专利名称：葫芦素脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，确切地说它是一种葫芦素脂质体(包括前体脂质体)及其制备方法。
背景技术：
葫芦素(cucurbitacin)是从中药甜瓜蒂中提取分离出的成分，具有多种生物活性，有细胞毒和抗肿瘤，保肝，抗肝炎，提高免疫功能等作用。主要含葫芦素B、E等，其中含葫芦素B80％以上，为治疗肝炎及肝癌的有效成份。葫芦素片用于治疗慢性肝炎---葫芦素片药学通报1986，21(6)357)，经上海、北京、重庆等地十三家医院临床，其有效率为75.2％，显效率为44.6％中草药1987，18(10)1984，3(2)21-22，葫芦素的药理与临床应用中草药1992，23(11)，另有文发现葫芦素B，E(II)20μg/ml对癌细胞的杀伤率为82.6％，浓度提高至80μg/ml时，其杀伤率达94.1％，而对正常人淋巴细胞转化率的影响则分别为90.6％及89.5％。浙江中医学院学报1994，18(4)18～19，有文献指出，长疗程用药6周能明显抑制肝纤维组织增生，防止肝脂肪变性以及肝硬变的形成和发展；RP-HPLC法测定葫芦素滴丸中葫芦素B的含量中草药2003年05期由于葫芦素B的最大吸收波长为228nm，而色谱纯甲醇在230nm的吸光度约为0.15，本底吸收大，不同程度地影响到测定结果。建立了乙腈0.1mol/LK2HPO4为流动相的色谱系统，使葫芦素B与其他成分达到良好分离。葫芦素BE聚乳酸纳米微粒对口腔癌颈淋巴结转移灶的靶向性评价华西口腔医学杂志2003年06期探讨平均粒径为85nm的葫芦素BE聚乳酸纳米微粒对口腔癌颈淋巴结转移灶的靶向性及靶向程度。葫芦素脂肪乳剂成型性影响因素考察 张利，侯世祥，王昶光 中南药学2004年02期以 葫芦素脂肪乳的外观、粒径、药物含量及稳定性为指标，分别考察渗透压、高压乳匀、pH、空气置换刑及灭菌等因素对乳剂成型性的影响。四川大学华西医学院的研究人员研究了葫芦素聚乳酸毫微粒冻干针剂；生物利用度低，而将葫芦素制成脂质体和前体脂质体未见推荐。
发明内容
本发明的目的是提供葫芦素脂质体和前体脂质体及其制备方法，以改善葫芦素难溶于水，口服吸收差，且生物利用度低。同时作为膜材的磷脂，本身无毒，而且能增强人体免疫力，具有许多保健功能。
本发明是由葫芦素与磷脂加胆固醇，也可不加胆固醇等辅料制备而成的(纳米)脂质体。制备方法可以采用前体脂质体法、乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸发法、PH梯度法、挤出法、机械法等制备脂质体和纳米脂质体的各种方法。机械法可为乳匀机、高压乳匀机、纳米机、匀浆机、高压微射流等各种机械设备制备脂质体的方法。制备脂质体的磷脂，可以是大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂，也可以是合成磷脂，由乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸发法、挤出法、机械法制备葫芦素脂质体，其组成包括葫芦素磷脂、胆固醇、VE等辅料.其中磷脂与葫芦素的重量比为0.1∶1～40∶1，胆固醇与磷脂的重量比为0～2∶1。
通过前体脂质体法制备脂质体的处方为葫芦素、支持剂、磷脂、胆固醇、VE等。磷脂与葫芦素的重量比为0.1∶1～40∶1，胆固醇与磷脂的重量比为0～2∶1，支持剂与磷脂的比例为0.01∶1～400∶1。支持剂可以是山梨醇、甘露醇、蔗糖、氯化钠、水溶性淀粉、右旋糖苷、葡萄糖、乳糖等所用可用于冻干支持剂的药用材料或药用辅料。制备前脂质体的方法，可以采用减压旋转薄膜法、喷雾干燥法、流化床法或冻干法等各种造粒方法和干燥及包衣方法。前体脂质体使用前加水或缓冲液通过振摇、搅拌、超声水化形成脂质体，或制备成胶囊剂、片剂、颗粒剂等。在消化道中遇水直接自发形成脂质体。
用葫芦素脂质体(或前体脂体)可以制成片剂、口服液、口服乳、胶囊剂、颗粒剂、注射液、冻干粉针、输液乳剂、微乳剂、粉针剂等剂型。
本发明的优点是改善葫芦素口服吸收差，生物利用度低的不足，利用磷脂作膜材，将葫芦素制成脂质体，磷脂能与葫芦素发挥协同和辅助作用，提高葫芦素的疗效。
具体实施例方式本发明的具体制备方法，由下列实施实例举例说明，但本发明的保护范围，不局限于此。
实施例1乙醇注入法制备葫芦素脂质体取大豆磷脂，胆固醇，VE加无水乙醇溶解后注入葫芦素水溶液中，恒温高速搅拌，减压蒸发除去乙醇，过微孔滤膜整粒，即得葫芦素脂质体，包封率可达62.8％。
实施例2薄膜分散法制备葫芦素脂质体取大豆磷脂，胆固醇，VE用15ml氯仿溶解于150ml茄形瓶中，在旋转薄膜蒸发器上减压成膜并除尽有机溶剂，加10ml葫芦素水溶液水化，过微孔滤膜整粒，得葫芦素脂质体，包封率可达60.1％。
实施例3反相蒸发法制备葫芦素脂质体称取大豆磷脂、胆固醇、VE加5ml氯仿使溶解，再加入10ml乙醚，然后加入15ml葫芦素的磷酸盐缓冲液中，浴式超声使形成均一单相体系，减压蒸发去除氯仿乙醚至凝胶形成，继续减压蒸发5～10分钟，涡旋振荡至水性悬浊液即脂质体形成。包封率可达27.5％。
实施例4减压旋转薄膜法制备葫芦素前体脂质体取山梨醇和葫芦素以等量递加法混合均匀后置于100ml茄形瓶中，于一经改良的旋转蒸发仪上减压预热30分钟，取大豆磷脂、胆固醇、VE适量溶于乙醇液，真空旋转蒸发。在乙醇液全部加完后继续减压蒸发30～40分钟，将粉末取出置于干燥器中过夜后过筛(40目，450μm)，即得葫芦素前体脂质体。包封率可达22.8％。
实施例5流化床法制备葫芦素前体脂质体山梨醇和葫芦素以等量递加法混合均匀后置于流化床中，取大豆磷脂、胆固醇、VE适量溶于无水乙醇中，通过流化床沸腾一步制粒，过筛，即得葫芦素前体脂质体。
实施例6流化床法制备葫芦素前体脂质体葫芦素加蒸馏水，再加0.1N NaOH调PH使溶解，用蒸馏水调整体积(A液)；另取大豆磷脂、胆固醇、VE溶于无水乙醇中，通过流化床沸腾一步制粒，过20目和60目筛，即得葫芦素前体脂质体颗粒。
实施例7喷雾干燥法制备葫芦素前体脂质体葫芦素加水，0.1N NaOH调PH使溶解，加入乳糖和EDTA并使溶解(A液)。另取大豆磷脂、胆固醇、VE溶于100ml无水乙醇中(B液)。将B液在搅拌下缓慢加入A液中，喷雾干燥制粒，过筛，即得葫芦素脂质体。
实施例8乙醇注入法、薄膜分散法制备的脂质体，喷雾干燥，即得葫芦素前体脂质体。
实施例9由前体脂质体制备葫芦素脂质体。取实施例7制得的前体脂质体2g，，加水10ml振摇10分钟并水化，即得葫芦素脂质体，显微镜放大1000倍观察可看到脂质体。
实施例10冷冻干燥法制备葫芦素前体脂质体大豆磷脂、胆固醇、适量VE加无水乙醇溶解后在高速搅拌缓慢注入葫芦素水溶液中，减压蒸发除去乙醇。冷冻干燥24小时，得葫芦素前体脂质体。
实施例11将葫芦素脂质体过0.22μm微孔滤膜灭菌，充氮气，灌封，得葫芦素脂质体注射液。
实施例12将葫芦素脂质体加入10％蔗糖，过0.22μm微孔滤膜灭菌，分装，冷冻干燥，得粉针剂。
实施例13将葫芦素前体脂质体过筛，分装，得葫芦素脂质体颗粒剂。
实施例14将葫芦素前体脂质体过筛，装胶囊，得葫芦素脂质体胶囊剂。
实施例15将葫芦素前体脂质体过筛，压片，得葫芦素脂质体片剂。
本发明不限于以上所述的实施例。
权利要求
1.葫芦素脂质体及其制备方法，其特征在于由葫芦素与磷脂等辅料制备而成的脂质体或前体脂质体。
2.根据权利要求1所述的葫芦素脂质体，其特征在于其中可以加入胆固醇和支持剂。
3.根据权利要求1所述的葫芦素脂质体或前体脂质体，其特征在于膜材磷脂可以采用天然磷脂，也可以是采用氢化大豆磷脂和合成磷脂等。
4.根据权利要求1所述的葫芦素脂质体或前体脂质体，其特征在于磷脂与药物的重量比为0.1∶1～40∶1.
5.根据权利要求2述的葫芦素脂质体或前体脂质体，其特征在于支持剂可以山梨醇、甘露醇、蔗糖、氯化钠、水溶性淀粉、右旋糖苷、甜菊糖、葡萄糖、乳糖等，其中支持剂与磷脂的比例为0.01∶1～400∶1。
6.根据权利要求1所述的葫芦素脂质体或前体脂质体，其特征在于用该脂质体或前体脂质体可制得胶囊剂、片剂、颗粒剂、注射液、口服液、冻干粉针、输液等剂型。
7.一种如权利要求1所述的葫芦素脂质体的制备方法，其特征在于制备方法可以采用前体脂质体法、乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸发法、挤出仪、机械法，PH梯度法等；机械法包括使用均质机、乳匀机、挤出机、纳米机、匀浆机、高压微射流等各种机械设备制备脂质体的方法。
8.一种如权利要求7所述的葫芦素前体脂质体的制备方法，其特征在于采用前体脂质体法制备葫芦素脂质体，先制备前体脂质体，由制备的前体脂质体在使用前形成脂质体，或前体脂质体制备成胶囊剂、片剂、颗粒剂等，在消化道中遇水直接自发形成脂质体。
全文摘要
本发明是葫芦素脂质体及其制备方法，它克服了葫芦素口服吸收差，生物利用度低的缺点，提高了制剂的稳定性。由葫芦素与磷脂、胆固醇等辅料制备而成的脂质体或前体脂质体，其中还可加入支持剂等辅料。膜材磷脂可以采用天然磷脂或合成磷脂，磷脂与药物的重量比为0.1∶1～40∶1。制备方法可以采用乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸发法、挤出法、机械法，支持剂可以是山梨醇、甘露醇、蔗糖、氯化钠、水溶性淀粉、右旋糖苷、葡萄糖、乳糖等。支持剂与磷脂的比例为0.01∶1～400∶1。葫芦素具有多种生物活性，有细胞毒和抗肿瘤，保肝，抗肝炎，提高免疫功能等作用。
文档编号A61P1/16GK1723906SQ200410054739
公开日2006年1月25日 申请日期2004年7月19日 优先权日2004年7月19日
发明者胡才忠 申请人:胡才忠