专利名称：一种奈拉滨的合成方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种奈拉滨的合成方法。
本申请的化学合成是指有机化学中合成方法，即使用有机物质、有机溶剂制备成化合物的方法，制备过程中不使用任何生物学方法，比如酶法等。
背景技术：
T-ALL和T-LBL是两种恶化速度非常快的疾病，它们严重影响着机体的造血功能。T-ALL在我国急性淋巴细胞白血病(急淋)的发病率仅次于普通型急淋(C-ALL)，占急淋发病的第二位。T细胞急性淋巴细胞性白血病通常发病于较大的儿童、青少年和青年，较B细胞急性淋巴细胞性白血病不太常见。美国每年大约有1600名成人和儿童被诊断患有T-ALL或T-LBL。随着环磷酰胺、阿糖胞苷和左旋门冬酰胺酶的应用，T-细胞淋巴细胞白血病和T-细胞淋巴母细胞瘤的反应率和生存率有了很大的改观。但对于复发病人的补救化疗方案的效果有限，反应率低，许多病人必须进行骨髓抑制，而缓解的病人进行骨髓移植更有效。开发特异性地针对恶性T-细胞的化合物是关键的。
核苷类似物被证明是治疗血液系统肿瘤的相当成功的细胞毒药物。脱氧鸟苷酸类似物9-β-D-arabinofuranosylguanine(ara-G)发现于20世纪60年代，但由于溶解性差而未能用于临床。但开始于70年代的对嘌呤核苷磷酸酶(PNP)缺陷症的研究则为开发脱氧鸟苷类似物提供了有益的思路。PNP催化脱氧鸟苷酸，缺乏PNP的病人出现了dGTP-介导的T-细胞淋巴细胞减少症，而B细胞的数量却没有降低。这表明脱氧鸟苷酸类似物可以用来治疗T-细胞恶性肿瘤，如T-ALL。实际上ara-G就选择性地对T细胞有细胞毒作用。之后开发了ara-G的水溶性前药奈拉滨。奈拉滨是脱氧鸟苷类似物9-β-D-阿糖呋喃糖鸟嘌呤(ara-G)的前体药。在腺苷脱氨酶(ADA)的作用下，奈拉滨去甲基化生成ara-G，经脱氧鸟苷激酶和脱氧胞嘧啶核苷激酶依次单磷酸化生成活性的5′-三磷酸盐，ara-GTP。ara-GTP可在白血病原始细胞中积累，并与DNA相结合，最终导致抑制DNA合成和细胞死亡。临床和药物代谢研究发现奈拉滨是一种在血浆中可产生ara-G，在白血病细胞中可产生ara-GTP的前药。奈拉滨被腺苷脱氨酶去甲基形成ara-G，在细胞内被进一步转化为活性形式ara-GTP，ara-GTP掺入到DNA可导致DNA合成的终止和细胞死亡。奈拉滨为罹患这两种罕见但致命疾病的患者带来了希望。
专利“EP 0294114”公开了奈拉滨的制备工艺，但该工艺方法以2-氨基-6-甲氧基嘌呤和尿嘧啶阿糖苷为原料，使用生化法得目标产物奈拉滨，该方案的难点在于菌种较难得到，反应时间太长，将近一个月，对设备要求较严格，因此，该工艺方法制备得到的奈拉滨的造价相当昂贵，会给患者带来巨大的经济负担；文献也公开奈拉滨的合成工艺，该工艺以2-氨基-6-氯嘌呤为原料，经甲醇亲核取代，2，3，5-三-氧-苄基-1-氧-对硝基苯甲酰-D-阿拉伯呋喃糖经氯化，两者缩合可得，该方案的难点在于起始原料2，3，5-三-氧-苄基-1-氧-对硝基苯甲酰-D-阿拉伯呋喃糖价格昂贵且来源有限，奈拉滨收率也不高，同样，得到奈拉滨造价昂贵，会给患者带来巨大的经济负担；因此，研究开发出一种经济可行的合成奈拉滨的工艺方法，是很多医药工作者的希望。
发明内容
基于上述原因，我们科研人员通过长期的研究发现一种非常经济、适合工业化化生产合成奈拉滨的工艺方法，该合成工艺是以6-氯鸟苷为原料，该原料具有易得、价格低的特点，以6-氯鸟苷为原料，经多步反应将呋喃核糖构型转换为呋喃阿拉伯糖制得奈拉滨。该路线起始原料廉价易得，合成步骤较短，操作较简便，得率高，得到奈拉滨造价不高，降低了患者的经济负担。反应过程如下所示 以6-氯鸟苷为原料，将呋喃核糖构型转换为呋喃阿拉伯糖还可以应用1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷或其它有机试剂进行基团保护，可以进一步缩短上述实验步骤；本申请奈拉滨具体如下奈拉滨的化学结构式、分子式、分子量中文名奈拉滨；汉语拼音Nailabin；英文名nelarabine；英文化学名2-amino-9-β-D-arabinofuranosyl-6-methoxy-9H-purine；中文化学名2-氨基-9-β-D-阿拉伯呋喃糖基-6-甲氧基-9H-嘌呤
分子式C11H15N5O5分子量297.27本申请通过以下技术方案实现的。
一种奈拉滨的合成方法，以6-氯鸟苷为原料，经化学合成将呋喃核糖构型转换为呋喃阿拉伯糖制得奈拉滨。
一种奈拉滨的合成方法，其中化学合成方法为，以6-氯鸟苷为原料，经化学合成的制备成6-甲氧基鸟苷，6-甲氧基鸟苷经化学合成制备成2′，3′，5′三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷，2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷经化学合成制备成3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷，2′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷经化学合成制备成2′-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷，2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷经化学合成制备成2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤，2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤经化学合成制备成奈拉滨。
其中6-甲氧基鸟苷的制备方法为取甲醇钠加入到甲醇中，搅拌，得白色浑浊液，加入6-氯鸟苷物料迅速溶解，得淡黄的溶液，随后又析出白色固体，加热至回流，继续反应，冷却至室温，搅拌下小心滴加盐酸溶液中和至PH＝8-9，除溶剂后向剩余淡黄色粘稠物加入蒸馏水，70℃搅拌下溶解，再加入活性碳，热过滤，滤液，自然冷却析晶，过滤，得无色结晶固体，真空干燥，得白色固体，即6-甲氧基鸟苷。mp133-135℃；TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，产品Rf＝0.4，原料Rf＝0.45。
其中2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取6-甲氧鸟苷溶于无水吡啶中，减压蒸干，60℃真空干燥2小时，重复操作一次，然后加入乙腈混合搅拌，得白色浑浊液，将DMAP、三乙胺加至白色浑浊液中，氮气保护下将乙酸酐先慢后快加入反应瓶中，物料逐渐溶解，室温搅拌反应，反应完毕，向溶液中加入乙醇，将反应液减压蒸干，再加入乙酸乙酯，再用5％碳酸氢钠溶液洗涤二次，水相用乙酸乙酯反萃，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩后所得到的无色胶状固体，即2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，原料Rf＝0.4；产品Rf＝0.8。
其中3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取醋酸钠和盐酸羟胺，悬浮于无水吡啶中，搅拌，氮气保护下将2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷加入，室温下搅拌反应，TLC检测反应完毕，向体系中加入丙酮，反应液减压浓缩，剩余物料中加入丙酮继续减压蒸馏带出残余吡啶，粗品溶于丙酮后过滤，不溶滤渣用丙酮洗涤，合并丙酮液，减压浓缩得一油状物，硅胶柱层析，收集产品相，减压蒸干得无色胶状固体，用二氯甲烷-庚烷重结晶得白色固体，即3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。mp150-153℃TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.6；产品Rf＝0.45；1HNMR.(DMSO)δ＝8.09(s，1H，H-8)；6.52(s，2H，NH2)；5.88(d，1H，H-1′)；5.81(d，1H，2′-OH)；5.23(m，1H，H-3′)；4.87(m，1H，H-2′)；4.31(m，1H，H-4′)；4.23(m，2H，H-5′)；3.97(s，3H，OCH3)；2.12(s，3H，CH3CO)；2.04(s，3H，CH3CO)其中′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷，N-二甲基氨基吡啶和三乙胺加入无水吡啶中，搅拌下降温至-10℃，小心滴加三氟甲磺酸酐，反应瓶中充满白色烟雾，略有温升，滴加完毕，反应液变为棕红色，室温搅拌，TLC检测反应完毕，将反应液小心倒入冰水中，用氯仿萃取四次，合并氯仿相，水洗，氯仿相用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩至干，得红褐色固体，即2′-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.45；Rf＝0.8。
其中2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤的制备方法为取2′-O-三氟甲磺酰基-3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷加入乙酸乙酯中，加入乙酸，再加入N，N一二异丙基苯胺，于氮氛下40℃反应，然后回流搅拌，TLC检测反应完毕，再加乙酸乙酯稀释，稀释后的溶液用水、碳酸氢钠水溶液以及饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后减压蒸馏除去溶剂，所得粗品用无水乙醇重结晶，得白色同体，即2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.8；Rf＝0.6。
其中奈拉滨的制备方法为将2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′ 5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤加入无水乙醇中，置于冰水浴中冷却，通氮气排空体系中的空气，然后向体系中通入无水氨气直至体系均相，所得产物于冰箱中放置，然后减压浓缩，浓缩产物用乙醇重结晶，干燥，加入甲醇混合加热至回流，搅拌使物料溶解，趁热过滤，滤液浓缩，搅拌下加入无水乙醇、乙醚，冷却放置析晶，抽滤，用无水乙醇洗涤，抽滤，干燥，得到奈拉滨。
上述合成方法得到奈拉滨制备成药物制剂，例如口服制剂、注射制剂等药剂学上可以接受的制剂。
一、检测分析实验照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录VD)测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇(70∶30)为流动相，检测波长为247nm。流速0.75ml/min理论板数按奈拉滨计不低于2000，奈拉滨峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
取本品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相超声处理使溶解，并以流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml至10ml量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取奈拉滨对照品约10mg，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
样品检测结果本申请奈拉滨纯度大于99.90％二、工艺数据1、6-甲氧基鸟苷的制备
2、4-2.2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备
3、3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷的制备
4、2′-O-三氟甲磺酰基-3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷的制备
5、2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤的制备
6、奈拉滨的制备
三、中间体质量控制在合成奈拉滨的过程中，我们运用了多种方法来控制中间体的质量。具体的结果如下表格
四、确证奈拉滨结构1、1H-NMR核磁共振谱
2、513C-NMR核磁共振谱
五、药理学实验奈拉滨是脱氧鸟苷类似物9-β-D-阿糖呋喃糖鸟嘌呤(ara-G)的前体药，在腺苷脱氨酶的作用下，奈拉滨去甲基化生成ara-G，然后转运进入细胞内。转运进入细胞内的ara-G在腺苷激酶作用下转变成ara-G单磷酸盐(ara-GMP)，然后在脱氧胞苷激酶和脱氧鸟苷激酶作用下，转化生成ara-G二磷酸盐(ara-GDP)和有药理活性的三磷酸盐(ara-GTP)，生成ara-GTP的限速步骤是ara-G的单磷酸化。随着ara-GTP在细胞中与脱氧核糖核苷竞争整合到DNA中，最终导致DNA合成的抑制而诱发细胞凋亡。
临床前研究表明，ara-GTP对T细胞有选择性，从而表现出更强的细胞毒作用。这说明ara-GTP在T细胞和B细胞中有不同的浓度，主要是由于前者对ara-GTP有更强的蓄积作用而后者对ara-GTP有更快的消除作用。在多项对病人的原始淋巴细胞研究中，也观察到了相同结果。
1、在体外检测ara-G和奈拉滨对人骨髓祖细胞的毒性。
细胞CFU-GM和BFU-E(来源于三位不同的捐献者)，检测药物的IC50值。结果显示奈拉滨的毒性比ara-G的大(见表1)。
表1.ara-G和奈拉滨对细胞的体外毒性
2、奈拉滨对T-细胞和B-细胞的选择性试验目的是比较奈拉滨对T-细胞(Molt4)和B-细胞(IM9)生长的抑制性，同时比较奈拉滨与其他嘌呤阿拉伯糖苷的毒性。结果显示奈拉滨对T-细胞的毒性要大于对B-细胞。其对T-细胞的毒性大于ara-G对T-细胞的毒性(见表2)。
表2.ara-G和奈拉滨对细胞的体外毒性
3、比较ara-G和奈拉滨对各种T-细胞和B-细胞的毒性，同时检测两种腺苷脱氨基酶抑制剂(能阻止奈拉滨转化为ara-G)助间型霉素和EHNA是否能降低奈拉滨的毒性。结果显示ara-G和奈拉滨对大多数T-细胞的毒性差不多大，并且都是μM水平。对B-细胞(IM-9)均没有毒性。两种腺苷脱氨基酶抑制剂均能减弱奈拉滨的毒性(见表3、4)。
表3.ara-G和奈拉滨对细胞的体外毒性(IC50μM)及助间型霉素对奈拉滨毒性的抑制作用
注CEM、CEM CD4+、MOLT4T-细胞；U937巨噬细胞；IM9B-细胞表4.ara-G和奈拉滨对细胞的体外毒性(IC50μM)及EHNA对奈拉滨毒性的抑制作用
注CEM、CEM CD4+、MOLT4T-细胞；U937巨噬细胞；IM9B-细胞实验结论mM浓度的奈拉滨对体外骨髓祖细胞具有毒性。体外试验显示奈拉滨对人恶性T-细胞的毒性要大于对恶性B-细胞的毒性。对某些细胞系，奈拉滨的毒性要大于ara-G，这可能是由于奈拉滨更容易被吸收的缘故，不是由于单独的毒性。
六、制备实施例实施例1其中6-甲氧基鸟苷的制备方法为取248.0克甲醇钠加入到甲醇中，搅拌，得白色浑浊液，加入310克6-氯鸟苷物料迅速溶解，得淡黄的溶液，随后又析出白色固体，加热至回流，继续反应，冷却至室温，搅拌下小心滴加盐酸溶液中和至PH＝8-9，除溶剂后向剩余淡黄色粘稠物加入蒸馏水，70℃搅拌下溶解，再加入活性碳，热过滤，滤液，自然冷却析晶，过滤，得无色结晶固体，真空干燥，得白色固体196.7克，即6-甲氧基鸟苷。mp133-135℃；TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，产品Rf＝0.4，原料Rf＝0.45。
其中2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取195.0克6-甲氧鸟苷溶于无水吡啶中，减压蒸干，60℃真空干燥2小时，重复操作一次，然后加入乙腈混合搅拌，得白色浑浊液，将DMAP、三乙胺加至白色浑浊液中，氮气保护下将乙酸酐先慢后快加入反应瓶中，物料逐渐溶解，室温搅拌反应，反应完毕，向溶液中加入乙醇，将反应液减压蒸干，再加入乙酸乙酯，再用5％碳酸氢钠溶液洗涤二次，水相用乙酸乙酯反萃，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩后所得到的无色胶状固体251.2克，即2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，原料Rf＝0.4；产品Rf＝0.8。
其中3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取150克醋酸钠和137.5克盐酸羟胺，悬浮于无水吡啶中，搅拌，氮气保护下将250克2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷加入，室温下搅拌反应，TLC检测反应完毕，向体系中加入丙酮，反应液减压浓缩，剩余物料中加入丙酮继续减压蒸馏带出残余吡啶，粗品溶于丙酮后过滤，不溶滤渣用丙酮洗涤，合并丙酮液，减压浓缩得一油状物，硅胶柱层析，收集产品相，减压蒸干得无色胶状固体，用二氯甲烷-庚烷重结晶得白色固体112.4克，即3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。mp150-153℃TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.6；产品Rf＝0.45；1HNMR.(DMSO)δ＝8.09(s，1H，H-8)；6.52(s，2H，NH2)；5.88(d，1H，H-1′)；5.81(d，1H，2′-OH)；5.23(m，1H，H-3′)；4.87(m，1H，H-2′)；4.31(m，1H，H-4′)；4.23(m，2H，H-5′)；3.97(s，3H，OCH3)；2.12(s，3H，CH3CO)；2.04(s，3H，CH3CO)其中2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取110克3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷，N-二甲基氨基吡啶和三乙胺加入无水吡啶中，搅拌下降温至-10℃，小心滴加三氟甲磺酸酐35.2克，反应瓶中充满白色烟雾，略有温升，滴加完毕，反应液变为棕红色，室温搅拌，TLC检测反应完毕，将反应液小心倒入冰水中，用氯仿萃取四次，合并氯仿相，水洗，氯仿相用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩至干，得红褐色固体125克，即′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.45；Rf＝0.8。
其中2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤的制备方法为取120克2′-O-三氟甲磺酰基-3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷加入乙酸乙酯中，加入乙酸，再加入N，N一二异丙基苯胺，于氮氛下40℃反应，然后回流搅拌，TLC检测反应完毕，再加乙酸乙酯稀释，稀释后的溶液用水、碳酸氢钠水溶液以及饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后减压蒸馏除去溶剂，所得粗品用无水乙醇重结晶，得白色固体85.3克，即2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.8；Rf＝0.6。
其中奈拉滨的制备方法为将80克2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤加入无水乙醇中，置于冰水浴中冷却，通氮气排空体系中的空气，然后向体系中通入无水氨气直至体系均相，所得产物于冰箱中放置，然后减压浓缩，浓缩产物用乙醇重结晶，干燥，加入甲醇混合加热至回流，搅拌使物料溶解，趁热过滤，滤液浓缩，搅拌下加入无水乙醇、乙醚，冷却放置析晶，抽滤，用无水乙醇洗涤，抽滤，干燥，得到奈拉滨43.5克。
以6-氯鸟苷为原料，将呋喃核糖构型转换为呋喃阿拉伯糖还可以应用1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷或其它有机试剂进行基团保护，可以进一步缩短上述实验步骤；上述合成方法得到奈拉滨制备成药物制剂，例如口服制剂、注射制剂等药剂学上可以接受的制剂。
实施例2其中6-甲氧基鸟苷的制备方法为取128克甲醇钠加入到甲醇中，搅拌，得白色浑浊液，加入160克6-氯鸟苷物料迅速溶解，得淡黄的溶液，随后又析出白色固体，加热至回流，继续反应，冷却至室温，搅拌下小心滴加盐酸溶液中和至PH＝8-9，除溶剂后向剩余淡黄色粘稠物加入蒸馏水，70℃搅拌下溶解，再加入活性碳，热过滤，滤液，自然冷却析晶，过滤，得无色结晶固体，真空干燥，得白色固体102.6克，即6-甲氧基鸟苷。mp133-135℃；TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，产品Rf＝0.4，原料Rf＝0.45。
其中2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取102.6克6-甲氧鸟苷溶于无水吡啶中，减压蒸干，60℃真空干燥2小时，重复操作一次，然后加入乙腈混合搅拌，得白色浑浊液，将DMAP、三乙胺加至白色浑浊液中，氮气保护下将乙酸酐先慢后快加入反应瓶中，物料逐渐溶解，室温搅拌反应，反应完毕，向溶液中加入乙醇，将反应液减压蒸干，再加入乙酸乙酯，再用5％碳酸氢钠溶液洗涤二次，水相用乙酸乙酯反萃，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩后所得到的无色胶状固体131.2克，即2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，原料Rf＝0.4；产品Rf＝0.8。
其中3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取79克醋酸钠和69克盐酸羟胺，悬浮于无水吡啶中，搅拌，氮气保护下将130克2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷加入，室温下搅拌反应，TLC检测反应完毕，向体系中加入丙酮，反应液减压浓缩，剩余物料中加入丙酮继续减压蒸馏带出残余吡啶，粗品溶于丙酮后过滤，不溶滤渣用丙酮洗涤，合并丙酮液，减压浓缩得一油状物，硅胶柱层析，收集产品相，减压蒸干得无色胶状固体，用二氯甲烷-庚烷重结晶得白色固体62.8克，即3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。mp150-153℃TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.6；产品Rf＝0.45；1HNMR.(DMSO)δ＝8.09(s，1H，H-8)；6.52(s，2H，NH2)；5.88(d，1H，H-1′)；5.81(d，1H，2′-OH)；5.23(m，1H，H-3′)；4.87(m，1H，H-2′)；4.31(m，1H，H-4′)；4.23(m，2H，H-5′)；3.97(s，3H，OCH3)；2.12(s，3H，CH3CO)；2.04(s，3H，CH3CO)其中2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取60克3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷，N-二甲基氨基吡啶和三乙胺加入无水吡啶中，搅拌下降温至-10℃，小心滴加三氟甲磺酸酐33克，反应瓶中充满白色烟雾，略有温升，滴加完毕，反应液变为棕红色，室温搅拌，TLC检测反应完毕，将反应液小心倒入冰水中，用氯仿萃取四次，合并氯仿相，水洗，氯仿相用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩至干，得红褐色固体68克，即2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.45；Rf＝0.8。
其中2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤的制备方法为取65克2′-O-三氟甲磺酰基-3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷加入乙酸乙酯中，加入乙酸，再加入N，N一二异丙基苯胺，于氮氛下40℃反应，然后回流搅拌，TLC检测反应完毕，再加乙酸乙酯稀释，稀释后的溶液用水、碳酸氢钠水溶液以及饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后减压蒸馏除去溶剂，所得粗品用无水乙醇重结晶，得白色固体45.9克，即2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.8；Rf＝0.6。
其中奈拉滨的制备方法为将45克2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤加入无水乙醇中，置于冰水浴中冷却，通氮气排空体系中的空气，然后向体系中通入无水氨气直至体系均相，所得产物于冰箱中放置，然后减压浓缩，浓缩产物用乙醇重结晶，干燥，加入甲醇混合加热至回流，搅拌使物料溶解，趁热过滤，滤液浓缩，搅拌下加入无水乙醇、乙醚，冷却放置析晶，抽滤，用无水乙醇洗涤，抽滤，干燥，得到奈拉滨21克。
以6-氯鸟苷为原料，将呋喃核糖构型转换为呋喃阿拉伯糖还可以应用1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷或其它有机试剂进行基团保护，可以进一步缩短上述实验步骤；上述合成方法得到奈拉滨制备成药物制剂，例如口服制剂、注射制剂等药剂学上可以接受的制剂。
实施例3其中6-甲氧基鸟苷的制备方法为取800克甲醇钠加入到甲醇中，搅拌，得白色浑浊液，加入1000克6-氯鸟苷物料迅速溶解，得淡黄的溶液，随后又析出白色固体，加热至回流，继续反应，冷却至室温，搅拌下小心滴加盐酸溶液中和至PH＝8-9，除溶剂后向剩余淡黄色粘稠物加入蒸馏水，70℃搅拌下溶解，再加入活性碳，热过滤，滤液，自然冷却析晶，过滤，得无色结晶固体，真空干燥，得白色固体598.8克，即6-甲氧基鸟苷。mp133-135℃；TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，产品Rf＝0.4，原料Rf＝0.45。
其中2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取590克6-甲氧鸟苷溶于无水吡啶中，减压蒸干，60℃真空干燥2小时， 重复操作一次，然后加入乙腈混合搅拌，得白色浑浊液，将DMAP、三乙胺加至白色浑浊液中，氮气保护下将乙酸酐先慢后快加入反应瓶中，物料逐渐溶解，室温搅拌反应，反应完毕，向溶液中加入乙醇，将反应液减压蒸干，再加入乙酸乙酯，再用5％碳酸氢钠溶液洗涤二次，水相用乙酸乙酯反萃，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩后所得到的无色胶状固体752克，即2′，3′ 5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，原料Rf＝0.4；产品R′0.8。
其中3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取450克醋酸钠和421.3克盐酸羟胺，悬浮于无水吡啶中，搅拌，氮气保护下将750克2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷加入，室温下搅拌反应，TLC检测反应完毕，向体系中加入丙酮，反应液减压浓缩，剩余物料中加入丙酮继续减压蒸馏带出残余吡啶，粗品溶于丙酮后过滤，不溶滤渣用丙酮洗涤，合并丙酮液，减压浓缩得一油状物，硅胶柱层析，收集产品相，减压蒸干得无色胶状固体，用二氯甲烷-庚烷重结晶得白色固体329.8克，即3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。mp150-153℃；TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.6；产品Rf＝0.45；1HNMR.(DMSO)δ＝8.09(s，1H，H-8)；6.52(s，2H，NH2)；5.88(d，1H，H-1′)；5.81(d，1H，2′-OH)；5.23(m，1H，H-3′)；4.87(m，1H，H-2′)；4.31(m，1H，H-4′)；4.23(m，2H，H-5′)；3.97(s，3H，OCH3)；2.12(s，3H，CH3CO)；2.04(s，3H，CH3CO)其中2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取320克3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷，35.2克N-二甲基氨基吡啶和三乙胺加入无水吡啶中，搅拌下降温至-10℃，小心滴加三氟甲磺酸酐176克，反应瓶中充满白色烟雾，略有温升，滴加完毕，反应液变为棕纤色，室温搅拌，TLC检测反应完毕，将反应液小心倒入冰水中，用氯仿萃取四次，合并氯仿相，水洗，氯仿相用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩至干，得红褐色固体365克，即2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.45；Rf＝0.8。
其中2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤的制备方法为取350克2′-O-三氟甲磺酰基-3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷加入乙酸乙酯中，加入乙酸，再加入N，N一二异丙基苯胺，于氮氛下40℃反应，然后回流搅拌，TLC检测反应完毕，再加乙酸乙酯稀释，稀释后的溶液用水、碳酸氢钠水溶液以及饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后减压蒸馏除去溶剂，所得粗品用无水乙醇重结晶，得白色固体243克，即2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.8；Rf＝0.6。
其中奈拉滨的制备方法为将240克2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤加入无水乙醇中，置于冰水浴中冷却，通氮气排空体系中的空气，然后向体系中通入无水氨气直至体系均相，所得产物于冰箱中放置，然后减压浓缩，浓缩产物用乙醇重结晶，干燥，加入甲醇混合加热至回流，搅拌使物料溶解，趁热过滤，滤液浓缩，搅拌下加入无水乙醇、乙醚，冷却放置析晶，抽滤，用无水乙醇洗涤，抽滤，干燥，得到奈拉滨126.1克。
以6-氯鸟苷为原料，将呋喃核糖构型转换为呋喃阿拉伯糖还可以应用1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷或其它有机试剂进行基团保护，可以进一步缩短上述实验步骤；上述合成方法得到奈拉滨制备成药物制剂，例如口服制剂、注射制剂等药剂学上可以接受的制剂。
注本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。
权利要求
1.一种奈拉滨的合成方法，其特征在于以6-氯鸟苷为原料，经化学合成将呋喃核糖构型转换为呋喃阿拉伯糖制得奈拉滨。
2.根据权利要求1所述得一种奈拉滨的合成方法，其中化学合成为，以6-氯鸟苷为原料，经化学合成制备成6-甲氧基鸟苷，6-甲氧基鸟苷经化学合成制备成2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷，2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷经化学合成制备成3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷，2′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷经化学合成制备成2′-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷，′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷经化学合成制备成2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤，2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤经化学合成制备成奈拉滨。
3.根据权利要求2所述的一种奈拉滨的合成方法，其中6-甲氧基鸟苷的制备方法为取甲醇钠加入到甲醇中，搅拌，得白色浑浊液，加入6-氯鸟苷物料迅速溶解，得淡黄的溶液，随后又析出白色固体，加热至回流，继续反应，冷却至室温，搅拌下小心滴加盐酸溶液中和至PH＝8-9，除溶剂后向剩余淡黄色粘稠物加入蒸馏水，70℃搅拌下溶解，再加入活性碳，热过滤，滤液，自然冷却析晶，过滤，得无色结晶固体，真空干燥，得白色固体，即6-甲氧基鸟苷。
4.根据权利要求2所述的一种奈拉滨的合成方法，其中2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取6-甲氧鸟苷溶于无水吡啶中，减压蒸干，60℃真空干燥2小时，重复操作一次，然后加入乙腈混合搅拌，得白色浑浊液，将DMAP、三乙胺加至白色浑浊液中，氮气保护下将乙酸酐先慢后快加入反应瓶中，物料逐渐溶解，室温搅拌反应，反应完毕，向溶液中加入乙醇，将反应液减压蒸干，再加入乙酸乙酯，再用5％碳酸氢钠溶液洗涤二次，水相用乙酸乙酯反萃，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩后所得到的无色胶状固体，即2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。
5.根据权利要求2所述的一种奈拉滨的合成方法，其中3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取醋酸钠和盐酸羟胺，悬浮于无水吡啶中，搅拌，氮气保护下将2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷加入，室温下搅拌反应，TLC检测反应完毕，向体系中加入丙酮，反应液减压浓缩，剩余物料中加入丙酮继续减压蒸馏带出残余吡啶，粗品溶于丙酮后过滤，不溶滤渣用丙酮洗涤，合并丙酮液，减压浓缩得一油状物，硅胶柱层析，收集产品相，减压蒸干得无色胶状固体，用二氯甲烷-庚烷重结晶得白色固体，即3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。
6.根据权利要求2所述的一种奈拉滨的合成方法，其中2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷的制备方法为取3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷，N-二甲基氨基吡啶和三乙胺加入无水吡啶中，搅拌下降温至-10℃，小心滴加三氟甲磺酸酐，反应瓶中充满白色烟雾，略有温升，滴加完毕，反应液变为棕红色，室温搅拌，TLC检测反应完毕，将反应液小心倒入冰水中，用氯仿萃取四次，合并氯仿相，水洗，氯仿相用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩至干，得红褐色固体，即2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鸟苷。
7.根据权利要求2所述的一种奈拉滨的合成方法，其中2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤的制备方法为取2′-O-三氟甲磺酰基-3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鸟苷加入乙酸乙酯中，加入乙酸，再加入N，N一二异丙基苯胺，于氮氛下40℃反应，然后回流搅拌，TLC检测反应完毕，再加乙酸乙酯稀释，稀释后的溶液用水、碳酸氢钠水溶液以及饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后减压蒸馏除去溶剂，所得粗品用无水乙醇重结晶，得白色固体，即2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤。
8.根据权利要求2所述的一种奈拉滨的合成方法，其中奈拉滨的制备方法为将2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤加入无水乙醇中，置于冰水浴中冷却，通氮气排空体系中的空气，然后向体系中通入无水氨气直至体系均相，所得产物于冰箱中放置，然后减压浓缩，浓缩产物用乙醇重结晶，干燥，加入甲醇混合加热至回流，搅拌使物料溶解，趁热过滤，滤液浓缩，搅拌下加入无水乙醇、乙醚，冷却放置析晶，抽滤，用无水乙醇洗涤，抽滤，干燥，得到奈拉滨。
9.根据权利要求1所述的合成方法得到奈拉滨制备成药物制剂。
全文摘要
本发明公开了一种奈拉滨的合成方法，其特征在于以6－氯鸟苷为原料，经化学合成将呋喃核糖构型转换为呋喃阿拉伯糖制得奈拉滨；这种合成奈拉滨的方法是一种非常经济、适合工业化化生产合成奈拉滨的工艺方法，该合成工艺是以6－氯鸟苷为原料，该原料具有易得、价格低的特点，该路线起始原料廉价易得，合成步骤较短，操作较简便，得率高，得到奈拉滨造价不高，降低了患者的经济负担。
文档编号A61P35/00GK101092441SQ200710119140
公开日2007年12月26日 申请日期2007年7月17日 优先权日2007年7月17日
发明者顾群, 孙学伟, 徐春霞 申请人:北京本草天源药物研究院