专利名称：用于癌症治疗的含有雌四醇衍生物的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种通过向哺乳动物给药有效量的特定雌激素成分治疗或预防所述哺乳动物中雌激素敏感性肿瘤的方法。该方法尤其适用于治疗或预防乳腺癌和子宫内膜癌。
背景技术：
乳腺癌是导致西方妇女癌症死亡率的最主要原因，并且据预测，在不久的将来将成为导致如日本的东方妇女因癌症死亡的最主要原因。据美国癌症学会估计，九分之一的妇女终生都面临来自这一疾病的威胁，且对于四分之一的正在遭受其折磨的妇女来说，该疾病是致命的。已知，乳房肿瘤以及其他肿瘤(包括子宫癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫纤维瘤、良性前列腺增生以及黑色素瘤等)均为雌激素敏感性，这表明17β-雌二醇等雌激素刺激上述肿瘤的形成和生长。17β-雌二醇是人体的一种内源性雌激素，同时存在于男性和女性身体中。
已知雌激素可以通过诱导雌激素受体介导的乳房和子宫内膜细胞分裂(增殖)频率增加，从而导致生成例如乳房和子宫内膜肿瘤的风险增加。由于细胞分裂本身会增加基因错误的风险，特别是如肿瘤抑制基因灭活等基因错误，因此其是人类肿瘤生成这一复杂过程的本质原因。
治疗雌激素敏感性肿瘤的一个重要的因素是抑制或在可能的情况下消除某些雌激素诱导的作用。为此，期望可以阻断受雌激素刺激的受体部位和/或降低能够作用于这些部位的雌激素的量。
通常应用的阻断受体部位的治疗包括给药抗雌激素。抗雌激素是一种可以抑制雌激素对其靶组织发挥全部作用的化学物质。他莫西芬是目前用于雌激素敏感性癌症化疗中的一种抗雌激素成分。他莫西芬是所谓的选择性雌激素受体调节剂(SERM)，即此物质显示雌激素拮抗剂以及激动剂的性质。尽管这种混合激动剂/拮抗剂对此类癌症的治疗中具有有益的作用，但是同样已知其雌激素副作用对于子宫中的某些癌症细胞群体具有刺激作用，因此在某些情况下会起相反作用。在现有技术中，还已知似乎不对子宫起激动作用的SERM(如雷洛昔芬)，但却具有能诱导一些更年期疾病的发生的缺点，如热潮红和出汗。此外，这种SERM还与静脉血栓栓塞风险的增加有关，这是另一激动性雌激素作用。
血清中雌激素浓度的降低可以外科手术(卵巢切除术、肾上腺切除术、垂体切除术)或者以药物学方法通过给药大剂量的孕激素、GnRH类似物或甾体通道抑制剂等实现。然而，长期抑制内源性雌激素的生成会导致雌激素不足。此外，发现即使在性激素完全缺失的情况下，一些受体仍可以被激活。参考Simard and Labrie，“Keoxifene shows pureantiestrogenic activity in pituitary gonadotrophs”，Mol.Cell.Endocrinol.39141-144，(1985)，尤其是第144页。
US 4937238(Lemon)涉及一种预防雌性哺乳动物乳腺癌的方法，包括给药选自以下组中的药物的步骤(1)4-OH雌二醇；(2)d-马萘雌酮；以及(3)17α-乙炔基雌三醇。其还提供一个通式来描述包括(1)4-OH雌二醇在内的一系列化合物。该式包含大量不同的雌激素类物质，包括可含有4个或更多个羟基的物质。除了4-OH雌二醇外，没有讨论任何这一大类物质的其他代表性物质。
US 5,340,584(Spicer等)记载一种用于避孕或治疗良性的妇科疾病的方法，包括在第一段时期给药抑制卵巢雌激素和孕酮生成有效量的GnRH组合物，同时给药预防雌激素缺乏症状有效量的雌激素组合物，以及同时给药有效剂量的孕激素，以维持该孕激素的血清水平在降低子宫内膜细胞增殖有效的水平上。该美国专利主要关注在至少为两个月的延长的时期内有效的缓释剂型。在列举的诸多可以被用于所述发明的雌激素中也提及雌四醇。
WO 02/30355(Kragie)记载一种在患者中缓解芳香化酶抑制剂的不利的副作用和/或增强其有益的功效的方法，其中该方法包括给药一种或多种芳香化酶抑制剂以及一种或多种具有雌激素功能替代剂的组合(EFR)。在该申请中提及大量EFR剂，包括雌激素。所列举的雌激素中也提及雌二醇。据称，所要求保护的方法对治疗遭受所服用的用于治疗许多疾病状况或临床适应症的包含芳香化酶抑制剂的组合物的副作用折磨或其疗效下降的的患者有益。有关作为疾病状况的实例而提及的乳腺癌中，据发现芳香化酶抑制剂被用于减少癌变的乳房组织中雌激素的生成。据称，雷洛昔芬等选择性EFR剂和雌二醇代谢物作为EFR剂在肿瘤治疗中具有有益的作用。关于雌二醇代谢物可参考Lippert TH等。Steroids2000；65357-69。所述文章报道了对包括雌四醇在内的雌二醇的A环和D环代谢物对血管内皮细胞增殖作用的研究的结果。该结果表明，一些A环代谢物能够抑制经培养的人体脐带血管内皮细胞的增殖。而未观察到雌四醇对此具有显著作用。
与仅仅抑制雌激素生成的治疗相比而言，雌激素类似物如GnRH类似物、芳香化酶抑制剂和/或孕激素通常能够产生更好的疗效。因此，需要一种药物，其与抗雌激素和/或目前可用的SERM相比，具有激动剂和拮抗剂(或非激动剂)性质的更有利的组合。具体而言，需要一种对乳房和/或子宫内膜组织无不利的增殖作用，而同时具有足够的雌激素活性以防止其给药后导致雌激素缺乏和/或更年期症状。
发明内容
本发明出乎意料地发现，如下式所示的雌激素物质能满足这些要求
其中R1、R2、R3、R4分别独立地为氢原子、羟基或含有1-5个碳原子的烷氧基。
此类雌激素物质已知的代表是1，3，5(10)-雌三烯-3，15α，16α，17β-四醇，也称作雌四醇、oestetrol以及15α-羟基雌三醇。雌四醇是在人类妊娠期间由胎儿肝脏产生的一种雌激素。在足月妊娠中，母体血浆中未结合的雌四醇水平的峰值是1.2ng/ml，而在胎儿血浆中比在母体血浆中约高12倍(Tulchinsky等，1975.J.Clin.Endocrinol.Metab.，40，560-567)。
由于本领域技术人员预期雌激素物质将促进雌激素敏感肿瘤的形成和生长，因此该雌激素物质能方便的用于治疗这种肿瘤是令人惊奇的。由于该雌激素物质似乎未显示出雌激素拮抗性质，这一发现实在是出人意料。
尽管发明者们不想被理论所束缚，但相信该雌激素成分(EC)的有利作用是由该成分赖以与其他的雌激素竞争结合细胞质雌激素受体(ER)的首要机制(primary mechanism)导致的。据信，所得ER-EC复合体可抑制肿瘤细胞内源性雌激素的多种活性。内源性雌激素，如17β-雌二醇等，与ER结合从而促进细胞的活性如雌激素/ER介导的基因转录、DNA合成、癌症细胞生长，以及自分泌多肽如转录生长因子-α、表皮生长因子、类胰岛素生长因子-II以及其他可能与细胞增殖有关的生长因子的增加。本发明雌激素成分对内源性雌激素与ER结合的竞争性抑制可以降低或抑制内源性雌激素的诱导癌症生长的细胞活性。由于对如乳房组织不具有增殖影响，本发明的雌激素成分可以抑制乳腺癌细胞从细胞周期的G1初期向G1中期转变，并且对乳腺癌细胞显示细胞抑制作用。
据发现，本发明的雌激素物质对ERα受体显示出相对较高的亲和力，或者相反地，对ERβ受体显示出相对较低的亲和力。据信，这种受体特异性以某种方式与本发明物质在雌激素敏感性肿瘤治疗中具有较高的功效有关。然而，尽管在此领域正在进行大量的科学研究，但是对控制导致这种功效的ER信号通道的机制仍所知甚少。
已知大多数的雌激素与在组织特异性辅激活物和/或辅阻抑物存在下结合至基因调节区域中的雌激素反应成分和/或其他转录因子的两种ER相结合。考虑到ER信号的复杂性，以及ERα和ERβ以及它们的辅因子的组织特异性表达，现在认识到ER配体能够以组织特异性方式起到雌激素激动剂或者甚至雌激素抑制剂的作用。
目前还已知雌激素通过基因表达调节细胞的药理学，已知该雌激素作用受雌激素受体介导。雌激素受体对基因调节的作用可以通过ER直接与雌激素反应成分相结合、ER与其他转录因子如NF-κB、C/EBPβ以及通过包括离子通道受体的非基因组作用加以介导。
近年来的研究进展表明，ER与辅激活物(如SRC-1、CBP和SRA)和辅阻抑物(如SMRT和N-CoR)有关，它们也可以组织特异性及配体特异性方式调节ER的转录活性。此外，有证据表明，多数雌激素调节的基因不具有典型的雌激素反应成分。在这种情况下，ER与对调节这些基因而言关键的转录因子进行相互作用。已知的其活性可受ER调节的转录因子包括例如AP-1、NF-κB、C/EBPβ和Sp-1。
考虑到ER信号的复杂性以及表达ER及其辅因子的组织的不同类型，一般认为ER配体不能再被简单地分为纯粹的抑制剂或激动剂。Paech等(Science 277，1508-1510，1997)的发现支持这一观点，他们报道，在ERα存在下，17β雌二醇激活AP-1位点，但是在ERβ存在下却抑制该同一位点。相反，ER配体雷洛昔芬(Eli Lilly & Co.)及他莫西芬以及ICI-182,780(Zeneca Pharmaceuticals)通过ERβ刺激AP-1位点，但是在ERα存在的情况下却抑制此位点。
如主要通过RT-PCR或原位杂交的分析，已知ERα和ERβ具有交叠以及相异的组织分布。通常组织表达ERα和ERβ，但是受体却存在于不同细胞类型中。
总之，尽管本发明的雌激素成分是如何发挥其有利作用的机制还不清楚，但是显然所述雌激素成分与诸如17β雌二醇和乙炔基雌二醇的雌激素物质不同，它对ERα受体显示出与对ERβ受体相比而言相对较高的亲和力。由以上所述还可知，这种特异性可能会是本发明雌激素成分在雌激素敏感性肿瘤的治疗或预防中所具有的出人意料的功效的原因。
与SERM如他莫昔芬相似，本发明雌激素成分显示出能够长期给药而不会发生更年期症状的雌激素作用。然而，他莫西芬对子宫组织具有不良的雌激素作用，并且与子宫内膜增生和癌变有关。长期使用他莫西芬与子宫内膜癌变风险的增加有关，比没有使用他莫西芬治疗的妇女的风险高出五倍。因此，给药他莫西芬用于长期预防乳腺癌和长期治疗乳腺癌具有显著的与之相关的风险。
与他莫西芬有关的另一个缺点是对于绝经前妇女而言具有卵巢过度刺激的危险，其导致雌激素的过多分泌。显然，所导致的雌激素血清水平的增加对于患有雌激素敏感性肿瘤的患者而言是非常不希望的。因此，对于使用他莫西芬治疗的绝经前患者一般要施行卵巢切除术。因为本发明雌激素成分实际上抑制卵泡生长和排卵，因此其似乎对子宫组织无此不良影响，也不会诱导卵巢的过度刺激。
本发明的雌激素物质的另一个重要的益处来源于它们与其他药物相互作用(药物之间的相互作用)的相对不敏感性。众所周知，某些药物可能会降低雌激素的作用，而其他药物可能会增强它们的活性，从而可能导致副作用增加。类似地，雌激素可能干扰其他药物的代谢。一般而言，其他药物对雌激素的作用是由于干扰了这些雌激素的吸收、代谢或排泄，而雌激素对其他药物的作用是由于对代谢途径的竞争。
当药物可能诱导可能使雌激素血浆水平降低至治疗水平之下的肝脏微粒体酶时(例如抗惊厥剂苯妥因、普里米酮、巴比妥酸盐、卡巴咪嗪、乙琥胺和甲琥胺；抗结核药物如利福平；抗真菌药物如灰黄霉素)，发生临床上最显著的一组雌激素和药物之间的相互作用。本发明雌激素物质对肝脏微粒体酶(如P450)向上和向下调节的依赖性更低，且对其他P450底物的竞争也不太敏感。类似地，它们并不显著干扰其他药物的代谢。
如形成于肝脏的大多数雌激素的结合物被分泌于胆汁中，且可能被结肠中的肠道细菌分解以释放出活性激素，该激素然后可以被重吸收(肠肝循环)。有临床报告支持如下观点，在服用抗生素如阿莫西林和四环素等的妇女中，雌激素的肠肝循环会降低。本发明雌激素物质的结合物形式几乎不从胆汁中分泌，表明它们对影响其他雌激素的肝肠循环的药物几乎不敏感。
上述陈述用于解释为何本发明雌激素物质尤其适用于治疗或预防雌激素敏感性肿瘤。
具体实施例方式
因此，本发明涉及一种治疗或预防哺乳动物中雌激素敏感性肿瘤的方法，所述方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的雌激素成分。其中，该雌激素成分选自以下组中如下式所示的物质，
其中R1、R2、R3、R4彼此独立地为氢原子、羟基或含有1-5个碳原子的烷氧基；当以本发明方法应用时可以释放出前述分子式物质的前体；一种或多种上述物质和/或前体的混合物。
本文所用术语“肿瘤”是指其中细胞增殖失控并呈进行性的组织新的生长。术语肿瘤包括恶性和良性肿瘤。
术语“雌激素敏感性肿瘤”是指其形成和生长受雌激素刺激的肿瘤，除本发明雌激素成分外，尤其是选自以下组中17β-雌二醇、乙炔基雌二醇，以及其前体和代谢物。
术语“癌症”是指经过恶性转变进而对宿主器官呈病理性的细胞。
本发明雌激素物质与通常应用于药物制剂中的生物源以及合成雌激素不同，其甾体骨架中的5元环含有3个羟基取代基而不是0-2个。在一个特别优选的实施方案中，R1、R2、R3、R4中至少一个为羟基，即此雌激素物质至少包含4个羟基。优选地，在本发明组合物中用作活性成分的雌激素成分是所谓的生物源雌激素，即自然存在于人体内的雌激素，生物源雌激素的前体或它们的混合物。由于生物源雌激素自然存在于胎儿和女性体内，因此，特别是在外源性给药这种雌激素所造成的血清水平并非大幅超出自然存在的浓度时，预期不会产生副作用。
在一个本发明优选实施方案中，该雌激素物质含有4个羟基。在另一个优选的实施方案中，R1、R2、R3、R4中不超过3个为氢原子。同样，在上述式中，R1优选为氢原子。在所述分子式中，基团R1、R2、R3和R4中优选至少2个、更优选至少3个是氢原子。
因为携带羟基取代基的碳原子具有手性活性，所以符合该式的雌激素物质包含各种对映异构体。在一个优选的实施方案中，本发明雌激素物质是15α-羟基取代的。在另一个优选的实施方案中，该物质是16α-羟基取代的。在另一个优选的实施方案中，该物质是17β-羟基取代的。最优选的雌激素物质是15α，16α，17β-三羟基取代的。在本发明雌激素成分甾体骨架中的其他手性碳原子优选为具有与17β-雌二醇和其他生物源雌激素相应的碳原子相同的构型。
在本发明的一个优选的实施方案中，R3为羟基或烷氧基。在另一个优选的实施方案中，R1、R2和R4为氢原子，在这种情况下该物质为1，3，5(10)-雌三烯-3，15，16，17-四醇。后一物质优选的异构体是1，3，5(10)-雌三烯-3，15α，16α，17β-四醇(雌四醇)。
本发明还包括构成本发明方法中的活性成分的雌激素物质的前体的应用。例如，作为代谢转化的结果，这些前体物质在用于本发明方法时能够释放出上述的雌激素物质。这些前体优选地选自本发明雌激素物质的衍生物组中，其中，至少一个羟基上的氢原子被以下基团取代含有1-25个碳原子的烃基羧酸、磺酸或氨基磺酸的酰基；四氢呋喃基；四氢吡喃基；或每个残基含有1-20个糖苷单元的直链或支链糖苷残基。适用于本发明的前体的典型的实例是酯类，其可通过将雌激素物质的羟基与含有一个或多个羧基(M+-OOC-)的物质发生反应获得，其中M+为氢原子或(碱)金属阳离子。因此，在一个特别优选的实施方案中，该前体是其中在所述式中至少一个羟基上的氢原子被-CO-R所取代的雌激素物质衍生物，其中R是含有1-25个碳原子的烃基。优选地，R是氢或含有1-20个碳原子的烷基、烯基或芳香基。
本发明方法可适用于治疗哺乳动物如牛、宠物以及尤其是人。该方法可用于治疗雌性和雄性(例如前列腺增生)，但在治疗雌性中获得最佳结果。该方法可有利地应用于绝经期前、围绝经期或绝经后的雌性。因为本方法不同于他莫西芬等SERM，与卵巢过度刺激的危险无关，因此其特别适用于绝经期前和围绝经期雌性的治疗。本发明方法可有利地用于治疗雌激素敏感性肿瘤以及同时预防此类肿瘤的形成。
当长期持续给药时，本方法尤其有效。一般来说，该方法包括在为期至少5天期间内不间断地给药雌激素成分。优选地，不间断给药持续至少30天，更优选至少90天。
本发明方法适于采用雌激素成分的经肠或非胃肠道给药。所用术语“非胃肠道给药”在本文中包括透皮给药、静脉给药、鼻内给药、阴道内给药、肺内给药、口腔给药、皮下给药、肌内给药以及子宫内给药。术语“经肠给药”包括口服给药以及直肠给药。
优选地，给药方式选自以下组中口服给药、透皮给药、静脉给药、鼻内给药、阴道内给药、肺内给药、直肠给药、口腔给药、皮下给药、肌内给药或子宫内给药。更优选地，给药方式选自以下组中口服给药、透皮给药、静脉给药、皮下给药、鼻内给药、肺内给药以及阴道给药。在一个特别优选的实施方案中，本发明方法采用口服给药、透皮给药、鼻内给药或皮下给药。更优选地，本发明方法采用口服给药和透皮给药。
口服给药、静脉给药、皮下给药、肌内给药、鼻内给药、直肠给药、口腔给药、以及肺内给药理论上适用于每日(至少)一次给药。透皮给药有利地以每日一次至每月一次的频率应用。阴道内给药和子宫内给药有利地以每周一次至每月一次的频率操作。皮下给药和肌内给药也适用于采用储库型注射剂的形式，以一周到6个月的间隔、优选为4周到3个月的间隔给药。
处于方便的原因，本发明方法优选地采用1天、1周或1个月的给药间隔。特别优选的给药方案是每日一次口服给药、皮下给药、静脉给药或鼻内给药，每周一次透皮给药或每月一次阴道内或皮下给药。
尽管本方法可以用于如US 5340584中所述的缓释剂型，但是并不优选在至少约一个月的长期内有效的缓释剂型。
不考虑给药方式，该雌激素成分优选以能够使血清浓度达到至少1纳克/升，更优选为10纳克/升，最优选为100纳克/升。通常，所导致的雌激素成分的血清浓度不会超过100微克/升，优选为不超过50微克/升，更优选为不超过25微克/升。
如US 5340584中所教导，在一个特别优选的实施方案中，该雌激素成分以明显超过维持所述雌激素成分血清水平于可以有效的预防雌激素缺乏症状的水平所需的剂量给药。更优选地，该雌激素成分以足够维持所述雌激素成分血清水平处于与超过50pg/ml、最优选为超过140pg/ml雌二醇血清水平等效的水平的量给药。
根据本发明方法，该雌激素成分通常以每日每千克体重不超过1mg、优选为每日每千克体重不超过0.4mg的量给药。为了使给药雌激素成分起到显著的效果，建议以每日每千克体重至少1μg的量给药。优选地，所给药的量为每日每千克体重至少5μg。
优选地，活性成分口服给药的量优选为每日每千克体重不超过400μg，优选为每日每千克体重不超过200μg。为了使给药活性成分起到显著的效果，建议以每日每千克体重至少2μg的量口服给药。优选地，所口服给药的量为每日每千克体重至少5μg。在本发明方法中，尤其是用于人时，雌激素成分通常以每日至少0.05mg、优选为每日至少0.1mg的平均剂量给药。最大剂量通常需低于每日40mg，优选为低于每日20mg。
本发明的治疗方法包括向需要这种治疗的哺乳动物给药有效量的雌激素成分。有效所需的剂量在个体之间具有差异，并由各种因素所决定，如个体的性别、体重、给药途径以及所使用的特定雌激素成分的效力。
本发明方法中，尤其是用于人时，该雌激素成分通常以每日0.01到20mg、优选为每日0.05到10mg的剂量口服给药。类似地，非胃肠道给药优选的剂量为每日至少0.05mg，优选为每日至少0.1mg。非胃肠道给药的平均最大剂量通常需低于每日40mg，优选为低于每日20mg。
在本发明的一个特别优选的实施方案中，该方法采用活性雌激素成分的口服给药。所用术语“口服给药”在本文也包括经口管饲给药。发明人发现，尽管雌四醇以及相关的雌激素物质的效力较低，但仍然可有利地口服给药。尽管发明人不希望被理论所束缚，但据信口服雌四醇类物质的效力源于这些物质特殊的药代动力学(ADME)和药效学性质的联合。
发明人发现，雌四醇类物质的口服生物利用度出乎意料地高，其在体内的半衰期比通常使用的生物源雌激素长很多。从而，尽管雌四醇和雌四醇类物质具有相对较低的雌激素效力，它们仍然可以有效地用于口服给药，这是因为要达到期望效果所需的口服剂量与那些已经用于例如17β-雌二醇的口服剂量相近。
雌四醇和雌四醇类物质的另一个重要的优点在于，由于这类物质在所谓的“首过”中几乎不代谢，因此事实上这类物质的肝脏作用被认为很小。口服给药的首过效应指的是在药物从起始摄入转运至血流循环中时药物被肝脏降解的过程。在从肠腔内再吸收后，口服给药的活性成分通过肝脏进入机体。该事实对雌激素药物尤为重要，因为肝脏是雌激素的靶器官。雌激素的口服摄入在肝脏中导致强烈的雌激素效应。治疗上等效剂量的通常应用的生物源雌激素在口服给药时导致明显的肝脏参数反应，如SHBG、CBG和血管紧张素原的增加。在应用马雌激素剂型(也称作结合雌激素)时也观察到雌激素的这些肝脏效应。
本发明方法可适用于各种雌激素敏感性肿瘤的(预防性)治疗，包括乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜异位、子宫纤维瘤、良性前列腺增生症和黑色素瘤。术语“子宫癌”包括子宫内膜癌和宫颈癌。本发明方法被认为特别适用于乳腺癌和子宫内膜癌的治疗或预防。本发明方法最有利地用于乳腺癌的治疗或预防。
为了进一步增强本发明方法的有效性，建议可联合给药一种能够抑制内源性雌激素血清水平的药物成分。优选地，以能够有效抑制17β-雌二醇水平至10pg/ml以下、更优选为5pg/ml以下、最优选为1pg/ml以下的量联合给药一种或多种该雌激素抑制剂。
可有利地与本发明雌激素成分一同联合给药的雌激素抑制剂的实例包括孕激素、GnRH类似物、芳香化酶抑制剂、环加氧酶2(COX-2)抑制剂和1型17β-羟基甾体脱氢酶(1型17β-HSD)抑制剂。优选地，本发明方法包括联合给药一种选自前述组中的酶抑制剂的雌激素抑制剂。这些酶抑制剂能提供具有以下优势，其能够选择性地抑制内源性雌激素生成而不直接影响其他甾体和/或促性腺激素的生成。
原则上，如US 5,340,584和US 5,340,585所述的GnRH组合物也在本发明方法中用作雌激素抑制剂。然而优选地，本发明方法不采用这种GnRH组合物，特别是在本发明方法被用于预防雌激素敏感性肿瘤的发生时。
如芳香化酶抑制剂、COX-2抑制剂和1型17β-HSD抑制剂等酶抑制剂能够阻断涉及最重要的内源性雌激素17β-雌二醇的内源性生成的生物合成途径。这些途径如下所示
由上图可知，芳香化酶和17β-羟基甾体脱氢酶1是17β-雌二醇内源性生成的关键酶。因此，对芳香化酶和17β-羟基甾体脱氢酶1的抑制将自动减少17β-雌二醇的内源性生成，其再减弱雌激素诱导的增殖。
上图还表明，前列腺素PGE2能够刺激芳香化酶活性。因此，导致由花生四烯酸生成PGE2的环加氧酶2(COX-2)的抑制将自动降低芳香化酶活性，从而相应地减少雌激素诱导的增殖。
因此可以推断，芳香化酶抑制剂、环加氧酶2(COX-2)抑制剂以及1型17β-羟基甾体脱氢酶抑制剂适用于减弱雌激素的内源性生成，尤其是17β-雌二醇的内源性生成。
芳香化酶是P-450酶中的一种。在始于胆固醇侧链的断裂的甾体生物合成途径中，芳香化酶催化甾体骨架A环的芳构化。更准确地说芳香化酶催化雄烯二酮转化为雌酮，以及睾酮转化为雌二醇。因此，芳香化酶是其后雌激素生物合成的限速酶。
芳香化酶抑制剂是能够抑制芳香化酶催化活性的物质。就本发明而言，芳香化酶抑制剂是可以非毒性剂量用于动物尤其是人，从而抑制雌激素的生物合成。目前，许多芳香化酶抑制剂可以使用，包括氨鲁米特、阿那曲唑、依西美坦、伏氯唑、来曲唑、法倔唑、罗谷亚胺、阿他美坦、福美坦、利阿唑、YM511、TZA-2237、CGS 16949A以及MEN 11066。芳香化酶抑制剂主要应用于治疗乳腺癌的方法中。芳香化酶抑制剂还被建议用于子宫内膜异位的治疗。Takayama等(Fertility Sterility 1998；69(4)；709-13)成功地使用芳香化酶抑制剂对一例罕见的侵袭性(aggressive)绝经后子宫内膜异位复发进行治疗。所有使用芳香化酶抑制剂的现有治疗都建立在口服或肌内给药的基础上。
环加氧酶(COX)，也称作前列腺素G/H合酶，是一种膜结合酶，负责把花生四烯酸氧化为前列腺素，其在20年前首次得到证实。然而，在过去的10年里，对环加氧酶在不同的病理生理学条件下所起的作用得以更多地了解。经鉴定环加氧酶具有两种同工型，称为COX-1和COX-2。COX-1为组成型表达并且调节许多管家功能，如血管止血和胃保护，而COX-2可以被许多介质如生长因子、细胞活素和内毒素诱导(例如，在炎症部位)。
1型17β-羟基甾体脱氢酶抑制剂(1型17β-HSD抑制剂)的实例包括N-丁基、N-甲基、9-[3’，17’β-(二羟基)-1’，3’，5’(10’)-雌三烯-16α基]-7-溴壬酰胺；N-丁基、N-甲基、7-[3’，17’β-二羟基-1’，3’，5’(10’)-雌三烯-6’β基]-7-硫代庚酰胺。
在一个优选的实施方案中，本发明的方法包括以能够有效抑制内源性雌激素生成的量联合给药芳香化酶抑制剂。芳香化酶抑制剂适用于显著降低内源性雌激素的生成而不产生严重的副作用。通常与芳香化酶抑制剂以及其他内源性雌激素生成抑制剂有关的一种严重的副作用为低雌激素症(hypoestrogenism)，其可通过联合给药本发明的雌激素成分而得以有效地消除。
在一个特别优选的实施方案中，本发明方法包括以能够抑制内源性雌激素生成的量联合给药孕激素。孕激素联合给药具有已知孕激素能够抑制雌激素对子宫内膜的增殖作用。与某些SERM不同，尽管本发明雌激素成分似乎对子宫内膜无显著增殖作用，但仍建议联合给药孕激素以排出任何潜在的风险。
可根据本发明应用的孕激素的实例包括孕酮、左炔诺孕酮、诺孕酯、炔孕酮、地屈孕酮、屈螺酮、3β-羟基去氧孕烯、3-酮去氧孕烯(依托孕烯)、17-去乙酰诺孕酯、19-去甲孕酮、乙酰氧基孕烯诺龙、烯丙基雌烯三醇、阿那孕酮、氯地孕酮、环丙孕酮、地美孕酮、去氧孕烯、地诺孕素、dihydrogesterone、地美孕酮、炔孕酮、双醋炔诺醇、醋酸氟孕酮、gastrinon、孕二烯酮、孕三烯酮、羟甲基孕酮、羟基孕酮、利奈孕酮(＝lynoestrenol)、美屈孕酮、甲羟孕酮、甲地孕酮、美仑孕酮、诺美孕酮、炔诺酮(＝norethisterone)、异炔诺酮、炔诺孕酮(包括d-炔诺孕酮和dl-炔诺孕酮)、诺孕烯酮、normethisterone、孕酮、奎孕醇、(17α)-17-羟基-11-亚甲基-19-去甲孕-4，15-二烯-20-炔-3-酮、替勃龙、曲美孕酮、醋苯阿尔孕酮、nestorone、普美孕酮、17-羟基孕酮酯、19-去甲-17羟基孕酮、17α-乙炔基-睾酮、17α-乙炔基-19-去甲-睾酮、d-17β-乙酰氧基-13β-乙基-17α-乙炔基-gon-4-烯-3-酮肟以及这些化合物的能够在用于本发明的方法时在体内释放出这些孕激素的前体。优选地，用于本发明方法中的孕激素选自以下组中孕酮、去氧孕烯、依托孕烯、孕二烯酮、地诺孕素、左炔诺孕酮、诺孕酯、炔诺酮、屈螺酮、曲美孕酮、地屈孕酮、这些孕激素的前体以及其混合物。
本发明的另一方面涉及包括以下成分的药物组合物至少0.01mg选自芳香化酶抑制剂、GnRH类似物、环加氧酶2(COX-2)抑制剂、1型17β-羟基甾体脱氢酶(HSD)抑制剂以及它们的组合的雌激素抑制剂；至少0.05mg的如本文前述的雌激素成分；以及药物学可接受的赋型剂。在一个优选的实施方案中，该雌激素抑制剂选自以下组中芳香化酶抑制剂、COX-2抑制剂、1型17β-羟基甾体脱氢酶(HSD)抑制剂以及它们的组合。最优选的雌激素抑制剂诶芳香化酶抑制剂。
在一个特别优选的实施方案中，本发明的药物组合物包含与至少0.05mg阿那曲唑口服剂量等效的量的芳香化酶抑制剂。
本发明还包括含有如上定义的药物组合物的药物传递系统，所述药物传递系统选自以下组中口服剂量单位、注射液、栓剂、阴道栓、凝胶以及乳膏。在一个特别优选的实施方案中，所述药物传递系统选自以下组中口服剂量单位、栓剂、阴道栓、凝胶以及乳剂。最优选地，该药物传递系统为口服剂量单位。
本发明的另一方面涉及由一个或多个含有至少0.05g本发明雌激素成分以及药物学可接受的赋型剂的剂量单位、以及一个或多个含有至少0.01mg选自GnRH类似物、芳香化酶抑制剂、环加氧酶2(COX-2)抑制剂、1型17β-羟基甾体脱氢酶抑制剂以及其组合的雌激素抑制剂以及药物学可接受的赋型剂的剂量单位组成的药盒。
雌激素成分和雌激素抑制剂可以单独的剂量单位形式并入本发明药盒。然而，有可能并且实际上可以非常方便地将这两种成分结合为单一剂量单位。
该药盒优选地包含用于口服给药、透皮给药、静脉给药、鼻内给药、阴道内给药、肺内给药、直肠给药、口腔给药、皮下给药、肌内给药和/或子宫内给药的剂量单位。更优选的剂量单位设计成用于口服给药、透皮给药、静脉给药、皮下给药、鼻内给药、肺内给药和/或阴道给药。在一个特别优选的实施方案中，该药盒包含可以用于口服给药、透皮给药、鼻内给药和/或皮下给药。最优选地，该剂量单位为口服剂量单位。
本发明的雌激素成分可适用于以任何本领域已知的药物剂型的形式给药。该药物剂型可为固体或半固体剂量形式如片剂、胶囊剂、扁囊剂、小丸剂、丸剂、散剂及颗粒剂，以及液体剂型如溶液剂、乳剂、混悬剂、软膏、糊剂、乳膏、凝胶、胶冻、泡沫剂。
可用于本发明的口服剂量单位的实例包括固体或半固体剂量形式，如片剂、胶囊剂、扁囊剂、小丸剂、丸剂、散剂及颗粒剂。术语“固体或半固体剂量形式”也包括含有液体如油的胶囊，所述雌激素成分溶于或分散于其中。片剂及等效的固体和半固体剂量形式可合适地包含如粘合剂(例如羟基丙基甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、其他纤维素材料以及淀粉)、稀释剂(例如乳糖和其他糖类、淀粉、磷酸二钙及纤维素材料)、崩解剂(例如淀粉聚合物剂纤维素材料)以及润滑剂(例如硬脂酸盐及滑石粉)。
适宜的透皮传递系统包括贴剂、凝胶、胶带和乳膏，可以含有赋形剂如增溶剂、渗透促进剂(如脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪醇和氨基酸)、亲水性聚合物(如聚卡波非和聚乙烯吡咯烷)以及粘合剂和增粘剂(如聚异丁烯、硅氧烷基粘合剂、丙烯酸盐和聚丁烯)。
透粘膜(特别是直肠和阴道内的)传递系统包括贴剂、片剂、栓剂、阴道栓剂、凝胶剂和乳膏，也可以含有增溶剂和促进剂(如丙二醇、胆汁盐和氨基酸)以及其他载体(如聚乙二醇、脂肪酸酯及衍生物、以及亲水性聚合物如羟基丙基甲基纤维素和透明质酸)。
可注射和可移植的储库制剂可以是注射液和移植片的形式。合适的液体载体成分为活性药物可溶于、混悬于其中生理相容性的稀释剂。合适的稀释剂是水，可以加或不加电解质盐或增稠剂。因此，钙储库制剂可以例如是含水的微晶悬浮液。油尤其适宜用作稀释剂，可以加或不加增溶剂、表面活性剂、助悬剂或乳化剂。适宜的油的实例包括落花生油、橄榄油、花生油、棉籽油、大豆油、蓖麻油和芝麻油。增溶剂的实例包括苯甲醇和苯甲酸盐。储库制剂的优点是单次注射或植入能够满足一个或数个月的需求。储库作用的持续时间依赖于雌激素成分的性质(优选酯前体，因为它们释放缓慢)、雌激素成分的量以及释放活性药物的载体物质的类型。通常，该持续时间在10-30天之间，但是也可为更长或更短的时间。
可用于给药本发明雌激素成分的其他药物传递系统包括鼻内和肺内传递系统如喷雾剂和微粒。
通过以下实施例对本发明做进一步说明实施例实施例1使用已确立的竞争性甾体结合试验测定雌四醇(E4)与17α-乙炔基雌二醇(EE)和17β-雌二醇(E2)相比对人体α-和β-型雌激素受体(ER)的相对亲和力。
所采用的方法根据科学文献修改而成，Osbourn等(1993，Biochemistry，32，6229-6236)对此有详细记载。自转染的Sf9细胞纯化重组人ERα和ERβ蛋白质。体外试验包括ERα或ERβ蛋白以及作为标记配体的0.5nM固定浓度的[3H]E2。将重组人ERα和ERβ蛋白溶于结合缓冲液(10mM Tris-HCL，pH7.5，10％甘油、1mM DTT、1mg/ml BSA)，然后，将完全相同的等分试样与最终浓度为0.5nM的[3H]E2以及甾体对照(0.4％DMSO)一同温育，或与含有浓度增加的作为竞争剂的未标记甾体配体的等量甾体温育。在25℃温育2小时后，去除未结合配体并测定结合至ERα或ERβ蛋白的[3H]E2的量。用每一竞争剂浓度下结合至ERα或ERβ蛋白[3H]E2的量的平均值做抑制曲线。然后用非线性、最小乘方回归分析确定IC50值。用Cheng和Prusoff方程(Cheng等，1973，Biochem.Pharmacol.，22，3099-3108)，以受试化合物所测得的IC50、试验中所采用放射配体的浓度、以及放射配体的Kd的历史值计算抑制常数(Ki)，经确定其对于ERα和ERβ分别为0.2nM和0.13nM。对E4的生物化学试验所得的结果显示为在三个独立的试验中特异性结合的百分抑制率(表1)。经试验测得的Ki值如在表2中所示，用以对E4、EE以及E2与ERα和ERβ蛋白的结合亲和力进行比较。在与EE和E2、E4进行对比时，证明E4具有独特的强烈的优先(400％)与ERα蛋白结合的功能(表2)。对比而言，EE和E2甾体配体对ERβ蛋白的Ki值更为显著(表2)。
表1以E4作为未标记的甾体配体、以0.5nM[3H]E2作为标记的竞争剂时，与ERα和ERβ蛋白特异性结合的百分抑制率。下表表示三个独立试验的结果。
nd未检出表2试验测定的雌四醇(E4)、17α-乙炔基雌二醇(EE)和17β-雌二醇(E2)与人ERα和ERβ蛋白结合的抑制常数(Ki)，以及与ERα蛋白结合的相对优先性。
实施例2对健康绝经后志愿者进行单一递加剂量试验，以测定口服剂量给药雌四醇后的生物利用度和消除半衰期。向志愿者(n＝6)随机分配0.1、1或10mg雌四醇，并在72小时内采集血液样品(每个志愿者18个)。
融化血浆样品后，用液—液萃取(己烷和二乙醚)制备含有雌四醇的血浆样品以进行HPLC分析(Perkin Elmer 200)，并用PE Sciex 4000级联质谱分光计和APCI接口进行串联质谱光谱测定。对于每一样品批次，使用6个校准点记录校准曲线。利用线性回归(相关系数＞0.98)计算校准曲线，并可以之对血浆浓度定量。
当将口服雌四醇的剂量从0.1增加至1进而10mg时发现具有良好的耐受性。AUC值据证明具有良好的剂量线性，这意味着即使在整个剂量范围内经口给药雌四醇可以较好地被吸收。令人感兴趣的是，雌四醇经证实具有超过20小时的较长的消除半衰期，即在绝经后对象内20-50小时。
实施例3在7，12-二甲基-苯并蒽(DMBA)诱导的大鼠肿瘤模型中检测雌四醇，以评价本发明雌激素物质的抗肿瘤功效。此肿瘤模型最初由Huggins等人在1961年(Nature，19，204-207)开发并得到广泛的应用，且为被普遍接受的人体内抗肿瘤药物的预期值模型。DMBA诱导的肿瘤的生长取决于内源性生成的雌二醇或外源性给药的雌激素和促乳素(Sylvester等，1982，Cancer Research，42，4943-4947)。据显示，在DMBA模型中，卵巢切除术(Hollingsworth等，1998，Breast Cancer Research and Treatment，47，63-70)、雄性激素(Dauvois等，1989，Breast Cancer Treatment，14，299-306)、他莫西芬(Hollingsworth等，1998，Breast Cancer Research andTreatment，47，63-70)、孕激素(Kelly等，1979，Eur.J.Cancer，15，1243-1251；Ruso等，1987，Lab.Invest.57，112-137)以及GnRH类似物(Hollingsworth等，1998，Breast Cancer Research and Treatment，47，63-70)都是有效的抗肿瘤治疗。
将Sprague-Dawley雌性大鼠(Harlan，荷兰)84只群居喂养，维持在12小时光/暗环境中，自由进食Soya Free Diet(SDS英国)以及水。每周对动物进行称重。在诱导乳腺癌的前一周，对12只动物(43天龄)进行卵巢切除术以外科手术去势。在50天龄时，所有动物给药单一口服剂量16mg的DMBA以诱导肿瘤发生。然后，将动物分为7组(n＝12)，并如下给药安慰剂或治疗药物■第一组 动物口服安慰剂3.0ml/kg/天的载体(20％wt/vol的羟基丙基-β-环糊精水溶液)进行治疗；■第二组 以外科手术去势的动物接受安慰剂3.0ml/kg/天的载体进行治疗；■第三组 动物以3mg/kg的单一每日剂量经口接受抗雌激素他莫西芬；■第四组 动物以0.025mg/kg的单一每日剂量经口接受乙炔基雌二醇(EE)；■第五组 动物以0.125mg/kg的单一每日剂量经口接受乙炔基雌二醇(EE)；■第六组 动物以0.5mg/kg的单一每日剂量经口接受雌四醇(E4)；■第七组 动物以2.5mg/kg的单一每日剂量经口接受雌四醇(E4)。
EE和E4的剂量基于先前的研究，这些结果表明，0.025mg/kg/天的EE和0.5mg/kg/天的E4在抑制骨重吸收的激动性模型中、在对热潮红和阴道角质化的抑制中等效。类似地，0.125mg/kg/天的EE和2.5mg/kg/天的E4在抑制骨重吸收、热潮红和阴道角质化的抑制中的体内雌激素效力等效。
在8周的治疗期内，每周测定触摸得到的肿瘤的形成以及肿瘤的数目。第八周尸检时进行最后的测量。
图1表示尸检时的肿瘤数目。
图1.每一治疗组中乳腺肿瘤的数目(n＝12)第一组 以3.0ml/kg/天的载体进行口服治疗；第二组 卵巢切除后的动物，使用3.0ml/kg/天载体的安慰剂进行治疗；第三组 口服他莫西芬3mg/kg/天；第四组 口服乙炔基雌二醇(EE)0.025mg/kg/天；第五组 口服EE 0.125mg/kg/天；第六组 口服雌四醇(E4)0.5mg/kg/天；第七组 口服E4 2.5mg/kg/天。
在卵巢切除的动物(第二组)中无肿瘤已经清楚地证明，DMBA诱导的乳腺肿瘤的发生是雌激素依赖性的。正如所预期，他莫西芬通过抑制该模型中乳腺肿瘤的发生而表现出抗肿瘤性质。令人惊讶的是，与0.125mg/kg/天剂量的EE的作用相比，E4在2.5mg/kg/天的等效激动剂量显著地抑制乳腺肿瘤的形成。此外，该特定剂量的E4与他莫西芬同样有效地抑制DMBA诱导的肿瘤的生长。
实施例4在第二次大鼠DMBA试验中相继测定雌四醇和他莫西芬以评价其抑制大鼠乳腺肿瘤形成的剂量—反应关系。采用如前述实施例三建立的试验过程作为预防试验，用口服剂量的雌四醇或他莫西芬在肿瘤诱导后的连续8周中对动物(每组12只动物)进行治疗。暴露于DMBA的大鼠随机分入各治疗组，并如下所述接受口服治疗■第一组 动物以3.0ml/kg载体的单一每日剂量形式接受安慰剂口服治疗(20％wt/vol的羟基丙基-β-环糊精水溶液)；■第二组 动物以1mg/kg的单一每日剂量经口接受他莫西芬；■第三组 动物以2mg/kg的单一每日剂量经口接受他莫西芬；■第四组 动物以3mg/kg的单一每日剂量经口接受他莫西芬；■第五组 动物以0.5mg/kg的单一每日剂量经口接受雌四醇；■第六组 动物以1.0mg/kg的单一每日剂量经口接受雌四醇；■第七组 动物以1.5mg/kg的单一每日剂量经口接受雌四醇；■第八组 动物以2.0mg/kg的单一每日剂量经口接受雌四醇；■第九组 动物以2.5mg/kg的单一每日剂量经口接受雌四醇；■第十组 动物以3.0mg/kg的单一每日剂量经口接受雌四醇。
在8周的治疗期内，每周测定可触摸得到的肿瘤的发展以及肿瘤的数目。图2所示为尸检时乳腺肿瘤的数目。如所预期，他莫昔芬在该预防试验中对乳腺肿瘤的发展显示出抗增殖作用。在无他莫昔芬组(1，2和3mg/kg/天)中，发展出可触摸得到的肿瘤。口服雌四醇治疗(0.5-3.0mg/kg/天)也对乳腺肿瘤的生成显示出剂量依赖性抑制，进一步证明了其对肿瘤生长的抗增殖作用。并且，如以他莫昔芬所观察到的，以2.5和3.0mg/kg/天的雌四醇进行治疗可以完全保护大鼠不发展出肿瘤。
图2.每个治疗组中乳腺肿瘤的数目(n＝12)第一组 以3.0ml/kg/天载体口服治疗；第二组 口服1mg/kg/天的他莫西芬；第三组 口服2mg/kg/天的他莫西芬；第四组 口服3mg/kg/天的他莫西芬；第五组 口服0.5mg/kg/天的雌四醇；第六组 口服1.0mg/kg/天的雌四醇；第七组 口服1.5mg/kg/天的雌四醇；第八组 口服2.0mg/kg/天的雌四醇；第九组 口服2.5mg/kg/天的雌四醇；第十组 口服3.0mg/kg/天的雌四醇。
实施例5在改进型(治疗设计)7，12-二甲基-苯并蒽(DMBA)诱导的大鼠肿瘤模型中测定雌四醇，以评价雌四醇较少业已存在的乳腺肿瘤的数目和大小的效力。如在实施例3中所述，雌性Sprague-Dawley大鼠在50天龄时被给予16mg的DMBA。允许乳腺肿瘤发展，直到以DMBA处理8周后。然后将动物分为6组，如下所述每日口服安慰剂、他莫西芬或雌四醇进行治疗4周■第一组 动物口服安慰剂3.0ml/kg/天的载体(20％wt/vol的羟基丙基-β-环糊精水溶液)进行治疗；■第二组 将动物以外科手术去势并接受3.0ml/kg/天载体进行安慰剂治疗；■第三组 动物接受1mg/kg/天的他莫西芬；■第四组 动物接受1.0mg/kg/天的雌四醇；■第五组 动物接受3.0mg/kg/天的雌四醇；■第六组 动物接受10.0mg/kg/天的雌四醇。
先前的发现显示雌四醇以及他莫昔芬在预防型DMBA模型中能够部分或完全抑制乳腺肿瘤的发展(见实施例3和实施例4)，在此基础上对雌四醇和他莫昔芬的口服剂量进行选择。
在治疗期间，每周对可触摸得到的乳腺肿瘤的发展或消失以及肿瘤的大小进行测定。尸检时，计数、测量肿瘤并计算相对于治疗开始时的基线的变化。
在载体治疗动物(n＝9)中，肿瘤数目从治疗开始时为16陡增至治疗4周后的35。切除卵巢的大鼠(n＝8)显示，肿瘤数目从治疗开始的15减少到尸检时的7，减少了53％。尽管其对DMBA诱导肿瘤后马上对乳腺肿瘤显示出抑制效力，但在1mg/kg/天剂量下，他莫昔芬在DMBA诱导8周后给药而未能抑制肿瘤数目的进一步增加。在他莫昔芬治疗的大鼠(n＝8)中，肿瘤数目从治疗开始时的15进一步增加至尸检时的19。令人感兴趣的是，在4周的治疗期间，雌四醇剂量依赖性地减少了业已存在的乳腺肿瘤的数目。在以1mg/kg/天剂量的雌四醇处理的大鼠中(n＝9)，从治疗开始时的16个肿瘤上升至尸检时的23个，显示雌四醇或多或少为有效。在以3mg/kg/天雌四醇治疗的大鼠中(n＝9)，肿瘤数目从开始时的16略减少为尸检时的15.并且，在以10mg/kg/天雌四醇治疗的大鼠中(n＝9)，肿瘤数目从治疗开始时的18下降到尸检时的7。
因此，由对乳腺肿瘤净消失的分析可知，雌四醇的效力显然与卵巢切除术相当。在抑制乳腺肿瘤生成有效剂量下，他莫昔芬却在后期中无力抵抗模型中乳腺肿瘤的进一步发展和侵蚀。通过将肿瘤数目表示为从治疗开始时的基线的变化百分比(图3)，可清楚看出雌四醇的强大的治疗效力。
图3.业已存在的乳腺肿瘤对卵巢切除术或以他莫昔芬或雌四醇口服治疗4周的反应■第一组 口服3.0ml/kg/天的载体进行治疗；■第二组 以外科手术去势的动物以3.0ml/kg/天载体接受安慰剂治疗；■第三组 口服1mg/kg/天的他莫西芬；■第四组 口服1mg/kg/天的雌四醇；■第五组 口服3mg/kg/天的雌四醇；
■第六组 口服10mg/kg/天的雌四醇。
类似地，通过将肿瘤大小表示为相对基线的变化百分比，显示雌四醇治疗(如肿瘤切除术)对导致作为净群体效应(net group effect)的肿瘤大小的剂量依赖性显著减少有效。尽管肿瘤大小的减少见于个别受治疗的大鼠，但以他莫昔芬治疗动物的净差额较不利，显示出肿瘤大小增加的净群体效应。
图4.每只动物(白条)以及每组动物(黑条)的乳腺肿瘤负载对卵巢切除术或口服他莫昔芬或雌四醇治疗4周的反应■第一组 以3.0ml/kg/天的载体进行口服治疗；■第二组 以外科手术去势的动物以3.0ml/kg/天载体进行安慰剂治疗；■第三组 口服1mg/kg/天的他莫西芬；■第四组 口服1mg/kg/天的雌四醇；■第五组 口服3mg/kg/天的雌四醇；■第六组 口服10.0mg/kg/天的雌四醇；
权利要求
1.选自以下组中的雌激素成分在制备药物组合物中的应用以下式代表的物质， 其中R1、R2、R3、R4分别独立地为氢原子、羟基或含有1-5个碳原子的烷氧基；在用于本发明方法中时能够释放出前式物质的前体；以及一种或多种前述物质和/或前体的混合物；该药物组合物用于治疗或预防哺乳动物中雌激素敏感性肿瘤的方法中，所述方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的所述雌激素成分。
2.如权利要求1所述的应用，其中R1、R2、R3、R4中不超过3个为氢原子。
3.如权利要求1或2所述的应用，其中R3为羟基或烷氧基。
4.如权利要求1-3之一所述的应用，其中R1、R2、R3、R4中至少3个为氢原子。
5.如权利要求1-4之一所述的应用，其中可以释放出所述雌激素物质的前体是本发明雌激素物质的衍生物，其中至少一个羟基上的氢原子被以下基团取代含有1-25个碳原子的烃基羧酸、磺酸或氨基磺酸的酰基；四氢呋喃基；四氢吡喃基；或每个残基含有1-20个糖苷单元的直链或支链糖苷残基。
6.如权利要求1-5之一所述的应用，其中该方法包括在为期至少5天、优选为30天的期间内不间断地给药雌激素成分。
7.如权利要求1-6之一所述的应用，其中该方法包括雌激素成分的口服给药、透皮给药、静脉内给药或皮下给药。
8.如权利要求7所述的应用，其中该方法包括口服给药。
9.如权利要求1-8之一所述的应用，其中该雌激素成分以每日每千克体重至少1μg、优选为每日每千克体重至少5μg的量给药。
10.如权利要求1-9之一所述的应用，其中该雌激素敏感性肿瘤选自以下组中乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜异位、子宫纤维瘤、良性前列腺增生以及黑色素瘤。
11.如权利要求10所述的应用，其中该雌激素敏感性肿瘤选自乳腺癌和子宫癌。
12.如权利要求1-11之一所述的应用，其中该方法包括以能够有效地抑制内源性雌激素生成的量联合给药一种雌激素抑制剂，所述的雌激素抑制剂选自以下组中孕激素、GnRH类似物、芳香化酶抑制剂、环加氧酶2(COX-2)抑制剂、1型17β-羟基甾体脱氢酶抑制剂及其组合。
13.如权利要求11所述的应用，其中该雌激素抑制剂以能够有效地将17β-雌二醇血清水平抑制至低于10pg/ml、更优选为低于5pg/ml、最优选为低于1pg/ml的量联合给药。
14.如权利要求11或12所述的应用，其中该方法包括联合给药孕激素。
15.如权利要求11或12所述的应用，其中该方法包括联合给药芳香化酶抑制剂。
16.一种药物组合物，其包括a.至少0.01mg选自以下组中的雌激素抑制剂芳香化酶抑制剂、GnRH类似物以及其组合；b.至少0.05mg的选自以下组中的雌激素成分下式所示的物质 其中R1、R2、R3、R4分别独立地为氢原子、羟基或含有1-5个碳原子的烷氧基；在用于本发明方法中时能够释放出前式物质的前体；以及一种或多种前述物质和/或前体的混合物；以及c.药学可接受的赋形剂。
17.如权利要求16所述的药物组合物，其中R1、R2、R3、R4中不超过3个为氢原子。
18.如权利要求16或17所述的药物组合物，其中R3为羟基或烷氧基。
19.如权利要求16-18之一所述的药物组合物，其中的R1、R2、R3、R4中至少3个为氢原子。
20.如权利要求16-19之一所述的药物组合物，其中所述可以释放出雌激素物质的前体是本发明雌激素物质的衍生物，其中至少一个羟基上的氢原子被以下基团取代含有1-25个碳原子的烃基羧酸、磺酸或氨基磺酸的酰基；四氢呋喃基；四氢吡喃基；或每个残基含有1-20个糖苷单元的直链或支链糖苷残基。
21.如权利要求16-20之一所述的药物组合物，其中该组合物包括与至少0.05mg口服剂量的阿那曲唑等效的量的芳香化酶抑制剂。
22.含有如权利要求16-21之一所述的药物组合物的药物传递系统，所述的药物传递系统选自以下组中口服剂量单位、注射液、栓剂、阴道栓、凝胶剂以及乳膏。
23.一种药盒，其由一个或多个含有至少0.05g如权利要求1所述的雌激素成分以及药物学可接受的赋型剂的剂量单位、以及一个或多个含有至少0.01mg选自GnRH类似物、芳香化酶抑制剂、环加氧酶2(COX-2)抑制剂、1型17β-羟基甾体脱氢酶抑制剂以及其组合的雌激素抑制剂以及药物学可接受的赋型剂的剂量单位组成。
24.如权利要求23所述的药盒，其中该剂量单位为口服剂量单位。
全文摘要
本发明涉及一种治疗或预防哺乳动物的雌激素敏感性肿瘤的方法，所述的方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的雌激素成分，其中该雌激素成分选自以下组中下文中式(I)所示的物质，其中R
文档编号A61K45/06GK1681513SQ03821744
公开日2005年10月12日 申请日期2003年7月11日 优先权日2002年7月12日
发明者赫尔曼·扬·蒂扎曼·科林格本宁克, 埃弗特·约翰内斯·本恩舍滕 申请人:潘塔希生物科学股份有限公司