专利名称：：毛萼乙素衍生物,其制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用的制作方法
技术领域：
：:本发明涉及结构式(I)的毛萼乙素衍生物，其制备方法，以该类衍生物为活性成分的药物组合物，以及它们在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
：癌症是当今世界各国的主要死亡原因。随着全世界人口和寿命的增长，同时由于环境的持续恶化，癌症发病率和死亡率一直逐年持续上升。我国平均每90个家庭就有一个癌症患者，肿瘤死亡分别占我国城市和农村死因的第一位和第二位。目前临床使用的抗癌药物大多只能是使病情得到一定缓解，对胃、肝、肺、食管、结肠、乳腺、宫颈等常见的恶性肿瘤依然缺乏有效的抗癌药物。化疗药物虽然有一定疗效，但由于其较大的毒副作用而给患者带来了巨大的肉体和精神上的痛苦，因此临床上急需毒副作用相对较小而疗效确切的抗肿瘤药物。充分利用中国中草药资源，以其有效成分为先导化合物进行结构改造和结构优化，设计合成具有更强生物活性的化合物，是寻找新型抗肿瘤药物的一条有效途径。天然产物中分离得到的毛萼乙素已经显示出了较广的抗肿瘤活性(见中国专利申请公开号CN1424028A，申请号02134163，X;公开号CN1868468A，申请号200510110089.8)。.文献报道(Euro.JMed.Chem.，42(2007),494-502)过对毛萼乙素结构的水溶性改造，但其活性大为降低。因此对其进行脂溶性结构改造和结构优化，寻找更强抗肿瘤活性的化合物是非常必要的。迄今，现在技术中未见有本发明毛萼乙素衍生物的报道。
发明内容本发明的目的是提供一种具有结构式(I)的毛萼乙素衍生物，其制备方法，以及上述化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明的目的是通过以下技术方法来实现的:下述结构式(I)的毛萼乙素衍生物(I)其中n-1-8，R=C2H5，isopropyl(异丙基)。毛萼乙素衍生物的制备方法，取毛萼乙素、卤代烃、银盐，以摩尔比为1:1-16:1-4，在有机溶剂中，0°C-室温，反应10小时-7天，得式(I)化合物，所用的卤代烃为氯或溴或碘代烃；银盐为三氟甲垸磺酸银(AgOTf)或三氟甲垸磺酸银(AgOTf)或碳酸银(Ag2C03)或氧化银(Ag20)及其混合物；有机溶剂为二氯甲烷或苯或甲苯或正己垸。毛萼乙素衍生物的另一种制备方法，在有机溶剂中，毛萼乙素与酸作用得到结构式为II的化合物，此化合物再在银盐的作用下与卤代烃反应，得式(I)化合物，所用的有机溶剂为二氯甲垸或四氢呋喃或1,3-二氧六环或苯或甲苯或正己垸；酸为三氟甲烷磺酸或乙酸或对甲苯磺酸或稀盐酸；银盐为三氟甲垸磺酸银(AgOTf)或碳酸银(Ag2C03)或氧化银(Ag20)及其混合物；卤代烃为氯或溴或碘代烃。毛萼乙素衍生物的再一种制备方法，结构式为(III)的化合物、碱，在室温-回流条件下与卣代烃反应得式(I)化合物；所述有机溶剂为四氢呋喃或1,3-二氧六环或苯或甲苯或正己烷；碱为氢化钠或氢化钾或氢氧化钠或氢氧化钾或叔丁醇钾；卤代烃为氯或溴或碘代烃。上述制备方法中，卤代径为碘代烃，酸为三氟甲烷磺酸。本发明的用于治疗癌症的药物组合物，其中含有式(I)化合物和药学上可接受的载体。本发明化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明药物组合物中所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯垸酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；.吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、以及和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。本发明化合物可以组合物的形式通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其他液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。优选的形式是片剂、胶囊和注射剂。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。本发明的药物组合物优选含有重量比为0.1°/『99.5%的活性成分，最优选含有重量比为0.5%~95%的活性成分。本发明化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01~10mg/kg体重，优选0.15mg/kg体重。可以一次或多次施用。具有结构式(I)的毛萼乙素衍生物的制备采用下述三种方法方法1:在有机溶剂中，室温和避光条件下，毛萼乙素、卤代烃、银盐按l:l-16:l-4的摩尔比反应10小时-7天。所述的有机溶剂可以是二氯甲烷、苯、甲苯，正己烷等。卤代烃可以是氯、溴、碘代烃，优先采用碘代烃。银盐可以是三氟甲磺酸银或者是三氟甲磺酸银(AgOTf)与碳酸银(AgC03)，氧化银(AgO)的混合物。方法2:在有机溶剂中，毛萼乙素与酸作用得到结构式为^OH的化合物，此化合物再在银盐作用下与卤代烃反应。所述有机溶剂可以是二氯甲烷，四氢呋喃，1,3-二氧六环，苯，甲苯，正己烷等。酸为三氟甲垸磺酸，乙酸，对甲苯磺酸，稀盐酸等，优先采用三氟甲烷磺酸。银盐可以是三氟甲烷磺酸银(AgOTf)，碳酸银(Ag2C03)，氧化银(Ag20)及其混合物。卤代烃可以是氯、溴、碘代烃，优先采用碘代烃。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>方法3:结构式为'一-OH的化合物在碱的作用下与卤代烃反应。所述有机溶剂可以是四氢呋喃，1,3-二氧六环，苯，甲苯，正己垸等，碱可以是氢化钠，氢化钾，氢氧化钠，氢氧化钾，叔丁醇钾等，卤代烃可以是氯、溴、碘代烃，优先采用碘代烃。具体实施例方式下列实施例是本发明方法的举例说明而不是对其进行限制。对本领域技术人员显而易见的多种条件和参数的其他修改和适应性改变，包含在本发明的实质和范围内。实施例1:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>取毛萼乙素(EriocalxinB)0.05mmol，溶于3mL四氢呋喃中，加入5mLIN的盐酸，室温搅拌反应。TLC跟踪反应原料消失后，加入水10mL，乙酸乙酯(3x5mL)萃取。合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤、浓縮得粗品。粗品经过硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=5:1(v/v)]，得目标产物-EriocalinA。相关的测试数据如下EriocalinA:[《=-220.00(C=0.075inCHC13);!H-NMR(300MHz,CDCl3):5=6.10(1H,s),5.39(1H,s),4.69(1H,d,J=9.54Hz)，4.57(1H,d,J=11.7Hz),4.12(IH,d,J=9,6Hz),3.73(2H,br),3.13(IH,br),2.83(1H，d,J=8.1Hz),2.71-2.68(2H,m),2.09(IH,d,J=11.7Hz),1.98-1.56(6H,m),1.50(3H,s),1.09(3H,s)卯m;13C-NMR(75MHz,CDCl3):5=207.66,206.83,200.11,146.99,117.46,77.00,71.34,61.50,59.20,51.96,50.68,41.83,38.69,37.70，36.96,36,80,31.35,29.26,23.01,20.51ppm;IR(KBr):wnax=3441.45,2926.88,2882.34,1748.40,1644.38,1454.49,1107.72,1065.01,936.10cm-1;UV(CHC13)Xmax(logs)=241.60(3.85)nm;MS(EI):m/z:344;MS(HR-ESI):m/z:calcdforC20H24O5Na:367.1521;found:367.1525[M+Na]+实施例2:NaH,THFRXreflux&v'oca//f)A&/oca/,>7B-J其中n-1-8,R=C2H5,isopropyl取实施例1所得产物(EriocalinA)0.03mmol，溶于5mL四氢呋喃中，加入氢化钠(NaH)0.045mmol，卤代烃0.06mmol，回流反应。TLC跟踪反应原料消失后滤去固体，滤液浓縮得粗品。粗品经过硅胶柱层析[洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=20-5:1(v/v)]，得到九个目标产物(EriocalinB,C,D,E,F,G,H,I,J)。实施例3:取实施例1所得产物(EriocalinA)0.03mmol，溶于lmL二氯甲烷中，加入三氟磺酸银(AgOTf)0.045mmol，碳酸银(Ag2CO3)0.06mmo1，室温搅拌下加入事先溶于2mL二氯甲烷的卤代烃，避光反应10小时-4天。TLC检测反应完全后滤去固体，滤液浓縮得粗品。粗品经过硅胶柱层析[洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=20-5:1(v/v)]，得到九个目标产物(EriocalinB,C,D,E，F,G,H,I,J)。实施例4:其中(1=1-8,R=C2H5,isopropyl取毛萼乙素(EriocalyxinB)0.05233mmo1，溶于hnL二氯甲垸中，加入三氟磺酸银(AgOTf)0.0785mmo1，碳酸银(Ag2CO3)0.105mmo1，室温搅拌下加入事先溶于2mL二氯甲垸的卤代烃，避光反应10小时-4天。TLC检测反应完全后滤去固体，滤液浓縮得粗品。粗品经过硅胶柱层析[洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯=20國5:1(v/v)]，得到九个目标产物(EriocalinB,C,D,E,F,G,H,I,J)。相关的测试数据如下EriocalinB:n=l,R=C2H5,[ag1=-266.89(C=0.148inCHC13);^-NMR(300MHz,CDCl3):5=6.05(IH,s),5.33(IH,s),4.68(IH,d,J=9.6Hz),4.11(2H,d,J=11.7Hz),3.80(IH,dd,J=8.1Hz),3.69(1H,m),3.30(IH,dd,J=8.1Hz),3.13(IH,br),2.81(IH,d,J=7.8Hz),2.69-2.66(2H,m),2.0(IH,d,J=11.7Hz),1.91-1.51(8H,m),1.36(3H,s),1.08(3H,s),0,99(3H,t,J=7.2Hz)ppm;13C-NMR(75MHz,CDCl3):S=207.75，204.34,200.29,147.27，116.75,78.65,77.43,72.41,n.+[bn+W]￡0￡r"t:punoj，eOd￡t:BNsOKH"0j0jP3IB:5:z戶(IS3"犯)SIA[*I，z/ui:(13)tou(69'。09.汁乙=(33。i)xbut(toHO)All(I掘sS￡6'，"901、8SI11'W6Wl'0乙卞1791'W6:丄l'S8.6tl1'18.U8乙'81'0￡6乙'乙09S6乙=xmua加dd訓乙'99.乙Z:'丄9.乙乙、6卞S'9e.6乙'WIG'061￡'999￡'18'9￡'S8"'".8e'io.6e'乙z;i，'89.8t'訓9'osi9t乙'69W"'W8A'w9n'8rm'￡￡00乙'8￡卞0乙'e/;乙0乙=9:(￡IOCO'zh1a[")^HJS[-:)￡[:radd(znr乙H:'P'P'H9)I6'0'(s'H￡)801'(s'HO8￡'I'(HOI)ISI寸0Z'(瓜'H乙)0"'(ZHSK'P'HI)'(叫'HI)OIT'(ZH8K'PP'HI)0￡￡'(瓜'HI)69T'(ZH8K'PP'HI)98￡'(zh8.1W'P'H乙)n卞'(ZH9.6《'P'HI)89》'(s'HI)'(s'HI)=2:(￡I3CD'zh]AI00￡)^DA[NL-I^Wl。HO可A6I0=O)n'803陽=^["]'lMojdosKat=u:amiB0op3:punq;^W乙t317:bnsOz￡HwOJ。jP。IE。z/ui:(lS3-犯)S1A[，001;:ZA":(13)S1A[，ura(乙")oriw=(3g。i)丽YtoHO)八nU，6￡骗'"，t'丄8'6in'w6m'58^91'厶0ZXl丄I'9匚0ai'90'外ZJ'""83tO'￡S6r'H096乙'9r^H=x它raa"HI加dd68￡1'09.0乙'"'63Wl￡'￡9.9￡'8//9￡'98."'9S'8S'U.lt7>9.針'乙0'乙S'9009'8Z/I9'I;0丄'99'8乙'08.911'9￡00乙'6￡卞0乙'6Z/乙03=2:(SIOCO'z腦SZJ"aMM-0￡l&idd(zhsk、'H￡)"'0'(s'hs)801'(s'HS)9￡1'(辺'HU)9"國e0.乙'(冚'H乙)99乙-69S加"^'P'Hl)18乙'0q'HI)0IT'(ZH8K'PP'HI)0",'HI)89￡'PP'HI)肌'(z战IW'P'H乙)II卞'(ZH9衬'P'HI)89卞'(s'HI)'(s'HI)=2:(￡10(10'2謂00￡)poi它o:z/ui:(IS3-犯)S1AI》8￡:z/^:(m)S1A[:rau(18'￡)0乙=(3§。0xbuiy(eoHD)AnU-raow'6￡6'100901'90'乙ni'wo外i'乙r&91'￡s;ozj'9r9乙u'srswj'86'6丄8乙'"'0s6乙'8兩6z:'w0sk=x画:(腦)Mdk'OI'09.03'"'乙乙'6乙.S乙'a'6S'S9'9￡'08'9￡'98'"'9S'8S'U'lt'A9'針>0."'訓9'6//I9<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>48.67,41.72,38.57,37.86,36.81,36.66,31.76，31.42,30.06,29,34，29.10,26.11,22.76,22.58,20.60,14.06ppm;IR(KBr):irniax=3432.43,2930.37,2857.33,1751.49,1728.82,1644.21,1457.93,1115.94,1064.17,935.55cm-1;UV(CHC13)Xmax(logs)=241.40(3.76)nm;MS(EI):m/z:442;MS(HR-ESI):m/z:calcdforC27H3805Na:465.2616;found:465.2605[M+Na]+.EriocalinH:n=6,R=C2H5,[a]g=-184.07(C=0.182inCHC13);^-NMR(300MHz,CDCl3):S=6.03(IH,s),5.32(IH,s),4.67(IH,d,J=9.6Hz),4.09(2H，d,J=12Hz),3.81(IH,dd,J=7.8Hz),3.67(IH,m),3.30(IH,dd,J=7.8Hz),3.10(IH,br):2.79(IH,d,J=7.5Hz),2.68(2H,m),2.06-1.37(IIH，m),1.35(3H,s),1.33-1.25(8H,m)，1.07(3H,m),0.87-0.83(3H,t,J=7.0Hz)ppm;13C-NMR(75MHz,CDCl3):5=207.80,204.39,200.38,147.26,116.77,78.67,77.39,70.86,61.76,60.05,52,01,48.63，41.70,38.57,37.85,36.77,36.62,31.80，31.39,30.04,29.37,29.21,29.20,26.13,22.75,22.63,20.60,14.09ppm;IR(KBr):ramx=3432.90,2928.95,2856.15,1751.67,1729.45,1643.25,1459.51,1115.82,1064.24,935.55cm画l;UV(CHC13)Xmax(loge)=241.20(3.64)nm;MS(EI):m/z:456;MS(HR-ESI):m/z:calcdforC2SH40O5Na:479.2773;found:479.2772[M+Na]+.EriocalinI:n=7,R=C2H5,[ag。=-134.78(C=0.230inCHC13);^-NMR(300MHz,CDCl3):S=6.04(IH,s),5.32(IH,s),4.67(IH,d,J=9.6Hz),4.09(2H,d,J=12Hz),3.81(IH,dd,J-7.8Hz),3.67(IH,m),3.30(IH,dd,J=7.8Hz),3.10(IH,br),2.79(IH,d,J=7.5Hz),2.68(2H,m),2.06-1.37(10H,m),1.35(3H,s),1.33-1.25(11H,m),1.07(3H,s),0.87-0.83(3H,t,J=7.0Hz)卯m;13C-1S1MR(75MHz,CDCl3):5=207.79,204.39,200.37,147.26,116.78,78.68,77.40,70.87,61.77,60.06,52.02,48.63,41.71,38.57,37.85,36.79,36.64,31.86,31.40,30.06,29.50，29.51,29.35,29.25，26.14,22.76,22.66,20.60,14.10ppm;IR(KBr):mnax=3432.58，2927.84,2855.63,1751.56,1730.44,1642.09,1460.09,1115.19,1064.26,935.91cm-1;UV(CHC13)Xmax(log￡)=241.60(3.39)nm;MS(EI):m/z:470;MS(HR-ESI):m/z:calcdforC29H4205Na:493.2929;found:493.2917[M+Na]+.EriocalinJ:n=8,R=C2H5,[aU'=-161.29(C=0.093inCHC13);丄H-丽R(300MHz,CDCl3):5=6.05(IH,s),5.33(IH,s),4.68(IH,d,J=9.6Hz),4.10(2H,d,J=11.6Hz),3.82(IH,dd,J=7.6Hz),3.69(1H，m),3.30(IH,dd,J=7.6Hz),3.10(IH,br),2.80(IH,d,J=7.5Hz),2.69(2H,m),2.06-1.37(11H,m),1.36(3H,s),1.33-1.25(12H,m),1.08(3H,s),0.87-0.84(3H,t,J=7.5Hz)ppm;13C-NMR(75MHz,CDCl3):S=207.74，204.33,200.29,147.28,116.73,78.68,77.43,70.88,61.80,60.07,52.04,48.66,41.72,38.56,37.86,36.81,36.66,31.88,31.42,30.06,29.54(3C),29.43,29.34:26.14,22.76,22.66,20,60,14.08ppm;IR(KBr):imiax=3432.91,2926.04,2854.53,1751.64,1688,81,1459.64,1116.20,1064.46,935.82cm-1;UV(CHC13)Xmax(logs)=241.60(3.65)nm;MS(EI):m/z:484;MS(HR誦ESI):m/z:calcdforC30H44O5Na:507.3086;found:507.3092[M+Na]+.实施例5:片齐J:实施例1-4所得任一种化合物10mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸镁5mg;制备方法将化合物、乳糖和淀粉混合，用水均匀湿润，把湿润后的混合物过筛并干燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重250mg，化合物含量为10mg。实施例6:安瓿剂实施例1-4所得任一种化合物2mg，氯化钠10mg;制备方法将化合物和氯化钠溶解于适量的注射用水中，过滤所得溶液，在无菌条件下装入安瓿瓶中。实施例7:胶囊剂实施例1-4所得化合物10mg，乳糖187mg,硬脂酸镁3mg;制备方法将化合物与助剂混合，过筛，均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊，每个胶囊重200mg，活性成分含量为10mg。实施例8:式(I)毛萼乙素衍生物的体外抗肿瘤活性实验对具有结构式(I)的毛萼乙素衍生物进行体外抗肿瘤活性实验。化合物1-10按照磺酰罗丹明B(sulforhodamineB,SRB)蛋白染色法分别对BEL-7402、A549、HT-29癌细胞株进行了体外抗肿瘤活性筛选；同时化合物1-10按照四氮唑盐(microcultiiretetrazolium，MTT)还原法对HT60、MOLT-4人白血病细胞株也进行了体外生物活性实验，采用VP-16(依托泊泔，Etoposide)为阳性对照物，结果表明(见表1):此类脂溶性衍生物在体外具有较广的抗肿瘤活性。当B环C-6位的羟基所接的脂肪碳链数在3-5之间，对肝癌、肺癌、结肠癌、白血病都具有显著的抑制作用，而随着碳链数的增加，活性逐渐减弱。但化合物10却在抗白血病活性实验中显示出了较其他化合物强的抗肿瘤活性。表1:化合物1-10对肿瘤细胞生长的抑制率％化合物IC50(ng/ml)BEL-7402A549HT-29HL60MOLT-4EriocalinA11.89.610.25.31.3EriocalinB6.35.27.46.23.2EriocalinC11.17.99.43.42.2EriocalinD7.77.46.73.22.5EriocalinE9.57.911.04.73.0EriocalinF18.216.418.27.25.2EriocalinG17.214.514.37.66.2EriocalinH28.223.035.29.58.6EriocalinI39.319.842.25.315.5EriocalinJ26.616.430.71.53.5VP-164.317.416.60.210細9权利要求1、下述结构式(I)的毛萼乙素衍生物(I)其中n＝1-8，R＝C2H5，isopropyl(异丙基)。2、权利要求1毛萼乙素衍生物的制备方法，取毛萼乙素、卤代烃、银盐，以摩尔比为1:1-16:1-4，在有机溶剂中，0°C-室温，反应10小时-7天，得式(I)化合物，所用的卤代烃为氯或溴或碘代烃；银盐为三氟甲垸磺酸银(AgOTf)或三氟甲烷磺酸银(AgOTf)或碳酸银(Ag2C03)或氧化银(Ag20)及其混合物；有机溶剂为二氯甲垸或苯或甲苯或正己烷。3、权利要求1毛萼乙素衍生物的制备方法，在有机溶剂中，毛萼乙素与酸作用得到结构式为II的化合物，此化合物再在银盐的作用下与离代烃反应，得式(I)化合物，所用的有机溶剂为二氯甲垸或四氢呋喃或1,3-二氧六环或苯或甲苯或正己烷；酸为三氟甲烷磺酸或乙酸或对甲苯磺酸或稀盐酸；银盐为三氟甲烷磺酸银(AgOTf或碳酸银(Ag2C03)或氧化银(Ag20)及其混合物；卤代烃为氯或溴或碘代烃。4、权利要求l毛萼乙素衍生物的制备方法，结构式为(III)的化合物、碱，在室温-回流条件下与卤代烃反应得式(I)化合物；所述有机溶剂为四氢呋喃或1,3-二氧六环或苯或甲苯或正己烷；碱为氢化钠或氢化钾或氢氧化钠或氢氧化钾或叔丁醇钾；卤代烃为氯或溴或碘代烃。(III)5、按照权利要求2或3或4的方法，其中卤代烃为碘代烃，酸为三氟甲垸磺酸。6、用于治疗癌症的药物组合物，其中含有式(I)化合物和药学上可接受的载体。7、权利要求1中任意一项的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。全文摘要本发明涉及结构式(I)的毛萼乙素衍生物，其制备方法，以该类衍生物为活性成分的药物组合物，以及它们在制备抗肿瘤药物中的应用。文档编号A61P35/00GK101307059SQ200810058610公开日2008年11月19日申请日期2008年7月1日优先权日2008年7月1日发明者刘靖平,孙汉董,张洪彬,普建新,肖伟烈申请人:中国科学院昆明植物研究所