专利名称：：葡糖苷配基异黄酮富集的植物蛋白提取物和分离物及生产方法
技术领域：
：本发明涉及葡糖苷配基异黄酮富集的提取物和分离物的生产，方法是从一种植物蛋白材料中提取可溶物并在一定条件下用一种或多种β-葡萄糖苷酶处理，以使大部分葡糖异黄酮转化成保留在蛋白分离物中的葡糖苷配基异黄酮。这是1993年10月12日递交的美国专利申请08/135,196的部分接续申请。异黄酮存在于各种豆类植物中，包括植物蛋白材料如大豆中。这些化合物包括黄豆苷、6”-OAc-黄豆苷、6”-OMal-黄豆苷、黄豆苷原、染料木苷、6”-OAc染料木苷、6”-OMal-染料木苷、染料木黄酮、glycitin、6”-OAc-glycitin、6”-OMal-glycitin、glycitein、生原禅宁A，7-羟基-4＇-甲氧异黄酮和拟雌内酯。这些化合物通常与大豆固有的苦味有关并且在商业产品，如分离物和浓缩物的生产中，除去这些物质已经成为焦点问题。例如，在传统方法中，大豆蛋白分离物的生产是用碱性介质水溶液提取大豆片，许多异黄酮被溶解在提取物中并且在乳清中保持溶解。其中异黄酮通常在蛋白质酸沉淀之后被除去以形成一种分离物。在酸沉淀的蛋白分离物中残余的异黄酮通常采用对分离物彻底洗涤而除去。近来已发现，如大豆等植物蛋白中含有的异黄酮可以抑制人体癌细胞的生长，如下述文章所讲的乳腺癌细胞和前列腺癌细胞“GenisteinInhibitionoftheGrowthofHumanBreastCancerCells，IndependencefromEstrogenReceptorsandtheMulti-DrugResistanceGene”由Peterson和Barnes著，BiochemicalandBiophysicalResearch，Communications，Vol.179，No.1，p.661～667，1991年8月30日；“GenisteinandBiochaninAInhibittheGrowthofHumanProstateCancerCellsbutnotEpidermalgrowthFactorReceptorTyrosineAutophosphorylation”由Peter-son和Barnes著，TheProstate，Vol.22，p.335～345(1993)；和“SoybeansInhibitMammaryTumorsinModelsofBreastCancer”，Barnes等著，MutagensandCarcinogonsintheDiet，p.239～253(1990)。上述异黄酮中，几种与一个葡萄糖分子连接，以葡糖苷或葡糖形式存在。几种葡糖如6”-OAc-染料木苷，含有一个与自身葡萄糖分子的六位连接的乙酸基。虽然包括葡糖苷在内的所有这些异黄酮在医学价值上令人感兴趣，但是其中葡萄糖分子未被连接的葡糖苷配基是最受关注的特殊的异黄酮。这些异黄酮与葡糖或异黄酮葡糖苷的水溶性不同。这类特殊的异黄酮是黄豆苷原、染料木黄酮和glycitein。这些葡糖苷配基具有以下通式其中，R1，R2，R3和R4可从含H、OH和OCH3的组中选出。因此，本发明所针对的是把葡糖苷配基和一种植物蛋白富集物从这些材料中分离出来。本领域中已知把葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基异黄酮的方法，Obata等人描述于日本专利申请258,669中。这些方法只能完成中等程度转化而不适合需要，特别是对大规模工业化操作来说。另外，已知方法如669申请中只讲述从蛋白材料中除去异黄酮，而并未讲述如何制备葡糖苷配基异黄酮富集的蛋白提取物或分离物。因此，需要一种方法使至少多数和最好将大体上所有葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基异黄酮并生产出一种葡糖苷配基异黄酮富集的蛋白提取物和分离物。因此，本发明目的是提供一种葡糖苷配基异黄酮富集的提取物和蛋白分离物及其生产方法。这与其他目的将在本发明以下描述中得以实现。本发明提供一种葡糖苷配基异黄酮富集的植物蛋白提取物和分离物及其生产方法。生产这些提取物的方法包括，pH值大约高于植物蛋白材料等电点的水提剂提取含葡糖异黄酮的植物蛋白材料，和在一定时间内、温度和pH条件下用足够数量的一种或多种β-葡萄糖苷酶与葡糖异黄酮反应，以至少使提取物中多数葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基异黄酮，由此生产出葡糖苷配基异黄酮富集的提取物。本发明还提供用于生产这类提取物的方法，其中补充的β-葡萄糖苷酶被加入提取物中以生产葡糖苷配基异黄酮富集的提取物。本发明进一步提供了获得葡糖苷配基异黄酮富集的蛋白分离物的方法，即调节前述提取物pH至接近该蛋白材料的等电点，使蛋白材料沉淀并生产出富集葡糖苷配基异黄酮的蛋白分离物。所得到的葡糖苷配基异黄酮富集的分离物能被分离并脱水而形成一种干燥的富集分离物。另外，本发明提供了从植物蛋白材料中以较高比例回收异黄酮的方法。尽管本发明将讲述的是关于大豆产品、尽管此方法特别适用于由大豆材料中生产葡糖苷配基异黄酮富集的提取物和分离物，但是此方法也通常应用于从含有异黄酮的各种植物蛋白来源中生产蛋白提取物和分离物。这种来源的一个例子是含有黄豆或大豆材料的植物蛋白材料。这里所用的术语“大豆材料”是指大豆或任何大豆衍生物。按照优选实施方案的提取或分离，起始材料为大豆片，其中的油已经通过溶剂提取而除掉。该片用一种pH值大约高于蛋白材料等电点的水提剂提取，优选pH约6.0至约10.0，最优选pH为约6.7至约9.7。如果想提高水提剂的pH值，可以使用象氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化钙这样的典型碱性试剂。所需异黄酮化合物一般溶解于水提液中。为了最大限度回收水提液中的这些化合物，还要求大豆片与提取液的重量比控制在一定水平，以尽可能多地溶解蛋白材料中固有的异黄酮。蛋白质和异黄酮的提取能以各种方式进行，这些方法包括在水提液与片的重量比为约8∶1至约16∶1时逆流提取这些片，其中初始提取液用于提取片，并提供一种蛋白质和异黄酮的水提液。另一方面，可以采用两步提取方法，其中第一步中提取剂与片的重量比组成约为10∶1，随后在提取剂与片的重量比约为6∶1或更小的情况下用新鲜提取剂提取片，这样两步中提取剂与片的结合重量比不超过提取剂与片的总重量比16∶1。除去不溶物质后，所得的含有溶解性异黄酮的含水蛋白提取物进一步与一种或多种β-葡萄糖苷酶反应，使多数、更好为大体上全部以葡糖形式与一个葡萄糖分子连接的异黄酮转化成一种葡糖苷配基异黄酮。β-葡萄糖苷酶的最适pH范围将随所用特异β-葡萄糖苷酶而变化，但一般在约4至约8之间变化。在与酶反应前提取物的pH值一般调节到这种特异酶具有最大活性的pH值范围。一般，通过添加一种可食用酸，如乙酸、硫酸、磷酸、盐酸或其他任何适合的试剂来调节pH值。β-葡萄糖苷酶可以是自然存在于大豆材料中或是出现在微生物生长时，这里称之为“剩余”酶，或被加入蛋白质提取物中。所加酶在这里称为“补充酶”。通常，如果大豆材料或提取物中的剩余酶浓度不足以使多数、更好为大体上全部的异黄酮由葡糖形式转化为葡糖苷配基形式，则需加入补充酶。足以完成异黄酮转化反应的酶量是随着许多因素而变化的，包括存在的酶的种类，酶浓度分布、系统pH值、存在的酶的活性。一旦由剩余酶、补充酶或两者同时形成足够的酶浓度时，含有溶解异黄酮的蛋白质提取物将在一定时间内、温度和pH下，与β-葡萄糖苷酶发生反应，使提取液中至少多数、最好基本上全部葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基形式。补充的β-葡萄糖苷酶最好包括Biopectinase100L和300L，BiopectinaseOK70L，LactaseF和Lactozyme。LactaseF最佳pH范围为约4至约6，可从AmanoInternationalEnzymeCo.，Inc.，P.O.Box1000，Troy，VA22974得到。而Lactozyme的最佳pH范围约为7，可从NovoIndustries，EnzymeDivision，NOVOAlle，DK-2880Bagsvaerd，Denmark得到。Biopectinase100L，Biopectinase300L和BiopectinaseOK70L可从QuestInterna-tional，Sarasota，Florida得到。补充酶的添加量要足以使至少多数、最好基本上全部葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基。例如，在需要加补充酶时，所加酶量以蛋白质沉淀物干基计约为0.5％至约5％(重量)。另一类适用酶是脂酶。这些酶被认为特别适用于这里讲述的优选实施方法，其通过移去异黄酮结合物中的乙酸根和丙二酸根基团，使乙酸和丙二酸结合物转变为葡糖异黄酮。在最优选实施方式中，同时利用β-葡萄糖苷酶和脂酶这两种类型的酶。优选实施方法是优选的一步过程，在相对短的时间内完成异黄酮的高度转化(从葡糖形式到葡糖苷配基形式)，方法相对简便且经济。这里所用的术语“一步”反应过程是指在反应过程中某些过程参数值通常保持不变。这些过程参数包括pH和温度。很高程度的转化是指，大豆材料提取物中以葡糖形式存在的异黄酮至少多数、最好是基本上全部被转化为葡糖苷配基形式。术语“多数”是指葡糖异黄酮转化成葡糖苷配基异黄酮的程度至少大约为50％。术语“基本上全部”是指葡糖异黄酮转化成葡糖苷配基异黄酮的程度至少约为80％且最优选至少约为90％。尽管不想受到某一特别理论的束缚，但是相信，这里所述方法的令人惊奇和意想不到的高转化度是一步反应过程中所用过程参数共同造成的。优选的反应系统pH值是保持或大约保持在约4到约8数值内，且在一步反应过程，最优选的是在与异黄酮结合物反应前酶最有活性时的pH值。优选反应系统的温度是保持或基本上保持在约40℃到约60℃的温度内，且在一步反应过程中最优选温度为约60℃。通常，这里所述由一步反应过程完成基本上使全部葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基所必需的时间，是从约2小时到约24小时。与一种或多种β-葡萄糖苷酶反应后，调节pH值至大豆蛋白等电点，通常通过加酸调节在约4.0至约5.0之间，优选约4.4至约4.6之间。调节pH值至等电点可使蛋白质以凝乳形式沉淀，凝乳中富集不易溶的葡糖苷配基。沉淀后，凝乳或沉淀蛋白质通过如离心法从乳清中分离，形成富集葡糖苷配基异黄酮的蛋白分离物。在优选实施方式中，沉淀的蛋白质材料的洗涤或者完全免除，或者减到最小程度，以减少葡糖苷配基异黄酮从蛋白质沉淀物中脱除，由此提供一种葡糖苷配基异黄酮富集的分离物，尽管葡糖苷配基比其他异黄酮难溶于水。因此，可以完全避免用水对酸沉淀蛋白进行洗涤，或将其限制在单一水洗过程，其中水与沉淀蛋白材料的重量比为约2∶1至约6∶1之间。缺少酸沉淀凝乳的洗涤提供一种富集所需水平异黄酮的分离物，而进行过多程度的洗涤将使异黄酮回收率更低。适量的洗涤提供一种蛋白分离物，其具有约1.5至约3.5毫克/克染料木黄酮的干基含量和约1.0至约3.0毫克/克的黄豆苷原含量。酸沉淀的蛋白质随后通过离心或浓缩的结合使用而脱水，并采用常规方法干燥。优选实施方式不受某种特殊脱水方法限制，但优选使用常规干燥技术如喷雾干燥形成干燥分离物。这里所述方法提供葡糖苷配基异黄酮量增加了的分离物。本发明还提供了从植物蛋白材料如大豆材料中以非常高比例回收异黄酮的方法。这里所述方法获得的回收水平，基于起始植物蛋白材料中各种特定异黄酮的总和，一般至少为50％，优选为65％，最优选为80％。尽管不想受任何特别理论的限制，但认为高回收率来自这里所述的转化反应以及伴随发生的所述各种工艺操作。通过在一特定加工阶段，将相对易溶的葡糖异黄酮结合物转化为更不易溶的葡糖苷配基形式，可以从原料中回收高百分比异黄酮的最终产品。下列实施例提供本发明的特定实施方式而不是限制性实施方式。实验通过添加5克提取的脱脂大豆片(粉末)至5克水中并调pH值至7和8来制备样品。0.25克LactaseF或Lactozyme被加进每种悬浮液中，以使每个样品中的酶浓度约为5％(以固体重量计)。样品在40℃和60℃温育培养。在加入酶之前(t＝0)和在预定温度下温育24小时后，取出子样品。表1显示了与LactaseF或Lactozyme温育24小时后，大豆片(粉状)中异黄酮的变化和百分比分布。在加入补充酶前样品未消毒，且微生物和污染物生长不受抑制。表1这些数据指出了通过结合使用剩余酶和补充酶可得到的转化程序。剩余酶的来源可以是微生物生长产生的或大豆内源酶。当大豆片(粉末)在pH为8，60℃和温育24小时时，可发生异黄酮结合物向葡糖苷配基的明显转化。这里所述每类异黄酮的浓度是基于这种异黄酮类型的各种形式的总和。另一组样品是通过形成16％脱脂大豆片的水悬浮液而制备的。样品调pH值至4.5和7，并在45℃下温育24小时。子样品在0和24小时时取出。分析所有样品的异黄酮含量。表2显示了在pH值为4.5和7，温度为45℃下温育24小时后，脱脂片中计算的异黄酮的百分比分布的变化。表2</tables>这些数据表明依靠蛋白材料中的剩余酶所能达到的转化程度。在pH为7和温度为45℃条件下温育24小时后，可发生异黄酮结合物向葡糖苷配基的明显转化。在其他系列实验中，研究了从大豆得到的蛋白分离物中的染料木黄酮和黄豆苷原的百分回收率。百分回收率是通过测定分离物中染料木黄酮(或黄豆苷原)的量而得到的，以基于大豆起始材料中各种形式染料木黄酮(或黄豆苷原)的总量的百分数形式表示其数量。用1000克温度为32℃、加氢氧化钠调pH为9.7的水提取100克脱脂大豆片。得到水与粉末重量比为10∶1。粉末从提取液中分离，用600克pH9.7、温度32℃的水提剂再次提取。第二次提取步骤得到水与粉末重量比为6∶1。离心分离粉末，使第一和第二提取物混合，pH调至4.5，形成大豆乳清和酸沉淀凝乳的浆液。浆液被加热到50℃并加入2％(以凝乳干重计)的LactaseF。让浆液在50℃反应16小时以保证葡糖异黄酮完全转化成葡糖苷配基形式。酸沉淀的凝乳可通过离心法从乳清中分离以形成葡糖苷配基富集的分离物。可避免用水对沉淀凝乳的进一步洗涤。分离物中回收的染料木黄酮的量是起始大豆材料(脱脂大豆粉末)中各种形式染料木苷和染料木黄酮的总和的86％。与之相似，分离物中回收的黄豆苷原的量为75％。下面是对一种测定黄豆产品中异黄酮的方法的说明。异黄酮可通过0.75克样品(喷雾干燥或精细研磨粉末)下50ml80/20甲醇/水溶剂相混合而从大豆产品中提取。混合物用一个轨道摇动器于室温下摇动2个小时。两小时后，剩余的未溶解材料通过Whatman42号滤纸过滤除去。5ml滤液用4ml水和1ml甲醇稀释。提取的异黄酮用BeckmanC18反相柱通过高效液相色谱法(HPLC)分离。异黄酮被注入柱中，在起始为88％甲醇，10％水和2％冰醋酸至终止为98％甲醇和2％冰醋酸的溶剂梯度中洗脱。当流速为0.4毫升/分钟，所有异黄酮-染料木苷，6-O-Acety-genistin，6-O-丙二酰染料木苷，染料木黄酮，黄豆苷，6-O-Acetydaidzin，6-O-丙乙酰黄豆苷，黄豆苷，glycitin和其衍生物和glycitein可明显分离。峰的测量用紫外吸光度262mm。峰的测定可由质谱仪完成。可通过使用购自IndofineChemicalCompany，Sommerville，NJ.的纯标准物(染料木苷、染料木黄酮、黄豆苷和黄豆苷原)来进行定量。每种上述化合物被测出响应因子(积分面积/浓度)并用以定量未知样品。对于得不到纯标准物的结合形式，响应因子假定为母体分子的响应因子，并由分子量差异予以修正。glycitin的响应因子假定为染料木苷的响应因子，用分子量差异做过修正。这种方法提供每种单独异黄酮的量。为了方便起见，如果全部结合形式转化成它们相应的非结合形式，全部染料木苷、全部黄豆苷原和全部glycitein能被算出并代表这些化合物的聚集重量。这些总量也可采用一种利用酸水解作用转化结合形式的方法直接测量。当然，应理解前述只是本发明的优选实施方式，在不违背其精神实质的情况下可做各种变化和改变，以及在附加权利要求中会涉及其更加广泛的方面，其中将会依据包括等效理论在内的专利法原则对权利要求予以说明。权利要求1.一种从植物蛋白材料中生产葡糖苷配基异黄酮富集的提取物的方法，它包括(a)用pH大约高于所述植物蛋白材料等电点的水提剂提取一种含有葡糖异黄酮的植物蛋白材料，以生产一种含有蛋白质和葡糖异黄酮的水提物；和(b)在一定时间内、温度和pH值下，用足够的至少β-葡萄糖苷酶和酯酶中的一种与所述葡糖异黄酮反应，足以使所述提取物中的至少多数所述葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基异黄酮，由此生产一种葡糖苷配基异黄酮富集的提取物。2.根据权利要求1所述的方法，其中提取是在pH从约6至约10下进行的。3.根据权利要求2所述的方法，其中提取是在pH从约6.7至约9.7下进行的。4.根据权利要求1所述的方法，其中植物蛋白材料的提取包括两次提取。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述提取剂与所述植物蛋白材料的重量比为约8∶1至约16∶1。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述时间从约2小时至约24小时。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述时间约为24小时。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述温度是约40℃至约60℃。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述温度约为60℃。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述pH为约4至约8。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述pH约为4.5。12.根据权利要求1所述的方法，其中所述时间约为24小时，所述温度约为60℃且所述pH约为4.5。13.根据权利要求1所述的方法，进一步包括(c)调节所述葡糖苷配基异黄酮富集的提取物的pH值至接近所述植物蛋白材料的等电点，以使所述蛋白材料沉淀；和(d)分离出沉淀的蛋白材料以生产一种葡糖苷配基异黄酮富集的蛋白质分离物。14.根据权利要求13所述的方法，其中省去了对所述分离物的洗涤。15.根据权利要求13所述的方法，其中所述分离物用重量小于约6倍所述沉淀的蛋白材料重量的水来洗涤。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述分离物用重量上小于约4倍所述沉淀的蛋白材料重量的水来洗涤。17.根据权利要求1的方法生产的葡糖苷配基异黄酮富集的提取物。18.根据权利要求13的方法生产的葡糖苷配基异黄酮富集的蛋白分离物。19.根据权利要求18的分离物，其中述分离物是由大豆制成的。20.根据权利要求1所述的方法，其中所述植物蛋白材料包括一种大豆材料。21.一种从植物蛋白材料中生产葡糖苷配基异黄酮的方法，它包括(a)用一种pH大约高于所述植物蛋白材料的等电点的水提剂提取植物蛋白材料，植物蛋白材料含有葡糖异黄酮和足够的剩余酶，剩余酶至少为β-葡萄糖苷酶和酯酶中的一种，以生产一种含有蛋白质和葡糖异黄酮的水提物；和(b)在一定时间内、温度和pH值下，所述葡糖异黄酮与所述剩余酶反应，足以将所述提取物中至少多数所述葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基异黄酮，由此生产一种葡糖苷配基异黄酮富集的提取物。23.根据权利要求22所述的方法，其中提取是在pH从约6至约10下进行的。24.根据权利要求23所述的方法，其中提取是在pH从约6.7至约9.7下进行的。25.根据权利要求22所述的方法，其中所述植物蛋白材料的提取包括两次提取。26.根据权利要求22所述的方法，其中所述提取剂与所述植物蛋白材料的重量比为从约8∶1至约16∶1。27.根据权利要求22所述的方法，其中所述时间为从约2小时至约24小时。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述时间约为24小时。29.根据权利要求22所述的方法，其中所述的温度为约40℃至约60℃。30.根据权利要求29所述的方法，其中所述温度约为60℃。31.根据权利要求22所述的方法，其中所述pH为从约4至约8。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述pH为约4.5。33.根据权利要求22所述的方法，其中所述时间约为24小时，所述温度约为60℃且所述pH约为4.5。34.根据权利要求22所述的方法，进一步包括(c)调节所述葡糖苷配基异黄酮富集的提取物的pH至接近所述植物蛋白材料的等电点，以使所述蛋白材料沉淀；和(d)分离出沉淀的蛋白材料以生产一种葡糖苷配基异黄酮富集的蛋白分离物。35.根据权利要求34所述的方法，其中省去了对所述分离物的洗涤。36.根据权利要求34所述的方法，其中所述分离物用重量小于约6倍所述沉淀蛋白材料重量的水来洗涤。37.根据权利要求36所述的方法，其中所述分离物用重量小于约4倍所述沉淀蛋白材料重量的水来洗涤。38.权利要求22的葡糖苷配基异黄酮富集的提取物。39.权利要求34的葡糖苷配基异黄酮富集的蛋白分离物。40.根据权利要求34所述的方法，其中所述分离物是由大豆制成的。41.根据权利要求22所述的方法，其中所述植物蛋白材料包括大豆材料。42.根据权利要求22所述的方法，其中基本上所有葡糖异黄酮被转化成葡糖苷配基异黄酮。43.一种从植物蛋白材料中生产葡糖苷配基异黄酮富集的提取物的方法，它包括(a)用一种pH大约高于所述植物蛋白材料等电点的水提剂提取一种含有葡糖异黄酮的植物蛋白材料，以生产一种含有蛋白质和葡糖异黄酮的水提物；(b)向所述提取物中添加补充酶，补充酯至少是β-葡萄糖苷酶和酯酶中的一种，以使所述提取液中的总酶浓度足够使所述提取物中至少多数所述葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基异黄酮；和(c)在一定时间内、温度和pH下，使所述葡糖异黄酮与酶反应，足以使所述提取物中至少多数所述葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基异黄酮，由此生产一种葡糖苷配基异黄酮富集的提取物。44.根据权利要求43所述的方法，其中提取是在pH为约6至约10下进行的。45.根据权利要求44所述的方法，其中提取是在pH为约6.7至约9.7下进行的。46.根据权利要求43所述的方法，其中所述植物蛋白材料的提取包括两次提取。47.根据权利要求43所述的方法，其中所述提取剂与所述植物蛋白材料的重量比是从约8∶1至约16∶1。48.根据权利要求43所述的方法，其中所述时间是从约2小时至约24小时。49.根据权利要求48所述的方法，其中所述时间约为24小时。50.根据权利要求43所述的方法，其中所述温度是约40℃至约60℃。51.根据权利要求50所述的方法，其中所述温度约为60℃。52.根据权利要求43所述的方法，其中所述pH是从约4至约8。53.根据权利要求52所述的方法，其中所述pH是约4.5。54.根据权利要求43所述的方法，其中所述时间约为24小时，所述温度约为60℃且所述pH约为4.5。55.根据权利要求43所述的方法，进一步包括(d)调节所述葡糖苷配基异黄酮富集的提取物的pH至约为所述植物蛋白材料的等电点，以沉淀所述蛋白材料；和(e)分离出沉淀的蛋白材料以生产一种葡糖苷配基异黄酮富集的蛋白质材料。56.根据权利要求55所述的方法，其中省去了对所述分离物的洗涤。57.根据权利要求55所述的方法，其中所述分离物用重量小于约6倍所述沉淀蛋白材料重量的水来洗涤。58.根据权利要求57所述的方法，其中所述分离物用重量小于约4倍所述沉淀蛋白材料重量的水来洗涤。59.根据权利要求43中的葡糖苷配基异黄酮富集的提取物。60.权利要求55中的葡糖苷配基异黄酮富集的蛋白分离物。61.根据权利要求55所述的方法，其中所述分离物是由大豆制成的。62.根据权利要求43所述的方法，其中所述植物蛋白材料包括一种大豆材料。63.根据权利要求43所述的方法，其中基本上全部葡糖异黄酮被转化为葡糖苷配基异黄酮。64.一种植物蛋白分离物，具有约1.5至约3.5毫克/克的干基染料木黄酮含量和约1.0至约3.0毫克/克的干基黄豆苷原含量。65.一种从植物蛋白材料中至少回收50％异黄酮的方法，它包括(a)用一种pH大约高于所述植物蛋白材料等电点的水提物提取一种含异黄酮的植物蛋白材料，以生产一种含有蛋白质和异黄酮的水提物；(b)在一定时间内、温度和pH下，所述异黄酮与足够量酶反应，足以使所述提取物中至少多数所述异黄酮转化为更不易溶的异黄酮，由此生产一种异黄酮富集的提取物；(c)调节所述提取物的pH至约为所述植物蛋白材料的等电点，以使所述蛋白材料沉淀；和(d)分离出沉淀的蛋白材料以在所述植物蛋白材料中回收一种含有至少50％所述异黄酮的分离物。66.根据权利要求65所述的方法，其中所述酶选自β-葡萄糖苷酶和酯酶。67.根据权利要求65中所述的方法，其中在所述植物蛋白材料中，至少65％所述异黄酮回收于所述分离物中。68.根据权利要求65中所述的方法，其中在所述植物蛋白材料中，至少80％所述异黄酮回收于所述分离物中。69.根据权利要求65所述的方法，其中所述植物蛋白材料包括一种大豆材料。70.权利要求65中的蛋白分离物。71.权利要求67中的蛋白分离物。72.权利要求68中的蛋白分离物。73.根据权利要求1所述的方法，其中所述pH值处于酶与所述葡糖异黄酮发生反应前所述酶具有最大活性时的值。74.根据权利要求22所述的方法，其中所述pH值处于剩余酶与所述葡糖异黄酮反应前所述剩余酶具有最大活性时的值。75.根据权利要求43所述的方法，其中所述pH值处于补充酶与所述葡糖异黄酮反应前所述补充酶具有最大活性时的值。全文摘要葡糖苷配基异黄酮富集的植物蛋白提取物、分离物及生产和回收方法。用pH约高于蛋白材料等电点的水提剂提取包含葡糖异黄酮的植物蛋白材料而生产一种水提物，并在一定时间、温度和pH下使葡糖异黄酮与足量β-葡萄糖苷酶或酯酶反应，足以使提取物中至少多数葡糖异黄酮转化为葡糖苷配基异黄酮，由此生产葡糖苷配基异黄酮富集的提取物。通过调节提取物的pH至约为植物蛋白材料等电点以沉淀蛋白材料，再分离此蛋白材料生成一种葡糖苷配基富集的蛋白分离物。文档编号C12P17/06GK1135223SQ94194206公开日1996年11月6日申请日期1994年9月21日优先权日1993年10月12日发明者J·L·申,B·A·布赖恩申请人:蛋白质技术国际公司