用于癌症治疗的包括二芳基脲化合物和PI3、AKT激酶或mTOR抑制剂(雷帕霉素类)的组合治疗的制作方法

专利名称：用于癌症治疗的包括二芳基脲化合物和PI3、AKT激酶或mTOR抑制剂(雷帕霉素类)的组合治疗的制作方法
用于癌症治疗的包括二芳基脲化合物和PI3、 AKT激酶或 mTOR抑制剂(雷帕霉素类)的组合治疗发明背景二芳基脲化合物例如US 20050038080描述的4{4-[3<4-氯-3-三氟甲基苯基) -脲基]-3-氟苯氧基}-吡啶-2-羧酸甲基翻安是拥有多种活性的有效抗癌和抗血管 生成剂，其活性包括对VEGFR、 PDGFR、 raf、 p38、禾口/或flt-3激^f言号舒 的抑制活性。RAS/RAF/MEK/ERK路径与细胞的增殖、分化和转化有关，并且 涉及多种癌症。PI3K/AKT信号传导路径是细胞里另一条重要的生理路径。它调 节细胞外刺、激物，包括生长因子、细胞因子、细胞一细胞粘附和细胞一胞外基 体(Vi環co和Sawyers, Nat Rev Cancer, 2: 489-501, 2002, Downward^ Curr Opin Cell Biol, 10: 262-267,1998)。 AKT路^[以乎在许多类型的人类癌症中表现活跃 (Nicholson和Anderson^ Cell Signal, 14: 381-395,2002)。发明描述本发明提供了一种药物组合，组合物，以及方法，用于治疗疾病和病症， 包括，但不局限于，细胞增殖障碍(例如癌症)、炎症、免疫调节障碍、以及与 异常或不需要的血管生成有关的病症。所述药物组合包括式I化合物和至少一种 作为PI3K/AKT信号传导路径抑制齐啲第二化合物。所述方法可包括，例如， 施予下述的二芳基脲化合物和信号传导路径抑制剂，其药学上可接受的盐，以 及其衍生物，等等。磷脂WL醇-3-激酶(PBK)和AKT (蛋白激酶B)信号传导路径调节许多 生物过程，包括细胞存活、细胞增殖、细胞生长和细胞运动。PI3K-AKT信号传 导的异常性促使多种疾病和病症发病，包括细胞增殖障碍(例如癌症)、炎症和 免疫调节障碍。许多生长和存活因子# 舌PBK家族成员以将脂质信号分子之一 PIP2特异 地转换成另一种脂质信号分子PI(3,4,5)P3 。磷酸化产物将Akt家族成员征集至内 质膜，激活它们的蛋白激酶活性。迄今为止，多种参与数种生物过程的Akt效 应物已经被确认。例如，通过使细胞凋亡机构组分磷酸化和失活，Akt激酶介导细胞存活。PI3K/AKT信号传导路径包括任何参与信号转导级联的成员或组分。 它们包括，但不限于，例如，PI3-激酶、Akt-激酶、FKBP 12， mTOR (雷帕霉 素的哺乳动物耙点；也称为FRAP、 RAFT1或RAPT1)， RAPTOR (mTOR的 调节相关蛋白)，TSC (结节状硬化复合体)，PTEN (磷酸酶和张力蛋白同源物) 和其下游的效应物。本发明的组合可用于治疗和/或预防和，活性中任一有关 的任何病症和/皿病。PI3K/AKT信号传导路径的抑制剂是抑制一个或更多，信号转导级联成 员的化合物。虽然这样的化合物可被认为是路径抑制剂，本发明包括这些抑制 齐,于治疗任意提及的疾病或病症的用途，而不管其作用机理或治疗效果如何 达到。实际上，已确定这样的化合物可具有不只一个的靶点，并且化合物公认 的初始活性可能不是当对受试者施予时该化合物在体内拥有的活性，或借此化 合物能达到它的治疗功效的活性。因而，化合物作为路径或蛋白靶点(例如， Akt或mTOR)抑制齐啲记载表明化合物拥有这样的活性，但决不是用来限制 当化合物作为治疗齐喊预防齐M顿时具有那样的话性。AKT家族成员的例子包括Aktl、 Akt2 (通常在肿瘤中过表达；Bellacosa 等,J. C朋cer, 64:280-285,1995 )和Akt3 。PBK家族成员的例T^括pll0-a、 pllO-P、 pllO-S和pllO-Y (催化的)。PBK/AKT信号传导路径抑制剂的例子包括，但不限于，例如，FTY720(例 如,Lee等,C頻"oge"一 25(12):2397國2405， 2004);UCN國01 (例如,Amomphimoltham等,C//" C朋cer W战，10(12 Pt 1):4029-37, 2004)。磷脂蘭酉l"3-激酶(PI3-激酶)抑制齐啲例子，包括，但不限于，例如塞来考昔及其类似物，例如OSU-03012和OSLW)3013 (例如,Zhu等,C朋cer 版，64(12):4309誦18,2004);3-脱氧-D-myo-肌醇类似物(例如，美国专利申请No. 20040192770;Meuillet 等,O co/. 14:513-27,2004)，例如PX-316;2'-取代3'-脱氧-磷脂酰myo-肌醇类似物(例如,Tabellini等,&J//wm加/., 126(4):574誦82,2004);稠合的杂芳基衍生物(美国专利No. 6,608,056);3-(咪唑并[l,2-a]吡啶3-基)衍生物(例如，美国专利Nos. 6,403,588和6,653,320);Ly294002 (例如，Vlahos等， /说o/" C72m., 269(7) 5241-5248,1994); 喹UgJl1u4-鹏衍生物，例如IC486068 (例如，美国专利申请No. 20020161014; Geng等,C謹rRes., 64:4893-99,2004);3-(杂)芳氧,代的苯辨b)噻吩衍生物(例如，WO 04 108715;也如W004菌13);绿胶霉素，包括半合成绿胶霉素，例如PX-866 (醋酸 (lS,4E,10Rai民13S,14R;K4-二烯丙基氨基亚甲基-6-羟基-l-甲氧基甲基-10,13-二 甲基-3,7,17-三氧代-l,3,4，7,10,ll,12,13，14,15,16,17-十二氢-2-氧杂-环戊烷并[a]菲 -ll-基酯)(例如，Me等,M / C朋cer 77^, 3(7):763-72, 2004;美国专利申请No. 20020037276;美国专利5,726,167);和渥曼青霉素及其衍生物(例如，美国专利Nos. 5,504,103; 5,480,906， 5,468,773; 5,441,947; 5,378,725; 3,668,222)。Akt-激酶(也称为蛋白激酶B)抑制齐啲例子，包括，但不限于，例如Akt-l陽l (抑制Aktl) (Bamett等，说oc/2，.人385 (R2):399408,2005);Akt國l-1,2 (抑制Akl禾卩2) (Barnett等，说ocAe肌人385 (Pt2):399408, 2005);API-59CJ-Ome (例如,Jin等,& / C朋ca, 91:1808-12,2004 );l-H-咪唑[4,5^c]吡啶基化合物(例如，WO05011700);口引哚-3-甲醇及其衍生物(例如，美国专利Nos.6,656,963; Sarkar和Li,W敏， 134(12 Suppl): 3493S-3498S, 2004);哌立福辛(例如,干扰Akt膜定位；Dasmahapatra等，C/^.O^cer尺战， 10(15):5242-52,2004);磷脂藤醇醚脂质类似物(例如，Gills禾口 Dermis, 5"x戸W, /wvay餘 Dragy, 13:787-97,2004);曲西立滨(TCN或API-2或NCI鉴别剂NSC 154020; Yang等，C朋cw to, 64:4394-9,2004)。mTOR抑制齐啲例子包括但不限于，例如FKBP12增强齐(J;雷帕霉素及其衍生物，包括CCI-779 (替西罗莫司(temsirolimus))、RAD001(依维莫司;WO 9409010)、 TAFA93和AP23573;雷帕类似物(rapalogs)， 例如在WO 98/02441和WO 01/14387中公开的，例如AP23573、 AP23464、 AP23675或AP23841; 40-(2-羟乙萄雷帕霉素、40-[3-羟與羟甲萄丙酸甲酉旨]-雷帕霉素(也叫CC1779)、 40-表-(四唑基)"雷帕霉素(也叫ABT578)、 32-去氧 代雷帕霉素、16-imS氧基-32(S)-二氢雷帕霉素，和在WO 05005434中公开的 其它衍生物；在USP5,258,389、 WO94/090101、 WO92/05179、 USP5,118,677、 USP5,118,678、 USP5,廳,883、 USP5,151,413、 USP5,120,842、 W093/ll腦、 WO 94/02136、 WO 94/02485、 WO 95/14023、 WO 94/02136、 WO 95/16691 (例 如SAR943)、 EP 509795、 WO 96/41807、 WO 96/41807和USP 5,256,790中公 开的衍生物；含磷雷帕霉素衍生物(例如，WO 05016252); 4H-l-苯并吡喃-4-酮衍生物(例如，美国临时申请No. 60/528,340)。 临床ltH顿或临床4顿的化合物的例子，包括AP23573、 AP23841 、 CCI-779 和RADOOl。所关注的磷脂灘酉l"3-激酶(PI3-激酶)抑制齐鹏子是渥曼青霉素及其衍 生物或其类似物，以及渥曼青霉素和它的衍生物和类似物在药学上可接受的盐。 因此，本发明的方飽括i細式W的PI3-激,制剂式W化合物的衍生物或类似物、式W化合物的药学上可接受的盐和式W化合 物的衍生物^^似物的药学上可接受的盐。这里涉及的渥曼青霉素或"式W"化合物的衍生物和类似物意在包括美国 专利Nos. 5,504,103; 5,480,906, 5,468,773; 5,441,947; 5,378,725; 3,668^22中鉴别 的衍生物和类似物。式W化合物适合的衍生物和类似物包括a)式W1的化合物<formula>formula see original document page 10</formula>其中R是H (ll-脱乙酰氧難曼青霉素)或乙酰氧基和R'是CrC6烷基， b)式W2的A9,ll-脱氢脱乙酰氧ffl曼青霉素化合物其中R'是CVC6烷基，c)式W3的17( a -二氢-渥曼青霉素化合物W3其中R是H或乙酰氧基，和R'是CrC6烷基，以及R"是H、 d-C6烷基、-C(O)OH或画C(0)0-Q-C6烷基；d)式W4的渥曼青霉素化合物的开A-环的酸或酯其中l是H、甲基或乙基，和R2是H或甲基，或e)式W5的渥曼青霉素11-取代和17-取代的衍生物其中R4^K)或-0(CO)R6， R3^=0、 -OH或-0(CO)R6，齡R6独立地是苯基， CVC6烷基或取代的C广C6烷基，其中R4^O或-0PiR3不是KX与4{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-脲基]-3-氟苯氧對-吡啶-2-羧酸甲基,安对应的具有式(I)结构的化合物及其药学上可接受的盐、多晶型物、自l」化物、 水合物、代谢产物及药物前体，在此统称为"式I化合物"。式(I)如下0)当在此4顿的词语化合物、盐等的复数形式，这也表示单个的化合物、盐等等。术语Cw烷基，除非另夕卜指出，表雜有1到6个碳原子的直链、支繊 环状烷基，它可以是环状的、直线的或有一个或多个分支的支链。这样的基团 包括例如，甲基乙基正丙基异丙基、正丁基异丁基仲丁基、叔丁基、 环丙基、环丁基等等。本发明还涉及在此处公开的化合物的有用形式，例如药 学上可接受的盐和代谢产物。本发明还涉及式(I)化合物的药物前体。术语"药 学上可接受的盐"是指本发明化合物相对无毒的、无机或有机融Q成盐。例如， 参见S. M. Berge等，"Pharmaceutical Salts," J. Pharm. Sci. 1977,66,1-19。药学上 可接受的盐包括通过为形成盐而使起碱的作用的主化合物与无机酸或有机酸反 应所获得的那些盐，例如，盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、樟脑磺酸盐、 草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐和柠檬酸盐。药学上可接受的盐还包括那些其中 起酸作用的主化合物与适合的碱反应形成的盐，例如，钠盐、钾盐、钙盐、镁 盐、铵盐和胆碱盐。本领域的技术人员会进一步明白所要求化合物的酸加成盐 可由所述化合物和适合无机或有机酸经由许多已知方法中的任意一种来反应制 备。替代地，碱金属盐和碱土金属盐由本发明化合物和适合的碱经各种已知方 M反应制备。本发明化，代表性的盐包括常规的无毒盐和季铵盐，其例如由无机或有 机酸或碱经本领域熟知的技术形成。例如，这样的酸加成盐包括醋酸盐、己二 酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、 丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、肉桂酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡 糖酸盐(digluconate)、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚酸盐、 甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟乙烷磺 、衣康,、乳Kfc、马来酸盐、扁杉鹏盐、甲烷磺離、2-凝黄 酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、,萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙 酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、磺酸盐、酒石酸盐、硫氰酸 盐、甲苯磺酸盐、三氟甲磺酸盐和十一酸盐。 包括 ^属盐例如钾盐和钠盐、 ±金属盐例如钙盐和镁盐、和与有 机碱例如二环己基胺和N-甲基D-葡糖胺成的铵盐。财卜，碱性含氮基团可与诸 如如下的试剂^^化低级烷基卣化物例如甲基乙基、丙基和丁基氯化物、 溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如硫酸二甲酯、二乙酯和二丁酯；和硫酸二戊酯，长链卤化物例如癸基十二烷基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘 化物，芳基或芳烷基卤化物如苯甲凝味乙基溴化物以及其它单取代的芳烷基 卣化物或多取代的芳烷基靴物。符合本发明目的的,U化物是指那些化合物形式，其中^ U分子形成固体 复合物，并且包括但不限于如乙醇和甲醇。水合物是，U化物一种特殊的形式，其中翻u針是水。某些药理学活性剂可进一步用不稳定的官能团修饰，所述官能团在体内给药后裂解得至姆体活性齐诉口药理学非活性的衍生基团。这些衍生物，通称为药 物前体，可以被用于如改变活性齐啲理化性质，使活性齐脾巴向至特定组织，改 变活性剂的药代动力学和药效学性质，以及降低不良副作用。本发明的药物前 体包括，例如，^ 耐受性的适宜本发明化合物的酯，药学上可接受的酯例如 烷基酯，包括甲基、乙基、丙基异丙基、丁基异丁基或戊基酯。可f柳其它酯例如苯基-d-C5烷基酯，而 甲酯。在下列对jJfcfe题的综述中描述了可用于合成其它药物前体的方法，这些综 述并A^文以参考对这些合成方法的说明 Higuchi, T.; Stella^ V. ^ffi:尸rodrMgJ Zj Wove/ i>t<g i e"ve;7加fe亂ACS Symposium Series. American Chemical Society: Washington, DC (1975). 'Roche, E. B,. ￡>asi'gw 0/祝qp/wnnaceK"ca/尸ro戸"es fhrough /Voc/rK砂onrf Jna/ogs. American Pharmaceutical Association: Washington, DC (1977). SinkulA A. A.; Yalkowsky， S. H. J尸;iarw 197S, 181-210. Stella^ V. J.; Ch咖叫W. N. Naringrekar, V. H. Drw伊l诉S' 2P, 45S473. Bundgaard, H.^:Z)ew'g" o/iWrwgJ. Elsevier: New York (1985). Stella, V. J.; Himmelstein, K. J. / AT". CAem. l卵O,", 1275-1282. Han, H-K; Amidon, G. L. A4尸S尸/wr附ci' 2000,2,1 -11. Denny, w. A. ￡w. / a/ecf. CTj加.2001, 577-595. Wwmuth, C. G.于Wermuth' C. G.编辑T7ie尸mc"ce 0/MW"'"a/ C7iew'W/y Academic Press: San Diego (1996)， 697-715.Balant, L. P.; Doelker, E.于Wolff, M. E.编辑5"rge" ^A/edic,'"a/ C/je加's^)'爿"^ Discover;/ John Wiley & Sons: New York (1997), 949-982.本发明化合物的代谢产物包括式I化合物的氧化衍生物，其中一个或多个 氮被羟基取代；包括其中吡啶基团的氮原子以氧化物形式存在的衍生物，在本 领域中被称为l-氧化-吡啶，或其中吡啶基团的氮原子具有一个羟M(代基的衍 生物，在本领域中被称为l-羟基吡啶。l的制备方法本发明化合物可利用已知的化学反应和程序如在下列公开的国际申请wo2005/009961中描述的方法来制备。式I化合物已被表征为具有各种活性，包括抑制RafMEK/ERK路径、raf 激酶、p38激酶、VEGFR激酶、PDGFR激酶的活性。这些活性和它们用于治 疗各种疾病和病症的应用在例如WO 2005/009961中公开，所述文献以全文并入 本文作为参考。本发明的药物组合可被用来治疗与经包含所述组合的混配物调节的细胞路 径有关的或由经包含所述组合的混配物调节的细胞路径所介导的任意疾病或病症。这些路^m括但不限于信号传导路径，其中包含例如VEGFR、 VEGFR2、 RafMek/Erk、 Akt/PI3K、 MTOR、 PTEN、等等(还可参见上面的内容)。所述 药物组合可有效治疗与存在于这些路径中的一个或多个基因中突变有关的或由 存在于这些路径中的一个或多个基因中突变所介导的疾病，所述基因中突变包 括与癌症相关的PTEN、 ras、 Raf、 Akt、 PI3K等基因突变。如上所述，虽然所述化合物可知作为特定抑制剂，本发明包括任意的改善 或治疗效果，而不管作用机理或者该效果是如何实现的。所述药物组合可拥有一个或多个下列活性，包括，抗增殖；抗肿瘤；抗血 管生成；抑制内皮劍中瘤细胞的增殖；抗肿瘤形成；免疫抑制；免疫调节；促 凋亡等等。可根据本发明治疗的病症鹏病包括增殖障碍(例如癌症)、炎性病症、免 疫调节障碍、变态反应、自身免疫性疾病(例如类W显性关节炎，或多发性硬 化症)、异常或皿血管生成，等等。可以治疗任何肿瘤或癌症，包括但不限于，具有在raf、 VEGFR-2、VEGFR-3、 PDGFR-j3、 Flt-3、 ras、 PTEN、 Akt、 PBK、 mTOR中以及它们作为之中一部分的信号传导路径的上游或下游成员中的一个或多个基因突变的癌 症。肿瘤或癌症可用本发明的药物组合治疗，而不其作用机理。可以治疗任何 器官的癌症，包括但不限于，例如，结肠、月熟,、乳腺、前列腺、骨、肝、肾、 肺、睾丸、皮肤、力鄉突、胃、前列腺、卵巢、子宫、头和颈、血细胞、淋巴等 的癌症。可根据本发明治疗的癌症，特别包括，但不限于，脑肿瘤、乳腺癌、骨的 肉瘤(例如，骨肉瘤和尤因氏肉瘤)、未恶变支气管瘤、子宫内膜癌、成胶质细 胞瘤、血液恶性肿瘤、肝细胞癌、何杰金氏病、肾肿瘤、白血病、平滑肌肉瘤、 脂肪肉瘤、淋巴瘤、小脑发育不良性神经节细胞瘤病(Lhermitte-Duclosedisease)、 恶性胶质瘤、黑素瘤、恶性黑素瘤、转移瘤、多发性骨髓瘤、髓样化生、髓细 胞生成综合症(myeloplastic syndromes)、非小细腳市癌、胰腺癌、前列腺癌、肾 细胞癌(例如，晚肌晚期难治的)、横 肉瘤、软组织肉瘤、皮肤的鳞肚 皮癌和与缺失PTEN功能、活化的Akt有关的癌症(例如PTEN缺失肿瘤和带 ras突变的肿瘤)。乳腺癌的例子包括但不限于，侵入式导管癌、侵入式小叶癌、原位导管癌 和原位小叶癌。呼吸道癌症的例子包括但不限于，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、支气管腺 瘤和胸膜肺胚细胞瘤。脑癌的例T^括但不限于，脑干和hypophtalmic神经胶质瘤、小脑和大脑 星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、室管膜瘤和神经外胚层和松果体肿瘤。男性生殖器官的肿瘤包括但不限于前列腺和睾丸癌。女性生殖器官糊中瘤 包括但不限于，子宫内膜的、子宫颈的、卵巢的、阴道的和外阴的肿瘤，以及 子宫肉瘤。消化邀中瘤包括但不限于肛门的、结肠的、结肠飾的、 的、胆囊、 胃的、胰腺的、直肠的、小肠和唾液腺癌症。泌尿道的肿瘤包括但不限于膀胱、阴茎的、肾、肾盂、输尿管和尿道的癌症。眼部癌症包括但不限于眼内的黑素瘤和视网膜母细胞瘤。 肝癌的例子包括但不限于肝细胞性肝癌(有羽层状变体或没有羽层状变体15的肝细胞癌)、胆管癌(肝内胆液胆管癌)和混合型肝细胞啦旦管癌。舰癌包括，但不限于鳞状细胞癌、卡波济氏肉瘤、恶性黑素瘤、梅克尔细胞皮肤癌和非黑素瘤皮l^癌。头颈癌包括但不限于喉部、下咽的、鼻咽的和/或口咽的癌症，以及唇和口腔癌。淋巴瘤包括但不限于AIDS相关的淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、皮肤的T细胞淋巴瘤、何杰金氏病和中枢神经系统的淋巴瘤。肉瘤包括但不限于软组织的肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维性组织细胞瘤、淋巴 肉瘤和横纹肌肉瘤。白血病包括但不限于急性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、慢性 淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病，和毛细胞白血病。除了抑制肿瘤细胞的增殖以外，本发明的药物组合还可致4数中瘤退化，例 如，肿瘤尺寸或体内癌症范围的减小。雌用于黑素瘤、肾癌、肝细胞癌、非小细鹏市癌、卵巢癌、前列腺癌、 结肠 癌、乳腺癌劍熟l癌的治疗。血管生成相关的病症和障碍也可用本发明的药物组合治疗。血管生成不适 当的和异位表,生物体可以是有害的。许多病理学病症与额外血管的生长相 关。这些包括，例如，糖尿病视网膜病、新生血管性青光眼、银屑病、晶体后 纤维组织增生、血管纤维瘤、炎症、再狭窄，等等。此外，增加的血液供给与 癌性的和肿瘤的组织相关，刺激肿瘤生长，导劍中瘤ayi地增大和转移。而且， 肿瘤中新血管的生长提供了变节细胞脱离路线，结果是刺激转移和导致癌症扩 散。用于调节血管生成的有效系统，包括，例如，瘤外植物的新血管生成(例如，美国专利Nos. 5,192,744; 6,024,688)、鸡绒毛膜(CAM)测定(例如，Taylor 和Folkman, Nature, 297:307-312, 1982; Eliceiri等，J. Cell Biol., 140, 1255-1263, 1998)、牛毛细管内皮(BCE)细胞测定(例如，美国专利No. 6,024,688;Polverini, PJ.等,Methods Enzymol., 198:440450,1991)、迁移测定和HUVEC (人脐带血 管内皮细胞)生长抑制测定(例如，美国专利No. 6,060,449)。另外，用于调节 淋巴管发生的有效系统，包括，例如，兔耳模型(例如，Szuba等,FASEB J., 16(14): 1985-7， 2002)。适合的方法确定。例如，组织血管供应的程度典 型地是由评价存在于给定样品中血管的数量和密度来确定的。例如，微血管密度(MVD)可由在一个高倍显微镜年鹏下计算内皮簇的数量来评价，或者检测 微血管内皮特异性标记或其它生长性或已建立血管的标记，例如CD31 (也被称 为血小板-内皮细胞粘附分子或PECAM)。 CD31抗体可按常规免^M织学方法 做成免疫染色组织切片，例如记载在Penfold等,Br. J. Oral and Maxill. Surg., 34: 37"41;美国专利No. 6,017,949; Delias等，Gyn. Oncol.， 67:27-33,1997;和其他鄉 中。其它血管生成的标记包括，例如Vezfl(例如，Xiang等,Dev. Bio., 206:123-141， 1999)、血管生成素、Tie-l和Tie-2(例如,Sato等，Nature, 376:70-74， 1995)。本发明的药物组合还具有治疗或预防许多疾病进程的广泛治疗活性，所述 疾病例如炎性病症，冠状动脉再狭窄、肿瘤相关的血管生成、动脉粥样硬化、 自身免疫性疾病、炎症、某些与肾小球或系膜细胞增殖相关的肾脏疾病、和与 视网膜血管增殖相关的眼部疾病、银屑病、肝硬化、糖尿病、动脉粥样硬化、 再狭窄、血管移植再狭窄、支架内狭窄、血管生成、眼部疾病、肺纤维化、闭 塞性细支气管炎、肾小球肾炎、类Kf显性关节炎。本发明还提供人类和/或其它哺乳动物的一种或多种下列病症的治疗、预 防、调节视网膜病，包括糖尿病视网膜病、缺血性视网膜静脉闭塞、早产儿 视网膜病变和年龄相关性黄斑变性类视网膜病变；类风湿性关节炎、银屑病或 与表皮下7jC疱形成有关的大疱病，包括大疱性类天疱疫、多形性红斑或疱疹样 皮炎、风湿热、骨吸收、绝经后骨质疏松病、脓毒症、革兰氏阴性脓毒症、脓 毒性休克、内毒素性休克、中毒性休克综合症、全身炎症反应综合症、炎性肠 病(克罗恩病和渍疡性结肠炎)、雅里施-赫克斯海默反应、哮喘、成人呼P媳迫 综合症、急性肺纤维化病、肺结节病、过敏性呼吸系疾病、鄉市病、虹创市 病、肺泡损伤、肝衰竭、肝病的急性感染期、严重的酒精性肝炎、症疾(恶性 症原虫和脑型培)、非胰岛素 性糖尿病(NE)DM)、充血性心力衰竭、心脏 病后损害、动脉粥样硬化、阿耳茨海默氏病、急性脑炎、脑损伤、多发性硬化 症(多发性硬化里的脱髓鞘和少突神经胶质细胞的损失)、晚期癌症、淋巴恶性 肿瘤、胰腺炎、感染中的、炎症中的与癌症中的伤口治愈不良、骨髓增生异常 综合症、全身性红斑狼疫、胆汁性肝硬变、肠坏死、放射性损伤/施予单克隆 抗体后的毒性、宿主抗移植物排斥反应(局部缺血再灌注损伤和肾、肝、心和皮肤的同种异体排斥反应)、肺同种异^f多植物排斥反应(闭塞性支气管炎)或 全髋置换导致的并发症，以及传染性疾病，其选自结核病、消化性溃疡病期间的幽门螺旋杆菌感染、克氏锥虫感染导致的Chaga氏病、大肠杆菌感染导致的 志贺样毒素作用、葡萄球菌感染导致的肠毒素A作用、脑膜炎球菌感染和来自 博氏疏螺旋体、梅毒螺旋体、巨细胞病毒、流感病毒、泰勒脑脊髓炎病毒、人 免疫缺陷病毒(HIV)的感染、乳头瘤、胚神会，质瘤、卡波济氏肉瘤、黑素瘤、 肺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状上皮细胞癌、星形细胞瘤、头癌、颈癌、膀胱 癌、乳腺癌、结肠直肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、胃癌、肝细胞癌、白血病、淋 巴瘤、何綠氏病、Burkitt氏病、关节炎、类风湿性关节炎、糖尿病性视网膜 病、血管生成、再狭窄、支架内再狭窄、血管移植物再狭窄、肺纤维化、肝硬 化、动脉粥样硬化、肾小球肾炎、糖尿病性肾病、微血管血栓综合症、移植物 排斥、银屑病、糖尿病、创伤愈合、炎症和神经变性疾病、超免疫障碍、血管 瘤、心肌血管发生、冠状和大脑并行血管化、局部缺血、角膜疾病、虹膜红变、 新生血管性青光眼、早产儿黄斑变性视网膜病、创伤愈合、溃疡螺旋杆菌相关 疾病、骨折、子宫内膜异位、糖尿病病症、猫抓热、甲状腺肥大、烧伤后的哮 喘或水肿、仓怖、慢倒市病、中风、息肉、脓胞、滑膜炎、慢性和过敏性炎症、 卵巢，刺激综合症、肺与脑水肿、瘢痕瘤、纤维症、肝硬化、腕管综合症、 成人呼卩皿迫综合症、腹水、眼部病症、心血管病症、Crow-Fukase (POEMS) 病、克罗恩病、肾小球肾炎、骨关节炎、多发性硬化症、移植物排斥、莱姆氏 病、脓毒症、vonHippelLindau病、类天袍拖、佩吉特氏病、多囊性肾病、结节 病、甲^l^炎、高粘滞综合征、奥斯勒-韦伯-朗迪病、慢性闭塞啦市部疾病、辐 射、缺氧、先兆子痫、月经过多、子宫内膜异位、单纯性疱疹感染、缺血性视 网膜病、角膜血管生成、带状疱疹、人类免疫缺陷病毒、类痘病毒、原虫、弓 形体病、脊椎关节炎、强直性脊椎炎、Morbus Bechterew、禽流感(包括例如血 清型H5N1)，以及与肿瘤相关的渗液和7K肿。本发明提供了治疗任意，疾病和/或病症(包括那些所有弓l用参考文献中 駄的)的方法，包括施予有效量的式I化合物以及至少一种作为PI3K/AKT 信号传导路径抑制齐啲第二化合物(例如雷帕霉素或者雷帕霉素的衍生物或类 似物，或渥曼青霉素或者渥曼青霉素的衍生物或类似物)。"有效量"是化合物 育统效达到例如用以治疗疾病或病症的预期玄，的量。本发明还涉及抑制包含细胞的系统里血管生成的方法，包括给予该系统有 效量的这里描述化合物的组合。包含细胞的系统可以是体内系统，例如患者体内的肿瘤，分离的器官、组织或细胞，体外测定系统(CAM， BCE，等等)、 动t)^趣(例如，体内，皮下的，癌症模型)、需要治疗的主体(例如，遭受具 有血管原性成分的疾病例如癌症的主体；经历再狭窄的主体)等等。此外，药物组合可被施予用以调节下列一个或多^H1程细胞生长(例如， 增殖)、肿瘤细胞生长(包括，例如，分化，细胞存活，禾卩/或增殖)、肿瘤消退、 内皮细胞生长(包括，例如，分化，细胞存活，禾口/或增殖)、血管生成(血管生 长)、血管生成和/或血细胞生成(例如，增殖，T-细胞发育等等)。本发明的化合物或药物组合可以以任意形式经任何有效途径施予，所述有 效途径包括例如经口服、胃肠外、肠道、静脉、鹏内、表面、经皮(例如， 4細任意标准贴剂)、经眼、经鼻、局部、非口服例如气雾剂、吸入剂、皮下、 肌内、颊含、舌下、直肠、阴道、动脉内和鞘内等方式。它们可单独施予，或 与任意活性或非活性成分组合。它们可以以任意有效剂量施予，例如，约0.1 至约200 mg/kg总体重。本发明的组合可以在任意时间和以任意有效形式施予。例如，化合物可同 时施予，例如，作为单一组合物或剂量单位(例如，同时含有两个组分的药丸 或液体剂)，或者它们可作为分开的组合物但在同时施予(例如，其中一种药物 由静脉内给药，而另一种口服或肌内给药)。所述药物还可以在不同时间相继施 予。药剂可按照常规制成齐趣以在较长时段例如12-小时、24-小时的时段达到预期释放率。这可ffi3i添加4顿药齐诉tv或其具有适宜代谢半衰期的衍生物达到，和/或舰{顿控释剂型达到。药物组合可以是增效的，例如，其中药物的合用作用是这样的合用 媒 大于它们各自简单叠加的效果。因此，可减少施予药物的用量例如降低毒性或 其它有害或不利作用，和/或4顿与药剂单独纟好时所4顿的相同的量但能达到 更大的功效，例如，具有更有效的抗增殖和促凋亡作用。本发明的化合物或药物组合可进一步结合任意其它适合的、添加剂或药学上 可接受的载体。这样的添加剂包括任何已经皿的物质，也包括任何常规使用 的物质，仿j如那些在Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro禾口 Gennaro编辑,2(f版，Lippincott Williams & Wilkins, 2000); Theory and Practice ofIndustrial Pharmacy (Lachma等编辑，3"脱Lippincott Williams & Wilkins, 1986); Encyclopedia of Pharmaceutical Technology (Swarbrick禾口 Boylan编辑，2nd版, Marcel Dekker,2002)中描述的。这些可在本文中称作"药学上可接受的载体"， 以表称们与活性药物结合，并且可为治疗目的对患者安^i也施予。ltW卜，本发明的化合物或药物组合可以与其它活性齐蜮治疗(例如，方妇寸 疗法)共同施予，用来治疗任意，提及的疾病和/或病症。本发明提供了有效治疗疾病或病症的至少一种式I化合物和至少一种作为 PI3K/AKT信号传导路径抑制剂的第二化合物的组合。针对本发明目的的"组合" 包括-含有至少一种式I化合物和至少一种作为PI3K/AKT信号传导路径抑制剂 的第二化合物的单一组合物或剂塾-含有至少一种式I化合物和至少一种作为PI3K/AKT信号传导路径抑制剂 的第二化合物以便被同时或相继施予的组合包装；-包括至少一种式I化合物和至少一种作为PI3K/AKT信号传导路径抑制剂 的第二化合物的试剂盒，所超少一种式I化合物与所超少一种第二化合物作 为单位剂量或作为^m的单位剂量彼此分开包装，带有或不带有将它们同时或 相继施予的说明书；和-至少一种式I化合物和至少一种作为PI3K/AKT信号传导路径抑制齐啲第 二化合物的分开独立剂型可协同达到治疗效果，例如，同种疾病的预防或治疗， 当同时或相继施予。组合中每一种药齐啲剂量可参考其它和/或疾病鄉和/或疾病状态选择，以 达至顿期的治疗活性。例如，组合中活性剂可以固定组合存在和施予。"固定组 合"这里是指组分按提供所需功效的固定比例存在的药物形式。对于特定的患 者，这些量可常规地确定，其中利用不同的参数皿择适合的剂量(例如，癌 症的类型、患者的年龄、疾病状态、患者健康状态、体重等等)，或者量可为相 对标准的。组合可包含有效量的至少一种式I化合物和至少一种作为PI3K/AKT信号 传导路径抑制剂的第二化合物，其超盯比每一种化合物单独使用时更好的治 疗功效。该组合可有效引起肿瘤退化，使得疾病病情稳定，预防或减少转移， 或产生其它治疗点，其中治疗效果是当药剂单独使用时观察不到的，或者其中当施予该组合时观察到增强的效果。组合中每一种化合物的相对比例也可根据它们各自的作用机理和疾病生物学皿择。例如，在多于60^的人类黑素瘤患者中观察到B-RAF基因的激活性 突变，以及用于治疗黑素瘤的组合物可有利地以较作为P13K/AKT信号传导路 径抑制剂的化合物更强效的量包含式I化合物。比，来，对于与PI3K/AKT 信号传导路径中突变有关的癌症(例如，卵巢和乳腺癌)，在该信号传导路径中 具有活性的药剂可以相对于Re^MEK/ERK路径抑制剂更强效的量存在。每种化 合物的相对比例可在广泛地变化，本发明包括这样的用于治疗癌症的组合，其 中式I化合物和第二活性齐啲齐U量可例衍周节使得其中任一种以较高的量存在。组合物一种或多种药剂的释放也可以被控制以便在适当时当以单一剂型、 组合包装、试剂盒或在分开的^tl^剂型存在时可提供所需的治疗活性。测定本发明组合的活性可根据任意有效的体内或体外方法测定。 鰣活性激酶活性可使用常规的测定方法例行测定。激酶测定典型地包括激酶、底 物、缓冲液和检观孫统组件。典型的激酶测定涉及蛋白激酶与肽底物和ATP如 32P-AIP的反应，以产生磷酸化终产物(例如，当j柳肽底物时得到磷蛋白)。 所得终产物可4OT任意适合的方法检测。当使用方M性ATP，放射性标记的磷 蛋白可使用亲和膜或凝胶电泳AA^反应的，32P-ATP分离，然后在凝胶上使用放 射自显影法显现或用闪烁计数器检测。也可使用非方妇中性的方法。方法可利用 能识别磷酸化底物的抗体，例如，抗磷酸酪氨酸抗体。例如，激酶可和底物在 能有效使得WI酸化底物的条件下在ATP和激酶缓冲液存在下培养。反应混合 物可被分离，例如，经电泳，然后可测量底物的磷酸化，例如，4OT抗磷酸酪 氨酸抗体通过蛋白质印迹法进行。抗体可用可探测的标记进行标记，例如，酶 如HRP、抗生物素蛋白或生物素，化合发光试剂等等。其它方法可利用ELISA 模式，亲和膜分离、荧光偏振测定、发光测定等等。方M性模式的替代形式是时间解析的荧光共振能量转换(TR-FRET)。该方 法ilt盾标准激酶反应，其中底物例如生物素化的戮GluTyr)在ATP存在的情况下 经蛋白激,酸化。然后终产物可用铕螯合物磷^f寺异性抗体(抗磷酸酪氨酸 或磷酸丝氨^苏氨酸)和抗生物素蛋白链菌素-APC，其可结合生物素化的底物。这两种组分可在空间上结合，并且能量从磷酸特异性抗体转移到受体(SA-APC)，在均一模式(homogeneous format)中产生荧光读数。 Ra麵EK/ERK活性c-Raf激酶测定可由Lck激酶激活(磷酸化)的c-Raf酶 行。Lck-活化 的c-Raf (Lck/c-Raf)在S 昆虫细胞中经用在多角体蛋白启动子的控制之下表达 GST-c-Raf (从氨基酸302至鎮基酸648)和Lck (錄)的杆状病毒共感染细胞 产生。所述杆状病毒两者 2.5的感染复数下使用，并且在感染后48小时收 集细胞。在Sf9昆虫细胞中通过在5的感染复数下用表达GST-MEK-1 (全长)融合 蛋白的杆状病毒感染细胞并且在感染后48小时收集细胞，从而产生MEK-1蛋 白。对GST-c-Raf302448和GST-MEK-1使用相似的纯化步骤。转染细胞以每mL 100mg湿细胞生物质悬浮于含有lOmM磷勝内、140mM 氯化钠pH 7.3、 0.5%Triton X-100和蛋白酶抑制剂混合物的缓冲液。细胞用 Polytron匀浆器进行 并30,000g离心30倂中。30,000g上层清液被供应到 GSH-琼月旨糖上。树脂用含有50mM Tris， pH 8.0， 150 mM NaCl和0.01% Triton X-100的缓冲液洗涤。 GST-标记的蛋白被含有100mM谷胱甘肽，50mMTris， pH 8.0,150 mMNaCl和0.01% Triton X-100的溶液洗脱下来。纯化的蛋白透析到 含有20 mM Tris， pH 7.5,150 mM NaCl和20%丙三醇的缓冲液中。逸验化合物在DMSO中稀释，JOT三倍连纟^^释度，至典型地50uM到 20 nM的贮备M物(例如，测定中最终浓度可从1 u M到0.4nM)。 c-Raf生物 化学测定是在96-孔Costar聚丙烯板(Costar3365)中用方妇寸性过滤垫测定完成 的。板装载了 75 u L含有50 mMHEPES pH 7.5， 70 mMNaCl, 80 ng的Lck/c-Raf 禾口lugMEK-l的溶液。接着，在ATP添加之前，往反应中加入2uL经连繊 释的M化合物。反应以25 y L含有5 u M ATP禾卩0.3 u Ci[33P]-ATP的ATP 溶繊始。板被密封并且在32"培育1小时。反应ffi31加入50 tU的4 %磷酸 猝灭，并用WallacTomtec收集器收集到P30过滤，erkinElmer)上。过滤垫先 用1%磷酸冲洗，然后用去离子H20冲洗。过滤垫在微波炉中千燥，浸渍在闪； 烁液中并用Wallac 1205 Betaplate计数^(WaJlac Inc., Atlanta GA U.S.A.)读取。 结果用抑制百分lt^示。。/。抑制二[100-(Tibm)]x100，其中Tib=(存在抑制剂情况下每併中计数)—(背景) Ti=(无抑制剂情况下每辦中计数)—(背景)Raf的活性还可由它起始导致ERK磷酸化(即ra^MEK/ERK)(这产生磷 酸-ERK)的级联的能力监测。Bio-Plex磷酸-ERK1/2免疫测定法可按如下步骤 进行4細激光流式细胞计量平台的96-孑L磷酸-ERK (pERK)免疫测定法已经建 立，用以测量细胞系中基部pERK的抑制。在完全生长培养基中，在96- LM 滴定板中以每孔50，000个细胞涂覆MDA-MB-231细胞。针对i&验化合物对基 部pERK1/2抑制的^T媒，在涂顧的第二天，将MDA-MB-231细胞转移至含 0.1%BSA的DMEM中并用在O.l %DMSO中1:3稀释至最终浓度3mM到12nM 的试验化合物培育。细胞用i(验化合物培育2h，冲洗，然后在Bio-Plex全细胞 溶解缓冲液A中溶解。样品用缓冲液B l:l(v/v)稀释并直接转移至分析板或在-80 °C冷冻直到处理。50 mL稀释的MDA-MB-231细胞溶胞产物用约2000个和抗 -ERK1/2抗体连接的5 Bio-Plex珠培育，室温下在振荡器上过夜。第二天， 进行生物素化的磷酸-ERK1/2夹心式免疫测定，在每个培育期间冲洗珠三次并 且然后使用50mLP&抗生物素蛋白链菌素作为显影试剂。PERK1/2的相对荧光 单位M用高灵i^Bu)-Plex流式细胞(探针)计数25个珠来检测。ffl3i将未 M细胞取作最大值O以及将不含细胞瞎况(只有珠)取作背景来计算IC5。磷脂WW3鄉活性PKB活性可例行地确定，例如，使用商业上可获得的试剂盒(例如， Perkin-Elmer,FlashPlate平台)，Frew等,^2"c朋ceri 战，14(6B):2425-8,1994。还 可参见，PKI3抑制剂下列举的出版物。Akt活性AKT可如在WO 05011700中描述从表达His-标记AKTl(aa 136480)的昆 虫细胞中分离出来。表鄉胞4顿Polytron (5ml溶解缓冲漱g细胞)在25mM HEPES， 100mMNaC1^20mM咪唑(pH7.5)溶解。细胞碎片经28,000xg离 心30併中后去除。上清、 过4.5 滤膜滤过，然后装在预先用溶解缓冲液 平衡过的镍螯合性柱上。柱子用5倍柱体积(CV)的溶解缓冲、液洗涤，然后用 5CV的20Q/。缓冲液B洗涤，其中缓冲液B是25mMHEPES， 100mMNaC1,300 mM咪唑；pH7。 His-标记的AKTl(aal36480)用10CV20-100。/。缘性梯度的缓23冲液B洗脱。将His-标记的AKT1 (136480)洗脱级分集中并用缓冲液C三倍稀 释，其中缓冲液C是25 mM HEPES, pH 7 。样品然后M51用缓冲液C预先平衡 过的Q-琼脂糖HP柱迸行层析。柱子用5 CV缓冲液C洗涤，然后用5CV10 %D、 5CV20%D、 5CV30%D、 5CV50。/。D和5CV的100。/。D分步洗脱；其中 缓冲液D是25 mM HEPES, 1000 mM NaCl; pH 7.5 。含有His4gi己的AKTl(aa 136480)的级分被集中，并在10-kDa舒量筛截 ^i器中浓縮。His-标记的AKTl(aa 136480)M31用25 mM HEPES、 200 mM NaCl、 lmMDTT (pH7.5)预先平衡过的S邵erdex 75 ^繊过滤柱进行层析。 His4斜己的AKTl (aal36480)级分4OTSDS-PAGE和质谱法检测。蛋白质被集 中、綠并在80。C储藏。His-标记的AKT2 (aa 138481)和His-标记的AKT3(aa 135479)可以相似方 式被分离并纯化。AKT酶测定化合物可在底物磷酸化观啶中被测试AKT蛋白丝氨酸激, 制活性。该测定检测小分子有机化合物抑制肽底物的丝氨酸磷酸化作用的育叻。 底物磷酸化测定^ffl AKT1 、 2或3的催化结构域。AKT 17 2和3也可从Upstate US入Inc Mil商业途径获得。该方法观糧分离的酶催化Y-磷^/人ATP转移到生 物素化合lttt (生物素-ahx-ARKRERAYSFGHHA-醐安)丝氨酸-72残基上的能 力。底物磷酸化可M31在W0 05011700中描述的步骤检测。在384孔U-底白板上进行测定。10nM活化的AKT酶于室温下以含有 50mM MOPS, pH 7.5, 20 mM MgCl2， 4uM ATP, 8uM肽,0.04 uCi [g-33P] ATP/孑U 1 mM CHAPS, 2 mM DTT和1 u 1于100%DMSO中的试验化合物的20ul测定体 积培育40併中。通过加入50 u 1 SPA珠混合物(不含Mg2+和Ca2+的Dulbecco's PBS, 0.1 % Triton X國濯，5 mM EDT入50 u M ATP, 2.5mg/ml抗生物素蛋白链菌 素包覆的SPA珠)使反应停止。将板密封，使珠静置过夜，然后将板在Packard Topcount驢反应板闪烁计数tl(Packard Instrument Co., Meriden, CT)上计数。齐廿量响应 可以％对照(用数据还原公式10(^(U1《2)/(C1-C2)计算出) 对化合物浓度(其中U是未知值，CI是对DIVISO获得的平均对照值，以及 C2就0.1MEDTA获得的平均对照值)绘图。将娜拟合y = ((Vmax * x) K + x))描述的曲线，其中Vmax是上渐进线，而K是IC50。细胞增殖细胞增殖测定的例子在下列实施例中描述。然而，增殖测定可M招可适 合的方法进行。例如，乳腺癌细胞增殖测定可按如下步骤进行。其它细胞类型可替代MDA-MB-231细胞系。人类乳腺癌细胞(MDAMB-231,NCI)在添加了 1()Q/。热灭活FBS的标准培养 S(DMEM)中，在37"C、 5% CO2 (vol/vol)中在增湿的培养箱中培养。细胞以 3000细鹏每孔的密度在90 P1生长培养基中涂敷于96 L培养皿。为了测定Toh CTG值，涂敷24小时后，将100 "的CellTiter^lo荧光试齐O(Promega)加入每 个孔中并且在室温培养30辦中。在Wallac Victor n仪器上记录荧光。CellTiter-Gl0 荧光试齐特鄉胞溶解和与存在的ATP量成比例的荧光信号生成，该信号是直 接与存在细胞的数量成正比的。i^验化合物溶于100%DMSO以制备10 mM储备液。储备、，一步在生长 培养基中1:400稀释，以在0.25% DMSO里产生25 n M试验化合物的工作储备 液。微化合物在生长培养基中连续稀释，所述生长培养基含有0.25%画O 以在所有孔中保持恒定的-DMSO浓度。60 P L稀释的试验化合物添加到*培 养孔中以达到ISOuL的最终体积。具有和没有^H(验化合物的细胞培养72 小时，此时分别测量ATP荧光，如前面所述，产生Tv2h值。任选地，ICs。值可 4柳化合物浓颇百分比抑制值以最小二乘法分析程序来确定。%抑制=[1 -(丁7211繊『丁()11)/(17211对勝rT。h)] x 100，其中Tv2h^ffl二在试验化合物存在下在72小时的ATP 4 性发光Tm滩勉二在没有it验化合物存在下在72小时的ATP 1 性发光Toh^在时间为0时的ATP依赖性发光血管生成一个研究血管生成的有用模型是如下的观察结果:当将补充有生长因子(如FGF-1)的经重构的(reconstituted)基膜基质例如Matrigel皮下注入宿主动物时， 内皮细胞被召集SA所述基质，在数琉形成新血管。参见，例如，Passaniti等, 丄W. /wve对.，67:519-528,1992。通过在不同时间采样提取物，血管生成可暂时阻 断，从而能识别涉及所有血管生成阶段的基因，所述阶段包括例如内皮细胞迁 移进AS质，内皮细胞调配至血管生成路径，细胞伸长和囊样空间的形成，和 包含含红细胞的被连接的线性结构的功能毛细管的^:。为了稳定生长因子和/ 或减缓它从基质的释放，可使生长因子与肝素或另一稳定齐嗨合。基质还可周斯性地再注入以生长因子，以便提高和延伸血管生成进程。其它研究血管生成的有用系统，包括，例如，肿瘤外植物的新血管形成(例如，美国专利Nos. 5,192,744; 6,024,688)、鸡绒毛膜(CAM)测定(例如，Taylor 和Folkm叫Nature, 297:307-312, 1982; Eliceiri等，J. Cell Biol., 140, 1255-1263, 1998)、牛毛细管内皮(BCE)细胞测定(例如，美国专利No. 6，024,688; Polverini, P. J.等，Methods Enzymol., 198: 440"450, 1991)、迁移测定、HUVEC (AJW 带血管内皮细胞)生长抑制测定(例如，美国专利No. 6,060,449)。 本发明提供一个或多个下歹肿寺征。一种治疗任意上述疾病和/或病症的方法，包括施予有效量的式I化合物和 作为PBK/AKT信号传导路径抑制剂的第二化合物。一种调节(例如，抑制) 一种或多种，活性的方法，包括施予有效量的 式I化合物和作为PI3K/AKT信号传导路径抑制齐啲第二化合物。包含式I化合物和作为PBK/AKT信号传导路径抑帝跻啲第二化合物的组合。无需进一步的详细描述，相信本领域技术人员能够利用上述说明以最充分 的程度利用本发明。下列 的特定实施方式，因而将被理解为仅仅是说明性 的，并且不是以任何方式限制所述公开的其余部分。在上面和下面引述的所有 专利和出版物的完整公开以其全文并入本文。
权利要求
1. 一种组合，包含式I化合物id="icf0001" file="S2006800185177C00011.gif" wi="105" he="32" top= "69" left = "39" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>或其药学上可接受的盐、多晶型物、溶剂化物、水合物、代谢产物或药物前体形式，和至少一种作为PI3K/AKT信号传导路径抑制剂的第二化合物。
2. 如权利要求1所述的组合，其中所述的第二化合物是塞来考昔、 OSU陽03012、 OSU-03013、 PX誦316、 2'-取代3'國去氧-磷脂酰基國myo肌醇衍生物、 3-(咪唑并[l,2-a]吡啶-3-基)t行生物、Ly294002、 IC486068、 3<杂)芳氧 (代的苯 ，)噻吩衍生物、PX-866、哌立福辛、曲西立滨、FKBP12增强剂、磷脂 醇,旨质类似物、渥曼青霉素或雷帕霉素或其衍生物，或其药学上可接受的盐。
3. 如权利要求l所述的组合，其中所述的第二化合物是式W的渥曼青霉 素化合物式W渥曼青霉素化合物的衍生物或类似物、式W渥曼青霉素化合物的药学上 可接受的盐、或式W渥曼青霉素化合物的衍生物或类似物的药学上可接受的盐。
4.如权利要求3所述的组合，其中所述的式W的衍生物^^似物选自 a)式W1化合物<formula>formula see original document page 3</formula>其中R是H (ll-脱乙酰氧M曼青霉素)或乙酰氧基和R'是CrC6烷基， b)式W2的△ 9,11 -去氢脱乙酰氧M曼青霉素化合物其中R'是CVC6烷基，c)式W3的17( a -二氢-渥曼青霉素化合物其中R是H或乙酰氧基，和R'是d-C6烷基，和R"是H、 d-C6烷基、-C(O)OH或-C(0)OQ-C6烷基；d)式W4的渥曼青霉素化合物的开A-环酸或酯其中R!是H、甲基或乙基，和R2是H或甲基，或e)式W5的渥曼青霉素11-取代和17-取代衍生物其中R4是O或^0(CO)R6， R3是K)、 -OH或-0(CO)R6，旨R^te地^ 基d-C6烷基或取代的d-C6烷基，其中R4^O或-0H， R3不是0。
5. 如权利要求l所述的组合，其中所述的第二化合物是Akt-激,制剂。
6. 如权利要求1所述的组合，其中所述的第二化合物是Akt-l-l 、Akt-1-1,2、 API-59CJ-Ome、 l-H-咪唑并[4,5-c]吡啶基衍生物、吲哚-3-甲醇及其衍生物、哌 立福辛、fl脂Wl醇醚脂质类似物、曲西立滨或其药学上可接受的盐。
7. 如权利要求l所述的组合，其中所述的第二化合物是mTOR抑制剂。
8. 如权利要求1所述的组合，其中所述的第二化合物是雷帕霉素、替西 罗莫司、依维莫司、AP23573、 AP23675、 AP23464、 AP23841、 40-(2-羟乙基) 雷帕霉素、格p-羟與羟甲萄丙酸甲酯]-雷帕霉素、恥-表-(四唑基)-雷帕霉素、 32-脱氧代雷帕霉素、或16-imS氧基-32(S》二氢雷帕霉素、SAR943或其药学 上可接受的盐。
9. 如禾又利要求1所述的组合，包含式(I)化合物和渥曼青霉素。
10. 如禾又利要求1所述的组合，包含式(I)化^t)和雷帕霉素。
11. 如权利要求1-10任意一项所述的组合，其中组合中活性成分的量是 增效的。
12. 如权利要求1—11任意一项所述的组合，其用于治疗癌症。
13. 如权利要求12所述的组合，其中所述的癌症是黑素瘤、肝细胞癌、 肾细胞癌、非小细鹏市癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠飾癌、乳腺癌劍夷腺癌。
14. 一种治疗需要治疗的受试者癌症的方法，包括施予有效量的式I化合物<formula>formula see original document page 5</formula>或其药学上可接受的盐、多晶型物、 1」化物、7K合物、代谢产物或药物前体，和作为PBK/AKT信号传导路径抑制齐啲第二化合物。
15. 制造用于治疗癌症的权利要求1 一ll任意一项所述的组合的方法。
16. 如权利要求15所述的方法，其中所述的癌症是黑素瘤、肝细胞癌、 肾细胞癌、非小细鹏市癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠飾癌、乳腺癌^l夷腺癌。
全文摘要
本发明涉及用于治疗癌症的药物组合物和组合，包括二芳基脲化合物例如4{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-脲基]-3-氟苯氧基}-吡啶-2-羧酸甲基酰胺和PI3K/AKT信号传导路径抑制剂。PI3K/AKT信号传导路径抑制剂包括PI3抑制剂{像塞来考昔、绿胶霉素、渥曼青霉素}，AKT激酶抑制剂{像哌立福辛、曲西立滨}和mTOR抑制剂{像雷帕霉素类药物替西罗莫司和依维莫司}。
文档编号A61K31/4412GK101257903SQ200680018517
公开日2008年9月3日 申请日期2006年5月13日 优先权日2005年5月27日
发明者I·伯纳德, U·朔伊林 申请人:拜耳医药保健股份公司