顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物的制作方法

专利名称：顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物的制作方法
技术领域：
本发明大体关于具有有益药理学性能的顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物。本发明进一步关于所述化合物于治疗与辣椒素受体活化相关的病症上，于鉴别与辣椒素受体结合的其他药物上，以及作为检测和定位辣椒素受体的探针上之用途。

背景技术：
痛知觉或伤害感受是由一组称为“伤害感受器”的特殊感觉神经元的周边末端介导的。有多种生理或化学刺激会引起哺乳动物的所述神经元活化，使得所述神经元能识别有潜在危害的刺激。然而，不当或过度活化伤害感受器可能产生引致衰弱的急性或慢性疼痛。
神经病理性疼痛涉及无刺激下的疼痛信号传输，通常是由神经系统受到伤害而引起的。在大多数情况下，认为所述疼痛是在周边系统受到初始伤害(如通过直接伤害或全身性疾病)之后造成周边神经系统和中枢神经系统敏化所致。神经病理性疼痛通常为灼热、刺痛且其强度不退，有时候比诱发该疼痛之初次伤害或疾病过程更会引致衰弱。现有的神经病理性疼痛的治疗方法大都是无效的。鸦片，例如吗啡，是有力的止痛药，但其副作用(如生理成瘾性及生理戒断性，以及呼吸抑制、情绪变化、以及伴随便秘脂肠内蠕动性减弱、恶心、呕吐，以及内分泌及自主神经系统的改变)限制了其用途。此外，神经病理性疼痛经常对传统类鸦片类止痛药疗法没有反应或仅有部分反应。使用N-甲基-D-天冬氨酸拮抗剂氯胺酮(ketamine)或α(2)-抗肾上腺素激动剂可乐定(clonidine)治疗可减少急性或慢性疼痛，并减少类鸦片的消耗，但是这些药物通常因有副作用而耐受性差。
使用辣椒素的局部疗法已用于治疗慢性及急性疼痛(包括神经病理性疼痛)。辣椒素是来自茄科植物(包括辣椒)的一种有刺激味的物质，其似乎选择性作用于被认为介导疼痛的小直径传入神经纤维(A-δ及C纤维)。对辣椒素反应的特征为周边组织中伤害感受器的持续不断的活化，最终周边伤害感受器对一种或多种刺激脱敏。经过对动物研究发现，辣椒素似乎通过打开钙和钠的阳离子选择性通道而引发C纤维细胞膜的去极化。
与辣椒素有相同的类香草醇基的结构类似物亦会引起类似的反应。一种所述的类似物为辣椒素同源物树脂毒素(resiniferatoxin，RTX)，其为大戟属(Euphorbia)植物的天然产物。术语类香草醇受体(VR)是用来说明辣椒素与所述相关的刺激性化合物于神经元细胞膜的识别部位。辣椒素反应被另一种辣椒素类似物(辣椒氮呯(capsazepine))竞争性地抑制(由此受到拮抗)，亦被非选择性离子通道阻断剂钌红抑制，其仅靠适度亲和力(典型地，Ki值不低于140μM)与VR结合。
大鼠与人的类香草醇受体已由背根神经节细胞克隆。第一类需鉴别的类香草醇受体为熟知的类香草醇受体类型1(VR1，亦称为TRPV1)，本文所述的术语“VR1”及“辣椒素受体”交替使用，指此类型的大鼠及/或人以及同系哺乳类的受体。已使用缺少此类受体的小鼠确定了VR1在疼痛感觉方面的角色，此种小鼠显示无类香草醇引发的疼痛行为，且对热及炎症的反应已受损。VR1为非选择性阳离子通道，其开放阀值因高温、低pH及辣椒素受体激动剂而降低。辣椒素受体通道开放之后通常从表达该受体的神经元及其他相邻神经元释放出炎性多肽而增强疼痛的反应。经辣椒素初始活化后，该辣椒素受体藉由cAMP-依赖性蛋白激酶磷酸化而快速脱敏。
由于其对周边组织的伤害感受器具有脱敏能力，VR1激动剂类香草醇化合物已用作局部麻醉剂。然而，应用激动剂本身可引起灼痛，从而限制了该治疗用途。最近，据报道VR1拮抗剂，包括某些非类香草醇化合物亦用于治疗疼痛(请见例如PCT国际申请案公开号第WO02/08221号、第WO 03/062209号、第WO 04/054582号、第WO04/055003号、第WO 04/055004号、第WO 04/056774号、第WO05/007646号、第WO 05/007648号、第WO 05/007652号、第WO05/009977号、第WO 05/009980号、第WO 05/009982号、第WO05/049601号、第WO 05/049613号、第WO 06/120481号及第WO06/122200号)。
因此，与VR1相互作用但不引起VR1激动剂类香草醇化合物的初始疼痛感的化合物可理想的用于治疗慢性及急性疼痛(包括神经病理性疼痛)，以及用于治疗其他对辣椒素受体调节有反应的病症。本发明满足了这一需要，并提供进一步相关的优越性。


发明内容
本发明提供如式(I)所示的顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物以及所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物(如水合物)及酯

式(I) 式(I)中

代表含有1个、2个或3个杂原子的稠合5元或6元杂芳基，所述杂原子独立选自O、N或S的，且其余环原子为碳，其中，所述稠合杂芳基视需要经取代；优选地，所述稠合杂芳基经0个至2个独立选自下述的取代基取代(i)氨基或羟基；或(ii)各自经0个至2个独立选自羟基、氨基、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基的取代基取代的下述基团C1-C6烷基、(C3-C7环烷基)C0-C2烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰氧基、C1-C6烷基磺酰氨基、C1-C6烷酰氨基或单-或二-(C1-C6烷基)氨基； Ar为6元至10元芳基或5元至10元杂芳基，其各自视需要经取代，并且优选地，所述芳基或杂芳基各自经0个至4个或0个至3个独立选自卤素、氰基、氨基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基或单-或二-(C1-C6烷基)氨基的取代基取代；以及 Rx为C1-C6烷基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基或C1-C6卤代烷基，所述基团之各者视需要经取代，并且优选地，所述基团可各自经0个至2个独立选自卤素、氰基、氨基、羟基或C1-C6烷基的取代基取代。在某些态样中，本发明提供的顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物满足式(II)

式(II) 或为其药学上可接受的盐、溶剂化物(如水合物)或酯。式(II)中

代表环中含有1个、2个或3个杂原子的5元或6元稠合杂芳基，所述杂原子独立选自O、N或S，且其余环原子为碳，其中，所述稠合杂芳基视需要经取代；优选地，所述稠合杂芳基经0个至2个独立选自下述的取代基取代(i)氨基或羟基；或(ii)各自经0个至2个独立选自羟基、氨基、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基的取代基取代的下述基团C1-C6烷基、(C3-C7环烷基)C0-C2烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰氧基、C1-C6烷基磺酰氨基、C1-C6烷酰氨基或单-或二-(C1-C6烷基)氨基； X为N或CH； R1代表0个至3个取代基；优选地，所述取代基各自独立选自卤素、氰基、氨基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基或单-或二-(C1-C6烷基)氨基；以及 Rx为C1-C6烷基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基或C1-C6卤代烷基，所述基团各自视需要经取代，并且优选地，所述基团可各自经0个至2个独立选自卤素、氰基、氨基、羟基或C1-C6烷基的取代基取代。
在某些态样中，式(I)或式(II)所示的化合物为VR1调节剂，其以辣椒素受体结合检测法测得的Ki不大于1微摩尔(micromolar)、500纳摩尔(nanomolar)、100纳摩尔、50纳摩尔、10纳摩尔或1纳摩尔，及/或其于测定辣椒素受体激动剂或拮抗剂活性的体外检测法测得的EC50或IC50的值不大于1微摩尔、500纳摩尔、100纳摩尔、50纳摩尔、10纳摩尔或1纳摩尔。在某些实施方式中，所述VR1调节剂为VR1拮抗剂，并且在辣椒素受体活化的体外检测法(如本发明实施例6提供的检测法)中，当其浓度等于IC50、10倍IC50或100倍IC50时没有可检测的到的激动剂活性。
在某些态样中，本发明化合物标有可检测的标记(如放射性标记或萤光素共轭标记)。
在其他态样中，本发明进一步提供药物组合物，其包括至少一种与生理上可接受的载体或赋形剂组合的顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物。
在另外一些态样中，本发明提供用于减少细胞辣椒素受体的钙传导的方法，其包括将表达辣椒碱受体的细胞(如神经元，诸如中枢神经系统或周边神经节、尿道上皮或肺部的细胞)与至少一种本发明所述的VR1调节剂接触。所述接触可在体内或体外发生，并通常使用足以在体外改变类香草醇配体与VR1结合性的VR1调节剂浓度(使用实施例5所提供的检测法)及/或VR1-介导的信号传导(使用实施例6所提供的检测法)的VR1调节剂浓度。
本发明进一步提供抑制类香草醇配体与辣椒素受体结合的方法。在某些实施方式中，所述抑制发生在体外。所述方法包括以足以可检测地抑制类香草醇配体与辣椒素受体结合的条件及量或浓度下将至少一种本发明所述的VR1调节剂与辣椒碱受体接触。在其他实施方式中，所述辣椒素受体于患者体内。所述方法包括于患者体内以于体外足以可检测地抑制类香草醇配体与表达克隆辣椒素受体的细胞结合的量或浓度将至少一种本发明所述的VR1调节剂与表达辣椒素受体的细胞接触。
本发明进一步提供治疗患者对辣椒素受体调节产生反应的病症的方法，其包括对患者投予治疗上有效量的至少一种本发明所述的VR1调节剂。
在其他态样中，本发明提供用于治疗患者疼痛的方法，包括对遭受疼痛(或有此危险)的患者投予治疗上有效量的至少一种本发明所述的VR1调节剂。
本发明进一步提供用于治疗患者瘙痒、尿失禁、膀胱过动症、绝经症状、咳嗽及/或打嗝的方法，包括对遭受一种或多种前述病症(或有此危险)的患者投予治疗上有效量的至少一种本发明所述的VR1调节剂。
本发明进一步提供用于加快肥胖患者减肥的方法，包括对肥胖患者投予治疗上有效量的至少一种本发明所述的VR1调节剂。
本发明进一步提供用于鉴别与辣椒素受体结合的试剂的方法，包括(a)将辣椒素受体与本发明所述的经标记化合物在允许所述化合物与辣椒素受体结合的条件下接触，由此产生已结合的标记化合物；(b)在没有测试试剂的条件下测试与所述已结合的经标记化合物的量相对应的信号；(c)以测试试剂接触所述已结合的标记化合物；(d)在有测试试剂的条件下测试与所述已结合的标记化合物的量相对应的信号；(e)测定步骤(d)所测定的信号比步骤(b)所测定的信号的减少量。
在另外一些态样中，本发明提供了测定样品中是否存在辣椒素受体的方法，包括(a)将样品与本发明所述的化合物在允许所述化合物与辣椒素受体结合的条件下接触；以及(b)测定用以指示与辣椒素受体结合的化合物的水平的信号。
本发明亦提供包装药物制剂，包括(a)在容器中的本发明所述的药物组合物；以及(b)使用所述组合物治疗一种或多种对辣椒素受体调节产生反应的病症的说明书，所述病症如疼痛、瘙痒、尿失禁、膀胱过动症、绝经症状、咳嗽打嗝及/或肥胖。
在又另一态样中，本发明提供用于制备本发明所揭示的化合物(包括中间体)的方法。
本发明的这些态样及其他态样将会在参考下列详细说明而明了。

具体实施例方式 如上所述，本发明提供顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物。所述化合物可用于体内或体外调节多种情况下辣椒素受体的活性。
专门术语 本发明所述的化合物通常使用标准命名。咸了解，除非另行说明，否则对于不具有对称中心的化合物()所有光学异构体及其混合物都包括在内。此外，含有碳碳双键的化合物可产生Z形或E形，除非另行说明，所述化合物的所有异构形式都包括于本发明中。当一种化合物具有多种互变异构形式时，所述化合物不限于任意一种具体的互变异构体，而是包括所有互变异构形式。本发明所述的某些化合物使用包括变数(如R1、A、X)的通式。除非另行说明，所述通式中的每个变数独立于任何其他变数而定义，在一个通式中出现多于一次的任意变数每次出现时都分别独立定义。
本发明使用的术语“顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物”包括式(I)所示的所有化合物以及本发明提供的其他化学式所示的化合物(包括任意对映体、消旋体及立体异构体)，以及所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物及酯。
本发明引用的化合物的“药学上可接受的盐”为适于与人或动物的组织接触而没有过分毒性或致癌性，且优选为没有刺激性、过敏反应、或其他问题或并发症的酸式盐或碱式盐。所述盐包括具碱性残基(例如胺类)的无机酸盐和有机酸盐，以及酸性残基(例如羧酸类)的碱金属盐或有机盐。具体的用于盐形成的药学上可接受的阴离子包括，但不限于乙酸根、2-乙酰氧基苯甲酸根、抗坏血酸根、苯甲酸根、重碳酸根、溴化物、依地酸钙、碳酸根、氯化物、柠檬酸根、二氢氯酸根、二磷酸根、二酒石酸根、二依地酸根、丙酸酯十二烷基硫酸根(estolate)(乙基琥珀酸根)、甲酸盐、富马酸根、葡庚糖酸根、葡萄糖酸根、谷氨酸根、乙醇酸根、对α-羟乙酰氨基苯砷酸根(glycollylarsanilate)、间苯二酚己酸根(hexylresorcinate)、海巴明根(hydrabanine)、氢溴酸根、氢氯酸根、氢碘酸根、羟基马来酸根、羟基萘甲酸根、碘化物、羟乙基磺酸根、乳酸根、乳糖酸根、苹果酸根、马来酸根、扁桃酸根、甲基溴酸根、甲基硝酸根、甲基硫酸根、粘液酸根、萘磺酸根、硝酸根、双羟萘酸根、泛酸根、苯乙酸根磷酸根、聚半乳糖醛酸根、丙酸根、水杨酸根、硬脂酸根、碱式乙酸根、琥珀酸根、氨基磺酸根、磺胺酸根、硫酸根、磺酸根包括苯磺酸根(besylate，benzensulfonate)、樟脑磺酸根(camsylate，camphorsulfonate)、乙二磺酸根(乙烷-1，2-二磺酸根)、乙磺酸根(乙烷磺酸根)2-羟基乙磺酸根、甲磺酸根(甲烷磺酸根)、三氟甲基磺酸根(三氟甲烷磺酸根)以及甲苯磺酸根(对甲苯磺酸根)、单宁酸根、酒石酸根、茶氯酸根(teoclate)以及三碘季铵根(tricthiodide)。类似地，用于盐形成的药学上可接受的阳离子包括，但不限于铵、苄星(N，N′-双苄基乙撑二胺benzathine)、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、甲葡胺、普鲁卡因，以及金属，诸如铝、钙、锂、镁、钾、钠及锌。本领域的普通技术人员将认知本发明化合物的更多药学上可接受的盐。通常而言，药学上可接受的酸式盐或碱式盐可藉由任何传统化学方法而由含有碱性基或酸性基的母体化合物合成。简而言之，所述盐可藉由化学计算量的适当的碱或酸在水中或有机溶剂中，或水与有机溶剂的混合物中与这些化合物的游离酸或游离碱反应而制得；通常而言，优选为使用无水介质，例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、异丙醇或乙腈。
很显然，本发明的每种化合物可以，但不一定需要制成溶剂化物(如水合物)或非共价错合物。此外，多种晶体形式(crystal form)和多晶型物(polymorph)都属于本发明的范围。本发明亦提供所引用化学式所示的化合物的前药。“前药”是指可不完全满足本发明化合物的结构要求，但在投予患者后，在体内经改变而生成本发明化学式所示的化合物。例如，前药可为本发明化合物的酰化衍生物。前药包括其中羟基、氨基或巯基键合至任意基团的化合物，并且当投予至哺乳物件时，会分别分裂成游离羟基、氨基或巯基。前药的实例包括，但不限于本发明化合物中醇及胺官能团的乙酸酯、甲酸酯及苯甲酸酯衍生物。本发明化合物的前药可藉由改变所述化合物中的官能团而制得，所述改变后的化合物在体内分裂而产生母体化合物。
本发明所用的术语“烷基”指直链或支链的饱和脂肪族烃基。烷基包括含有1个至8个碳原子(C1-C8烷基)、1个至6个碳原子(C1-C6烷基)及1个至4个碳原子(C1-C4烷基)的基团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、淑丁基、戊基、2-戊基、异戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基以及3-甲基戊基。“C0-Cn烷基”指单一共价键(C0)或含有1个至n个碳原子的烷基；例如“C0-C4烷基”指单一共价键或C1-C4烷基。在某些情况下，会具体指出烷基的取代基。例如，“羟烷基”指以至少一个羟基取代基取代的烷基。
如上述定义，“亚烃基”指二价烷基。C1-C2亚烃基为亚甲基或1，2-亚乙基；C0-C4亚烃基为单一共价键或含有1个、2个或3个碳原子的亚烃基；C0-C2亚烃基为单一共价键或含有1个或2个碳原子的亚烃基。
“烯基”指直链或支链烯烃基，其包括至少一个不饱和碳碳双键。烯基包括分别含有2个至8个、2个至6个或2个至4个碳原子的C2-C8烯基、C2-C6烯基及C2-C4烯基，例如乙烯基、烯丙基或异丙烯基。“炔基”指直链或支链炔基，其含有一个或多个不饱和碳碳键并且至少一个不饱和碳碳键为三键。炔基包括分别含有2个至8个、2个至6个或2个至4个碳原子的C2-C8炔基、C2-C6炔基及C2-C4炔基。
“环烷基”为包括一个或多个饱和及/或部分饱和环并且所有环原子都为碳的基团，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、金刚烷基，以及前述部分饱和的变形基团，例如环己烯基。环烷基不包含芳香环或杂环。某些环烷基为C3-C7环烷基，其中环烷基含有一个单环，所述单环含有3个至7个环原子并且所有环原子都为碳。“(C3-C7环烷基)C0-C4烷基”为藉由单一共价键或C1-C4亚烃基键联的C3-C7环烷基。
本发明所用的术语“烷氧基”意指藉由氧桥连接的上述烷基。烷氧基包括分别含有1个至6个或1个至4个碳原子的C1-C6烷氧基及C1-C4烷氧基。代表性的烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基以及3-甲基戊氧基。
“烷氨基”指具有通用结构-NH-烷基或-N(烷基)(烷基)的仲胺或叔胺，其中每个烷基独立选自烷基、环烷基及(环烷基)烷基。所述烷氨基包括，例如，单-及二-(C1-C6烷基)氨基，其中每个C1-C6烷基可相同或不同。很显然，术语“烷氨基”中“烷基”的定义不同于所有其他含烷基基团(包括环烷基及(环烷基)烷基(例如(C3-C7环烷基)C0-C4烷基))中“烷基”的定义。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“卤代烷基”为经1个或多个独立选择的卤素所取代的烷基(例如“C1-C6卤代烷基”含有1个至6个碳原子)。卤代烷基的实例包括，但不限于单-、二-或三-氟甲基；单-、二-或三-氯甲基；单-、二-、三-、四-或五-氟乙基；单-、二-、三-、四-或五-氯乙基；以及1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基。典型的卤代烷基为三氟甲基及二氟甲基。术语“卤代烷氧基”指藉由氧桥键联的上述定义的卤代烷基。
不在两个字母或符号之间的破折号(“-”)指取代基的连接点。例如，-CONH2通过碳原子连接。
“芳基”指所有环原子都为碳并且至少一个环为芳香环的环基。芳基包括，例如，苯基以及含有稠合环的基团诸如萘基、茀基、茚满基(indanyl)以及1，2，3，4-四氢萘基。
“杂芳基”为至少一个芳香环包含至少一个选自N、O或S的杂原子的芳香基。杂芳基包括，例如，5-员及6-员杂芳基诸如咪唑、呋喃、呋咱、异噻唑、异恶唑、恶二唑、恶唑、吡嗪、吡唑、哒嗪、吡啶、嘧啶、四唑、噻唑及噻吩，以及含有稠合环的基团，并且至少一个所述基团为杂芳基。
本发明所用的“取代基”指与目标分子中原子共价键合的分子部分。例如，环取代基可为卤素、烷基、卤代烷基或其他与环原子(优选为碳原子或氮原子)共价键合的基团。芳香基的取代基通常与环上的碳原子共价键合。术语“取代”指以取代基取代分子结构中的氢原子，因此指定原子的化合价没有增加并且取代后得到化学稳定的化合物(即可进行分离、表征、生物活性测试的化合物)。
“视需要经取代”的基团不被取代或经一个或多个氢以外的适当的基团(可相同或不同)于一个或多个可取代的位置(典型的为1个、2个、3个、4个或5个位置)取代。视需要经取代亦指“经0个至X个取代基取代”，其中X为合适取代基的最多个数。某些视需要经取代的基团经0个至2个、3个或4个独立选择的取代基取代(即不取代或经直到最多个数的取代基取代)。其他视需要经取代的基团经至少一个取代基取代(如经1个至2个、3个或4个独立选择的取代基取代)。
本发明可交替使用的术语“VR1”及“辣椒素受体”指类号1的类香草醇受体。除非另行说明，这些术语既包括大鼠也包括人的VR1受体(例如GenBank Accession Numbers AF327067、AJ277028及NM_018727；美国专利第6,482,611号提供的某些人类VR1 cDNA序列以及编码氨基酸序列)，以及在其他物种中发现的VR1受体的同系物。
“VR1调节剂”，本发明亦称为“调节剂”是调节VR1活化及/或VR1介导信号传导的化合物。本发明中具体提供的VR1调节剂是式(I)所示的化合物以及其药学上可接受的盐、溶剂化物及酯。某些优选VR1调节剂不是类香草醇。VR1调节剂可为VR1激动剂或拮抗剂。某些调节剂与VR1键合的Ki小于1微摩尔，优选地小于500纳摩尔、100纳摩尔、10纳摩尔或1纳摩尔。本发明实施例5提供了测定VR1的Ki的代表性检测法。
如果调节剂可检测地抑制类香草醇配体与VR1的结合性及/或抑制VR1介导信号传导(例如使用实施例6提供的代表性检测法)则认为所述调节剂为“拮抗剂”；通常而言，以实施例6提供的检测法测定的所述拮抗剂抑制VR1活化的IC50值小于1微摩尔，优选地小于500纳摩尔，更优选为小于100纳摩尔、10纳摩尔或1纳摩尔。VR1拮抗剂包括神经拮抗剂和反向激动剂。
VR1的“反向激动剂”是一种在不添加类香草醇配体的条件下降低VR1的活性使其低于VR1的基本活性水平的化合物。VR1的反向激动剂亦可抑制类香草醇配体在VR1上的活性及/或抑制类香草醇配体结合至VR1的结合性。VR1的基本活性以及由于VR1拮抗剂存在所引起的VR1活性的降低可以钙迁移检测法测定，例如实施例6提供的检测法。
VR1的“中性(neutral)拮抗剂”是一种抑制类香草醇配体在VR1上的活性但没有显著改变所述受体的基本活性(即以实施例6所述的钙迁移检测法，在没有类香草醇配体的条件下测定的VR1活性降低不多于10％，优选为不多于5％，更优选为不多于2％，最优选为没有可检测的到的活性降低)的化合物。VR1的中性拮抗剂可抑制类香草醇配体结合至VR1的结合性。
本发明所述的“辣椒素受体激动剂”或“VR1激动剂”是一种将所述受体活性提高至受体基本活性水平之上(即提高VR1活化及/或VR1介导信号传导)的化合物。辣椒素受体激动剂活性可以实施例6提供的代表性检测法鉴别。通常而言，以实施例6提供的检测法测定的所述激动剂的EC50值小于1微摩尔，优选小于500纳摩尔，更优选为小于100纳摩尔或10纳摩尔。
“类香草醇”为包含以两个氧原子与相邻环的碳原子(其中一个碳原子位于与苯环连接的第三个基团的连接点的对位)连接的苯环的任意化合物。辣椒素为代表性类香草醇。“类香草醇配体”是与VR1结合并且Ki(以本发明所述的方法测定)不大于10μM的类香草醇。类香草醇配体激动剂包括辣椒素、奥芬氨酯(olvanil)、N-花生四烯酰基(arachidonoyl)-多巴胺及树脂毒素(RTX)。类香草醇配体拮抗剂包括辣椒氮呯及碘代树脂毒素(iodo-resiniferatoxin)。
“治疗上有效量”(或剂量)是基于投予患者时产生可识别的患者受益(例如可检测的缓解至少一种治疗病症)的量。所述的缓解可使用任意适当的标准检测，包括一种或多种症状(诸如疼痛)的缓解。治疗上有效量或剂量通常可使体液(诸如血液、血浆、血清、CSF、滑液、淋巴液、细胞间质液、眼泪或尿液)内化合物的浓度为足以于体外产生改变类香草醇配体与VR1的结合性(使用实施例5提供的检测法)及/或VR1介导信号传导(使用实施例6提供的检测法)。很显然，依据投予所述化合物的指示而定，所述可识别的患者受益在投予单剂后变得明显或根据预定的疗法重复投予治疗上有效量后变得明显。
本发明所述的“统计学上显著的”是指与使用统计显著性的标准参数检测法(诸如学生的T测试)测量结果与对照组间差异在在p＜0.1显著性水平内。
“患者”是以本发明所提供的化合物治疗的任意个体。患者包括人以及其他动物，例如宠物(如狗和猫)及家畜。患者可患有一种或多种对辣椒素受体调节产生反应的病症的综合症(如疼痛、曝露于类香草醇配体、瘙痒、尿失禁、膀胱过动症、绝经症状、咳嗽及/或打嗝)，或未患有所述综合症(即对认为具患有所述综合症的危险的患者进行预防性治疗)。
顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物 如上所述，本发明提供式(I)所示的顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物。在某些态样中，所述化合物为可在多种情况下使用的VR1调节剂，包括治疗疼痛(如神经病理性疼痛或周边神经介导性疼痛)；曝露于辣椒素；曝露于酸、热、光、催泪瓦斯、大气污染物(例如烟草烟雾)、传染剂(包括病毒、细菌及酵母菌)、胡椒喷雾或相关试剂；呼吸道病症例如哮喘或慢性肺阻塞性疾病；瘙痒；尿失禁或膀胱过动症；绝经症状、听觉损伤(如耳蜗损伤)、耳鸣、听觉过敏、糖尿病及前糖尿病病症(如胰岛素抵抗或葡萄糖耐量异常)、咳嗽或打嗝；及/或肥胖。所述化合物亦可在体外检测法(如受体活性检测法)中作为探针用于测定及定位VR1，并用作配体结合和VR1介导信号传导检测法的标准物。
从本发明的内容中发现式(I)所示的化合物具有无法预期地高的VR1调节活性，至少部分是因为位于式(I)所示的嘧啶酮的2-位置的顺式取代的环己基基团。
如上所述，

代表稠合的、视需要经取代的5员或6员杂芳基，其中，1个、2个或3个环原子是独立选自O、N或S的杂原子，而其余环原子为碳。在某些实施方式中，

经0个至2个独立选自C1-C6烷基、(C3-C7环烷基)C0-C2烷基或C1-C6卤代烷基的取代基取代。在另一些实施方式中，

经0个至2个独立选自C1-C4烷基、C3-C5环烷基及C1-C4卤代烷基的取代基取代。
在某些实施方式中，

为经0个至2个上述取代基(例如独立选自C1-C4烷基、(C3-C5环烷基)C0-C2烷基或C1-C4卤代烷基)取代的5员杂芳基。在某些实施方式中，

为如下列任一化学式所表示的5员杂芳基

其中R2为，例如氢、氰基、芳基、杂芳基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基或C3-C5环烷基，R’4为氢、C1-C4烷基、(C3-C5环烷基)C0-C2烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4羟烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷酰氨基或C1-C4烷基磺酰氨基。代表性的所述基团包括，例如，


其中，R2为氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基或C3-C5环烷基。在某些实施方式中，

為

很明显，所述

基的取向意欲于以所示的方式保留(例如如果

為

则双环核

為

)。
在某些实施方式中，

为经0个至3个独立选自羟基、C1-C6烷基、(C3-C7环烷基)C0-C2烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、单-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷酰氨基或C1-C6烷基磺酰氨基的取代基取代的6员杂芳基；在某些实施方式中，

为经0个至2个独立选自羟基、C1-C4烷基、(C3-C5环烷基)C0-C2烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4羟烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4卤代烷氧基的取代基取代的6员杂芳基。代表性的所述基团包括，例如

其中R4代表0个至1个、2个或3个独立选自羟基、C1-C4烷基、(C3-C5环烷基)C0-C2烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4羟烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4卤代烷氧基的取代基。
如上所述的Ar代表6员至10员芳基或5员至10员杂芳基，所述基团各自视需要经取代。代表性Ar基包括视需要经取代的苯基；视需要经取代的6员杂芳基，诸如吡啶基或嘧啶基；视需要经取代的5员杂芳基，诸如



稠合双环基，诸如



以及前述基团的变形，其中所述稠合环含有1个或多个额外的双键，诸如



以及如下列式的基团

其中n为0或1，且T、U及V分别独立选自视需要经取代的碳及视需要经取代的氮。
在某些实施方式中，变数R1代表0个至3个，优选为自1个至3个，独立选自卤素、氰基、C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基的取代基。例如，在某些实施方式中，R1代表仅一个取代基(例如在环的连接点的对位)。在某些实施方式中，R1所代表的至少一个取代基为卤素或CN；在某些实施方式中，所述取代基位于对位(即如果X为CH，所述取代基位于4-位置)。
在某些实施方式中，式(I)所示的化合物进一步满足了式(III)、式(IV)、式(V)或式(VI)
式(III)式(IV)
式(V) 式(VI) 其中，R2为羟基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基或C3-C5环烷基；R3为卤素、氰基、C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基；R4代表0个至2个独立选自羟基、C1-C4烷基、(C3-C5环烷基)C0-C2烷基、C1-C4卤代烷基或C1-C4烷氧基的取代基，其余的变数则如上所述。在某些实施方式中，R3为卤素或CN。
在式(I)至式(VI)的某些实施方式中，变数Rx为C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基。代表性Rx部分包括，例如甲基、乙基、异丙基、叔丁基、二氟甲基及三氟甲基。
本发明的代表性化合物包括，但不限于实施例2及实施例3中具体说明的化合物。很显然，本发明引用的具体化合物仅作为代表，而非用于限制本发明的范围。再者，如上所述，本发明的所有化合物可为游离酸或游离碱，或药学上可接受的的盐。此外，本发明具体包含了其他形式(诸如所述化合物的溶剂化物及前药)。
在本发明的某些态样中，由体外VR1功能性检测法(诸如钙迁移检测法)所测得者，本发明的顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物可检测地改变(调节)VR1活性。VR1配体结合检测法可用于所述活性的最初筛选。本发明引用的“VR1配体结合检测法”意指如实施例5提供的标准体外受体结合检测法，而可以实施例6所述的方法使用“钙迁移检测法”(于本发明中亦指“信号传导检测法”)。简而言之，可使用竞争检测法评估对VR1的结合，在所述竞争检测法中，VR1制剂与结合至VR1的标记(如125I或3H)化合物(如辣椒素受体激动剂，诸如RTX)及未标记的测试化合物进行反应。在本发明的所述检测法中，VR1优选为使用哺乳动物的VR1，更优选为人或大鼠的VR1。所述受体可为重组表达或自然表达。所述VR1制剂可为，例如由重组表达人VR1的HEK293或CHO细胞制得的膜制剂。与可检测地调节类香草醇配体与VR1结合的化合物反应，使得结合至VR1制剂的标记量相较于没有所述化合物时的已结合标记量来得减少或增加。所述减少量或增加量可用于决定本发明所述的VR1的Ki。通常而言，优选在所述检测法中减少VR1制剂的标记数量的化合物。
本发明的某些VR1调节剂在纳摩尔(即亚微摩尔)浓度、亚纳摩尔浓度或低于100皮摩尔(picomolar)、20皮摩尔、10皮摩尔或5皮摩尔浓度可检测性地调节VR1活性。
如上所述，在某些实施方式中，优选为VR1拮抗剂的化合物。所述化合物的IC50值可使用如实施例6提供的标准体外VR1介导钙迁移检测法测定。简而言之，表达辣椒素受体的细胞与目标化合物及细胞内钙浓度指示剂(如膜可渗透钙敏染料，诸如Fluo-3或Fura-2(MolecularProbes，Eugene，OR)，当与Ca++结合时，所述膜可渗透钙敏染料各自产生萤光信号)接触，所述接触的进行优选为一次或多次将细胞于含有溶于于溶液中的所述化合物和所述指示剂中之一或是两者的缓冲液或培养介质中反应。接触持续的时间应足以使染料进入细胞(如1小时至2小时)中。洗涤或过滤细胞以去除多余的染料，然后与典型为等于EC50的浓度的类香草醇受体激动剂接触(如辣椒素、RTX或奥伐尼(olvannil))，并测定萤光反应。当经激动剂接触的细胞与作为VR1拮抗剂的化合物接触时，其萤光反应比没有测试化合物时与激动剂接触的细胞的萤光反应相比通常减少至少20％，优选为至少50％，更优选为至少80％。本发明VR1拮抗剂的IC50优选为小于1微摩尔，小于100纳摩尔(nM)、小于10nM或小于1nM。在某些实施方式中，本发明的VR1拮抗剂在化合物浓度等于IC50时体外检测辣椒素受体激动作用显示无可检测的激动剂活性。某些所述的拮抗剂在化合物浓度高于IC50的100倍时体外检测辣椒素受体激动作用显示无可检测的激动剂活性。
在其他实施方式中，优选化合物为辣椒素受体激动剂。辣椒素受体激动剂的活性通常可以实施例6所述的方法测定。当细胞与1微摩尔身为VR1激动剂的化合物接触时，萤光反应的增加量通常至少是当细胞与100nM辣椒素接触时观察到的增加量的30％。本发明VR1激动剂的EC50优选为小于1微摩尔、小于100nM或小于10nM。
VR1调节活性亦可，或另外地，由实施例7的培养背根节检测法及/或实施例8的体内疼痛缓解检测法进行评价。在一种或多种本发明的功能性检测法中，本发明的VR1调节剂优选地对VR1活性具有统计学上显著的具体效果。
在某些实施方式中，本发明的VR1调节剂实质上不会调节配体与其他细胞表面受体的结合性，诸如EGF受体酪氨酸激酶或烟碱乙酰胆碱受体。换句话说，所述调节剂实质上不会抑制细胞表面受体的活性，诸如人表皮生长因数(EGF)受体酪氨酸激酶或烟碱乙酰胆碱受体(例如于对所述受体的IC50或IC40较佳大于1微摩尔，最佳大于10微摩尔)。优选地，调节剂在浓度为0.5微摩尔、1微摩尔或更优选为10微摩尔时不会可检测地抑制EGF受体活性或烟碱乙酰胆碱受体活性。商业上可获得测定细胞表面受体活性的检测法，包括产自Panvera(Madison，WI)的酪氨酸激酶检测法试剂盒。
在某些实施方式中，优选VR1调节剂没有镇静作用。换句话说，剂量为足以对用于检测疼痛缓解的动物模型(诸如本发明实施例8提供的模型)止痛的最小剂量的两倍的VR1调节剂剂量在动物模型的镇静检测法(使用Fitzgerald et al.(1988)Toxicology 49(2-3)433-9所述的方法)中仅产生短暂的(即持续时间不长于疼痛缓解持续时间的1/2)或优选地不产生统计学上显著的镇静效果。优选地，足以止痛的最小剂量的5倍的剂量不产生统计学上显著的镇静效果。更优选地，本发明VR1调节剂在静脉注射剂量少于25毫克/千克(mg/kg)(优选为少于10mg/kg)或口服剂量少于140mg/kg(优选为少于50mg/kg，更优选为少于30mg/kg)时不产生镇静作用。
若需要时，可对本发明化合物的某些药理学性能进行评价，所述药理学性能包括，但不限于口服生物可用率(优选化合物的口服生物可用性程度为达到所述化合物的治疗上的有效浓度的口服剂量少于140mg/kg，优选为少于50mg/kg，更优选为少于30mg/kg，进一步优选为少于10mg/kg，又更进一步优选为少于1mg/kg，最优选为少于0.1mg/kg)、毒性(优选化合物为投予个体治疗上有效量时，其为无毒)、副作用(优选化合物为投予个体治疗上有效量时，其产生与安慰剂相当的副作用)、血清蛋白结合以及体外和体内半衰期(优选化合物的体内半衰期应允许Q.I.D.投药，优选为T.I.D.投药，更优选为B.I.D.投药，最优选为每天一次的投药)。此外，血脑屏障的差异渗透性可能符合藉由调节CNS VR1活性治疗疼痛的VR1调节剂，从而上述每日口服总剂量提供所述的调节达到治疗上的有效程度，而低脑水平的VR1调节剂用于治疗周边神经介导性疼痛(即所述剂量不能使化合物的脑(如CSF)水平足够显著的调节VR1活性)为优选。本技术领域习知的常规检测法可用于评价这些性能，并鉴别用于特殊用途的优级化合物。例如，用于预测生物可用性的检测法包括跨人肠内单层细胞(包括Caco-2单层细胞)运输。人体内化合物对血脑屏障的渗透性可由投予了所述化合物(如静脉注射)的实验室动物体内所述化合物的脑水平而预测。血清蛋白结合可由清蛋白结合检测法预测。化合物的半衰期与化合物剂量的频率成反比。化合物的体外半衰期可以例如，美国专利申请公开第2005/0070547号的实施例7所述的微粒体半衰期检测法而预测。
如上所述，本发明的优选化合物为无毒的。通常而言，术语“无毒的”应理解为相对意义上的无毒，而且意指由美国食品药品管理局(”FDA”)认证的可对哺乳动物(较佳为人)使用的任意物质，或与确立的标准一致的，易于被FDA认证的可对哺乳动物(较佳为人)使用的任意物质。此外，极优选的无毒化合物通常满足下列的一条或多条标准(1)实质上不抑制细胞ATP生产；(2)不显著延长心脏QT间隔；(3)不引起实质性胆肝发大，或(4)不引起实质性肝酵素释放。
本发明所述的实质上不抑制细胞ATP生产的化合物为满足美国专利申请案公开号第2005/0070547号的实施例8所提出的标准的化合物。换句话说，使用100μM所述化合物，以所述方法处理的细胞显示的ATP水平至少是未处理过的细胞的ATP水平的50％。在更优选的实施方式中，所述细胞显示的ATP水平至少为未处理过的细胞的ATP水平的80％。
不显著延长心脏QT间隔的化合物为对豚鼠、迷你猪或狗的投予剂量使得血清浓度等于所述化合物EC50或IC50时，不引起统计学上显著延长的心脏QT间隔(由心电图描记法测定)的化合物。在某些较佳的实施方式中，肠道外投予或口服投予的剂量为0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、40mg/kg或50mg/kg时，所述化合物不引起统计学上显著延长的心脏QT间隔。
如果每天以产生血清浓度等于所述化合物的EC50或IC50的剂量治疗实验室啮齿类动物(如小鼠或大鼠)，持续5天至10天所引起的肝脏与体重之比的增大量不大于类比对照组的100％，则化合物不引发实质性肝脏发大。在更优选的实施方式中，所述剂量引起肝脏发大不大于类比对照组的75％或50％。如果使用于非啮齿类哺乳动物(例如狗)，所述剂量不应使肝脏与体重之比的增大量大于未处理的对照组的50％，较佳不大于25％，更佳不大于10％。在所述检测法中肠道外投予或口服投予的优选剂量包括0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、40mg/kg或50mg/kg。
类似地，如果投予剂量为使血清浓度等于所述化合物VR1的EC50或IC50的最小剂量的两倍时不能使实验室动物(如啮齿类动物)的ALT、LDH或AST的血清水平比类比假处理对照组提高100％，则所述化合物不能促进肝酵素的实质性释放。在更加优选的实施方式中，所述剂量使所述血清浓度不高于对照组的75％或50％。或者，如果在体外肝细胞检测法中，浓度(在体外与肝细胞接触及反应的培养介质或其他所述溶液)等于化合物EC50或IC50时，没有任何所述肝酵素可检测地释放到培养介质中达类比假处理的对照细胞的介质中观察到在基本水平以上，则所述化合物不能促进肝酵素的实质性释放。在更加优选的实施方式中，当所述化合物浓度为所述化合物EC50或IC50的5倍，较佳为10倍时，在检测不到任何所述肝酵素释放到培养介质中达基本水平以上。
在其他实施方式中，在浓度等于VR1化合物的EC50或IC50时，某些优选的化合物不抑制或诱导微粒体细胞色素P450酵素活性，诸如CYP1A2活性、CYP2A6活性、CYP2C9活性、CYP2C19活性、CYP2D6活性、CYP2E1活性或CYP3A4活性。
在等于所述化合物的EC50或IC50的浓度下，某些优选化合物不具基因诱变性(clastogenic)(如以小鼠红细胞前体细胞微核检测法、埃姆斯(Ames)微核检测法、螺旋式微核检测法等测定)。在其他实施方式中，某些优选化合物在所述浓度时不会诱导姐妹染色单体交换(如在中国仓鼠卵巢细胞中)。
为了检测之目的，如下详述，本发明VR1调节剂可被同位素标定或放射性标记。例如，化合物可含有一个或多个由元素相同但原子质量或质量数与通常发现于自然界的原子质量或质量数不同的原子取代的原子。可用于本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟及氯的同位素，诸如、2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F及36Cl。此外，以重同位素(例如氘(即2H))代替可获得因为新陈代谢稳定性增强所引起的某些治疗上的优越性，例如增加体内半衰期或减少剂量需求，因此在某些情况下为优选者。
顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物的制备 顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物通常可使用标准合成方法制备。初始原料可商业上获得自供应商诸如Sigma-Aldrich公司(St.Louis，MO)，或可使用已设计的方案由商业上可获得的前体而合成。举例来说，可使用与如下所示的任意一条反应路线相似的合成路线以及合成有机化学领域熟知的合成方法。下列反应路线的每个变数意指与本发明化合物相一致的任意基团。
下列反应式及本发明其他地方使用的某些简称包括 δ化学位移 DCM二氯甲烷 DMSO 二甲亚砜 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 乙醇 h 小时 1H NMR核磁共振 HPLC 高压液相色谱法 Hz赫兹 Me甲基 min 分钟 MS质谱分析 (M+1) 质量+1 Pd(PPh3)4 四(三苯基膦)钯(0) RT室温 TFA 三氟乙酸 THF 四氢呋喃 TLC 薄层色谱分析法 反应式(1)
反应式(2)
反应式(3)
在某些实施方式中，本发明化合物可含有一个或多个不对称碳原子，从而所述化合物可以不同立体异构形式存在。所述形式可为，例如消旋体或具光学活性形式。如上所述，本发明包括所有的顺式环己基立体异构体。但是，获得单一种对映体(即可具光学活性形式)可能为较理想者。制备单一种对映体的标准方法包括不对称合成和消旋体的解析。消旋体的解析可藉由例如传统方法，诸如于解析剂存在下重结晶法或是使用例如手性HPLC柱的色谱法而实现。
化合物的放射性标记可藉由使用含有至少一个原子为放射性同位素的前体合成而进行。放射性同位素各者优选为碳(例如14C)、氢(例如3H)、硫(例如35S)或碘(例如125I)。氚标记化合物亦可藉由含氚乙酸中的铂催化交换、含氚三氟乙酸中的酸催化交换或以化合物作为基体而以氚气进行混杂催化而催化制得。此外，某些前体可适合以氚气进行氚-卤素交换、氚气还原不饱和键或使用硼化氚还原。放射性标记化合物可方便地由专业的定制合成放射性标记探针化合物的放射性同位素供应商制备。
药物组合物 本发明亦提供药物组合物，其包括一种或多种本发明化合物以及至少一种生理学可接受的载体或赋形剂。药物组合物可包括，例如一种或多种水、缓冲剂(例如中性缓冲盐水或磷酸盐缓冲液)、乙醇、矿物油、植物油、二甲亚砜、碳水化合物(如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或类糊精)、甘露醇、蛋白质、辅药、多肽或氨基酸(诸如甘氨酸)、抗氧化剂、螯合剂(诸如EDTA)或谷胱甘肽(glutathione)及/或防腐剂。此外，本发明的药物组合物可(但非必需)包括其他活性成分。
药物组合物可制作用于任意合适的投予方式，包括例如局部投予、经口投予、经鼻投予、经直肠投予或投予。本发明所用的肠道外术语包括皮下注射、真皮内注射、血管内注射(如静脉注射)、肌肉注射、脊随注射、颅内注射、鞘内注射及腹腔内注射，以及任意类似的注射或注入技术。在某些实施方式中，优选适于口服的组合物。所述组合物包括，例如片剂、锭剂、菱形锭、水性或油性悬浮液、飞散性散剂或颗粒、乳液、硬胶囊或软胶囊、或者糖浆或酏剂。在另外一些实施方式中，药物组合物可制成冷冻干产物。局部投予的制剂较佳可用于某些病症(例如在治疗皮肤病症时，如烧伤或瘙痒)。直接对膀胱(内胞膜给药)投予的制剂较佳可用于治疗尿失禁及膀胱过动症。
用于口服的组合物可进一步包括一种或多种组分，诸如甜味剂、调味剂、染色剂及/或防腐剂以制成人们喜欢的以及合口味的制剂。药片含有与适合用于制作药片的生理学上可接受的赋形剂混合的活性成分。所述赋形剂包括，例如惰性稀释剂(例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠)、成粒剂及崩解剂(例如玉米淀粉或褐藻酸)、粘结剂(如淀粉、凝胶或阿拉伯胶)及润滑剂(如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉)。药片可使用标准技术制造，包括干法制粒、直接压片及湿法制粒。所述药片可不覆膜或以熟知技术覆膜。
用于口服的制剂亦可制成其中所述活性组分与惰性固体稀释剂(如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合的硬胶囊或制成其中所述活性组分与水或油状介质(如花生油、液状石蜡或橄榄油)混合的软胶囊。
水性悬浮液含有与适当的赋形剂混合的活性材料，诸如悬浮剂(羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶及阿拉伯胶)；以及分散剂或润湿剂(如自然生成的磷脂类诸如卵磷脂、亚烃基氧化物(alkylene oside)与脂肪酸的缩合产物(诸如硬脂酸聚氧乙烯酯)、次乙基氧化物(ethylene oxide)与长链脂肪醇的缩合产物(诸如十七乙烯氧基十六烷醇)、次乙基氧化物与脂肪酸以及己糖醇的部分酯的缩合产物(诸如聚氧乙烯去水山梨醇单油酸酯(polyoxyethylene sorbitan monoleate))或次乙基氧化物与脂肪酸以及己糖醇酐的部分酯的缩合产物(诸如聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯))。水性悬浮液亦可包括一种或多种防腐剂(诸如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种染色剂、一种或多种调味剂及/或一种或多种甜味剂(诸如蔗糖或糖精)。
油性悬浮液可藉由将活性成分悬浮于植物油(如花生油、橄榄油、麻油或椰子油)或矿物油(如液状石蜡)而制成。所述油性悬浮液可含有增稠剂诸如蜂蜡、硬石蜡或十六烷醇。可添加上述的甜味剂及/或调味剂以制成可口的口服制剂。所述悬浮液可藉由添加抗氧化剂(如抗坏血酸)进行保存。
适于藉由添加水而制备水性悬浮液的飞散性散剂及颗粒是将活性成分与分散剂或润湿剂、悬浮剂及一种或多种防腐剂混合。适当的分散剂或润湿剂及悬浮剂的实例已如上所述。飞散性散剂及颗粒中亦可添加其他的赋形剂，诸如甜味剂、调味剂及染色剂。
药物组合物亦可制成水包油乳剂。所述油相可为植物油(如橄榄油或花生油)、矿物油(如液体石蜡)或其混合物。适当的乳化剂包括自然生成的胶(如阿拉伯胶或黄蓍胶)、自然生成的磷脂(如大豆卵磷脂及衍生自脂肪酸与己糖醇的酯或部分酯)、酐(如去水山梨糖醇单油酸酯)及脂肪酸的部分酯及己糖醇与次乙基氧化物的缩合产物(如聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯)。乳液亦可包括一种或多种甜味剂及/或调味剂。
糖浆或酏剂可以甜味剂制成，如甘油、聚丙烯醇、山梨糖醇或蔗糖。所述制剂亦可包括一种或多种缓和剂、防腐剂、调味剂及/或染色剂。
局部投予的制剂典型地包括与活化剂组合的局部载体，可含有或不含有视需要额外使用的组分。适当的局部载体和额外成分已为本领域所熟知，并且很显然载体的选择决定于特殊的物理形态和运输模式。局部载体包括水；有机溶剂诸如醇类(如乙醇或异丙醇)或甘油；二醇类(如丁二醇、异戊二存或丙二醇)；脂肪醇类(如羊毛脂)；水与有机溶剂的混合物以及有机溶剂的混合物诸如醇及甘油；脂质系材料诸如脂肪酸、酰基甘油酯(包括油(诸如矿物油)及天然脂肪或合成脂肪)、磷酸甘油酯、鞘脂及蜡；蛋白质系材料诸如胶原蛋白及凝胶；聚硅氧系材料(包括不挥发及挥发的聚硅氧材料)；碳水化合物系材料诸如微海绵和聚合物母体。组合物可进一步包括一种或多种适合提高所述应用制剂的稳定性或效力的组分，诸如稳定剂、悬浮剂、乳化剂、粘度调节剂、胶凝剂、防腐剂、抗氧剂、透皮吸收促进剂、增湿剂及缓释材料。所述组分的实例如Martindale-马丁代尔大药典(The Extra Pharmacopoeia)(医药出版社(Pharmaceutical Press)，伦敦1993)及Remington药剂学原理与实践，第21版(The Science and Practice of Pharmacy，21 st ed)，Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia，PA(2005)所述。制剂可包括微胶囊，诸如羟甲基纤维素或凝胶-微胶囊、脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米微粒或纳米胶囊。
局部制剂可任意制成多种物理形态包括，例如固体、糊剂、乳霜、泡沫、洗液、凝胶、粉末、水成液及乳液。所述药学上可接受的形式的物理性质和黏性可由制剂中的乳化剂及黏度调节剂的存在与否与量决定。固体通常是结实以及不具倾泻性的，其通常可制成棒或杆，或颗粒形式；固体可为不透明的或透明的，并且视需要可含有溶剂、乳化剂、增湿剂、软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂和其他提高或增强最终产品效力的活性成分。乳霜和乳剂经常互相类似，主要区别是其黏度；乳剂和乳霜都可为不透明的、半透明的或透明的，并通常含有乳化剂、溶剂、黏度调节剂，以及增湿剂、软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂和其他提高或增强最终产品效力的活性成分。凝胶可制成一系列的黏度，从浓稠或高粘度至稀薄或低粘度。这些制剂(如乳剂和乳霜一般)亦可含有溶剂、乳化剂、增湿剂、软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂和其他提高或增强最终产品效力的活性成分。液剂比乳剂、乳霜或凝胶，通常不含有乳化剂。液剂局部产品通常含有溶剂、乳化剂、增湿剂、软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂和其他提高或增强最终产品效力的活性成分。
用于局部制剂的适当的乳化剂包括，但不限于离子乳化剂、鲸蜡硬脂醇、非离子乳化剂例如聚氧乙烯油基醚、PEG-40硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇聚醚-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇聚醚-30、鲸蜡硬脂醇聚醚醇、PEG-100硬脂酸酯及甘油硬脂酸酯。适当的黏度调节剂包括，但不限于保护胶体或非离子胶，诸如羟乙基纤维素、黄原胶、硅酸镁铝、硅胶、微晶蜡、蜂蜡、石蜡、鲸蜡醇棕榈酸酯。凝胶组合物可藉由添加凝胶剂(例如壳聚糖、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯醇、聚季铵盐、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、卡波姆(carbomer)或含氨甘草酸酯)而制成。适当的表面活性剂包括，但不限于非离子表面活性剂、两性表面活性剂、离子表面活性剂及阴离子表面活性剂。例如，可在局部制剂中使用一种或多种聚二甲基硅氧烷共聚醇、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、月桂酰胺DEA、椰油酰胺DEA及椰油酰胺MEA、油基甜菜碱、椰油酰基胺丙基磷脂酰PG-二硬酯氯(PG-dimonium chloride)以及十二酯硫酸铵。适当的防腐剂包括，但不限于抗菌剂(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸、苯甲酸及甲醛)以及物理稳定剂及抗氧化剂(例如维生素E、抗坏血酸钠/抗坏血酸及没食子酸丙酯)。适当的增湿剂包括，但不限于乳酸及其他羟基酸及其盐、甘油、丙三醇、丙二醇及丁二醇。适当的软化剂包括羊毛脂醇、羊毛脂、羊毛脂衍生物、胆固醇、凡士林、新戊酸异硬脂醇酯及矿物油。适当的香料及染色剂包括，但不限于FD&C红色第40号(Red No.40)及FD&C黄色第5号(Yellow No.5)。局部制剂中的其他适当的额外成分可包括，但不限于研磨剂、吸收剂、抗结剂、消泡剂、抗静电剂、收敛剂(例如金缕梅、醇与草本植物萃取物，例如洋甘菊萃取物)、粘结剂/赋形剂、缓冲剂、螯合剂、膜形成剂、调节剂、推进剂、遮光剂、pH调节剂及保护剂。
凝胶制剂的适当的局部载体的实例为羟丙基纤维素(2.1％)；70/30异丙醇/水(90.9％)；丙二醇(5.1％)；以及聚山梨醇酯80(1.9％)。泡沫制剂的适当的局部载体的实例为鲸蜡醇(1.1％)；硬脂醇(0.5％)；季铵盐52(1.0％)；丙二醇(2.0％)；乙醇95PGF3(61.05％)；去离子水(30.05％)；P75烃类推进剂(4.30％)。所有百分数皆为重量百分数。
运送局部组合物的典型模式包括使用指头；使用物理敷料器(诸如布、面纸、纱布、药棒或刷子)；喷涂(包括喷雾、气溶胶喷涂或泡沫喷涂)；点滴器；喷洒；浸泡；以及润洗。
药物组合物可制成无菌可注射水性悬浮液或油性悬浮液。依据使用的载体和浓度，可将本发明化合物悬浮于载体或溶于载体中。所述组合物可根据熟知的技术使用如上所述的适当的分散剂、润湿剂及/或悬浮剂而制成。可接受的载体和溶剂中，可使用的有水、1，3-丁二醇、林格氏(Ringer’s)溶液及等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发性油可用作溶剂或悬浮介质。为此，可使用任意温和的不挥发性油，包括合成的单-或二-甘油酯。此外，可将脂肪酸(如用于制备可注射组合物的油酸)及辅药(如局部麻醉剂、防腐剂及/或缓冲剂)溶于所述载体中。
药物组合物亦可制成栓剂(如用于直肠投予)。所述组合物可籍由将所述药物与适当的非刺激性固体赋形剂混合而制得，所述赋形剂在常温下为固体在直肠内的温度下为液体，因而可在直肠内融化以释放所述药物。适当的赋形剂包括，例如可可脂及聚乙二醇。
用于吸入的组合物典型地可制成溶液、悬浮液或乳液形式，以此可使用传统推进剂(如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷)以干粉或气溶胶形式投予。
药物组合物可按照预定的速度释放。持续的释放可藉由例如舌下投予(即藉由舌下的血管而不是消化管迅速吸收所述活性组分的方式实施口腔投予)而实现。控制释放制剂(即在投予后降低及/或延迟活性组分释放的制剂，如胶囊、片剂或覆膜片剂)可藉由例如口腔置入、直肠置入或皮下置入或在目标位置置入而投予。通常而言，控制释放制剂包括延迟在胃肠道(或置入位置)的分解及吸收的基质及/或覆膜，由此使延迟作用或维持作用持续更长的时间。控制释放制剂的其中一种类型为缓释剂，其中至少一种活性组分以恒定的速度持续释放一段时间。优选地，所述治疗剂的释放速度应使血液(如血浆)浓度保持在有疗效的范围，但低于中毒浓度达至少4小时，较优选为至少8小时，更优选为至少12小时。所述制剂通常可使用熟知技术制备，并且藉由例如口腔置入、直肠置入或皮下置入或藉由在目标位置置入而投予。用于所述制剂的载体具有生物相容性，亦可具有生物降解性；优选地，所述制剂具有相对恒定的调节剂释放浓度。包含于缓释剂中的调节剂的量决定于，例如置入位置、所欲的释放的速度和持续时间以及治疗或预防的病症的性质。
控制释放可藉由将活性成分与本身及/或通过使用控制释放的覆膜可改变释放速度的基质材料结合而实现。所述释放速度可使用本领域熟知的方法而改变，包括(a)改变覆膜的厚度或组成，(b)改变覆膜中可塑剂的添加量或添加方式，(c)包括另外的组分，诸如释放改进剂，(d)改变基质的组成、粒度或颗粒形状，以及(e)提供一种或多种穿透覆膜的方式。包含于缓释剂中的调节剂的量决定于，例如投予方法(例如置入位置)、释放的速度和持续时间以及治疗或预防的病症的性质。
本身具有或不具有控制释放功能的基质材料通常为可乘载活性成分的任意材料。例如，可使用时间延迟材料诸如单硬脂酸甘油脂或双硬脂酸甘油脂。在剂型(如片剂)形成之前可将活性组分与基质材料结合。或者，或此外，可将活性组分覆膜于包含基质材料的颗粒、小颗粒、球粒、微球粒、小珠或小丸的表面。所述覆膜可藉由传统方法实现，诸如将活性组分溶于水或其他适当的溶剂中并且喷涂。视需要地，在覆膜之前添加另外的组分(如用于促进活性组分与基质材料的结合或着色溶液)。在进行控制释放覆膜之前可以阻隔剂覆膜基质。根据需要可封装多种覆膜基质单元以生成最终剂型。
在某些实施方式中，藉由使用控制释放覆膜(即在水介质中以控制速度释放活性组分的覆膜)而实现控制释放。所述控制释放覆膜应为坚硬的连续膜，其光滑、能承载颜料及其他添加剂、无毒、不活泼以及无粘性。调整调节剂释放的覆膜包括pH非依赖性覆膜、pH依赖性覆膜(可用于在胃中释放调节剂)及肠覆膜(使制剂完整地穿过胃部进入小肠，在小肠中所述覆膜溶解并且其内含物被身体吸收)。很显然可使用多种覆膜(例如一部分剂量在胃中释放，一部分剂量沿着胃肠道进一步释放)。例如，一部分活性成分可涂覆于肠覆膜上，因此在胃中释放之，而基质核中剩余的活性成分藉由肠覆膜而对其保护，并沿着G1道进一步释放。pH依赖性覆膜包括，例如虫胶、纤维素乙酸酯酞酸酯、聚乙酸乙烯酞酸酯、羟丙基甲基纤维素酞酸酯、甲基丙烯酸酯共聚物及玉米蛋白。
在某些实施方式中，所述的覆膜为憎水(hydrophobic)材料，优选地，其用量为在投予后可有效地减缓凝胶剂的水合。适当的憎水材料包括烷基纤维素(如乙基纤维素或羧甲基纤维素)、纤维素醚、纤维素酯、丙烯酸聚合物(如聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、丙烯酸与甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰乙酯、甲基丙烯酸椰油二乙醇酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸铵酯共聚物、甲基丙烯酸氨烷基酯共聚物、聚(甲基丙烯酸酐)及甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物)以及前述憎水材料的混合物。代表性的乙基纤维素的水分散系包括，例如

(FMCCorp.，Philadelphia，PA)及

(Colorcon，Inc.，West Point，PA)，其都可根据制造商的说明书而涂覆至基材。代表性的丙烯酸聚合物包括，例如各种

(Rohm America，Piscataway，NJ)聚合物，其可根据制造商说明书单独使用或根据预期的释放方案混合使用。
包含憎水材料水分散系的覆膜的物理性能可藉由添加一种或多种增塑剂而改善。用于烷基纤维素的适当的增塑剂包括，例如癸二酸二丁酯、酞酸二乙酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯及乙酸甘油酯。用于丙烯酸聚合物的适当的增塑剂包括，例如柠檬酸酯(如柠檬酸三乙酯及柠檬酸三丁酯)、酞酸二丁酯、聚乙二醇、丙二醇、酞酸二乙酯、蓖麻油及乙酸甘油酯。
控制释放覆膜通常以传统技术施涂，例如以水分散系的形式喷涂。根据需要，所述覆膜可包括孔或沟以促进释放活性组分。孔或沟通常可由习知的方法生成，包括添加能在使用环境中溶解、被萃取出或从覆膜中释放的有机或无机材料。某些所述的成孔材料包括亲水性聚合物(诸如羟烷基纤维素(如羟丙基甲基纤维素)、纤维素醚)、合成的水溶性聚合物(如聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮及聚环氧乙烷)、水溶性聚葡萄糖、糖类及多糖类以及碱金属盐。或者，或此外，控制释放覆膜可包括一个或多个洞，所述洞可由美国专利第3,845,770号；第4,034,758号；第4,077,407号；第4,088,864号；第4,783,337号及第5,071,607号所述的方法制成。控制释放亦可藉由使用透皮贴剂，以传统技术(请见如美国专利第4,668,232号)而实现。
控制释放制剂及其组分的更多实例可见例如美国专利第4,572,833号；第4,587,117号；第4,606,909号；第4,610,870号；第4,684,516号；第4,777,049号；第4,994,276号；第4,996,058号；第5,128,143号；第5,202,128号；第5,376,384号；第5,384,133号；第5,445,829号；第5,510,119号；第5,618,560号；第5,643,604号；第5,891,474号；第5,958,456号；第6,039,980号；第6,143,353号；第6,126,969号；第6,156,342号；第6,197,347号；第6,387,394号；第6,399,096号；第6,437,000号；第6,447,796号；第6,475,493号；第6,491,950号；第6,524,615号；第6,838,094号；第6,905,709号；第6,923,984号；第6,923,988号；以及第6,911,217号；其各自并入此处作为参考以用于教示控制释放剂型的制备。
除了或连同上述投予方式，本发明化合物可方便地添加至食物或饮用水(例如用于对非人类动物给药，包括宠物(如狗和猫)和家畜)。可制成动物饲料和饮用水组合物以根据动物的饮食规律使其摄取适当量的所述组合物。亦可方便地将所述组合物作成添加至饲料或饮用水的预拌合料。
化合物通常以治疗上有效量投予。优选的全身剂量不高于每天每公斤体重50mg(如每天每公斤体重从约0.001mg至约50mg)，口服剂量通常高于静脉剂量的5倍至20倍(如每天每公斤体重从0.01mg至40mg)。
可与载体材料组合以生产单剂量单位的活性组分的量将根据例如治疗的患者、特殊的投予方式及其他任意的合并投予药物而变化。剂量单位通常含有的活性组分为10μg至500mg。优选剂量可使用常规测试及本领域熟知的程式而确定。
药物组合物可包装用于治疗对VR1调节产生反应的病症(如治疗曝露于类香草醇配体或其他刺激、疼痛、瘙痒、肥胖或尿失禁)。包装的药物组合物通常包括(i)装有包括至少一种本发明VR1调节剂的药物组合物的容器以及(ii)指示所含组合物用于治疗患者对VR1调节产生反应的病症的说明(如标签或包装内页)。
使用方法 本发明VR1调节剂可用于在多种情况下于体外及体内改变辣椒素受体的活性及/或活化。在某些态样中，VR1拮抗剂可用于体外或体内抑制类香草醇配体激动剂(如辣椒素及/或RTX)与辣椒素受体的结合性。通常而言，所述方法包括的步骤为在水溶液中存在类香草醇配体下，以一种或多种本发明VR1调节剂与辣椒素受体接触，并且所述步骤在适于所述配体与辣椒素受体结合的条件下进行。所述VR1调节剂的浓度通常足以改变类香草醇配体与VR1的体外结合(使用实施例5所述的检测法)及/或VR1介导的信号传导(使用实施例6所述的检测法)。所述辣椒素受体可存在于溶液或悬浮液中(如在分离膜或细胞制剂中)，或在培养细胞或分离细胞中。在某些实施方式中，所述辣椒素受体于患者的神经细胞表达，并且所述水溶液为体液。优选地，一种或多种VR1调节剂对动物的投予量使得VR1调节剂在至少一种所述动物的体液中达到治疗上的有效浓度，所述治疗上的有效浓度为5微摩尔或更少；优选为1微摩尔或更少；更优选为100纳摩尔或更少。例如，所述化合物可以小于20mg/kg体重，优选为小于5mg/kg，在某些情况下小于1mg/kg的治疗上的有效剂量投予。
本发明亦提供用于调节(较佳为降低)细胞辣椒素受体的信号传导活性(即钙传导性)的方法。所述调节可藉由一种或多种本发明VR1调节剂在适于调节剂与受体结合的条件下与辣椒素受体(不管在体外或是体内)接触而实现。通常所述VR1调节剂的浓度如本文所述的足以改变类香草醇配体与VR1的体外结合及/或VR1介导信号传导。所述受体可在溶液或悬浮液中、在培养或分离细胞制剂或患者体内的细胞中。例如，所述细胞可为在动物体内接触的神经细胞。或者，所述细胞可为上皮细胞，例如膀胱上皮细胞(尿道上皮细胞)或在动物体内接触的气道上皮细胞。信号传导活性的调节可藉由检测于钙离子传导性所产生的效果(亦指钙移动或钙流)而进行评价。或者，信号传导活性的调节可藉由检测以一种或多种本发明所提供的VR1调节剂治疗的患者的症状(如疼痛、灼烧感、支气管收缩、炎症、咳嗽、打嗝、瘙痒、尿失禁或膀胱过动症，或绝经症状)的变化而进行评价。
本发明所提供的VR1调节剂较佳对患者(如人)口服投予或局部投予，并且调节VR1信号传导活性在所述动物的至少一种体液中进行。用于所述方法的优选VR1调节剂体外调节VR1信号传导活性时的浓度为1纳摩尔或更少、优选为100皮摩尔或更少，更优选为20皮摩尔或更少，在体液(例如血液)中体内调节VR1信号传导活性时的浓度为1微摩尔或更少、500纳摩尔或更少或100纳摩尔或更少。
本发明进一步提供用于治疗对VR1调节产生反应的病症的方法。在本发明内文中，术语“治疗”既包括疾病改进治疗也包括对症治疗，其各自都可为预防性的(即在症状发作之前，以预防而延迟或减轻症状的严重程度)或治疗性的(即症状发作后，以减轻症状的严重程度及/或持续时间)。如果一种病症以对辣椒素受体有不适当活性为特征，而不考虑所在处的类香草醇配体的量，及/或如果辣椒素受体活性的调节使得所述病症或所述症状的表现缓解，则此病症为“对VR1调节产生反应”者。所述病症包括，例如曝露于VR1活化刺激而引起的症状、疼痛、呼吸障碍(如咳嗽、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、慢性支气管炎、囊性纤维化及鼻炎(包括过敏性鼻炎(诸如季节性及常年性鼻炎)及非过敏性鼻炎)、抑郁(depression)、瘙痒、尿失禁、膀胱过动症、绝经症状、听觉损伤(如耳蜗损伤)、耳鸣、听觉过敏、糖尿病及前驱糖尿病症状(如胰岛素抵抗或葡萄糖耐量异常)、打嗝及肥胖，如下详细所述。所述病症可使用本领域已确立的标准进行诊断及监测。患者可包括人、宠物及家畜，剂量如上所述。
治疗方案可根据使用的化合物和待治疗的特定病症而定；但是，治疗大多数疾病的投予频率优选为每天4次或更少次。通常而言，更优选剂量方案为每天2次，特别优选的每天1次。治疗急性疼痛时，优选为迅速达到有效浓度的单剂量。然而，应该了解的是，对任意特定患者的具体剂量和治疗方案决定于多种因素，包括使用的具体化合物的活性、患者的年龄、体重、整体健康度、性别、饮食、投予时间、投予途径、及排泄速度、药物组合及接受治疗的特定疾病的严重程度。通常而言，优选为使用足以实现有效治疗的最小剂量。通常，可使用适于所治疗或预防所述病症的医学或兽医学标准监测患者的治疗效率。
患有因曝露于辣椒素受体活化刺激物引起的病症的患者包括因热、光、催泪瓦斯或酸引起灼烧的个体以及其黏膜曝露(如藉由摄取、吸入或眼睛接触)于辣椒素(例如来自辣椒或胡椒喷雾)或相关刺激物(如酸、催泪瓦斯、传染剂或大气污染物)的个体。产生的病症(其可使用本发明的VR1调节剂、尤其是拮抗剂进行治疗)可包括，例如疼痛、支气管收缩及炎症。
本发明VR1调节剂可治疗的疼痛可为慢性的或急性的，其包括，但不限于周边神经介导疼痛(尤其是神经病理性疼痛)。本发明化合物可用于治疗，例如乳房切除术后疼痛综合征、残端痛、幻肢痛、口部神经性疼痛、牙痛(牙齿疼痛)、假牙疼痛、带状疱疹后遗神经痛、糖尿病性神经病、化疗药物所致的神经病、反射性交感神经性营养不良、三叉神经痛、骨关节炎、类风湿性关节炎、纤维肌痛、格林-巴利(Guillain-Barre)综合征、感觉异常性股痛、灼口综合征及/或与神经或神经根损伤有关的疼痛，包括与外周神经障碍有关的疼痛(如神经卡压及臂丛根性撕脱、截肢手术、外周神经病包括双边外周神经痛、三叉神经痛、非典型颜面疼痛、神经根损伤及蛛网膜炎)。另外的神经性疼痛病症包括灼性神经痛(反射性交感神经性营养不良-RSD，外周神经损伤续发)、神经炎(包括坐骨神经炎、外周神经炎、多神经炎、视神经炎、发热后神经炎、游走性神经炎、节段性神经炎、贡博(Gombault′s)综合征)、神经元炎、神经痛(颈臂神经痛、颅神经痛、膝状节神经痛、舌咽(glossopharyngial)神经痛、偏头痛性神经痛、先天性神经痛、脉间神经痛、乳腺神经痛、颌关节神经痛、跖骨痛症(Morton′s neuralgia)、鼻睫神经痛、枕骨神经痛、红色神经痛、斯卢德氏(Sluder)神经痛、脾颚(splenopalatine)神经痛、眶上神经痛与翼管神经痛)、与外科有关的疼痛、肌骨胳疼痛、肌筋膜疼痛综合征、与AIDS有关的神经痛、与MS有关的神经痛、中枢神经系统疼痛(如由脑干损伤引起的疼痛、坐骨神经痛及强直性脊柱炎)以及脊椎疼痛(包括与脊髓损伤有关的疼痛)。头痛，包括与外周神经活动有关的头痛亦可以本发明所述的方法治疗。所述疼痛包括，例如鼻窦性头痛、丛集性头痛(即偏头痛性神经痛)及紧张性头痛、偏头痛、颞下颌疼痛及上颌窦疼痛。例如，偏头痛可藉由在患者出现偏头痛先兆时立即服用本发明化合物而得到预防。本发明可治疗的更多病症包括夏科氏疼痛、涨气、耳部疼痛、心脏疼痛、肌肉疼痛、眼睛疼痛、口颌面痛(如牙痛)、腹部疼痛、妇科疼痛(如经痛、痛经、与膀胱炎相关的疼痛、分娩疼痛、慢性骨盆疼痛、慢性前列腺炎及子宫内膜异位)、急性及慢性背痛(如下背痛)、痛风、伤疤疼痛、痔疮、消化不良疼痛、咽喉痛、神经根疼痛、“非疼痛”神经病、复合区域疼痛综合征、同位痛、异位痛-包括与癌相关的疼痛，经常指癌疼痛(如在患骨癌的患者中)、与接触毒液(如由蛇咬伤、蜘蛛咬伤和昆虫刺伤引起)相关的疼痛(及炎症)、与外伤相关的疼痛(如术后疼痛、会阴切开术疼痛、切割造成的疼痛、肌骨胳疼痛、瘀伤、裂骨及灼烧疼痛，尤其是与初级痛觉过敏相关的疼痛)。可以本发明所述方法治疗的其他疼痛病症包括与如上所述的呼吸障碍、自身免疫病、免疫缺陷紊乱、潮热、炎性肠病、胃食管反流病(GERD)、肠易激综合症及/或炎性肠病有关的疼痛。
在某些态样中，本发明VR1调节剂可用于治疗机械性疼痛。本发明使用的术语“机械性疼痛”指头痛以外的疼痛，所述疼痛不是神经病理性疼痛或是由曝露于热、冷或外部化学刺激而引起的疼痛。机械性疼痛包括物理损伤(不是热或化学灼烧或其他刺激及/或与有毒化学品接触的疼痛)诸如术后疼痛及由切割、瘀伤、裂骨造成的疼痛；牙痛；假牙疼痛；神经根疼痛；骨关节炎；类风湿性关节炎；纤维肌痛；感觉异常性股痛；背痛；与癌症有关的疼痛；绞痛；腕隧道综合症，以及因骨折、分娩、痔疮、肠涨气、消化不良及月经引起的疼痛。
可治疗的瘙痒病症包括银屑病瘙痒症、血液渗透引起的瘙痒、水源性(aguagenic)瘙痒症、与女阴前庭炎、接触性皮炎、蚊虫叮咬及皮肤过敏有关的瘙痒。本发明可治疗的泌尿管病症包括尿失禁(包括充溢性尿失禁、急迫性尿失禁及压力性尿失禁)以及过度活动或不稳定膀胱病症(包括膀胱逼尿肌反射过度、脊髓源逼尿肌反射过度和膀胱超敏性)。在某些所述治疗方法中，VR1调节剂藉由导尿管或相似装置投予，使VR1调节剂直接注射入膀胱中。本发明化合物亦可用作止咳剂(以用于预防、缓解或抑制咳嗽，包括由药物引起的咳嗽，例如ACE抑制剂)，以用于治疗打嗝及加快肥胖患者减肥。
在其他态样中，本发明VR1调节剂可使用于治疗与疼痛及/或炎性成分有关的病症的组合疗法中。所述病症包括，例如自身免疫病变熟知具有炎性成分的病理性自身免疫反应，其包括，但不限于关节炎(特别是类风湿性关节炎)、牛皮藓、克罗恩氏(Crohn)病、红斑狼疮、肠易激综合症、组织移植排斥以及移植器官的超急性排斥。其他所述病症包括外伤(如头部损伤或脊髓损伤)、心脏血管及脑血管病及某些感染性疾病。
在所述的组合疗法中，VR1调节剂与止痛剂及/或抗炎药一起投予至患者。所述VR1调节剂与止痛剂及/或抗炎药可在同一药物组合物中，或可以任一顺序分别投予。抗炎药包括，例如非甾类抗炎药(NSAIDs)、非异性的及环氧合酶-2特异性环氧合酶抑制剂、金化合物、皮质甾类、甲氨喋呤、肿瘤坏死因数(TNF)、受体拮抗剂、抗-TNFα抗体、抗-C5抗体及白细胞介素-1(IL-I)受体拮抗剂。NSAIDs的实例包括，但不限于布洛芬(ibuprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、甲氧萘丙酸(naproxen)或甲氧萘丙酸钠(naproxen sodium)、双氯芬酸(diclofenac)、双氯芬酸钠(diclofenac sodium)与米索前列醇(misoprostol)的组合物、舒林酸(sulindac)、恶丙嗪(oxaprozin)、双氟尼酸(diflunisal)、吡氧噻嗪(piroxicam)、吲哚美辛(indomethacin)、依托度酸(etodolac)、非诺洛芬钙(fenoprofen calcium)、酮洛芬(ketoprofen)、萘丁美酮钠(sodiumnabumetone)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、托美汀钠(tolmetin sodium)及羟化氯喹(hydroxychloroquine)。一类NSAIDs包括抑制环氧酶的化合物；所述化合物包括塞来昔布(celecoxib)及罗非昔布(rofecoxib)。NSAIDs进一步包括水杨酸盐诸如乙酰水杨酸及阿司匹林、水杨酸钠、胆碱及水杨酸镁及双水杨酸酯，以及皮质甾类诸如可的松(cortisone)、地塞米松(dexamethasone)、甲强龙(methylprednisolone)、脱氢皮质甾醇(prednisolone)、脱氢皮质甾醇磷酸钠(prednisolone sodium phosphate)及泼尼松(prednisone)。更多的抗炎药包括美洛昔康(meloxicam)、罗非昔布(rofecoxib)、塞来昔布(celecoxib)、依托考昔(etoricoxib)、帕瑞昔布(parecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)及泰里卡昔(tilicoxib)。
所述组合疗法中VR1调节剂的适当剂量通常如上所述。抗炎药的投予剂量和方法如制造商于医师案头参考(Physician′s Desk Reference)中的说明书。在某些实施方式中，VR1调节剂与抗炎药的组合投予使得产生治疗效果的抗炎药的剂量减少(即最少的治疗上有效量减少)。因此，优选地，组合物或组合治疗方法中抗炎药的剂量少于不与VR1拮抗剂组合投予时制造商建议的抗炎药给药的最大剂量。更优选地，所述剂量少于最大剂量的3/4，进一步优选为少于最大剂量的1/2，极优选为少于最大剂量的1/4，最优选剂量少于不与VR1拮抗剂组合投予时制造商建议的抗炎药给药的最大剂量的10％。很显然，需达到理想效果的组合物中VR1拮抗剂组分的剂量可类似地受到组合物中抗炎药组分的剂量及效力影响。
在某些优选实施方式中，VR1调节剂与抗炎药的组合投予是藉由将一种或多种VR1调节剂与一种或多种抗炎药包装于相同的包裹中而实现，并且可为包裹中各自放入不同的容器中或将一种或多种VR1拮抗剂与一种或多种抗炎药的混合物放入同一容器中。优选为将混合物制成口服制剂(例如药丸、胶囊、片剂等)。在某些实施方式中，所述包裹包括贴有标记的标签，所述标记标明所述一种或多种VR1调节剂及一种或多种抗炎药一起服用以用于治疗炎性疼痛病症。
在其他态样中，本发明VR1调节剂可与一种或多种另外的疼痛缓解药物结合使用。某些所述的药物亦为如上所列的抗炎药。其他所述的药物为止痛药，包括典型地对一种或多种鸦片受体亚型(如μ、κ及/或δ)作用，较佳作为激动剂或部分激动剂的麻醉药。所述药物包括鸦片、鸦片衍生物及类鸦片，及所述药物的药学上可接受的盐及水合物。在较佳实施方式中，麻醉止痛剂的具体实例包括阿芬太尼(alfentanil)、α-普洛丁(alphaprodine)、阿尼利定(anileridine)、贝齐米特(bezitramide)、布诺啡(buprenorphine)、布托啡诺(butorphanol)、可待因(codeine)、二乙酰基二氢吗啡(diacetyldihydromorphine)、二乙酰吗啡(diacetylmorphine)、双氢可待因(dihydrocodeine)、苯乙呱啶(diphenoxylate)、乙基吗啡(ethylmorphine)、芬太尼(fentanyl)、海洛因(heroin)、二氢可待因酮(hydrocodone)、二氢吗啡酮(hydromorphone)、异美沙酮(isomethadone)、左美沙芬

左旋凡(levorphane)、左啡诺(levorphanol)、麦啶(meperidine)、美他佐辛(metazocine)、美沙酮(methadone)、美沙芬(methorphan)、麦托朋(metopon)、吗啡(morphine)、纳布啡(nalbuphine)、鸦片萃取物(opiumextracts)、鸦片流体萃取物(opium fluid extracts)、鸦片粉剂、鸦片颗粒、生鸦片、鸦片酊剂、羟二氢可待因酮(oxycodone)、羟吗啡酮(oxymorphone)、帕格利(paregoric)、戊唑辛(pentazocine)、派鱼替啶(pethidine)、苯唑星(phenazocine)、匹米诺定(piminodine)、丙氧芬(propoxyphene)、消旋甲啡烷(racemethorphan)、消旋啡烷(racemorphan)、舒芬太尼(sulfentanyl)、蒂巴因(thebaine)以及前述药物的药学上可接受的盐及水合物。
麻醉止痛剂的其他实例包括乙酰托啡(acetorphine)、乙酰氢可待因(acetyldihydrocodeine)、乙酰美沙醇(acetylmethadol)、烯丙罗定(allylprodine)、α-乙酰美沙醇(alphracetylmethadol)、阿法美罗定(alphameprodine)、阿法美沙醇(alphamethadol)、苄替啶(benzethidine)、苄吗啡(benzylmorphine)、倍他乙酰美沙醇(betacetylmethadol)、倍他美罗定(betameprodine)、倍他美沙醇(betamethadol)、倍他罗定(betaprodine)、氯尼他秦(clonitazene)、溴甲可待因(codeinemethylbromide)、可待因-N-氧化物(codeine-N-oxide)、环丙啡(cyprenorphine)、地索吗啡(desomorphine)、右吗拉胺(dextromoramide)、地恩丙胺(diampromide)、二乙噻丁(diethylthiambutene)、二氢吗啡(dihydromorphine)、地美沙朵(dimenoxadol)、地美庚醇(dimepheptanol)、二甲基噻丁烯(dimethylthiamubutene)、吗苯丁酯(dioxaphetyl butyrate)、地匹呱酮(dipipanone)、羟蒂巴酚(drotebanol)、乙醇、乙甲噻丁(ethylmethylthiambutene)、依托尼秦(etonitazene)、埃托啡(etorphine)、醇苯呱酯(etoxeridine)、呋替啶(furethidine)、氢吗啡醇(hydromorphinol)、羟呱替啶(hydroxypethidine)、凯托米酮(ketobemidone)、左旋吗散痛(levomoramide)、左芬啡烷(levophenacylmorphan)、甲去氧吗啡(methyldesorphine)、甲二氢吗啡(methyldihydromorphine)、吗呱利定(morpheridine)、吗啡、甲基脱氧吗啡(methylpromide)、甲基磺胺吗啡(morphine methylsulfonate)、吗啡-N-氧化物、吗咯吩(myrophin)、纳洛酮(naloxone)、纳曲酮(naltyhexone)、烟酰可待因(nicocodeine)、尼可吗啡(nicomorphine)、诺美沙朵(noracymethadol)、去甲左啡诺(norlevorphanol)、去甲美沙酮(normethadone)、去甲吗啡(normorphine)、二苯呱己酮(norpipanone)、苯他索卡因(pentazocaine)、非那多松(phenadoxone)、呱苯丙酰胺(phenampromide)、非诺啡烷(phenomorphan)、苯呱利定(phenoperidine)、氰苯双呱酰胺(piritramide)、吗啉吗啡(pholcodine)、普庚索辛(proheptazoine)、丙呱利定(properidine)、丙吡胺(propiran)、消旋吗拉胺(racemoramide)、醋氢可待因酮(thcbacon)、三甲利定(trimeperidine)及其药学上可接受的盐及水合物。
进一步具体的代表性止痛药包括，例如乙酰氨酚(acetaminophen)(扑热息痛(paracetamol))；布洛芬；阿司匹林；及其他如上所述的NSAID；NR2B拮抗剂；缓激肽拮抗剂；抗偏头痛药；抗痉挛药诸如奥卡西平(oxcarbazepine)及卡马西平(carbamazepine)；抗抑郁药(如TCA、SSRI、SNRI、物质P拮抗剂等)；脊髓阻滞剂；戊唑辛(pentazocine)/纳洛酮(naloxone)；麦啶；左吗啡；丁丙诺啡

二氢吗啡酮；芬太尼、舒芬太尼、羟考酮(oxycodone)；羟考酮/乙酰氨酚(acctaminophen)、纳布啡及羟吗啡酮。更多的止痛药包括CB2-受体激动剂，诸如AM1241、辣椒素受体拮抗剂及与电压门控钙通道的α2δ子组结合的化合物，例如加巴喷丁(gabapentin)及普加巴林(pregabalin)。
与本发明VR1调节剂结合使用的代表性抗偏头痛药包括CGRP拮抗剂、麦角胺及5-HT1激动剂，诸如舒马曲坦(sumatripan)、那拉曲坦(naratriptan)、索马曲坦(zolmatriptan)及利扎曲坦(rizatriptan)。
在另外一些方面，本发明VR1调节剂可与一种或多种白细胞三烯受体拮抗剂结合使用(如抑制半胱氨酰白三烯CysLT1受体的试剂)。CysLT1拮抗剂包括目特路卡(Montelukast)(

Merck&Co.，Inc.)。所述组合物用于治疗肺部病症诸如哮喘。
为了治疗或预防咳嗽，本发明VR1调节剂可与其他用于治疗此病症的药物结合使用，诸如抗生素、抗炎药、胱氨酸基白三烯(cystinylleukotrienes)、组胺拮抗剂、皮质甾类、类鸦片类、NMDA拮抗剂、质子泵抑制剂、痛敏肽(nociceptin)、神经激肽(NK1、NK2及NK3)及缓激肽(BK1及BK2)受体拮抗剂、大麻素、Na+依赖性通道阻断剂及高传导性Ca+2依赖性K+通道活化剂。具体药物包括右旋溴苯吡胺(dexbrompheniramine)加假麻黄碱(pseudoephedrine)、氯雷他定(loratadine)、氧甲唑啉(oxymetazoline)、异丙托铵(ipratropium)、沙丁胺醇(albuterol)、氯地米松(beclomethasone)、吗啡、可待因、福尔可定(pholcodeine)及右美沙芬(dextromethorphan)。
本发明进一步提供治疗尿失禁的组合疗法。在所述方面，本发明VR1调节剂可与用于治疗此病症的其他药物结合使用，诸如雌激素替代疗法、孕酮同系物(progesterone congeners)、电刺激、钙通道阻滞剂、镇痉药、类胆碱拮抗剂、抗毒蕈碱药、三环抗抑郁剂、SNRIs、β-肾上腺受体激动剂、磷酸二酯酶抑制剂、钾通道开放剂、痛敏肽/孤啡肽(orphanin)FQ(OP4)激动剂、神经激肽(NK1及NK2)拮抗剂、P2X3拮抗剂、肌营养性药物(musculotrophic drug)及骶神经调节术。具体试剂包括奥昔布宁(oxybutinin)、溴化依米波宁(emepronium)、托特罗定(tolterodine)、黄酮呱酯(flavoxate)、氟比洛芬(flurbiprofen)、托特罗定(tolterodine)、双环胺(dicyclomine)、丙呱凡林(propiverine)、丙胺太林(propantheline)、双环胺、丙咪嗪(imipramine)、多虑平(doxepin)、度洛西汀(duloxetine)、1-去氨-8-D-精氨酸加压素、毒蕈碱受体拮抗剂诸如托特罗定(tolterodine)(

Pharmacia Corporation)及抗胆碱药，诸如奥昔布宁(

Ortho-McNeil Pharmaceutical，Inc.，Raritan，NJ)。
所述组合物疗法中VR1调节剂的适当的剂量通常如上所述。其他疼痛缓解药的给药剂量和给药方法如制造商于Physician′s DeskReference中所说明者。在某些实施方式中，VR1调节剂与一种或多种另外的治疗疼痛的药物合并使用引起需产生治疗效果的每种治疗药的剂量都减少(例如一种或两种药物的剂量可少于上述剂量或制造商建议的最大剂量的3/4，少于1/2，少于1/4或少于10％)。
在组合疗法中，上述的药物组合物可进一步包括一种或多种上述药物。在某些所述的组合物中，所述另外的药物为止痛药。本发明亦提供包装的药物制剂，其包括在同一包裹中的一种或多种VR1调节剂及一种或多种另外的药物(如止痛药)。所述的包装的药物制剂通常包括(i)装有包括至少一种本发明所述的VR1调节剂的药物组合物的容器；(ii)装有包括至少一种额外的药物(如疼痛缓解药及/或抗炎药)的药物组合物的容器；以及(iii)指明所述组合物是同时使用、分别使用还是相继使用而用于治疗或预防对患者中的VR1调节剂产生反应的病症(如疼痛及/或炎症主导的病症)的说明书(如标签或包装内页)。
为VR1激动剂的化合物可进一步应用于，例如群体控制(作为催泪瓦斯的替代物)或个人防护(如喷雾剂)，或藉由辣椒素受体脱敏而用作治疗疼痛、瘙痒、尿失禁或膀胱过动症的药物。通常而言，用于群体控制或个人防护的化合物根据传统催泪瓦斯或胡椒喷雾技术制造和使用。
在各自不同的汰样中，本发明提供了本发明化合物于体外及体内的多种非药物用途。例如，所述化合物可被标记并用作检测及定位辣椒素受体的探针(在样品中，诸如细胞制剂或组织切片、制剂或部分制剂)。此外，包含适当的活性基团(如芳基羰基、硝基或叠氮基)的本发明化合物可用于受体结合位置的光亲和标记研究。此外，本发明化合物可在检测受体活性时用作阳性对照，作为测定候选药物与辣椒素受体结合能力的标准物，或作为正电子放射层扫描术(PET)成像或单光子发射电脑断层显象术(SPECT)的放射性示踪剂。所述方法可用于表征活体目标中的辣椒素受体。例如，VR1调节剂可使用任意一种普遍熟知的技术(如本发明所述的以放射性核(如氚)进行放射性标记)进行标记，并与样品反应一段适当的反应期(如藉由先检测结合的时间而决定)。反应后，去除未结合的化合物(如藉由洗涤)，使用适合所述使用标记的任意方法检测已结合的化合物(如使用自动射线照相术或闪烁计数侦测放射性标记化合物；分光镜法可用于检测发光基团和萤光基团)。作为对照，含有标记化合物及更多量(如大于标记化合物10倍)的未标记化合物的对照样品可使用相同方式处理。残留于测试样品中的可检测的标记量多于残留于对照组中可检测的标记量说明样品中含有辣椒素受体。检测方法，包括在培养细胞或组织样品中对辣椒素受体进行受体自动射线照相(受体映射)可根据Kuhar in sections 8.1.1 to 8.1.9 ofCurrent Protocols in Pharmacology(1998)John Wile y &Sons，New York所述的方法进行。
本发明化合物亦可使用于多种普遍熟知的细胞分离方法。例如，可将调节剂连接置组织培养板或其他撑体的内表面，以作为固定用的亲和性配体，籍此体外分离辣椒素受体(如分离受体表达细胞)。在优选的实施方式中，与萤光标记(如萤光素)连接的调节剂与细胞接触，再以萤光化合物细胞分拣术(FACS)分析(或分离)所述细胞。
本发明VR1调节剂可进一步使用于鉴别与辣椒素受体结合的其他药物的检测法。通常而言，所述检测法为标准竞争结合检测法，其中，已结合的经标记VR1调节剂由测试化合物代替。简而言之，所述检测法藉由下述方法实施(a)在允许VR1调节剂与辣椒素受体结合的条件下以本发明所述的放射性标记VR1调节剂与辣椒素受体接触，由此产生已结合的标记VR1调节剂；(b)于不使用测试试剂的情况下检测与已结合的标记VR1调节剂的量相对应的信号；(c)将测试剂与已结合的标记VR1调节剂接触；(d)于使用测试剂的情况下检测与已结合的标记VR1调节剂的量相对应的信号；以及(e)检测步骤(d)所测定信号比步骤(b)所测定信号减少的量。
下列实例提供用于说明而非用于限制本发明。除非另行说明，所有试剂及溶剂都为标准商品级并且使用时不需进一步纯化。使用常规改性方法，可改变初始原料并添加另外的步骤以生产本发明的其他化合物。
本发明所引用的所有专利申请、专利及出版物的内容整体并入此处作为参考。
实施例 实施例1 代表性中间体的制备 此实施例说明了用于合成顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物的代表性中间体的制备方法。
A.3-氮基丙氨酸乙酯
以340mL饱和NaHCO3水溶液谨慎地处理于440mL水中的氰基乙醛酸乙酯-2-肟(50公克(g)，352毫摩尔(mmol))的混合物，接着分多次添加连二亚硫酸钠(165g，950mmol)。然后，将反应物加热至内部温度35℃并保持35分钟。冷却至室温后，以NaCl(重量250g)饱和所述反应物，并以CH2Cl2(6×150毫升(mL))萃取。将合并的CH2Cl2萃取物干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩而获得呈褐色油状的标题化合物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.43(1H，s)，4.34(2H，q，J 7.2)，2.30(2H，bs)，1.35(3H，t，J 7.2)。
B.5-氨基-1-乙基-1H-咪唑-4-羧酸乙酯
将原甲酸三乙酯(32.5mL，28.9g，0.195mol)添加至3-氮基丙氨酸乙酯(25g，0.195mol)的MeCN(400mL)的溶液中，加热所得溶液至90℃。70分钟后，冷却所述溶液至室温，添加乙胺溶液(2M于THF中，98mL，0.195mol)并在室温下搅拌所述反应物18小时。真空浓缩所述反应至呈黏性油状，之后加入盐酸(1N，200mL)。以DCM(2×200mL，1×100mL)洗涤水层。藉由添加固体重碳酸钠(～25g)而中和水层，之后以DCM(5×200mL)萃取水层。合并有机层，以MgSO4干燥并真空浓缩而获得褐色/红色固体残质。将残质在EtOAc(50mL)中形成浆，过滤，且以二乙醚漂洗所述固体并干燥而获得标题化合物。1H NMR(360MHz，CDCl3)δ7.05(1H，s)，4.85(2H，br.s)，4.34(2H，q，J 7)，3.79(2H，q，J7)，1.43(3H，t，J7)，1.39(3H，t，J7)。
C.5-氨基-1-甲基-1H-咪唑-4-羧酸乙酯
将原甲酸三乙酯(26mL，23.2g，0.156mol)添加至3-氮基丙氨酸乙酯(20g，0.156mol)的MeCN(400mL)的溶液中，加热所得溶液至90℃。1小时后，冷却所述溶液至室温，添加甲胺溶液(8M于EtOH中，20mL，0.156mol)并在室温下搅拌所述反应18小时。真空浓缩所述反应至呈黏性油状，之后加入盐酸(1N，180mL)。以DCM(2×200mL，1×100mL)洗涤水层。藉由添加固体重碳酸钠(～20g)而中和水层，之后以DCM(5×200mL)萃取水层。合并有机层，以MgSO4干燥并真空浓缩而获得褐色/红色固体残质。将残质在EtOAc(40mL)中以超声波制成浆，过滤，以乙醚漂洗所述固体并干燥而获得标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.08(1H，s)，5.94(2H，s)，4.15(2H，q，J7.1)，3.39(3H，s)，1.24(3H，t，J7.1)。
D.5-氨基-1-丙基-1H-咪唑-4-羧酸乙酯
使用正丙胺代替乙胺，基本上以实施例1B所述的方法制备此化合物。1H NMR(360MHz，DMSO)δ7.10(1H，s)，5.89(2H，s)，4.14(2H，q，J7.1)，3.75(2H，t，J7.0)，1.63(2H，q，J7)，1.23(3H，t，J7.1)，0.83(3H，t，J 7.4)；m/z(ES+)198(M+H+)。
E.5-氨基-1-环丙基-1H-咪唑-4-羧酸乙酯
使用环丙胺代替乙胺，基本上以实施例1B所述的方法制备此化合物。1H NMR(360MHz；CDCl3)5.09(2H，s)，4.33(2H，q，J7)，3.00-2.94(1H，m)，1.38(3H，t，J7)，1.2-1.0(2H，m)，1.0-0.8(2H，m).m/z(ES+)196(M+H+)。
F.5-氨基-1-(2，2，2-三氟乙基)-1H-咪唑-4-羧酸乙酯
使用2，2，2-三氟乙胺代替乙胺，基本上以实施例1B所述的方法制备此化合物。1H NMR(360MHz，d6-DMSO)1.24(3H，t，J7.1)；4.17(2H，q，J7.1)；4.92(2H，q，J9.3)；6.32(2H，br s)；7.18(1H，s)。
G.5-氨基-1-(2，2-二氟乙基)-1H-咪唑-4-羧酸乙酯
使用2，2-二氟乙胺代替乙胺，基本上以实施例1B所述的方法制备此化合物。
H.3-氨基吡啶-2-羧酸乙酯
将溶于26mL EtOH中的3-氨基吡啶-2-羧酸(6.4g，46.3mmol)与8mL浓硫酸的混合物加热回流2天。冷却后，将所述混合物浓缩至15mL至20mL并倒入20g冰中。在冰浴中冷却的同时，以浓NH4OH碱化所述混合物至pH为8至9。藉由过滤去除产生的褐色沉淀物，以乙醚(4×60mL)萃取滤液。以浓盐水(4×60mL)洗涤合并的乙醚萃取液，干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发而获得黄色/褐色固体。将所述固体与上述过滤产物合并，并以冷乙醚磨碎，而获得呈浅褐色固体之标题化合物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(1H，m)，7.21(1H，m)，7.03(1H，m)，5.74(2H，bs)，4.44(2H，q，J7.2，6.9)，1.45(3H，t，J6.9).m/z＝167.13(M+H)。
I.5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-羧酰胺
于N2氛及室温下，以5分钟将三甲基铝(2M溶液于正己烷中；8.9mL，17.7mmol)滴加至4-氯苯胺(1.13g，8.87mmol)的1，2-二氯乙烷(18mL)溶液中。搅拌所得的悬浮液30分钟后添加5-氨基-1-甲基-1H-咪唑-4-羧酸乙酯(1.00g，5.91mmol)，将所述浆体加热回流6小时。冷却过程中以CH2Cl2(60mL)稀释所述溶液，添加饱和酒石酸钾钠水溶液(60mL)，再添加饱和氯化铵水溶液(20mL)及MeOH(10mL)。猛烈搅拌所述混合物1小时，之后在分离各相之前静置1小时。以8％MeOH/DCM(50mL)萃取水相，合并的有机萃取液以1M酒石酸钾钠(150mL)洗涤，以MgSO4干燥，过滤并真空浓缩而获得橙色固体。以二乙醚将所述固体形成浆，过滤所述混合物。以乙醚洗涤残质并以空气流干燥1小时，而获得呈金色固体之标题化合物。1H NMR(500MHz，DMSO)δ9.44(1H，s)，7.84(2H，d，J 8.8)，7.30(2H，d，J 8.8)，7.19(1H，s)，5.98(2H，s)，3.43(3H，s)。
J.5-氨基-N-(4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-羧酰胺
使用4-氟苯胺代替4-氯苯胺，基本上以实施例1I所述的方法制备此化合物。
K.3-氨基-N-(4-氯苯基)吡啶酰胺(3-amino-N-(4-chlorophenyl)picolinamide)
使用3-氨基吡啶-2-羧酸乙酯及4-氯苯胺，基本上以实施例1I所述的方法制备此化合物。
L.3-氨基-N-(4-氯苯基)-1-乙基-1H-咪唑-4-羧酰胺
使用5-氨基-1-乙基-1H-咪唑-4-羧酸乙酯及4-氯苯胺，基本上以实施例1I所述的方法制备此化合物。1H NMR(500MHz，DMSO)δ9.44(1H，s)，7.83(2H，d，J 8.9)，7.29(2H，d，J 8.9)，7.24(1H，s)，6.02(2H，s)，3.85(2H，q，J7.3)，1.27(3H，t，J7.2)。
M.甲乙酐 将乙酸酐(35.94g，352mmol)及甲酸(16.20g，352mmol)添加至圆底烧瓶中，于55℃加热3小时。所述反应混合物用于实施例1O而不需进一步纯化。
N.N-甲酰-3-氰基丙氨酸乙酯
将3-氰基丙氨酸乙酯(26.9g，210mmol)溶于无水乙醚(200mL)中，于冰/水浴中冷却。滴加甲乙酐(制备成如上所述的混合物)。添加完毕后，将反应混合物恢复至室温并于室温下搅拌过夜。在真空中去除大部分易挥发物，剩余溶剂藉由与甲苯(100mL×4)共蒸发而去除。获得的红色油在乙醚中摩擦时沉淀，将产生的固体在乙醚中重结晶而获得呈白色固体之标题化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)8.32(1H，s)，7.26(1H，s)，6.46(1H，bs，)，5.56(1H，d，J 7.8)，4.39(2H，q)，1.37(3H，t)。
O.5-氨基-1，3-噻唑-4-羧酸乙酯
将N-甲酰-3-氰基丙氨酸乙酯(11.22g，71.86mmol)溶于无水苯(220mL)中。添加劳森试剂(Lawesson′s reagent)(14.53g，35.93mmol)后，将所述悬浮液回流24小时。大部分溶剂在真空中去除，将黏性的红色残质预先吸附于硅胶上，并装到硅胶管(洗提溶剂EtOAc∶己烷＝50∶50)中。获得呈黄色固体之标题化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.87(1H，s)，7.26(1H，s)，6.01(2H，broad s)，4.38(2H，q)，1.41(3H，t)；m/z(ES+)173.11(M+H+)。
P.5-氨基-N-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-羧酰胺
除了于90℃的反应时间降至3小时，以及产物以CH2Cl2(代替8％MeOH/CH2Cl2)萃取并以10％Et2O/己烷(代替Et2O)洗涤外，此化合物基本上以实施例1I所述的方法自5-氨基-1，3-噻唑-4-羧酸乙酯{Tetrahedron，1985，41，5989)及4-氯苯胺制备。1H NMR(500MHz，DMSO)δ9.83(1H，s)，8.08(1H，s)，7.85(2H，d，J 8.9)，7.35(4H，m)。
Q.3-氨基-N-(6-氯吡啶-3-基)-4-甲基噻吩-2-羧酰胺
使用3-氨基-4-甲基噻吩-2-羧酸甲酯及2-氯-5-氨基吡啶，基本上以实施例1I所述的方法制备此化合物。
R.5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-环丙基-1H-咪唑-4-羧酰胺
由5-氨基-1-环丙基-1H-咪唑-4-羧酸乙酯及4-氯苯胺，基本上以实施例1I所述的方法制备此化合物。m/z(ES+)277(M+H+)。
S.5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-(2，2-二氟乙基)-1H-咪唑-4-羧酰胺
由5-氨基-1-(2，2-二氟乙基)-1H-咪唑-4-羧酸乙酯及4-氯苯胺，基本上以实施例1I所述的方法制备此化合物。
T.1-(4-氟苯基)-9-甲基-2-硫酮基-1，2，3.9-四氢-6H-嘌呤-6-酮盐酸盐
在45℃于吡啶(125mL)中搅拌5-氨基-1-甲基-1H-咪唑-4-羧酸乙酯(8.45g，0.05摩尔)及异硫氰酸4-氟苯基酯(7.65g，0.05摩尔)20小时。所述反应混合物于真空下浓缩并添加冰冷水进行稀释。反应混合物以CH2Cl2(2×250mL)萃取，以水(200mL)洗涤并以MgSO4干燥。于真空中蒸发滤液而获得呈红橙色黏性油之粗中间体。将所述油在1％氢氧化钠水溶液(300mL)中形成浆，加热至90℃并保持20小时。冷却所述反应混合物并过滤所述固体。于真空中蒸发所述滤液以减少体积至100mL。使用浓HCl酸化所述混合物至pH为4.0，并于室温下静置过夜。过滤分离出的黄色固体并于70℃干燥而获得标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.8(1H，s)，7.2-7.4(4H，m)，3.74(3H，s)；m/z(ES+)277.09(M+H+)。
U.2-氯-1-(4-氟苯基)-9-乙基-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮
将1-(4-氟苯基)-9-甲基-2-硫酮基-1，2，3.9-四氢-6H-嘌呤-6-酮盐酸盐(6.5g，0.021摩尔)悬浮于大量过量的氧氯化磷(150mL)中，加热至135℃并保持40小时。冷却反应混合物，于真空中蒸发，并与甲苯共沸两次。将所得黏性褐色油溶于DCM(200mL)，再以饱和NaHCO3(水溶液)中和。以DCM(2×200mL)萃取水层，干燥(MgSO4)。过滤干燥后的萃取液，真空浓缩而获得呈浅褐色固体之粗产物。以快速柱色谱法，使用1％至2.5％MeOH/CH2Cl2纯化所述粗产物而获得呈白色固体之标题化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.75(1H，s)，7.2-7.35(4H，m)，3.85(3H，s)。
V.1-(4-氟苯基)-9-甲基-2-(4-(三氟甲基)环己烯-1-基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮
于二氧杂环乙烷(20ml)中结合2-氯-1-(4-氟苯基)-9-甲基-1H-嘌呤-6(9H)-酮(500mg，1.8mmol)与4，4，5，5-四甲基-2-(4-氟甲基-环己烯-1-基)[1，3，2]-二杂氧戊硼烷[J.Med.Chem.，2006，49，3719-3742](694mg，2.5mmol)、Pd(PPh3)4(103mg，0.09mmol)及K3PO4(2M，1.8ml，3.6mmol)。所述混合物以N2净化5分钟，再加热至110℃并于密封试管中搅拌18小时。冷却反应物至室温，并以H2O及CH2Cl2分离。分离各层，以CH2Cl2(2×40mL)萃取水相，并干燥(Na2SO4)合并的有机层，过滤并真空浓缩。以快速柱色谱法纯化而获得呈白色固体之标题化合物。
W.3-(4-氟苯基)-2-硫酮基-2.3-二氢吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(1H)-酮
将3-氨基吡啶-2-羧酸乙酯(2.0g，12.0mmol)及异硫氰酸4-氟苯基酯(1.84g，12.0mmol)的混合物于7mL无水吡啶及45℃搅拌21小时。冷却后，于真空中蒸发吡啶，将冰水添加至残质中。于EtOAc中将所得混合物形成浆并过滤，而获得成白色固体之标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.59(1H，m)，7.79(2H，m)，7.33(4H，m).m/z＝274.09(M+H)。
X.2-氯-3-(4-氟苯基)-吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮
将3-(4-氟苯基)-2-硫酮基-2.3-二氢吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(1H)-酮(2.6g，9.5mmol)于30mL POCl3的混合物加热至135℃并搅拌2天。冷却至室温后，于真空中去除多余的POCl3，并将残质与甲苯共沸2次。将所得的黏性褐色油/固体混合物溶于CH2CI2并以饱和NaHCO3中和至pH7至8。分离各层，将CH2CI2层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发而获得褐色黏性固体。以管柱色谱法(梯度从CH2Cl2至20％EtOAc/CH2Cl2)纯化而获得呈灰白色固体之标题化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.91(1H，m)，8.05(1H，m)，7.74(1H，m)，7.28(4H，m).m/z＝276.10(M+H)。
Y.6-(4-氟苯基)-5-巯基[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐
将5-氨基--1，3-噻唑-4-羧酸乙酯(1.05g，6.10mmol)及异硫氰酸4-氟苯酯(0.93g，6.10mmol)添加至吡啶(3.5mL)，并于45℃加热15小时。于真空中去除大部分溶剂，将所得黄色固体溶于CH2Cl2(150mL)并以H2O(20mL×2)及浓盐水(20mL×2)洗涤。以MgSO4干燥CH2Cl2相，并于减压下去除溶剂。所得残质以1％NaOH溶液(37mL)处理，并于90℃加热15小时。过滤所述反应混合物，藉由添加浓HCl而将所述滤液调节至pH 3。于真空中去除大部分水，将分离出的黄色固体过滤，干燥而获得呈黄色固体之标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)8.90(1H，s)，7.31(4H，m)。
Z.5-氯-6-(4-氟苯基)-5-巯基[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-7(6H)-酮
将6-(4-氟苯基)-5-巯基[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-7(6H)-酮盐酸盐(0.2g，0.633mmol)添加至POCl3(10mL)，将所得溶液于135℃回流41小时。于减压下去除大部分易挥发物并将残留溶剂与甲苯共沸(50mL×3)。将所得的黑色固体溶于CH2Cl2(200mL)，以饱和NaHCO3溶液(100mL×5)及浓盐水(50mL×2)洗涤，并以MgSO4干燥。去除溶剂后由硅胶管柱层析法(EtOAc∶己烷＝50∶50)获得呈黄色固体之标题化合物1H NMR(400MHz，CDCl3)8.88(1H，s)，7.26(4H，m)；m/z(ES+)281.95(M+)。
AA.3-(4-氯苯基)-2-巯基-7-甲基噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮
由可购得的3-氨基-4-甲基噻吩-2-羧酸甲酯及异氰酸4-氯苯酯，基本上以实施例1Y所述的方法制备此标题化合物。
BB.2-氯-3-(4-氯苯基)-7-甲基噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮
由3-(4-氯苯基)-2-巯基-7-甲基噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，基本上以实施例1Y所述的方法制备所述标题化合物。
CC.N-(6-氯吡啶-3-基)-4-甲基-3-(4-(三氟甲基)环己烷羧酰氨基)噻吩-2-羧酰胺
将3-氨基-N-(6-氯吡啶-3-基)-4-甲基噻吩-2-羧酰胺(1.14mmol)、4-(三氟甲基)环己烷羧酸(1.93mmol)、双(2-氧代-3-恶唑烷基)次磷酰氯(1.93mmol)、N，N-二异丙基乙胺(1.93mmol)及二氯乙烷(10ml)合并，并以微波炉于160℃加热20分钟，之后，薄层色谱法表明所述反应结束。以DCM(30ml)及10％碳酸钾水溶液(30ml)使所述化合物分层。分离各层，以DCM(30ml)萃取水相，合并有机层并以水(30ml)及浓盐水洗涤。干燥(MgSO4)有机层并蒸发。与乙醚磨碎残质而获得标题化合物。
DD.5-氨基-N-(苯并[d]噻唑-6-基)-1-甲基-1H-咪唑-4-羧酰胺
使用苯并[d]噻唑-6-胺及5-氨基-1-甲基-1H-咪唑-4-羧酸乙酯，基本上以实施例1I所述的方法制备此化合物。
EE.3-氨基-N-(苯并[d]噻唑-6-基)吡啶酰胺
使用苯并[d]噻唑-6-胺及3-氨基吡啶-2-羧酸乙酯，基本上以实施例1I所述的方法制备此化合物。
实施例2 代表性顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物的合成 这些实施例说明了代表性顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物的合成。
A.3-(6-氯吡啶-3-基)-7-甲基-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮
将N-(6-氯吡啶-3-基)-4-甲基-3-(4-(三氟甲基)环己烷羧酸酰氨基)噻吩-2-羧酰胺(3.73mmol)添加至POCl3(10mL)，所得溶液于110℃回流4小时。于减压下去除大部分易挥发物，将残质加入DCM。以饱和NaHCO3溶液洗涤所述有机物，以Na2SO4干燥并于减压下浓缩。藉由硅胶管柱层析法纯化而获得标题化合物。
B.5-{4-氧代-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]吡啶并[3，2-d]嘧啶-3(4H)-基}吡啶-2-甲腈
将3-(6-氯吡啶-3-基)-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮(1.4g，3.43mmol)、Zn(CN)2(0.8mg，6.87mmol)、参(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.31g，0.343mmol)及1，1’-双(二苯基膦)二茂铁(0.19g，0.343mmol)添加至二甲基甲酰胺(15mL)。以N2清洗所述混合物3分钟，再于120℃加热18小时。添加水(20mL)并以DCM(2×40mL)萃取所得混合物。将所述有机层通过硅藻土和Na2SO4，于真空中去除溶剂。以管柱层析法(MeOH∶CH2Cl2＝2∶98)纯化粗产物而获得标题化合物的顺式与反式混合物。以MeOH/EtOAc(1∶25)洗提，使用制备性平板硅胶纯化法将想得到的顺式异构体与反式异构体分离。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.88(d，J＝4Hz，1H)，8.67(s，1H)，8.09(d，J＝4Hz，1H)，7.95(d，J＝7.8Hz，1H)7.87(dd，J＝3，8.4Hz，1H)，7.74(q，J＝8.4Hz，1H)，2.40-2.51(m，1H)，1.92-1.32(m，1H)，1.49-1.72(m，1H)。
C.1-(4-氟苯基)-9-甲基-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮
将1-(4-氟苯基)-9-甲基-2-(4-(三氟甲基)环己烯-1-基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(1.4g，3.57mmol)与PtO2(850mg)合并于EtOH(200ml)中。于60℃及50磅/平方英寸(psi)氢化所述混合物3天。冷却所述反应物至室温，以硅藻土过滤，并真空浓缩。以快速色谱法纯化而获得呈白色固体之标题化合物。
D.1-(4-氯苯基)-9-乙基-8-(甲基氨基)-2-((1s，4s)-4-(三氟甲基)环己基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮 步骤1.1-(4-氯苯基)-9-乙基-2-[4-(三氟甲基)环己基]-1H-嘌呤-6(9H)-酮
将5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-乙基-1H-咪唑-4-羧酰胺(1.0g，3.78mmol)与4-(三氟甲基)环己烷羧酸(314mg，1.6mmol)及多磷酸(2.0mL)合并于试管中。将所述混合物加热至100℃，搅拌1小时，再加热至140℃，30分钟。冷却所述反应物至室温并添加冰。粉碎多磷酸结块，所述悬浮液分层于4N NaOH水溶液及CH2Cl2中。分离各层，以CH2Cl2(2×50mL)萃取水相，将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。以制备性TLC纯化而获得呈白色固体的标题化合物的顺式与反式混合物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.75(s，1H)，7.54-7.51(m，2H)，7.18-7.15(m，2H)，4.21(q，2H，J＝7.1Hz)，2.34-2.22(m，1H)，2.01-2.18(m，1H)，2.00-1.62(m，6H)，1.58-1.52(t，3H，J＝7.2Hz)，1.18-1.10(m，2H).m/z(ES+)425.102(M+H+)。
步骤2.8-溴-1-(4-氯苯基)-9-乙基-2-(4-(三氟甲基)环己基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮
将Br2(0.38g，2.36mmol)、1-(4-氯苯基)-9-乙基-2-[4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6(9H)-酮(1.0g，2.36mmol)于乙酸(2mL)溶液以50℃加热24小时。冷却至室温后，将反应物倒入冰水(75mL)中搅拌，置于室温中2小时。收集沉淀物，藉由快速管柱层析法以硅胶(CH2Cl2∶MeOH99∶1)纯化而获得呈白色固体的标题化合物的顺式与反式混合物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.53-7.50(m，2H)，7.16-7.12(m，2H)，4.24(q，2H，J＝7.2Hz)，2.32-2.22(m，1H)，2.18-2.00(m，1H)，2.00-1.60(m，6H)，1.58-1.42(t，3H，J＝7.2Hz)，1.18-1.00(m，2H).m/z(ES+)503(M+H+)。
步骤3.8-(烯丙基(甲基)氨基)-1-(4-氯苯基)-9-乙基-2-(4-(三氟甲基)环己基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮
将8-溴-1-(4-氯苯基)-9-乙基-2-(4-(三氟甲基)环己基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(0.1g，0.2mmol)及烯丙基甲胺(1.2mL)于120℃加热36小时。冷却至室温后，所述反应物以CH2Cl2稀释并以Na2CO3仔细洗涤。合并有机物，干燥(Na2SO4)并真空浓缩。以制备性TLC(CH2Cl2∶MeOH99∶5)纯化而获得呈白色固体之标题化合物的顺式/反式混合物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.51-7.49(m，2H)，7.17-7.11(m，2H)，5.98-5.87(m，1H)，5.28(m，2H)，4.08(q，2H，J＝7.2Hz)，3.79-3.77(app d，2H，J＝5.7)，2.9(s，3H)，2.29-2.16(m，1H)，2.16-2.00(m，1H)，1.98-1.62(m，6H)，1.48-1.43(t，3H，J＝7.2Hz)，1.17-1.00(m，2H).m/z(ES+)494(M+H+)。
步骤4.1-(4-氯苯基)-9-乙基-8-(甲基氨基)-2-(4-(三氟甲基)环己基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮
将8-(烯丙基(甲基)氨基)-1-(4-氯苯基)-9-乙基-2-(4-(三氟甲基)环己基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(70mg，0.14mmol)及N，N-二甲基巴比妥酸(0.42mmol)的二氯乙烷溶液以氮气清洗10分钟。之后，添加四(三苯基膦)钯(0)(10mg，0.14mmol)，于80℃加热所述反应物6小时。冷却所述混合物至室温并以CH2Cl2稀释。以饱和Na2CO3洗涤有机层并真空浓缩。以制备性TLC(CH2Cl2∶MeOH99∶5)纯化而获得呈白色固体之标题化合物的顺式与反式混合物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.51-7.49(m，2H)，7.17-7.12(m，2H)，3.97(q，2H，J＝7.2Hz)，3.13(d，2H，J＝5.1)，2.27-2.16(m，1H)，2.14-1.80(m，1H)，1.97-1.62(m，6H)，1.40-1.35(t，3H，J＝7.2Hz)，1.16-1.00(m，2H).m/z(ES+)454.154(M+H+)。根据需要，可使用半制备性HPLC分离顺式/反式的混合物而获得标题化合物的顺式异构体。
步骤5.1-(4-氯苯基)-9-乙基-8-(甲基氨基)-2-((1s，4s)-4-(三氟甲基)环己基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮
使用半制备性HPLC分离顺式/反式的混合物，而获得1-(4-氯苯基)-9-乙基-8-(甲基氨基)-2-(4-(三氟甲基)环己基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮。此标题化合物为白色固体。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.50-7.47(m，2H)，7.16-7.13(m，2H)，3.97(q，2H，J＝7.2Hz)，3.13(d，2H，J＝4.2)，2.64-2.58(m，1H(顺式异构物))，2.24-2.10(m，2H)，2.14-1.82(m，2H)，1.68-1.50(m，5H)，1.40-1.35(t，3H，J＝7.2Hz)。
E.1-(4-氯苯基)-9-环丙基-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮
将5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-羧酰胺(200mg，0.80mmol)与4-(三氟甲基)环己烷羧酸(314mg，1.6mmol)及多磷酸(2.0mL)合并于密封试管中。将所述混合物加热至100℃并搅拌1小时，再加热至140℃，30分钟。冷却所述反应物至室温并添加冰。粉碎多磷酸结块，所述悬浮液分层于4N NaOH水溶液及CH2Cl2中。分离各层，以CH2Cl2(50mL)萃取水相，将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。以半制备性TLC纯化而获得呈白色固体的标题化合物。
F.1-(苯并[d]噻唑-6-基)-9-甲基-2-((1s，4s)-4-(三氟甲基)环己基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮
使用5-氨基-N-(苯并[d]噻唑-6-基)-1-甲基-1H-咪唑-4-羧酰胺及4-(三氟甲基)环己烷羧酸，基本上以实施例2E所述的方法制备此化合物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.13(s，1H)，8.28(d，1H)，7.85(s，1H)，7.80(s，1H)，7.35(d，1H)，3.84(s，3H)，2.64(m，1H)，2.20-1.49(m，9H)。
G.3-(苯并[d]噻唑-6-基)-2-((1s，4s)-4-(三氟甲基)环己基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮
使用3-氨基-N-(苯并[d]噻唑-6-基)吡啶酰胺及4-(三氟甲基)环己烷羧酸，基本上以实施例2E所述的方法制备此化合物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.15(s，1H)，8.88(d，1H)，8.31(d，1H)，8.09(d，1H)，7.90(s，1H)，7.71(m，1H)，7.42(d，1H)，2.60(m，1H)，2.16-1.48(m，9H)。
实施例3 另外的代表性顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物 使用常规修改方法，可改变初始原料并且可使用其他步骤生产本发明所提供的其他化合物。表1所列的化合物是使用此类方法制备的。所有表1所示的化合物以实施例6所述的方法测定的IC50为100纳摩尔或更少(即，此类化合物使曝露于IC50的辣椒素的细胞的萤光反应减少50％的所述细胞的浓度为100纳摩尔或更少)。在标有”MS”栏的质谱数据为电喷射MS，其使用装设有Waters 600泵、Waters 996光电二极体矩阵检测器、Gilson 215自动取样器以及Gilson 841微量注射器的LCT飞行时间质谱器(Micromass Time-of-Flight LCT)，以15V或30V锥电压的阳离子模型获得。使用MassLynx(Advanced ChemistryDevelopment，Inc；多伦多(Toronto)，加拿大(Canada))第4.0版软体收集和分析数据。将1微升体积的样品注射至50×4.6mm ChromolithSpeedROD C18柱，使用2相线性梯度以6毫升/分钟(ml/min)的流速洗提。于220至340内米(nm)UV范围测定样品的总吸光率。洗提条件为移动相A为95/5/0.05的水/甲醇/TFA；移动相B为5/95/0.025的水/甲醇/TFA。
相A-95/5/0.05 水/甲醇/TFA，流动相B-5/95/0.025 水/甲醇/TFA 梯度时间(分钟)％B 0 10 0.5 100 1.2 100 1.2 110 注射与注射间总运行时间为2分钟 质谱保留时间在标有“保留时间”的栏位。
表1 代表性的顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物




实施例4 VR1-穿透感染(transfect)细胞及膜的制备 本发明说明了用于辣椒素结合检测法(实施例5)的VR1-穿透感染细胞及含VR1膜的制备。
亚克隆编码全长人辣椒素受体的cDNA(美国专利第6,482,611号的SEQ ID号1、2或3)至质体pBK-CMV(Stratagene，La Jolla，CA)中，供于哺乳动物细胞中重组表达。
使用标准方法，以编码全长人辣椒素受体的pBK-CMV表达构成体(expression construct)穿透感染人胚肾细胞(HEK293)。在含有G418(400微克/毫升)(μg/ml)的介质(medium)中选择穿透感染细胞2周，而获得一群稳定穿透感染细胞。藉由控制稀释法从此群中分离出独立的纯系而获得稳定纯细胞系以用于后续试验。
在放射性配体结合实验中，将细胞接种至T175细胞培养瓶中(介质中不含抗生素)，生长至约90％密度(confluency)。以PBS洗涤所述培养瓶，在含有5mM EDTA的PBS中收获细胞。藉由温和的离心将细胞集结成块，于-80℃储藏至检测时。
在冰冷的HEPES匀化缓冲液(5mM KCl 5，5.8mM NaCl，0.75mMCaCl2，2mM MgCl2，320mM蔗糖，及10mM HEPES pH 7.4)中以组织匀浆器将先前的冷冻细胞打散。将组织匀浆首先于1000×g(4℃)离心10分钟，以去除核部分及碎片，然后，将首次离心后的上清液进一步于35,000×g(4℃)离心30分钟，而获得部分纯化的膜部分。检测之前将膜于HEPES匀化缓冲液中均匀打散。藉由Bradford方法(BIO-RAD蛋白质检测试剂盒，#500-0001，BIO-RAD，Hercules，CA)将所述膜匀浆的分装份用于测定蛋白质浓度。
实施例5 辣椒素受体结合检测法 所述实例说明了辣椒素受体结合的代表性检测法，其可用于测定化合物与辣椒素(VR1)受体结合的亲和性。
基本上以Szallasi and Blumbcrg(1992)J.Pharmacol.Exp.Ter.262883-888所述的方法研究与[3H]树脂毒素(RTX)的结合。在所述方案中，结合反应结束后添加牛α1酸糖蛋白(100μg/试管)使非特定性的RTX结合减少。
由Chemical Synthesis and Analysis Laboratory，National CancerInstitute-Frederick Cancer Research and Development Center，Frederick，MD合成并获得[3H]RTX(37Ci/mmol)。也可从商人(如AmershamPharmacia Biotech，Inc.；Piscataway，NJ)获得[3H]RTX。
将实施例4的膜匀浆如前所述进行离心并在匀化缓冲液中均匀打散至蛋白质浓度为333μg/ml。于冰上设置结合检测混合物，所述混合物含有[3H]RTX(比活性2200mCi/ml)、2μL无放射活性的测试化合物、0.25mg/ml牛血清清蛋白(Cohn fraction V)及5×104至1×105VR1穿透感染细胞。以上述冰冷的HEPES匀化缓冲溶液(pH7.4)调整最终体积至500μL(用于竞争结合检测法)或1,000μL(用于饱和结合检测法)。非特定结合性之定义为在1μM无放射活性的RTX(Alexis Corp.；San Diego，CA)之存在下之结合性。。在饱和结合检测中，添加的[3H]RTX的浓度范围为7至1,000pM(稀释1至2次)。典型地，每条饱和结合曲线收集11个浓度点。
使用60pM[3H]RTX及不同浓度的测试化合物进行竞争结合检测法。所述结合反应以将检测混合物转移至37℃水浴为起点，并经历60分钟反应期后藉由于冰上冷却试管而终止。以WALLAC玻璃纤维滤纸(PERKIN-ELMER，Gaithersburg，MD)(在使用前以1.0％PEI(聚乙烯亚胺)预先浸泡2小时)过滤而将与膜结合RTX与游离RTX以及任何与α1酸糖蛋白结合的RTX分离。将滤纸干燥过夜，之后添加WALLAC BETASCINT闪烁液并以WALLAC 1205 BETA PLATE计数器计数。
平衡结合参数之决定为代入变构希尔方程式(the allosteric Hillequation)，借助电脑程式FIT P(Biosoft，Ferguson，MO)之助(说明于Szallasi等人之(1993)J.Pharmacol.Exp.Ther.266678-683)计算数据。使用所述检测法测得本发明化合物对辣椒素受体的Ki值通常小于1μM、100nM、50nM、25nM、10nM或1nM。
实施例6 钙迁移检测法 这些实施例说明了用于评价测试化合物的激动活性及拮抗活性的代表性的钙迁移检测法。
将经表达质粒(如实施例4所述)穿透感染籍此表达人辣椒素受体的细胞接种至FALCON黑壁透明底的96孔板(#3904，BECTON-DICKINSON，Franklin Lakes，NJ)使其生长至70至90％密度。排除96孔板的培养介质并将FLUO-3AM钙敏感染料(Molecular Probes，Eugene，OR)添加至每个孔(染料溶液1mg FLUO-3AM、440μL DMSO及440μL 20％普罗尼克酸的DMSO溶液，在克氏-林格氏HEPES(Krebs-Ringer HEPES，KRH)缓冲液(25mM HEPES，5niM KCl，0.96mM NaH2PO4，1mM MgSO4，2mM CaCl2，5mM葡萄糖，1mM丙磺舒，pH 7.4)中稀释成1∶250，50μL稀释溶液/孔)。所述板以铝箔覆盖并在含5％CO2的环境中于37℃反应1至2小时。反应后清除板中的染料，以KRH缓冲液洗涤细胞一次，再以KRH缓冲液均匀打散细胞。
测定辣椒素EC50 为了测定测试化合物在表达辣椒素受体细胞中激动或拮抗细胞对辣椒素或其他类香草醇激动剂产生的钙迁移反应的能力，首先测定激动剂辣椒素的EC50。于如上所述制备的每一孔的细胞中，另将20μLKRH缓冲液及1μL DMSO。藉由FLIPR仪器将含100μL辣椒素的KRH缓冲液自动转移至每个孔。使用FLUOROSKAN ASCENT(Labsystems；Franklin，MA)或FLIPR(萤光成像阅读仪；Molecular Devices，Sunnyvale，CA)仪器侦测辣椒素介导的钙迁移。将施用激动剂后30秒至60秒之间获得的数据制成8点浓度反应曲线，终点辣椒素浓度为1nM至3μM。使用KALEIDAGRAPH软体(Synergy Software，Reading，PA)，将所述数据应用于方程式 y＝a*(1/(1+(b/x)c)) 以测定刺激所述反应的50％浓度(EC50)。在所述方程式中，y为最大萤光信号，x为激动剂或拮抗剂(在所述实例中为辣椒素)的浓度，a为Emax，b对应于EC50值，c为希尔系数。
测定激动剂活性 将测试化合物溶于DMSO，以KRH缓冲液稀释，直接添加至上述制备的细胞。将100nM辣椒素(约EC90浓度)也添加至同一96孔板中的细胞作为阳性对照。检测孔中测试化合物的最终浓度为0.1nM至5μM。
测试化合物作为辣椒素受体激动剂的能力藉由测量由所述化合物引起的表达辣椒素受体细胞的萤光反应作为化合物浓度的函数。将所述数据应用于上述方程式而获得EC50，所述EC50通常小于1微摩尔，较佳小于100nM，更佳小于10nM。每种测试化合物的效力范围亦藉由计算测试化合物的浓度(通常为1μM)引起的反应相对于100nM辣椒素引起的反应而测定。所述值称为信号百分数(POS)，其藉由下列方程式计算 POS＝100*测试化合物反应/100nM辣椒素反应 所述分析是对作为人辣椒素受体激动剂的测试化合物的能力及效力的定量分析。人辣椒素受体的激动剂通常以小于100μM，或优选小于1μM，或更优选小于10nM的浓度时引起可检测的反应。人辣椒素受体的浓度为1μM时，其效力程度优选为大于30POS，更优选为大于80POS。如下述检测法中藉由当化合物浓度低于4nM，更优选为低于10μM，最优选为低于或等于100μM时没有可检测的拮抗活性证明了某些激动剂实质上没有拮抗活性。
测定拮抗剂活性 将测试化合物溶于DMSO，以20μL KRH缓冲液稀释以使检测孔中测试化合物的最终浓度为1μM至5μM，并添加至上述制备的细胞。将含有制备细胞及测试化合物的96孔板于黑暗处及室温下反应0.5小时至6小时。非常重要的是反应时间不超过6小时。在检测萤光反应之前，将100μL含辣椒素(为上述方法测定EC50的两倍的浓度的辣椒素)的KRH缓冲液藉由FLIPR仪器自动添加至96孔板的每个孔，最终样品体积为200μL，最终辣椒素浓度等于EC50。检测孔中测试化合物的最终浓度为1μM至5μM。与类比对照组相比(即没有测试化合物时以浓度为两倍EC50的辣椒素处理的细胞)，辣椒素受体拮抗剂在浓度为10微摩尔或更少，优选为1微摩尔或更少时使反应减少至少约20％，较优选为至少约50％，最优选为至少约80％。与使用辣椒素而不使用拮抗剂产生的反应相比，造成减少50％时所需拮抗剂的浓度为拮抗剂的IC50，且优选为低于1微摩尔、100纳摩尔、10纳摩尔或1纳摩尔。
所述数据分析如下。首先，将产生自阴性对照孔(无激动剂)的平均最大相对萤光单元(RFU)反应从检测其他每个实验孔所获得的最大反应中减除。其次，计算阳性对照孔(激动剂孔)的平均最大RFU反应。之后，使用下述方程式计算每种测试化合物的抑制百分数 抑制百分数＝100-100×(测试细胞中的峰信号/对照细胞中的峰信号) 将所述抑制％数据绘制成测试化合物浓度的函数，将所述数据使用于例如下列方程式KALEIDAGRAPH软体(Synergy Software，Reading，PA)由资料拟合公式决定测试化合物的IC50 y＝m1*(1/(1+(m2/m0)m3)) 其中，y为抑制百分数，m0为激动剂浓度，m1为最大RFU，m2对应于测试化合物IC50(相应于使检测中使用辣椒素而不使用拮抗剂产生的反应减少50％的拮抗剂的浓度)，m3为希尔系数。或者，使用线性回归测定测试化合物的IC50，其中x为1n(测试化合物的浓度)，y为1n(抑制百分数/(100-抑制百分数))。抑制百分数大于90％或小于15％的数据排除在外且不用于所述回归中。以所述方式计算的IC50为e(-截距/斜率)。
某些优选VR1调节剂为实质上不具有激动活性的拮抗剂，此系藉由于上述检测法中化合物于其浓度低于4nM，较优选为低于10μM，最优选为低于或等于100μM时没有可检测的激动活性所证明。
实施例7 背根神经节(DRG)细胞检测法 所述实施例说明了用于评价化合物的VR1拮抗或激动活性的代表性背根神经节细胞检测法。
DRG以标准方法(Aguayo and White(1992)Brain Research57061-67)自新生大鼠解剖下，将其解离并培养。培养48小时后，洗涤细胞一次，以钙敏感染料Fluo 4AM(2.5至10ug/ml；TefLabs，Austin，TX)反应30分钟至60分钟。再洗涤细胞一次。藉由萤光计中Fluo-4萤光的变化而监测因辣椒素添加至细胞导致细胞内钙浓度的VR1依赖性(VR1-dependent)增加。收集60秒至180秒的数据以测定最大萤光信号。
在拮抗剂检测法中，将多种浓度的化合物添加至细胞中。之后将萤光信号作为化合物浓度的函数绘图以鉴别出能实现辣椒素活化反应的50％抑制的浓度或IC50。燃辣椒素受体拮抗剂的IC50优选为低于1微摩尔、100纳摩尔、10纳摩尔或1纳摩尔。
在激动剂检测法中，将多种浓度的化合物添加至细胞中但不添加辣椒素。为辣椒素受体激动剂的化合物导致细胞内钙浓度的VR1依赖性增加(VR1-dependent increase)，这是藉由萤光计中Fluo-4萤光的变化进行监测。所述EC50或能实现50％的辣椒素活化反应的最大信号的浓度较优选为低于1微摩尔，低于100纳摩尔或低于10纳摩尔。
实施例8 测定疼痛缓解的动物模型 这些实施例说明了评价化合物所提供的疼痛缓解的程度的代表性方法 A.疼痛缓解测试 下列方法可用于评价疼痛缓解 机械性触诱发痛 基本上以Chaplan et al.(1994)J.Neurosci.Methods 5355-63及Taland Eliav(1998)Pain 64(3)511-518所述的方法评价机械性触诱发痛(对无害刺激的异常反应)。将一系列不同硬度(典型地，一个系列8至14条细丝)的凡弗瑞(yon Frey)细丝以刚能够弯曲所述细丝的力应用于后掌的跖面。将所述细丝保持在所述位置不超过3秒或直至所述大鼠产生阳性触诱反应。阳性触诱反应包括抬起受影响的爪子之后立即舔或摇动所述爪子。单个细丝所使用的顺序及频率藉由狄克森上下序贯方法(Dixon up-down method)决定。测试的起点为先使用所述系列的中间细丝，后续细丝可以升幂或降幂依次应用，应用的顺序依由初始细丝引起的是阳性或是阴性反应决定。
如果与未处理的对照组或与以载剂处理的大鼠相比，以所述化合物处理的大鼠需要更高硬度的Von Frey细丝进行刺激以激起阳性触诱反应，则所述化合物能有效的反转或预防机械性触诱发痛类症状。或者，或额外地，对患有慢性疼痛的动物的测试可在其服用化合物之前或之后进行。在所述检测法中，与治疗前引起反应的细丝相比或与同样患有慢性疼痛但未治疗或以载剂治疗的动物相比，有效的化合物导致在治疗后需要更高硬度的的细丝来引起反应。测试化合物在疼痛发作之前或之后投予。当测试化合物在疼痛发作之后投予，在投予后10分钟至3小时进行测试。
机械性痛觉敏感 基本上以Koch et al.(1996)Analgesia 2(3)157-164所述的方法测试机械性痛觉敏感(对疼痛刺激的夸张反应)。将大鼠分别置于装有加热过的多孔金属地板的笼子的单个隔间中。在对任意一个后爪的跖面轻微的刺孔后测定测定后爪撤回的延续时间(即动物在将其爪子放回门上之前举起其爪子的时间)。
如果后爪撤回的延续时间具有统计学上显著的减少，则所述化合物降低了机械性痛觉敏感。测试化合物可在疼痛发作之前或之后投予。当测试化合物在疼痛发作之后投予时，在投予后10分钟至3小时使进行测试。
热敏疼痛 基本上以Hargreaves et al.(1988)Pain.32(1)77-88所述的方法测定热敏疼痛(对有害热刺激的夸张反应)。简而言之，在动物的任意一个后爪的跖面使用持续放热的辐射热源。撤回的时间(即在动物移开其爪子之前的加热时间)，还可称为热阈值或潜伏期，测定动物后爪对热的敏感度。
如果后爪撤回的延续时间具有统计学上显著的增加(即对反应的热阈值或潜伏期增加)，则所述化合物降低了热敏疼痛。测试化合物可在疼痛发作之前或之后投予。当测试化合物在疼痛发作之后投予时，在投予后10分钟至3小时使进行测试。
B.疼痛模型 可使用任意一种下列方法引起疼痛以测试化合物的止痛效力。通常而言，使用雄性SD大鼠及至少一种下列模型，以至少一种前述的测试方法测得本发明化合物使疼痛在统计学上显著的减少。
急性炎症性疼痛模型 基本上以Field et al.(1997)Br.J.Pharmacol.121(8)1513-1522所述的角叉菜胶模型方法引起急性炎症性疼痛。将100至200μL的1％-2％角叉菜胶溶液注射入大鼠后爪中。注射后3小时至4小时，使用上述方法测试动物对热及机械性刺激的敏感度。在测试之前，或在注射角叉菜胶之前，对所述动物投予测试化合物(0.01mg/kg至50mg/kg)。所述化合物可口服投予或通过任意肠胃外途径投予，或在爪子上局部投予。此模型中能够缓解疼痛的化合物使机械性触诱发痛及/或热敏疼痛在统计学上显著的减少。
慢性炎症性疼痛模型 使用一种下列方案引起慢性炎症性疼痛 1.基本上以Bertorelli et al.(1999)Br.J.Pharmacol.128(6)1252-1258及Stein et al.(1998)Pharmacol.Biochem.Behav.31(2)455-51所述的方法，将200μL弗氏完全佐剂(0.1mg热杀的及干燥的结核菌(M.Tuberculosis)注入大鼠的后爪中在爪背面注入100μL，在跖面注入100μL。
2.基本上以Abbadie et al.(1994)J Neurosci.14(10)5865-5871所述的方法，将150μL CFA(1.5mg)注入大鼠的胫骨-跗骨关节。
在任意一个方案中，注射CFA前，从每个试验动物获得其对动物后爪的机械性刺激及热刺激的个别基本敏感度。
注射CFA之后，以上述方法测试大鼠的热敏疼痛、机械性触诱发痛及机械性痛觉敏感。为了确定症状的进展，在注射CFA之后第5天、第6天及第7天测试大鼠。在第7天，以测试化合物、吗啡或载剂治疗动物。1mg/kg-至5mg/kg的吗啡的口服剂量适于用作阳性对照。典型地，测试化合物的剂量为0.01mg/kg至50mg/kg。在测试之前可将化合物以单个大药丸投予或在测试之前每天投予1次、2次或3次并持续几天。所述化合物可口服投予或通过任意肠胃外途径，或对动物局部投予。
结果以最大潜在效力百分数(MPE)代表。0％MPE定义为载剂的止痛作用，100％MPE定义为动物恢复到注射CFA之前的基本敏感度。此模型中缓解疼痛的化合物可得到至少30％MPE。
慢性神经性疼痛模型 基本上以Bennett and Xie(1988)Pain 3387-107所述的方法，对大鼠的坐骨神经使用慢性缩窄性损伤(CCI)以引起慢性神经性疼痛。将大鼠麻醉(如腹腔内投药剂量为50至65mg/kg戊巴比妥并根据需要可增加剂量)。对每个后肢的侧面刮毛并消毒。使用无菌技术，在所述后肢侧面的中长水平处做一切口。将股二头肌直接切开并曝露坐骨神经。在每个动物的一条后肢上，间隔大约1mm-2mm于骨神经周围宽松地缠四条绷带。在另一侧面，所述坐骨神经不绑扎也不进行操作。以连续形态盖上肌肉，并以伤口夹子或缝线缝合皮肤。以上述方法测试大鼠的热敏疼痛、机械性触诱发痛及机械性痛觉敏感。
在测试之前可将化合物以单个大药丸直接投予(0.01至50mg/kg，口服、肠胃外或局部投予)或在测试之前每天投予1次、2次或3次并持续几天，此模型中缓解疼痛的化合物使机械性触诱发痛、机械性痛觉敏感及/或热敏疼痛在统计学上显著的减少。
权利要求
1.一种如下式的化合物或其药学上可接受的盐或水合物
其中，
代表含有1个、2个或3个杂原子的稠合5元或6元杂芳基，所述杂原子独立选自O、N或S，且其余环原子为碳，其中，所述稠合杂芳基经0个至2个独立选自下列的取代基取代(i)氨基或羟基；以及(ii)各自经0个至2个独立选自羟基、氨基、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基的取代基取代的下述基团C1-C6烷基、(C3-C7环烷基)C0-C2烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰氧基、C1-C6烷基磺酰氨基、C1-C6烷酰氨基或单-或二-(C1-C6烷基)氨基；
Ar为6元至10元芳基或5元至10元杂芳基，其各自经0个至4个或0个至3个独立选自卤素、氰基、胺基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基或单-或二-(C1-C6烷基)氨基的取代基取代；以及
Rx为C1-C6烷基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基或C1-C6卤代烷基，其各自经0个至2个独立选自卤素、氰基、氨基、羟基或C1-C6烷基的取代基取代。
2.如权利要求1所述的化合物或其盐或水合物，其中，所述化合物如下述结构所示
其中，X为N或CH；以及
R1代表0个至3个独立选自卤素、氰基、氨基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、(C3-C7环烷基)C0-C4烷基或单-或二-(C1-C6烷基)氨基的取代基。
3.如权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐或水合物，其中，
为经0个至2个独立选自C1-C4烷基、(C3-C5环烷基)C0-C2烷基或C1-C4卤代烷基的取代基取代的5元杂芳基。
4.如权利要求3所述的化合物或其盐或水合物，其中，
为
或
其中，R2为氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基或(C3-C5环烷基)C0-C2烷基。
5.如权利要求1或权利要求2所述的化合物或其盐或水合物，其中，
为经0个至2个独立选自羟基、C1-C4烷基、(C3-C5环烷基)C0-C2烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4羟烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4卤代烷氧基的取代基取代的6元杂芳基。
6.如权利要求5所述的化合物或其盐或水合物，其中，
为
其中，R4代表0个至3个独立选自羟基、C1-C4烷基、(C3-C5环烷基)C0-C2烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4羟烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4卤代烷氧基的取代基。
7.如权利要求1至6中任一项所述的化合物或其盐或水合物，其中，R1代表1个至3个独立选自卤素、氰基、C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基的取代基。
8.如权利要求7所述的化合物或其盐或水合物，其中，一个由R1代表的取代基为位于对位的卤素或氰基。
9.如权利要求1至8中任一项所述的化合物或其盐或水合物，其中，R1代表仅一个取代基。
10.如权利要求9所述的化合物或其盐或水合物，其中，所述化合物如下述结构所示
其中
R2为氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基或C3-C5环烷基；
R3为卤素、氰基、C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基；以及
R4代表0个至2个独立选自C1-C4烷基、(C3-C5环烷基)C0-C2烷基或C1-C4卤代烷基的取代基。
11.如权利要求10所述的化合物或其盐或水合物，其中，R3为卤素或CN。
12.如权利要求1至11中任一项所述的化合物或其盐或水合物，其中，Rx为C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基。
13.如权利要求12所述的化合物或其盐或水合物，其中，Rx为甲基、乙基、异丙基、叔丁基、二氟甲基或三氟甲基。
14.如权利要求1所述的化合物或其盐或水合物，其中，所述化合物为
1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氟苯基)-9-甲基-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
3-(4-氟苯基)-7-甲基-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
3-(4-氯苯基)-7-甲基-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
9-环丙基-1-(4-氟苯基)-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
4-{9-甲基-6-氧代-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-6，9-二氢-1H-嘌呤-1-基}苯甲腈；
1-(4-氯苯基)-9-环丙基-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
9-乙基-1-(4-氟苯基)-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
6-(4-氯苯基)-5-[顺-4-(三氟甲基)环己基][1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-7(6H)-酮；
3-(4-氯苯基)-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
3-(6-氯吡啶-3-基)-7-甲基-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
1-(4-氯苯基)-9-乙基-2-(顺-4-异丙基环己基)-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
4-{9-乙基-6-氧代-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-6，9-二氢-1H-嘌呤-1-基}苯甲腈；
1-(6-氯吡啶-3-基)-9-乙基-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
4-{4-氧代-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]吡啶并[3，2-d]嘧啶-3(4H)-基}苯甲腈；
3-(4-氟苯基)-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
9-乙基-1-(6-甲基吡啶-3-基)-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
9-乙基-1-(6-氰基吡啶-3-基)-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
3-(6-氯吡啶-3-基)-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
1-(4-氯苯基)-9-乙基-8-(甲基氨基)-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
5-{4-氧代-2-[顺-4-(三氟甲基)环己基]吡啶并[3，2-d]嘧啶-3(4H)-基}吡啶-2-腈；
1-(苯并[d]噻唑-6-基)-9-甲基-2-((1s，4s)-4-(三氟甲基)环己基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮；或
3-(苯并[d]噻唑-6-基)-2-((1s，4s)-4-(三氟甲基)环己基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮。
15.如权利要求1至14中任一项所述的化合物或其盐或水合物，其中，所述化合物在辣椒素受体激动作用的体外检测中没有可检测到的激动活性。
16.如权利要求1至15中任一项所述的化合物或其盐或水合物，其中，所述化合物于辣椒素受体钙迁移检测法的IC50值为1微摩尔或以下。
17.一种药物组合物，所述药物组合物包括与一种生理上可接受的载体或赋形剂组合的至少一种如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物。
18.如权利要求17的药物组合物，其中，所述组合物配制成注射液、喷雾剂、霜、口服液、片剂、凝胶、药丸、胶囊、糖浆或透皮贴剂。
19.一种减少细胞辣椒素受体的钙传导的方法，所述方法包括将表达辣椒素受体的细胞与至少一种如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物接触，由此减少所述辣椒素受体的钙传导。
20.如权利要求19所述的方法，其中，所述细胞在动物体内接触。
21.如权利要求20所述的方法，其中，所述细胞为神经元细胞。
22.如权利要求20所述的方法，其中，所述细胞为尿道上皮细胞。
23.如权利要求20所述的方法，其中，于接触期间，所述的化合物或其盐或水合物出现在所述动物的体液内。
24.如权利要求20所述的方法，其中，所述动物为人。
25.如权利要求20所述的方法，其中，所述化合物是经口投予。
26.一种抑制类香草醇配体与辣椒素受体于体外结合的方法，所述方法包括在足以可检测地抑制类香草醇配体与辣椒素受体结合的条件与量下，将至少一种如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物与所述辣椒素受体接触。
27.一种于患者体内抑制类香草醇配体与辣椒素受体结合的方法，所述方法包括以于体外足以可检测地抑制类香草醇配体与表达克隆辣椒素受体的细胞结合的量将至少一种如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物与表达所述辣椒素受体的细胞接触，由此抑制类香草醇配体与辣椒素受体于患者体内结合。
28.如权利要求27所述的方法，其中，所述患者为人。
29.一种治疗患者体内对辣椒素受体调节产生反应的病症的方法，所述方法包括对所述患者投予治疗上有效量的至少一种如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物，由此缓解所述患者的所述病症。
30.如权利要求29所述的方法，其中，所述患者遭受(i)曝露于辣椒素，(ii)曝露于热引起的灼烧或刺激，(iii)曝露于光引起的灼烧或刺激，(iv)曝露于催泪瓦斯、传染剂、大气污染物或胡椒喷雾引起的灼烧、支气管收缩或刺激，或(v)曝露于酸引起的灼烧或刺激。
31.如权利要求29所述的方法，其中，所述病症为哮喘或慢性肺阻塞性疾病。
32.一种治疗患者疼痛的方法，所述方法包括对遭受疼痛的患者投予治疗上有效量的至少一种如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物，由此缓解所述患者的所述疼痛。
33.如权利要求32所述的方法，其中，所述患者遭受神经性疼痛。
34.如权利要求32所述的方法，其中，所述疼痛与选自下列的病症有关
乳房切除术后疼痛综合征、残端痛、幻肢痛、口部神经性疼痛、牙痛、带状疱疹后遗神经痛、糖尿病性神经病、反射性交感神经性营养不良、三叉神经痛、骨关节炎、风湿性关节炎、纤维肌痛、格林-巴利综合征、感觉异常性股痛、灼口综合征、双边外周神经痛、灼性神经痛、神经炎、神经元炎、神经痛、与AIDS有关的神经痛、与MS有关的神经痛、脊髓损伤有关的疼痛、与手术有关的疼痛、肌骨胳疼痛、背痛、头痛、偏头痛、咽喉痛、分娩疼痛、痔疮、消化不良、夏科氏疼痛、涨气、月经、癌、接触毒液、肠道易激综合症、炎性肠病或外伤。
35.如权利要求32所述的方法，其中，所述患者为人。
36.一种治疗患者疼痛的方法，所述方法包括对遭受疼痛的患者投予治疗上有效量的(i)至少一种如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物及(ii)布洛芬的组合，由此缓解所述患者的所述疼痛。
37.一种治疗患者瘙痒的方法，所述方包括对患者投予治疗上有效量的如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物，由此缓解所述患者的所述瘙痒。
38.一种治疗患者咳嗽或打嗝的方法，所述方法包括对患者投予治疗上有效量的如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物，由此缓解所述患者的所述咳嗽或打嗝。
39.一种治疗患者尿失禁或膀胱过动症的方法，所述方法包括对患者投予治疗上有效量的如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物，由此缓解所述患者的所述尿失禁或膀胱过动症。
40.一种治疗患者绝经症状的方法，所述方法包括对患者投予治疗上有效量的如权利要求1至16中任一项所述的化合物或盐或水合物，由此缓解所述患者的所述绝经症状。
41.一种加快肥胖患者减肥的方法，所述方法包括对患者投予治疗上有效量的如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物，由此促进所述患者减肥。
42.如权利要求1所述的化合物或其盐或水合物，其中，所述化合物经放射性标记。
43.一种测定样品中是否存在辣椒素受体的方法，所述方法包括下列步骤
(a)将样本与如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物在允许该化合物与辣椒素受体结合的条件下接触；以及
(b)测定用以指示与辣椒素受体结合的该化合物或其盐或水合物的水平的信号，由此测定所述样品中是否存在所述辣椒素受体。
44.如权利要求43所述的方法，其中，所述化合物或其盐或水合物经放射性标记，并且其中所述测定步骤包括下述步骤
(i)分离未结合化合物与已结合化合物；以及
(ii)测定所述样品中是否存在已结合的放射性标记。
45.一种包装的药物制剂，所述药物制剂包括
(a)在容器中的如权利要求17所述的药物组合物；以及
(b)使用所述药物组合物治疗疼痛的说明书。
46.一种包装的药物制剂，所述药物制剂包括
(a)在容器中的如权利要求17所述的药物组合物；以及
(b)使用所述药物组合物治疗咳嗽或打嗝的说明书。
47.一种包装的药物制剂，所述药物制剂包括
(a)在容器中的如权利要求17所述的药物组合物；以及
(b)使用所述药物组合物治疗肥胖的说明书。
48.一种包装的药物制剂，所述药物制剂包括
(a)在容器中的如权利要求17所述的药物组合物；以及
(b)使用所述药物组合物治疗尿失禁或膀胱过动症的说明书。
49.一种如权利要求1至16中任一项所述的化合物或其盐或水合物在制备治疗对辣椒素受体调节产生反应的病症的药物中的用途。
50.如权利要求49所述的用途，其中该病症为疼痛；哮喘；慢性肺阻塞性疾病；咳嗽；打嗝；肥胖；尿失禁；膀胱过动症；绝经病症；曝露于辣椒素；曝露于热引起的灼烧或刺激；曝露于光引起的灼烧或刺激；曝露于催泪瓦斯、传染剂、大气污染物或胡椒喷雾引起的灼烧、支气管收缩或刺激；或曝露于酸引起的灼烧或刺激。
全文摘要
本发明提供如式(I)所示的顺式环己基取代的嘧啶酮衍生物，其中各变数如文中所述。此类化合物是可用于体内或体外调节特定受体的活性的配体，其尤其适用于治疗与人类、宠物及家畜的病理性受体活化相关的病症。本发明还提供使用所述化合物治疗所述病症的药物组合物及病症方法，以及将所述配体用于受体定位研究的方法。
文档编号A61P13/00GK101558069SQ200780046131
公开日2009年10月14日 申请日期2007年11月5日 优先权日2006年11月6日
发明者C·A·布卢姆, M·戈什, I·马丁内斯, X·张, X·郑 申请人:神经能质公司