2h-1-苯并吡喃衍生物、它们的制备方法及其药物组合物的制作方法

专利名称：2h-1-苯并吡喃衍生物、它们的制备方法及其药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及2H-1-苯并吡喃衍生物、它们的制备方法和它们的药物组合物。
更确切地，本发明涉及下列通式的2H-1-苯并吡喃衍生物 其中R1和R2独立地是H、烷基、卤代烷基、链烯基或卤代链烯基，或者与它们所键合的氮原子一起可以构成4至8元杂环；X是H、烷基、芳基、硝基、卤代、O-R3，其中R3是H、烷基、芳基、烷酰基、芳酰基；X1是H、烷基或烷氧基，当X和X1是烷基时，它们可以与它们所键合的碳原子一起构成稠合的芳族环，得到α-萘基；Y是H、烷基、烷酰基、芳酰基、烷基氨基羰基、烷氧基羰基，Z是H、O-R4，其中R4是H、烷基、烷酰基、芳酰基；m是1、2；n是0、1；p是2-6； 代表在3-4或4-4a位原子之间的单键或双键；当n是1时，双键或者可以是环外或环内的，分别得到4-亚苄基苯并二氢吡喃，此时m＝1，或者4-苄基色-3-烯，此时m＝2；当n是0时，环内键3-4可以是单键或双键，当n是0且环内键3-4是单键时，Z不是H。
本发明化合物可以盐的形式存在。
带碱性基团的化合物可以有机或无机酸加成盐的形式存在。
带酸性基团的化合物可以与碱金属或碱土金属或有机胺的加成盐的形式存在。
当式(I)化合物中苯并吡喃环3和4位之间的键为单键时，该环3-和4-位的两个碳原子可以是不对称的，且该化合物可作为纯对映体、非对映异构体混合物或外消旋体存在。
烷基优选为C1-C4烷基，例如甲基，乙基，正丙基，异丙基，叔丁基。
卤代烷基优选为被1至5个氟或氯原子取代的C1-C4烷基，例如三氟甲基。
链烯基优选为C2-C4链烯基，例如乙烯基或烯丙基。
卤代链烯基优选为被1-3个卤原子取代的C2-C4链烯基。
芳基优选为苯基或萘基，选择性地被1-3个取代基取代，取代基是相同或不同的，选自卤原子、烷基、烷氧基、硝基、氰基、三氟甲基、氨基、羟基。
烷酰基优选为C1-C4烷酰基，例如甲酰基、乙酰基或丙酰基。
芳酰基优选为苯甲酰基，可选地被一至三个取代基取代，取代基是相同或不同的，选自卤原子、烷基、烷氧基、硝基、氰基、三氟甲基、氨基、羟基。
优选的式(I)化合物是这样的，其中R1和R2与氮原子一起构成哌啶子基或吡咯烷子基，Y是氢或烷酰基。
Z是氢、羟基或烷氧基，n是0或1，p是2，X和X1是氢，或者一个是氢，另一个是卤素，或OR3基团，其中R3是如上所定义的，优选地位于对位。
在优选的实施方式中，本发明涉及式(IA)的2H-1-苯并吡喃衍生物
其中X是H、C1-C4烷氧基，Y是H、C1-C4烷基、C1-C5烷酰基、芳酰基。
芳酰基优选为苯甲酰基，可选地被一至三个取代基取代，取代基是相同或不同的，选自卤原子、烷基、烷氧基、硝基、氰基、三氟甲基、氨基、羟基。
这些化合物可以以有机或无机酸加成盐或者碱金属或碱土金属或有机胺加成盐的形式存在。
式(I)化合物属于选择性雌激素受体调节剂(SERM)，它们与雌激素受体结合并发生相互作用，在某些组织中，例如骨，充当雌激素激动剂，在其他组织中，确切为乳腺和子宫，充当雌激素拮抗剂。
SERM保留雌激素的有益效果，没有它的一些副作用。
技术状态Zymogenetics的WO 94/20098公开了3，4-二芳基-2H-1-苯并吡喃，用于减少骨丢失，确切为与骨质疏松有关的骨丢失。
特别优选用在Zymogenetics的发明中的化合物是centchroman的l-对映体，后者由Novo Nordisk开发为左美洛昔芬，用于骨质疏松的治疗。
左美洛昔芬在下文中被用作参照化合物。
具有潜在的抗雌激素活性的取代的苯并吡喃和硫代苯并吡喃衍生物后来公开在C & C Research Laboratories的WO 98/25916和WO99/65893中。
本发明的化合物在化学结构上不同于现有技术苯并吡喃之处在于·在3-4或4-4a位原子之间存在双键，作为替代选择存在环内或环外双键；·苯并吡喃环4位碳原子被t-氨基烷氧基苄基或亚苄基原子团取代；·当4位碳上的取代基是t-氨基烷氧基苯基原子团时，存在5位羟基。
苯并吡喃结构上的这些差异、确切为在苯并吡喃环4位碳原子与苯基碳原子之间存在亚甲基或次甲基桥，揭示了本发明化合物药理活性的基本重要性。
描述在Jones CD等，J.Med.Chem.27，1057-1059，1984中的非甾体苯并噻吩衍生物雷洛昔芬提供了组织特异性雌激素激动剂和拮抗剂作用，在美国和一些欧洲国家已经获准用于临床。
本发明的化合物堪与雷洛昔芬媲美。
其他具有这种可能的活性谱的合成化合物、包括三苯基乙烯和二氢化萘，已被描述为SERM。不过，开发很多这些化合物作为药物，已被证实是成问题的，因为它们过度地刺激子宫组织。
本发明的新颖的SERM证实对骨和血清脂质水平具有显著的有益效果，对生殖组织具有与内在雌激素生成程度低有关的拮抗效果。
关于它们的组织特异性雌激素激动与拮抗性质，本发明的化合物可以用在疗法中，确切地用于预防和治疗大量绝经后病变，确切为骨质疏松、冠心病和雌激素依赖性人类癌症。
本发明还提供式(I)化合物的制备方法
其中R1和R2独立地是H、烷基、卤代烷基、链烯基或卤代链烯基，或者与它们所键合的氮原子一起可以构成4至8元杂环；X是H、烷基、芳基、硝基、卤代、O-R3，其中R3是H、烷基、芳基、烷酰基、芳酰基；X1是H、烷基或烷氧基，当X和X1是烷基时，它们可以与它们所键合的碳原子一起构成稠合的芳族环，得到α-萘基；Y是H、烷基、烷酰基、芳酰基；Z是H、O-R4，其中R4是H、烷基、烷酰基、芳酰基；m是1、2；n是0、1；p是2-6； 代表在3-4或4-4a位原子之间的单键或双键；当n是1时，双键或者可以是环外或环内的，分别得到4-亚苄基苯并二氢吡喃，此时m＝1，或者4-苄基色-3-烯，此时m＝2；当n是0时，环内键3-4可以是单键或双键，当n是0且环内键3-4是单键时，Z不是H。
流程(1)和(2)是式(I)2-(N-哌啶基)乙氧基化合物的代表性制备方法。这些反应流程也可以适用于其他式(I)t-氨基烷氧基类似物。
其中Z＝OR4的式(I)化合物可以按照流程(1)这样获得，在用气态HCl饱和的质子惰性溶剂中，使1，3，5-三羟基苯与取代的苯乙腈反应，得到式(II)酮亚胺，后者可以在沸水中水解，得到对应的式(III)酮，后者可以在二甲基甲酰胺(DMF)中借助N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛和三氟化硼二乙醚合物环化，得到式(IV)化合物。
式(IV)化合物可以在7位被保护，例如借助适当的酸酐，有或没有溶剂，温度从0℃至溶剂或纯酸酐的沸点，或者借助适当的卤化物，在质子惰性溶剂中，在碱的存在下，得到式(V)酯，后者对格利雅反应必须是稳定的。
所得式(V)化合物可以在适合的催化剂的存在下氢化，得到式(VI)化合物。
在从-70℃至溶剂沸点的温度下，向式(VI)酮加入式(VII)格利雅试剂——在质子惰性溶剂中从4-(t-氨基烷氧基)-1-溴苯和Mg获得，得到醇(VIII)，后者可以脱水，例如在浓HCl的乙醇溶液中，得到式(IX)化合物。
式(IX)化合物可以被烷基化或酰基化，借助烷基卤或酰基卤，在适当的溶剂中，在碱的存在下，或者可以被酰基化，借助酰基酸酐，在高温下，没有溶剂，得到式(X)化合物，其中Y(不同于R4)是保护基团，选自对格利雅反应稳定的那些。式(IX)化合物可以被去保护，例如用浓HCl或浓HBr，在高温下，或者当Y＝酰基时，用K2CO3，在含水甲醇中，在室温下，得到对应的式(XI)游离酚，后者可以被二烷基化，例如借助烷基卤，在适当的溶剂中，在碱的存在下，或者可以被二酰基化，例如借助酰基卤，在适当的溶剂中，在碱的存在下，或者借助酰基酸酐，有或没有溶剂，得到式(X)化合物，其中Y是R4但不同于H；式(X)化合物可以在适合的溶剂中、在催化剂的存在下氢化，得到对应的式(XII)化合物，其中Y是R4或不同于R4，并且其中Y可以不同于在格利雅反应中选择作为保护基团的那些。
式(IX)化合物也可以氢化，得到式(XIII)化合物。
其中Z是H的式(I)化合物可以遵照流程(2)获得。
将化合物(XIV)的酚羟基用适当的保护性部分(Y)保护起来，得到化合物(XV)，保护性部分选自关于酚的保护的文献所述的那些(例如参见T.W.Greene，P.G.Wuts“Protective groups in organicsynthesis”，3rdEd.，John Wiley & Sons，Inc.，1999，p.246-292)。保护基团必须选自在下面的步骤条件下稳定的那些。化合物(XV)随后在烯属双键被选择性氢化，其方式避免酮还原为醇，借助催化氢化作用，使用适当的催化剂(含有Pd、Pt、Rh、Ru或其他过渡金属)，在适当的溶剂中(醇、THF、丙酮、二噁烷、乙酸乙酯、醇-水混合物等)，或者通过化学还原作用，使用氢化物，在适当的质子惰性溶剂中，得到化合物(XVI)。使化合物(XVI)与化合物(XVII)(通过被保护的4-羟基苄基氯与Mg的反应获得，反应在适合的溶剂中，例如二乙醚、THF或其他醚溶剂，在室温与溶剂沸点之间的温度下)反应，得到式(XVIII)化合物。用于4-羟基苄基氯的保护基团(Y’)必须选自与前述相同者，但是一般不同于关于化合物(XV)所选择的Y。选择性除去这种第二保护基团(Y’)，得到化合物(XIX)。式(XIX)化合物可以在适合的溶剂中、在碱的存在下用卤代烷基胺烷基化，得到式(XX)化合物。
式(XX)化合物可以脱水(例如用含水HCl，在乙腈中，在室温下)，得到式(XXI)与(XXII)化合物的混合物，或者可以被去保护(当Y＝酰基时)，在温和的条件下，例如使用K2CO3，在含水甲醇中，在室温下，得到式(XXIII)化合物。(XXI)可以通过结晶从混合物中分离，而(XXII)可以通过色谱方法纯化。
式(XXI)化合物的纯对映体可以通过手性色谱法获得，得到式(XXV)和(XXVI)化合物。
式(XXI)和(XXII)化合物可以氢化，得到式(XXVII)化合物。
式(XXIII)化合物可以脱水，例如使用含水HCl，在乙腈中，得到式(XXIV)化合物，后者可以被酰基化或烷基化，例如使用酰基氯或烷基氯，在适合的溶剂中，在碱的存在下，得到式(XXII)化合物，其中Y可以不同于在格利雅反应中选择作为保护基团的那些。
适当地选择Y，有可能通过Y保护基团的酸性除去和同时的叔醇的水解而直接从化合物(XX)得到化合物(XXIV)。
其中Y＝酰基的式(XXI)化合物可以水解，例如使用K2CO3，在含水甲醇中，得到对应的式(XXVIII)酚，它们可以借助烷基化剂或酰基化剂被烷基化或酰基化，得到式(XXI)化合物，其中Y可以不同于在格利雅反应中选择作为保护基团的那些。
优选的保护基团是新戊酰基(2，2-二甲基丙酰基)。
流程1
流程2
下列实施例进一步阐述本发明。
实施例12，4，6-三羟基苯基苄基酮亚胺盐酸盐的制备 向苯乙腈(50.1g)与三氟化硼二乙醚合物(4.7ml)的HCl/EtOAc≌5M(800ml)溶液——在冷却的乙酸乙酯中通入HCl气体而制得——加入冷冻在5℃下的间苯三酚(60g)的二乙醚(400ml)溶液。将溶液在5℃下贮存3天。将结晶性黄色沉淀过滤，用二乙醚(50ml)洗涤，无需进一步纯化即可使用。得到95g产物(收率80％)。
TLC氯仿/甲醇＝90/10，Rf＝0.7实施例22，4，6-三羟基苯基苄基酮的制备 将2，4，6-三羟基苯基苄基酮亚胺盐酸盐(95g)悬浮在水(≌2000ml)中，在90℃下搅拌1小时。冷却后，得到结晶性产物。将固体过滤，用水(200ml)洗涤，在60℃真空下干燥。得到70g产物(收率85％)。
TLC氯仿/甲醇＝90/10，Rf＝0.8实施例35，7-二羟基异黄酮的制备
向在50℃下温热的实施例2化合物(55g)的N，N-二甲基甲酰胺(1400ml)溶液加入三氟化硼二乙醚合物(228ml)与N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(84g)的N，N-二甲基甲酰胺(715ml)溶液。将混合物在95℃下加热60分钟。将深橙色溶液在室温下冷却，倒入冷水(10l)中，放置过夜，无需搅拌。将粉红色固体过滤，用水(1l)洗涤，在70℃真空下干燥。得到40.3g产物(收率70.4％)。
TLC己烷/乙酸乙酯＝70/30，Rf＝0.55实施例47-新戊酰氧基-5-羟基异黄酮的制备 在密闭的烧瓶内，将实施例3化合物(10g)和新戊酸酐(50ml)在120℃下、在磁搅拌下加热4小时。将红色浓溶液保持在室温下过夜，无需搅拌。将沉淀过滤，用石油醚洗涤，在45℃真空下干燥。得到8.9g粉红色固体(收率65％)。
TLC二氯甲烷/甲醇＝95/5，Rf＝0.8实施例53-苯基-5-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃-4-酮的制备 向实施例4化合物(8.7g)的丙酮(300ml)溶液加入5％Pd/C(9g)(含水量≌50％)，在40psi Parr设备内氢化2.5小时。在C盐垫上过滤催化剂，将滤液蒸发至干。将油性残余物溶于二乙醚，干燥(Na2SO4)，再次蒸发。得到8g橙色的油(收率90％)。使用时无需进一步纯化。
TLC石油醚/EtOAc＝95/5，Rf＝0.5
实施例64-(2-(N-哌啶基)乙氧基)-1-溴苯的制备 向溴酚(10g)的二甲基甲酰胺(160ml)溶液加入K2CO3(20.7g)，在100℃下、在搅拌下加热10分钟。历经10分钟加入N-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐(9.6g)。将混合物加热搅拌2小时，然后冷却至室温，倒入水(300ml)中，用乙酸乙酯(300ml)萃取。有机相用3％HCl萃取(2×200ml)。碱化后，含水相用乙酸乙酯(300ml)萃取；蒸发溶剂，得到13g产物，为橙色的油。
TLC二氯甲烷/甲醇/乙酸＝70/20/10，Rf＝0.7实施例7溴化4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基镁的制备 在N2气氛下，将镁(2.1g)加入到500ml四颈烧瓶内，烧瓶装有冷凝器、滴液漏斗和磁搅拌器。加入5ml实施例6化合物(11.8g)的新蒸馏四氢呋喃(THF)(50ml)溶液，然后将混合物加热至回流。历经40分钟向沸腾着的反应混合物滴入其余溶液。待混合物达到室温，浑浊的灰色溶液用于下一步。
实施例83-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-4，5-二羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃盐酸盐的制备
在搅拌下，向实施例5化合物(2.6g)的无水THF(20ml)溶液迅速加入前步所得格利雅溶液。温度升至40℃。搅拌1.5小时后，加入水(10ml)，在真空下将混合物蒸发至干。将粗产物溶于乙酸乙酯(300ml)，滤出不溶物。将有机溶液用HCl 0.25N(200ml)洗涤(产物的盐酸盐在乙酸乙酯中比在水中更易溶)，浓缩至少量体积，直至发生沉淀。超声处理后，将固体过滤，风干。得到1.6g产物，为白色粉末(收率36％)。
TLC二氯甲烷/甲醇＝90/10，Rf＝0.3m.p.220-221℃NMR一致实施例93-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5-羟基-7-新戊酰氧基色-3-烯盐酸盐的制备 将实施例8化合物(0.71g)溶于沸腾着的乙醇(40ml)。将溶液冷却至室温，加入HCl 37％(0.2ml)。在室温下2小时后，将溶液蒸发至完全干燥，使固体泡沫从丙酮中结晶。将所得白色固体过滤，用丙酮洗涤，在35℃真空下干燥。得到550mg(收率80％)。
m.p.229-230℃TLC二氯甲烷/甲醇/三乙胺＝95/5/1，Rf＝0.3NMR一致实施例103-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃盐酸盐的制备 将470mg实施例9化合物悬浮在丙酮(50ml)中。加入H2O(2ml)，将透明的溶液在40psi Parr设备中用5％Pd/C(2g，50％H2O)氢化3小时。过滤催化剂后，蒸发溶液，将所得白色固体泡沫溶于少量MeOH，加入Et2O进行沉淀。得到230mg化合物。
T.L.C.二氯甲烷/甲醇/三乙胺＝90/10/0.5m.p.260-270℃(分解)NMR一致实施例113-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5，7-二羟基色-3-烯盐酸盐的制备 将370mg实施例9化合物溶于热THF(20ml)，然后加入130mgLiAlH4，将混合物搅拌30分钟。小心地加入水(170mg)，滤出灰色固体，溶液用HCl/EtOAc酸化。蒸发混合物，将残余物溶于EtOH(2ml)，用超声处理。有白色固体沉淀出来。将其过滤，用Et2O洗涤，在50℃真空下干燥。得到210mg化合物。
m.p.248-251℃(分解)TLC二氯甲烷/甲醇/三乙胺＝95/5/1，Rf＝0.25NMR一致实施例124’，7-二新戊酰氧基-5-羟基异黄酮的制备 将商业上可得到的或者用已知方法制备的染料木碱(10g)和新戊酸酐(75ml)在110℃下加热22小时，然后将褐色溶液冷却至室温，放置过夜。有少量固体生成，向混合物加入轻质石油醚(150ml)，然后将大量固体过滤，用轻质石油醚洗涤，在45℃真空下干燥。得到11.6g标题化合物。
TLC轻质石油醚/EtOAc＝85/15，Rf＝0.5实施例133-(4-新戊酰氧基苯基)-5-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃-4-酮的制备 将实施例12化合物(10g)溶于丙酮(750ml)，在40psi下氢化，使用5％Pd/C(10g，50％H2O)作为催化剂。3小时后，滤出催化剂，蒸发溶液，得到油，从轻质石油醚(150ml)中结晶。得到8.7g标题化合物。
TLC轻质石油醚/EtOAc＝85/15，Rf＝0.5实施例143-(4-新戊酰氧基苯基)-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-4，5-二羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃盐酸盐的制备 利用实施例8所述相同工艺得到标题化合物，其中使用实施例13化合物代替实施例5化合物。
TLC氯仿/甲醇/30％NH4OH＝95/5/0.1，Rf＝0.35实施例153-(4-新戊酰氧基苯基)-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5-羟基-7-新戊酰氧基色-3-烯盐酸盐的制备 利用实施例9所述相同工艺得到标题化合物，其中使用3-(4-新戊酰氧基苯基)-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-4，5-二羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃盐酸盐代替实施例8化合物。
TLC氯仿/甲醇/30％NH4OH＝95/5/0.1，Rf＝0.4m.p.243-245℃(分解)实施例163-(4-新戊酰氧基苯基)-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃盐酸盐的制备
利用实施例10所述相同工艺得到标题化合物，其中使用实施例15化合物代替实施例9化合物。
TLC氯仿/甲醇/30％NH4OH＝95/5/0.1，Rf＝0.45m.p.205-207℃(分解)实施例173-(4-新戊酰氧基苯基)-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5-异丙氧基-7-新戊酰氧基色-3-烯盐酸盐的制备 将实施例15化合物(210mg)溶于DMF(4ml)，然后加入K2CO3(300mg)和2-碘丙烷(200mg)，将混合物在室温下搅拌2小时。加入H2O(5ml)，将所沉淀的产物过滤，用H2O洗涤，经过硅胶快速色谱法纯化(洗脱剂二氯甲烷/甲醇＝95/5，Rf＝0.7)。将所得产物溶于丙酮(2ml)，加入略微过量的HCl的EtOAc溶液，得到结晶性盐酸盐。得到7mg标题化合物。
m.p.237-239℃NMR一致实施例184’-甲氧基-7-新戊酰氧基-5-羟基异黄酮的制备
将商业上可得到的或者用已知方法制备的生原禅宁A(20g)悬浮在新戊酸酐(100ml)中，在搅拌下将混合物在120℃下加热4小时。将褐色溶液在室温下放置过夜，将所沉淀的产物过滤，用轻质石油醚洗涤，在70℃真空下干燥。得到19.6g标题化合物。
TLC二氯甲烷/甲醇＝95/5，Rf＝0.8实施例193-(4-甲氧基苯基)-5-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃-4-酮的制备 利用实施例5所述相同工艺得到标题化合物，其中使用4’-甲氧基-7-新戊酰氧基-5-羟基异黄酮代替实施例4化合物。
TLC石油醚/EtOAc＝95/5，Rf＝0.5实施例203-(4-甲氧基苯基)-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-4，5-二羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃盐酸盐的制备 利用实施例8所述相同工艺得到标题化合物，其中使用3-(4-甲氧基苯基)-5-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃-4-酮代替实施例5化合物。
TLC氯仿/甲醇/30％NH4OH＝95/5/0.1，Rf＝0.3实施例213-(4-甲氧基苯基)-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5-羟基-7-新戊酰氧基色-3-烯盐酸盐的制备 利用实施例9所述相同工艺得到标题化合物，其中使用3-(4-甲氧基苯基)-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-4，5-二羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃盐酸盐代替实施例8化合物。
TLC氯仿/甲醇/30％NH4OH＝95/5/0.1，Rf＝0.35m.p.214-216℃(分解)NMR一致实施例223-(4-甲氧基苯基)-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5，7-二羟基色-3-烯盐酸盐的制备 利用实施例11所述相同工艺得到标题化合物，其中使用实施例21化合物代替实施例9化合物。
TLC氯仿/甲醇/30％NH4OH＝95/5/1，Rf＝0.3m.p.198-200℃(分解)
实施例237-新戊酰氧基异黄酮的制备 向7g 7-羟基异黄酮的190ml N，N-二甲基甲酰胺溶液加入2g氢化钠(含80％的石蜡油)。将混合物搅拌10分钟，然后在剧烈搅拌下，在1分钟内滴加4.2g新戊酰氯。在室温下20分钟后，将混合物倒入水(400ml)中，将沉淀过滤，用水(1000ml)洗涤，溶于氯仿(800ml)。有机溶液经硫酸钠干燥，蒸发至干。得到7.6g白色固体。
TLC洗脱剂轻质石油醚/乙酸乙酯＝85/15，Rf＝0.6实施例243-苯基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃-4-酮的制备 向15.7g实施例23化合物的770ml 1，4-二噁烷溶液加入8g湿的5％披钯碳，在40psi Parr设备中氢化。反应受TLC监测，以避免进一步还原为4-羟基衍生物。2小时后，在C盐垫上过滤催化剂，用1，4-二噁烷(200ml)洗涤。将溶液蒸发至干，将残余的油(21.35g)溶于115ml乙酸乙酯，加入635ml轻质石油醚，在-20℃下贮存过夜，进行结晶。得到8.53g产物。使母液在乙醇中结晶，得到第二批1.3g纯产物。
TLC轻质石油醚/乙酸乙酯＝80/20，Rf＝0.85实施例253-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-4-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃盐酸盐的制备
利用实施例8所述相同工艺得到标题化合物，其中使用实施例24化合物代替实施例5化合物。
TLC二氯甲烷/甲醇90/10，Rf＝0.4实施例263-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-4-羟基-7-新戊酰氧基色-3-烯盐酸盐的制备 利用实施例9所述相同工艺得到标题化合物，其中使用实施例25化合物代替实施例8化合物。
TLC二氯甲烷/甲醇/30％NH4OH＝95/5/1，Rf＝0.4m.p.233-235℃(分解)实施例273-苯基-5-羟基-7-甲氧基苯并二氢吡喃-4-酮的制备 利用实施例5所述相同工艺得到标题化合物，其中使用5-羟基-7-甲氧基异黄酮代替实施例4化合物。
实施例283-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-4，5-二羟基-7-甲氧基苯并二氢吡喃盐酸盐的制备 利用实施例8所述相同工艺得到标题化合物，其中使用3-苯基-5-羟基-7-甲氧基苯并二氢吡喃-4-酮代替实施例5化合物。
TLC二氯甲烷/甲醇90/10，Rf＝0.25实施例293-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5-羟基-7-甲氧基色-3-烯盐酸盐的制备 利用实施例9所述相同工艺得到标题化合物，其中使用实施例28化合物代替实施例8化合物。
TLC二氯甲烷/甲醇/30％NH4OH＝95/5/1，Rf＝0.3m.p.253-256℃(分解)NMR一致实施例303-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5-甲氧基-7-新戊酰氧基色-3-烯盐酸盐的制备 将实施例9化合物(550mg)溶于DMF(30ml)，然后加入K2CO3(400mg)的H2O(3.5ml)溶液和CH3I(0.9ml)的DMF(9.5ml)溶液，将混合物搅拌5小时，用H2O(200ml)猝灭，用EtOAc(200ml)萃取。将有机相用盐水洗涤(2×200ml)，经硫酸钠干燥，在真空下蒸发。黄色的油经过硅胶快速色谱法纯化(洗脱剂CH2Cl2/MeOH/NEt3＝95/5/0.1，Rf＝0.4)。向游离碱的EtOAc溶液加入HCl/EtOAc，将所得产物转化为它的盐酸盐。得到190mg白色无定形固体。
TLC二氯甲烷/甲醇/NEt3＝95/5/0.1，Rf＝0.4NMR一致实施例313-(4-氟苯基)-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5-羟基-7-新戊酰氧基色-3-烯盐酸盐的制备 遵照实施例1至9所述工艺得到标题化合物，其中原料是4-氟苯乙腈，代替实施例1的苯乙腈。
TLC二氯甲烷/甲醇/30％NH4OH＝95/5/1，Rf＝0.3m.p.198-200℃(分解)
NMR一致实施例32顺式-3-苯基-4-(4-苄氧基苄基)-4-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃的制备 在500ml四颈烧瓶内，在N2下加入镁(4.9g)，烧瓶装有冷凝器、滴液漏斗和磁搅拌器。将4-苄氧基苄基氯(14.7g)溶于190ml新蒸馏的THF，加入到滴液漏斗中。在室温下将10ml该溶液滴加到镁上，将混合物强加热，直至在镁表面上有明显的泡腾。将烧瓶立即浸入75℃油浴中，历经40分钟加入其余溶液。待混合物达到室温后，在N2下将灰色浑浊溶液转移至500ml烧瓶内，烧瓶装有温度计、CaCl2阀、磁搅拌器和滴液漏斗。该格利雅溶液立即用于下一步或者储备在冰箱中(收率100％，根据未反应的镁重量计算)。历经30分钟向冷冻在≌-20℃下的上述溶液滴加实施例24化合物(10g)的新蒸馏THF(100ml)溶液。待黄橙色混合物达到室温，搅拌2小时，冷却至0℃，在搅拌下加入水(8ml)。所生成的固体弃去，将溶液蒸发至干，用EtOAc/轻质石油醚＝15/85研制(2×300ml)。过滤固体(镁盐和其他副产物)后，蒸发溶液，使油性残余物从EtOH(200ml)中结晶。得到7.0g白色固体；母液经过快速色谱法(EtOAc/轻质石油醚＝15/85)，得到第二批(1.4g)纯的顺式-3-苯基-4-(4-苄氧基苄基)-4-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃。
TLCEtOAc/轻质石油醚＝15/85，Rf＝0.35实施例33顺式-3-苯基-4-(4-羟基苄基)-4-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃的制备 将实施例32化合物(6.9g)溶于MeOH(800ml)，在40psi Parr设备中用14g湿的5％Pd/C氢化45分钟。在C盐垫上过滤催化剂后，在减压下蒸发溶液，油性残余物无需进一步纯化即可用于下一步。
TLCEtOAc/轻质石油醚＝30/70，Rf＝0.5实施例34顺式-3-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苄基)-4-羟基-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃的制备 向实施例33化合物(5.3g)的丙酮(170ml)溶液加入N-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐(2.48g)和K2CO3(3.38g)，然后将混合物在搅拌下回流16小时。滤出固体，蒸发溶液，将油性残余物溶于沸腾着的己烷(500ml)。过滤不溶物后，将热溶液冷却至室温，超声处理(或者剧烈搅拌)直至发生结晶。在-20℃下贮存后，将固体过滤，在50℃真空下干燥。得到3.2g白色固体。母液可以受到快速色谱法处理(CH2Cl2/MeOH/NEt3＝95/5/0.1)，得到另外1.2g产物。
TLC二氯甲烷/甲醇/NEt3＝95/5/0.1，Rf＝0.4实施例35
外消旋-3-苯基-4-E-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)亚苄基)-7-新戊酰氧基苯并二氢吡喃盐酸盐的制备 向冷却的(-20℃)37％HCl(3ml)的CH3CN(300ml)溶液加入冷冻在-20℃下的实施例34化合物(4.2g)的CH3CN(300ml)溶液，在-20℃下放置过夜。待溶液达到室温，用HPLC检查。若实施例34化合物被完全消耗，在真空下蒸发溶剂，将残余物溶于丙酮，再次蒸发，得到白色固体泡沫，将其溶于EtOAc，通过超声处理或搅拌进行结晶。
TLCEtOAc/n-ButOH/H2O/CH3COOH＝50/10/10/10，Rf＝0.3m.p.214-216℃NMR一致实施例36实施例35化合物对映体的分离实施例35化合物受到制备型HPLC分离处理。制备型分离条件如下柱子Chorisis 10μm，7.8×300mm洗脱剂乙腈/0.5％乙酸＝25/75流速2ml/minλ254nm进样量25mg，溶于0.5ml移动相通过分析型手性色谱法测定两种对映体的对映体纯度，条件如下柱子Chiralcel OJ-R，5μm，4.6×150mm洗脱剂乙腈/0.01M NaH2PO4+1ml HCLO4(pH＝5.6)＝65/35流速0.5ml/min
λ254nm(+)异构体的保留时间5.6min(-)异构体的保留时间6.2min收集到两种异构体的游离碱。向游离碱的醚溶液通入HCl气体，转化为它们的盐酸盐。D＝+44.6(c＝1，MeOH)[α]D＝-44.0(c＝1，MeOH)实施例37外消旋-3-苯基-4-E-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)亚苄基)-7-羟基苯并二氢吡喃盐酸盐的制备 向实施例35化合物(440mg)的MeOH(50ml)溶液加入K2CO3(440mg)的H2O(2.5ml)溶液，搅拌过夜。加入1N HCl(6.3ml)，然后将溶液部分蒸发至有白色乳液生成。冷却至0℃后，有固体分离出来，过滤之，用水洗涤，风干。得到320mg白色无定形固体。
TLCEtOAc/n-ButOH/H2O/CH3COOH＝50/10/10/10，Rf＝0.2NMR一致实施例38顺式-3-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苄基)-4，7-二羟基苯并二氢吡喃的制备
将实施例34化合物(12.5g)、MeOH(800ml)、K2CO3(12.5g)与H2O(40ml)的混合物搅拌4小时，蒸发溶剂至50ml，在磁搅拌下加入H2O(500ml)。有白色固体分离出来，过滤收集之，用水洗涤，在45℃下干燥。得到9.2g标题化合物。
TLC二氯甲烷/甲醇/30％NH4OH＝93/7/0.7，Rf＝0.35m.p.95-103℃NMR一致实施例393-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苄基)-7-羟基色-3-烯的制备 向沸腾着的实施例38化合物(9g)的乙腈(300ml)溶液加入37％HCl(3ml)的乙腈(40ml)溶液。20分钟后，将溶液迅速冷却至0℃，加入K2CO3(9.0g)，搅拌3小时，将所沉淀的游离碱与K2CO3一起过滤，用水洗涤，在40℃真空下干燥。得到7g标题化合物。
m.p.168-170℃(分解)TLC二氯甲烷/甲醇/30％NH4OH＝93/7/0.7，Rf＝0.4NMR一致实施例403-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苄基)-7-新戊酰氧基色-3-烯盐酸盐的制备
向实施例39化合物(0.5g)与K2CO3(0.5g)在乙腈(40ml)中的混合物加入新戊酰氯(0.5g)；将混合物搅拌5小时，滤出盐，然后加入HCl的EtOAc溶液(略微过量)，将溶液蒸发至干，留下固体泡沫，用乙醚研制，过滤，在室温下干燥。得到400mg标题化合物，为白色无定形固体。
TLCEtOAc/n-ButOH/H2O/CH3COOH＝50/10/10/10，Rf＝0.4NMR一致实施例413-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苯基)-5，7-二乙酰氧基色-3-烯盐酸盐的制备 在130℃下，将实施例11化合物(210mg，如实施例11制备)溶于乙酸酐(2g)，搅拌30分钟。将溶液冷却至室温，加入冰(2g)，用水(50ml)稀释，用含水K2CO3处理，用EtOAc(50ml)萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，用略微过量的HCl/EtOAc酸化，蒸发至干。使所得黄色的油从丙酮/Et2O中结晶，得到100mg标题化合物，为浅黄色粉末。
TLC二氯甲烷/甲醇/NEt3＝95/5/0.1，Rf＝0.55m.p.154-156℃(分解)NMR一致实施例42
3-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苄基)-7-异丁酰氧基色-3-烯盐酸盐的制备 遵照实施例40所述工艺得到标题化合物，其中使用异丁酰氯代替新戊酰氯。
TLCEtOAc/n-ButOH/H2O/CH3COOH＝50/10/10/10，Rf＝0.4m.p.152-155℃NMR一致实施例433-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苄基)-7-羟基色-3-烯甲磺酸盐(1∶1)(实施例39化合物的可溶性盐)的制备将2.7g实施例39化合物溶于120ml热丙酮，然后加入512mg甲磺酸的30ml丙酮溶液，将溶液磁搅拌，直至发生结晶。在-20℃下放置2小时后，将固体过滤，用Et2O洗涤，在40℃真空下干燥。得到2.9g白色固体。
m.p.170-175℃(分解)该盐在室温下、在水中的溶解度＞1mg/ml。
实施例44通过实施例37化合物的异构化制备3-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苄基)-7-羟基色-3-烯向在80℃下加热的实施例37化合物(660mg)的CH3CN/H2O(150/5ml)悬液加入25ml 1％浓HCl的CH3CN溶液。反应受HPLC监测(柱子Select B RP C18，洗脱剂CH3CN-MeOH＝80-20 70％，缓冲液30％，流速0.8ml/min，λ＝254nm)。在80℃下加热15分钟后，反应结束，有85％的产物(保留时间4.8min)生成，仍有11％的试剂未反应。反应不再进行，既不继续加热，也不加入大量的酸。对反应混合物进行处理，分离产物，如实施例39所述。得到500mg产物(收率75％)。
实施例452，2-二甲基丙酸3-(4-甲氧基苯基)-4-氧代-4H-1-苯并吡喃-7-基酯的制备 将7-羟基-4’-甲氧异黄酮(90g，335mmol)悬浮在乙腈中，加入K2CO3，将混合物在室温下搅拌大约20分钟。向混合物滴加新戊酰氯(59.85g，496mmol)，然后将反应搅拌另外15分钟，用水猝灭。将固体过滤，用水洗涤，溶于CHCl3；将溶液干燥，蒸发至干，得到标题化合物，可以从热甲苯中结晶。得到102g白色结晶性粉末。
m.p.159-161℃；NMR、MS和IR与结构一致。
实施例462，2-二甲基丙酸3，4-二氢-3-(4-甲氧基苯基)-4-氧代-2H-1-苯并吡喃-7-基酯的制备 将实施例45化合物溶于二噁烷，在35psi Parr设备中氢化，用Pd/BaSO45％作为催化剂。3小时后，滤出催化剂，将溶液蒸发至少量体积，用水猝灭，得到沉淀，过滤，溶于热的95％乙醇。在冰箱内放置过夜后，将白色产物过滤，用石油醚洗涤，得到66g标题化合物。
m.p.119-121℃；NMR、MS和IR与结构一致。
实施例472，2-二甲基丙酸3，4-二氢-4-羟基-3-(4-甲氧基苯基)-4-[[4-(苯甲氧基)苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-7-基酯的制备 向2升烧瓶内加入镁屑(15.4g，635mmol)。将4-苄氧基苄基氯(49.6g，211.6mmol)溶于无水THF，在惰性气氛下，将该溶液在1小时内滴加到镁屑上，同时轻微的回流。将混合物冷却至-20℃，然后在15分钟内滴加实施例46化合物(60g，169.3mmol)的无水THF(300ml)溶液。待混合物达到室温后，加入水(50ml)，滤出固形物，将溶液蒸发至干。向残余的油加入乙酸乙酯(200ml)，混合物在-20℃下保持1小时。滤出固体，将溶液蒸发至干。使残余的油从95％乙醇与石油醚的80/20混合物中结晶，得到60.8g(110mmol)标题化合物。
m.p.104-111℃；NMR、MS和IR与结构一致。
实施例482，2-二甲基丙酸3，4-二氢-4-羟基-4-[(4-羟基苯基)甲基]-3-(4-甲氧基苯基)-2H-1-苯并吡喃-7-基酯的制备 将实施例47化合物(60.8g，110mmol)溶于乙酸乙酯，加入5％Pd/C，使混合物氢化。滤出催化剂，将溶液蒸发至干，得到固体泡沫(50.88g，110mmol)，无需任何进一步纯化即可使用。
NMR、MS和IR与结构一致。
实施例492，2-二甲基丙酸3，4-二氢-4-羟基-3-(4-甲氧基苯基)-4-[[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-7-基酯的制备 使实施例48化合物(50g，108.1mmol)、N-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐(20g，108.7mmol)与K2CO3在沸腾着的丙酮(860ml)中的混合物反应。滤出固体，将溶液蒸发至干，得到油(62g，108.1mmol)，无需任何进一步纯化即可使用。
NMR、MS和IR与结构一致。
实施例503，4-二氢-4-羟基-3-(4-甲氧基苯基)-4-[[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-4，7-二醇的制备 向实施例49化合物(60g，104.6mmol)的甲醇溶液加入K2CO3的水溶液，在室温下反应3小时。蒸发溶剂至300ml，将混合物用水猝灭，搅拌过夜。滤出固体，用水洗涤，在室温真空下干燥，得到36g粗产物，从沸腾着的乙腈中结晶，得到28g化合物。
m.p.107.5-108.5℃；NMR、MS和IR与结构一致。
实施例513-(4-甲氧基苯基)-4-[[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-7-醇盐酸盐的制备 将实施例50化合物(24g，49mmol)溶于热的乙腈(550ml)，加入37％HCl(4.9ml)，将溶液在回流下搅拌45分钟。待混合物达到室温，将所结晶的固体过滤，用二乙醚洗涤。得到17.3g(34mmol)标题化合物。
m.p.199-205℃(分解)；NMR、MS和IR与结构一致。
还已试验了本发明化合物的药理活性。
下列实施例报道了利用化合物3-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苄基)-7-羟基色-3-烯(实施例39化合物，采用游离碱或甲磺酸盐)和3-(4-甲氧基苯基)-4-[[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-7-醇盐酸盐(实施例51化合物)所得到的结果，二者分别称为化合物I(实施例39)和化合物II(实施例51)。
体外研究——人雌激素受体-α与-β(ER-α和ER-β)本实验是如Obourn JD等，Biochemistry，32，6229，1993所述进行的。
本发明的化合物I对人ER-α和ER-β具有很高的结合亲合性。结合Ki分别为0.041±0.011和0.157±0.028nM。
与熟知的SERM雷洛昔芬相比，它的ER-α亲合性是相似的(Ki＝0.071±0.008nM)，而对ER-β的亲合性高10倍(Ki＝1.62±0.348nM)。
本发明的化合物II对人ER-α和ER-β具有进而更高的结合亲合性。结合Ki分别为0.017±0.002和0.099±0.005nM。与熟知的SERM雷洛昔芬相比(KiER-β＝1.62±0.348，ER-α＝0.071±0.008nM)，对ER-β的亲合性高16倍，而对ER-α的亲合性是相似的。
体内研究——未成熟雌性大鼠测定法抗子宫营养活性实验是如Eppenberger U等，Am.J.Clin.Oncol.，14(suppl.2)，S5-S14，1991所述进行的。
在未成熟雌性大鼠中，口服0.05mg/kg 17α-乙炔基雌二醇(E2)处理3天，与载体处理的对照相比显著增加子宫湿重(170-220％)。E2的这种浓度是产生接近最大效果的最低值，是在初步的剂量-响应实验的基础上加以选择的。
口服给药的化合物I和II以剂量相关性方式抑制E2的子宫营养作用。利用1-10mg/kg/天的化合物I观察到完全的拮抗作用(EC50＝0.33mg/kg.天)，而参照化合物左美洛昔芬仅仅部分地拮抗E2对子宫的刺激作用(在1mg/kg/天下抑制40-45％)。
利用0.1-1mg/kg/天的化合物II观察到完全的拮抗作用。对比抗雌激素效力(ED50是雌二醇刺激的生长减少50％所需的剂量)，显示本发明的化合物II比雷洛昔芬强大约25倍(ED50分别为0.016和0.39mg/kg.天)。
子宫营养活性与载体处理的对照大鼠相比，化合物I和雷洛昔芬在0.1mg/kg/天下略微增加子宫重量(分别为17和32％，显著低于0.1mg/kg/天的E2)；不过，关于0.01、1和10mg/kg/天的化合物I和雷洛昔芬，子宫重量与对照大鼠没有显著不同。
关于0.01、0.1、1和10mg/kg/天的化合物II和雷洛昔芬，子宫重量与对照大鼠没有显著不同。
与前人报道的数据相符(M.Salman等，J.Med.Chem.，1986，29，1801-1803)，左美洛昔芬在相同剂量水平下以剂量依赖性方式显著增加子宫湿重，最大激动剂活性出现在1mg/kg下，是E2的60-65％。
我们可以得出结论，在未成熟雌性大鼠测定法中，优选的本发明化合物有力和有效地拮抗雌激素对子宫的刺激作用至载体处理对照的水平以下，没有显著的雌激素生成性。
化合物II比雷洛昔芬更有力地拮抗雌激素对子宫的刺激作用。
相形之下，左美洛昔芬是一种部分激动剂，证实在1mg/kg/天下最大激动剂活性是E2的60-65％。
所要求保护的化合物在未成熟大鼠中的药理学似乎严格不同于结构上相关的化合物左美洛昔芬，表明本发明化合物与现有技术化合物之间的结构差异与减少子宫刺激作用有关。
对卵巢切除(OVX)的大鼠模型的作用实验是按照Kaln DN，Bone Mineral，15，175-192，1991和GreseTA等，J.Med.Chem.，40，146-167，1997进行的。
四周OVX大鼠测定法还在9-11月龄OVX大鼠中评价供试化合物的作用，它们在手术后给药4周，并与OVX和假对照相比。
利用子宫重量、子宫组织学、子宫嗜曙红细胞过氧化物酶活性(EPO)、骨矿物质密度(BMD)和血清胆固醇水平作为终点，检查组织特异性雌激素激动剂作用。
给药4周，没有见到明显的毒性。
对骨矿物质密度(BMD)的作用(腰椎L1-4)骨矿物质密度(BMD)是通过DEXA(双能X射线吸光分析)法测量的，使用Hologic QDR-1000+仪器，装有专用于小动物测量的软件。采用超高分辨率模式(行距0.0254cm，分辨率0.0127cm)，准直仪直径0.63mm。这种技术提供密质骨和小梁骨的完整测量。
在进行体内DEXA测量(基线扫描)之后立即手术，手术后4周再进行一次。所检查的解剖学区域是腰椎L1-4。
在扫描前将全部动物用氯胺酮和p-普马嗪麻醉。关于每次扫描，使大鼠仰卧，脊柱平行于密度计管的长轴。扫描腰椎，以骨盆骨为界；对该部位的分析是这样完成的，用亚区高分辨率软件分开椎骨和椎骨间距，在有关区域中仅包括目标椎骨。
通过下式计算保护作用百分率％保护作用＝[(％机会BMD供试化合物-％机会BMDOVX对照)/(％机会BMD假对照-％机会BMDOVX对照)]×100在第一个实验中测定化合物I的骨节省作用。
手术后4周观察到OVX大鼠的基线BMD变化百分率显著低于假对照大鼠(分别为-9.39±0.60和-0.11±0.75％，P＜0.01)。如文献所示，0.1mg/kg的17α-乙炔基雌二醇(E2)部分地防止骨的丢失(～50％保护作用)。0.1、1和10mg/kg/天的化合物I处理减少骨丢失，它们的BMD基线变化％显著高于OVX大鼠(保护作用分别为40、46和47％，P＜0.01)。
在第二个实验中测定化合物II的骨节省作用。
手术后4周观察到OVX大鼠的基线骨丢失显著高于假对照大鼠(BMD变化％分别为-5.16％和+1.28％，P＜0.01)。如文献所示，0.1mg/kg的17α-乙炔基雌二醇(E2)防止骨的丢失(～95％保护作用)。0.1和1mg/kg/天的供试化合物处理以剂量依赖性方式减少骨丢失，它们的基线BMD变化％显著高于OVX大鼠(保护作用分别为60和119％，P＜0.01)。
供试化合物的骨节省作用相当于0.1mg/kg/天的E2，表明它们对骨是完全的雌激素激动剂。
雷洛昔芬和左美洛昔芬与化合物II相比，它们的保护作用是显著的(在1和10mg/kg/天下的保护作为是50-60％)，但是显著低于本发明的化合物。
对血清胆固醇水平的作用0.1-10mg/kg/天的化合物I剂量依赖性地降低OVX大鼠的总血清胆固醇，半数最大功效ED50为0.12mg/kg，在10mg/kg下观察到胆固醇的最大降低作用(相对于OVX对照的抑制作用为67％)。
0.1和1mg/kg/天的化合物II剂量依赖性地降低OVX大鼠的总血清胆固醇(抑制作用分别为75和81％)。关于对照，化合物II在降低血清胆固醇水平上与E2同样有效，而雷洛昔芬和左美洛昔芬似乎明显不太有效。
子宫作用在用0.1、1和10mg/kg/天的本发明化合物处理的OVX大鼠中，子宫重量显著低于假对照和E2处理的OVX大鼠。
子宫的嗜曙红细胞过氧化物酶诱导作用程度可以是受雌激素影响的生长响应的有用标志(Lyttle CR和DeSombre ER，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，74，3162-3166，1977)。与OVX子宫相比，供试化合物对嗜曙红细胞过氧化物酶活性没有显著作用，而左美洛昔芬显著增加该参数。
而且，供试化合物给药没有见到显著的子宫上皮刺激作用。相反，雌激素和左美洛昔芬导致上皮萎缩完全消失，子宫内膜组织学维持在假对照的水平。
本发明的化合物I和II分别通过口服途径按0.1、1与10mg/kg/天和0.1与1mg/kg/天给药4周，显著减少骨丢失，同时降低血清胆固醇水平。
实现这些保护作用的剂量仅有最小的子宫刺激作用。
总之，所报道的结果显示，本发明的苯并吡喃衍生物具有有趣的SERM(选择性雌激素受体调节)活性，组织选择性堪与结构上相关的现有技术参照化合物媲美。
体外研究——MCF-7细胞增殖本试验比较化合物I与两种市售产品雷洛昔芬和他莫昔芬。
肿瘤细胞是从美国典型培养物保藏中心(ATCC HTB-22)获得的。所用培养基是最低必需培养基，含有10％胎牛血清，并补充有1％抗生素-抗霉菌剂。在37℃下，在5％CO2气氛中，将100μl细胞悬液试样置于96孔微量滴定板中(5×103/孔)。24小时后，每孔分别加入100μl生长培养基、2μl供试溶液、丝裂霉素或载体(DMSO，最终浓度0.4％)，一式两份，培育另外72小时。培育结束时，向每孔加入20μlalamarBlue 75％试剂，培育另外6小时，然后通过荧光强度检测细胞活力(激发波长530nm，发射波长590nm)。
相对于载体处理的对照组，化合物I和两种对比化合物雷洛昔芬和他莫昔芬在1与100μM之间的浓度下表现显著的生长抑制作用。进而，在本实验条件下，他莫昔芬和化合物I(抑制浓度IC50分别为6.0和6.5μM)比雷洛昔芬(IC50＝11μM)更有效。
他莫昔芬和化合物I在11μM下或者雷洛昔芬在18μM下观察到完全的生长抑制作用，而50％致死浓度(LC50)为22(他莫昔芬)、20(化合物I)和29(雷洛昔芬)μM。
所报道的结果确认本发明的化合物充当有力的选择性组织特异性雌激素激动剂和拮抗剂。
供试化合物比结构上相关的参照化合物苯并吡喃衍生物左美洛昔芬具有更好的药理学，堪与雷洛昔芬媲美，后者是第一代开发用于临床的SERM之一。
鉴于它们的治疗用途，本发明的化合物可以按照常规方法适当地与通常的药学上可接受的赋形剂结合，制备药物组合物，用于肠胃外、口服、鼻、直肠、皮下或透皮给药。
本领域技术人员在配制化合物时可以采取适当的方式，并且按照公认的惯例，例如公开在Remington’s Pharmaceutical Sciences，Gennaro ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1990中的那些。
权利要求
1.下列通式的2H-1-苯并吡喃衍生物 其中R1和R2独立地是H、烷基、卤代烷基、链烯基或卤代链烯基，或者当它们为烷基时与它们所键合的氮原子一起可以构成4至8元杂环；X是H、烷基、芳基、硝基、卤代、O-R3，其中R3是H、烷基、芳基、烷酰基、芳酰基；X1是H、烷基或烷氧基，当X和X1是烷基时，它们可以与它们所键合的碳原子一起构成稠合的芳族环，得到α-萘基；Y是H、烷基、烷酰基、芳酰基，烷基氨基羰基，烷氧基羰基；Z是H、O-R4，其中R4是H、烷基、烷酰基、芳酰基；m是1、2；n是0、1；p是2-6； 代表在3-4或4-4a位原子之间的单键或双键；当n是1时，双键或者可以是环外或环内的，分别得到4-亚苄基苯并二氢吡喃，此时m＝1，或者4-苄基色-3-烯，此时m＝2；当n是0时，环内键3-4可以是单键或双键，当n是0且环内键3-4是单键时，Z不是H，及其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1的2H-1-苯并吡喃衍生物，其中R1和R2是烷基，并且与它们所键合的氮原子一起可以构成哌啶环；X是H或C1-C4烷氧基；X1是H；Y是H、C1-C5烷酰基或芳酰基；Z是H；m是2；n是1；p是2；3-4位原子之间的键是双键，4-4a位原子之间的键是单键。
3.根据权利要求1或2的化合物，它是3-苯基-4-(4-(2-(N-哌啶基)乙氧基)苄基)-7-羟基色-3烯，及其酯和盐。
4.根据权利要求1或2的化合物，它是3-(4-甲氧基)苯基-4-[[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-7-醇、它的酯和盐。
5.药物组合物，含有至少一种如权利要求1-4所要求保护的化合物作为活性成分以及药学上可接受的赋形剂。
6.根据权利要求1-4的化合物在药物制备中的用途，该药物可用于预防和治疗大量绝经后病变，确切为骨质疏松、冠心病和雌激素依赖性人类癌症。
全文摘要
2H－1－苯并吡喃衍生物、它们的制备方法及其在药物组合物制备中的用途，该组合物用于预防和治疗绝经后病变。
文档编号A61P19/10GK1487934SQ02804066
公开日2004年4月7日 申请日期2002年1月21日 优先权日2001年1月24日
发明者M·戴尔卡纳利, G·阿玛利, E·阿曼尼, M·希瓦利, E·加尔比亚蒂, M 戴尔卡纳利, 呃 , 妊堑, 昀 申请人:奇斯药制品公司