专利名称：：来自高丽参的黑色素生物合成抑制剂及含有该抑制剂的化妆品组合物用于皮肤增白的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及使用酸、碱、酶或产生所述酶的微生物从人参提取物中获得的人参皂苷Fl的用途，以及含有该人参皂苷Fl的用于皮肤增白的化妆品组合物。
背景技术：
：决定人的肤色的因素有多种，在这些因素中，诸如人体内的产生黑色素的黑素细胞的活性、血管的分布、皮肤的厚度以及存在或不存在色素(例如，类胡萝卜素、胆红素等)等因素具有重要作用。它们中最重要的因素是通过人体黑素细胞中的各种酶(例如，酪氨酸酶)的活动而产生的黑色素。黑色素的形成受到遗传因素、激素分泌、与应激有关的生理因素以及环境因素(例如，紫外(UV)光照射)的影响。人皮肤上的黑色素细胞中产生的黑色素是一种具有黑色素与蛋白质的络合物的酚系聚合物。黑色素阻断太阳紫外射线，从而保护真皮下面的皮肤器官，同时，黑色素清除皮肤组织中产生的游离自由基从而保护皮肤中的蛋白质和基因。但是，由皮肤中的内部或外部应激刺激产生的黑色素是一种稳定的物质，即使在应激消失后也不会被除去，直到通过皮肤角化作用才能被释放到外界。因此，如果产生了不必要的大量的黑色素就会出现有损美丽的色素过度沉着(hyperpigmentation)，例如变色、雀斑和斑点。随着休闲人群的增加，喜欢户外活动的人越来越多，因此防止由UV光引起的黑色素沉着的需求也在增多。为了满足这一需求，已经在化妆品或医疗药物中使用了抗坏血酸、曲酸、熊果苷(albutin)、对苯二酚、谷胱甘肽、或它们的衍生物，或者具有酪氨酸酶抑制活性的物质。但是，由于增白效果不充分以及其他的问题(例如，将上述物质添加到化妆品中所带来的皮肤安全问题、配方和稳定性问题)使这些物质的使用受到了限制。
发明内容因此，本发明的发明人进行了大量研究来制备增白化妆品组合物，该增白化妆品组合物源自天然产生的物质，对皮肤安全，同时还具有优异的增白效果和优异的产品稳定性。结果，本发明的发明人发现，通过使植物提取物(特别是人参提取物)与酸、碱或酶进行反应而获得的人参皂苷Fl具有优异的减少黑色素生物合成的效果，从而完成了本发明。因此，本发明的一个目的在于检验人参皂苷Fl的黑色素生物合成抑制效果，该人参皂苷Fl是通过使植物提取物与酸、碱或酶进行反应而得到的，本发明还提供了具有优异的增白效果的化妆品和治疗组合物。本发明提供了由下式1表示的人参皂苷Fl以及含有该人参皂苷Fl的用于皮肤增白的化妆品组合物的用途。[式1]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>下面将对本发明进行详细的描述。人参皂苷Fl是由植物提取物获得的。具体来说，本发明的化妆品组合物中含有的人参皂苷Fl获得自人参、红参、白参、鲜人参、参须(ginsengtail)、人参叶或人参果。可以以下方式来制备用于本发明的提取物。向植物中添加有机溶剂，该有机溶剂的量约为所述植物的重量的1-6倍，优选约3倍，通过在室温下对所述植物进行1-5次萃取而将该植物脱脂。向脱脂后的植物中添加有机溶剂，该有机溶剂的量约为所述脱脂后的植物的重量的1-8倍，优选约4倍，并在回流下对所述脱脂后的植物进行1-5次提取。将提取物在10-20°C下培养1-3天，然后通过过滤和离心将该提取物分离成残渣和滤液。分离出的滤液在减压下进行浓缩，并将浓缩物悬浮在水中，随后用例如乙醇进行处理以除去其中的色素。接下来，用有机溶剂对水层进行1-5次萃取，然后，获得的有机溶剂层在减压下进行浓缩，从而获得有机溶剂提取物。将所述有机溶剂提取物溶解在少量的甲醇等中，然后向其中加入大量的乙酸乙酯。将生成的沉淀物干燥，从而得到本发明的提取物。本发明所使用的有机溶剂优选为选自由无水甲醇、水合甲醇(hydratedmethanol)、无水乙醇和水合乙醇所组成的组中的一种溶剂，或者上述甲醇中的一种与上述乙醇中的一种的混合溶剂。利用酸、碱、酶或产生所述酶的微生物对所述提取物进行水解，从而制得人参皂苷Fl0使用酸时，所述酸可以是选自由盐酸、硫酸和硝酸所组成的组中的至少一种酸，或者是上述酸与选自由乙醇、甲醇和丁醇所组成的组中的至少一种醇的混合物。酸_醇混合物中使用的醇优选为50%的乙醇。向所述提取物中加入0.1-2N的酸溶液(优选IN的酸溶液)或酸-醇混合物，然后通过在50-100°C(优选80°C)的温度下，在水浴中加热回流而使该提取物进行0.5-2小时的水解。使用碱时，所述碱可以是选自由氢氧化钠和氢氧化钾所组成的组中的至少一种碱，或者是所述碱与选自由乙醇、甲醇和丁醇所组成的组中的至少一种醇的混合物。碱_醇混合物中使用的醇优选为50%的丁醇。向所述提取物中加入0.1-2N的碱溶液(优选IN的碱溶液)或酸-醇混合物，然后通过在50-100°C(优选100°C)的温度下，在水浴中加热回流而使该提取物进行1-12小时的水解。使用酶时，所述酶可以是选自由β-葡萄糖苷酶、α，β-阿拉伯糖苷酶(α，β-arabinosidase)、α，β-鼠李糖苷酶、β-葡萄糖苷酸酶、β-半乳糖苷酶和淀粉葡萄糖苷酶所组成的组中的至少一种。将所述提取物溶解于5-20倍体积(优选约10倍体积)的酸性缓冲溶液中，接着加入酶。然后，在约37°C下，在水浴中将该提取物搅拌约1-60小时，同时通过薄层色谱法来检测底物的消除速率。底物被完全耗尽后，在80-100°C下，在热水中将所述提取物加热5-15分钟。接着，使水解反应终止并收集反应溶液。当使用微生物时，所述微生物可以是产生所述酶的微生物。更具体的说，所述微生物可以选自由曲霉属(aspergillussp.)、芽孢杆菌属(bacillussp.)、青霉属(peniciIliumsp·)、根霉属(rhizopussp·)、根毛霉属(rhizomucorsp·)、篮状菌属(talaromycessp.)、双歧杆菌属(bifidobacteriumsp.)、被抱霉属(mortierellasp.)、隐球菌属(Cryptococcussp.)、微杆菌属(microbacteriumsp.)等所组成的组。将所述提取物溶解于5-10倍体积(优选约10倍体积)的离子水(ionizedwater)中，接着在121°C下进行30分钟的灭菌，继而冷却至30°C。将预先培养的微生物接种到提取物溶液中，并在30°C下培养2-5天，以所述提取物溶液的重量为基准，所述预先培养的微生物的接种量为5-10重量％。然后，利用薄层色谱法检测底物的清除率(scavengingrate)，当底物被完全耗尽时，反应完成，以5，000-10,000转/分(rpm)对反应溶液进行离心。用蒸馏水将收集的沉淀物洗涤3次，从而获得沉淀物。如上所述，使用酸、碱、酶或产生所述酶的微生物进行水解反应之后，在减压下将反应溶液浓缩以除去溶剂。向残渣中加入选自由甲醇、乙醇和丁醇所组成的组中的醇，并将该溶解搅拌1-5次。然后，通过过滤除去沉淀出来的盐，将滤液在减压下进行浓缩，从而获得人参皂苷Fl。本发明的增白化妆品组合物中含有的所述人参皂苷Fl的量为该组合物总重量的0.0001-10重量％。若人参皂苷Fl的含量低于0.0001重量％，则无法提供增白等效果，而若人参皂苷Fl的含量超过10重量％，则含量的增加不会带来效果的提高。本发明的增白化妆品组合物抑制了由UV光或炎症所诱导的皮肤黑色素的产生并改善了色素沉着。对本发明的增白化妆品组合物的剂型没有特别的限制，可以将本发明的组合物配制成化妆产品，例如润肤液(skinlotion)、收敛洗液(astringentlotion)、乳液(milklotion)、营养霜(nourishingcream)、按摩霜(massagecream)、精华素(essence)、目艮霜(eyecream)、目艮部精华素(eyeessence)、i青洁霜(cleansingcream)、i青洁泡沫(cleansingfoam)、清洁水(cleansingwater)、美容涂敷剂(pack)、粉剂(powder)、润体液(bodylotion)、体霜(bodycream)、身体调和油(bodyoil)和护体精华素(bodyessence)。本发明提供的来源于人参的人参皂苷Fl(20-0-β-D-吡喃葡糖基_20(S)-原人参三醇(20-0-β-D-glucopyranosyl-20(S)-protopanaxatriol))具有抑制黑色素产生并改善色素沉着的效果。由于具有上述效果，在用来抑制黑色素产生并改善由UV光引起的色素沉着的化妆品组合物中使用人参皂苷Fl(20-0-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参三醇)是有利的。具体实施例方式下面结合实施例和测试例对本发明进行更为详细的描述，但本发明的范围不仅限于这些实施例。参考例1人参提取物的制备将2kg的人参添加到4L的甲醇水溶液中，并在回流下提取3次，然后在15°C下培养一天。接着，用滤布过滤并离心，将提取后的植物分离成为残渣和滤液，并将滤液在减压下浓缩。将浓缩物悬浮在水中，然后用IL的乙醇萃取5次以除去其中的色素，水层用500mL的1-丁醇萃取3次。将获得的全部的1-丁醇层在减压下进行浓缩，从而得到1-丁醇提取物，随后将该1-丁醇提取物溶解在少量的甲醇中，并添加到大量的乙酸乙酯中。将产生的沉淀干燥，获得IOOg的人参提取物。实施例1通过酸水解制备人参皂苷Fl将IOg参考例1得到的人参提取物添加到20倍体积(体积/重量)的IN的HCl-50%的甲醇溶液(体积/体积)中，并通过在80°C下，在水浴中加热回流8小时而进行水解。然后，将反应溶液在减压下进行浓缩以除去溶剂，将残渣添加到200mL的乙醇中并搅拌3次。接着通过过滤除去沉淀出来的盐，并将滤液在减压下进行浓缩，由此得到粗产品。将粗产品用硅胶柱色谱法(氯仿甲醇=81-41)进行纯化，由此获得1.25g的人参皂苷F1。实施例2通过碱水解制备人参皂苷Fl将IOg参考例1得到的人参提取物溶解于500mL干燥的吡啶中，并向其中加入IOg甲醇钠粉末。然后，通过在水浴中加热回流8小时而进行水解，将反应溶液在减压下进行浓缩以除去溶剂。将残渣添加到200mL的乙醇中并搅拌3次。通过过滤除去沉淀出来的盐。将滤液在减压下进行浓缩，由此得到粗产品。将粗产品用硅胶柱色谱法(氯仿甲醇=8:1-4:1)进行纯化，由此获得0.85g的人参皂苷F1。实施例3通过酶水解制备人参皂苷Fl将IOg参考例1得到的人参提取物溶解于IOOmL0.IM的乙酸溶液(pH4.5)中，并加入2.5g的酶(0.5g的橘皮苷酶、0.5g的柚皮苷酶、0.5g的纤维素酶(cellulose)、0.2g的β-葡萄糖苷酸酶和0.3g的淀粉葡萄糖苷酶，Sigma制造)。然后，将溶液在37°C下在水浴中搅拌48小时，并在80-100°C下在热水中加热10分钟。反应完成之后，将反应溶液在减压下进行浓缩以除去溶剂。将残渣添加到200mL的乙醇中并搅拌3次。通过过滤除去沉淀物，并将滤液在减压下进行浓缩，由此得到粗产品。将粗产品用硅胶柱色谱法(氯仿甲醇=81-41)进行纯化，由此获得0.91g的人参皂苷F1。实施例4利用微生物制备人参皂苷Fl将IOg参考例1得到的人参提取物溶解于IOOmL的离子水中，并在121°C下进行30分钟的灭菌，继而冷却至30°C。然后，将预先培养的黑曲霉(Aspergillusniger)KCCM11885接种到提取物溶液中，并在30°C下培养5天，以所述提取物溶液的重量为基准，所述预先培养的黑曲霉KCCM11885的接种量为5-10重量％。然后，通过薄层色谱法检测底物的消除率，当底物被完全耗尽时，反应完成。将培养物以5，000-10，OOOrpm进行离心，将收集的沉淀物用蒸馏水洗涤3次，然后进行离心收集作为沉淀物的反应溶液。接着，将沉淀物加入到200mL的乙醇中并搅拌3次。然后，通过过滤除去沉淀物，并将滤液在减压下进行浓缩，由此得到粗产品。将粗产品用硅胶柱色谱法(氯仿甲醇=81-41)进行纯化，由此获得0.62g的人参皂苷。测试例1用鼠类黑素细胞来检测黑饩素产生抑制效果在37°C和5%CO2的条件下，将来自C57BL/6小鼠的鼠类黑素细胞(Mel-Ab细胞)在DMEM(达尔伯克氏改良伊格尔培养基(Dulbecco'smodifiedEagle，smedia))中进行培养，所述DMEM含有10%的胎牛血清、IOOnM的2_0_十四烷酰佛波醋酸酯-13(2-0-tetradecanoyphorbol-13-acetate)和InM的霍乱毒素。用0.25%的胰蛋白酶-EDTA来消化(detach)经过培养的Mel-Ab细胞，并在24孔板中以IO5个细胞/孔的浓度进行培养。从开始培养之后的第2天起，将IOppm的各种测试物质(曲酸，参考例1和实施例1-4)添加到培养中的细胞中再培养3天。在此，曲酸作为对照组以检测本发明的人参皂苷Fl的黑色素产生抑制效果。移除培养基，用PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤细胞，并用IN的氢氧化钠溶解(Iyse)。检测细胞在400nm处的吸光度，然后根据下列的公式1来计算各个测试样品的黑色素产生抑制率(％)。计算结果列于下表1中(多利法(Dooleymethod))。[公式1]黑色素产生抑制率(％)=100_(各个测试样品的吸光度/对照组的吸光度χ100)表1黑色素产生抑制效果^测试样品黑色素产生抑制率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>如上表1所示，与现有的增白剂曲酸相比，根据本发明的人参皂苷Fl表现出优异的黑色素产生抑制率(％)。此外，可以看到，从人参提取物中通过水解方法制备的人参皂苷Fl之间的黑色素产生抑制率(％)几乎相同。测试例2对人体皮肤的增白效果的测试将具有直径为1.5cm的穿孔的不透明胶带粘附到12位健康男性的上臂上。然后，用UV射线(UVB)对每位受试者进行照射，照射的剂量比最小红斑剂量高1.5-2倍，从而使皮肤变黑。用UV进行照射之后，将1重量％的各个测试样品溶液(使用1，3_丁二醇乙醇=73作为赋形剂)施敷到每位受试者的皮肤上。将3重量％的曲酸和赋形剂溶液分别施敷到每位受试者的皮肤上，作为阴性对照组和阳性对照组。对照组不施敷任何东西，并对受试者的皮肤状态改变进行持续10周的观察。每隔一周用比色计(Minolta，日本)检测皮肤的颜色。然后，根据下列公式2计算各个样品的施敷时间点与施敷结束的时间点之间的肤色差值(ΔL*)，并且计算结果列于下表2中。同时，通过将施敷了各个样品的部位与对照部位之间的进行比较来评估增白效果。在该评估中，△L*的值约为2表示色素沉着得到了明显的改善，ΔL*值高于1.5说明该样品具有增白效果。[公式2]ΔL*=施敷结束时的L*值一开始施敷时的L*值表2对人体皮肤的增白效果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由上表2中可以看出，根据本发明的人参皂苷Fl的ΔL*值高于1.6，说明该人参皂苷Fl具有优异的增白效果。此外还可以看出，与已知具有优异的增白效果的曲酸相比，根据本发明的人参皂苷Fl具有优异的增白效果。工业实用性如上所述，提取自人参的人参皂苷Fl具有优异的抑制黑色素产生以及改善由UV光引起的色素沉着的效果。因此，本发明提供了一种化妆品组合物，该化妆品组合物含有人参皂苷Fl作为活性成分，从而具有优异的增白效果。权利要求人参皂苷F1(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参三醇)在皮肤增白中的用途。2.一种化妆品组合物在皮肤增白中的用途，该组合物含有人参皂苷Fl(20-0-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参三醇)作为活性成分。3.根据权利要求2所述的用途，其中，以所述组合物的总重量为基准，所述人参皂苷Fl的含量为0.0001-10重量％。4.根据权利要求1或2所述的用途，其中，含有人参皂苷Fl(20-0-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参三醇)的所述组合物获得自人参、红参、白参、鲜人参、参须、人参叶或人参果的提取物。5.根据权利要求4所述的用途，其中，所述人参皂苷Fl是通过使所述提取物与酸、碱、酶或产生所述酶的微生物进行反应而得到的。6.根据权利要求5所述的用途，其中，所述酸为选自由盐酸、硫酸和硝酸所组成的组中的至少一种，或者为所述酸与选自由乙醇、甲醇和丁醇所组成的组中的至少一种醇的混合物。7.根据权利要求5所述的用途，其中，所述碱为选自由氢氧化钠和氢氧化钾所组成的组中的至少一种碱，或者为所述碱与选自由乙醇、甲醇和丁醇所组成的组中的至少一种醇的混合物。8.根据权利要求5所述的用途，其中，所述酶为选自由葡萄糖苷酶、α，阿拉伯糖苷酶、α，β-鼠李糖苷酶、β-葡萄糖苷酸酶、β-半乳糖苷酶和淀粉葡萄糖苷酶所组成的组中的至少一种。9.根据权利要求5所述的用途，其中，所述微生物为选自由曲霉属(aspergillussp.)、芽孢杆菌属(bacillussp.)、青霉属(penicilliumsp.)、根霉属(rhizopussp.)、根毛霉属(rhizomucorsp·)、篮状菌属(talaromycessp·)、双歧杆菌属(bifidobacteriumsp.)、被孢霉属(mortierellasp.)、隐球菌属(Cryptococcussp.)、禾口微杆菌属(microbacteriumsp.)所组成的组中的至少一种。10.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述组合物抑制黑色素的产生。11.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述组合物改善由UV光造成的色素沉着。全文摘要本文公开了一种含有源自植物的人参皂苷F1(20-O-β-D-吡喃葡糖基-20(S)-原人参三醇)作为活性成分的增白化妆品组合物。更具体地说，所述人参皂苷F1是通过使用酸、碱、酶或微生物由人参提取物获得的，而且含有该人参皂苷F1的增白化妆品组合物具有优异的抑制黑色素生物合成的效果，从而提供优异的皮肤增白效果。文档编号A61P17/18GK101820854SQ200780101086公开日2010年9月1日申请日期2007年10月31日优先权日2007年10月31日发明者姜炳永,安秀美,张利燮,朴惠胤,朴葰星,李真锳,金德熙,金银珠申请人:株式会社太平洋