专利名称：黄酮衍生物及制备和用途的制作方法
技术领域：
本发明属有机化合物的合成，涉及多取代黄酮衍生物的制备方法，尤其涉及2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的制备方法，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
黄酮衍生物具有抗肿瘤作用。自1971年科学工作者研究揭示槲皮素(3′，4′，5，7-四羟基黄酮)有一定的抗肿瘤活性后，人们陆续报道了多种具有抗肿瘤活性的黄酮化合物。2003年X.Zheng等报道了一系列B环含三氟甲基取代基的黄酮衍生物具有抗肿瘤作用，其中5，7-二丙氧基-2-(4’-三氟甲基苯基)-苯并吡喃-4-酮对人胃癌细胞SGC-7901活性最强，IC50值为2.7μM。该文所提供的黄酮衍生物的结构特点是B环的4’-位含三氟甲基取代基，A环的5-位单取代或5，7-位二取代含氧功能基(羟基和烷氧基)。作者仅对这些化合物进行了初步的构效关系探讨，而未对其抗肿瘤作用的机制作进一步的深入研究；2005年Y.K.Rao等报道一系列的多甲氧基黄酮衍生物对人淋巴癌细胞、人前列腺癌细胞和人结肠癌细胞均具有抑制作用，IC50值的范围为15-100μM，而对正常细胞几乎无影响(IC50值＞200μM)。细胞周期的分析研究表明部分化合物能将细胞周期阻滞于G2/M期，因此他们可作为特异的G2/M期阻滞先导物。2007年S.Li等报道了多甲氧基黄酮和羟基甲氧基黄酮对人白血病细胞具有中等程度的抑制作用，其中2个化合物显示了较强的抑制活性，IC50值分别为2.07和4.16μM，并能诱导细胞凋亡。
发明内容
本发明的目的是提供一类结构新颖的未见文献报道的含有氮原子的黄酮衍生物(2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物)。本发明是在黄酮母核的8-位上引入不同的胺亚甲基结构，合成了一系列的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物。本发明提供的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的结构通式为
其中R1为1至3个碳原子的直链或支链烷烃；Ar为无取代、单取代、二取代或三取代的苯环，苯环上的取代基可为氢原子、卤原子、羟基、含1至6个碳原子的直链或支链的烷基、含1至3个碳原子的直链或支链的烷氧基；R2是开链或环状的叔胺结构NR3R4，其中R3和R4可以是相同或不同，它们可以是甲基、乙基，含1-4个碳原子的烷基醇及其酯，含1-4个碳原子的羧酸及其酯，含1-4个碳原子的烷基胺，或R3、R4分别与碳、氧及氮原子环合成五元或六元环。
本发明的另一个目的是提供一类2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的制备方法，通过以下步骤实现(1)化合物I在碱性条件下经烷基化试剂的选择性醚化可得到化合物II，经过重结晶可得纯品。反应通常在极性溶剂如丙酮中进行，常用的碱性物质有碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾，反应温度可以在10-30℃之间进行，通常在室温下进行；(2)化合物II在碱性条件下与芳香醛缩合得到化合物III，反应通常在质子性混合溶剂中进行，如甲醇-水、乙醇-水、异丙醇-水等，常用的碱有氢氧化钠、氢氧化钾、氢化钠等，反应温度可以在10-30℃之间进行，通常在室温下进行，所得粗品可通过重结晶精制；(3)所得的III在质子性溶剂中，在酸和甲醛的存在下与仲胺反应生成化合物IV，所用的质子性溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇等，所用的甲醛可以为甲醛水溶液、三聚甲醛和多聚甲醛等，反应通常在50-90℃之间进行，所得产物经过柱层析可得纯品；(4)化合物IV在极性溶剂中，经碘催化环合得到化合物V，反应所用的极性溶剂为二氧六环、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲亚砜中任一种。反应温度可以在10-100℃之间，通常在室温进行，所得产物经柱层析分离可得纯品；(5)化合物V经过脱烷基化得到化合物VI，常用的脱烷基化试剂选用路易斯酸如氢溴酸、浓盐酸、三氯化铝、三溴化铝、三甲基碘硅烷、三氯化硼、三溴化硼中任一种，反应在极性溶剂中进行，所用的极性溶剂可以为二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈中任一种，反应温度为10-80℃，粗产物经过柱层析分离可得到纯品。
化合物I可直接购买，化合物II可按文献方法(K.Y.T.Juntend et al，EP0292576)制得，化合物III可按文献方法(Xiaoyong Bu et al，Synthesis，1997，11，1246-1248)制得。
本发明的合成路线 在(HCHO)n中，当n为1时是甲醛，n为3时是三聚甲醛，如果没有特别说明，则(HCHO)n为多聚甲醛。
本发明的又一个目的是2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。初步的药理实验发现它们对多种肿瘤细胞株，包括Bel-7402，PC-3，ECA-109，A-549，HL-60和MCF-7等均有一定的体外抑制增殖作用，黄酮母核8-位具有开链叔胺结构的化合物对HL-60细胞有选择性的抑制作用，其中Vg对HL-60细胞具很强的抑制活性，IC50值为0.6μM；化合物VIc的作用尤为突出，对6种肿瘤细胞均表现出很强的抑制活性，IC50值分别为24.4，10.9，12.7，9.1，8.7，13.1μM，具广谱的抗肿瘤活性。另外对部分化合物进行细胞周期素依赖性激酶1/周期素B的抑制活性测定，结果表明部分化合物确有抑制细胞周期的作用，如化合物VIc对细胞周期依赖性激酶1/周期素B的抑制IC50值为低微摩尔水平(IC50值为0.2052μM)，说明这些化合物抑制肿瘤细胞生长的作用可能与其阻滞肿瘤细胞周期的进程有关。
本发明的特点是以具有活性的黄酮为先导化合物，在其母核结构的8-位引入胺亚甲基而得到的2-取代苯基-5，7-含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物。这是一类结构全新的化合物，初步的药理活性筛选试验表明这些化合物具有一定的抗肿瘤活性，有些化合物的选择性很好，有些化合物的抗瘤谱较广，对细胞周期依赖性激酶1/周期素B的抑制活性表明这些化合物的抗肿瘤活性可部分归因于它们对细胞周期的抑制作用。
具体实施例方式
本发明结合实施例作进一步的说明。以下的实施例是说明本发明的，而不是以任何方式限制本发明。
实施例1、2’-羟基-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(III)参照文献方法(Xiaoyong Bu et al，Synthesis，1997，11，1246-1248)制得。
m.p.123-124℃1HNMR(CDCl3)δ14.20(s，1H)，8.14(d，1H，J＝15.6Hz)，7.87(d，1H，J＝15.2Hz)，7.68-7.70(m，1H)，7.42-7.44(m，1H)，7.26-7.31(m，2H)，6.11(d，1H，J＝2.4Hz)，5.96(d，1H，J＝2.4Hz)，3.90(s，3H)，3.84(s，3H)。
实施例2、2’-羟基-3’-(四氢吡咯-1-基-甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVa)将化合物III 1.59g(4.99mmol)、甲醛水溶液1.24g(15.30mmol)、四氢吡咯0.80g(11.25mmol)、甲醇13ml和盐酸数滴加入反应瓶中，回流2h。冷却，减压回收溶剂，加水稀释，碱化，二氯甲烷提取，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压回收溶剂，柱层析分离得到黄色固体1.00g，收率50％，m.p.125-127℃。
1HNMR(CDCl3)δ8.05(d，1H，J＝15.6Hz)，7.70-7.68(m，1H)，7.54(d，1H，J＝15.6Hz)，7.43-7.40(m，1H)，7.30-7.28(m，2H)，6.02(s，1H)，3.94(s，2H)，3.93(s，3H)，3.91(s，3H)，2.86(brs，4H)，1.89(brs，4H)。
实施例3、2’-羟基-3’-(4-甲基哌嗪-1-基-甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVb)操作过程参见实施例2，只是用N-甲基哌嗪代替四氢吡咯。得到黄色结晶，收率56％，m.p.146-148℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.98(d，1H，J＝15.6Hz)，7.70-7.67(m，1H)，7.42(d，1H，J＝15.6Hz)，7.41-7.39(m，1H)，7.29-7.26(m，2H)，6.00(s，1H)，3.86(s，3H)，3.85(s，3H)，3.71(s，2H)，2.61-2.60(m，4H)，2.45-2.44(m，4H)，2.26(s，3H)。
实施例4、2’-羟基-3’-(N，N-二乙胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVc)操作过程参见实施例2，只是用N，N-二乙胺代替四氢吡咯。得到黄色结晶，收率71％，m.p.187-190℃。
1HNMR(CDCl3)δ14.71(s，1H)，8.17(d，1H，J＝15.6Hz)，7.80(d，1H，J＝15.6Hz)，7.70-7.68(m，1H)，7.45-7.44(m，1H)，7.33-7.31(m，2H)，6.06(s，1H)，4.17(s，2H)，4.07(s，3H)，3.99(s，3H)，3.12(q，4H，J＝7.0Hz)，1.47(t，6H，J＝7.0Hz)。
实施例5、2’-羟基-3’-(N，N-二甲胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVd)操作过程参见实施例2，只是用N，N-二甲胺代替四氢吡咯。得到黄色结晶，收率63％，m.p.188-190℃。
1HNMR(CDCl3)δ8.01(d，1H，J＝15.6Hz)，7.68-7.65(m，1H)，7.52(d，1H，J＝16.0Hz)，7.40-7.38(m，1H)，7.27-7.25(m，2H)，5.99(s，1H)，3.88(s，3H)，3.87(s，3H)，3.58(s，2H)，2.30(s，6H)。
实施例6、2’-羟基-3’-(N，N-甲乙胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVe)操作过程参见实施例2，只是用N，N-甲基乙基胺代替四氢吡咯。得到黄色固体，收率72％，m.p.179-181℃。
1HNMR(CDCl3)δ14.71(s，1H)，8.19(d，1H，J＝15.6Hz)，7.83(d，1H，J＝15.2Hz)，7.72-7.69(m，1H)，7.47-7.45(m，1H)，7.35-7.33(m，2H)，6.09(s，1H)，4.22(s，2H)，4.07(s，3H)，4.04(s，3H)，3.16(q，2H，J＝7.2Hz)，2.72(s，3H)，1.53(t，3H，J＝7.2Hz)。
实施例7、2’-羟基-3’-(N-甲基-N-β-羟乙胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVf)操作过程参见实施例2，只是用N-甲基-N-β-羟乙胺代替四氢吡咯。得到黄色固体，收率74％，m.p.127-130℃。
1HNMR(CDCl3)δ8.13(d，1H，J＝15.6Hz)，7.80(d，1H，J＝15.6Hz)，7.71-7.69(m，1H)，7.46-7.43(m，1H)，7.33-7.31(m，2H)，6.03(s，1H)，3.96(s，3H)，3.92(s，3H)，3.67(t，2H，J＝5.4Hz)，3.61(s，2H)，2.65(t，2H，J＝5.4Hz)，2.27(s，3H)。
实施例8、2’-羟基-3’-(N-甲基-N-β-乙酰氧乙胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVg)将化合物IVf2.03g(5.01mmol)溶于CH2Cl225ml中，加入醋酐0.55ml，室温搅拌2h。用稀盐酸调pH至8，二氯甲烷提取，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压回收溶剂，柱层析分离得到黄色固体1.05g，收率47％，m.p.97-99℃。
1HNMR(CDCl3)δ8.04(d，1H，J＝15.6Hz)，7.70-7.67(m，1H)，7.59(d，1H，J＝15.6Hz)，7.42-7.40(m，1H)，7.30-7.29(m，2H)，6.01(s，1H)，4.25(t，2H，J＝5.6Hz)，3.91(s，3H)，3.88(s，3H)，3.68(s，2H)，2.75(t，2H，J＝5.6Hz)，2.34(s，3H)，2.04(s，3H)。
实施例9、2’-羟基-3’-(N-甲基-N-甲氧羰基甲基胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVh)操作过程参见实施例2，只是用肌氨酸甲酯盐酸盐代替四氢吡咯。得到黄色结晶，收率53％，m.p.115-117℃。
1HNMR(CDCl3)δ13.88(brs，1H)，8.12(d，1H，J＝16.0Hz)，7.75(d，1H，J＝16.0Hz)，7.71-7.70(m，1H)，7.46-7.44(m，1H)，7.33-7.31(m，2H)，6.02(s，1H)，3.97(s，3H)，3.92(s，3H)，3.82(s，2H)，3.73(s，3H)，3.35(s，2H)，2.47(s，3H)。
实施例10、2’-羟基-3’-(N-甲基-N’，N’-二甲基丙基胺基甲基)-4’，6’-二甲氧基-2-氯-查耳酮(IVi)操作过程参见实施例2，只是用N，N’，N’-三甲基丙二胺代替四氢吡咯。得到黄色结晶，收率49％，m.p.86-87℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.92(d，1H，J＝15.6Hz)，7.61-7.59(m，1H)，7.36(d，1H，J＝15.2Hz)，7.32-7.30(m，1H)，7.20-7.18(m，2H)，5.93(s，1H)，3.79(s，6H)，3.55(s，2H)，2.43-2.41(m，4H)，2.10(s，9H)，1.66-1.64(m，2H)。
实施例11、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(四氢吡咯-1-基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Va)将化合物IVa 1.00g(2.40mmol)溶于二甲基甲酰胺32mL中，再加入碘96mg(0.38mmol)，室温反应3h。减压蒸馏除去大部分的二甲基甲酰胺，将反应液倒入100mL水中，乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压回收。柱层析分离得淡黄色结晶0.60g，收率62％，m.p.124-126℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.72(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.53(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.44-7.40(m，2H)，6.60(s，1H)，6.45(s，1H)，4.03(s，3H)，3.98(s，3H)，3.91(s，2H)，2.57(brs，4H)，1.74-1.72(m，4H)。
实施例12、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Vb)操作过程参见实施例11，只是用化合物IVb替代化合物IVa。得到微黄色结晶，收率70％，m.p.147-149℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.72(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.8Hz)，7.51(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.8Hz)，7.38-7.36(m，2H)，6.58(s，1H)，6.44(s，1H)，4.02(s，3H)，3.96(s，3H)，3.79(s，2H)，2.64(brs，8H)，2.37(s，3H)。
实施例13、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(二乙胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Vc)操作过程参见实施例11，只是用化合物IVc替代化合物IVa。得到淡黄色结晶，收率64％，m.p.117-119℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.75(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝2.0Hz)，7.55(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝2.0Hz)，7.47-7.43(m，2H)，6.58(s，1H)，6.48(s，1H)，4.06(s，3H)，4.01(s，3H)，3.82(s，2H)，2.60(q，4H，J＝7.0Hz)，1.01(t，6H，J＝7.0Hz)。
实施例14、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(二甲胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Vd)操作过程参见实施例11，只是用化合物IVd替代化合物IVa。得到淡黄色结晶，收率71％，m.p.160-162℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.70(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.43-7.41(m，2H)，6.58(s，1H)，6.44(s，1H)，4.02(s，3H)，3.97(s，3H)，3.64(s，2H)，2.25(s，6H)。
实施例15、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(甲基乙基胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Ve)操作过程参见实施例11，只是用化合物IVe替代化合物IVa。得到白色结晶，收率69％，m.p.146-147℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.71(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.42-7.40(m，2H)，6.57(s，1H)，6.45(s，1H)，4.02(s，3H)，3.97(s，3H)，3.71(s，2H)，2.50(q，2H，J＝7.2Hz)，2.19(s，3H)，1.06(t，3H，J＝7.2Hz)。
实施例16、2-{[(2-(2-氯苯基)-5，7-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-基)甲基]甲基胺基}乙醇醋酸酯(Vf)操作过程参见实施例11，只是用化合物IVg替代化合物IVa。得到淡黄色结晶，收率67％，m.p.127-128℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.75(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.42-7.40(m，2H)，6.54(s，1H)，6.43(s，1H)，4.15(t，2H，J＝5.6Hz)，4.00(s，3H)，3.97(s，3H)，3.76(s，2H)，2.69(t，2H，J＝5.6Hz)，2.23(s，3H)，1.94(s，3H)。
实施例17、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-(2-羟乙基甲基胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Vg)将化合物Vf 0.89g(2.0mmol)、氢氧化钾0.15g(2.7mmol)、乙醇20mL和水1mL投入反应瓶中，回流0.5h。减压回收大部分溶剂，加水稀释，乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压回收。硅胶柱层析分离得淡黄色固体0.60g，收率74％，m.p.162-164℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.65(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝2.0Hz)，7.52(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝2.0Hz)，7.43-7.41(m，2H)，6.48(s，1H)，6.46(s，1H)，4.03(s，3H)，4.00(s，3H)，3.93(s，2H)，3.64(t，2H，J＝5.0Hz)，2.74(t，2H，J＝5.0Hz)，2.34(s，3H)。
实施例18、2-{[(2-(2-氯苯基)-5，7-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-基)甲基]甲基胺基}乙酸甲酯(Vh)操作过程参见实施例11，只是用化合物IVh替代化合物IVa。得到黄色结晶，收率54％，m.p.116-118℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.73(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝2.0Hz)，7.53(dd，1H，J1＝7.2Hz，J2＝1.6Hz)，7.43-7.41(m，2H)，6.58(s，1H)，6.45(s，1H)，4.03(s，3H)，4.00(s，5H)，3.58(s，3H)，3.29(s，2H)，2.41(s，3H)。
实施例19、2-(2’-氯苯基)-5，7-二甲氧基-8-{[((3-二甲胺基)丙基)(甲基)胺基]甲基}-4H-1-苯并吡喃-4-酮(Vi)操作过程参见实施例11，只是用化合物IVi替代化合物IVa。得到淡棕色固体，收率62％，m.p.70-72℃。
1HNMR(CDCl3)δ7.71(dd，1H，J1＝8.0Hz，J2＝2.0Hz)，7.52(dd，1H，J1＝8.0Hz，J2＝2.0Hz)，7.42(m，2H)，6.54(s，1H)，6.45(s，1H)，4.02(s，3H)，3.98(s，3H)，3.74(s，2H)，2.50(t，2H，J＝7.4Hz)，2.28(t，2H，J＝7.4Hz)，2.21(s，9H)，1.73-1.69(m，2H)。
实施例20、2-(2’-氯苯基)-5-羟基-7-甲氧基-8-(四氢吡咯-1-基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIa)化合物Va 0.50g(1.20mmol)、三氯化铝0.29g(2.16mmol)和无水乙腈10mL投入反应瓶中，回流反应2h。将反应液倒入冰水中，用饱和碳酸氢钠溶液调pH 7～8，产生大量鲜黄色固体。用乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压回收得黄色粗品。硅胶柱层析，得黄色结晶0.20g，收率43％，m.p.112-114℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.87(s，1H)，7.70(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.53(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.44-7.42(m，2H)，6.58(s，1H)，6.43(s，1H)，3.90(s，3H)，3.86(s，2H)，2.56(brs，4H)，1.74-1.70(m，4H)。
实施例21、2-(2’-氯苯基)-5-羟基-7-甲氧基-8-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIb)操作过程参见实施实施例20，只是用化合物Vb替代化合物Va。得到黄色结晶，收率54％，m.p.129-131℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.82(s，1H)，7.71(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.43-7.41(m，2H)，6.60(s，1H)，6.41(s，1H)，3.88(s，3H)，3.69(s，2H)，2.45(brs，8H)，2.23(s，3H)。
实施例22、2-(2’-氯苯基)-5-羟基-7-甲氧基-8-(二乙胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIc)操作过程参见实施例20，只是用化合物Vc替代化合物Va。得到黄色结晶，收率22％，m.p.154-156℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.87(s，1H)，7.70(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.53(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.45-7.43(m，2H)，6.56(s，1H)，6.45(s，1H)，3.94(s，3H)，3.77(s，2H)，2.57(q，4H，J＝7.2Hz)，0.98(t，6H，J＝7.2Hz)。
实施例23、2-(2’-氯苯基)-5-羟基-7-甲氧基-8-(二甲胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VId)操作过程参见实施例20，只是用化合物Vd替代化合物Va。得到黄色结晶，收率23％，m.p.134-137℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.99(s，1H)，7.70(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.54(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.48-7.46(m，2H)，6.59(s，1H)，6.47(s，1H)，3.95(s，3H)，3.75(s，2H)，2.35(s，6H)。
实施例24、2-(2’-氯苯基)-5-羟基-7-甲氧基-8-(乙基甲基胺甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIe)操作过程参见实施例20，只是用化合物Ve替代化合物Va。得到黄色结晶，收率25％，m.p.152-154℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.99(s，1H)，7.73(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.56(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.49-7.45(m，2H)，6.57(s，1H)，6.48(s，1H)，3.97(s，3H)，3.95(s，2H)，2.78(q，2H，J＝7.2Hz)，2.39(s，3H)，1.23(t，3H，J＝7.2Hz)。
实施例25、2-(2’-氯苯基)-5-羟基-7-甲氧基-8-(2-羟乙基甲胺基甲基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIf)操作过程参见实施例20，只是用化合物Vg替代化合物Va。得到黄色结晶，收率26％，m.p.109-112℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.95(s，1H)，7.63(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.54(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.46-7.44(m，2H)，6.52(s，1H)，6.45(s，1H)，3.92(s，3H)，3.81(s，2H)，3.60(t，2H，J＝5.4Hz)，2.67(t，2H，J＝5.2Hz)，2.27(s，3H)。
实施例26、2-{[(2-(2-氯苯基)-5-羟基-7-甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-基)甲基]甲基胺基}乙醇醋酸酯(VIg)操作过程参见实施例20，只是用化合物Vf替代化合物Va。得到黄色结晶，收率19％，m.p.139-141℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.90(s，1H)，7.69(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.55(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.46-7.44(m，2H)，6.59(s，1H)，6.45(s，1H)，4.17(t，2H，J＝5.8Hz)，3.92(s，3H)，3.74(s，2H)，2.70(t，2H，J＝5.8Hz)，2.25(s，3H)，1.96(s，3H)。
实施例27、2-{[(2-(2-氯苯基)-5-羟基-7-甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-基)甲基]甲基胺基}乙酸甲酯(VIh)操作过程参见实施例20，只是用化合物Vh替代化合物Va。得到黄色结晶，收率24％，m.p.75-77℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.94(s，1H)，7.74(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.56(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.48-7.44(m，2H)，6.62(s，1H)，6.46(s，1H)，3.96(s，2H)，3.93(s，3H)，3.59(s，3H)，3.32(s，2H)，2.44(s，3H)。
实施例28、2-(2’-氯苯基)-5-羟基-7-甲氧基-8-{[((3-二甲胺基)丙基)(甲基)胺基]甲基}-4H-1-苯并吡喃-4-酮(VIi)操作过程参见实施例20，只是用化合物Vi替代化合物Va。得到黄色结晶，收率24％，m.p.40-42℃。
1HNMR(CDCl3)δ12.94(s，1H)，7.72(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.50(dd，1H，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz)，7.47-7.45(m，2H)，6.52(s，1H)，6.43(s，1H)，3.93(s，3H)，3.68(s，2H)，2.48(t，2H，J＝7.4Hz)，2.28(t，2H，J＝7.4Hz)，2.20(s，9H)，1.71-1.67(m，2H)。
实施例29、抗肿瘤生物活性测试方法肿瘤细胞离体培养选取肿瘤细胞Bel-7402，PC-3，ECA-109，A-549，HL-60和MCF-7于37℃、5％CO2细胞培养箱中孵育，待细胞密度长到70-90％时传代(贴壁细胞用Puck’sEDTA消化后传代)，用于以后实验所需。
MTT法测定查耳酮衍生物对不同瘤株的体外抑制作用将化合物用二甲亚砜溶解，稀释，肿瘤细胞Bel-7402，PC-3，ECA-109，A-549，HL-60和MCF-7在96孔板上种入4000个/200μL/孔，每孔加入化合物2μL，终浓度为12.0μM，6.0μM，3.0μM，1.5μM，共同于37℃、5％CO2细胞培养箱中孵育72小时，以二甲亚砜(1％)为空白对照。72小时后，加入终浓度为0.25mg/mL的MTT，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中4小时，之后吸干溶剂，每孔加入100μL二甲亚砜，用酶联免疫仪于570nm处测定吸光度(OD值)，所得数据用于计算IC50。所得结果见表1
表1所合成的黄酮衍生物对不同肿瘤细胞株的IC50(μM)值 从表1可以看出1)所有的化合物对不同的肿瘤细胞株均有一定的抑制活性；2)黄酮母核8-位具有开链叔胺结构的化合物对HL-60细胞有选择性的抑制作用，其中化合物Vg对HL-60细胞具很强的抑制活性，IC50值为0.6μM；3)化合物VIc对6种肿瘤细胞均表现出很强的抑制活性，IC50值分别为24.4，10.9，12.7，9.1，8.7，13.1μM，因此具广谱的抗肿瘤活性。
实施例30、细胞周期素依赖性激酶1/周期素B抑制活性的测定实验方法溶剂对照组；空白对照组；给药组，浓度分别为3μM、0.3μM和0.03μM。
1、参照下表将各个样本准备好后，30℃反应30min；
2、倒去孔中液体，每孔加入200μL的1×冲洗缓冲液，轻轻拍打后，倒去液体。如法洗涤5次；3、每孔加入100μL的抗磷酸的cdc 7 T376单克隆抗体TK-3H7，室温反应30min；4、重复步骤2的操作；5、每孔加入100μL的辣根过氧化物酶-配对的抗鼠免疫球蛋白G，室温反应30min；6、重复步骤2的操作；7、每孔加入100μL的底物试剂，室温反应15min；8、每孔加入100μL的终止液；9、用分光光度计在双波长450/540nm测定吸收值，所得数据用于计算IC50值。所得结果见表2。
表2部分黄酮化合物对细胞周期素依赖性激酶1/周期素B的抑制活性
从表2可以看出1)一部分的黄酮化合物显示了一定的细胞周期依赖性激酶1/周期素B的抑制作用，其中化合物VIc对该激酶的抑制作用达到了低微摩尔水平(IC50值为0.2052μM)；2)结合表1，化合物VIc对6种肿瘤细胞均表现出很强的抑制活性，这说明该化合物抑制肿瘤细胞生长的作用可能与其阻滞肿瘤细胞周期的进程有关；3)总而言之，该类化合物有较好的抗肿瘤应用前景，有必要进一步的深入研究。
权利要求
1. 2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物，结构通式为 其中R1为1至3个碳原子的直链或支链烷烃；Ar为无取代、单取代、二取代或三取代的苯环，苯环上的取代基为氢原子、卤原子、羟基、含1至6个碳原子的直链或支链的烷基、含1至3个碳原子的直链或支链的烷氧基；R2是开链或环状的叔胺结构NR3R4，其中R3和R4相同或不同，为甲基、乙基、含1-4个碳原子的烷基醇及其酯、含1-4个碳原子的羧酸及其酯、含1-4个碳原子的烷基胺，或R3、R4分别与碳、氧及氮原子环合成五元或六元环。
2.根据权利要求1所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的制备方法，其特征是通过以下步骤实现(1)化合物I在碱性条件下经烷基化试剂的选择性醚化可得到化合物II，经过重结晶得纯品，反应通常在极性溶剂丙酮中进行，反应温度在10-30℃之间；(2)化合物II在碱性条件下与芳香醛缩合得到化合物III，反应在质子性混合溶剂中进行，质子性混合溶剂选用甲醇-水、乙醇-水或异丙醇-水，反应温度在10-30℃之间，所得粗品通过重结晶精制；(3)所得的III在质子性溶剂中，在酸和甲醛的存在下与仲胺反应生成化合物IV，反应温度在50-90℃之间，所得产物经过柱层析得纯品；(4)化合物IV在极性溶剂中，经碘催化环合得到化合物V，反应温度在10-100℃之间，所得产物经柱层析分离得纯品；(5)化合物V经脱烷基化反应得到化合物VI，常用的脱烷基化试剂选用路易斯酸，反应在极性溶剂中进行，反应温度为10-80℃，粗产物经过柱层析分离得到纯品。
3.根据权利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的制备方法，其特征是步骤(1)中所用的碱性物质选用碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾中任一种。
4.根据权利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的制备方法，其特征是步骤(2)中的碱选用氢氧化钠、氢氧化钾或氢化钠中任一种。
5.根据权利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的制备方法，其特征是步骤(3)中所用的质子性溶剂选用甲醇、乙醇或异丙醇中任一种。
6.根据权利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的制备方法，其特征是步骤(3)中所用的甲醛选用甲醛水溶液、三聚甲醛或多聚甲醛中任一种。
7.根据权利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的制备方法，其特征是步骤(4)中所用的极性溶剂选用二氧六环、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲亚砜中任一种。
8.根据权利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的制备方法，其特征是步骤(5)中所用的路易斯酸选用氢溴酸、浓盐酸、三氯化铝、三溴化铝、三甲基碘硅烷、三氯化硼、三溴化硼中任一种。
9.根据权利要求2所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物的制备方法，其特征是步骤(5)中所用的极性溶剂选用二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈中任一种。
10.根据权利要求1所述的2-取代苯基-5，7-二含氧功能基-8-胺亚甲基黄酮衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明提供一类含有氮原子的黄酮衍生物(2－取代苯基－5，7－二含氧功能基－8－胺亚甲基黄酮衍生物)。是在黄酮母核的8－位上引入不同的胺亚甲基结构，合成一系列2－取代苯基－5，7－二含氧功能基－8－胺亚甲基黄酮衍生物。本发明经药理实验证实对多种肿瘤细胞株，包括Bel－7402，PC－3，ECA－109，A－549，HL－60和MCF－7等有体外抑制增殖作用，对细胞周期依赖性激酶1/周期素B的抑制活性表明这些化合物的抗肿瘤活性可部分归因于它们对细胞周期的抑制作用，可在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明的2－取代苯基－5，7－二含氧功能基－8－胺亚甲基黄酮衍生物的结构通式。
文档编号A61K31/352GK101066961SQ20071006925
公开日2007年11月7日 申请日期2007年6月8日 优先权日2007年6月8日
发明者胡永洲, 刘滔, 何俏军, 杨波, 罗沛华 申请人:浙江大学