专利名称：：新的疫苗制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及水包油乳剂、所述乳剂作为佐剂的用途、和包括所述乳剂的药物组合物、免疫组合物、或疫苗组合物。
背景技术：
：佐剂在疫苗中的应用是公知的。佐剂是一种当与疫苗免疫原组合时能增加对疫苗免疫原的免疫应答的化合物。在促进蛋白的免疫原性的策略中，糖蛋白或肽是那些乳化疫苗免疫原的策略(Nossal1999，In:尸w/7^9边eiU"/咖""o/0^7.Paul(Ed.)，Lippincott-RavenPublishers,Philadelphia,Pa.;VogelandPowell,1995，In:Kscci/7eTheSubunitandAdjuvantApproach.PowellandNewman(Eds.)，PlenumPress,NY，N.Y.p.141)。由于佐剂在提高疫苗免疫原的免疫原性方面起到的重要作用，因此佐剂在疫苗制剂中的应用实际上是非常普遍的(Nossal，1999，^//ra;VogelandPowell,1995，同上；在此通过引用将其教导并入本申请)。本领域已知的常用佐剂在性质上是多样化的。例如，它们可以是由不溶于水的无机盐、脂质体、微团或乳剂(即弗氏佐剂)组成的。在上面所提及的VogelandPowell,1995中可以找到其他的佐剂。尽管不存在单一的佐剂作用机制，但是一个基本特征是与单用疫苗免疫原所诱导的应答相比它们能显著增加对疫苗免疫原的免疫应答的能力(Nossal,1999,同上；VogelandPowell,1995，同上)。在这个方面，一些佐剂能更有效地增强体液免疫应答；另一些佐剂能更有效地增加细胞介导的免疫应答(VogelandPowell,1995，同上)；以及还有另一组佐剂能增加抗疫苗抗原的体液和细胞介导的免疫应答两者(VogelandPowell,1995，同上)0免疫制剂所用的乳剂一般包括油、水溶液和表面活性剂的混合物。一些乳剂掺合了亲脂性表面活性剂如Span80@和亲水性表面活性剂如Tween80。这些乳剂也可以包含已知具有离子表面活性剂性能的化合物如卵磷脂或皂苷。但是，当乳剂被用作疫苗佐剂时，会观察到稳定性问题，特别是在储存或转运期间。免疫原的溶液或悬浮液中所存在的脂肪酶或酯酶的酶活性可以水解乳剂的表面活性剂，并且会导致佐剂缺乏稳定性。脂肪酶或酯酶例如可以来自用于生长病毒的细胞培养物或者可以来自细菌，当这些组合物包含浓缩的免疫原(特别是未纯化的浓缩免疫原)时，这特别如此。用于灭活(杀灭)疫苗的佐剂通常是这种情况。这个问题对于多价疫苗组合物甚至是更明显的，因为免疫原在相同体积的稀释剂中更为浓缩。与佐剂应用相关的另一个问题是不良事件例如毒性或注射部位的局部炎症的危险。例如，注射后可以造成局部炎症应答和/或肉芽肿。为了限制这种不良反应，可以减少乳剂中的表面活性剂和其他组分；但是，这种减少可能会降低疫苗组合物的稳定性。因此，需要新的佐剂和包括这种佐剂的具有增加的安全性和稳定性的疫苗组合物。发明概述本发明的第一个实施方式提供了新的水包油(o/w)乳剂，其在细菌、寄生虫或病毒悬浮液存在下具有增加了的稳定性，特别是那些被浓缩的和未纯化的或弱纯化的悬浮液。本发明的另一个实施方式提供了稳定的、安全的和容易施用的(特别是可注射的)o/w乳剂，其作用为递送包括至少一种活性成分的药物组合物的载体，所述活性成分具体地可以是免疫原。本发明的另一个实施方式提供了作用为增加免疫原诱导的免疫应答的佐剂的稳定的、安全的、和可注射的o/w乳剂。具体地，本发明提供了新的佐剂，当其用于含有免疫原的疫苗组合物时，其能增加接种者对免疫原的细胞免疫应答、体液免疫应答或有利地增加这两种免疫应答。本发明的另一个实施方式提供了包括o/w乳剂的稳定的、安全的、和免疫原性的组合物或疫苗。本发明的另一个实施方式提供了利用本发明的佐剂制备疫苗组合物的方法；提供了因此所获得的疫苗组合物；以及使用所述疫苗组合物的方法。本发明的仍另一个实施方式提供了试剂盒，其包括第一个瓶中的免疫原或其他药物产品和第二个瓶中的根据本发明制备的佐剂，将佐剂设计成在使用之前与免疫原或其他疫苗产品混合。在一个实施方式中，本发明提供了水包油(0/W)乳剂，其可以包括(1)含有免疫原的水溶液；(2)矿物油；(3)非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇；(4)选自乙氧基化脂肪醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物或其任何组合的非离子亲水性表面活性剂。在另一个实施方式中，本发明提供了水包油(0/W)乳剂，其可以包括(1)含有免疫原的水溶液；(2)选自乙氧基化脂肪醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物或其任何组合的非离子亲脂性表面活性剂；(3)矿物油；(4)非离子亲水性乙氧基化脂肪醇。本发明制备的乳剂基于至少两种选自两个不同的表面活性剂组(亲脂性和亲水性表面活性剂)的成员的表面活性剂的组合，可以使用属于每组中的一种或多种表面活性剂。仍在另一个有利的实施方式中，本发明提供了包括新乳剂的疫苗组合物，其可以包含至少一种适用于引起接种者的免疫应答的免疫原。本发明还提供了这些组合物，其中乳剂作为增加免疫原所诱导的免疫应答的佐剂，具体地是增加细胞应答、体液应答或有利地增加两种应答。在一个有利的实施方式中，抗原或免疫原是或源自支原体(有利的是猪肺炎支原体)、猪环病毒(有利的是2型猪环病毒)或螺杆菌(有利地是化7/c幽"erce油或幽门螺杆菌)。在另一个有利的实施方式中，本发明提供了用于制备疫苗组合物的方法，其中免疫原(特别是低压冻干形式或水溶液中的免疫原)与本发明的佐剂混合在一起。免疫原可以选自由灭活病原体、减毒病原体、亚单位抗原、包括质粒的重组表达载体等组成的组。病原体的来源可以是细菌、病毒、原虫、寄生虫或真菌，或者免疫原可以是类毒素。在另一个有利的实施方式中，本发明提供了用于在接种者中诱导抗病原体的免疫应答的方法，包括向接种者施用本发明的疫苗组合物。在另一个有利的实施方式中，本发明提供了包括至少两个瓶的试剂盒，第一个瓶中是免疫原，特别是低压冻干形式或水性介质溶液中的免疫原，以及第二个瓶中是本发明的佐剂或乳剂。要注意，在本发明的阐述以及特别是在权利要求书中，术语例如"包括"、"包含"、"含有"等可具有美国专利法中归于这些术语的含义，例如它们可以表示"包含"、"包括，，、"含有，，等；术语例如"基本上由…组成"具有美国专利法归于其的含义，例如它们许可没有被明确叙述的元素，但是排除在现有技术中可找到的或者能影响本发明的基本的或新的特征的元素。通过下面的详细描述，这些和其他的实施方式得到了公开或者变得显而易见并且包含在其中。详细描述为了便利，在此收集了在本申请的说明书、实施例和附录的段落及权利要求书中所采用的某些术语。术语"动物"在此包括所有脊推动物包括人。它也包括所有发育阶段包括胚胎期和胎儿期的个体动物。具体地，术语"脊推动物"包括但不限于人、犬科动物(例如狗)、猫科动物(例如猫)、马科动物(例如马)、牛族动物(例如牛)、猪族动物(例如猪)、羊(例如绵羊)、羊(例如山羊)、兔和禽类。术语"禽类"在此指的是分类学鸟纲的任何物种或亚种，例如但不限于鸡(育种鸡、肉鸡和蛋鸡)、火鸡、鸭、鵝、鹌鹑、雉、鹦鹉、雀、鹰、乌鸦和走鸟包括鸵鸟、鸸鹋和鹤鸵。术语"猪"或"小猪"在此涉及猪起源的动物，而"母猪"指的是具有生殖年龄和能力的雌性。术语"有毒的，，在此涉及保留了其在动物宿主中的感染性能力的分离林。术语"灭活疫苗"在此包括含有不再能复制或生长的感染性生物体或病原体的疫苗组合物。病原体可以是细菌、病毒、原虫、寄生虫或真菌来源。可用多种方法包括高压、化学处理(例如硫柳汞或福尔马林处理)、超声、辐射、热或足以阻止生物体的复制或生长同时保持其免疫原性的任何其他常规方式完成灭活。术语"免疫原性"在此意味着能够在宿主动物体内生成抗免疫原的免疫应答。该免疫应答形成了疫苗引发的对抗特定感染性生物体的保护性免疫的基础。术语"免疫应答"在此指的是在动物体内引发的应答。免疫应答可以指的是细胞免疫(CMI)、体液免疫或者可以包括这两种免疫。本发明也关注限于免疫系统一部分的应答。例如，本发明的疫苗组合物可以特异地诱导增强的Y干扰素应答。术语"抗原"或"免疫原"在此意味着能够诱导在宿主动物体内的特异性免疫应答的物质。抗原可以包括整个生物体(杀死的、减毒的或活的生物体)；生物体的亚基或部分；含有具有免疫原性能的插入物的重组载体；在呈递给宿主动物后能够诱导免疫应答的DM部分或片段；蛋白、糖蛋白、脂蛋白、多肽、肽、抗原表位、半抗原、或其任何组合。或者，免疫原或抗原可以包括毒素或抗毒素。术语"多价"在此意味着疫苗含有一种以上的抗原，无论其来自相同的物种(例如猪肺炎支原体的不同分离抹)、来自不同的物种(例如来自溶血巴斯德氏菌和多杀巴斯德氏菌)；或者疫苗含有来自不同属的抗原的组合(例如疫苗包括来自多杀巴斯德氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、睡眠嗜血杆菌和梭状芽孢杆菌的抗原)。术语"佐剂"在此意味着被添加到疫苗内以增加疫苗免疫原性的物质。对佐剂如何起效的机制还了解的很少。相信一些佐剂是通过緩慢释放抗原来增强免疫应答，而其他佐剂可以通过任何以下机制来介导其作用增加注射部位的细胞浸润、炎症和运输，特别是抗原呈递细胞(APC);通过上调共刺激信号或主要组织相容性复合物(MHC)表达促进APC的活化状态；增强抗原呈递；或诱导细胞因子释放以发挥间接作用。对于给定疫苗免疫原最合适的佐剂将在很大程度上取决于保护性免疫所需的免疫应答的类型。佐剂选择可能有几分经验性。已知的疫苗佐剂包括但不限于油和水乳剂(例如，完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂)，具体的是水包油乳剂、油包水佐剂、水包油包水乳剂。它们还包括例如皂苷、氢氧化铝、硫酸葡聚糖、卡波姆、海藻酸钠、"AVRIDINE"(N，N-双十八烷基-N、N'-双(2-羟乙基)-丙二胺)、石蜡油、胞壁酰二肽、阳离子脂质(例如DMRIE、DOPE及其组合)等。术语"可药用载体"和"可药用介质"在此可以互换使用，其指的是用于包含疫苗免疫原的液体载体，其可以被注射到宿主体内，且没有显著的不良作用。本领域已知的合适的可药用载体包括但不限于无菌水、盐水、葡萄糖、或緩冲溶液。载体可以包括辅剂，包括但不限于稀释剂、稳定剂(即糖和氨基酸)、防腐剂、湿润剂、乳化剂、pH緩沖剂、粘性增强添加剂、加色剂等。可药用或兽用载体或介质或赋形剂对于本领域技术人员是公知的。例如，可药用或兽用载体或介质或赋形剂可以是0.9%NaCl(例如盐水)溶液或磷酸盐緩冲液。在本文大体描述中讨论了剂量和剂量体积，本领域技术人员通过阅读本文结合本领域知识也可以确定出剂量和剂量体积，而不需要任何过度的试验。术语"疫苗组合物"在此包括可药用载体内的用于诱导宿主体内的免疫应答的至少一种抗原或免疫原。考虑诸如受体动物的年龄、性别、体重、物种和状况、及施用途径等因素，以医学和兽医学领域的技术人员已知的剂量和技术可以施用疫苗组合物。施用途径可以是经皮的、经黏膜施用(例如口、鼻、目艮)或经肠外途径(例如皮内、肌肉内、皮下)。为了给宿主肠外施用产品，可以使用带针头或无针头的注射器。可以单独地施用疫苗组合物，或者疫苗组合物可以和其他的治疗或疗法共施用或依次施用。施用形式可以包括用于肠外、皮下、皮内或肌肉内施用(例如可注射施用)的悬浮液和制剂例如无菌悬浮液或乳剂。疫苗组合物可以作为喷雾剂或者混合于食物和/或水进行施用，或者可以与合适的载体、稀释剂或赋形剂例如无菌水、生理盐水、葡萄糖等混合递送疫苗组合物。组合物可以含有辅助物质例如湿润剂或乳化剂、pH緩冲剂、助剂、胶凝剂或增粘添加剂、防腐剂、芳香剂、色素等，取决于施用途径和所需的制剂。可以查阅标准药学教科书例如"Remington'sPharmaceuticalSciences"(1990)来制备合适的制剂，而不需要过度的试验。本发明的一个实施方式提供了新的水包油(0/W)佐剂或乳剂，其可以包括(1)含有能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原的水溶液；(2)非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇；(3)矿物油；(4)选自乙氧基化脂肪醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物和/或其任何组合的非离子亲水性表面活性剂。本发明的另一个实施方式提供了新的水包油(0/W)佐剂或乳剂，其可以包括(1)含有能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原的水溶液；(2)选自乙氧基化脂肪醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物和/或其任何组合的非离子亲脂性表面活性剂；(3)矿物油；(4)非离子亲水性乙氧基化脂肪醇。根据本发明制备的乳剂是基于至少两种表面活性剂的组合，所述表面活性剂选自两个不同表面活性剂组(亲脂性和亲水性表面活性剂)的成员，使用一种或多种属于每个组的表面活性剂是可能的。亲脂性乙氧基化脂肪醇可以是乙氧基化脂肪醇，其可以包括约43%分子量(w/w)或更少的氧化乙烯(ethyleneoxide)(E0)。亲脂性聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(P0E-P0P嵌段共聚物)是可以包括约35%(w/w)或更少氧化乙烯的共聚物。亲水性乙氧基化脂肪醇可以是乙氧基化脂肪醇，其包括超过约43%(w/w)的氧化乙烯(E0)。亲水性POE-POP嵌段共聚物是包括约55%(w/w)或更多氧化乙烯的共聚物。对于非离子亲水性表面活性剂而言，脂肪醇可以是C9到C22脂肪醇，有利地选自油醇、十六烷醇、硬脂醇、异硬脂醇、十二烷醇及其组合，有利的是油醇，更有利的是具有5到21个E0的油醇。P0E-P0P嵌段共聚物的MW为约3000到约16000。非离子亲水性表面活性剂组包括但不限于乙氧基化脂肪醇Brij③76[Steareth-10]、Brij③56[Ceteth-10]、Brij96/97[Oleth-lO]、Brij98、Brij721[Steareth-21]、Brij58[Ceteth-20]、Brij35[Laureth-23]、Brij78[Steareth-20〗、(Uniqema)VolpoN5、VolpoCS6[Ceteareth-6]、VolpoCS12[Ceteareth-12]、VolpoCS20[Ceteareth-20]、VolpoCS25[Ceteareth-25〗、VolpoCS23[Ceteareth-23](Croda)、BL9-EX[Laureth-9]、BC-7[Ceteth-7]、BT-5[C12-14Pareth-5]、BT-7[C12-14Pareth-7]、BT-9[C12-14Pareth-9]、BT-12[C12-14Pareth-12]、BD-10[C12-15Pareth-10]、B0-7V、BC5.5[Ceteht-6]、BL-21[Laureth-21]、BL-25[Laureth-25]、BC-15TX[Ceteth-15]、BC-23[Ceteth-23]、BC-25TX[Ceteth-25]、B0-15V、B0-50V、BB-20[Beheneth-20](NikkoChemicals)及其组合；P0E-P0P嵌段共聚物LutrolF127[Poloxamer407]、LutrolF68[Poloxamer188]、LutrolF108[Poloxamer338]、LutrolF98[Poloxamer278]、LutrolF87[Poloxamer227]、LutrolF88[Poloxamer228]、LutrolF77[Poloxamer207]、LutrolF38[Poloxamer108](BASF)、TetronicsT1307、TetronicsT1107、TetronicsT908(BASF)、及其组合。对于非离子亲脂性表面活性剂而言，脂肪醇是C9到C22脂肪醇，有利地选自油醇、十六烷醇、硬脂醇、异硬脂醇、十二烷醇及其组合，有利的是油醇，更有利的是具有1到4个E0的乙氧基化油醇。P0E-P0P嵌段共聚物的MW为约1000到约8000。非离子亲脂性表面活性剂组包括但不限于乙氧基化脂肪醇Brij30[Laureth-4]、Brij92/93、Brij72[Steareth-2]、Brij52[Ceteth-2〗(Uniqema)、VolpoL3[C12-13Pareth-3]、VolpoN3、VolpoL4[C12-13Pareth-4](Croda)、BS-4[Steareth-4]、BD-2[C12-15Pareth-2]、BD-4[C12-15Pareth-4]、BT-3[C12-14Pareth-3](NikkoChemicals)及其组合；P0E-P0P嵌段共聚物PluronicL121[Poloxamer401]、PluronicL101[Poloxamer331〗、PluronicL81[Poloxamer221]、PluronicL62[Poloxamer182]、PluronicL43[Poloxamer123]、PluronicP103[Poloxamer333]、PluronicL123[Poloxamer403]、LutrolL63[Poloxamer183]、LutrolP122[Poloxamer402]、LutrolL92[Poloxamer272]、LutrolL72[Poloxamer202]、LutrolL42[Poloxamer122]、LutrolL61[Poloxamer181](BASF)、TetronicsT1301、TetronicsT701、TetronicsT901(BASF)、及其组合。本发明的表面活性剂可以具有来自动物或植物来源的脂肪醇。可以将一种来源改变为另一种，只需对乳剂配方作很小调整。本发明的乳剂可以具有表面活性剂的总浓度(重量/体积)为乳剂的从约0.2%到约6.5%，特别是从约1%到6%，有利的是从约1.5%到约5%,更有利的是从约2%到约3%。这样的乳剂具有低粘度，且容易注射。在有利的实施方式中，本发明提供了水包油(0/W)乳剂，其可以包括(1)含有能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原的水溶液；(2)非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇；(3)矿物油；(4)非离子亲水性乙氧基化脂肪醇，其包括超过约43%且小于71%(w/w)的氧化乙烯。(5)非离子亲水性乙氧基化脂肪醇，其包括约71%或更多(w/w)的氧化乙烯。包括超过约43°/。且少于约71%(w/w)氧化乙烯的乙氧基化脂肪醇有利地是具有5到14个E0的乙氧基化油醇。包括约71。/d或更多(w/w)氧化乙烯的脂肪醇有利地是具有15个或更多EO的乙氧基化油醇。在这个有利的实施方式中，如果用占乳剂的重量/体积(w/v)百分比表示，非离子亲水性乙氧基化脂肪醇的浓度一般是从约1.0%到约5.0%,特别是从约1.5%到约4.5%，更有利的是从约2.0%到约3.5%。非离子高亲水性乙氧基化脂肪醇的浓度一般是从约0.01%到约3.0%，特别是从约0.05%到约2.5%，更有利的是从约O.l阔约2.0%(w/v)。非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇的浓度一般是从约0.1%到约2.5%，特别是从约0.2%到约2.0%，有利的是从约0.2%到约1.5%，更有利的是从约0.2%到约1.2%(w/v)。在有利的实施方式中，本发明提供了水包油(0/W)乳剂，其可以包括(1)含有能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原的水溶液；(2)非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇；(3)矿物油；(4)非离子亲水性乙氧基化脂肪醇；(5)非离子亲水性聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。亲水性乙氧基化脂肪醇有利的是包括超过约43%且少于约71%(w/w)氧化乙烯的脂肪醇，更有利的是具有5到14个EO的乙氧基化油醇。非离子POE-POP嵌段共聚物可以有利地包括70%或更多(w/w)的氧化乙烯。在这个有利的实施方式中，如果用占乳剂的重量/体积(w/v)百分比表示，非离子亲水性乙氧基化脂肪醇的浓度一般是从约1.0%到约5.0%，特别是从约1.5%到约4.5%，更有利的是从约2.0%到约3.5%。非离子POE-POP嵌段共聚物浓度一般是从约0.01%到约2.0%，更特别是从约0.1%到约1.5%(w/v)。非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇的浓度一般是从约0.1%到约2.5%，特别是从约0.2°/。到约2.0%，有利的是从约0.2%到约1.5%，更有利的是从约0.2%到约1.2%(w/v)。本发明的乳剂一般可以具有^251C的相转变温度(PIT)，特别是在从约28n到约65r的范围内，更特别是从约33t:到约60X:。PTI是油包水乳剂变成水包油乳剂或移相(打破乳剂并分离成2相)时的温度。用各种方法例如通过目视外观或通过电导率可以测定出PIT值。乳剂被放置在低于乳剂PIT的温度下，例如约25匸的水浴内。逐步增加温度。观察乳剂的视觉外观变化，并与对照乳剂进行比较，特别是流动性、两相分离、油相迁移到表面所造成的表面外观的变化。观察到这种视觉外观变化时的温度就是乳剂的PIT值。或者，通过放置于乳剂内(接近其表面)的探针所测定的那样，对于生理盐水作为水相，通过电导率数值从约5-15毫西门子/厘米(mS/cm)(水包油乳剂)快速变为数值约OmS/cm(油包水乳剂)，确定PIT。观察到这种转变时的温度就是乳剂的PIT值。本领域一般技术人员不需要过多的试验就能够确定出表面活性剂和油的组合，包括它们各自相应的浓度，以便生成本发明的乳剂，特别是具有在上面定义的范围之内的PIT值的乳剂。本发明的乳剂一般可以含有占乳剂约2%到约50%包含油和表面活性剂的油相(体积/体积(v/v))，特别是从约4%到约40%，有利的是从约8%到约35%,更有利的是从约15%到约30%油相。本说明书中的数值范围被定义成始终都包含范围的限值，除非有其他说明。所用的油可以是矿物油，包括但不限于石蜡油例如异链烷烃油(isoparaffinicoil)和/或环垸基石油、角鲨烷、角鲨烯、姥鲛烷、聚异丁烯、氢化聚异丁烯、聚癸烯、聚异戊二烯、聚异丙烯等。用于本发明的一种有利的矿物油可以包括包含线性或分支碳链的油，所述碳链具有超过15个碳原子，有利的是从15到32个，且没有芳香族化合物。这样的油例如可以是市场上销售的名为MARC0L52或MARC0L82(Esso)或"DRAKE0L6VR，，(Penreco)的那些油。油也可以是油的混合物，其包括任何比例的至少两种选自在此所述的油的油。油的混合物也可以包括至少一种选自上面所述的油的油和至少一种植物油，这种植物油占油相的约0.1%到约33%,有利的是从约5°/。到约15%v/v。这些植物油是富含油酸的不饱和油，其是可生物降解的并且有利地在储存温度(约+4。C)下为液态或者至少使得可以生成在该温度下液态的乳剂。例如植物油可以是花生油、坚果油、向日葵油、红花油、大豆油、月见草油等。一般而言，本发明考虑使用水溶液，其包含合适的可兽用或药用的载体、赋形剂或稀释剂，包括但不限于无菌水、生理盐水、葡萄糖、緩沖液等。栽体、赋形剂或稀释剂还可以包括多元醇、糖精或pH緩冲剂。载体、赋形剂或稀释剂可以例如还包括氨基酸、肽、抗氧化剂、杀菌剂、抑菌化合物。向油和表面活性剂中加入一定量的水溶液，使得获得100%体积的本发明的乳剂。本发明关注乳剂，其包含石蜡油；作为非离子亲脂性表面活性剂的具有2到3个E0的乙氧基化油醇；作为非离子亲水性表面活性剂的具有5到6个EO的乙氧基化油醇；和作为非离子亲水性表面活性剂的具有约70到80。/。EO且分子量约9800到16000的POE-POP嵌段共聚物。具体地，石蜡油的浓度是从约5%到约50%，有利的是从约15%到约30%(v/v);具有2到3个EO的乙氧基化油醇的浓度是从0.1%到1.5%,有利的是从0.1%到1.2%(w/v);具有5到6个EO的乙氧基化油醇的浓度是从1%到5%，有利的是从1°/。到4%(w/v);以及具有约70到80%EO且分子量约9800到16000的POE-POP嵌段共聚物的浓度是从0.01%到2%，有利的是从0,05°/。到1.5%(w/v)。在本发明的第二个实施方式中，乳剂包含石蜡油；作为非离子亲脂性表面活性剂的具有2到3个E0的乙氧基化油醇；作为非离子亲水性表面活性剂的具有10个E0的乙氧基化油醇；和作为非离子亲水性表面活性剂的具有约70到80y。EO且分子量约9800到16000的P0E-P0P嵌段共聚物。具体地，石蜡油的浓度是从约5%到约50%，有利的是从约15%到30%(v/v);具有2到3个E0的乙氧基化油醇的浓度是从0.2%到3%,有利的是从0.5°/。到3%(w/v);具有10个EO的乙氧基化油醇的浓度是从0.2%到3%,有利的是从0.5%到3%(w/v);以及具有约70到80%EO且分子量约9800到16000的POE-POP嵌段共聚物的浓度是从0.01%到2%，有利的是从0.05%到1,5%(w/v)。在本发明的第三个实施方式中，乳剂包含石蜡油；作为非离子亲脂性表面活性剂的具有2到3个E0的乙氧基化油醇和作为非离子亲水性表面活性剂的具有5到6个E0的乙氧基化油醇。具体地，石蜡油的浓度是从约5%到约50%,有利的是从约15%到35%(v/v);具有2到3个EO的乙氧基化油醇的浓度是从0.1%到3%,有利的是从0.5°/。到2%(w/v);具有5到6个EO的乙氧基化油醇的浓度是从1%到5%，有利的是从2.0%到4.5%(w/v)。任选地，可以向乳剂中加入作为辅佐剂的其他化合物，包括但不限于铝；CpG寡核苷酸(ODN)，特别是0DN2006、2007、2059、2216或2135(PontarolloR.A.ef，阮/鹏MO厶7tz7節卿"力，2002，84:43-59;WernetteC.M.efW.，阮/咖歸7./卿w卿"力，2002,84:223-236;MutwiriG.eta/.，/鹏:;加人/層w7，M'2003，91:89-103;KerkmannM.etal.，/./zzm/"力o人，2003，170:4465-4474);多A-多U("VaccineDesignTheSubimitandAdjuvantApproach"，editedbyMichaelF.PowellandMarkJ.Newman,尸力ar则ceu〃ca/》/Wec力/7o7o^r,6:03);溴化二曱基双十八烷基铵(DDA)("VaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach"，editedbyMichaelF.PowellandMarkJ.Newman,尸Asm3ce:/〃cs/^'Wec力/7o/o^F，volume6:157);N，N-双十八烷基-N，，N，-双(2-羟乙基)丙二胺(例如Avridine)(同上，第l48页)；卡波姆；壳聚糖(例如见美国专利系列No.5,980.912)。本发明也提供了制备包含至少一种抗原或免疫原和根据本发明制备的佐剂或乳剂的疫苗组合物或免疫组合物的方法。可以在乳剂形成期间掺入免疫原，或者在另一个实施方式中，可以在之后例如恰在使用之前向乳剂中加入免疫原。初始生成的乳剂可以含有所用的全部量的水溶液。或者，可以是仅仅一部分该水溶液被用于形成乳剂，掺入免疫原时加入剩余量的水溶液。免疫原或抗原可以是低压冻干形式，或者存在为其他合适的固体形式，然后将其与乳剂混合，或者抗原可以在溶液中，特别是水溶液，将该溶液与乳剂混合。根据其溶解度，有利地向油或水溶液中加入表面活性剂。例如，向本发明的油中加入非离子亲脂性表面活性剂，而向水溶液中加入非离子亲水性表面活性剂。通过本发明一般技术人员已知的常规方法可以制备乳剂。例如，在本发明的一个实施方式中，可以在低于乳剂PIT的温度下制备乳剂，特别是在室温例如约30TC下。通过例如用装配有能够生成高剪切力的旋转定片的涡轮进行机械搅拌将水相和油相混合在一起。有利地，搅拌从低旋转速度开始，緩慢增加速度，同时通常将水溶液逐步加入到油中。有利地，将水溶液逐渐加入到油中。油/水溶液比值可以调整以适于获得油包水(W/0)乳剂，例如浓度为约40%到约55%油(v/v)。当停止搅拌时，在室温冷却下乳剂逐渐变成了0/W乳剂(相转化)。在转化之后，如果需要，通过加入水溶液稀释乳剂，以便获得所需的油浓度，制成终乳剂。乳剂可以被储存在约5T。在另一个实施方式中，可以在高于乳剂PIT的温度下制备乳剂。在第一个步骤中，在高于乳剂PIT的温度下将水相和油相混合在一起。有利地，将水溶液逐步地加入到油中。油/水溶液比值可以调整以适于获得油包水(W/0)乳剂，例如浓度为约40%到约55%油(v/v)。通过以低或无剪切力搅拌，例如用静态混合器或船用螺旋浆(推进器)或用涡轮以非常低的旋转速度，可以实现乳化作用。所获得的乳剂是油包水(W/0)乳剂。在第二个步骤中，将乳剂逐步冷却到低于PIT。在这个步骤中，乳剂变成了0/W乳剂(相转化)。在转化之后，如果需要，通过加入水溶液稀释乳剂，以便获得所需的油浓度制成终乳剂。乳剂可以被储存在约5t:。乳剂中油滴的大小可以是从约100nm到约500nm。例如，可以将乳剂用作配制疫苗组合物或药物组合物的佐剂。乳剂也可以被用作溶解干燥产物的溶剂，特别是含有例如减毒微生物或活重组载体的低压冻干产物。在特定实施方式中，用仅仅一部分水溶液生产前乳剂。通过加入活性成分例如药物或免疫原(有利的是免疫原)的悬浮液可以稀释该前乳剂，以便获得最终组合物。或者，可以用水溶液稀释前乳剂，并将其用于溶解干燥的产物例如低压冻干产物。适用于本发明的免疫原或抗原可以选自由灭活病原体、减毒病原体、免疫原性亚单位(例如蛋白、多肽、肽、抗原表位、半抗原)或重组表达栽体包括具有免疫原性插入物的质粒组成的组。在本发明的一个实施方式中，免疫原是灭活的或杀死的微生物。在本发明的另一个实施方式中，疫苗组合物包括选自禽类病原体的免疫原，所述病原体包括但不限于鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)、减蛋综合征病毒(EDS)、或传染性粘液囊病病毒(IBDV)、禽流感病毒等及其组合。或者，疫苗组合物包括选自猫病原体的免疫原，猫病原体诸如但不限于猫疱渗病毒(FHV)、猫杯状病毒(FCV)、猫白血病病毒(FeLV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、狂犬病毒等及其组合。仍在另一个实施方式中，本发明的疫苗组合物包括选自犬病原体的免疫原，犬病原体包括但不限于狂犬病毒、犬疱疹病毒(CHV)、犬细小病毒(CPV)、犬冠状病毒、犬钩端螺旋体、出血黄疽钩端螺旋体、流感伤寒钩端螺旋体、布氏疏螺旋体、支气管败血性博德特氏菌等及其组合。'仍在本发明另一个实施方式中，组合物包括选自马病原体的免疫原，马病原体诸如马疱渗病毒(1型或4型)、马流感病毒、破伤风菌、西尼罗病毒等和/或其组合。仍在本发明另一个实施方式中，组合物包括选自牛病原体的免疫原，例如狂犬病毒、牛轮状病毒、牛副流感病毒3型(bPIV-3)、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)、牛呼吸道合胞病毒(BRSV)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBR)、大肠杆菌、多杀巴斯德氏菌、溶血巴斯德氏菌等及其组合。仍在本发明另一个实施方式中，组合物包括选自猪病原体的免疫原，猪病原体诸如但不限于猪流感病毒(SIV)、2型猪环病毒(PCV-2)、猪生殖呼吸综合征病毒(PRRS)、伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、FMDV、猪霍乱(HCV)、猪肺炎支原体、猪丹毒丹毒丝菌、多杀巴斯德氏菌、支气管败血性博德特氏菌、大肠杆菌、#e//co6a"ercerdo、幽门螺杆菌等及其组合。本发明的有利实施方式提供了包含在可药用载体中的至少一种免疫原和乳剂的疫苗组合物。通过利用合适培养基或宿主细胞系的体外培养方法和本领域一般技术人员已知的常规方法可以生成包括病毒、细菌、真菌等的免疫原。例如，PRRS可以被培养于合适的细胞系例如MA-104细胞系(见美国专利No.5，587，164、5,866,401、5,840,563、6，251，404等)。以类似的方式，用PK-15细胞系可以培养PCV-2(见美国专利No.6,391,314);SIV可以被培养于蛋中(美国专利6.048.537);以及猪肺炎支原体可以被培养于合适的培养基中(美国专利No.5，968，525、5,338,543;RossR.F.Wa丄，J迈./.虹，1984，45:1899-1905)。为了获得灭活的免疫或疫苗组合物，有利地在收获后通过用例如甲醛、j3-丙内酯、乙撑亚胺、二元乙撑亚胺(BEI)、硫柳汞等进行化学处理和/或物理处理(例如热处理或声处理)灭活病原体，并且任选地将其进行净化。灭活方法对于本领域技术人员是公知的。例如，PRRS病毒可以#皮P-丙内酯处理(Plana-Duranetal,，&乙#/cro6/o7.，1997，55:361-370)或被BEI处理(美国专利No.5，587，164)所灭活；使用乙撑亚胺处理或通过p-丙内酯处理可以完成PCV-2病毒的灭活(美国专利No.6，391，314);用去污剂例如Triton或用甲醛处理可以灭活猪流感病毒(美国专利No.6，048，537);用甲酪处理(RossR.F.，同上)、用乙撑亚胺或BEI处理(见W091/18627)、或者用硫柳汞处理(美国专利Nos.5，968，525和5,338,543)可以灭活猪肺炎支原体细菌。用常规的浓缩技术特别是超滤可以浓缩所灭活的病原体，和/或用常规纯化方法可以将其纯化，特别是使用层析技术包括但不限于凝胶过滤、蔗糖梯度超速离心或选择性沉淀特别是使用聚乙二醇(PEG)。用于本发明的疫苗组合物的免疫原也包括表达栽体。"载体"指的是包含有待在体外或体内递送到靶细胞内的异源多核苷酸的重组DNA或RNA质粒或病毒例如痘病毒、腺病毒、疱渗病毒。异源多核苷酸可以包括治疗目的相关的序列，可以任选地是表达盒形式。载体在此无需能够在最终靶细胞或对象中进行复制。该术语包括用于翻译多核苷酸编码序列的克隆载体。也包括病毒载体。术语"重组"表示基因组cDNA、半合成或合成来源的多核苷酸，其不存在于自然界中或以在自然界不能找到的排列与另一种多核苷酸相连。根据本发明的另一个实施方式，表达载体是用于在合适细胞系统中体外表达蛋白的表达载体。可以在分泌之后或者不在分泌之后(如果没有分泌，通常发生或进行细胞裂解)在或从培养上清液中收获所表达的蛋白，任选地用浓缩方法例如超滤将其浓缩和/或用纯化方法例如亲和、离子交换或凝胶过滤型层析法将其纯化，并将其配制于本发明的乳剂中。本发明也包括配制多价免疫组合物或联合疫苗组合物。例如，用于本发明制备的联合牛菌苗中的抗原包括但不限于牛支原体、巴斯德氏菌属(特别是多杀巴斯德氏菌和溶血巴斯德氏菌)、嗜血杆菌属(特别是睡眠嗜血杆菌)、梭状芽孢杆菌、沙门氏菌、棒状杆菌、链球菌、葡萄球菌、莫拉菌、大肠杆菌等。本发明还提供了用于诱导宿主例如动物体内的免疫应答的方法，包括给宿主施用本发明的免疫组合物或疫苗组合物。以这种方式引发的免疫应答特别是抗体和/或细胞免疫应答，特别是rt扰素应答。具体地，本发明提供了免疫对抗致病生物体感染(例如病毒、细菌、真菌或原虫寄生虫感染)动物或者防止或减轻致病生物体感染动物所引起的症状的方法。本发明的方法可用于脊推动物，包括但不限于人、犬科动物(例如狗)、猫科动物(例如猫)、马科动物(例如马)、牛族动物(例如牛)、猪族动物(例如猪)、羊(例如绵羊)、羊(例如山羊)和兔以及禽类，禽类包括但不限于鸡、火鸡、鸭、鹅、鹤鹑、雉、鹦鹉、雀、鹰、乌鸦和走鸟(鸵鸟、鴯鹋和鹤鸵等)。在本发明的一个特定方面，这些方法包括在分娩之前通过施用本发明制备的疫苗组合物来接种妊娠雌性动物。这些方法还包括通过接种方案诱导保护性抗体以及这些保护性抗体从被接种的妊娠雌性动物转移到它们的子代。这种母体抗体的转移随后保护其子代免于疾病。本发明制备的疫苗组合物的剂量将取决于接种动物的物种、品种、年龄、大小、接种史和健康状态。其他因素例如抗原浓度、附加的疫苗组分和施用途径(即皮下、皮内、口服或肌肉内施用)也将影响有效剂量。根据疫苗的抗原浓度、施用途径和接种动物的年龄及状况可容易确定出施用疫苗的剂量。或者，不需要过多试验，对不同剂量的系统性免疫原性试验和LD5G研究及其他筛选方法可以用于确定出本发明的疫苗组合物的有效剂量。从下面给出的实施例中，哪些近似剂量和哪些近似体积适用于在此所述的疫苗组合物将是显而易见的。关键因素是剂量能提供对抗自然感染的至少部分保护作用，如自然感染相关的死亡率和发病率的降低所证实的那样。本领域一般技术人员同样容易确定出合适的体积。例如，在禽类物种中，剂量体积可以是从约0.lml到约0.5ml，有利的是从约0.3ml到约0.5ml。对于猫、犬和马物种而言，剂量体积可以是从约0.2ml到约3.0ml，有利的是从约0.3ml到约2.0ml，更有利的是从约0.5ml到约1.0ml。对于牛和猪物种而言，剂量体积可以是从约0.2ml到约5.0ml，有利的是从约0.3ml到约3.0ml，更有利的是从约0.5ml到约2.0ml。最初或者自末次剂量已经过去很长时间时，以周期性时间间隔重复接种可能是有利的，以增强免疫应答。在本发明的一个实施方式中，肠外注射(即皮下、皮内或肌肉内)施用疫苗组合物。可以施用一个剂量的组合物，或者在备选实施方式中，可以施用重复剂量的组合物，以约2到约6周间隔施用约2到约5个剂量，有利的是从约2到约5周。但是，本领域技术人员将认识到剂量数目和接种之间的时间间隔取决于多个因素，包括但不限于接种动物的年龄；动物的状态，特别是是否存在母体抗体；施用途径；每个剂量可得到的抗原的量等。对于初次接种，时间一般要在l周以上，有利的是约2到约5周之间。对于先前接种过的动物，可以进行约1年间隔的妊娠之前或期间的强化接种。本发明也关注用无针头注射器施用疫苗组合物，例如但不限于Pigjet、Avijet、Dermojet③或Biojector(Bioject，Oregon,USA)。结合因素例如接种动物的物种、动物的年龄和体重等，本领域一般技术人员不需要过多的试验就能够按需调整注射器的规格。在本发明的一个实施方式中，方法包括单次施用用本发明的乳剂配制的疫苗组合物。例如，在一个实施方式中，疫苗组合物是灭活的猪肺炎支原体疫苗，而另一个实施方式提供了包括灭活的PCV2病毒组合物的疫苗。其他免疫组合物或疫苗适用于单剂方案，包括但不限于灭活的PRRS和SIV。也可以在存在既有抗体时施用疫苗。本发明还涉及治疗宿主例如动物的方法，包括给宿主施用本发明制备的药物组合物，所述药物组合物包括至少一种选自蛋白或肽的免疫原、抗体、变应原、CpG0DN、生长因子、细胞因子或抗生素，特别是CpG0DN或细胞因子。可以用这些药物组合物提高动物例如鸡、猪或牛的生长性能。本发明还涉及试剂盒，其包括含有成分例如免疫原或药物组合物的第一个瓶以及含有本发明制备的乳剂的第二个瓶。免疫原可以是低压冻干形式、干燥形式或在水溶液中，如在此所述。通过下面的非限制性实施例现在将进一步地描述本发明。实施例实施例1:乳剂生产方法如下所述以两个步骤生成乳剂第一步用高剪切转子定片的Silverson乳化器(10迈m直径碎裂头的L4RT型)生成制剂。为了生产乳剂，用1体积水相#1在35匸下乳化l体积油相。在搅拌(5000rpm，每分钟转数)下，向油相中加入水相进行l分钟。随着体积的增加，在l分钟期间将旋转速度逐渐增加到8300rpm。在该步骤中，乳剂是油包水乳剂。最终的LR4乳剂是含有20%油相的0/W乳剂。对于LR4乳剂，相组成如下油相(72ml):-01eth-2(Brij92):1.8%w/v，-01eth-5(VolpoN5):8.2%w/v，-石蜡油(Marcol82):87.5%v/v，-防腐剂2.5%v/v水相#1(108ml):-Poloxamer407(LutrolF127):0.58%w/v-含磷酸氢二钠和磷酸二氢钾0.02M的等渗緩沖液(pH7.8):适量至100.0%v/v。用在与疫苗相同的緩冲液例如含磷酸氩二钠和磷酸二氬钾0.02M的等渗緩冲液(pH7.8)中的5%(w/v)LutrolF127溶液制备水相#1。当搅拌停止时，乳剂变成了水包油乳剂。将乳剂在5x:冷室中放置至少4个小时。在此阶段，乳剂是含40。/。油相的前乳剂。第二步用180ml磷酸氢二钠和磷酸二氢钾0.02M等渗緩冲液(pH7.8)和免疫原(灭活的猪肺炎支原体免疫原，或PCV-2免疫原，如下所述)制备水相#2。将在第一步中制备出的前乳剂冷却到约5X:，加入相同体积的相同温度的水相#2进行稀释，并在磁棒旋转下混合1分钟。LR4乳剂中的最终表面活性剂浓度是2.18%(w/v)。如在此所制备出的LR4疫苗在5C下保持稳定至少1年。利用相同的制备方法，可以获得如下所述的其他乳剂LR3乳剂第一步最终LR3乳剂是含有33%油相的0/W乳剂。油相(120ml):-01eth-2(Brij92):6.24%w/v-01eth-10(Brij96):2.76%w/v-石蜡油(Marcol82):89.50%v/v-防腐剂1.50%v/v水相#1(120ml):-Poloxamer407(LutrolF127):1.20%w/v;-含磷酸氢二钠和磷酸二氢钾0.02M的等渗緩沖液(pH7.8):适量至100.0%v/v。用在与疫苗相同的緩沖液例如磷酸氢二钠和磷酸二氢钾0.02M等渗緩冲液(pH7.8)中的5%(w/v)LutrolF127溶液制备水相#1。当搅拌停止时，乳剂变成了水包油乳剂。将乳剂在51C冷室中放置至少4个小时。在此阶段，乳剂是含50%油相的前乳剂。第二步用含磷酸氢二钠和磷酸二氢钟0.02M的等渗緩冲液(pH7.8)和免疫原构建水相#2(120ml)。将在第一步中制备出的前乳剂冷却到约5。C，加入一半体积的相同温度的水相#2进行稀释，并在磁棒旋转下混合1分钟。LR3乳剂中的最终表面活性剂浓度是3.40%w/v。如在此所制备出的LR3疫苗在5C下保持稳定至少l年。BE1乳剂最终BE1乳剂是含有33%油相的0/W乳剂。油相(120ml):-01eth-2(Brij92):3.0%w/v-01eth-5(VolpoN5):9.1%w/v-石蜡油(Marcol82):86.4%v/v-防腐剂1.5%v/v水相#1(240ml):-含磷酸氢二钠和磷酸二氢钾0.02M的等渗緩冲液(pH7.8):适量至100.0%v/v。水相#1含有含磷酸氢二钠和磷酸二氢钾0.02M的等渗緩冲液(pH7.8)(98.5%v/v)和免疫原。在使用之前，不稀释BB1乳剂。BE1乳剂中最终表面活性剂浓度是4%w/v。实施例2:乳剂的稳定性甚至在浓缩的免疫原存在下，LR4和LR3组合物在21TC下保持稳定至少9个月。乳剂的颗粒大小分布在这段时间内不发生变化。实施例3:猪肺炎支原体和PCV-2联合疫苗组合物及其在小猪中的安全性材料和方法如实施例1所述制备两种疫苗，含有LR3或LR4乳剂、12个抗原单位的灭活猪肺炎支原体和2.4logl。(抗原单位)的灭活2型猪环病毒/剂。将24只3周大的小猪随机分配到两组。在第0天，用4mlLR3疫苗组合物经肌肉内途径接种组2中的12只小猪；在第0天，用4mlLR4疫苗组合物经肌肉内途径接种组3中的12只小猪。組1对应于未接种的对照组。每天监测小猪。在注射后2周，观察注射部位和局部病损。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>*平均值±标准偏差结杲LR3和LR4佐剂都显示出了很好的安全性镨。实施例4:施用一剂以LR4乳剂为佐剂的PCV-2疫苗后的血清学结果材料和方法如实施例1所述制备疫苗，包含LR4乳剂、50yig/剂的CpG0DN#2216、1.5个抗原单位的灭活猪肺炎支原体和1.5log,。(抗原单位)的灭活2型猪环病毒/剂。40只3周大的既有高母体抗体的小猪被随机分配到2組。在笫0天，用无针头注射器将0.5mlLR4疫苗组合物经皮内途径接种组2中的20只小猪。组l对应于未接种的对照组。在接种后第0、21、41、63、84、126、153和180天取血样，用ELISA测定出PCV-20RF2抗体的滴度。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>*平均值±标准偏差Uogi。单位)结果如下面的表所证实的那样,从接种后第7天到第180天，所有接种者都显示出显著的抗PCV-20RF抗体应答，甚至在接种时存在母体抗体的情况下。实施例5:制备螺杆菌的方法从甘油贮存物生长细菌培养物，用5-10%接种到添加10%胎牛血清(FBS)的Brucella肉汤中。在37。C三气培养箱(85%N2、10%C02和5%02)中约70rpm振荡下，培养物生长于有通气孔道的烧瓶内。在接种时，也划线接种13人+5%绵羊血(SB)平板作为测定样品纯度的诊断性测试。菌落的形态学是点状的和清亮的。在放置于培养箱3到4天的平板中可以看到一些溶血。进行培养24到36个小时，以便生长到0D6。。>1。生长的培养物也划线接种到TSA+5%SB平板，并测定过氧化氢酶和尿素酶的生成(^e"co6ac^ercercTo对两者均为阳性)。离心将生长到0D6Q。>1的培养物分装到无菌的离心瓶中，并用J10Beckman转子以约8600g在7500rpm离心20分钟。弃去上清液，并用lx磷酸盐緩冲盐水(PBS)洗涤细胞沉淀。将沉淀重悬于PBS中，并将其分装到10ml疫苗瓶内。低压冻干在没有稳定剂或防腐剂情况下，将抗原制品低压冻千36个小时。观察到成形良好的饼块。胃蛋白酶消化在lOmMHC1中制备胃蛋白酶溶液(0.1%)，并用0.2微米滤膜过滤除菌2次。用胃蛋白酶在37。C和轻轻摇晃下消化经低压冻干的抗原制品(每mg千细胞物加入lng胃蛋白酶)。在第18和25小时时，将lOOpl样品铺到TSA+5%SB平板上(在37°C三气微需氧培养箱中温育)；在96个小时后没有观察到生长，说明胃蛋白酶消化具有灭活作用。PBS中和在胃蛋白酶消化之后，抗原制品的pH值为约2.0，因此用2:1体积的PBS中和所述抗原制品。在pH中和之后，pH值为约7.0。实施例6:由经胃蛋白酶或福尔马林处理过的iye〃co6aCercercTo制成的抗原制品的配制。通过将低压冻干细菌溶解于10mlLR2佐剂/瓶中可以临时配制出表l所示的疫苗。数值反映了配制后每种成分的浓度。LR2乳剂等同于实施例1所述的LR4乳剂。在LR2乳剂中，LutrolF127的终浓度是O.20%(w/v)，而不是0.175%(w/v)。^人'^萝浙浙<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>实施例7:用基于Agei7/o的疫苗接种的动物和方法。本研究所用的动物是经选择的无PRRSV和无猪肺炎支原体的常规猪。选出仍与母猪在一起的常规小猪。记录下所有猪的体重。将猪分成2组，每组至少5只猪，用体重、性别和窝来源进行分层。检查所有猪，以确保健康状态。试验仅包含临床健康的动物。鉴定所有猪。在第l周和2周大仍与母猪在一起时，接种小猪。一组猪被接种，而另一组作为未接种的对照。接种动物经肌肉内途径接受1个剂量(每剂2ml)，每个肩膀和臀部各O.5ml。未接种对照没有接受任何注射。在3周大时，所有猪断奶并被攻击。将每组圈养在隔离设施中单独分开的围栏中。在攻击后约28天时，对猪进行尸检。在最终尸检日期将阴性对照猪尸检。表2总结了试验设计。<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>攻击方案和评价在严重的临床疾病时，可以施用被认为对动物福利所必需的治疗。记录下每只动物的耳签号码、发病日期、推定诊断、治疗方案和处置。攻击后不提供治疗。对濒死的或受伤的动物实施安乐死。不健康的动物(临床疾病或损伤)可以退出研究，血清学和皮肤测试在接种之前、攻击之前和尸检时，从上腔静脉采集血液。测定螺杆菌抗体水平。实施皮肤测试。生产参数在到达时、接种之前、攻击之前和每次尸检时称量猪，以评价可能的体重增加或减少。尸检根据螺杆菌攻击，在接种后28天尸检猪。实施例8:螺杆菌分离抹通过微需氧培养和在Skirrow培养基平板上传代，从猪胃粘膜中回收两个细菌分离林(2662和1268)。基于胃部位(贲门和胃窦)、形态学(革兰氏阴性、短、弯曲的"鸥翼样"杆菌)、尿素酶活性、与兔抗Hp抗体的反应性，将这两个分离林都分到螺杆菌属，基于SDS-PAGE和Western印迹镨，发现分离林2662与幽门螺杆菌相似，称作"^//c^ac^rcer^"。分离林1268具有与2662不同的i脊。实施例9:经尿素酶活性测量的细菌负荷表又'遂^#雄活遂浙责^^荷<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>实施例10:胃部炎症应答根据滤泡和胃固有层的淋巴细胞浸润给胃部炎症应答"评分"(表4)，标准为0:无；1:轻微；2:中度；和3:重度。以胃贲门和胃窦的组织学评分的总和计算出每只猪的总炎症评分。从中计算出組平均评分。f命乂症^吝<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>实施例11:血清学应答<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>Acer化疫苗提供了好的保护性免疫的指示，其基于尿素酶活性的强度、盲法的组织切片组织学评价和强的血清学应答。包括Suivaxyn、猪肺炎支原体和Acerdo的联合疫苗给出了相似的抗体应通过下面的编号段落进一步地描述本发明1.水包油(0/W)乳剂，其包含(1)含有能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原的水溶液；(2)非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇；(3)矿物油；(4)选自乙氧基化脂肪醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(POE-POP嵌段共聚物)和/或其任何组合的非离子亲水性表面活性剂。2.水包油(0/W)乳剂，其包含(1)含有能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原的水溶液；(2)选自乙氧基化脂肪醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(POE-POP嵌段共聚物)和/或其任何组合的非离子亲脂性表面活性剂；(3)矿物油；(4)非离子亲水性乙氧基化脂肪醇。3.段落1或2的乳剂，其中亲脂性乙氧基化脂肪醇包括约43%分子量(w/w)或更少的氧化乙烯(E0)。4.段落2的乳剂，其中亲脂性P0E-P0P嵌段共聚物包括约35%(w/w)或更少的氧化乙烯。5.段落2的乳剂，其中亲水性乙氧基化脂肪醇包括超过约43%(w/w)的氧化乙烯。6.段落1的乳剂，其中亲水性P0E-P0P嵌段共聚物包括约55%(w/w)或更多的氧化乙烯。7.段落3的乳剂，其中乙氧基化脂肪醇是C9到C22脂肪醇，其有利地选自油醇、十六烷醇、硬脂醇、异硬脂醇、十二烷醇及其组合，有利的是油醇，以及更有利的是具有l到4个E0的乙氧基化油醇。8.段落5的乳剂，其中乙氧基化脂肪醇是C9到C22脂肪醇，其有利地选自油醇、十六烷醇、硬脂醇、异硬脂醇、十二烷醇及其组合，有利的是油醇，以及更有利的是具有5到21个E0的乙氧基化油醇。9.段落4的乳剂，其中P0E-P0P嵌段共聚物的MW是从约1000到约8000。10.段落6的乳剂，其中POE-POP嵌段共聚物的MW是从约3000到约16000。11.段落l到10中任一的乳剂，其中非离子亲水性表面活性剂是乙氧基化脂肪醇。12.段落11的乳剂，其中乙氧基化脂肪醇是Brij⑧76、Brij⑧56、Brij96/97、Brij98、Brij721、Brij58、Brij35、Brij78(Uniqema)、VolpoN5、VolpoCS6、VolpoCS12、VolpoCS20、VolpoCS25、VolpoCS23(Croda)、BL9-EX、BC-7、BT-5、BT-7、BT-9、BT-12、BD-IO、B0-7V、BC5.5、BT-5、BL-21、BL-25、BC-15TX、BC-23、BC-25TX、B0-15V、B0-50V、BB-20(NikkoChemicals)或它们的<壬4可组合。13.段落l到12中任一的乳剂，其中非离子亲水性表面活性剂是POE-POP嵌段共聚物。14.段落13的乳剂，其中POE-P0P嵌段共聚物是LutroPF127[Poloxamer407〗、LutrolF68[Poloxamer188]、LutrolF108[Poloxamer338〗、LutrolF98[Poloxamer278]、LutrolF87[Poloxamer227]、LutrolF88[Poloxamer228]、LutrolF77[Poloxamer207]、LutrolF38[Poloxamer108](BASF)、TetronicsT1307、TetronicsT1107、TetronicsT908(BASF)或它们的4壬4可组合。15.段落l到14中任一的乳剂，其中非离子亲脂性表面活性剂是乙氧基化脂肪醇。16.段落15的乳剂，其中乙氧基化脂肪醇是Brij30、Brij92/93、Brij72、Brij52(Uniqema)、VolpoL3、VolpoN3、Volpo"(Croda)、BS-4、BD-2、BD-4、BT-3(NikkoChemicals)或它们的任何组合。17.段落1到16中任一的乳剂，其中非离子亲脂性表面活性剂是P0E-P0P嵌段共聚物。18.段落17的乳剂，其中P0E-P0P嵌段共聚物是PluronicL121[Poloxamer401]、PluronicL101[Poloxamer331]、PluronicL81、PluronicL62[Poloxamer182〗、PluronicL43[Poloxamer123]、PluronicP103[Poloxamer333]、PluronicL123[Poloxamer403〗、LutrolL63[Poloxamer183]、LutrolP122[Poloxamer402]、LutrolL92[Poloxamer272]、LutrolL72[Poloxamer202]、LutrolL42[Poloxamer122]、LutrolL61[Poloxamer181](BASF)、TetronicsT1301、TetronicsT701、TetronicsT901(BASF)或它们的任何组合。19.段落l到18中任一的乳剂，其中表面活性剂的总浓度，按重量/乳剂体积计，是从约0.2%到约6.5%，特别是从约1%到约6%，有利的是从约1.5%到约5%,更有利的是从约2%到约3%。20.水包油(0/W)乳剂，包含(1)含有能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原的水溶液；(2)非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇；(3)矿物油；(4)包括超过约43%且小于约71%(w/w)的氧化乙烯(E0)的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇；(5)包括约71%或更多(w/w)的氧化乙烯(E0)的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇。21.段落20的乳剂，其中包括超过约43%且小于约71%(w/w)的氧化乙烯(E0)的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇是具有5到14个E0的乙氧基化油醇。22.段落20或21的乳剂，其中包括约71%或更多(w/w)的氧化乙烯(E0)的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇是具有15个或更多个E0的乙氧基化油醇。23.段落20到22中任一的乳剂，其中包括超过约43%且小于约71%(w/w)的氧化乙烯(E0)的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇的浓度是从约1.0%到约5.0%,特别是从约1.5%到约4.5%,更有利的是从约2.0%到约3.5%,表示为重量/乳剂体积(w/v)百分比。24.段落20到23中任一的乳剂，其中包括约71%或更多(w/w)的氧化乙烯的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇的浓度是从约0.01%到约3.0%,特别是从约0.05°/。到约2.5%,更有利的是从约0.1%到约2.0%(w/v)。25.段落20到24中任一的乳剂，其中非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇的浓度是从约0.1%到约2.5°/。，特别是从约0.2%到约2.0%，有利的是从约0.2%到约1.5%，更有利的是从约0.2%到约1.2%(w/v)。26.水包油(0/W)乳剂，包含(1)含有能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原的水溶液；(2)非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇；(3)矿物油；(4)非离子亲水性乙氧基化脂肪醇。(5)非离子亲水性聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。27.段落26的乳剂，其中亲水性乙氧基化脂肪醇有利的是包括超过约43%且小于约71%(w/w)的氧化乙烯的乙氧基化脂肪醇。28.段落27的乳剂，其中脂肪醇是具有5到14个E0的乙氧基化油醇。29.段落26到28中任一的乳剂，其中非离子亲水性乙氧基化脂肪醇的浓度是从约1.0%到约5.0%,特別是从约1.5%到约4.5%,更有利的是从约2.0%到约3.5%,表示为重量/乳剂体积(w/v)百分比。30.段落26到29中任一的乳剂，其中非离子亲水性聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物的浓度是从约0.01%到约2.0%，更特别是从约0.1%到约1.5°/。(w/v)。31.段落26到30中任一的乳剂，其中非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇的浓度是从约0.1°/。到约2.5%，特别是从约0.2%到约2.0%，有利的是从约0.2阔约1.5%，更有利的是从约0.2%到约1.2%(w/v)。32.段落1到31中任一的乳剂，其中乳剂的相转变温度(PIT)大于或等于25°C。33.段落32的乳剂，其中PIT是从约28匸到约65"C，更特别是从约33。C到约6ox:。34.段落1到33中任一的乳剂，其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2°/。到约50%的油相，所述油相包括油和表面活性剂，特别是从约4°/。到约40%,有利的是从约8%到约35%，更有利的是从约15%到约30%的油相。35.段落34的乳剂，其中油是矿物油。36.段落35的乳剂，其中矿物油是石蜡油例如异链烷烂油和/或环烷基石油、角鲨烷、角鲨烯、姥鲛烷、聚异丁烯、氢化聚异丁烯、聚癸烯、聚异戊二烯、聚异丙烯等。37.段落34或35的乳剂，其中矿物油包括线性或分支的碳链，其具有15个以上碳原子数，有利的是从15到32个，且没有芳香族化合物。38.段落37的乳剂，其中油的商品名是MARCOL⑧52或MARC0L⑧82(Esso)或"DRAKE0L6VR，，(Penreco)。39.段落34到38中任一的乳剂，其中油是包括任何比例的至少两种油的油混合物。40.段落39的乳剂，其中油混合物包括至少一种植物油。41.段落40的乳剂，其中植物油占油相的约0.1%到约33%，有利的是从约5%到约15%v/v。42.段落40或41的乳剂，其中植物油是花生油、坚果油、向日葵油、红花油、大豆油、月见草油等。43.包括石蜡油；作为非离子亲脂性表面活性剂的具有2到3个E0的乙氧基化油醇；作为非离子亲水性表面活性剂的具有5到6个E0的乙氧基化油醇；和作为非离子亲水性表面活性剂的具有约70到80%EO以及MW为约9800到16000的P0E-P0P嵌段共聚物的乳剂。44.段落43的乳剂，其中石蜡油的浓度是从约5%到约50%，有利的是从约15%到约30%(v/v);具有2到3个E0的乙氧基化油醇的浓度是从0.1%到1.5%，有利的是从0.1%到1.2%(w/v);具有5到6个EO的乙氧基化油醇的浓度是从l。/。到5%，有利的是从1%到4°/。(w/v);以及具有约70到80°/。EO以及MW为约9800到16000的POE-POP嵌段共聚物的浓度是从约0.01%到2°/。，有利的是从约0.05%到1.50/"w/v)。45.包括石蜡油；作为非离子亲脂性表面活性剂的具有2到3个EO的乙氧基化油醇；作为非离子亲水性表面活性剂的具有IO个EO的乙氧基化油醇；和作为非离子亲水性表面活性剂的具有约70到80%EO以及MW为约9800到16000的POE-POP嵌段共聚物的乳剂。46.段落45的乳剂，其中石蜡油的浓度是从5°/。到50°/。，有利的是从15%到30%(v/v);具有2到3个E0的乙氧基化油醇的浓度是从0.2%到3%,有利的是从0.5%到3%(w/v);具有10个E0的乙氧基化油醇的浓度是从0.2%到3%，有利的是从0.5°/。到3%(w/v);以及具有约70到80。/。E0以及MW为约9800到16000的POE-POP嵌段共聚物的浓度是从0.01%到2%,有利的是从0.05%到1.5%(w/v)。47.包括石蜡油；作为非离子亲脂性表面活性剂的具有2到3个EO的乙氧基化油醇和作为非离子亲水性表面活性剂的具有5到6个EO的乙氧基化油醇的乳剂。48.段落47的乳剂，其中石蜡油的浓度是从5%到50%，有利的是从15%到35%(v/v);具有2到3个E0的乙氧基化油醇的浓度是从0.1%到3%，有利的是从0.5%到2%(w/v);具有5到6个E0的乙氧基化油醇的浓度是从1%到5%，有利的是从2.0%到4.5%(w/v)。49.制备疫苗组合物的方法，包括混合能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原和段落1到48中任一的乳剂。50.用于诱导宿主的疫苗应答的方法，包括给宿主施用段落l到48中任一的乳剂或段落49的疫苗組合物。51.用于实施段落49或50的方法的试剂盒，包括段落1到48中任一的乳剂或段落49的疫苗组合物以及用于实施该方法的说明书。由此已经详细描述了本发明的有利的实施方式，要明白上面段落所定义的发明并不限于上面描述所述的特定细节，许多显而易见的变异都是可能的，而不脱离本发明的精神或范围。权利要求1.水包油(O/W)乳剂，其包含(1)含有能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原的水溶液；(2)非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇；(3)矿物油；(4)选自乙氧基化脂肪醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(POE-POP嵌段共聚物)和/或它们的任何组合的非离子亲水性表面活性剂。2.水包油(0/W)乳剂，其包含(1)含有能够诱导宿主的免疫应答的疫苗抗原或免疫原的水溶液；(2)选自乙氧基化脂肪醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(P0E-P0P嵌段共聚物)和/或它们的任何组合的非离子亲脂性表面活性剂；(3)矿物油；(4)非离子亲水性乙氧基化脂肪醇。3.权利要求l的乳剂，其中亲脂性乙氧基化脂肪醇包括约43%分子量(w/w)或更少的氧化乙烯(E0)或其中亲水性P0E-P0P嵌段共聚物包括约55%(w/w)或更多的氧化乙烯或其中亲脂性乙氧基化脂肪醇包括约43%分子量(w/w)或更少的氧化乙烯(E0)和其中乙氧基化脂肪醇是C9到C22脂肪醇以及有利地选自由油醇、十六烷醇、硬脂醇、异硬脂醇、十二烷醇及其组合组成的组，有利的是油醇，以及更有利的是具有1到4个E0的乙氧基化油醇或其中亲水性P0E-P0P嵌段共聚物包括约55%(w/w)或更多的氧化乙烯和其中P0E-P0P嵌段共聚物的MW是从约3000到约16000或其中非离子亲水性表面活性剂是乙氧基化脂肪醇或其中亲水性乙氧基化脂肪醇包括超过约43%(w/w)的氧化乙烯或其中亲水性乙氧基化脂肪醇包括超过约43%(w/w)的氧化乙烯以及其中乙氧基化脂肪醇是C9到C22脂肪醇以及有利地选自由油醇、十六烷醇、硬脂醇、异硬脂醇、十二烷醇及其组合组成的组，有利的是油醇，以及更有利的是具有5到21.个E0的乙氧基化油醇或其中非离子亲水性表面活性剂是乙氧基化脂肪醇和其中乙氧基化脂肪醇是Brij76、Brij56、Brij96/97、Brij98、Brij721、Brij58、Brij35、Brij78(Uniqema)、VolpoN5、VolpoCS6、VolpoCS12、VolpoCS20、VolpoCS25、VolpoCS23(Croda)、BL9-EX、BC-7、BT-5、BT-7、BT-9、BT-12、BD-IO、B0-7V、BC5.5、BT-5、BL-21、BL-25、BC-15TX、BC-23、BC-25TX、B0-15V、B0-50V、BB-20(NikkoChemicals)或它们的任何组合或其中非离子亲水性表面活性剂是POE-POP嵌段共聚物或其中非离子亲水性表面活性剂是P0E-P0P嵌段共聚物和其中P0E-P0P嵌段共聚物是LutrolF127[Poloxamer407]、LutrolF68[Poloxamer188]、LutrolF108[Poloxamer338]、LutrolF98[Poloxamer278〗、LutrolF87[Poloxamer227]、LutrolF88[Poloxamer228]、LutrolF77[Poloxamer207〗、LutrolF38[Poloxamer108](BASF)、TetronicsT1307、TetronicsT1107、TetronicsT908(BASF)或它们的任何组合或其中非离子亲脂性表面活性剂是乙氧基化脂肪醇或其中非离子亲脂性表面活性剂是乙氧基化脂肪醇和其中乙氧基化脂肪醇是Brij⑧30、Brij⑧92/93、Brij72、Brij⑧52(Uniqema)、VolpoL3、VolpoN3、Volpo"(Croda)、BS-4、BD-2、BD-4、BT-3(NikkoChemicals)或它们的任何组合或其中表面活性剂的总浓度，以重量/乳剂体积计，是从约0.2%到约6.5°/。，特别是从约1%到约6%，有利的是从约1.5%到约5%，更有利的是从约2%到约3°/。。4.权利要求2的乳剂，其中亲脂性乙氧基化脂肪醇包括约43%分子量(w/w)或更少的氧化乙烯(E0)或其中亲脂性P0E-P0P嵌段共聚物包括约35%(w/w)或更少的氧化乙烯或其中亲水性乙氧基化脂肪醇包括超过约43%(w/w)的氧化乙烯(E0)或其中亲脂性乙氧基化脂肪醇包括约43%分子量(w/w)或更少的氧化乙烯(E0)和其中乙氧基化脂肪醇是C9到C22脂肪醇以及有利地选自由油醇、十六烷醇、硬脂醇、异硬脂醇、十二烷醇及其组合组成的组，有利的是油醇，以及更有利的是具有1到4个E0的乙氧基化油醇或其中亲水性乙氧基化脂肪醇包括超过约43%(w/w)的氧化乙烯(E0)和其中乙氧基化脂肪醇是C9到C22脂肪醇以及有利地选自由油醇、十六烷醇、硬脂醇、异硬脂醇、十二烷醇及其组合组成的组，有利的是油醇，以及更有利的是具有5到21个E0的乙氧基化油醇或其中亲脂性POE-POP嵌段共聚物包括约35%(w/w)或更少的氧化乙烯和其中P0E-P0P嵌段共聚物的MW是从约1000到约8000或其中非离子亲水性表面活性剂是乙氧基化脂肪醇或其中非离子亲水性表面活性剂是乙氧基化脂肪醇和其中乙氧基化脂肪醇是Brij⑧76、Brij56、Brij96/97、Brij98、Brij721、Brij58、Brij35、Brij78(Uniqema)、VolpoN5、VolpoCS6、VolpoCS12、VolpoCS20、VolpoCS25、VolpoCS23(Croda)、BL9-EX、BC-7、BT-5、BT-7、BT-9、BT-12、BD-10、B0-7V、BC5.5、BT-5、BL-21、BL-25、BC-15TX、BC-23、BC-25TX、B0-15V、B0-50V、BB-20(NikkoChemicals)或它们的任何组合或其中非离子亲脂性表面活性剂是乙氧基化脂肪醇或其中非离子亲脂性表面活性剂是乙氧基化脂肪醇和其中乙氧基化脂肪醇是Brij30、Brij⑧92/93、Brij⑧72、Brij⑧52(Uniqema)、VolpoL3、VolpoN3、VolpoL4(Croda)、BS-4、BD-2、BD-4、BT-3(NikkoChemicals)或它们的任何组合或其中非离子亲脂性表面活性剂是P0E-P0P嵌段共聚物或其中非离子亲脂性表面活性剂是POE-POP嵌段共聚物和其中P0E-P0P嵌段共聚物是Pluronic⑧L121[Poloxamer401〗、PluronicL101[Poloxamer331]、Pluronic⑧L81[Poloxamer221]、PluronicL62[Poloxamer182]、Pluronic"3[Poloxamer123]、PluronicP103[Poloxamer333]、PluronicL123[Poloxamer403]、LutrolL63[Poloxamer183〗、LutrolP122[Poloxamer402]、LutrolL92[Poloxamer272]、LutrolL72[Poloxamer202]、LutrolL42[Poloxamer122]、LutrolL61[Poloxamer181](BASF)、Tet訓ics⑧T1301、Tet飄ics⑧T701、Tetronics⑧T901(BASF)或它们的任何组合或其中表面活性剂的总浓度，以重量/乳剂体积计，是从约0.2%到约6.5%,特别是从约1%到约6%，有利的是从约1.5%到约5%，更有利的是从约2°/。到约3%。5.权利要求1的乳剂，其中非离子亲水性表面活性剂包括包含超过约43%且小于约71%(w/w)氧化乙烯(E0)的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇和包含约71%或更多(w/w)氧化乙烯(E0)的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇。6.权利要求5的乳剂，其中包含超过约43%且小于约71%(w/w)氧化乙烯(E0)的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇是具有5到14个E0的乙氧基化油醇或其中包含约71%或更多(w/w)氧化乙烯(E0)的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇是具有15个或更多个E0的乙氧基化油醇或其中包含超过约43%且小于约71%(w/w)氧化乙烯的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇的浓度是从约1.0%到约5.0%，特别是从约1.5%到约4.5%，更有利的是从约2.0%到约3.5。/。，表示为重量/乳剂体积(w/v)百分比，或其中包含约71%或更多(w/w)氧化乙烯的非离子亲水性乙氧基化脂肪醇的浓度是从约0.01%到约3.0%，特别是从约0.05%到约2.5%，更有利的是从约0.1%到约2.0%(w/v)或其中非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇的浓度是从约0.1%到约2.5%，特别是从约0.2%到约2.0%，有利的是从约0.2°/。到约1.5°/。，更有利的是从约0.2阔约1.2%(w/v)。7.权利要求l的乳剂，其中非离子亲水性表面活性剂包括非离子亲水性乙氧基化脂肪醇和非离子亲水性聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。8.权利要求7的乳剂，其中亲水性乙氧基化脂肪醇有利地是包含超过约43%且小于约71%(w/w)氧化乙烯的乙氧基化脂肪醇或其中脂肪醇是具有5到14个EO的乙氧基化油醇或其中非离子亲水性乙氧基化脂肪醇的浓度是从约1.0%到约5.0%，特别是从约1.5%到约4.5%,更有利的是从约2.0%到约3.5%,表示为重量/乳剂体积(w/v)百分比，或其中非离子亲水性聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物的浓度是从约0.Ol阔约2.0%，更特别是从约0.1%到约1.5%(w/v)或其中非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇的浓度是从约0.1%到约2.5%，特别是从约0.2%到约2.0%，有利的是从约0.2%到约1.5%，更有利的是从约0.2阔约1.2%(w/v)。9.权利要求1的乳剂，其中乳剂具有大于或等于25匸的相转变温度(PIT)或其中乳剂具有大于或等于25C的相转变温度(PIT)和其中PIT是从约28匸到约65'C,更特别是从约33T到约601C。10.权利要求l的乳剂，其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2%到约50%的包括油和表面活性剂的油相，特别是从约4%到约40%，有利的是从约8%到约35%以及更有利的是从约15%到约30%的油相或其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2%到约50%的包括油和表面活性剂的油相，特别是从约4%到约40%,有利的是从约8%到约35%以及更有利的是从约15%到约30%的油相和其中油是矿物油或其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2%到约50%的包括油和表面活性剂的油相，特别是从约4%到约40%，有利的是从约8%到约35°/。以及更有利的是从约15%到约30°/。的油相和其中油是矿物油和其中矿物油是石蜡油例如异链烷烃油和/或环烷基石油、角鲨烷、角鲨晞、姥鲛烷、聚异丁烯、氢化聚异丁烯、聚癸烯、聚异戊二烯、聚异丙烯等或其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2%到约50%的包括油和表面活性剂的油相，特别是从约4°/。到约40%,有利的是从约8%到约35%以及更有利的是从约15%到约30%的油相和其中油是矿物油和其中矿物油包括线性或分支的碳链，其具有15个以上碳原子数，有利的是从15到32个，且没有芳香族化合物或其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2%到约50%的包括油和表面活性剂的油相，特别是从约4%到约40%，有利的是从约8%到约35°/。以及更有利的是从约15%到约30%的油相和其中油是矿物油和其中矿物油包括线性或分支的碳链，其具有15个以上碳原子数，有利的是从15到32个，且没有芳香族化合物和其中油的商品名是MARC0L52或MARC0L82(Esso)或"DRAKE0L6VR，，(Penreco)或其中油是包括任何比例的至少两种油的油混合物或其中油是包括任何比例的至少两种油的油混合物和其中油混合物包括至少一种植物油或其中油是包括任何比例的至少两种油的油混合物和其中油混合物包括至少一种植物油和其中植物油占油相的约0.1%到约33°/。，有利的是从约5%到约15%v/v0其中油是包括任何比例的至少两种油的油混合物和其中油混合物包括至少一种植物油和其中植物油是花生油、坚果油、向日葵油、红花油、大豆油、月见草油等。11.权利要求2的乳剂，其中乳剂具有大于或等于25X:的相转变温度(PIT)或其中乳剂具有大于或等于25'C的相转变温度(PIT)和其中PIT是从约28匸到约65'C，更特别是从约33C到约60'C。12.权利要求2的乳剂，其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2%到约50%的包括油和表面活性剂的油相，特别是从约4%到约40%，有利的是从约8%到约35°/。以及更有利的是从约15%到约30%的油相或其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2%到约50%的包括油和表面活性剂的油相，特别是从约4%到约40%,有利的是从约8%到约35%以及更有利的是从约15%到约30%的油相和其中油是矿物油或其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2%到约50%的包括油和表面活性剂的油相，特别是从约4%到约40%，有利的是从约8%到约35%以及更有利的是从约15%到约30%的油相和其中油是矿物油和其中矿物油是石蜡油例如异链烷烃油和/或环烷基石油、角鲨烷、角鲨烯、姥鲛烷、聚异丁烯、氢化聚异丁烯、聚癸烯、聚异戊二烯、聚异丙烯等或其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2%到约50%的包括油和表面活性剂的油相，特别是从约4%到约40%,有利的是从约8%到约35%以及更有利的是从约15%到约30°/。的油相和其中油是矿物油和其中矿物油包括线性或分支的碳链，其具有15个以上碳原子数，有利的是从15到32个，且没有芳香族化合物或其中乳剂包括，以体积/乳剂体积(v/v)计，约2%到约50%的包括油和表面活性剂的油相，特别是从约4%到约40%，有利的是从约8%到约35%以及更有利的是从约15%到约30%的油相和其中油是矿物油和其中矿物油包括线性或分支的碳链，其具有15个以上碳原子数，有利的是从15到32个，且没有芳香族化合物和其中油的商品名是MARC0L52或MARC0L82(Esso)或"DRAKE0L6VR，，(Penreco)或其中油是包括任何比例的至少两种油的油混合物或其中油是包括任何比例的至少两种油的油混合物和其中油混合物包括至少一种植物油或其中油是包括任何比例的至少两种油的油混合物和其中油混合物包括至少一种植物油和其中植物油占油相的约0.1%到约33%,有利的是从约5%到约15%v/v。其中油是包括任何比例的至少两种油的油混合物和其中油混合物包括至少一种植物油和其中植物油是花生油、坚果油、向日葵油、红花油、大豆油、月见草油等。13.权利要求1的乳剂，其中疫苗抗原或免疫原是猪肺炎支原体、2型猪环病毒或幽门螺杆菌。14.权利要求2的乳剂，其中疫苗抗原或免疫原是猪肺炎支原体、2型猪环病毒或幽门螺杆菌。15.包括石蜡油；作为非离子亲脂性表面活性剂的具有2到3个EO的乙氧基化油醇；作为非离子亲水性表面活性剂的具有IO个EO的乙氧基化油醇；和作为非离子亲水性表面活性剂的具有约70到80%EO以及MW为约9800到16000的P0E-P0P嵌段共聚物的乳剂。16.权利要求15的乳剂，其中石蜡油的浓度是从5°/。到50%，有利的是从15%到30%(v/v);具有2到3个EO的乙氧基化油醇的浓度是从0.2%到3%，有利的是从0.5%到3%(w/v);具有10个EO的乙氧基化油醇的浓度是从0.2%到3%,有利的是从0.5%到3%(w/v);以及具有约70到80。/。EO以及MW为约9800到16000的POE-POP嵌段共聚物的浓度是从0.01%到2%，有利的是从0.05%到1.5%(w/v)。17.包括石蜡油；作为非离子亲脂性表面活性剂的具有2到3个EO的乙氧基化油醇和作为非离子亲水性表面活性剂的具有5到6个EO的乙氧基化油醇的乳剂。18.权利要求17的乳剂，其中石蜡油的浓度是从5%到50%，有利的是从15%到35%(v/v);具有2到3个EO的乙氧基化油醇的浓度是从0.1%到3%，有利的是从0.5%到2%(w/v);具有5到6个EO的乙氧基化油醇的浓度是从1%到5°/。，有利的是从2.0%到4.5%(w/v)。19.包括权利要求15的乳剂和疫苗抗原或免疫原的组合物，其中疫苗抗原或免疫原是猪肺炎支原体、2型猪环病毒或幽门螺杆菌。20.包括权利要求17的乳剂和疫苗抗原或免疫原的组合物，其中疫苗抗原或免疫原是猪肺炎支原体、2型猪环病毒或幽门螺杆菌。全文摘要本发明涉及水包油乳剂，所述乳剂作为佐剂的用途和可包括所述乳剂的药物组合物、免疫组合物或疫苗组合物。在一个实施方式中，水包油(O/W)乳剂可以包括含有免疫原的水溶液、矿物油、非离子亲脂性乙氧基化脂肪醇和非离子亲水性表面活性剂。在另一个实施方式中，水包油(O/W)乳剂可以包括含有免疫原的水溶液、非离子亲脂性表面活性剂、矿物油和非离子亲水性乙氧基化脂肪醇。本发明还包括利用本发明的佐剂制备疫苗组合物的方法、由此所获得的疫苗组合物以及应用方法。文档编号A61K39/02GK101184501SQ200680018958公开日2008年5月21日申请日期2006年4月13日优先权日2005年4月15日发明者A·G·A·帕里索,C·J·M·鲁莱,C·沙雷尔,S·M-C·德古列-布莱谢申请人:梅瑞尔有限公司