专利名称：：荠苧非挥发性提取物在制备抗流感病毒药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及齐—学非挥发性提取物在制备抗流感病毒药物中的应用。(二)
背景技术：
：流感是由流感病毒感染引起的严重危害人类健康的常见传染病。目前，临床所用药物主要是西药，如病毒唑、津巴韦林、利巴韦林等。而中草药在防治流感(尤其是非典时期)中发挥了重要的作用。在防治流感方面具有独特的优势和广阔的发展前景。唇形科石芥芋属一年生草本植物，在我国分布广阔，资源丰富，为江浙一带民间常用中草药，荠苧包括苏州芥苧、疏花芥芋(小鱼仙草)、石荠竽和杭州齐—孕等。据《浙江民间常用草药》记载，其性温、微辛、入肺胃经，具有清热解毒、消炎镇痛等功效，用于治疗中暑、感冒、扁桃体炎等。研究表明，石荠苧挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、普通变形杆菌等7种菌抹均有一定的抑制作用。苏州养苧水浸膏具有明显的治疗感冒的作用，还能促进急性肾炎患者的淋巴细胞转化作用，具有补肾阳药物一样的免疫调节功能，且安全无毒；疏花芥竽(小鱼仙草)具有抗炎、抗细胞介导变态反应等作用。目前还未见齐芋非挥发性提取物具有预防或治疗病毒感染51起的流感及其相关疾病的药物用途的报道。(三)
发明内容本发明即是为了提供芥竽非挥发性提取物在制备抗流感病毒药物中的应用。本发明采用的技术方案是齐苧非挥发性提取物在制备防治流感病毒药物中的应用。本发明所述莽芋非挥发性提取物为芥芋药材的乙醇提取物以乙酸乙酯萃取获得的乙酸乙酯层蒸千后的物质。荠苧非挥发性提取物主要有效成分为乌苏酸、养竽黄酮-I(5-羟基-6，7-二曱氧基黄酮)、齐芋黄酮-II(5-羟基-7，8-二曱氧基黄酮)、芽菜素、金合欢素等，所述非挥发性提取物可按本领域常规方法，以醇水混合溶剂提取获得，本发明中，所述齐芋非挥发性提取物由如下方法制备得到取粉碎的荠苧药材，加入质量为荠苧药材质量1020倍的0100%(v/v，0%<乙醇浓度《100%，乙醇浓度为100%时即为无水乙醇)乙醇水溶液，5090。C提取13次，每次12小时，^是取液浓缩得浸膏，浸膏用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩、干燥，得到所述齐芋非挥发性^是^4勿。优选的，所述莽芋非挥发性提取物制备方法如下取粉碎的齐芋药材，加入质量为齐芋药材质量1020倍的7090%(v/v)乙醇水溶液，60~70°C提取13次，每次12小时，提取液浓缩得浸膏，浸膏用612倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩、干燥，得到所述莽竽非挥发性提取物。具体的，所述齐芋为下列之一①斗充少H芥芋(Mos/a/7a"gc/2ovvera^Matsuda)、②疏花齐竽(Moy/acfe^AeraMaxim)、③苏州齐芋(Mos/asooc/20衡m7iMatsuda)、④石齐芋(Mw/asca6ra(Thunb,)C.Y.WuetH.W.Li)。《尤选的，所述莽宇为4充州芥宇(7Wos/a/zawgcAowera^Matsuda)。本发明中，所述芥苧非挥发性提取物按比色法测定黄酮类化合物含量在20%及以上。本发明的芥苧非挥发性提取物经动物体内模型试验后，证实其具有较强的抗流感病毒作用。本发明所述提取物可用于制备预防或治疗流感病毒的药物，可添加常规药用辅料制成片剂、颗粒剂、胶嚢、口服液、注射液、喷雾剂、滴丸剂、脂质体、外用膏剂等剂型药物，包括现已公认的各种緩释、控释剂型或纳米制剂，或消毒防疫品。本发明的齐苧非挥发性提取物还可以与现已上市的流感病毒抑制剂或者其他治疗流感相关病症的治疗药物及其原料药如金刚烷胺、金刚乙胺和/或神经氨基酸酶抑制剂如扎那米韦和奥司他韦等联合使用，制备得到具有流感相关病症的药物组合物或复方制剂，可预期成为治疗流感疾病药品。上述各类药品可以采用片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂、喷雾剂、滴丸剂、脂质体、外用膏剂等剂型药物，包括现已^H人的各种緩释、控释剂型或纳米制剂，或消毒防疫品。本发明的有益效果主要体现在:提供了齐苧非挥发性提取物在抗流感病毒方面的新用途，为新药开发提供了基础。具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此实施例1:荠芋非挥发性提取物制备Matsuda，杭州芥竽)药材1000g，粉碎或切成小段，力。20倍70%(v/v)乙醇溶液，70。C下提取2h，浓缩，得浸膏283g(收率28.3%),浸膏用乙酸乙酯18002400mL萃取，至盐酸-镁粉反应呈弱阳性或阴性[在萃取液的乙醇或曱醇溶液中加入少许镁粉振摇，再加入几滴浓盐酸，12分钟(必要时水浴上加热)即显红色到紫红色，则反应示为阳性，无颜色反应则示为阴性]，收集萃取液，浓缩后得固形物76.7g(收率7.7%)，即为齐芋非挥发性提取物，其中芥芋总黄酮含量50.1%,收率3.9%。经化学分离，13C、'H-NMR测定，证明齐芋非挥发性提取物中主要含有乌苏酸、荠苧黄酮-I(5-羟基-6,7-二曱氧基黄酮)、芥芋黄酮-II(5-羟基-7，8-二曱氧基黄酮)、芹菜素(5,7,4'-三羟基黄酮)、金合欢素(5,7-二羟基，4'-曱氧基黄酮)等成分。实施例2:荠芋非挥发性提取物抗流感病毒实验研究取1822g的ICR小鼠(由中国科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限公司提供)，实验设正常对照组、病毒模型组、达菲对照组(0.02g/kg)和提取物低剂量组(2g生药/kg，即0.15g实施例1提取物/kg)、中剂量组(4g生药/kg，即0.3g实施例1提取物/kg)、高剂量组(6g生药/kg，即0.45g实施例1提取物/kg)。各组于攻毒前预先灌胃给药3天，按0.2mL/10g小鼠体重给药，连续给药至实验结束。于第3天给药2h后在乙醚轻度麻醉下采用曱型流感病毒小鼠肺适应抹A/PR/8/34(由浙江省疾病预防控制中心病毒所提供)，以lOLDso病毒量滴鼻感染小鼠。每天记录小鼠死亡情况，连续记录14天。另，同法平行实验，于感染后第7天每组取10只小鼠称重，眼球取血(按美国Rapidbio公司小鼠IL-2、IFN-yelisa检测试剂盒要求测定血清中细胞因子中IL-2、IFN-y含量)，解剖，称取肺重，计算小鼠肺组织病变程度。实验结果表明①荠苧非挥发性提取物能显著减少流感病毒感染后的肺病变面积。表l:荠苧非挥发性提取物对小鼠流感病毒肺炎的抑制作用(n=10,5±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注与病毒模型组相比，*p<0.05,**p<0.01。由表1可知，与病毒对照组相比，提取物高、中、低剂量组均可明显降低感染小鼠的肺指数，提高肺指数抑制率(高、中、低剂量组肺指数抑制率分别为31.41%、27.64%、9.26%)，减轻小鼠流感病毒所致肺炎的病变程度；达菲对照组可明显降低感染小鼠的肺指数，提高肺指数抑制率(32.19%)。齐芋非挥发性提取物高剂量组能显著减少流感病毒感染后的肺病变面积，与达菲20mg/kg组作用效果相近。②芥苧非挥发性提取物对流感病毒感染小鼠死亡具有一定的保护作用。表2:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注与病毒模型组相比，*p<0.05,**p<0.01。由表2可知，与病毒模型组比较，齐芋非挥发性提取物高、中、低剂量组死亡率分别为28.57%、50.00%和50.00%,对流感病毒感染小鼠死亡具有一定的保护作用，可延长小鼠平均存活天数，提高小鼠死亡保护率；达菲对照组死亡率为14.29%。表明芥芋非挥发性提取物对流感病毒感染小鼠死亡具有一定的保护作用。③莽芋非挥发性提取物能促进机体Th,亚群IL-2、IFN-y的分泌。表3:齐芋非挥发性提取物对流感感染小鼠血清中IL-2和IFN-y含量的影响(n=10，S±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注与病毒模型组相比，*p<0.05，**p<0.01;与正常对照组相比，Ap<0.05,厶<().01。由表3可知，齐芋非挥发性提取物高剂量组能显著提高流感病毒感染小鼠血清中IL-2和IFN-y含量，与病毒模型组比较，具有显著性差异。表明荠苧非挥发性提取物可能通过促进机体Th,亚群IL-2、IFN-y的分泌，提高机体抗病毒作用和免疫调节作用，减轻病毒对机体的损伤而发挥疗效。以上抗流感病毒实验实施例结果说明芥芋非挥发性提取物在预防或治疗流感病毒感染性疾病上具有显著的功效。有望进一步开发成为预防或治疗流感疾病的中药新药。权利要求1.荠苧非挥发性提取物在制备防治流感病毒药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述齐苧非挥发性提取物为芥芋药材的乙醇提取物以乙酸乙酯萃取获得的乙酸乙酯层蒸干后的物质。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述荠苧非挥发性提取物由如下方法制备得到取粉碎的芥芋药材，加入质量为芥芋药材质量10~20倍的0100%乙醇水溶液，5090。C提取13次，每次12小时，提取液浓缩得浸膏，浸膏用612倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩、干燥，得到所述芥学非挥发性提取物。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述荠苧非挥发性提取物制备方法如下取粉碎的养芋药材，加入质量为齐竽药材质量1020倍的7090%乙醇水溶液，60-70。C提取13次，每次1~2小时，提取液浓缩得浸膏，浸膏用612倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩、干燥，得到所述齐苧非挥发性提取物。5.如权利要求l-4之一所述的应用，其特征在于所述齐芋为下列之一①斗亢州齐竽(Afos7a/wwgc/wvt^"wjMatsuda)、②5t花齐芋(iWos/afi&mf/zeraMaxim)、③苏州齐学(iWbs/asooc/20wera7iMatsuda)、④石芥芋(M油廳6ra(Thunb,)C.Y.WuetH.W.Li)。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述荠苧为杭州荠苧(Mos/a/2fl"gc/o置m^Matsuda)。全文摘要本发明提供了荠苧非挥发性提取物在制备防治流感病毒药物中的应用。荠苧非挥发性提取物主要有效成分为乌苏酸、荠苧黄酮-Ⅰ、荠苧黄酮-Ⅱ、芹菜素、金合欢素等。本发明的荠苧非挥发性提取物经动物体内模型试验后，证实其具有较强的抗流感病毒作用，为新药开发提供了基础。文档编号A61P31/00GK101361792SQ20081012133公开日2009年2月11日申请日期2008年9月25日优先权日2008年9月25日发明者上官海燕,严云良,余陈欢,冰俞,吕佩惠,吴巧凤,文欣欣,熊耀康,盛振华,黄家卫申请人:浙江中医药大学