专利名称：一种注射用藤黄酸制剂及其制备方法
技术领域：
本发明一种注射用藤黄酸制剂及其制备方法涉及的是一种中药制剂，特别是涉及藤黄酸、含有它的制剂及其制备方法。
用上述方法提取的藤黄酸具有抗肿瘤作用，用藤黄酸制成的注射剂应用于抗肿瘤研究也有报道，目前报道的注射剂主要有直接溶解在水中的、用硼酸溶液配制的，这些注射剂需要加入大量助溶剂，稳定性差，临床使用不便。
一种注射用藤黄酸制剂及其制备方法是采以下方案实现一种注射用藤黄酸制剂，其特征是以藤黄酸为活性成分，其余成分为助溶剂，赋形剂、注射用水，其原料重量份配比范围藤黄酸1～50份助溶剂1～50份赋形剂1～100份注射用水 0～4000份注射用藤黄酸制剂原料优选重量份配比范围藤黄酸10～50份助溶剂10～50份赋形剂1～60份注射用水 0～3800注射用藤黄酸制剂原料优选重量份配比范围藤黄酸20～30份助溶剂15～25份赋形剂30～50份注射用水 0～24000份注射用藤黄酸制剂可以是注射剂、冻干注射剂。
助溶剂选用L-精氨酸、葡甲胺、赖氨酸中的一种，经稳定性实验以L-精氨酸最佳。赋形剂选用甘露醇、右旋糖苷、氯化钠中的一种，经比较以甘露醇最佳。
注射用藤黄酸制剂制备方法，其特征在于按重量份配比称取原料藤黄酸1～50份，加入注射用水0～4000份搅匀，加入助溶剂1～50份，超声溶解至澄清，加入赋形剂1～100份，搅拌溶解，加入活性炭、搅拌、脱炭、过滤、灌装，即制成藤黄酸注射剂，将藤黄酸注射剂冷冻干燥，即制成藤黄酸冻干注射剂。
上述注射用藤黄酸制剂制备方法中助溶剂选用L-精氨酸、葡甲胺、赖氨酸中的一种；赋形剂选用甘露醇、右旋糖苷、氯化钠中的一种。
上述注射用藤黄酸制剂在制备一种抗肿瘤药物中的应用。
本发明所用原料藤黄酸具有抗肿瘤作用，本发明所用藤黄酸可使用背景技术中的方法制备，也可使用如下方法制备将藤黄树脂剪成小粒，用粉碎机粉碎成粉(约10目)，将藤黄粉600g，置3000ml三角烧瓶中，加入1500ml吡啶，振摇、静置30分钟后，移入85℃水浴中热浸2小时，并不断振摇，趁热过滤，滤瓶用热吡啶洗涤3次，每次100ml，合并滤液及洗涤液加入60℃热水150ml，放置于冰箱中过夜。于次日取出，减压滤过，滤饼用70％吡啶洗涤两次，每次80ml，再用蒸馏水洗涤三次，每次60ml，抽干后，于红外灯下烘干，得干品75g，收率12.5％。
将上述干燥品放入1000ml圆底烧瓶中，加乙醚600ml，水浴上回流溶解，放冷，滤出不溶物，滤液浓缩至1/3体积，向烧瓶中加入同体积石油醚摇匀，放置2小时。滤出固体，用石油醚(60C～90℃)洗涤三次，每次50ml，抽干后，红外光下烘干，得干品42g，收率56％。
将上述干品用乙醚溶解后，移置1000ml分液漏斗中，用1N盐酸1200ml，分四次洗涤，每次300ml，再用蒸馏水洗涤至水层显中性，分取乙醚层，用无水Na2SO4干燥，抽滤，于水浴上浓缩乙醚至干，得成品藤黄酸原料30g，收率70.0％，纯度98.5％。TLC检查一个主斑点，Rf0.硅胶G板，展开剂∶苯-乙酸乙酯-甲酸(75.24∶1.5)。
本发明注射用藤黄酸制剂配方的筛选藤黄酸为橙黄色结晶性粉末，在乙醇、甲醇等有机溶剂中溶解，水中不溶，在碱性溶液中如氢氧化钠溶液中溶解，但不稳定，易水解，故选择助溶剂是关键。我们选择了多种助溶剂如氢氧化钠、碳酸氢钠、吐温80、泊拉沙姆、菸酰胺、葡甲胺、L-精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸等，在0.1mol/L氢氧化钠中和碳酸氢钠中溶解最快，溶液在数小时后颜色变深，可见有降解。表面活性剂对本品助溶效果不明显，L-半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸助溶差，L-精氨酸及赖氨酸助溶较好，水溶液放置数天颜色基本不变，含量变化较小，葡甲胺次之。所以选择L-精氨酸为本品的最佳助溶剂，结果见下表。表1藤黄酸选用助溶剂的试验结果(藤黄酸125mg10ml)助溶剂 用量 定容后量(ml)溶解情况 溶液颜色变化情况氢氧化钠0.1mol/L8ml 10 澄清4h颜色逐渐加深碳酸氢钠0.1mol/L8ml 10 澄清4h颜色逐渐加深吐温80 0.2g 10 混浊橙黄色乳光泊拉沙姆0.2g 10 混浊橙黄色混悬菸酰胺 0.2g 10 溶解，较澄清橙黄色不变葡甲胺 0.2g 10 部分溶解 橙黄色混浊L-半胱氨酸 0.2g 10不溶液 混悬L-精氨酸0.1g 10 澄清3d橙黄色不变谷氨酸 0.1g 10 不溶 混悬甘氨酸 0.10g10 不溶 混悬赖氨酸 0.10g10 澄清3d橙黄色不变先澄清，加水后析无水乙醇 2ml 10 橙黄色混浊出本制剂主药每瓶仅为25mg，加不加赋形剂，冻干后呈网状，松散，易碎，所以我们进行了赋形剂的筛选，选择的赋形剂有甘露醇、乳糖、右旋糖苷、氯化钠，葡萄糖，结果见表2。表2赋形剂的筛选结果赋形剂 用量(mg) 外观 澄清度甘露醇 40 块状 澄清氯化钠 40 块状起皮 澄清葡萄糖 40块状 混浊乳糖40块状 乳光右旋糖苷40块状 略带乳光无 -网状、松散、易碎澄清本发明的注射用藤黄酸配方的组合物经过稳定性对比实验，证明具有更加优良的稳定性。不加L-精氨酸的溶液，在经过一定时间后溶液变得浑浊，同样时间内，加入了L-精氨酸的溶液不变，另外，在高湿高热情况下，上述组合物也表现出非常的稳定性。加入了L-精氨酸大大增加了溶解度，也使稳定性提高。
本发明的藤黄酸制剂具有良好的抗肿瘤作用，以下通过实验例说明本发明的有益效果。实验例1注射用藤黄酸体外抑瘤实验1.实验材料(1)实验药物注射用藤黄酸，规格25mg/支。(2)瘤株a.人乳腺癌MCF-7，b.人肝癌贝尔-7402，c.人宫颈癌Hela2.实验方法参照肿瘤细胞体外筛选法中相关方法，将指数生长期的人乳腺癌MCF-7、人肝癌BEL-7402、人宫颈癌Hela三种细胞以3000～5000个/180ul/孔，接种于96孔板内，次日用培养液稀释药物，每孔20ul加入孔内，使其终浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10、20、50ug/ml，每稀释度设3孔，并设不加药对照组和不接种细胞空白本底组。加药后2天(药物作用48小时)倾去培养液，加入MTT(SIGMA)液150ul(0.5ug/ml)，4小时后用DMSO溶解细胞，用EL-312型酶标仪上以波长540nm测光密度吸收值OD，并计算抑制率。公式为1-{(用药组OD-空白本底OD)/(对照组OD-空白对照OD)}×100％3.实验结果(1)、综合四次试验结果，按公式计算生长抑制率，结果如下表3注射用藤黄酸对人癌细胞生长抑制作用剂量(ug/ml) 抑制率(％X±S)MCF-7 BEL-7402 Hela0.2 00 00.5 09.35±9.3517.41.0 32.58±11.9882.65±16.35 42.63±12.912.0 98.45±1.55100±0 74.4.±16.195.0 100±0 100±0 100±0(2)、肝癌BEL-7402细胞对注射用藤黄酸最敏感，IC50约为0.78ug/ml，乳腺癌MCF-7和宫颈癌HeLa细胞次之，其IC50分别为1.25ug/ml和1.35ug/ml。实验2注射用藤黄酸对小鼠移植肉瘤S180、小鼠肝癌H-22以及小鼠艾氏癌实体瘤的抑制作用药物配制定量称取注射用藤黄酸，加入0.9％NaCl溶液配成所需浓度。给药途径静脉给药给药周期于接种后次日，隔日连续给药二天，每天一次，共6次。停药后第一天处死解剖。
剂量设置共设五组A组注射用藤黄酸组(8、4、2mg/kg)B组羟基喜树碱组1mg/kgC组空白对照组(生理盐水0.1ml/20g)小鼠类型昆明种小鼠，体重18-22g，雄性给药体积0.1ml/20g实验方法取上述规格小鼠50只，按移植性肿瘤研究法接种，接种后24小时称鼠重，并随机分为5组，每组10只，注射用藤黄酸组设高、中、低三个剂量组、并设阳性对组羟基喜树碱组和阴性对照组生理盐水组。于停药后第一天称重，处死并分离瘤体，称瘤重并进行统计学处理(t检验)表4注射用藤黄酸iv对小鼠移植S180的抑制作用剂量 体重(g)组别鼠数(只) 瘤重(g) 抑瘤率(％)(mg/kg)给药前给药后10 820.3 22.40.95±0.29**63.8A组 10 420.3 21.71.09±0.43**58.610 220.2 22.41.40±0.43**47.1B组 10 120.0 21.40.97±0.31**63.1C组 1020.2 21.92.64±0.55**P＜0.01与生理盐水对照组比较表5注射用藤黄酸iv对小鼠肝癌H-22的抑制作用剂量体重(g)组别鼠数(只) 瘤重(g) 抑瘤率(％)(mg/kg) 给药前给药后10 8 21.2 22.6 1.26±0.36**57.3A组 10 4 21.2 23.4 1.81±0.37**39.110 2 21.3 24.0 1.95±0.46**33.3B组 10 1 21.0 23.1 1.27±0.25**62.8C组 1021.2 23.2 2.95±0.39**P＜0.01与生理盐水对照组比较表6注射用藤黄酸iv对小鼠艾氏癌实体瘤的抑制作用剂量体重(g) 抑瘤率组别鼠数(只) 瘤重(g)(mg/kg) 给药前给药后 (％)10 8 20.2 23.6 1.20±0.39**51.3A组 10 4 20.9 24.6 1.35±0.38**45.610 2 20.8 24.2 1.75±0.43**29.4B组 10 1 20.8 24.1 1.18±0.27**52.3C组 10 21.2 23.2 2.46±0.37**P＜0.01与生理盐水对照组比较实验结果结果表明与生理盐水对照组比较，注射用藤黄酸对小鼠移植S180，小鼠肝癌H-22及小鼠艾氏癌实体瘤的生长均有明显地抑制作用，对小鼠体重增长无明显影响。其对瘤体的抑制作用与羟基喜树碱注射液相当。实验3注射用藤黄酸对裸鼠人肝癌7721的实验治疗作用药物配制定量称取注射用藤黄酸内容物适量加入0.9％NaCl溶液配成所需浓度。
给药途径静脉给药。
剂量设置共五个组A组注射用藤黄酸组(6、3、1.5mg/kg)B组羟基喜树碱组(1mg/kg)C组生理盐水对照组(0.1ml/20g)小鼠类型裸鼠，体重16～18g，6～8周龄。
给药体积0.05ml/10g实验方法取裸鼠40只，同一性别，16-18g，正常饲养观察3天无异常后，在无菌条件下腑下小块(2mm3/块，1块/只)接种裸鼠人肝癌7721后随机分组，8只/组，共5组。注射用藤黄酸以生理盐水溶解，配制1.2mg/ml，0.6mg/ml和0.3mg/ml三种浓度，分别用于6mg/kg、3mg/kg和1.5mg/kg即高、中、低三个剂量组。静脉给药，给药体积为0.05mg/10g体重，接种后第5日开始给药，1次/3天，共10次。同时设阳性药对照(羟基喜树碱1mg/kg)及单纯对照组(生理盐水0.1ml/只)。末次给药后次日处死动物称体重，剥取肿瘤称瘤重，按公式[(对照组平均瘤重-实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重]×100％，计算肿瘤抑制率，并用t检验对数据进行统计学处理。表7注射用藤黄酸iv对裸鼠人肝癌7721的实验结果剂量 体重(g)组别 鼠数(只) 瘤重(g) 抑瘤率(％)(mg/kg) 给药前 给药后8 6 16.518.9 0.84±0.12**53.7A组 8 3 16.619.7 1.32±0.28**26.88 1.5 16.421.2 1.58±0.23**13.0B组 8 1 16.619.8 0.53±0.14**69.8C组 8 16.519.5 1.79±0.29**P＜0.01与生理盐水组比较取处方量藤黄酸置适宜容器中，加适量注射用水(总体积的80％)，搅匀，加入L-精氨酸酸超声溶解至澄清，加入甘露醇，搅拌溶解，加入1％针用炭，搅拌30分钟，脱炭，加注射用水至足量，测定中间体含量合格后，在无菌条件下，0.22微孔滤膜过滤，滤液灌装于10ml西林瓶中，每瓶2ml，半加塞，装盘，送入冻干箱中，插入温度传感器，关闭箱门开机并至干燥，密塞，出箱，扎盖，检查，包装即可。
取处方量藤黄酸置适宜容器中，加适量注射用水(总体积的280％)，搅匀，加入L-精氨酸超声溶解至澄清，加入甘露醇，搅拌溶解，加入1％针用炭，搅拌30分钟，脱炭，加注射用水至足量，测定中间体含量合格后，在无菌条件下，0.22微孔滤膜过滤，滤液灌装于10ml西林瓶中，每瓶2ml。实施例3配方1000瓶冻干注射剂，藤黄酸50g(50重量份)，葡甲胺或赖氨酸50g(50重量份)，右旋糖苷或氯化钠100g(100重量份)，注射用水4000ml(4000重量份)。
取处方量藤黄酸置适宜容器中，加适量注射用水(总体积的80％)，搅匀，加入葡甲胺或赖氨酸超声溶解至澄清，加入右旋糖苷或氯化钠，搅拌溶解，加入1％针用炭，搅拌30分钟，脱炭，加注射用水至足量，测定中间体含量合格后，在无菌条件下，0.22微孔滤膜过滤，滤液灌装于10ml西林瓶中，每瓶4ml，半加塞，装盘，送入冻干箱中，插入温度传感器，关闭箱门开机并至干燥，密塞，出箱，扎盖，检查，包装即可。
取处方量藤黄酸置适宜容器中，加适量注射用水(总体积的280％)，搅匀，加入葡甲胺或赖氨酸超声溶解至澄清，加入右旋糖苷或氯化钠，搅拌溶解，加入1％针用炭，搅拌30分钟，脱炭，加注射用水至足量，测定中间体含量合格后，在无菌条件下，0.22微孔滤膜过滤，滤液灌装于10ml西林瓶中，每瓶4ml。
将上述干燥品放入1000ml圆底烧瓶中，加乙醚600ml，水浴上回流溶解，放冷，滤出不溶物，滤液浓缩至1/3体积，向烧瓶中加入同体积石油醚摇匀，放置2小时。滤出固体，用石油醚(60℃-90℃)洗涤三次，每次50ml，抽干后，红外光下烘干，得干品42g，收率56％。
将上述干品用乙醚溶解后，移置1000ml分液漏斗中，用1N盐酸1200ml，分四次洗涤，每次300ml，再用蒸馏水洗涤至水层显中性，分取乙醚层，用无水Na2SO4干燥，抽滤，于水浴上浓缩乙醚至干，得成品藤黄原料30g，收率70.0％纯度98.5％。TLC检查一个主斑点，Rf0.65[硅胶G板，展开剂苯-乙酸乙酯-甲酸(75∶24∶1.5)]。
本发明一种注射用藤黄酸制剂及其制备方法，该制剂配方改进了目前藤黄酸注射剂的缺陷，具有良好的溶解性和稳定性，并且经济实用，具有良好的抗肿瘤作用，通过实验例说明本发明治疗效果优良。
权利要求
1.一种注射用藤黄酸制剂，其特征是以藤黄酸为活性成分，其余成分为助溶剂，赋形剂、注射用水，其原料重量份配比范围藤黄酸1～50份助溶剂1～50份赋形剂1～100份注射用水 0～4000份
2.根据权利要求1所述的注射用藤黄酸制剂，其特征在于其原料优选重量份配比范围藤黄酸10～50份助溶剂10～50份赋形剂1～60份注射用水 0～3800份
3.根据权利要求1所述的注射用藤黄酸制剂，其特征在于其原料优选重量份配比范围藤黄酸20～30份助溶剂15～25份赋形剂30～50份注射用水 0～2400份
4.根据权利要求1所述的注射用藤黄酸制剂，其特征在于制剂是注射剂。
5.根据权利要求1所述的注射用藤黄酸制剂，其特征在于制剂是冻干注射剂。
6.根据权利要求1所述的注射用藤黄酸制剂，其特征在于助溶剂选用L-精氨酸、葡甲胺、赖氨酸中的一种，经稳定性实验以L-精氨酸最佳。
7.根据权利要求1所述的注射用藤黄酸制剂，其特征在于赋形剂选用甘露醇、右旋糖苷、氯化钠中的一种，经比较以甘露醇最佳。
8.权利要求1所述的注射用藤黄酸制剂制备方法，其特征在于按重量份配比称取原料藤黄酸1～50份，加入注射用水0～4000份搅匀，加入助溶剂1～50份，超声溶解至澄清，加入赋形剂1～100份，搅拌溶解，加入活性炭、搅拌、脱炭、过滤、灌装，即制成藤黄酸注射剂，将藤黄酸注射剂冷冻干燥，即制成藤黄酸冻干注射剂。
9.根据权利要求8所述的注射用藤黄酸制剂制备方法，其特征在于助溶剂选用L-精氨酸、葡甲胺、赖氨酸中的一种；赋形剂选用甘露醇、右旋糖苷、氯化钠中的一种。
10.权利要求1所述的注射用藤黄酸制剂在制备一种抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明一种注射用藤黄酸制剂及其制备方法涉及的是一种含有藤黄酸中药制剂。注射用藤黄酸制剂，其特征是以藤黄酸为活性成分，其余成分为助溶剂，赋形剂、注射用水，其原料重量份配比范围藤黄酸1～50份，助溶剂1～50份，赋形剂1～100份，注射用水0～4000份。注射用藤黄酸制剂制备方法按重量份配比称取原料藤黄酸1～50份，加入注射用水0～4000份搅匀，加入助溶剂1～50份，超声溶解至澄清，加入赋形剂1～100份，搅拌溶解，加入活性炭、搅拌、脱炭、过滤、灌装，即制成注射剂，将注射剂冷冻干燥，即制成冻干注射剂。助溶剂选用L－精氨酸、葡甲胺、赖氨酸中的一种。赋形剂选用甘露醇、右旋糖苷、氯化钠中的一种。
文档编号A61K31/352GK1452960SQ0313151
公开日2003年11月5日 申请日期2003年5月21日 优先权日2003年5月21日
发明者戴建国 申请人:戴建国