含有肾素抑制剂与叶酸类化合物的药物组合物及其用途的制作方法

专利名称：：含有肾素抑制剂与叶酸类化合物的药物组合物及其用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种含有肾素抑制剂与叶酸类化合物的药物组合物及其用途，属于药学领域。
背景技术：
：肾素-血管紧张素系统(RAS)是最重要的血压调节系统之一，它由一系列激素及相应的酶组成，通过对血容量和外周阻力的控制，调节人体血压、水和电解质平衡。RAS不仅存在于血液循环系统，许多组织中存在有局部RAS，在许多生理和病理过程中起着重要作用。抗RAS的药物包括肾素抑制剂、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)、血管紧张素受体拮抗剂(ARB)、酸固酮受体拮抗剂。ACEI已被大规模的临床试验证实具有降低血压，逆转心室肥厚的作用，降低心肌梗死及充血性心力衰竭病死率。ARB阻断RAS的最后一个环节，临床试验证实能够降低血压，减轻大血管动脉粥样硬化和降低心血管病的发生率和病死率。但是，由于ACEI和ARB均不能完全阻断RAS，且ACEI对RAS的特异性不高，可能影响缓激肽和前列腺素的代谢，可引起咳嗽等不良反应，因此，研究RAS的第一环节——肾素阻滞药有着重要意义。肾素(门冬氨酸蛋白酶)催化RAS的始动环节，并且对血管紧张肽原有高度的特异性，即血管紧张肽原为其唯一的催化底物，所以肾素抑制剂长期被作为一个研究的目标。早期的肾素阻滞药，如依那吉仑(enalkiren)，瑞米吉仑(remikiren)，依那吉仑(enalkiren)，瑞米吉仑(remikiren)，地特吉仑(ditekiren),特拉吉仑(terlakiren),占吉仑(zankiren)。2001年Ho.mann-LaRoche研制的SPP600系列和2005年Speedel研制的SPP800系列属非月太类第二代肾素抑制剂，由于充分利用了基于结构的药物设计理论，化合物活性和药动学特性得到很大改善,在动物实验中具有较高的生物利用度。阿利吉仑(Aliskiren,SPP100)也是第二代口服非肽类肾素抑制剂，能有效降低血压和治疗相关心血管疾病。阿利吉仑与内源性肾素竞争性地紧密结合，作用机制主要为阿利吉仑呈剂量依赖性地降低肾素活性，阻止AngI和AngII的生成，不会引起血管紧张肽原水平的增高;降低血浆和尿中的酸固酮水平；促进尿钠排泄，而尿钾排泄不变。阿利吉仑结构在EP678503A中被详细公开，具有以下化学式(1):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式(I)的肾素抑制剂化学名称为2(S),4(S),5(S)，7(S)-N-(3-氨基-2，2-二甲基-3-氧代丙基)-2，7-二(1-甲基乙基)-4-羟基-5-氨基-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基-丙氧基)苯基]-辛酰胺，优选其半富马酸盐。有关含有阿利吉仑肾素抑制剂的专利情况如下公开号为CN1655819A的专利公开了一种包含肾素抑制剂、钙通道阻滞剂和利尿药的药物组合物，申请人为诺瓦提斯公司；公开号为CN1656058A的专利公开了一种肾素抑制剂与ARB，ACEI,e受体阻滞剂，钙通道阻滞剂，醛固酮合成酶抑制剂，醛固酮受体拮抗剂，利尿剂的联用组合；公开号为CN1882528A的专利公开了一种有机化合物，涉及肾素抑制剂与降糖药，降脂药，减肥药，降压药的联用组合；公开号为CN1474690A的专利公开了一种用于治疗心血管疾病的含有肾素抑制剂的协同性药物联合形式，涉及一种肾素抑制剂或其可药用盐的联合形式，包含肾素抑制剂与ATr受体拮抗剂，HMG-Co-A还原酶抑制剂，ACEI,钙通道阻滞剂，醛固酮合酶抑制剂，醛固酮拮抗剂，利尿剂的联用组合。阿利吉仑在治疗高血压及其相关疾病中还存在不足之处，阿利吉仑单用治疗会刺激一种代偿性反射，部分抵消血压降低，从而阻碍血压降低到理想值。阿利吉仑最常见的不良反应为乏力、胃肠道反应或头痛。阿利吉仑对靶器官保护方面的疗效也有待提高。由于治疗高血压病人的主要目的是最大限度地降低心血管病的死亡和病残的总危险，适当的阿利吉仑复方制剂不仅可以减少阿利吉仑的不良反应，提高降压疗效，还可提高阿利吉仑对高血压患者的靶器官保护作用，降低高血压引起的心脑血管事件的风险性。因此，开发适当组方的阿利吉仑复方制剂具有重要的临床意义。
发明内容本发明的目的是克服肾素抑制剂降压药存在的上述不足，提供一种在靶器官保护方面优于肾素抑制剂的复方降压药，而副作用不增加的药物组合物。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种药物组合物，包括(1)药用剂量的肾素抑制剂；(2)药用剂量的叶酸类化合物；(3)药剂学上可接受的载体。上述肾素抑制剂为阿利吉仑(Aliskiren)，地特吉仑(ditekiren)，特拉吉仑(terlakiren)，占吉仑(zankiren),SPP600,或SPP800。上述肾素抑制剂优选阿利吉仑。上述肾素抑制剂的药用剂量为100600mg。上述药用剂量的叶酸类化合物为叶酸、亚叶酸钙或左旋亚叶酸钙，剂量为0.2-1.6mg,优选0.4-1.Omg。我们运用本发明药物对高血压治疗的研究过程中，着重针对靶器官保护和降低心脑血管事件危险性方面。这是因为若高血压不进行有效控制，持续几年后可引起全身细小动脉硬化，变得僵硬且缺乏弹性，管腔变窄，输送至组织的血流速度减慢，造成心、脑、肾、眼等重要脏器损害而不能正常工作。高血压引起的靶器官损害，包括左室肥厚、良性小动脉性肾硬化症、恶性小动脉性肾硬化症、肾功能衰竭、视网膜动脉硬化、或高血压眼底病变。心脑血管事件包括心绞痛、心肌梗死、心力衰竭、脑梗塞、或脑出血，其中脑梗塞和脑出血合称脑卒中。血压控制不好，会出现靶器官损害，如果血压得不到进一步的控制，严重时导致心脑血管事件的发生。因此，治疗高血压病人的主要目的是最大限度地降低心脑血管病的死亡和病残的总危险，靶器官保护与降压并举，是高血压治疗的核心。研究发现，本发明提供的药物组合物不仅具有降压作用还具有靶器官保护作用；当将肾素抑制剂与叶酸类化合物合用时，能协同增强靶器官保护作用，且其保护作用强于单用肾素抑制剂降压药，也强于单用叶酸类化合物，差异均具有统计学意义。进一步，在实验中，我们发现，当将肾素抑制剂与叶酸类化合物合用时，能协同降低心脑血管事件危险性，且其作用强于单用肾素抑制剂降压药，也强于单用叶酸类化合物，差异均具有统计学意义。因此，本发明提供了上述药用剂量的肾素抑制剂和药用剂量的叶酸类化合物组成的药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压的药物中的用途；本发明提供该药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压引起的靶器官损害的药物中的用途，高血压引起的靶器官损害，包括左室肥厚、良性小动脉性肾硬化症、恶性小动脉性肾硬化症、肾功能衰竭、视网膜动脉硬化、或高血压眼底病变。本发明还提供该药物组合物在制备用于降低高血压引起的心脑血管事件危险性的药物中的用途；其中降低心脑血管事件危险性是指降低心绞痛、心肌梗死、心力衰竭、脑梗塞、或脑出血的发生率，降低心脑血管事件危险性还指降低脑卒中的发生率。该药物组合物中还含有药剂学可接受的载体，可制成普通口服制剂，包括普通片剂、胶囊、颗粒剂等，制成片剂时所述药学上可接受的载体包括有助于将活性化合物配制成药用制剂的赋形剂和辅药，如淀粉、微晶纤维素、无机盐类、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠等的一种或几种物质的组合物，属于本领域常识。该药物组合物的剂型包括但不限于普通片剂、双层片剂、多层片剂、缓释片剂、单室控释片剂、双室控释片剂、微孔型控释片剂、舌下含片、口腔速崩片、分散片、肠溶片、颗粒剂、丸剂、肠溶胶囊、延迟释放片、定时/位释放片、普通胶囊、缓释胶囊、控释胶囊、含有微丸或小片的胶囊、含有微丸或小片的PH依赖型胶囊、颗粒剂、口服液、膜剂或贴剂等剂型，其中优选片剂、胶囊或颗粒剂。根据本发明，药物组合物也可以是指含有两个独立药物的药盒。当"药物组合物"是指含有两个独立药物的药盒时，上述"组合药盒"是一种盒状容器，内置多种剂量形式的药物组合，及其服用说明书，"组合药盒"更适用于个体化用药；第一个药物为肾素抑制剂，第二个药物中含有叶酸类化合物。该药盒中的两个独立的药物可以伴随给药，也可以在同一种药物制剂中或者在不同的药物制剂中按顺序给药。本发明的有益效果是本发明提供的药物组合物具有明显协同作用，其协同作用在于能协同保护高血压引起的靶器官损害及协同降低心脑血管事件危险性。因此，本发明提供了上述药用剂量的肾素抑制剂和药用剂量的叶酸类化合物组成的药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压、高血压引起的靶器官损害的药物中的用途，本发明还提供该药物组合物在制备用于降低高血压引起的心脑血管事件危险性的药物中的用途。通过本发明的实施，提供给患者这种特定用途的药物组合物可以提高患者依从性，使患者服药方便，降低医疗费用，具有较好市场前景。下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，药理作用的实验支持详见以下具体实施方式。具体实施例方式实施例1:阿利吉仑+叶酸对自发性高血压大鼠(SHR)降压及靶器官损害的保护作用Sffil大鼠，体重150180g，平均分为6组，每组20只，分别为模型组、阿利吉仑+叶酸(15+0.04mg/kg)组、阿利吉仑+叶酸(15+0.08mg/kg)组、阿利吉仑+叶酸(15+0.16mg/kg)组、阿利吉仑(15mg/kg)组、叶酸(0.08mg/kg)组，另取20只正常大鼠作为正常对照组。给予等容量0.5%CMC溶液，每周称重一次，根据体重调整药量，连续给药20周。检测指标-(1)分别测定给药前和给药后不同时间鼠尾收縮压，比较各组间血压差别。(2)收集尿液，用比浊法测定尿蛋白、放免法测定24h尿al微球蛋白；取血，测定血肌酐、计算肌酐清除率(Ccr)。(3)心肌羟脯氨酸测定取左心室游离壁心肌组织，制备成10%的心肌组织匀浆，按羟脯氨酸测试盒说明书，消化法测定心肌羟脯氨酸含量，按胶原蛋白含量二羟脯氨酸含量X7.46，换算成胶原蛋白含量。(4)心肌组织常规切片，天狼星红-苦味酸染色，测量心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)。CVF为胶原面积与心肌总面积的比值，其中胶原面积不包括血管周围胶原面积，随机分析5个视野，取其均值。PVCA为每一标本测量4支呈横切面的壁内小动脉的周围面积与管腔面积的比值，取其均值。(5)肾内小动脉观察经腹主动脉插管，0.1mg/ml硝普钠充分扩张血管后，用10%的甲醛溶液在1012kPa下灌注固定，分离左肾，自肾门处剪下肾脏，置于4%甲醛中固定，常规脱水、石蜡包埋、横切片、HE染色。光学显微镜下选取外径为50100um的肾内小动脉，测量肾内小动脉内径、壁厚，计算壁厚内径比。每个标本测量4支呈横切面的壁内小动脉，取其平均值。计量资料用又±s表示，数据统计学处理采用SPSS10.0统计软件包，两组间比较采用t检验。结果(1)阿利吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠血压的影响第20周末，与正常组大鼠比较，模型组大鼠收缩压显著升高；与模型组比较，叶酸组大鼠收縮压有所改善，阿利吉仑组及阿利吉仑(15mg/kg)+不同剂量叶酸(0.040.16mg/kg)组大鼠收缩压均显著降低但与阿利吉仑单方组比较，阿利吉仑+不同剂量叶酸组大鼠收缩压的降压幅度没有显著改变。见表l。(2)阿利吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠肾功能的影响与正常组大鼠比较，模型组大鼠尿24ha1-微球蛋白、尿蛋白显著升高，Ccr明显降低。与模型组比较，阿利吉仑组大鼠尿24hci1-微球蛋白、尿蛋白显著降低，Ccr显著升高。与阿利吉仑组比较，阿利吉仑+不同剂量叶酸(0.040.16mg/kg)组大鼠Ccr进一步升高，24hal-微球蛋白、尿蛋白进一步降低。表明阿利吉仑对SHR高血压大鼠出现的早期肾功能损害具有保护作用，叶酸与阿利吉仑合用，对S服高血压大鼠的肾功能保护作用显著增强，见表2。表l阿利吉仑+叶酸对S服高血压大鼠收縮压(咖Hg)的影响(X士SD)<table>complextableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与正常组比较，*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较，AP<0.05,"P<0.01表2阿利吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠肾功能的影响(X±SD)<table>complextableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与正常组比较，'卞〈0.01;与模型组比较'AP<0.05，"P〈0.01;与阿利吉仑组比较，*P<0.05(3)阿利吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠心肌胶原蛋白含量及心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)的影响与正常组大鼠比较，模型组大鼠心肌胶原蛋白含量,心肌间质纤维化指标CVF、心肌血管周围纤维化指标PVCA均显著增加，CVF与PVCA升高几乎同步，表明心肌间质纤维化参与了高血压大鼠心脏重构的病理过程。与模型组比较，阿利吉仑组大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌CVF、PVCA均显著降低。与阿利吉仑(15mg/kg)组比较，阿利吉仑(15mg/kg)十不同剂量叶酸(0.040.16mg/kg)组大鼠心肌胶原蛋白含量及心肌CVF、PVCA进一步降低，与阿利吉仑(15mg/kg)单方组比较有显著性差异。表明叶酸与阿利吉仑合用，对高血压大鼠心肌保护作用增强。见表3。表3阿利吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)的影响(X土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与正常组比较，"P〈0.01;与模型组比较，AP<0.05,"P〈0.01;与阿利吉仑组比较，"*P<0.05(4)阿利吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠肾内小动脉的影响高血压大鼠的血管改变，主要表现为血管壁外膜的纤维化，管壁中层增厚(由平滑肌细胞增生、肥厚和细胞间质增多所致)；内膜玻璃样变，内皮细胞增生，上述变化使血管壁厚度/管腔比值减小。与正常组大鼠比较，模型组大鼠肾小动脉壁厚增加，内径减小，壁厚/内径比增加。与模型组比较，阿利吉仑组大鼠肾小动脉壁厚降低、壁厚/内径比增加，阿利吉仑+叶酸组大鼠肾小动脉壁厚进一步降低、壁厚/内径比进一步增加，与阿利吉仑组比较有显著性差异。见表4。表4阿利吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠肾内小动脉的影响(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与正常组比较，"P〈0.01;与模型组比较，"P〈0.01;与阿利吉仑组比较，*P<0.05，"P<0.01实施例2:阿利吉仑+叶酸对卒中易感型自发性高血压(SHR-SP)大鼠的保护作用8周龄左右雄性SHR-SP大鼠共60只，结合血压数值，分为模型组、阿利吉仑+叶酸(30+0.08rag/kg)组、阿利吉仑(30mg/kg)组。饲养条件室温22土2'C;相对湿度50%;固形饲料和垫料均由中国医学科学院实验动物繁育场提供；饮用水为纯净水。另设WKY对照组，每组20只。灌胃给药，每天1次，每周称重一次，根据体重调整药量，连续8周。观察指标(1)每日观察动物饮食、存活情况及行为活动，于8周记录各组动物脑卒中发生情况。(2)神经功能分级参照Bederson的神经功能分级标准(Bederson,JB，Pitts,LH，Tsuji.M,etal.Ratmiddlecerebralarteryocclusion:Evaluationofthemodelanddevelopmentaeurologicexamination[J]Stroke,1986,17(3):472-476.)，分为如下5级，每周观察一次。0级(正常)无神经功能缺损症状。l级(轻微)前肢蜷縮或屈曲，主要是持续性腕屈曲或肩内收伴肘部伸展。2级(中度)前肢持续性蜷縮或屈曲，可见腕、肘全部屈曲、肩部内收或内旋。3级(严重)持续性肢体蜷缩或屈曲，一侧肢体推力体抗持续性减弱，自主活动时不伴肢体划圈行为。4级(甚重)双侧肢体持续性蜷縮或屈曲，一侧肢体推力体抗持续性减弱，自主活动时出现肢体划圈行为。(3)病理学观察所有存活动物及死亡后可取得病理组织的大鼠均取脑组织，切片、HE染色，观察脑出血、脑梗塞或混合性脑卒中，计算各组大鼠脑卒中发生率。模型组有2只，复方组有1只，单方组中有l只动物死亡后被其他动物食掉，未能取得脑组织进行病理检査。结果本实验过程中，模型组大鼠卒中后出现明显精神萎靡，嗜睡，毛发蓬松、干枯或脱落、无光泽，体重下降，主动活动明显减少，行动迟缓，肢体呈不同程度瘫痪，部分大鼠发病同时伴有抽搐、腹泻、小便失禁、眼球出血等症状，病情严重者数小时内死亡。治疗组的大部分动物神经功能缺损较模型组轻微，精祌状态明显优于模型组，自主活动增加，主动觅食、饮水，体重下降不明显，毛发也较模型组顺滑有光泽。模型组20只大鼠中有14只发生脑卒中，其中死亡5只，除2只动物于夜间死亡后未能及时取得组织外，其他18只动物均进行了病理组织学观察，共16只有脑卒中发生，其中脑出血5只，脑梗死6只，混合性中风5只。脑卒中灶及周围均可见小动脉透明变性或纤维素样坏死，管壁增厚，管腔狭窄，有的管腔内可见微血栓形成，管周渗血。阿利吉仑对照组20只大鼠有12只发生脑卒中，其中死亡3只，1只动物未能取得病理组织，其他19只动物均进行了病理组织学观察，共14只有脑卒中发生，与模型组比较未见显著差异。阿利吉仑+叶酸组20只大鼠有8只发生脑卒中，于实验结束时死亡2只，其中1只动物未能取得病理组织，其他19只动物均进行了病理组织学观察，共7只有脑卒中发生，其脑卒中发生率明显降低，且与模型对照组比较差异具有显著性(P〈0.05),详见表5。4周及8周时观察，发现给予复方阿利吉仑叶酸(30+0.08mg/kg)可明显改善大鼠的神经功能分级(P<0.05)，详见表6及表7。表5阿利吉仑+叶酸连续给药8周对S服-SP大鼠脑卒中的影响(X土SD)iHi动物数脑卒中发生数~~病理组织学观察组别(mg/kg)(试验始/末)(发生率)发生数与发生率正常组一20/200(0%)1(590模型组一20/159(70%)'16(88.89%)**阿利吉仑+叶酸30+0.0820/186(40%)▲8(42.阿利吉仑3020/179(60%)14(73.7%)乂2检验，与正常组比较，"P〈0.01;与模型组比较，"〈0.05;模型组2只，复方组l只，单方组l只动物死亡后未能取得脑组织进行病理检査，统计中未计算入内。表6阿利吉仑+叶酸连续给药4周对SHR-SP大鼠脑卒中神经功能分级比较(只)iUil~~3"iTiTi4级(mg/kg)数对照组=20(100%)0(0%)0(0%)0(0%)0(0%)~模型组"一181(5.6%)1(5.6%)2(11.1W6(33.3%)8(44.4%)阿利吉仑+叶酸i30+0.081910(52.6%)3(15.8%)3(15.8%)2(10.5%)1(5.390阿利吉仑30195(26.3%)2(10.5%)3(15.8%)4(21.1%)5(26.3%)乂2检验，与正常组比较，"P〈0.01;与模型组比较，▲P<0.05;表7阿利吉仑+叶酸连续给药8周对SHR-SP大鼠脑卒中神经功能分级比较(只)组别剂量动物0级l级2级3级4级(mg/kg)数对照组一2020(100D0(0%)0(0%)0(0%)0(0%)模型组**一151(6.7%)1(6.7%)1(6.7%)5(33.3%)7(46.7%)阿利吉仑+叶酸A30+0.081810(55.6%)3(16.7%)2(11.1%)2(11.1%)1(5.6%)阿利吉仑30174(23.5%)2(11.8W3(17.6%)4(23.5%)4(23.5%)乂2检验，与正常组比较，"P〈0.01;与模型组比较，AP<0.05;实施例3:阿利吉仑+亚叶酸钙对双转基因大鼠(dTGR)的降压及靶器官保护作用6周龄人肾素，血管紧张素双转基因大鼠(dTGR)60只，根据血压水平及24小时尿蛋白情况将大鼠分为模型组，阿利吉仑+亚叶酸钙(15+0.10mg/kg)组，阿利吉仑(15mg/kg)组，缌沙坦Umg/kg)对照组，实验过程中均喂以1%盐水。另设正常对照组15只。正常对照组、模型组给予等容量0.5y。CMC溶液，每周称重一次，根据体重调整药量，连续给药3周。检测指标(1)一般状态及给药前后各组动物尾动脉收縮压。(2)试验结束时解剖取心脏及肾脏，计算脏器系数。(3)收集尿液，测尿蛋白、24h尿al微球蛋白；取血，测定血肌酐、计算肌酐清除率(Ccr)。结果(1)dTGR大鼠随年龄的增长，血压不断升高。模型组动物于9周龄时死亡率为100%,因而本试验中设计中加入缬沙坦(lmg/kg)对照组用于第9周时代替模型组同其他各组进行比较，该剂量仅能最小程度地起到降压及靶器官保护，是做为降低动物死亡率的一种措施。第9周末试验结束时，该组15只动物中死亡4只，存活11只。给予阿利吉仑(15呢/kg)及阿利吉仑+亚叶酸钙(15+0.lmg/kg)治疗的大鼠及正常大鼠存活率为100%。阿利吉仑单方及复方组血压均可显著降低，与单方组相比，复方组降压作用未见显著性差异，见表8。表8阿利吉仑+亚叶酸钙连续给药3周对dTGR大鼠血压(咖Hg)的影响(X土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>与正常组比较，"P〈0.01;与模型组比较，"P〈0.01;与缬沙坦代模型组比较，*P<0.05(2)对dTGR大鼠脏器系数的影响缬沙坦模型组大鼠心，脑，肾脏器系数均较正常组动物明显增加，给予阿利吉仑(15mg/kg)及阿利吉仑+亚叶酸钙(15+0.lmg/kg)，对dTGR大鼠的心、脑、肾脏器系数均有明显的减低作用，单方与复方组未见明显差异，见表9。表9阿利吉仑+亚叶酸钙连续给药3周对dTGR大鼠脏器系数(g/100g)的影响(X土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>与正常组比较，'P〈0.05;与缬沙坦代模型组比较，AP<0.05(3)对dTGR大鼠肾功能的影响与正常组大鼠比较，缬沙坦模型组大鼠尿24ha「微球蛋白、尿蛋白显著升高，Ccr明显降低。与本组比较，阿利吉仑组大鼠尿24ha「微球蛋白、尿蛋白显著降低，Ccr显著升高。与亚叶酸钙合用组大鼠Ccr进一步升高，24hai-微球蛋白、尿蛋白进一步降低。表明阿利吉仑对dTGR大鼠出现的早期肾功能损害具有保护作用，亚叶酸钙与阿利吉仑合用，对肾功能保护作用显著增强，见表io。表10阿利吉仑+亚叶酸钙连续给药3周对dTGR大鼠肾功能的影响a土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>与正常组比较，"P〈0.01;与缬沙坦模型组比较，"P〈0.01;与阿利吉仑组比较，<0.05实施例4:特拉吉仑+叶酸对自发性高血压大鼠(S服)降压及靶器官损害的保护作用SHR大鼠，体重150180g，平均分为6组，每组20只，分别为模型组、特拉吉仑+叶酸(30+0.04mg/kg)组、特拉吉仑+叶酸(30+0.08呢/kg)组、特拉吉仑+叶酸(30+0.16mg/kg)组、特拉吉仑(30呢/kg)组、叶酸(0.08mg/kg)组，另取20只正常大鼠作为正常对照组。给予等容量0.5%CMC溶液，每周称重一次，根据体重调整药量，连续给药20周。检测指标(1)分别测定给药前和给药后不同时间鼠尾收縮压，比较各组间血压差别。(2)收集尿液，用比浊法测定尿蛋白、放免法测定24h尿al微球蛋白；取血，测定血肌酐、计算肌酐清除率(Ccr)。(3)心肌羟脯氨酸测定取左心室游离壁心肌组织，制备成10%的心肌组织勾浆，按羟脯氨酸测试盒说明书，消化法测定心肌羟脯氨酸含量，按胶原蛋白含量^羟脯氨酸含量X7.46，换算成胶原蛋白含量。(4)心肌组织常规切片，天狼星红-苦味酸染色，测量心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)。CVF为胶原面积与心肌总面积的比值，其中胶原面积不包括血管周围胶原面积，随机分析5个视野，取其均值。PVCA为每一标本测量4支呈横切面的壁内小动脉的周围面积与管腔面积的比值，取其均值。(5)肾内小动脉观察经腹主动脉插管，0.1mg/ml硝普钠充分扩张血管后，用10%的甲醛溶液在1012kPa下灌注固定，分离左肾，自肾门处剪下肾脏，置于4%甲醛中固定，常规脱水、石蜡包埋、横切片、HE染色。光学显微镜下选取外径为50100um的肾内小动脉，测量肾内小动脉内径、壁厚，计算壁厚内径比。每个标本测量4支呈横切面的壁内小动脉，取其平均值。计量资料用I±s表示，数据统计学处理采用SPSSIO.O统计软件包，两组间比较采用t检验。结果(1)特拉吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠血压的影响第20周末，与正常组大鼠比较，模型组大鼠收縮压显著升高；与模型组比较，叶酸组大鼠收縮压有所改善，特拉吉仑组及特拉吉仑(30mg/kg)+不同剂量叶酸(0.040.16mg/kg)组大鼠收缩压均显著降低；但与特拉吉仑单方组比较，特拉吉仑+不同剂量叶酸组大鼠收缩压的降压幅度没有显著改变。见表ll。(2)特拉吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠肾功能的影响与正常组大鼠比较，模型组大鼠尿24hdl-微球蛋白、尿蛋白显著升高，Ccr明显降低。与模型组比较，特拉吉仑组大鼠尿24hal-微球蛋白、尿蛋白显著降低，Ccr显著升高。与特拉吉仑组比较，特拉吉仑+不同剂量叶酸(0.040.16呢/kg)组大鼠Ccr进一步升高，24hal-微球蛋白、尿蛋白进一步降低。表明特拉吉仑对S服高血压大鼠出现的早期肾功能损害具有保护作用，叶酸与特拉吉仑合用，对SHR高血压大鼠的肾功能保护作用显著增强。见表12。(3)特拉吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠心肌胶原蛋白含量及心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)的影响与正常组大鼠比较，模型组大鼠心肌胶原蛋白含量，心肌间质纤维化指标CVF、心肌血管周围纤维化指标PVCA均显著增加，CVF与PVCA升高几乎同步，表明心肌间质纤维化参与了高血压大鼠心脏重构的病理过程。与模型组比较，特拉吉仑组大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌CVF、PVCA均显著降低。与特拉吉仑(15mg/kg)组比较，特拉吉仑(15mg/kg)+不同剂量叶酸(0.040.16mg/kg)组大鼠心肌胶原蛋白含量及心肌CVF、PVCA进一步降低，与特拉吉仑(15mg/kg)单方组比较有显著性差异。表明叶酸与特拉吉仑合用，对高血压大鼠心肌保护作用增强。见表13。表ll特拉吉仑+叶酸对S服高血压大鼠收縮压(mmHg)的影响(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>与正常组比较，*P<0.05，林P〈0.01;与模型组比较，"<0.05，"P<0.01表12特拉吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠肾功能的影响(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>与正常组比较，"P〈0.01;与模型组比较，<0.05,"P〈0.01;与特拉吉仑组比较，*P<0.05表13特拉吉仑+叶酸对Sffi高血压大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)的影响(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>与正常组比较，"P〈0.01;与模型组比较，"<0.05,"P〈0.01;与特拉吉仑组比较，*P<0.05(4)特拉吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠肾内小动脉的影响高血压大鼠的血管改变，主要表现为血管壁外膜的纤维化，管壁中层增厚(由平滑肌细胞增生、肥厚和细胞间质增多所致)；内膜玻璃样变，内皮细胞增生，上述变化使血管壁厚度/管腔比值减小。与正常组大鼠比较，模型组大鼠肾小动脉壁厚增加，内径减小，壁厚/内径比增加。与模型组比较，特拉吉仑组大鼠肾小动脉壁厚降低、壁厚/内径比增加，特拉吉仑+叶酸组大鼠肾小动脉壁厚进一步降低、壁厚/内径比进一步增加，与特拉吉仑组比较有显著性差异。见表14。表14特拉吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠肾内小动脉的影响(X土SD)组别剂量(mg/kg)N壁厚(nm)内径(lim)壁厚/内径(％)正常组—204.3±0.961.2±11.68.4±1.1模型组一1513.1±2.2"48.5±9.T'21.7±7.1"特拉吉仑+叶酸30+0.04178.4±1.7"53.2±9.516.1±3.2"*30+0.08187.7±1.8"55.5±5.814.l士4,6""30+0.16196.7±2.3"63.6±7.111.5±3.7"*特拉吉仑30189.8±2.2"58.2±7.018.6±3.4"叶酸0.081711.4±2.850.9±8.524.2±5.6与正常组比较，"P〈0.01;与模型组比较，"P〈0.01;与特拉吉仑组比较，*P<0.05,**P<0.01实施例5:阿利吉仑150mg/叶酸0.2mg胶囊的制备处方阿利吉仑150.0g叶酸0.2g微晶纤维素80.0g交联聚维酮44.0g聚乙烯吡咯酮K12.0g5%聚维酮k-30水溶液适量硬脂酸镁_5_制成1000粒制备工艺将阿利吉仑150g、叶酸0.2g、微晶纤维素80g、交联聚维酮44g、聚乙烯吡咯酮K12g粉碎、过筛后混合均匀，与适量的5免聚维酮k-30水溶液混合制成软材后制粒、干燥、加入约1%的硬脂酸镁混合均匀，按常规方法装胶囊1000粒即得。实施例6:阿利吉仑300mg/叶酸1.6mg胶囊的制备处方阿利吉仑300.0g叶酸1.6g微晶纤维素160.0g交联聚维酮88.0g聚乙烯吡咯酮K16.0g5%聚维酮k-30水溶液适量硬脂酸镁_适量制成1000粒制备工艺同实施例5。实施例7:阿利吉仑150mg/叶酸0.4mg片的制备处方阿利吉仑150.0g叶酸0.4g微晶纤维素80.0g交联聚维酮44.0g聚乙烯吡咯酮K12.0g泊洛萨姆F68l.Og水适量硬脂酸镁适量制成1000片制备工艺叶酸过80目筛，其他辅料分别过100目筛后75'C干燥2小时，备用；精密称定处方量的阿利吉仑、微晶纤维素、交联聚维酮和聚乙烯吡咯酮K过筛混匀，备用；取处方量的叶酸和泊洛萨姆F68加入少量水，充分混合均匀后等量递增加入预混好的阿利吉仑、微晶纤维素、交联聚维酮和聚乙烯吡咯酮K，加入粘合剂制软材，30目筛制粒，60。C干燥3h;30目整粒，加入适量硬脂酸镁混匀，含量测定后压片，包装。实施例8:阿利吉仑150mg/叶酸0.8mg片的制备处方阿利吉仑150.0g叶酸0.8g微晶纤维素80.0g交联聚维酮44.0g聚乙烯吡咯酮K12.0g泊洛萨姆F68l.Og水适量硬脂酸镁_适量制成1000片制备工艺同实施例7。实施例9:阿利吉仑300mg/叶酸0.4mg片的制备处方阿利吉仑300.0g叶酸0.4g乳糖120.0g微晶纤维素30.0g预胶化淀粉8.0g胶态二氧化硅l.Og交联聚维酮3.0g硬脂酸镁适量水适量制成1000片制备工艺叶酸过80目筛，其他辅料分别过IOO目筛后75'C干燥2小时，备用；精密称定处方量的阿利吉仑、乳糖、微晶纤维素、预胶化淀粉、交联聚维酮等过筛混匀，加入粘合剂制软材，30目筛制粒，6(TC干燥3h;30目整粒，加入适量硬脂酸镁混匀，含量测定后压片，包装。实施例10:阿利吉仑300mg/叶酸0.8mg片的制备处方阿利吉仑300.0g叶酸0.8g乳糖120.0g微晶纤维素30.0g预胶化淀粉8.0g胶态二氧化硅1.0g交联聚维酮3.0g硬脂酸镁适量水适量制成1000片制备工艺同实施例9。当阿利吉仑每日需要用量为600mg时，可以一次服用如实施例6、9、或10的300rag阿利吉仑制剂规格两片/粒。实施例"处方阿利吉仑100mg/叶酸0.2mg胶囊的制备阿利吉仑叶酸簡.0g0.2g50.0g26.0g22.0g适量适量微晶纤维素交联聚维酮聚维酮十二烷基硫酸钠硬脂酸镁制成1000粒制备工艺将阿利吉仑、叶酸、微晶纤维素、交联聚维酮、聚维酮粉碎、过筛后混合均匀，与适量的十二垸基硫酸钠混合制成软材后制粒、干燥、加入约1%的硬脂酸镁混合均匀，按常规方法装胶囊iooo粒即得。实施例12:特拉吉仑300mg/叶酸0.4mg胶囊的制备处方特拉吉仑叶酸微晶纤维素交联聚维酮聚乙烯吡咯酮K5%聚维酮k-30水溶液硬脂酸镁300.0g0.4g160.0g88.0g16.0g适量适量制成1000粒制备工艺同实施例5。实施例13处方占吉仑250mg/叶酸0.4mg胶囊的制备盐酸占吉仑叶酸250.0g0.4g150.0g88.0g16.0g适量适量微晶纤维素交联聚维酮聚乙烯吡咯酮K5%聚维酮k-30水溶液硬脂酸镁制成1000粒制备工艺同实施例5。权利要求1.一种药物组合物，包括(1)药用剂量的肾素抑制剂；(2)药用剂量的叶酸类化合物；(3)药剂学上可接受的载体。2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述肾素抑制剂为阿利吉仑、地特吉仑、特拉吉仑、占吉仑、SPP600、或SPP800。3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述肾素抑制剂是阿利吉仑。4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述肾素抑制剂的药用剂量为100600mg。5.如权利要求l所述的药物组合物，其特征在于所述药用剂量的叶酸类化合物为叶酸、亚叶酸钙或左旋亚叶酸钙，所述剂量为O.21.6mg。6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述剂量是0.41.0mg。7.如权利要求16中任一所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的制药剂型为口服制剂，包括片剂、胶囊或颗粒剂。8.权利要求16中任一所述的药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压的药物中的用途。9.权利要求16中任一所述的药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压引起的靶器官损害的药物中的用途。10.如权利要求9所述的用途，其特征在于所述的靶器官损害包括左室肥厚、良性小动脉性肾硬化症、恶性小动脉性肾硬化症、肾功能衰竭、视网膜动脉硬化、或高血压眼底病变。11.权利要求16中任一所述的药物组合物在制备用于降低高血压引起的心脑血管事件危险性的药物中的用途。12.如权利要求11所述的用途，其特征在于所述降低高血压引起的心脑血管事件危险性是指降低心绞痛、心肌梗死、心力衰竭、脑梗塞、或脑出血的发生率。13.如权利要求11所述的用途，其特征在于所述降低高血压引起的心脑血管事件危险性是指降低脑卒中的发生率。全文摘要本发明涉及一种含有肾素抑制剂与叶酸类化合物的药物组合物及其用途，属于药学领域。此药物组合物包括药用剂量的肾素抑制剂、药用剂量的叶酸类化合物、和药剂学上可接受的载体。本发明提供了含有肾素抑制剂与叶酸类化合物的药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压、高血压引起的靶器官损害的药物中的用途，本发明还提供该药物组合物在制备用于降低高血压引起的心脑血管事件危险性的药物中的用途。通过本发明的实施，提供给患者这种特定用途的药物组合物可以提高患者依从性，使患者服药方便，降低医疗费用，具有较好市场前景。文档编号A61K31/519GK101347434SQ20071012001公开日2009年1月21日申请日期2007年8月7日优先权日2007年8月7日发明者多于,徐希平,燕王,王琳琳,陈光亮,陈明侠申请人:北京奥萨医药研究中心有限公司