专利名称：马蔺子甲素及其衍生物、类似物在制备化疗增敏剂中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种马蔺子甲素及其衍生物、类似物的制药用途，具体涉及马蔺子甲素、马蔺子乙素在制备化疗增敏剂中的用途。
背景技术：
马蔺子素胶囊的主要成分为马蔺子甲素以及约10％的马蔺子乙素。在临床上，其主要被用作肿瘤放疗增敏剂，多用于食管癌和鼻咽癌的放射治疗中(樊瑞太，李国文等，河南肿瘤学杂志，1998，11(6)446-447；贾中耀，张秀芝等，中国肿瘤临床，1999，26(8)639-640)。也有文献报道，马蔺子素本身具有抑制肿瘤细胞生长并引起其凋亡的作用，如马蔺子甲素对体外培养的鼻咽癌CNE-2、SUNE-1和Fadu细胞具有杀伤作用，且可诱导Fadu细胞出现凋亡征象。我们在研究中也发现，马蔺子素对体外培养的食管癌、胃腺癌、结肠癌、前列腺癌和黑色素瘤细胞同样具有杀伤作用。
化疗是“化学药物治疗”的简称。目前化疗的概念一般被理解为“肿瘤的化疗”，即使用抗肿瘤化学药物，采用某些措施和方案治疗肿瘤的方法。然而，常见的化疗药物如长春新碱、顺铂、甲氨喋呤、环磷酰胺等可产生注射局部疼痛、静脉栓塞、骨髓抑制、胃肠道反应、外周神经病变等毒副作用；此外，由于化疗药物的毒性，化疗病人有时还会出现感染，出血等并发症。
为减少化疗药物的毒副作用、提高疗效、减少肿瘤复发和避免抗药性的产生，选择不同的化疗增敏剂联合使用，已成为肿瘤化疗的重要手段之一。例如，临床上将顺铂与5-Fu、博来霉素或表鬼臼毒素等联合使用治疗食管癌。
肿瘤化疗增敏剂是一类能提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，减少化疗药物用量进而减低其毒性的药物。在中国专利申请CN 1362061A中，李德华等人公开了马蔺子甲素与环磷酰胺(CTX)联合使用能显著增强环磷酰胺对白血病、脑瘤、肺癌、宫颈癌细胞的杀伤作用。
协同作用(Synergistic Effect)是指两个药物联合使用时所产生的疗效大于相同剂量时两药单独使用时的疗效。根据中效原理(Joseph R.Bertino，Ting-ChaoChou，ChemotherapySynergism and Antagonism，Encyclopedia of Cancer，1996，Academic Press，Inc.)，两药联合使用时的作用效果可通过联合指数CI(Combination Index)进行判断CI=D1(Dx)1+D2(Dx)2+α×D1×D2(Dx)1×(Dx)2]]>其中，D1，D2分别为马蔺子甲素和乙素单独使用时，细胞增殖抑制率达到x％时的药物浓度；(Dx)1，(Dx)2为达到相同细胞增殖抑制率时混和物中马蔺子甲素和乙素的浓度。
对相互独立的两种药物α＝0；而互不独立的药物α＝1当CI＜1时，为协同作用；CI＝1时，为相加作用；CI＞1时，为拮抗作用马蔺子素与其他化疗药物联合使用产生对其他肿瘤细胞的协同杀伤作用未见文献报道。
发明内容
本发明的目的旨在寻找并开发马蔺子甲素及其衍生物、类似物的新医药用途。
本发明涉及下列通式(I)所示的马蔺子甲素及其衍生物、类似物，特别是马蔺子甲素、马蔺子乙素及其可药用盐、前药在制备对肿瘤化疗药物具有增敏减毒作用的药物中的用途 其中，R1＝H2n+1或CnH2n-1，n＝2～20，它可为直链或支链；当R1＝CnH2n-1时，它可为环状饱和基团或含有双键的基团，其中双键可位于直链或支链中的任何可能位置，双键构型可为顺式或反式；R2为羟基或氢。
其中，当R1代表 (马蔺子甲素)，且所述肿瘤为白血病、脑瘤、肺癌或宫颈癌时，所述化疗药物不是环磷酰胺。
本发明还涉及一种治疗肿瘤的药盒，它包括选自通式(I)化合物中的一种化合物；至少一种化疗药物；以及用药说明。
本发明的化合物的可药用盐包括各种无机或有机酸盐如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、扁桃酸盐和草酸盐；各种无机或有机碱盐如氢氧化钠、三羟甲基氨基甲烷(TPIS，tromethane)和N-甲基-葡萄糖胺。
本发明的化合物的前药包括含有该化合物的羧酸酯(可按本领域的常规方法用C1-4的醇浓缩制得)、含有该化合物的羟基酯(可按本领域的常规方法用C1-4的羧酸，C3-6的二羧酸或其酸酐，如马来酸酐，富马酸酐等浓缩制得)、含有该化合物的烯胺(可按本领域的常规方法用C1-4的醛或酮浓缩制得)或含有该化合物的缩醛或者缩酮(可按本领域的常规方法用氯甲基甲醚或氯甲基乙醚浓缩制得)等(Albert S.Kearney Advanced Drug Reviews.19(1996)229-234).。
本发明人经研究发现，马蔺子甲素、马蔺子乙素和多种化疗药物联合用药可明显提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，减少化疗药物的用量，减低其毒性。
本发明的马蔺子甲素(Irisquinone A，6-甲氧基-2-Δ10’-顺十七烯-1，4苯醌)和马蔺子乙素(Irisquinone B，6-甲氧基-2-十七烷基-1，4-苯醌)的化学结构式、分子式分别为 Irisquinone A，C24H38O3 Irisquinone B，C24H40O3本发明的马蔺子甲素、马蔺子乙素可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成份的马蔺子甲素、马蔺子乙素及药用载体。
所述可药用载体为各种常用的药物辅料如填充剂(无水乳糖、淀粉、乳糖珠粒、葡萄糖)、粘合剂(微晶纤维素)、崩解剂(交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、交联PVP)、润滑剂(硬酯酸镁)以及吸收促进剂、吸附载体、香味剂、甜味剂、稀释剂、赋形剂、润湿剂等。
所述药物组合物可按本领域常规方法制备并可以通过肠道或非肠道或局部途径给药。口服制剂包括片剂、颗粒剂、胶囊、悬浮液、溶液等，非肠道给药制剂包括注射液。局部给药制剂包括如霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂等。
所述药物的给药途径可以为口服、舌下、经皮、经肌肉或皮下、皮肤粘膜、尿道、阴道、静脉等。
本发明的马蔺子甲素和/或其药物组合物可用于多种肿瘤细胞的化疗增敏，这些肿瘤包括但不限于食管癌、肺癌、胃腺癌、结肠腺癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、黑色素瘤和宫颈癌。所述化疗药物包括但不限于抗代谢药、转录抑制药物、有丝分裂抑制药物和干扰DNA复制药物。
抗代谢药是一类模拟正常代谢物质，如叶酸、嘌呤碱、嘧啶碱等的化学结构所合成的类似物，可对相关代谢物质产生特异性的拮抗作用，从而干扰核酸、尤其是DNA的生物合成，抑制肿瘤细胞的分裂增殖。抗代谢药为细胞周期特异性药物，主要作用于S期。此类药物包括但不限于5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil)、甲氨喋呤(methotrexate)等。
转录抑制药物能嵌入DNA碱基对之间，与DNA形成复合体，影响RNA多聚酶的功能，阻断RNA特别是mRNA的合成，进而影响蛋白质合成，抑制肿瘤细胞的生长。属细胞周期非特异性药物。此类药物包括但不限于阿霉素(doxorubicin，adriamycin，ADM)、放线菌素(dactinomycin，DACT)、柔红霉素(daunorubicin，DNR)、普卡霉素(plicamycin；光辉霉素，mithramycin)等。
有丝分裂抑制药物可与细胞纺锤丝微管蛋白结合，使其变性，从而影响微管装配和纺锤丝的形成。是作用于M期的药物。此类药物包括但不限于长春新碱(vincristine，VCR)、表鬼臼素(podophyllotoxin)、紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)等。
干扰DNA复制药物可直接破坏DNA的结构或抑制DNA拓扑异构酶(DNAtopoisomerase)的活性从而抑制DNA的复制，属细胞周期非特异性药物。此类药物包括但不限于抗生素{如丝裂霉素(mitomycin C，MMC)、博来霉素(bleomycin，BLM)}、拓扑特肯(Topotecan)、依立替康(Irinotecan)、顺铂(cisplatin)等。本发明优选顺铂。
用本发明的马蔺子甲素和/或其药物组合物进行化疗增敏的方法是给予需要化疗增敏减毒的哺乳动物患者化疗药物和增敏减毒有效量的马蔺子甲素或含马蔺子甲素的药物组合物，当所述肿瘤为白血病、脑瘤、肺癌或宫颈癌时，所述化疗药物不是环磷酰胺。其中所述哺乳动物肿瘤患者包括人类和非人类。
本发明的马蔺子甲素和/或其药物组合物的用量可根据给药途径，患者的年龄和体重，所治疗肿瘤的类型及严重程度的不同而不同，其日剂量可以是0.001～100mg/kg，可一次或多次给药。
本发明的马蔺子甲素和/或其药物组合物还可与化疗药物一起组成一种治疗肿瘤的药盒，它包括选自通式(I)化合物中的一种化合物；至少一种化疗药物；以及用药说明。优选的方案为，当所述化合物为马蔺子甲素时，所述肿瘤选自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌，所述化疗药物为顺铂；当所述化合物为马蔺子乙素时，所述肿瘤选自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌，所述化疗药物为顺铂。
图1 马蔺子甲素(IQA)与顺铂联合抑制前列腺癌(DU145)细胞增殖。
图2 马蔺子甲素(IQA)与顺铂联合抑制胃腺癌(BGC-823)细胞增殖具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。但并不意味着本发明仅限于此。
实施例1在细胞水平上利用MTT法检测马蔺子甲素与顺铂联合使用时对肿瘤细胞的杀伤作用。
实验材料人肿瘤细胞株及其培养食管癌(Eca-109)、胃腺癌(BGC-823)、肺腺癌(SPC-A-1)、前列腺癌(DU145)细胞均购自中科院生化细胞研究所。细胞于含10％胎牛血清(Gibco)的RPMI-1640(Gibco)培养基中，在37℃，5％CO2条件下培养。
药物马蔺子甲素(IQ A)由山东新华制药厂提供；注射用顺铂冻干粉，齐鲁制药厂生产，溶解于PBS，配制为2mg/ml溶液。
其他试剂MTT及DMSO均为Sigma公司产品。
实验方法以MTT法测定两种药物单独使用及联合使用时对肿瘤细胞的杀伤毒性。
实验步骤如下1.细胞经胰酶消化并洗涤后悬浮于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中，经胎盘蓝染色排除法计活细胞数，并调节细胞悬浮液密度至1×105细胞/ml。
2.在平底96孔板中，每孔加入100微升细胞，每孔中细胞总数为1×104。于37℃，5％CO2细胞培养箱中培养过夜。
3.每孔加入10微升以细胞生长培养基稀释的样品，使单独反应时马蔺子甲素和顺铂的反应终浓度分别为100，30，10，3，1，和0.3ug/ml；在联合用药组，将相同浓度的马蔺子甲素和顺铂各5微升混和后加入，此时两种药物以1∶1比例共同作用于细胞。将相应量的DMSO加入不加药的细胞中作为对照，不加药物及DMSO的含细胞孔作为背景。每点作三个平行测试。
4.将加药细胞在37℃，5％CO2细胞培养箱中保温48小时。
5.每孔中加入10μl 5mg/ml MTT溶液，继续在培养箱中保温3～4小时。
6.将细胞板于1000rpm离心15分钟，真空吸去培养液，加入150μl PBS洗涤后离心并小心地吸去溶液。
7.每孔加入150μl DMSO，置于摇床上以150rpm摇动15分钟，使生成的甲簪晶体充分溶解。测定492nm光吸收值。
8.根据光吸收值计算马蔺子甲素处理后细胞相对存活率。计算公式如下 药物对肿瘤细胞生长的抑制率(E％)＝100-细胞相对存活率实验结果当等马蔺子甲素与顺铂以1∶1(w/w)比例联合使用，测定对食管癌、肺腺癌和前列腺癌等肿瘤细胞的增殖抑制作用(或杀伤)时，联合指数小于1，如表1所示，故两者之间为联合协同作用。
表1.马蔺子甲素与顺铂联合用于对肿瘤细胞的增殖抑制(或杀伤)的联合指数
权利要求
1.下述通式(I)的化合物或其可药用盐、前药在制备对肿瘤化疗药物具有增敏减毒作用的药物中的用途 其中，R1＝CnH2n+1或CnH2n-1，n＝2～20，它可为直链或支链；当R1＝CnH2n-1时，它可为环状饱和基团或含有双键的基团，其中双键可位于直链或支链上的任何可能位置，双键构型可为顺式或反式；R2为羟基或氢；其特征在于，当R1代表 R2代表氢，且所述肿瘤为白血病、脑瘤、肺癌或宫颈癌时，所述化疗药物不是环磷酰胺。
2.权利要求1的用途，其中当R1代表 R2代表氢时，所述化合物为马蔺子甲素，所述肿瘤选自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌。
3.权利要求2的用途，其中所述化疗药物选自5-氟尿嘧啶、紫杉醇、多烯紫杉醇、顺铂、甲氨喋呤、阿霉素、长春新碱、丝裂霉素、博来霉素、表鬼臼素、依立替康或拓扑特肯。
4.权利要求3的用途，其中所述化疗药物为顺铂。
5.权利要求1的用途，其中所述化疗药物选自抗代谢药、转录抑制药物、有丝分裂抑制药物或干扰DNA复制药物。
6.权利要求5的用途，其中所述化疗药物选自5-氟尿嘧啶、紫杉醇、多烯紫杉醇、顺铂、甲氨喋呤、阿霉素、长春新碱、丝裂霉素、博来霉素、表鬼臼素、依立替康或拓扑特肯。
7.权利要求6的用途，其中所述化疗药物为顺铂。
8.权利要求1的用途，其特征在于，当R1代表 R2代表氢时，所述化合物为马蔺子甲素，它可与化疗药物、放疗药物联合使用。
9.权利要求1的用途，其中当R1代表(CH2)16CH3，R2代表氢时，所述化合物为马蔺子乙素，所述肿瘤选自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌。
10.一种治疗肿瘤的药盒，它包括选自通式(I)化合物中的一种化合物；至少一种化疗药物；以及用药说明。
11.权利要求10的药盒，其中当所述化合物为马蔺子甲素时，所述肿瘤选自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌；所述化疗药物为顺铂。
12.权利要求10的药盒，其中当所述化合物为马蔺子乙素时，所述肿瘤选自食管癌、胃腺癌、前列腺癌或肺腺癌；所述化疗药物为顺铂。
全文摘要
本发明涉及一种马蔺子甲素及其衍生物、类似物的制药用途，具体涉及马蔺子甲素、马蔺子乙素在制备化疗增敏剂中的用途。本发明开发了马蔺子甲素、马蔺子乙素新的医药用途。
文档编号A61K31/122GK1711994SQ20041004969
公开日2005年12月28日 申请日期2004年6月23日 优先权日2004年6月23日
发明者严孝强, 崔玉敏, 张维汉, 左剑 申请人:和记黄埔医药企业有限公司