专利名称:一种由纤维素酶和碳酸氢钠组成的饲料添加剂、饲料及其应用和鸡球虫病活卵囊疫苗的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种由纤维素酶和碳酸氢钠组成的饲料添加剤、饲料及其应用、和鸡球虫病活卵囊疫苗。
背景技术：
鸡球虫病是ー种原生动物寄生虫病，由柔嫩艾美尔球虫、堆形艾美尔球虫、巨型艾美尔球虫、毒害艾美尔球虫、和缓艾美尔球虫、布氏艾美尔球虫、早熟艾美尔球虫的ー种或ー种以上引起。它们在鸡的肠道各部位寄生，引起肠道的炎症、出血和鸡的死亡，给养鸡业 造成巨大的经济损失。
长期以来，该病的防治以药物为主。由于药物残留影响食品安全和人类健康，加上球虫对药物容易产生抗药性，该病的防治越来越依靠免疫手段。
目前使用的鸡球虫病疫苗主要是活卵囊疫苗，例如先灵葆雅PARAC0X和C0CCIVAC、加拿大维泰克的IMMUC0X、梅里亚的LIVAC0X，其中C0CCIVAC和IMMUC0X为强毒
活卵囊疫苗。
在制造鸡球虫病活卵囊疫苗时，需要将活的疫苗卵囊从鸡的粪便中分离出来，得到相对纯净的疫苗液。已知固形物的存在影响鸡球虫活卵囊疫苗的外观和内在质 量，现有的技术主要采用过滤、离心、超滤等手段除去疫苗液中的固形物。如公开号为CN102174408A的专利所描述的方法。由于固形物在比重和大小等方面比较接近疫苗卵嚢，因而现有技术不容易将固形物全部除去，如何进ー步除去疫苗液中的固形物，是ー个需要解决的问题。
发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种由纤维素酶和碳酸氢钠组成的饲料添加剂、饲料及其应用、和鸡球虫病活卵囊疫苗。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案
一种饲料添加剤，它由纤维素酶和碳酸氢钠组成。
所述碳酸氢钠与纤维素酶的比例为I克碳酸氢钠20U的纤维素酶。
纤维素酶和碳酸氢钠在鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中减少疫苗液中固形物含量的应用。
添加的碳酸氢钠与纤维素酶的比例为I克碳酸氢钠20U的纤维素酶。
纤维素酶和碳酸氢钠在制备鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中用于减少疫苗液中固形物含量的饲料中的应用。
所述纤维素酶酶的添加量为200 —1000 U/kg饲料；添加的碳酸氢钠的数量为每公斤饲料10—50克。添加的碳酸氢钠与纤维素酶的比例为I克碳酸氢钠20U的纤维素酶。
一种用于鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中的饲料，制备疫苗所用鸡的饲料中包括纤维素酶和碳酸氢钠。
所述纤维素酶酶的添加量为200—1000 U/kg饲料。添加的碳酸氢钠的数量为每公斤饲料10 — 50克。碳酸氢钠与纤维素酶的比例为I克碳酸氢钠20U的纤维素酶。
所述纤维素酶为经过包被的饲料纤维素酶。上述的饲料在鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中减少疫苗液中固形物含量的应用。
一种鸡球虫病活卵囊疫苗，其是以下步骤制成的
(1)配制饲料在常规鸡饲料中添加纤维素酶和碳酸氢钠，所述纤维素酶酶的添加量为200—1000 U/kg饲料。添加的碳酸氢钠的数量为每公斤饲料10 — 50克。碳酸氢钠与纤维素酶的比例为I克碳酸氢钠20U的纤维素酶；
(2)饲喂和接种将配制的饲料饲喂待接种鸡，自由采食；且给待接种鸡接种球虫弱毒株孢子化卵囊；
(3)收粪和卵囊分离接种后96小时，收集鸡的粪便，经60目筛过滤所收集鸡粪，得滤液；离心滤液得到沉淀物；加盐水到该沉淀，搅拌均匀并离心，收集表面部分盐水，其中含有大量卵囊；收集表层盐水后，向其中加入10倍体积的水，搅匀后离心，得到沉淀；向沉淀中再加入水并搅拌离心，如此3次，得到最终沉淀物，加适量水到最终沉淀物中得到疫苗液。
为了最大限度地减少疫苗液中的固形物，现有技术主要采用过滤、离心、沉淀、盐水漂浮、超滤等方法，使用设备包括振动筛、离心机、超滤机等。本发明人意外发现，给制造疫苗所用鸡的饲料中添加纤维素酶和碳酸氢钠可以进ー步减少疫苗液中固形物的含量，该饲料用于疫苗生产可提高疫苗质量。上述的纤维素酶可以是单ー的纤维素酶，或是纤维素酶与其他酶的复合物。我们发现，当酶的添加量为10，100，400，500，1000，5000 U/kg饲料时，添加的碳酸氢钠的数量为每公斤饲料10 — 50克时，最终制得的疫苗液中的固形物依次降低。其中添加200— 1000U/kg饲料，能降低固形物20— 25%。
本发明的有益效果是该酶和碳酸氢钠的添加能减少疫苗中固形物的含量。
具体实施方式
下面通过具体实例对本发明进行进ー步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
实施例I :
配制两种饲料。玉米75公斤、大豆柏20公斤、预混料5公斤，混合均匀，此为饲料甲。饲料こ的配方与甲相同，但另外添加了纤维素酶，添加量为每公斤饲料200U，另外添加碳酸氢钠的量为姆公斤饲料10克。
I、饲喂和接种。21日龄蛋鸡200只，雌雄各半，均分为甲、こ两组。甲组喂饲料甲，こ组喂饲料こ。自由采食。给甲、こ两组鸡每只接种堆形艾美尔球虫弱毒株孢子化卵囊50000 个。
2、收粪和卵囊分离。(I)接种后96小时，收集甲、こ两组鸡的粪便各1000克。(2)经60目筛过滤所收集甲、こ鸡粪，得滤液各10000毫升。(3)离心甲、こ滤液得到甲、こ沉淀物。(4)加盐水到该甲、こ沉淀，搅拌均匀并离心,收集表面部分盐水,其中含有大量卵囊。(5)收集甲、こ两种表层盐水后，向其中加入10倍体积的水，搅匀后离心并去掉上清液，得到甲、こ两种沉淀。向沉淀中再加入水并搅拌离心并去掉上清液,如此重复3次(指加水、搅拌离心并掉上清液的步骤)，得到甲、こ两种最终沉淀物，加适量水到最终沉淀物中得到甲、こ两种疫苗液各1000 ■升。
3、疫苗液中固形物的測定。将甲、こ疫苗液摇匀，各取100毫升离心，得到离心沉淀物，烘干沉淀物并称重，所称重量即为疫苗液中固形物的重量。結果，甲疫苗液100毫升含固形物0. 44克，こ疫苗液100毫升含固形物0. 35克。
4、卵囊含量和活力測定。用血球计数板计算甲、こ两种疫苗液中卵囊总数。将两种疫苗液在28度通气培养48小时，測量两种疫苗液的孢子化率。喂甲种饲料得到的疫苗共有卵囊9870万个，孢子化率为95% ;喂こ种饲料得到卵囊10000万个，孢子化率为96%。
5、结论
在饲料中添加纤维素酶，能降低疫苗液中固形物的含量，不影响收获卵囊的数量和活力。
实施例2
配制两种饲料。玉米75公斤、大豆柏18公斤、鱼粉2公斤、预混料5公斤，混合均匀，此为饲料甲。饲料こ的配方与甲相同，但另外添加了纤维素酶和碳酸氢钠，添加量为每公斤饲料纤维素酶1000U，碳酸氢钠的量为每公斤饲料50克。
I、饲喂和接种。21日龄蛋鸡200只，雌雄各半，均分为甲、こ两组。甲组喂饲料甲，こ组喂饲料こ。自由采食。给甲、こ两组鸡每只接种堆形艾美尔球虫弱毒株孢子化卵囊50000 个。
2、收粪和卵囊分离。(I)接种后96小时，收集甲、こ两组鸡的粪便各1000克。(2)经60目筛过滤所收集甲、こ鸡粪，得滤液各10000毫升。(3)离心甲、こ滤液得到甲、こ沉淀物。(4)加盐水到该甲、こ沉淀，搅拌均匀并离心,收集表面部分盐水,其中含有大量卵囊。(5)收集甲、こ两种表层盐水后，向其中加入10倍体积的水，搅匀后离心并去掉上清液，得到甲、こ两种沉淀。向沉淀中再加入水并搅拌离心并去掉上清液，如此重复3次，得到甲、乙两种最终沉淀物，加适量水到最终沉淀物中得到甲、こ两种疫苗液各1000毫升。
3、疫苗液中固形物的測定。将甲、こ疫苗液摇匀，各取100毫升离心，得到离心沉淀物，烘干沉淀物并称重，所称重量即为疫苗液中固形物的重量。結果，甲疫苗液100毫升含固形物0. 49克，こ疫苗液100毫升含固形物0. 33克。
4、卵囊含量和活力測定。用血球计数板计算甲、こ两种疫苗液中卵囊总数。将两种疫苗液在28度通气培养48小时，測量两种疫苗液的孢子化率。喂甲种饲料得到的疫苗共有卵囊9770万个，孢子化率为95% ;喂こ种饲料得到卵囊10500万个，孢子化率为96%。
5、结论
在饲料中添加纤维素酶，能降低疫苗液中固形物的含量，不影响收获卵囊的数量和活力。
实施该专利方法，举例3
配制两种饲料。玉米75公斤、大豆柏18公斤、花生柏2公斤、预混料5公斤，混合均匀，此为饲料甲。饲料こ的配方与甲相同，但另外添加了纤维素酶，添加量为每公斤饲料600U，另外添加碳酸氢钠的量为每公斤饲料30克。
I、饲喂和接种。21日龄蛋鸡200只，雌雄各半，均分为甲、こ两组。甲组喂饲料甲，こ组喂饲料こ。自由采食。给甲こ两组鸡每只接种堆形艾美尔球虫弱毒株孢子化卵囊10000个。
2、收粪和卵囊分离。(I)接种后96小时，收集甲、こ两组鸡的粪便各1000克。(2)经60目筛过滤所收集甲、こ鸡粪，得滤液各10000毫升。(3)离心甲、こ滤液得到甲、こ沉淀物。(4)加盐水到该甲、こ沉淀，搅拌均匀并离心,收集表面部分盐水,其中含有大量卵囊。
(5)收集甲、こ两种表层盐水后，向其中加入10倍体积的水，搅匀后离心并去掉上清液，得到甲、こ两种沉淀。向沉淀中再加入水并搅拌离心并去掉上清液，如此重复3次。最終得到甲、こ两种最终沉淀物，加适量水到最终沉淀物中得到甲、こ两种疫苗液各1000毫升。
3、疫苗液中固形物的測定。将甲、こ疫苗液摇匀，各取100毫升离心，得到离心沉淀物，烘干沉淀物并称重，所称重量即为疫苗液中固形物的重量。結果，甲疫苗液100毫升含固形物0. 49克，こ疫苗液100毫升含固形物0. 36克。
4、卵囊含量和活力測定。用血球计数板计算甲、こ两种疫苗液中卵囊总数。将两种疫苗液在28度通气培养48小时，測量两种疫苗液的孢子化率。喂甲种饲料得到的疫苗共有卵囊9056万个，孢子化率为93% ;喂こ种饲料得到卵囊11000万个，孢子化率为94%。
5、结论
在饲料中添加纤维素酶，能降低疫苗液中固形物的含量，不影响收获卵囊的数量和活
力。、
权利要求
1.一种饲料添加剤，它由纤维素酶和碳酸氢钠组成。
2.如权利要求
I所述的饲料添加剤，其特征是所述碳酸氢钠与纤维素酶的比例为I克碳酸氢钠20U的纤维素酶。
3.纤维素酶和碳酸氢钠在鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中减少疫苗液中固形物含量的应用。
4.如权利要求
3所述的应用，其特征是，所述碳酸氢钠与纤维素酶的比例为I克碳酸氢钠20U的纤维素酶。
5.纤维素酶和碳酸氢钠在制备鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中用于减少疫苗液中固形物含量的饲料中的应用，所述纤维素酶酶的添加量为200 —1000 U/kg饲料；添加的碳酸氢钠的数量为每公斤饲料10 — 50克，碳酸氢钠与纤维素酶的比例为I克碳酸氢钠20U 的纤维素酶。
6.一种用于鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中的饲料，其特征是，制备疫苗所用鸡的饲料中包括纤维素酶和碳酸氢钠。
7.如权利要求
6所述的饲料，其特征是，所述纤维素酶酶的添加量为200—1000 U/kg饲料；添加的碳酸氢钠的数量为每公斤饲料10 — 50克，碳酸氢钠与纤维素酶的比例为I克碳酸氢钠20U的纤维素酶。
8.如权利要求
7所述的饲料，其特征是，所述纤维素酶为经过包被的饲料纤维素酶。
9.权利要求
6-8任一项所述的饲料在鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中减少疫苗液中固形物含量的应用。
10.一种鸡球虫病活卵囊疫苗，其特征是，其是以下步骤制成的 (1)配制饲料在常规鸡饲料中添加纤维素酶和碳酸氢钠，所述纤维素酶酶的添加量为200—1000 U/kg饲料；添加的碳酸氢钠的数量为每公斤饲料10—50克，碳酸氢钠与纤维素酶的比例为I克碳酸氢钠20U的纤维素酶； (2)饲喂和接种将配制的饲料饲喂待接种鸡，自由采食；且给待接种鸡接种球虫孢子化卵囊； (3)收粪和卵囊分离接种后96小时，收集鸡的粪便，经60目筛过滤所收集鸡粪，得滤液；离心滤液得到沉淀物；加盐水到该沉淀，搅拌均匀并离心，收集表面部分盐水，其中含有大量卵囊；收集表层盐水后，向其中加入10倍体积的水，搅匀后离心并去掉上清液，得到沉淀；向沉淀中再加入水并搅拌离心并去掉上清液,如此3次，得到最终沉淀物，加适量水到最终沉淀物中得到疫苗液。
专利摘要
本发明公开了一种由纤维素酶和碳酸氢钠组成的饲料添加剂、饲料及其应用、和鸡球虫病活卵囊疫苗。饲料添加剂由纤维素酶和碳酸氢钠组成。纤维素酶和碳酸氢钠在鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中减少疫苗液中固形物含量的应用。纤维素酶和碳酸氢钠在制备鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中用于减少疫苗液中固形物含量的饲料中的应用。用于鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中的饲料。上述的饲料在鸡球虫病活卵囊疫苗制备过程中减少疫苗液中固形物含量的应用。鸡球虫病活卵囊疫苗，其是以下步骤制成的配制饲料在常规鸡饲料中添加纤维素酶和碳酸氢钠；饲喂和接种；收粪和卵囊分离。本发明的有益效果是该酶和碳酸氢钠的添加能减少疫苗中固形物的含量。
文档编号A23K1/18GKCN102726617SQ201210229824
公开日2012年10月17日 申请日期2012年7月5日
发明者王江青, 郝言芝 申请人:烟台青大生物制药有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan