繁缕不饱和多糖的酚苷类成份及其抗病毒应用和制备方法

专利名称：：繁缕不饱和多糖的酚苷类成份及其抗病毒应用和制备方法
技术领域：
：本发明涉及从植物繁缕或其它一种繁缕属植物中提取的分子量在io，ooo以下但主要为分子量在4,000以下、分子结构中具巯基或硫醚或硫醇及垸或/和烯等基团的不饱和多糖或不饱和多聚醇类成份与酚性化合物，尤其是其与黄酮类化合物形成棕色的总酚苷类成份的组合物，作为广谱抗病毒药物应的用。二
背景技术：
：根据报道，繁缕属植物的化学成分主要是黄酮及黄酮甙类、皂甙及皂甙原类、环縮氨酸类、阿魏酸及其酯类、绿原酸、新绿原酸、咖啡酸、奎宁酸、抗坏血酸类、草酸及草酸钙、单酰基半乳糖类脂物、生物碱类、吡喃半乳糖-SN-丙二氧基类、菠菜甾醇、豆甾烯醇、谷甾醇类等等。本发明人曾在CN1377680A及CN1498630A两份专利中公开了从繁缕属植物繁缕或其它-』种繁缕属植物中提取的分子结构中含硫元素的总有机酚酸及其糖苷类化合物或总黄酮及其糖苷类等大极性化合物的组合物作为抗病毒药物的应用。另有CN1521193A等专利公开并声称从繁缕属植物中提取到分子量分布在40002000000的灰白色多糖类成份具有抗病毒作用。但未见从繁缕属植物中提取分离到分子量在10,000以下但主要为分子量在4,000以下、分子结构中具巯基或硫醚或硫醇及烷或/和烯等基团的不饱和多糖或不饱和多聚醇类成份与酚性化合物，尤其是其与黄酮类化合物形成棕色的总酚苷类成份的组合物，作为广谱抗病毒药物应用的报道。三
发明内容1、本发明要解决的技术问题提供一种从繁缕或其它一种繁缕属植物提取分离的分子量在10,000以下但主要为分子量在4,000以下、分子结构中具巯基或硫醚或硫醇及垸或/和烯等基团的不饱和多糖或不饱和多聚醇类成份与酚性化合物，尤其是其与黄酮类化合物形成棕色的总酚苷类成份的组合物，作为广谱抗病毒药物应用，并具有更好的抗病毒作用，还提供一种得率更高的制备方法。2、本发明采用的技术方案在本发明人已经公开的CN1377680A及CN1498630A两份专利基础上，改进提取工艺方法使得率提高，并经深入研究后，根据有关核磁共振波谱数据及药效、毒理等试验结果，进-一步提供-种从植物繁缕Stdlariamedia(L.)Cyr.及其它一种繁缕属植物中提取分离得到的分子量在IO，OOO以下但主要为分子量在4,000以下、分子结构中具巯基或硫醚或硫醇及烷或/和烯等基团的不饱和多糖或不饱和多聚醇类成份与酚性化合物，尤以其与黄酮类化合物形成棕色总酚苷类成份的组合物，作为广谱抗病毒药物应用。同时还提供改善树脂柱上洗脱条件后提高得率的制备方法。本发明所述的棕色组合物，可以从植物繁缕或下列一种植物中提取，这些植物包括繁缕属植物StellariaL.及牛繁缕属植物MalachiumFries至少包括以下78种，即雀舌草StellariaalsineGrimm.、褐瓣雀舌草Stellariaalsinevar.phaeuspetalaHand.-Mazz.、安徽繁缕StellariaanhwiensisMigo.、钝萼繁缕StellariaamblyosepalaSchrenk.、细尖繁缕StellariaapiculataWils.、鹅肠草Stellariaaquatica(L)Scop.、沙生繁缕StellariaarenariaMaxim、阿里山繁缕StellariaarisanensisHayata.、薄口十阿里山繁缕Stellariaarisanensisvar.leptophyllaHayata.、北繁缕StellariaborealisBigel.、短瓣繁缕StellariabrachypetalaBge.、长瓣繁缕StellariabungeanaFenzl.、东北繁缕Stellariacherleriae(Fisch.)Will.、华繁缕StellariachinensisRegel、台湾繁缕StellariacicranthaHayata、厚叶繁缕StellariacrassifoliaEhrh.、铍叶繁缕StellariacrispateWall.、大卫繁缕StellariadavidiiHemsl.、偃卧繁缕StellariadecumbensEdgew.、针状偃卧繁缕Stellariadecunbensvar.aciculariaEdgew.etHook.f.、西南繁缕StellariadelavayiFranch.、石竹叶繁缕StellariadianthifoliaWilliams、二歧聚伞花繁缕StellariadichasioidesWilliams、双歧繁缕StellariadichotomaL.、窄叶双歧繁缕Stellariadichotomavar.lanceolataBge.、线叶双歧繁缕Stellariadichotomavar.stephenianaWilld.、铺散繁缕StellariadiffusaWills.、番羽白繁缕StellariadiscolorTurcz.、泽繁缕StellariadiversifloraMaxim.、裸蔬异花繁缕Stellariadiversifloravar.gymnandraFranch.、凹脉繁缕StellariadepressaSchnid.、杜氏繁缕StellariaduthieiGandoger、线茎繁缕StellariafilicaulisMak.、线柄繁缕StellariafilipesKomar.、多花繁缕StellariafloridaFisch.、禾叶繁缕StellariagramineaL.、疏柔毛禾叶繁缕Stellariagramineavar.pilosulaMaxim.、变绿禾叶繁缕Stellariagramineavar.viridescensMaxim,、江孜繁缕StellariagyantsensisWilliams、霞草繁缕StellariagypsophiloidesFenzl.、站力北繁缕StellariahenryiWilliams、兴安繁缕StellariahsinganensisKitagawa、内曲繁缕StellariainfractaMaxim.、薄叶繁缕StellarialeptophyllaHance、东繁缕StellariamaximowixzianaFranch.、繁缕Stellariamedia(L.)Cyr.、小花繁缕StellariamicranthaHayata、柔繁缕StellariamitansWilliams、鹅肠繁缕StellarianeglectaWeihe、新沼生繁缕Stellarianeo-palustrisKitagawa、八蕊繁缕StellariaoctandraFobedim.、纟.l:莓繁纟娄StellariaoxycoccoidesKomar.、》召^fe繁缕StellariapalustrisL.、展叶繁缕StellariapatentifoliaKitagawa、柄花繁缕StellariapeduncularisBge.、柄叶繁缕StellariapetiolarisHand-Mazz.、长毛繁缕StellariapilosaFranch.、假石生繁缕StellariapseudosaxatilisHand.-Mass.、小繁缕StellariapusillaSchmid.、燧瓣繁缕StellariaradiansL.、网脉繁缕StellariareticulivenaHayata、岩繁缕StellariampestrisHemsl.、石生繁缕StellariasaxatilisBuch.-Ham.、抱茎石生繁缕Stellariasaxatilisvar.amplexicaulisHand.-Mazz.、7隹葛尔繁缕StellariasoongoricaRoshev.、苏氏繁缕StellariasoulieiWilliams、星毛繁缕Stellariastdlato-pilosaHayata、园萼繁缕StellariastrongylosepalaHand.-Mazz.、拟伞花繁缕StellariasubumbellataEdgew.、小莺毛繁缕StellariatomentellaOhwi、三型繁缕StellariatrimorphaNakai、土耳其斯坦繁缕StellariaturkestanicaSchischk.、湿地繁缕StellariaudaWilliams、伞7在繁缕StellariaumbellataTurcz.、纟录花繁缕StellariavirdifloraPaxetO.Hoffm.、巫山繁缕StellariawushanensisWilliams、五台繁缕StellariaHand.-Mazz.、云南繁缕Stellariayunnanensisfranch.j及牛繁缕属丰直物牛繁缕Malachiumaquaticum(L.)Fries等。深入研究发现这种从繁缕及其它一种繁缕属植物中提取分离到的由这种的分子量在10,000以下但主要为分子量在4,000以下、分子结构中具巯基或硫醚或硫醇及垸或/和烯等基团的不饱和多糖或不饱和多聚醇类成份与酚性化合物，尤以其与黄酮类化合物形成棕色的总酚苷类成份的组合物，作为广谱抗病毒药物应用尚有以下几个特点1)、此类特殊总酚苷类的棕色组合物抗病毒作用强度，与其化学结构中这种不饱和多糖类或不饱和多聚醇类部份所占比例成正比、与酚性部份包括黄酮部份所占的比例呈反比。因此，随它们分子量逐步增大，当此类特殊苷类成份化学结构中的不饱和多糖类或不饱和多聚醇类部份所占比例由50%55%增至80%90%、酚性部份包括黄酮部份所占比例由45%50%减少至仅占约10%20%时，其溶液颜色也由鲜黄色逐步变成棕红色至深棕红色，其抗病毒作用也逐步增强。2)、此类特殊的棕色总酚苷类成份的组合物所含硫元素在化合物中形成巯基或硫醚或硫醇结构，且其化学结构中还有烷基或/和烯基结构，因此，此特殊的苷类成份可以是饱和的或/和不饱和的。3)、此类特殊的棕色总酚苷类成份其形成的苷类可以是碳苷类，也可以是氧苷类，但以碳苷类优先。4)、此类特殊的棕色总酚苷类成份的组合物在聚酰胺薄层层析时，层析斑点在365nm紫外光下很清楚地显现深棕红色、棕褐色、棕色、棕黄色、及黄色等荧光斑点，在254nm紫外光下也可显现同样颜色的荧光斑点，只是较弱。5)、部份化合物具有縮合性，特别是经分离后的一些化合物可縮合并得到一种在365nm紫外光下呈"棕黑色"的荧光斑点，薄层层析时往往停留在原点或Rf值0.15左右，这是前所未见的特殊色荧光斑点，表明此类化合物具有特殊的化学结构，且其分子量更大、抗病毒作用也最强；当其縮合得足够大时即难溶亍水或有机溶剂。6)、此类特殊的棕色苷类成份的组合物易溶于水形成棕色、棕红色或深棕褐色透明溶液，没有多糖类成份通常所具有的乳光。7)、此类特殊的棕色酚苷类成份的组合物的水溶液可经分子筛如SephadexLH-20或SephadexLH-60进行层析分离，因此，其分子量分布在4000以下10，000以下，但以4000以下为主。8)、此类特殊的棕色总酚苷类成份的组合物的水溶液与三氯化铁试液可显现茶色或茶棕色反应，但并不出现糖类或多糖类与苯酚一浓硫酸反应时通常呈现的紫红色，所以本品不是纯粹的糖类或多糖类。根据以上特性，本发明从植物繁缕或其它一种繁缕属植物中提取的由特殊的不饱和多糖或不饱和多聚醇类成份与酚性化合物，尤其是其与黄酮类形成的棕色总酚苷类化合物的组合物(以下称"本品")是前所未见的，具有惟一性。3、本品具有以下有益效果本发明的本品可抗病毒包括艾滋病毒、肝炎病毒、包括高致病性禽流感病毒在内的流感病毒、副流感病毒、腺病毒等呼吸道病毒及尖锐湿疣病毒、肠病毒、腮腺炎病毒、单纯性疱疹病毒、带状疱疹病毒和水痘一带状疱疹病毒等。具体实施例方式-)、本品的制备方法包括下列步骤1、其第一种方法是将植物繁缕或其它一种繁缕属植物的新鲜全草洗净泥沙、粉碎后提取水溶液，将此水溶液经沉淀、离心或过滤后得到液体A;将液体A通过预先已处理好的大孔树脂柱以吸附所述组合物的成份，用水洗净，再将大孔树脂柱加温后用热蒸馏水洗柱并收集流出的深褐色蒸馏水液，再用加温后浓度在60%以下的低级醇从树脂柱上洗脱，并收集洗脱得到的棕红色或暗棕红色溶液。将此棕红色或暗棕红色溶液回收乙醇后与收集的深褐色水液合并，再经浓縮、干燥即得所述组合物粗品。将所述组合物粗品用水溶解后经离心去除沉淀物等方法精制后浓縮干燥即成本品。本品的性状及性质为一种具有中药干浸膏常见的棕色的粉状物或多孔玻璃状物，有通常中药干浸膏气味，其性质稳定、易溶于水、略有苦味。组合物需经0.22陶滤膜过滤或/和经钴60照射以除菌、灭菌，制成市售产品可作为一种广谱抗病毒药物应用。其中柱温为3(TC50。C，低级醇包括60%以下的甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇。优选40。C50。C的45。/。乙醇50。/。乙醇。2、其第二种方法是将植物繁缕或其它一种繁缕属植物的新鲜干全草洗净、粉碎后提取水溶液，将此水溶液经沉淀、离心或过滤后得到液体A;将此液体A经阴离子交换剂柱，使所述组合物成份吸附在柱上，用氯化钠溶液将所述组合物成份从加温后的柱上洗脱下来，再经脱盐处理、浓縮和干燥后即得所述组合物粗品。将所述组合物粗品用水溶解后经离心去除沉淀物等方法精制浓縮干燥成本品。本品性状及性质为-种具有中药干浸膏常见棕色的粉状或多孔玻璃状物，具有通常中药千浸膏气味，其性质稳定、易溶于水，略有苦味。组合物需经0.22WH滤膜过滤或/和经钴60照射以除菌、灭菌，制成市售产品可作为--种广谱抗病毒药物应用。其中柱温为30°C50°C，优选优选4(TC50。C。3、本品作为抗病毒药物应用至少可做成以下剂型1.针剂，可用于治疗艾滋病、肝炎、SAS病毒引发的非典型肺炎、高致病性禽流感病毒H5N1型引发的病毒性肺炎等。等各种病毒性疾病。2.粉针剂，可用于治疗艾滋病、肝炎、SAS病毒引发的非典型肺炎、高致病性禽流感病毒H5N1型引发的病毒性肺炎等各种病毒性疾病。3.气雾剂，用于小儿治疗流感、腮腺炎等，并可作为空气及口腔抗病毒的消毒剂、保健品或抗病毒功能性食品。4.含片或咀嚼片，用于治疗腮腺炎等，可作为空气及口腔抗病毒的消毒剂、保健品或抗病毒功能性食品。5.胶囊剂，口服用于治疗艾滋病、肝炎、流感等各种病毒性疾病。6.微囊剂，用以缓释药物治疗慢性病毒疾病。7.滴鼻剂，用于治疗流感等，还可作为鼻腔抗病毒的消毒剂、保健品等。滴鼻剂也可通过雾化器雾化吸入给药，用以治疗治疗病毒性肺炎，如SAS病毒引发的非典型肺炎、高致病性禽流感病毒H5N1型引发的病毒性肺炎等。8.膜剂或涂膜剂等，用于疱疹、尖锐湿疣等皮肤病的治疗。9.胶浆剂，用于治疗疱疹等皮肤病。10.水剂，用于临床直接涂抹治疗疱疹、尖锐湿疣等皮肤病。11.液体口香糖，可作为口腔抗病毒消毒剂、抗病毒保健品或功能性食品等。12.口香糖，可作为口腔抗病毒消毒剂、抗病毒保健品或功能性食品等。二)、本品的实施例1、用第一种方法的实施例1:取拣净杂质的繁缕新鲜全草20kg用自来水洗净泥土后，粉碎，离心，过滤，提取得药液，残渣弃去并可归田作肥料。将药液经过沉淀、离心或过滤后即得到液体A，将此液体A不断地通过id30cmX120cm的市售大孔树脂柱，控制流速在3ml/min至6ml/min。可见大孔树脂柱由上而下逐渐变成一种棕红色或深棕褐色直至柱子吸满药物。弃去柱子中流出的液体，并先用自来水洗净柱中的残液。用约2倍柱体积的55t:蒸馏水洗涤大孔树脂柱，弃去最先流出的无色及色泽较浅淡的水液，收集随后流出的深褐色水液。此时大孔树脂柱己被加温至4(TC45'C，继用55。C约为柱体积3倍量的50%乙醇洗脱并收集棕红色乙醇溶液，本例用量约为300L50%的乙醇。将乙醇溶液经减压干燥器回收乙醇后与收集到的深褐色水液合并浓縮至粘稠状放出，约为1000ml左右，比重约为1.15，经喷雾干燥后得粗品约59.68g。将粗品用约2000ml蒸馏水溶解后离心5分钟(4000r/min)，弃去沉淀物。上清液经0.22ixm滤膜过滤于已灭菌的洁净容器中，在无菌条件下再经减压浓縮成比重为1.1的稠膏状，经喷雾干燥得精制品。本品为棕黄色疏松粉末，有中药通常的气味。计得56.82g，得率以新鲜全草计约为0.28%左右。反复用此法共制得这种特殊的繁缕总苷组合物精制品556g。2、用第二种方法的实施例2:取繁缕干全草3kg，用自来水洗净泥土后，粉碎，离心，提取得药液；残渣弃去，并可归田作肥料。将药液经过沉淀、离心或过滤后即得到液体A，将此液体A通过id10cmX120cm的市售阴离子交换树脂柱，吸附所述组合物成份后，用约为柱体积3倍的新鲜蒸馏水或去离子水洗净弱碱性阴离子交换树脂柱，弃去从柱中流出的由浅黄色逐渐变淡直至几乎无色的洗柱液，本例用量约为30L水。然后将树脂柱加温至4(TC45。C继用2倍于柱体积的2N浓度的NaCl溶液将吸附在柱上的所述组合物成份迅速洗脱并收集此深棕红色洗脱液，本例用量为20L盐溶液。将此含盐溶液适当浓縮至750ml左右后置于半透膜袋中，先后对自来水和蒸馏水进行透析直至溶液对AgN(X,溶液反应很弱或无咸味为止。将透析后所得深棕红色溶液转移至减压干燥器中减压干燥至粘稠状，约为150ml，再转移至真空干燥器中经6(TC真空干燥使其发泡，维持12小时以上即得所述组合物粗品，约60.88g。将组合物粗品用250ml水溶解后离心5分钟(4000r/min)弃去沉淀物。上清液再经0.22wm滤膜过滤于己灭菌的洁净容器中，在无菌条件下经减压浓縮成稠膏状，再经真空干燥得精制品。为深棕红色玻璃状，研细后呈棕黄色粉末状，有一般的中药味。共得69.33g，得率以干全草计约为2.3%左右。用此法共制得精制品465.55g。表1.给出从大孔树脂柱上洗脱本品时，温度变化对得率的影响:表1.实施例1中从柱上洗脱本品时温度变化对得率的影响编号温度药物色泽得率(鲜草计)备<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表2.给从大孔树脂柱上洗脱本品时乙醇浓度变化对得率的影响表2.实施例1中从柱上洗脱本品时乙醇浓度变化对得率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>通常采用杂质较多表3.给出用繁缕属14种植物提取本品得率比较表3.实施例1中从繁缕属不同种植物提取本品的得率比较编号植物品种药物色泽得率(鲜草计)备<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3、各种剂型的制备实施例如下3丄针剂将实施例提取分离得到的药物精制品200g用0.9%氯化钠注射液2000ml溶解后用离心机离心5分钟(4000r/min)，将离心后所得上层清液经0.22ura滤膜密封过滤于已灭菌的洁净容器中，经灌封机灌装于注射剂用安瓿中，视需要分别分装成lml/支的1000支、0.lg/支，2ml/支的450支、0.2g/支，再经钴56照射灭菌即得注射剂。3.2.粉针剂将实施例提取分离得到的药物精制品200g用蒸馏水50ml溶解后经离心机离心5分钟(4000r/min)，将离心后所得上层清液经0.22iim滤膜密封过滤于已灭菌的洁净容器中，经喷雾干燥机喷干成药粉，再经灌封机灌封在安瓿中，再经钴56照射灭菌即可制成2ml的粉针剂，共计2000支，100mg/支。使用时用灭菌注射用水溶解后使用。3.3.气雾剂取4g药物精制品加入0.99^氯化钠注射液100ml溶解、离心、过滤于洁净的10ml装气雾剂瓶中，即制成10支气雾剂，200mg/支。可作为口腔抗病毒的消毒剂。3.4.含片剂取按实施例l制得的药物精制品100g与片剂的敷料、香料、矫味剂等一起用压片机制成含片2000片，50mg/片。可作为口腔抗病毒的消毒剂、保健食品或抗病毒功能性食品。3.5.胶囊剂取按实施例1制得的药物真空干燥后研成粉状的精制品100g在无菌条件下，灌装成1000粒胶囊，100mg/胶囊。可用于治疗各种病毒病，还可作为口腔抗病毒的消毒剂、保健食品或抗病毒功能性食品。3.6.微囊剂取按实施例1制得的经过精制处理的药物干粉3g使混悬于3.6g液状石蜡中；再另取阿拉百胶10g加入蒸馏水200ml，待溶解后煮沸半小时以破坏氧化酶，将温热的液状石蜡注入阿拉百胶液中，于组织捣碎机中乳化12分钟，制成水包油乳剂。再取明胶10g加入蒸馏水200ml，置于6(TC水浴上溶解，并与上述阿拉百胶液混合于1000ml烧杯中，维持胶液在45。C50。C，慢速搅拌。用新鲜配制的5%醋酸溶液5ml加至胶液中，调节溶液的PH值至约为4.1，产生凝聚作用。成囊后注入蒸馏水750ml，再移至冰浴中冷却，降温至510°C，使明胶囊膜冻凝。这时的微囊呈球状。再加37W的甲醛7ml进行固化。搅拌15分钟，使微囊定型。然后用20%的氢氧化钠溶液调节囊液至ra8.0左右。于低温搅拌1小时后，用离心机滤过，洗涤至中性无甲醛味。再加入囊重3%的硬脂酸镁作稀释剂，混合均匀后过16目筛，再5(TC真空干燥，得此药物的微囊剂，得率72.2%，计16.6g微囊，180mg/g。3.7.滴鼻剂将按实施例1提取分离得到的药物精制品2g用0.9%氯化钠注射液100ml溶解后用离心机离心5分钟(4000r/min)，将离心后所得上层清液经0.22um滤膜密封过滤于己灭菌的洁净塑料眼药水瓶中分装成10支滴鼻剂，200mg/支。3.8.膜剂取按实施例1制得的药物精制品30g、氮酮0.3ml加水100ml溶解后离心、经O.22um滤膜过滤于洁净容器内，加入PVA(05-88)19.5g适当加热搅拌使其溶解，洁净条件下在平板玻璃上涂成宽lOOmm、长约lOOmm、厚约0.1mm的药膜。再将宽约lOOmm、长IOO腦、厚约0.05mm的避光包衣薄膜在药膜上下两面各覆一层作为包衣膜，然后封装成膜剂。其剂量为0.3g/cm2，临用时按需要及其剂量剪切使用。3.9.胶浆剂取白芨胶质(中等粉)2g分装于10个15ml的干燥玻璃瓶中，各加入甘油2ml作分散剂，振摇分散均匀后，另取氯仿水100ml加入3g药物精制品搅拌使其溶解，离心后经0.22iim滤膜分别过滤于分散均匀的白芨胶质玻璃瓶中，猛烈振摇，得药物胶浆剂，200mg/瓶。3.10.水剂或滴鼻液取按实施例1制得的精制处理的药物干粉10g使溶于250ml水中，即可分装成25瓶水剂，400mg/瓶。3.11.液体口香糖在水剂中加入香料、矫味剂等制成液体口香糖，可作为口腔抗病毒消毒剂、抗病毒保健食品或功能性食品等。3.12.口香糖100g口香糖胶、0.1ml薄荷油香料、戊糖lg作为矫味剂等制成口香糖可作为口腔抗病毒消毒剂、抗病毒保健食品或功能性食品等。4、本品作为药物应用的安全性4.1、繁缕总酚苷小鼠口服给药的急性毒性实验摘要小鼠口服给药的实验结果表明一日内连续两次灌胃给予小鼠繁缕总酚苷最大给药量为32g(干粉)/kg，相当于临床日用量的1916.17倍；连续观察7天，未发现动物出现毒性反应及死亡现象。表明繁缕总酚苷毒性很低，按拟定临床剂量服用是安全的。4.1.1、试验目的观察一次或数次给予小鼠繁缕总酚苷饱和溶液后，试验动物所产生的急性毒性反应和死亡情况，为临床用量提供参考依据。4.1.2、试验材料4.1.2.1、动物健康普通级昆明种小鼠，体重1822g，雌雄各半，由安徽省医学科学研究所实验动物实验室提供。合格证皖医实动准字Ol号。4.1.2.2、药物繁缕总酚苷粉，批号050224;由朱耕新先生提供，使用前用蒸馏水配制成所需浓度。4.1.3、试验方法4.1.3.1、预试验繁缕总酚苷粉饱和溶液(400mg/ml):取小白鼠12只，禁食1416小时，体重19-21克，雌雄各半。视性别和体重将动物随机分为3组，每组4只，组间剂距比l:0.5。各组动物分别以0.4ml/10g体重灌胃给予繁缕总酚苷粉溶液(400mg/ml、200mg/ml、100mg/ml)，观察口服受试药一周内，引起实验动物0%和100%死亡的致死剂量和动物所表现的症状。结果3组动物服药后，均未发现有动物发生中毒症状和死亡情况，故采用最大给药量试验。4.1.3.2、最大给药量试验(MTD):繁缕总酚苷粉取小鼠20只，雌雄各半，体重1820g。在24小时内，分别给各鼠连续灌胃给药两次(两次给药间隔为6小时)，每次灌胃给予繁缕总酚苷粉饱和溶液(400mg/ml)0.8ml/20g，累计灌服L6ml，即时起观察小鼠中毒和死亡情况，连续观察7天。4.1.3.3、试验结果(1).试验小鼠体重变化情况样品组动物给药后一周内，均无出现死亡，动物的活动、精神状态、饮食、排便等均未见异常。试验前与试验结束时小鼠体重变化分别见表4.:表4.繁缕总酚苷粉急性毒性试验小鼠体重变化(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>(2).繁缕总酚苷粉的最大给药量计算小鼠最大耐受量繁缕总酚苷饱和液每毫升含繁缕总酚苷粉400毫克，小鼠平均体重为20g，每次灌胃容积0.8ml，共计2次。小鼠日服繁缕总酚苷粉最大耐受量=1.6mlX0.4g/ml/0.02kg=32g/kg安全限度以成人平均体重60kg为标准，繁缕总酚苷粉的日用量为lg。小鼠平均体重为20g，日最大用药量为1.6mlX0.4g/ml。安全限度=0.64g/20g+lg/60000g=1916.17(倍)4.1.3.4、结论上述数据表明本品口服给药的动物体内急性毒性试验未见有明显毒性等，因此本品是一种很安全的天然药物。繁缕总酚苷粉小鼠口服给药，最大耐受量为32g/kg，较本发明人曾在CN1377680A及CN1498630A两份专利中公开的口服给药最大耐受量为11.25g/kg更好约3倍，相当于临床给药日剂量的1916.17倍。实验结果说明繁缕总酚苷粉在动物口服急性给药条件下未产生明显毒性反应，实验观察期间样品组实验动物体重自然增长，活动、精神状态、饮食以及排便等也未见明显改变，表明本品毒性较低，按拟定临床剂量服用是安全的。5、繁缕总酚苷滴鼻剂的一般药理实验及其结果5.1、对小鼠和大鼠精神神经系统的影响，5.1.1、繁缕总酚苷滴鼻剂对小鼠和大鼠精神神经系统的影响，5.1.1.1、对小鼠入睡个数的影响取KM小鼠100只，体重18-22g，雌雄各半，随机均分为5组，即(1)正常对照组等体积蒸馏水；(2)戊巴比妥钠+蒸馏水组lml/kg;(3)戊巴比妥钠+繁缕总酚苷滴鼻剂I组0.16g/kg;(4)戊巴比妥钠+繁缕总酚苷滴鼻剂n组0.33g/kg;(5)戊巴比妥钠+繁缕总酚苷滴鼻剂m组0.67g/kg。各组均按lml/kg的容积分别滴鼻给药。15min后除正常对照组外各组腹腔注射阈下睡眠剂量的戊巴比妥钠25mg/kg，观察并记录注射戊巴比妥钠30min内每组入睡小鼠的个数(以小鼠翻正反射消失达l分钟以上者作为入睡反应)。结果见表5:表5繁缕总酚苷滴鼻剂对小鼠入睡只数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>实验结果表明，繁缕总酚苷滴鼻剂三个剂量组对小鼠戊巴比妥钠阈下睡眠剂量无协同作用，与戊巴比妥钠组比较，无显著性差异(P>0.05),提示繁缕总酚苷滴鼻剂对小鼠无催眠作用。5.1.1.2、繁缕总酚苷滴鼻剂对小鼠自发活动的影响取体重1822g的昆明种小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组即(1)对照组等体积蒸馏水；(2)繁缕总酚苷滴鼻剂I组0.16g/kg;(3)繁缕总酚苷滴鼻剂II组0.33g/kg;(4)繁缕总酚苷滴鼻剂m组0.67g/kg。各组均按lml/kg的容积分别滴鼻给药。用小动物测定仪观察小鼠给药后15min、30min、45min、60min、90min自发活动情况，记录小鼠5min内活动次数。结果见表6:表6繁缕总酚苷滴鼻剂对小鼠活动计数的影响(f±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>巴比妥钠阈下睡眠剂量无协同作用，与戊巴比妥钠组比较无显著差异(P>0.05)，提示繁缕总酚苷滴鼻剂对小鼠无催眠作用。(2)繁缕总酚苷滴鼻剂0.67g/kg，0.33g/kg，0.16g/kg各剂量组在给药后不同时间段对小鼠的自发活动计数，与对照组比较无显著性差异(P〉0.05)，提示繁缕总酚苷滴鼻剂对小鼠的中枢神经系统无影响。(3)繁缕总酚苷滴鼻剂0.33g/kg，0.16g/kg，0.08g/kg各剂量组在给药后不同时间段大鼠转棒掉落次数，与对照组比较无显著差异(P〉0.05)，提示繁缕总酚苷滴鼻剂对大鼠的行为没有影响。综上所述，繁缕总酚苷滴鼻剂对大鼠、小鼠的正常行为活动没有影响，与阈下睡眠剂量的戊巴比妥钠无协同作用，表明繁缕总酚苷滴鼻剂在受试剂量范围内对动物的精神神经系统无明显影响。5.2、繁缕总酚苷滴鼻剂对麻醉犬心血管及呼吸系统的影响5.2.1、方法和观察指标、观察时间及统计处理受试杂种犬禁食24小时，自由饮水。戊巴比妥钠(30mg/kg，iv)麻醉后，股动脉插管，经压力换能器与八道生理记录仪相连，备记血压(收縮压、舒张压、平均动脉压)、心率；呼吸带在剑突处经换能器测呼吸；针电极剌入皮下测标准II导联心电图。手术毕，待各参数稳定后滴鼻给药,观察各项指标。①观察指标心血管系统观察收縮压、舒张压、平均动脉压、心率、心律等。呼吸系统观察呼吸频率及呼吸幅度。②分组、给药剂量和观察时间实验动物随机均分为4组，每组动物数5只，雌雄不拘。(1)对照组给予等容积蒸馏水；(2)繁缕总酚苷滴鼻剂低剂量组给予0.16g/kg;(3)繁缕总酚苷滴鼻剂中剂量组给予0.33g/kg;(4)繁缕总酚苷滴鼻剂高剂量组给予0.67g/kg。各组均按0.4ml/只一次经滴鼻给药。观察时间为给药前和给药后5、15、30、45、60、90、120min。③统计处理所有数据资料采用Student's-t检验。A%=(给药后不同时相测定值一给药前测定值)/给药前测定值xiooy。5.2.2、试验结果结果显示繁缕总酚苷滴鼻剂低、中、高剂量组对受试麻醉犬的血压无明显影响，与对照组比较无显著性统计学意义(P>0.05)。三个剂量组对受试麻醉犬的心率、心电图无明显影响，与对照组比较无显著性统计学意义(P>0.05)。繁缕总酚苷滴鼻剂三个剂量组对受试麻醉犬的呼吸频率及幅度无明显影响，与对照组比较无显著性统计学意义(P>0.05)。6、本品作为抗病毒药物应用的实施6.1、本品具有更好的广谱抗呼吸道病毒效能6.1.1、小鼠口服繁缕总酚苷体内抗流感病毒的实验研究6.1.1.1、本品繁缕总酚苷系纯中药提取物，为研究其抗流感病毒的作用，采用流感病毒感染小鼠病毒性肺炎模型，对口服繁缕总酚苷体内抗流感病毒作用进行了研究。本发明人已在CN1377680A及CN1498630A两份专利中公开了从繁缕属植物繁缕或其它一种繁缕属植物中提取的分子结构中含硫元素的总有机酚酸及其糖苷类或总黄酮及其糖苷类等大极性化合物的组合物作为抗病毒药物的应用，包括细胞试验证明本品能对分属RNA类的流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、埃柯病毒、疱疹病毒和属于DNA类的腺病毒等两大类呼吸道病毒有较强的抑制作用，特别是对流感病毒、副流感病毒及腺病毒3具有强大的抑制，因此具有独特的广谱抗病毒性能。其滴鼻剂在小鼠动物体内抗流感病毒FM,的试验结果显示50%小鼠保护率(ED5o)为0.51mg/kg，体内治疗指数高达4500以上证明本品具有强大的抗流感病毒作用。本次公开本品口服给药在小鼠动物体内抗流感病毒FM,的试验结果，由于口服给药后药物受消化道及肝脏首过效应的影响等，因此其治疗指数理应低于滴鼻剂给药的治疗指数，但其在保持临床效果的同时达到使用更方便的目的。6.1.1.2、材料与药物6.1.1.2.1、动物昆明种小鼠，体重1822g,雌雄各半，雌性未孕。6.1.1.2.2、药物受试药繁缕总酚苷干粉，批号050224，由朱耕新先生提供。样品试验动物各给药组剂量为128mg/kg、64mg/kg、32mg/kg和16mg/kg(按体表面积计算)，分别相当于人临床日用量的6倍、3倍、2倍和1倍。阳性对照药双黄连口服液，哈药集团三精药业有限公司产品，规格10ml/支，批号03051841，试验动物给药剂量为9ml/kg(按体表面积计算)，相当于人临床日使用量的9倍。利巴韦林，四川美达康药业有限公司产品，规格100mg/片，批号030212。试验动物给药剂量为106mg/kg(按体表面积计算)，相当于人临床日使用量的9倍。以上药物均在使用前以蒸馏水配制成所需浓度。6.1.1.2.3、病毒流感病毒甲l型鼠肺适宜株(FM,)，引自国家流感中心，由本所病毒研究室传代保存毒株。血凝效价E4:12806.1.1.3、方法与结果6.1.1.3.1、FM,的增毒与保存取9日龄鸡胚尿囊腔接种FM,毒种液，34'C常规培养，48小时收集尿囊液。用微量血凝法收集血凝效价>1:1280的尿囊液，小管分装，置-70C冰箱备用。6.1.1.3.2流感病毒鼠肺适应株毒力的测定(LD5)取普通级昆明种小鼠30只，体重1822g，雌雄各半，雌性未孕。视体重和性别将小鼠分层随机分为5组，每组6只，其中雌雄各3只。在无水乙醚浅麻醉下，用FM,鼠肺适宜株流感病毒液50ul/只滴鼻感染小鼠，各组小鼠感染病毒的稀释度分别为l、10—'、102、l(T、104。小鼠感染病毒后，逐日观察和记录各组动物死亡数，连续观察14天。根据各组动物死亡总数，按Reed-Muench法计算小鼠感染病毒的半数致死量(LDM)。结果见表8.动物死亡百分率计算表表8.动物死亡百分率计算表<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>*分母为感染小鼠总数(包括死、活鼠)A分子为死亡小鼠数从表8可见各稀释度感染小鼠的死亡率分别为100%、62.5%、22.22%、0%和0%。，能使半数感染小鼠死亡的稀释度应在1(T10"之间。据此计算LDw,值。第一步按公式距离比例=>50%死亡百分率-50/>50%死亡百分率画<50%死亡百分率，将表中与LD5(,值上(55%)和下(22%)相邻的数代入公式，求得距离比例数=62.5-50/62.5-22.22=0.31第二步将>50%动物死亡的病毒稀释度之对数，加上距离比例数，再乘以稀释系数的对数，即求得LDJ直。>50%动物死亡的病毒稀释度之对数为LDS=1+0.31X1(稀释系数10的对数)=1.31根据计算结果，求得小鼠滴鼻吸入感染FM,的LD^为10":,'。6.1.1.3.3、繁缕总酚苷对流感病毒感染所致小鼠病毒性肺炎的治疗作用取普通级昆明种小鼠80只，体重1822g，雌雄各半。按表l所不剂量，视动物性别和体重将小鼠分层随机分为8组，每组10只，雌雄各半。在无水乙醚浅麻醉下，以5倍LDM同批鸡胚传代毒种流感病毒液50ul滴鼻吸入感染7组小鼠，正常对照组滴入等量生理盐水溶液。各给药组动物于病毒感染的同时给予灌胃给药，每日2次，每次0.4ml/20g体重，连续给药6天，正常对照组及病毒对照组均灌胃给予等容积蒸馏水。自感染病毒之日起，逐日观察和记录各实验组死亡动物数，连续观察14天。以14天内每组动物死亡的总数按下列公式计算死亡率(生存率)、死亡保护率和平均存活时间。死亡率(生存率)=存活(死亡)数/实验动物数X100。/。；死亡保护率(％)=(对照组死亡率一实验组死亡率)X100%;平均生存日=同组内每只动物生存日数相加/实验动物数；延长生命率(％)=(实验组平均存活天数一对照组平均存活天数)/对照组平均存活天数xiooy。。x2、t检验比较组间差异。结果见表9.、表io.:表9.本品溶液对流感病毒感染小鼠死亡保护率的影响次数组另lj剂量mg/kgXd死亡数/动物数死亡率%死亡保护率％正常对照组—0/12—一病毒对照组一12/12100一双黄连口服液9mlX610/1283.3316.67利巴韦林片106X68/1266.6733.33繁缕总酚苷液12.5X66/1250.0050.0025.0X64/1233.3366.6750.0X63/1225.0075.00100X62/1216.6783.33if.常对照组—0/12——病毒对照组一12/12100—双黄连口服液9mlX68/1266.6733.33利巴韦林片106X67/1258.3341.67繁缕总酚苷液16X67/1258.3341.6732X65/1241.6758.3364X63/1225.0075.00128X62/1216.6783.33表10.繁缕总酚苷溶液对流感病毒感染小鼠平均生存时间的影响次to。，，，存活数/存活率平均生存日延长生命組另U呢/kg数动物只数％X±S率％正常对照组—12/12——>14,0±0—病毒对照组一0/12一5.08±1.16"一双黄连口服液9mix62/1216.678.5±3.03**67.32利巴韦林片106X64/1233.3310.17±3.IO林100,20繁缕总酚苷液16X66/1250.009.08±3.15**78.7432X68/1266.679.88±3.25**100.2364X69/1275.0010.39±3.15林100.43128X610/1283.3310.8肚3.25**100.65正常对照组一10/12一>14.0±0—病毒对照组—0/12一5.2±0.92"双黄连口服液9mlX62/1216.678.6±3.34*65.38禾ll巴韦林片106X65/1241.6710.2±2.94**96.15繁缕总酚苷液16X65/1241.678.91±2.77*96.1532X67/1258.339.56±3.35**100.1564X69/1275.0010.39±3.15**100.43128X610/1283.3310.88±3.28**跳65与正常组相比"P〈0.01;与病毒组相比*P<0.05,**P<0.01表9与表10结果显示病毒对照组小鼠基本在病毒感染后5天左右全部死亡，而给予不同剂量的繁缕总酚苷溶液后，均可降低感染小鼠的死亡率，使感染动物平均生存日明显延长(以128mg/kg、64mg/kg剂量组极为显著)。其作用在一定范围内，可随着剂量的加大而增强。与病毒对照组相比，有显著统计学意义。繁缕总酚苷溶液64mg/kg、128rag/kg剂量组降低感染小鼠的死亡率和延长其平均生存时间的作用与利巴韦林片相近，明显优于双黄连口服液组。6.1.1.3.4、繁缕总酚苷对流感病毒感染致小鼠病毒性肺炎模型肺病变影响取健康普通级昆明种小鼠80只，体重1822g，雌雄各半。按表ll所示剂量，视动物性别和体重将小鼠分存随机分为8组，每组10只，雌雄各半。在无水乙醚浅麻醉下，以5倍LD;,,同批鸡胚传代毒种流感病毒液50ul滴鼻吸入感染7纟fj/j、t，正常对照组滴鼻吸入等量生理盐水。各给药组动物在病毒感染的同时分别给予灌胃给药，每天2次，给药容积每次0.4ral/20g体重，连续给药4天，正常对照组和病毒对照组均灌胃给予等容积生理盐水。感染动物隔离喂养，自由摄食，饮水。于末次给药后1小时，将动物称体重后固定，剪开胸部皮肤，切断左腋下动脉放血处死动物。解剖打开小鼠胸腔，取出全肺，剔除气管和肺门等淋巴组织后，用滤纸吸干肺脏表面液体，置天平称重，按肺重除以体重逐个计算肺指数和各组肺指数抑制率。用t检验比较组间差异性。留取肺组织标本，进行组织形态学观察和摄片。结果见表ll.。表11繁缕总酚苷溶液对流感病毒感染小鼠致病毒性肺炎肺指数影响/nm剂量动物肺指数肺指数D&组另lP值'__mg/kgXd数只g/100g抑制率%_正常对照组100.93±0.13病毒对照组101.60±0.26"P<0.01繁缕总酚苷溶液16X4101.28±0.20*19.89P<0.0532X4101.22±0.23*23.25P<0.0164X4101.16±0.14**25.83P<0,01128X4101.08±0.19**30.25P<0.01双黄连口服液9mlX4101.32±0.21*17.5P<0.05利巴韦林片106X4101.19±0.10**25.63P<0.01"与正常组比较；**与病毒组比较由表ll结果可见与正常组相比，病毒对照组小鼠的肺指数明显增加，统计学意义极显著。给予不同剂量的繁缕总酚苷溶液后，感染动物肺湿重指数均明显低于病毒对照组(P<0.010.05)，其治疗效果可随着药物剂量的增加，肺指数值也相应的减少，呈现较好的相关关系。繁缕总酚苷溶液128mg/kg、64mg、32mg/kg剂量组动物治疗效果优于利巴韦林片，显著优于双黄连口服液组。6.1.2、口服给药使用于流感病人的临床实际效果取1.32g的本品用1号胶囊填装成胶囊剂6粒，每次口服一粒，每天3次，可在1天半内治愈一例流感病人，最快的只需半天即可治愈。二年来临床自用治疗病毒流感有100多例次，无论是在流感病程的第几天，一旦使用了本品即口丁在12两天左右控制临床症状进而达到治愈流感的目的，并可正常工作和学习丫；包括服药后十多分钟至三十分钟内即可完全消除头痛，继而通鼻、消除清鼻涕、眼泪及浑身痛等症状，在24小时至36小时内退烧。越是发病早期使用效果越好，最快的病例曾在发病当晚(头疼、浑身痛、39.5°C、流眼泪、鼻涕等)临睡前用一次药，仅1粒，第二天早上即正常工作学习了。本品预防及治疗病毒流感可达特效药程度。6.2、口服和静脉注射给药的动物体内试验及其结果还表明本品可明显降低动物体内乙肝病毒DNA，对肝炎病毒也有明显抑制效果6.2.1、材料和方法6.2.1.1、药物繁缕总酚苷由朱耕新先生提供的棕色药粉，牛理盐水配制。阳性对照药物拉米夫定由葛兰素康威制药公司产品，批号B008923用生理盐水配制。6.2.L2、病毒鸭乙肝炎病毒鸭乙肝病毒DNA(DHBV-DNA)强阳性血清，-70"€保存。6.2.1.3、动物1日龄北京鸭，购自北京前进种鸭动物词养场。6.2.1.4、i式剂:a"P-dCTP购自北京福瑞生物技术工程公司，缺口翻译药盒购自普洛麦格公司(Pr匿gaCo.);S印hadexG-50，Fico11PVP购自瑞典Pharmacia公司;SDS西德Merck公司产品；鱼精DNA、牛血清白蛋白为中国科学院生物物理所产；硝酸纤维素膜0.45WnAmersham产。6.2.2、实验方法6.2.2.1、鸭乙型肝炎病毒感染1日龄北京鸭经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA阳性鸭血清，每只0.2ml，在感染后7天取血，分离血清，-70匸保存待检。6.2.2.2、药物治疗试验DHBV感染雏鸭7天后随机分组进行药物治疗试验，每组6只，给药组分2个剂量组，口服给药分别为250mg/kg和500mg/kg,腹腔注射给药组分别为25mg/kg和50mg/kg组，l天2次，给药10天。设病毒对照组(DHBV)，以生理盐水代替药物。阳性药用拉米夫定，口服给药50mg/kg，l天2次，给药10天。在感染后第7天即用药前(TO)，用药第5天(T5)，用药第10天(T10)和停药后第3天(P3)，自鸭腿胫静脉取血，分离血清，于-7(TC保存待检。6.2.2.3、检测方法取上述待检鸭血清，每批同时点膜，测定鸭血清中DHBV-DNA水平的动态，按缺口翻译药盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标检测仪测定0D值(滤光片为490nm)，计算血清DHBV-DNA密度，以杂交斑点0D值作为标本DHBV-DNA水平值。6.2.2.4、药效计算6.2.2.4.1、计算每组鸭不同时间血清DNA0D值的平均值(X士SD)，并将每组鸭用药后不同时间(T5、T10)和停药后第3天(P3)血清,-DNA水平与问组给药前(TO)0D值比较，采用配对t检验，计tl、Pl值。分析差异的显著性，判断药物对病毒感染的抑制效果。6.2.2.4.2、计算每组鸭用药后不同时间(T5、T10)和停药后第3天(P3)血清DHBV-DNA抑制率，并作图，比较各组鸭血清DHBV-DNA抑制率的动态。给药前(TO)OD值一给药后(T5、TIO、P3)0D值DNA抑制先-X薩o给药前(TO)OD值6.2.2.4.3、将给药治疗组不同时间DHBV-DNA抑制率分别与病毒对照组相同时间D朋V-DNA抑制率比较，采用成组t检验，作统计学处理，计算t2、P2值，分析差异的显著性，判断药效。6.2.2.5、结果6.2.2.5.1、1日龄北京鸦感染D朋V后，血清DHBV-DNA动态DHBV-DNA感染鸭口服生理盐水后DHBV-DNA斑点杂交结果见表1。实验感染鸭36只血清DHBV-DNA全部阳性。病毒对照组6只雏鸭感染后第7天血清D朋V-DNA全部阳性，实验全程21天内血清DHBV-DNA水平感染后基本平稳。6.2.2.5.2、阳性药拉米夫定对DHBV-DNA的影响DHBV感染鸭口服阳性药拉米夫定50mg/kg，1天2次，给药10天。结果见表l、表2。配对分析，给药第10天(T10)与给药前(TO)的OD值比较，下降有非常显著性(PO.Ol)，给药后对血清DHBV-DNA抑制率与病毒对照组，成组分析给药第10天(TIO)有非常显著性差异(P<0.01)。停药后3天(P3)无统计学意义，有反跳现象。6.2.2.5.3、本品在DHBV感染鸭体内对鸭血清DHBV-DNA的影响的实验结果实验分口服给药和腹腔注射给药两种，分别选用两个剂量组，口服给药分别为腦mg/kg，200mg/kg，1天两次，给药10天(BidX10);腹腔注射给药为15mg/kg，30mg/kg，l天2次，给药10天(BidX10)观察药物对鸭的毒性和鸭血清乙肝病毒DNA(DHBV-DNA)d的影响。6.2.2.5.3.1、口服给药实验表明，本品大剂量组口服给药200mg/kg，l天两次，无毒性，按配对统计，200mg/kg组给药后第5天、第10天，治疗组鸭血清DHBV-DNA有非常显著下降(PO.Ol)。按成组统计与各自对照组比较，给药后第5天，10天和停药后3天，治疗组鸭血清DHBV-DNA均有非常显著下降(PO.Ol,O.Ol)。6.2.2.5.3.2、腹腔注射给药，大剂量组30mg/kg组，1天两次给药10天，按配对统计给药后第5天，治疗组鸭血清DHBV-DNA即有非常显著下降(P<0.01)。成组统计与各自对照组比较有非常显著下降(P〈0.01，0.01)。15mg/kg组，按配对统计，停药后3天，治疗组鸭血清DHBV-DNA有显著下降(P<0.05)。按成组统计与各自对照组比较，给药后第5天和停药后3天，治疗组鸭血清DHBV-DNA有显著下降(P<0.05)。口服给药和腹腔注射给药均未见反跳现象是其重要特点。所以，从繁缕属植物中用科学方法提取的繁缕总酚苷组合物可作为安全和有效的抗肝炎病毒药物应用。6.3、本品的有益效果还可由以下4个报告和临床应用结果给出6.3.1、报告1.细胞试验证明本品能有效抑制艾滋病毒-1(HIV-1)结果6.3.1.1、抗病毒活性体外试验表明本品具有抗艾滋病毒(HIV-1)的作用，结果如下药物浓度(mg/ml)0.200.100.050.025抑制率(％)98.58%64.3400%23.90%12.11%经统计计算IC5。=0.133mg/ml阳性对照药AZT浓度在lg/ml时，抑制率为100%。6.3.1.2、细胞毒性试验结果如下药物浓度(mg/ml)52.51.250.625细胞死亡率(°/。)7240.0414.8806.3.1.3、经统计计算TC,3.204mg/ml，故安全指数(TC5Q/IC5。)为24.09。6.3.2、报告2.本品抗多种呼吸道病毒的细胞试验6.3.2.1、结论本品lmg/ml浓度用三种不同的方法处理细胞及鸡胚取尿液测血凝效价的结果，本品用对病毒感染所致细胞病变的保护效应如下1.对腺病毒-3型，用三种方法均表现有很强的抑毒及杀毒效应。2.对鼻病毒用方法l，HSV-l用方法2和3都表现有强的抑毒效应，感染力降低2个滴度。3.对腺病毒-7型和对腺病毒h型，用方法1和2能推迟细胞病变的出现，对ECHOll用第一种方法能推迟病变的出现。4.对流感病毒能降低8倍192倍(第一种方法能完全抑制病毒增殖，第二种方法能降低8倍)，有很强的抑毒效应。5.对副流感病毒用二种方法同样都可降低16倍，有抑毒效应。6.3.2.2、从以上结果分析本品对属RNA类的流感病毒A3、副流感病毒仙台株、鼻病毒、埃柯病毒-H、疱疹病毒和属于DNA类的腺病毒3型、7型和11型等多种不同的呼吸道病毒，用不同的处理方法表现有不同程度的抑毒和杀毒效应。用第一种方法都有效，对腺病毒-3型和流感病毒(A3)最好。6.3.3、报告3.细胞试验证明本品能有效抑制腺病毒3型的结果。6.3.3.1、药物"繁缕总酚苷"为中药提取物，朱耕新先生提供。6.3.3.2、病毒腺病毒3型，由本室72年分离鉴定株(C10株)6.3.3.3、细胞人胚肺细胞，由本室自建株6.3.3.4、结果本品对细胞无毒界限选择的结果见表12.:表12.本品对细胞无毒界限选择(药物浓度mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>结果本品以lmg/ml为无毒浓度6.3.3.5、细胞试验中本品对腺病毒3型的抑毒效果见表13.:表13.本品对腺病毒3型的抑毒效果<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>其方法为病毒以100TCIDsc为感染量，先感染细胞单层，3小时后加药。6.3.3.4.3、结论"繁缕总酚苷"以lmg/ml浓度于体外细胞培养上有强烈抑制腺病毒3型(C10株)的作用。6.3.4、报告4.细胞试验证明本品能有效抑制水泡口炎病毒。6.3.4.1、实验方法人胚肺二倍体细胞单层培养板，加入不同稀释度的繁缕总酚苷药物，37°C24小时后弃掉药物，加入100TCDW0.1ml病毒(VSV)攻击，设细胞对照及病毒对照，24小时后观察细胞病变，6.3.4.2、实验结果本品抑制水泡口炎病毒的实验结果见下表14.:表14.繁缕总酚苷抑制水泡口炎病毒的实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>6.3.4.3、结果药物繁缕总酚苷3号样品和4号样品均可明显抑制水泡口炎病毒(VSV)，3号样品可稀释到1:640仍能保护50%的细胞不发生病变，4号样品由1:20稀释到1:1280同样具有保护50%的细胞不发生病变的能力；样品由1:20开始稀释对HL细胞毒性不大。6.3.5、本品口服给药临床治疗流感的实际疗效6.3.5.1、方法将本品制成每片含本品50mg的"含片"，每小时含化1片，每天给药10次，两天共给药lg。6.3.5.2、结果"含片"治疗12例流感病人的结果见表15.:表15.临床给本品"含片"50mg/次治疗12例流感病人的实例<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>6.3.5.3、结论本品临床给以"含片"治疗12例流感病人，均可在两天内治愈，在最快的仅仅只需要半天即可退烧并消除流感症状，从而可以上学或上班，本品至少可縮短病毒流感疗程5天以上，因此，具有非常好的预防及治疗流感的功能，其疗效显著优于英、美的Zanamivir和Oseltamivir等流感病毒神经氨酸酶抑制剂，可达特效药程度。6.3.6、本品临床治疗单纯疱疹和带状疱疹的实际疗效6.3.6.1、方法患单纯疱疹和带状疱疹的病人用本品水剂不断涂抹于患处。6.3.6.2、结果见表16.表16.临床给药0.5g/25ml的胶桨剂治疗ll例单纯疱疹和带状疱疹的实例<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>6.3.6.2、结论从表16.可见临床使用本品治疗单纯疱疹和带状疱疹的病人，其用药量在0.2g0.5g之间、并可在1至3天内止痛、消疱、结痂从而达到痊愈，达到很满意的疗效。其中药物的浓度及疱疹面积大小与疗效有密切关系。6.3.7、本品临床治疗小儿腮腺炎的实施结果6.3.7.1、方法取本品制成每片含本品50mg的"含片"，每小时含化1片,每天给药3次，两天共给药0.3g。6.3.7.2、临床治疗小儿腮腺炎的实施结果见表17.:表17.临床给含片50mg/片治疗12例腮腺炎儿童的实例<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>6.3.7.3、结论本品临床治疗小儿腮腺炎的实施结果可以看出腮腺炎病儿临床使用繁缕总酚苷的含片50mgX3片沃后、仅仅只需2天左右即可痊愈，可获特效药的疗效。6.3.8、本品临床治疗病毒性性病尖锐湿疣的实际疗效6.3.8.1、方法本品临床治疗病毒性性病尖锐湿疣时，采用口服和外用相结合的方法，即临床给予0.25g/cn^的膜剂并给予含量为O.lg的片剂口服进行治疗，取得更好的效果。6.3.8.2、疗效见表18.:表18.临床给予膜剂和片剂治疗7例尖锐湿疣病人的实例<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>6.3.8.3、结论本品临床治疗病毒性性病"尖锐湿疣"同样取得令人更为满意的效果。6.3.9、本品"消毒剂"预防流感、腮腺炎等的实例。6.3.9.1、方法使用本品的"消毒剂"如气雾剂喷雾在口腔中喷雾、滴鼻液在鼻腔中滴鼻、口服口香糖或液体口香糖等。.6.3.9.2、结果本品"消毒剂"预防流感和腮腺炎效果见表19.:表19.本品"消毒剂"预防流感、腮腺炎等的实例<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>6.3.9.3、结论用本品制成的气雾剂、滴鼻液、口香糖、液体口香糖等应用为预防呼吸道病毒的"消毒剂"取得令人更满意的效果。权利要求1、一种广谱抗病毒药物，其特征是从植物繁缕或从下列一种繁缕属植物提取到的分子量在10,000以下但主要为分子量在4,000以下、分子结构中具巯基或硫醚或硫醇及烷或/和烯等基团的不饱和多糖或不饱和多聚醇类成份与酚性化合物，尤其是其与黄酮类化合物形成棕色的总酚苷类成份的组合物。2、权利要求1所述"下列一种繁缕属植物"包括以下78种包括雀舌草、褐瓣雀舌草、安徽繁缕、钝萼繁缕、细尖繁缕、鹅肠草、沙生繁缕、阿里山繁缕、薄叶阿里山繁缕、北繁缕、短瓣繁缕、长瓣繁缕、东北繁缕、华繁缕、台湾繁缕、厚叶繁缕、皱叶繁缕、大卫繁缕、偃卧繁缕、针状偃卧繁缕、西南繁缕、石竹叶繁缕、二歧聚伞花繁缕、双歧繁缕、窄叶双歧繁缕、线叶双歧繁缕、铺散繁缕、翻白繁缕、泽繁缕、裸蕊异花繁缕、凹脉繁缕、杜氏繁缕、线茎繁缕、线柄繁缕、多花繁缕、禾叶繁缕、疏柔毛禾叶繁缕、变绿禾叶繁缕、江孜繁缕、霞草繁缕、湖北繁缕、兴安繁缕、内曲繁缕、薄叶繁缕、东繁缕、小花繁缕、柔繁缕、鹅肠繁缕、新沼生繁缕、八蕊繁缕、红莓繁缕、沼生繁缕、展叶繁缕、柄花繁缕、柄叶繁缕、长毛繁缕、假石生繁缕、小繁缕、燧瓣繁缕、网脉繁缕、岩繁缕、石生繁缕、抱茎石生繁缕、准葛尔繁缕、苏氏繁缕、星毛繁缕、园萼繁缕、拟伞花繁缕、小茸毛繁缕、三型繁缕、土耳其斯坦繁缕、湿地繁缕、伞花繁缕、绿花繁缕、巫山繁缕、五台繁缕、云南繁缕及牛繁缕属植物牛繁缕。3、权利要求l所述棕色的总酚苷类成份可以是碳苷类，也可以是氧苷类，但以碳苷类优先。4、权利要求1所述组合物经薄层层析后在254nm或/和365nm紫外光下显现深棕红色、棕褐色、棕色、棕黄色及黄色荧光斑点等，特别是縮合后可出现一种呈"棕黑色"紫外荧光斑点，在365nm紫外光下这些荧光斑点显得更清楚。5、权利要求1所述组合物的制备方法1，其步骤包括将植物繁缕或其它-种繁缕属植物的新鲜全草洗净泥沙、粉碎后提取水溶液，将此水溶液经沉淀、离心或过滤后得到液体A;将液体A通过预先已处理好的大孔树脂柱以吸附所述组合物的成份，用水洗净，再将大孔树脂柱加温后用热蒸馏水洗柱并收集流出的深褐色蒸馏水液，再用加温后浓度在60%以下的低级醇从树脂柱上洗脱，并收集洗脱得到的棕红色或暗棕红色溶液。将此棕红色或暗棕红色溶液回收乙醇后与收集的深褐色水液合并，再经浓縮、干燥即得所述组合物粗品。将所述组合物粗品用水溶解后经离心去除沉淀物等方法精制后浓縮干燥即成本品。本品的性状及性质为一种具有中药干浸膏常见的棕色的粉状物或多孔玻璃状物，有通常中药干浸膏气味，其性质稳定、易溶于水、略有苦味。组合物需经0.22陏滤膜过滤或/和经钴60照射以除菌、灭菌，制成市售产品可作为一种广谱抗病毒药物应用。其中柱温为3(TC5(TC，低级醇包括60%以下的甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇。优选40。C5(TC的45。/()乙醇50。/。乙醇。6、权利要求1所述组合物的制备方法2，其步骤包括将植物繁缕或其它一种繁缕属植物的新鲜干全草洗净、粉碎后提取水溶液，将此水溶液经沉淀、离心或过滤后得到液体A;将此液体A经阴离子交换剂柱，使所述组合物成份吸附在柱上，用氛化钠溶液将所述组合物成份从加温后的柱上洗脱下来，再经脱盐处理、浓縮和干燥后即得所述组合物粗品。将所述组合物粗品用水溶解后经离心去除沉淀物等方法精制浓縮干燥成本品。本品性状及性质为一种具有中药干浸膏常见棕色的粉状或多孔玻璃状物，具有通常中药干浸膏气味，其性质稳定、易溶于水，略有苦味。组合物需经0.22to滤膜过滤或/和经钴60照射以除菌、灭菌，制成市售产品可作为一种广谱抗病毒药物应用。其中柱温为30°C50°C，优选优选40。C5(TC。7、权利要求1所述组合物在制备治疗艾滋病病毒药物中的应用。8、权利要求1所述组合物在制备治疗流感病毒，包括禽流感病毒的药物中的应用。9、权利要求1所述组合物在制备治疗疱疹病毒药物中的应用。10、权利要求1所述组合物在制备治疗肝炎病毒药物中的应用。11、权利要求1所述组合物在制备治疗腮腺炎病毒药物中的应用。12、权利要求1所述组合物在制备治疗尖锐湿疣病药物中的应用。13、权利要求1所述组合物在制备抗病毒的消毒剂中的应用。14、权利要求1所述组合物在制备抗病毒的保健品中的应用。全文摘要本发明涉及一种广谱抗病毒天然药物。目前全世界都缺乏临床高效、安全的广谱抗病毒药物。我们从植物繁缕或从其它一种繁缕属植物中用两种树脂吸附的方法提取的主要为分子量4,000以下、分子结构中具巯基或硫醚或硫醇及烯或/和烷等基团的不饱和多糖或不饱和多聚醇类成分与酚性化合物，尤其是其与黄酮类化合物形成棕色总酚苷类成分的组合物，可作为治疗艾滋病毒、肝炎病毒、包括高致病性禽流感病毒在内的流感病毒、副流感病毒、腺病毒等呼吸道病毒及尖锐湿疣病毒、肠病毒、腮腺炎病毒、单纯性疱疹病毒、带状疱疹病毒和水痘—带状疱疹病毒等病毒病的药物应用且未见毒性，并可制成10种药物剂型及保健品等。文档编号A61P31/00GK101108201SQ20061003772公开日2008年1月23日申请日期2006年1月11日优先权日2006年1月11日发明者毅曾,朱耕新,李泽琳,钱裕盛申请人:朱耕新