专利名称：一种穿心莲内酯脂微球制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种穿心莲内酯脂微球制剂及其制备方法，属药物领域。
背景技术：
穿心莲内酯(Andrographolide)是从爵床科植物穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees中提取得到的二萜内酯类化合物，是中药穿心莲的主要有效成分之一，具有清热解毒、消炎止痛等功能，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。现代药理研究表明，穿心莲内酯具有抗菌消炎、抗病毒感染、抗肿瘤、抗心血管疾病、免疫刺激等功能。(穿心莲内酯及其衍生物的药理研究进展，刘新建等，中药材第26卷第2期2003年2月；穿心莲内酯片治疗上呼吸道感染临床观察，陈炯华等，中国中医急症2004年2月第13卷第2期)穿心莲内酯为二萜类内酯化合物，难溶于水，通常仅能口服给药。但由于穿心莲内酯口服可因极苦而致呕吐，因此口服制剂使用较少。由于其水溶性差，故难以将其直接制备成可供临床使用的注射液。药学工作者针对临床上感染急症的需求，将本品内酯结构中引入不同的亲水基团，增强其水溶性，如将其制成穿心莲内酯二琥珀酸半酯单钾盐(商品名穿琥宁)、穿心莲内酯二琥珀酸半酯钾钠盐(商品名炎琥宁)及亚硫酸氢钠穿心莲内酯(商品名莲必治)。但这三种化合物的化学性质均不稳定，易氧化降解。并且由于其用药剂量较大，在临床使用过程中，常有过敏反应和毒副作用发生，如全身红紫、发热、咳嗽、皮疹、瘙痒、心悸、胸闷、呼吸困难、头疼、腹泻及血小板减少等。
20世纪七十年代，将药物直接运送到体内的病变部位，也就是具有药物导弹性的“靶向治疗”。美国的临床药物学家首先在实验室实现了这一设想，八十年代世界制药业由此出现了药物转运系统(DDS)这一理念。在这一理念下，将药物溶于脂肪油中经磷脂乳化分散于水相制成脂微球制剂，其中粒子平均粒径在200纳米左右形成一种微粒体分散系，称为脂微球。脂微球是新型靶向药物的载体，可选择性在病变部位聚积，将治疗药物最大限度地运送到靶区，使治疗药物在靶区浓度超出传统制剂的数倍至数百倍，治疗效果明显提高；同时药物在正常组织分布量极少，药物的毒副作用和不良反应会明显减轻，达到高效低毒的效果。此外，脂微球靶向制剂具有药物包封率高，安全性及稳定性好，给药方便等特点。例如日本的水岛裕教授发明的前列地尔脂微球注射液(商品名凯时)，该新型载体制剂具有以下特性(1)靶向性脂微球以其特有的特性易于聚集于病变部位。(2)持续性在脂微球的屏障保护作用下，药物的肺部灭活明显降低。(3)高效性仅需传统剂型十分之一的给药量，疗效更佳。(4)低副作用在脂微球的屏障保护下，明显减少了血管的刺激和炎性反应。(5)使用简便直接静脉注射，可在门诊治疗。当人体受细菌、病毒等微生物感染后会引发各种炎症，在炎症反应过程中，组织中的巨噬细胞会聚集到炎症部位。此时，经静脉(或口服)给药的包载药物的脂微球在血液循环过程会被炎症部位的巨噬细胞当作外源性异物而吞噬，进而使药物于炎症部位浓集并释放，发挥其治疗作用。迄今为止，国内外尚未见穿心莲内酯脂微球制剂的文献及专利报道。
发明内容
本发明的技术方案提供了一种穿心莲内酯脂微球制剂，本发明还提供了该脂微球制剂的制备方法。
本发明提供了一种穿心莲内酯脂微球制剂，它是由穿心莲内酯为活性成分，加上药学上常用的注射/口服用油、乳化剂、注射用水/制剂用水制备而成的脂微球制剂，其中脂微球的粒径分布范围在0.05微米～1微米，平均粒径为0.05微米～0.4微米。
其中，所述的脂微球制剂为静脉给药脂微球制剂、口服脂微球制剂。
其中，本发明穿心莲内酯脂微球制剂每100ml脂微球制剂含穿心莲内酯10毫克～1000毫克、注射或口服用油为1毫升～50毫升、乳化剂0.1克～5克(当需要调节渗透压时，加入注射用甘油)，其余为注射用水或制药用水。
进一步地，所述的口服脂微球制剂中口服用油为口服用大豆油；其含量为每100ml脂微球制剂中含穿心莲内酯250毫克、口服用大豆油为10毫升、乳化剂为1.0克，其余为制药用水。其中，乳化剂为豆磷脂、普罗尼克(F-68)、阿拉伯胶、明胶及药学上可接受的乳化剂中的一种或其混合。
更进一步地，所述的每100ml静脉给药脂微球制剂中注射用油为注射用大豆油，其中含量为每100ml脂微球制剂中含穿心莲内酯250毫克、注射用大豆油为10毫升、乳化剂1克(当需要调节渗透压时，加入注射用甘油2.5克)，其余为注射用水。其中，乳化剂为注射用豆磷脂、普罗尼克(F-68)中的一种或其混合。
本发明还提供了本发明穿心莲内酯脂微球制剂的制备方法，其中，静脉给药脂微球制剂的制备方法，包括如下步骤a、称取处方量的各原料、辅料；b、取处方量的原料药穿心莲内酯溶于预热的油相中，再将处方量的豆磷脂或普罗尼克和甘油溶于预热的水相中；c、将上述水相或油相转入组织捣碎机内，于高速搅拌条件下滴加油相入水相或滴加水相入油相，至油相均匀分散于水相中或水相均匀分散于油相中，得初乳；d、取上述初乳转移至高压乳匀机内，匀化至平均粒径达0.5微米以下，微孔滤膜过滤，所得脂微球制剂灌封于输液瓶或安瓿中，充氮气，热压灭菌，即得。
具体地，所述静脉给药脂微球制剂的制备方法包括如下步骤a、称取各原料穿心莲内酯10毫克～1000毫克、注射用油为1毫升～50毫升(当需要调节渗透压时，加入注射用甘油1克～5克)、乳化剂0.1克～5克、其余为注射用水；b、取穿心莲内酯溶于预热至80℃的注射用油中，再称取豆磷脂和甘油溶于预热至80℃的适量注射用水中；c、将上述水相转入组织捣碎机内，于10000转/分钟的搅拌条件下缓缓滴加油相入水相，以每分钟10000转搅拌3分钟，反复3次，直至溶有穿心莲内酯的油相均匀分散；d、取上述初乳加入预热至80℃的注射用水使达全量，转移至高压乳匀机内，匀化3次，取样测定粒径，至平均粒径达0.5微米以下，通过3微米微孔滤膜过滤，取上述脂微球制剂灌封于输液瓶或安瓿中，充氮气，105℃下灭菌45分钟。
所述的静脉给药脂微球制剂的另一种制备方法包括如下步骤a、称取各原料穿心莲内酯10毫克～1000毫克、注射用油为1毫升～50毫升(当需要调节渗透压时，加入注射用甘油1克～5克)、乳化剂0.1克～5克、其余为注射用水；b、将处方量的穿心莲内酯加入预热至80℃的处方量的注射用油中，搅拌至使其溶解并分散均匀；C、将处方量的豆磷脂，注射用甘油与预热至80℃的适量注射用水用高速组织捣碎机进行分散混合，以每分钟10000转搅拌3分钟，反复3次，直至豆磷脂均匀分散；d、于上述溶有穿心莲内酯的油相中，搅拌下缓慢加入含有豆磷脂、注射用甘油的水相分散液，用高速组织捣碎机进行分散混合，得到初乳，取上述初乳加入预热至80℃的注射用水使达全量，再转入高压乳匀机内，匀化3次，取样测定粒径，至平均粒径在0.5微米以下，通过3微米微孔滤膜过滤；e、取上述脂微球制剂灌封于输液瓶或安瓿中，充氮气，105℃灭菌45分钟。
上述工艺制备的脂微球制剂，系根据相似相溶及乳化原理，将脂溶性的穿心莲内酯溶解分散于油中，再与水及乳化剂制备成脂微球制剂，可显著增加穿心莲内酯的溶解度，提高其稳定性，从而直接将穿心莲内酯制备成可供临床使用的静脉注射(或口服)脂微球制剂。
由于穿心莲内酯具有广泛的抑菌、抗炎作用，考虑到穿心莲内酯难溶于水的特点，将其溶于脂肪油中经磷脂乳化分散于水相制成脂微球制剂，不仅克服了穿心莲内酯水溶性衍生物化学性质不稳定，易氧化降解，常有过敏反应和毒副作用发生的不足；同时可减少给药量，使穿心莲内酯选择性于病变部位聚积，降低药物在正常组织分布量，达到高效低毒的效果。
且本发明将穿心莲内酯制备成脂微球后，由于将药物包封于内相油中，避免了口服穿心莲内酯的苦味与不适感，可明显改善穿心莲内酯口服制剂的用药顺应性。
本发明制备的脂微球制剂，粒径在100～1000nm之间，属亚纳米乳范畴。外观不透明，呈乳状，可加入普罗尼克(F-68)助乳化，或仅需使用豆磷脂作为乳化剂。经热压灭菌后理化性质稳定，安全性试验结果表明，本发明制备的脂微球制剂无菌、热原检查合格，且无溶血性、无过敏性、无刺激性，符合临床用药对于安全性和稳定性的要求。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
图1 穿心莲内酯静脉脂微球制剂的粒径及其分布具体实施方式
实施例1 将注射用大豆卵磷脂1.5g和注射用甘油2.5g置入高速组织捣碎机，加适量注射用水，以12000转/分钟的速度制备成均匀分散相；将分散相和溶有穿心莲内酯250毫克的注射用油10毫升分别预热至60～80℃，混合后制成初乳，将初乳加注射用水至100毫升，置入高压乳匀机反复乳化，通过3微米微孔滤膜过滤，再充氮灌装，灭菌，即得静脉注射用脂微球制剂乳，亦可口服。
实施例2 将注射用大豆卵磷脂1.2g与普罗尼克(F-68)0.3g及注射用水先制备成均匀分散相；加入预热的溶有穿心莲内酯25毫克的注射用油10毫升制成初乳，加注射用水配至100毫升；高压乳化，通过0.8微米微孔滤膜过滤，再充氮灌装，灭菌，即制得静脉注射用脂微球制剂。
实施例3 将注射用大豆磷脂1.5g和注射用甘油2.5g及注射用水先制备成均匀分散相；加入预热的溶有穿心莲内酯25毫克的注射用油20毫升制成初乳，加注射用水配至100毫升，高压乳化，再充氮灌装，即制得静脉脂微球制剂。
实施例4 将大豆卵磷脂1.0g与普罗尼克(F-68)0.3g和注射用甘油2.5g及注射用水先制备成均匀分散相；加入预热的溶有穿心莲内酯25毫克的注射用油10毫升制成初乳，加注射用水配至100毫升，高压乳化，通过0.8微米微孔滤膜过滤，再充氮灌装，灭菌，即制得静脉脂微球制剂。
实施例5 将注射用大豆卵磷脂100g及注射用水制成分散相预热至80℃，与溶有穿心莲内酯2.5克的1000毫升注射用油(预热至80℃)混合，通过高压乳匀机制备成10000毫升的均匀脂微球制剂，通过3微米微孔滤膜过滤，再充氮灌装，压盖，灭菌，即得静脉脂微球制剂。
实施例6 将注射用大豆卵磷脂110g和注射用甘油250g及注射用水制成分散相预热至80℃，与溶有穿心莲内酯5克的1000毫升注射用油(预热至80℃)混合，通过高压乳匀机制备成10000毫升的均匀脂微球制剂，通过0.8微米微孔滤膜过滤，再充氮灌装，压盖，灭菌，即得静脉乳。
实施例7 将注射用大豆卵磷脂120g和注射用水制成分散相预热至80℃，与溶有穿心莲内酯2.5克的1000毫升注射用油(预热至80℃)混合，通过高压乳匀机制备成10000毫升的均匀脂微球制剂，通过0.8微米微孔滤膜过滤，再充氮灌装，压盖，灭菌，即得静脉乳。
实施例8 将大豆卵磷脂120g、尼泊金乙酯10g与制药用水制成分散相预热至80℃，与溶有穿心莲内酯5克的1000毫升药用大豆油(预热至80℃)混合，通过高速组织捣碎机制备成10000毫升的均匀脂微球制剂，压盖，即得口服乳。
实施例9 原料用量优选本发明首先对穿心莲内酯脂微球制剂的处方进行了优选。采用药学中常用的均匀设计法分别对注射用油用量、穿心莲内酯用量、注射用豆磷脂用量进行了考察。各因素水平设计如下，结果见表1。
A注射用油 (ml) 1～50B穿心莲内酯(mg) 5～250C注射用豆磷脂 (g) 0.1～5表1穿心莲内酯脂微球制剂处方 因素—水平
将以上3因素7水平按7水平均匀表U7(74)及使用表安排试验，按本发明所述制备方法配制不同的穿心莲内酯脂微球制剂，以穿心莲内酯加速试验与室温留样长期稳定性为考察指标，优选最佳处方，结果显示当制备的穿心莲内酯脂微球制剂每100ml脂微球制剂中含穿心莲内酯250毫克，其中含注射用油为10毫升、乳化剂1.0克，注射用甘油(根据渗透压进行调节)2.5g，其余为注射用水时，所得供试品在低温4℃放置6个月、高温45℃放置6个月、室温25℃放置12个月后，样品的物理外观、pH及包封率，均无明显变化，稳定性良好。据此实验结果，得到本发明穿心莲内酯脂微球制剂的最佳处方。
以下通过对上述实施例制备的脂微球制剂进行理化性质及安全性检测试验。
试验例1 本发明药物粒径的测定对本发明脂微球制剂的粒径及其分布进行了测定，具体方法如下取本发明制备的静脉与口服脂微球制剂各10ml，加入至400ml水中，用Malvern-2000型激光散射粒径分析仪(英国)，测定所得脂微球制剂的粒径及其分布，结果见图1。
由图1可见，所得静脉脂微球制剂的粒径大小符合正态分布。静脉脂微球制剂的50％的粒径小于172nm，90％的粒径小于215nm。该测定结果符合静脉注射用脂微球制剂的相关要求。其中脂微球的粒径分布范围在0.05微米～1微米，平均粒径为0.05微米～0.4微米。
试验例2 本发明药物稳定性检测我们对本发明制备的穿心莲内酯脂微球制剂于低温4℃放置6个月、高温45℃放置6个月、室温25℃放置12个月后，检测样品的外观、pH及包封率，考察本品的稳定性，结果见表1。
表1 本发明制备的穿心莲内酯脂微球制剂的稳定性考察结果
由表1可见，采用本发明制备的脂微球制剂稳定性良好。低温4℃放置6个月、高温45℃放置6个月、室温25℃放置12个月后，样品的外观、pH及包封率均无明显变化。
综上结果可知，采用本发明制备的脂微球制剂稳定性良好，可达到国家新药研究技术指导原则中关于制剂稳定性的要求。
试验例3 本发明药物质量控制方法本发明中穿心莲内酯的含量测定方法采用高效液相色谱法(毋福海等.HPLC测定复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量.华西药学杂志.2004，19(2)133-135)，以十八烷基键合硅胶为固定相，甲醇∶水(体积比70∶30)混合溶液为流动相，检测波长为225nm，以穿心莲内酯对照品(购自中检所)配制对照品溶液，外标法计算穿心莲内酯含量。
试验例4 本发明药物脂微球制剂包封率的测定以穿心莲内酯为指标采用超速离心法离心脂微球制剂，40000r/min，离心30min，取上层清液0.5ml，用无水乙醇溶解，以高效液相色谱法测定穿心莲内酯含量，可确定被包封的穿心莲内酯的含量M1。脂微球制剂中穿心莲内酯总量为M0，按下式计算穿心莲内酯脂微球制剂对穿心莲内酯IIA的重量包封率Q。
Q＝M1/M0×100％结果以穿心莲内酯为指标，本发明所制备的静脉脂微球制剂包封率均大于97％。
试验例5 本发明药物无菌检查取以本发明方法自制脂微球制剂，按照无菌检查法(中国药典2000版附录XI H)检查，以本发明方法制备的脂微球制剂无菌检查合格。
试验例6 本发明药物热原检查取以本发明方法自制脂微球制剂，按照热原检查法(中国药典2000版附录XI D)检查，以本发明方法制备的脂微球制剂热原检查合格。
试验例7 本发明药物过敏性试验试验方法将豚鼠按体重随机分为3组，每组6只，1、2两组豚鼠间日一次，连续三次腹腔注射穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂0.5ml/只致敏，1、2两组分别于第一次腹腔注射后的14天及21天足趾静脉注射穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂1.0ml/只激发；3组豚鼠间日一次，连续三次腹腔注射20％鸡蛋清液0.5ml/只致敏，于注射后的14天足趾静脉注射20％鸡蛋清液1.0ml/只激发，三组均在激发注射后15分钟内观察过敏反应症状。
试验结果穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂的两组豚鼠分别于第1次腹腔注射后14天和第21天用原药液进行攻击均未发生过敏性反应；而阳性对照组(3组)豚鼠于注射后2分钟内出现呼吸困难，抽搐倒下，而后死亡，豚鼠死亡均发生在注射后1～3分钟内。
试验结论在本次试验条件下，穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂对受试豚鼠无致敏作用。
试验例8 本发明药物溶血性试验试验方法取试管7支，1～5管分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml的穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂，并用10％葡萄糖注射液稀释至2.5ml，6号试管中加入10％葡萄糖注射液2.5ml、7号试管中加入蒸馏水2.5ml(完全溶血对照)。最后每管均加入2％兔红细胞悬液2.5ml，轻轻摇匀，置37℃水浴中，分别记录15min、30min、45min、1h、2h、3h、4h各管的溶血和凝集情况。
试验结果穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂1～5管在4小时内均未引起溶血和凝集反应。
试验结论本实验条件下，穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂对兔红细胞无溶血和凝集反应。
试验例9 本发明药物刺激性试验试验方法取新西兰兔2只，均于左耳缘静脉缓慢注射穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂10ml/kg(考虑到穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂将具有靶向分布、高效低毒的特点，其在应用时较穿琥宁注射液用量将明显减少，但为确保脂微球制剂的安全性，本发明在药物刺激性试验研究中参考穿琥宁注射液用量，成人每日一次，250～500ml静脉滴注。以人50kg体重计，则为5～10ml/kg/天)。右耳缘静脉缓慢注射10％葡萄糖注射液10ml/kg，每天一次，连续注射三天，于注射第一次开始，每天观察注射部位有无水肿、红斑，末次注射后24小时，从耳根剪下耳朵置10％甲醛溶液中固定，然后作病理切片检查。
试验结果穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂给兔耳缘静脉每日注射一次，连续三天，2只兔耳注射部位未见有水肿和红斑的发生。病理组织学观察，兔耳表皮结构正常。表皮下乳头层及网织层无炎细胞渗出、无出血，血管内无血栓形成。附件结构正常。
试验结论穿心莲内酯静脉注射用脂微球制剂对兔耳缘静脉血管无刺激性。
从以上结果可以看出，采用本发明制备的脂微球制剂安全可靠，无过敏性、溶血性及刺激性，符合临床用药的相关要求。
从本发明提供的试验例中，粒径的测定试验、稳定性试验、包封率测定试验及无菌、热原、过敏性、溶血、刺激性试验证明本发明提供的穿心莲静脉制剂克服了穿心莲内酯水溶性差，不易制备成注射剂的缺陷，也克服了常规制剂稳定性差、易氧化降解，过敏反应和毒副作用大等缺陷；当本发明穿心莲内酯脂微球制剂作为口服制剂时，避免了穿心莲内酯口感极苦，方便临床使用，是一种安全性高、疗效良好的新的药用制剂。
权利要求
1.一种穿心莲内酯脂微球制剂，其特征在于它是以穿心莲内酯为活性成分，加上药学上常用的注射或口服用油、乳化剂、注射用水/制药用水制备而成的脂微球制剂，其中脂微球的粒径分布范围在0.05微米～1微米，平均粒径为0.05微米～0.4微米。
2.根据权利要求1所述的穿心莲内酯脂微球制剂，其特征在于每100ml脂微球制剂含穿心莲内酯10毫克～1000毫克、注射或口服用油为1毫升～50毫升、乳化剂0.1克～5克，其余为注射用水或制药用水。
3.根据权利要求2所述的穿心莲内酯脂微球制剂，其特征在于所述的脂微球制剂为静脉注射用脂微球制剂、口服脂微球制剂。
4.根据权利要求3所述的穿心莲内酯脂微球制剂，其特征在于所述的口服脂微球制剂中所用油为口服用大豆油；其含量为每100ml脂微球制剂中含穿心莲内酯250毫克、口服用大豆油为10毫升、乳化剂为1克，其余为制药用水。
5.根据权利要求4所述的穿心莲内酯脂微球制剂，其特征在于乳化剂为豆磷脂、普罗尼克F-68、阿拉伯胶、明胶及药学上可接受的乳化剂中的一种或其混合。
6.根据权利要求3所述的穿心莲内酯脂微球制剂，其特征在于所述的每100ml静脉注射用脂微球制剂中所用油为注射用大豆油，其中含量为每100ml脂微球制剂中含穿心莲内酯10毫克～1000毫克、注射用大豆油为5毫升～50毫升、乳化剂0.1克～5克，其余为注射用水。
7.根据权利要求6所述的穿心莲内酯脂微球制剂，其特征在于所述的每100ml静脉注射用脂微球制剂中所用油为注射用大豆油，每100ml脂微球制剂中含有穿心莲内酯250毫克、注射用大豆油为10毫升、乳化剂1克，其余为注射用水。
8.根据权利要求6、7所述的穿心莲内酯脂微球制剂，其特征在于所述的乳化剂为注射用豆磷脂、普罗尼克F-68中的一种或两种混合。
9.一种制备权利要求6、7所述的穿心莲内酯脂微球制剂的方法，其特征在于所述静脉注射用脂微球制剂的制备方法包括如下步骤a、称取处方量的各原料、辅料；b、取处方量的原料药穿心莲内酯溶于油相中，再将处方量的注射用豆磷脂或普罗尼克(F-68)一种或两种混合溶于水相中；c、将上述水相或油相转入组织捣碎机内，于高速搅拌条件下滴加油相入水相或滴加水相入油相，至油相均匀分散于水相中或水相均匀分散于油相中，得初乳；d、取上述初乳转移至高压乳匀机内，匀化至平均粒径达0.5微米以下，微孔滤膜过滤，所得脂微球制剂灌封于输液瓶或安瓿中，充氮气，热压灭菌，即得。
全文摘要
本发明提供了一种穿心莲内酯脂微球制剂，它是以穿心莲内酯为活性成分，加上药学上常用的注射或口服用油、乳化剂、注射用水/制药用水制备而成的脂微球制剂。本发明制备的脂微球制剂，稳定性好，经热压灭菌后理化性质无明显改变，安全性试验结果表明，本发明制备的脂微球制剂无菌、热原检查合格，且无溶血性、无过敏性、无刺激性，符合临床用药安全性的要求。
文档编号A61K31/365GK1686108SQ20051002052
公开日2005年10月26日 申请日期2005年3月18日 优先权日2005年3月18日
发明者毛声俊, 金辉, 梁臻, 吴宇 申请人:四川思达康药业有限公司