与hGM-CSF结合的单克隆抗体及包含它的药物组合物的制作方法

专利名称：与hGM-CSF结合的单克隆抗体及包含它的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及结合人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(也称为“hGM-CSF”)并中和 hGM-CSF活性的单克隆抗体，包含一种或多种这类单克隆抗体的组合物和这类单克隆抗体 及组合物的使用方法。
背景技术：
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)被鉴定为一种促进骨髓粒细胞和巨噬 细胞祖细胞增殖，并促进粒细胞和巨噬细胞体外集落形成的体液因子。现在知道GM-CSF是多种细胞类型的刺激因子。它诱导粒细胞-巨噬细胞谱系血细 胞的分化和增殖，提升抗原呈递细胞的功能，维持一些种类上皮细胞的功能并诱导肺泡巨 噬细胞的功能(如，增强表面活性剂分解代谢，杀菌功能，和Fc受体表达)。The Cytokine Handbook,第 4 版，Thomson, Α.等(编)，Academic Press, 2003.已知GM-CSF引起多种疾病，包括1)变应性疾病如哮喘、特应性和花粉症，2)移植 物排斥，和移植物抗宿主病(GVHD)，和3)自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎。例如，人GM-CSF(hGM-CSF)在变应性患者的肺部中和在类风湿性关节炎患者的 关节中过表达；hGM-CSF mRNA在变应性患者的皮肤过表达。还报道的是，GM-CSF的产生 增强单核细胞的存活，而单核细胞是特应性皮炎的炎症诱导细胞。Bratton，D. L.等.， Granulocyte macrophage colony-stimulating factor contributes to enhanced monocyte survival in chronic atopic dermatitis. J. Clin. Invest. ,95 :211_218,1995。另外，已经表明GM-CSF刺激白血病细胞的增殖，因此，GM-CSF被认为是一种引起 白血病的因子。获得治疗人GM-CSF引起的疾病和状况的方法是有用的。治疗这类疾病和状况的 一种方法是结合hGM-CSF，并抑制它的生物活性。例如，这可以通过施用抗hGM-CSF单克隆 抗体来实现，所述单克隆抗体具有针对hGM-CSF的高亲和力和充分中和活性，但不诱导免 疫学反应。然而，目前报道的hGM-CSF抑制抗体都没有针对hGM-CSF的充分中和活性。并且， 看来非常可能的是，现有的抗hGM-CSF单克隆抗体会在接受者中引起不希望的免疫应答。 多克隆抗体和单克隆抗体通常衍生自实验动物，比如小鼠、家兔和公山羊。然而，获得的抗 体具有用于产生它们的动物的序列特征。如果将它们施用给人，人的免疫系统可能视这些 抗体为外来物，可能引起人抗动物抗体应答(即抗体产生了它自身的抗体)。另外，长期施药对于治疗这类疾病来说是必要的，结果可能产生问题，比如，可能 由施用药物中少量的杂质引起的安全问题。从有效性、安全性和医疗费用的角度考虑，比现 有抗体中和活性更好的抗体作为治疗剂会很有价值。发明概述本发明至少部分基于发明人对某些特征为针对hGM-CSF的极高中和活性的抗人 GM-CSF单克隆抗体的开发。这些抗体的中和活性令人惊讶地高出基于它们对hGM-CSF的结 合亲和力所作出的预期。其中的两个抗hGM-CSF单克隆抗体在此被称作EV1018和EV1019。
一方面，本发明提供了结合和中和hGM-CSF的抗hGM-CSF抗体及其片段。在一个实施方式中，提供了 一个分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结 合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段识别hGM-CSF中的ELYK(SEQ ID NO 2)和 TMMASHYKQH(SEQ ID NO :3)，hGM-CSF氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示。在一个实施方式 中，所述抗体包含(a)重链，其包含含有Vh-⑶Rl的共有序列，含有Vh-⑶R2的共有序列和含有 Vh-⑶R3的共有序列，其中⑴含有Vh-CDRI 的共有序列是 FTFSX1X2MH(SEQ ID NO :314)，其中 X1 是 Y 或 H，X2 是G或A，(ii)含有Vh-CDR2 的共有序列是X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G(SEQ ID NO :315)，其中 每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，X3是L或V，X4是T或I，X5是Y或W，X6是R 或K，X7是F或Y，X8是R或K，且(iii)含有 Vh-CDR3 的共有序列是 EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQ ID NO 316)，其中每个 Xn 相互独立地是任何天然存在的氨基酸，X9是M或V，Xltl是A或G，和，(b)轻链，其包含含有VfCDRl的共有序列，含有Vf CDR2的共有序列和含有 VL-⑶R3的共有序列，其中⑴含有Vl-CDRI 的共有序列是 XnGNXnXnNIGSX11AVG (SEQ ID NO 317)，其中每个 Xn 相互独立地是任何天然存在的氨基酸，X11是H或Y，(ii)含有 VfCDR2 的共有序列是 GX12SPX13SG (SEQ ID NO :318)，其中 X12 是 R 或 K， X13是A或P，且(iii)含有 Vl-CDR3 的共有序列是 STffDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO 319)，其中 X14 是 R 或S，X15是V或L ；并且所述抗体或其抗原结合片段特异性地结合hGM-CSF。在一个实施方式中，所述抗体包含(a)包含 Vh-CDRI，VH_CDR2 和 VH_CDR3 的重链，其中(i) Vh-CDRI 具有选自 SYGMH (SEQ ID NO 10)和 SHAMH (SEQ ID NO 333)的氨基酸 序列，(ii) Vh-CDR2 具有选自 LTYHHGNRKFYADSVRG (SEQ ID NO 5)禾口 VIffHDGSKKYYADSVKG (SEQ ID NO 334)的氨基酸序列，且(iii)VH-CDR3 具有选自 ESMGAINDN(SEQ ID NO :6)和 EWVGGTCDS (SEQ ID NO 335) 的氨基酸序列；和(b)包含 Vl-CDRI，VL_CDR2 和 VL_CDR3 的轻链，其中(i) Vl-CDRI 具有选自 IGNNNNIGSHAVG(SEQ ID NO :7)和 SGNSSNIGSYAVG(SEQ ID NO 330)的氨基酸序列，(ii)VL_CDR2 具有选自 GRSPPS(SEQ ID NO 8)禾口 GKSPAS(SEQ ID NO 331)的氨基 酸序列，且(iii)VL_CDR3 具有选自 STffDSSLSAVV (SEQ ID NO 9)和 STWDSRLSAVL (SEQ ID NO 332)的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段特异性地结合hGM-CSF。例如，如上所述的抗体或其抗原结合片段结合人GM-CSF的Kd小于400pM，更优选 地，Kd小于160pM。
在此描述的抗体或其抗原结合片段中和hGM-CSF的活性，使得如在此描述的TF-I 增殖分析中，ED80时测定的抗体或其抗原结合片段IC50值小于IOOpM(例如，小于30pM，小 于 20pM)。在任一实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段可包含重链，所述的重链为伽 玛1 ( Y D，伽玛2 ( γ 2),伽玛3(ys)或伽玛4 ( γ 4)。重链可以选自SEQ ID NO 10-33，38-80， 以及 160-183 和 222-245。在任一实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段可包含轻链，所述的轻链为λ 轻链。在一些实施方式中，λ轻链与野生型序列相比，可以含有R100G或A153G中一个或者 两个氨基酸取代。在一个实施方式中，轻链可以选自SEQ ID NO :34-37和202-221。轻链可 以是λ轻链或κ轻链。在一些实施方式中，重链是伽玛I(Y1),伽玛2(γ2)，伽玛3(γ3) 或伽玛4(Υ4)，轻链是λ轻链。在任一实施方式中，重链与野生型序列相比，可以含有下述 氨基酸取代中的一个或更多个:Q3E, T97A, T97V, N95D, N95E, N95K, N95Q, N93Q/N95T, K144R, L164A，和L165A。在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重 链含有选自下述组成的组的一个或更多个氨基酸取代Q3E，T97A，T97V，N95D, N95E, N95K, N95Q，N93Q/N95T, K144R，L164A，和L165A，所述轻链含有下述氨基酸取代中的一个或两个 R100G 和 A153G。在此描述的抗体或其抗原结合片段可以包含具有氨基酸序列SYGMH(SEQ ID NO 4)或SHAMH(SEQ ID NO 333)的Vh-CDRI。在此描述的抗体或其抗原结合片段可以包含具有 氨基酸序列 LTYHHGNRKFYADSVRG (SEQ ID NO :5)或 VIWHDGSKKYYADSVKG(SEQ ID NO 334)的 Vh-⑶R2。在此描述的抗体或其抗原结合片段可以包含具有氨基酸序列ESMGAINDN(SEQ ID NO 6)或EWVGGTCDS (SEQ ID NO 335)的Vh-⑶R3。在此描述的抗体或其抗原结合片段可以 包含具有氨基酸序列 IGNNNNIGSHAVG (SEQ ID NO :7)或 SGNSSNIGSYAVG(SEQ ID NO 330)的 VfCDRl。在此描述的抗体或其抗原结合片段可以包含具有氨基酸序列GRSPPS (SEQ ID NO 8)或GKSPAS(SEQ ID NO 331)的Vf⑶R2。在此描述的抗体或其抗原结合片段可以包含具 有氨基酸序列 STWDSSLSAVV(SEQ ID NO 9)或 STWDSRLSAVL(SEQ ID NO 332)的 VL_CDR3。在一些实施方式中，所述特异性结合hGM-CSF的抗体或其抗原结合片段包含6个 不同的CDR，其序列如SEQ ID NO :4_9所示。在一些实施方式中，所述特异性结合hGM-CSF的抗体或其抗原结合片段包含6个 不同的CDR，其序列如SEQ ID NO 330-335所示。在此提供的任一实施方式中，抗体可以包括重链，其是伽玛1 ( Y D，伽玛2 ( Y 2)， 伽玛3(γ3)或伽玛4( Y4)，和轻链，其是κ或入。在一些实施方式中，在此描述的抗体或其抗原结合片段可以进一步包含信号序 列，例如SEQ ID NO :324，325和326所示的信号序列。涉及野生型和野生型的变体的实施方式也包括在本发明中。在一些实施方式中， 抗体或其片段包含重链，重链为SEQ ID NO 10或选自SEQ ID NO 11-33，38-80的其变体， 还包含轻链，轻链为SEQ ID N0:34或选自SEQ ID NO :35_37的其变体。在一些实施方式 中，重链是SEQ ID NO: 160或选自SEQ ID NO 161-245的其变体，轻链是SEQ ID NO: 202或 选自SEQ ID NO 203-221的其变体。在一些实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，其中重链可变区的氨基酸序列是SEQ ID NO 152，或选自由SEQ ID NO :153_158和159组成的组的其变 体，和轻链可变区，其中轻链可变区的氨基酸序列是SEQ ID NO: 184，或选自由SEQ ID NO 185-200和201组成的组的其变体。在一个实施方式中，重链可变区的氨基酸序列是SEQ ID NO :152。在一个实施方 式中，轻链可变区的氨基酸序列是SEQ ID N0:184。在一个实施方式中，重链可变区的氨基 酸序列是SEQ ID NO: 152，并且其中轻链可变区的氨基酸序列是SEQ ID N0:184。在一个实 施方式中，抗体属于IgG1(X)类(亚类)。在一些实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，其中重链可 变区的氨基酸序列是SEQ ID NO :348，或选自由SEQ ID NO =349-362和363组成的组的其 变体，和轻链可变区，其中轻链可变区的氨基酸序列是SEQ ID N0:364或SEQ ID NO 365。在一个实施方式中，重链可变区的氨基酸序列是SEQ ID NO 348。在一个实施方 式中，轻链可变区的氨基酸序列是SEQ ID N0:364。在一个实施方式中，轻链可变区的氨基 酸序列是SEQ ID N0:365。在一个实施方式中，抗体属于IgG1 ( λ )类(亚类)。在一个实施方式中，在此公开的能够结合hGM-CSF (hGM-CSF)并中和hGM_CSF生物 活性的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，特征在于它具有由选自由SEQ ID NO 4-9和SEQ ID NO :330-335组成的组的一个或更多个氨基酸序列所示的互补决定区(⑶R)。 在一些实施方式中，CDR中的一个或更多个氨基酸可以被取代、缺失、插入或增加。在此描 述的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分可以特征在于，当TF-I细胞被hGM-CSF诱导 增殖时，在浓度约14pM下，抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分抑制TF-I细胞增殖达 约50%。在一些实施方式中，抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分抑制外周血树突状 细胞的增殖。在一个实施方式中，在此描述的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分对 hGM-CSF具有高的亲和力，Kd值为4X ΙΟ,Μ或更低。在一些实施方式中，在此描述的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分属于 IgG1(A)类(亚类)。在一些实施方式中，本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体是人单克隆抗 体。本发明进一步包括核酸及包含所述核酸的载体。在一个实施方式中，本发明是编 码在此公开的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。在一个实施方式 中，所述核酸是DNA。在一个实施方式中，本发明是载体，所述载体包含编码在此公开的抗 hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段的DNA。本发明进一步提供了包含表达载体的宿主细胞，所述载体包含本发明的DNA载 体。本发明还涵盖试剂盒，其包含(a)本发明的抗体或其抗原结合片段；和(b)含有 抗体或其抗原结合片段的一个或更多个容器。在一个实施方式中，本发明是依照本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合 片段，其用于药物中。本发明提供了包含结合并中和hGM-CSF的抗hGM-CSF抗体或其片段的组合物。这 类组合物可以是药物组合物(如药剂)，其包含抗hGM-CSF抗体和/或其片段(或其组合) 和药学上可接受的载体。上述任一实施方式中的抗体或其抗原结合片段被包含在其中。
在进一步实施方式中，组合物包含了超过一种的抗GM-CSF抗体、片段或其组合， 每一种是在此提供的。例如，所述组合物可以进一步包含第二种分离的结合hGM-CSF的抗 体或其抗原结合片段，使得所述组合物包含超过一种/型的抗体、其抗原结合片段或其组 合，每一种均结合GM-CSF。在一些实施方式中，上述多种结合hGM-CSF的抗体、其抗原结合 片段或其组合中的至少一个是选自由SEQ ID NO 10-80，152-245，320-323和348-365组成 的组的多肽。本发明也涉及适用于治疗hGM-CSF引起的疾病的药物组合物，其包含根据在此 的任一实施方式的抗hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合部分，以及药学上可接受的载体。 由hGM-CSF过量产生引起的疾病的例子包括(a)变应性疾病(allergic diseases), 如哮喘(asthma)，特应性(atopy)和花粉症(pollinosis)(变应性鼻炎(allergic rhinitis)，枯草热(hay fever)) ； (b)移植物排斥(graft re jection)，移植物抗宿主病 (graft-versus-host disease) (GVHD)；禾口(c)自身免疫性疾病(autoimmune diseases)如 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)。这样的组合物或兽药组合物可以包含特异于同一特定抗原的多种抗hGM-CSF单 克隆抗体或它们的抗原结合部分，以及药学上可接受的载体。在一些实施方式中，药用组合物或兽药组合物的特征在于，多种抗hGM-CSF单克 隆抗体或它们的抗原结合部分包含两型(type)或更多型的抗体或它们的抗原结合部分， 可以选自下述的(a)和(b)(a)具有由 SEQ ID NO 4-9，SEQ ID NO :330_335，SEQ ID NO :336_341，或 SEQ ID NO 342-347的氨基酸序列表示的⑶R，特异于hGM-CSF的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原 结合部分；(b) (a)的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其氨基酸序列中有一个或更 多个氨基酸被取代、缺失、插入或添加，且特异于hGM-CSF。当hGM-CSF诱导TF-I细胞增殖时，在各自约55pM的浓度下，这样的药用组合物或 兽药组合物可抑制TF-I细胞增殖达80%或更多。本发明的方面还涵盖试剂盒，其包含在此涵盖的任一组合物和一个或更多个容 器。在一些实施方式中，试剂盒进一步包含说明书。在一些实施方式中，试剂盒进一步包含 标签、说明书或者标签和说明书二者。还提供了在此描述的抗体或其抗原结合片段，或者包含这样的抗体或其片段的组 合物的用途。在此描述的任何抗hGM-CSF抗体或其抗原结合片段或组合物可用于生产或制 备药物，用于治疗受试者中与hGM-CSF过表达相关的疾病或病症，其中所述抗体或其抗原 结合片段结合hGM-CSF并能够中和hGM-CSF活性。在一些实施方式中，疾病或病症选自由 个曼性阻塞性月市疾病(chronic obstructive pulmonary disease) (COPD)、哮喘(asthma)、 囊性纤维化病(cystic fibrosis)、间质性肺病(interstitial lung disease)、鼻炎 (rhinitis)、关节炎(arthritis)及相关关节病(arthropathies)、银屑病(psoriasis)、髓 系白血病(myeloid leukemia，)、多发性硬化(multiple sclerosis)组成的组。对于所描述的用途，抗体或抗原结合片段以不超过最大耐受剂量施用给受试者， 其中，最大耐受剂量为每剂约500mg。本发明的一个方面包括任一实施方式描述的抗体或其抗原结合片段或组合物在治疗受试者中与hGM-CSF过表达相关的疾病或病症中的用途，其中所述抗体或其抗原结 合片段结合hGM-CSF并能够中和hGM-CSF活性。例如，疾病或病症可以是慢性阻塞性肺疾 病(COPD)、哮喘、囊性纤维化病、间质性肺病、鼻炎、关节炎及相关关节病、银屑病、髓系白血 病或多发性硬化。所述的用途包括给患者施用不超过最大耐受剂量本发明描述的抗体或 其抗原结合片段或包含所述抗体或其抗原结合片段的组合物，其中最大耐受剂量为每剂约 500mgo本发明还提供了用抗hGM-CSF抗体或其片段治疗患有hGM-CSF异常表达相关疾病 或病症的受试者的方法。所述方法包括向被诊断患有或存在风险患有hGM-CSF异常表达 (如，过表达)相关疾病或病症的受试者以有效获得受试者中至少一种治疗效果的量施用 包含体内中和hGS-CSF活性的抗hGM-CSF抗体或其抗原结合片段的组合物。本发明还包括增强抗hGM-CSF抗体介导的hGM-CSF中和活性的方法，其特征在于 多种特异于同一特定抗原的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分同时被施用。在一些 实施方式，两种或更多种的抗体或其抗原结合部分选自下面的(a)和(b)(a)具有 SEQ ID NO 4-9，SEQ ID NO :330_335，SEQ ID NO :336_341，或 SEQ ID NO 342-347的氨基酸序列所示的⑶R，特异于hGM-CSF的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原 结合部分；和(b) (a)的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其中一个或更多个氨基酸被 取代、缺失、插入或添加，且特异于hGM-CSF。本发明还包括增强活性的方法，其特征在于，当hGM-CSF诱导TF-I细胞增殖时，在 各自约55pM的浓度下，两种或更多种的抗体或其抗原结合部分抑制TF-I细胞增殖达80% 或以上。本发明还提供了被在此描述的抗体或其抗原结合片段识别的hGM-CSF表位。多肽 中hGM-CSF的表位在SEQ ID NO :2和3中列出，其中该本文被根据本发明公开内容的抗体 或其抗原结合片段识别，且其中所述多肽序列代表hGM-CSF(基于SEQ ID NO=D的不连续 的区段。所述表位是人GM-CSF的不连续的区段，其中所述表位包含人GM-CSF (SEQ ID NO 1)的77-80位氨基酸残基和人GM-CSF (SEQ ID NO 1)的95-104位氨基酸残基的全部或一 部分，且所述表位被包含如SEQ ID NO 4-9或SEQ ID NO 330-335所示的6个不同CDR的 抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段识别。本发明还提供了本发明的表位的用途。本发明还包括特异性结合在此描述的表位 的分子的筛选和/或鉴定方法，所述表位被在此提供的抗体或其抗原结合片段识别。一些 实施方式涉及结合在此描述的表位的分子的鉴定方法，包括(i)使用包含表位的探针筛 选生物样品或肽库；(ii)分离特异性结合探针的分子；及(iii)鉴定所述分子。结合所述 表位的分子可以是，例如，抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段。一些实施方式涵盖进 一步包含可检测的标记的探针。在一些实施方式中，所述方法包括被固定的探针。本发明还提供了生产抗hGM-CSF抗体或其抗原结合片段的方法或过程。本发明包 括在宿主细胞中生产结合hGM-CSF的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其 中所述抗体或其抗原结合片段至少包含含有Vh-⑶Rl的共有序列，含有Vh-⑶R2的共有序 列，含有Vh-CDR3的共有序列，含有VfCDRl的共有序列，含有Vf CDR2的共有序列，和含有 Vf⑶R3的共有序列。所述方法包含步骤
(i)获得包含至少一个DNA序列的宿主细胞，所述序列至少编码含有Vh-⑶Rl的共 有序列，含有Vh-CDR2的共有序列，含有Vh-CDR3的共有序列，含有VfCDRl的共有序列，含 有Vf⑶R2的共有序列，和含有Vf⑶R3的共有序列，其中(a)含有 Vh-CDRI 的共有序列是 FTFSX1X2MiKSEQ ID NO 314)，其中 X1 是 Y 或 H，且 X2是G或A，(b)含有 Vh_CDR2 的共有序列是 X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G (SEQ ID NO :315)，其中 每个Xn互相独立地是任何天然存在的氨基酸，X3是L或V，X4是T或I，X5是Y或W，X6是R 或K，X7是F或Y，且X8是R或K，(c)含有 Vh-CDR3 的共有序列是 EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQ ID NO :316)，其中每个 Xn 互 相独立地是任何天然存在的氨基酸，X9是M或V，且Xltl是A或G，(d)含有 Vl-CDRI 的共有序列是 XnGNXnXnNIGSX11AVG (SEQ ID NO 317)，其中每个 Xn 互相独立地是任何天然存在的氨基酸，且X11是H或Y，(e)含有 Vl-CDR2 的共有序列是 GX12SPX13SG (SEQ ID NO :318)，其中 X12 是 R 或 K， 且X13是A或P，且(f)含有 Vl-CDR3 的共有序列是 STWDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO :319)，其中 X14 是1 或 S，且X15是V或L ；(ii)在宿主细胞中表达所述DNA ；和(iii)在适合DNA表达并和抗体或其抗原结合片段生成的条件下培养宿主细胞。在一些实施方式中，至少一个DNA编码重链或其部分和轻链或其部分，其中所述 的重链或其部分选自由 SEQ ID NO 10-33，38-80，152-183，222-245，348-362 和 363 组成的 组，且其中所述的轻链或其部分具有选自由SEQ ID NO :34-37，184-221，364和365组成的 组的序列。上述过程可以进一步包括分离抗体或其抗原结合片段。上述过程可以进一步包括制备组合物，所述组合物包含所述抗体或其抗原结合片 段和药学上可接受的载体。还提供了载体，所述载体包含编码在此描述的抗体或其抗原结合片段的至少部分 的DNA。还提供了表达这样的载体的宿主细胞。在一些实施方式中，载体包含编码Vh-OTRI, Vh-⑶R2和Vh-⑶R3的DNA，其中Vh-CDRI 是 SYGMH(SEQ ID NO 4)或 SHAMH(SEQ ID NO 333)，VH-CDR2是LTYHHGNRKFYADSVRG(SEQ ID NO :5)或VIWHDGSKKYYADSVKG(SEQ ID NO: 334)，且Vh-CDR3 是 ESMGAINDN(SEQ ID NO 6)或 EWVGGTCDS (SEQ ID NO 335)。在一些实施方式中，载体包含编码Vl-⑶Rl，Vl-⑶R2和Vf⑶R3的DNA，其中Vl-CDRI 是 IGNNNNIGSHAVG(SEQ ID NO 7)或 SGNSSNIGSYAVG(SEQ ID NO 330)，Vl-CDR2 是 GRSPPSG(SEQ ID NO 8)或 GKSPASG(SEQ ID NO 331)，且Vl-CDR3 是 STWDSSLSAW (SEQ ID NO 9)或 STWDSRLSAVL (SEQ ID NO 332)。在本发明的一些实施方式中，分离的DNA编码能够结合hGM-CSF并中和hGM_CSF 生物活性的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于分离的DNA编码包含选 自由SEQ ID NO :4至9组成的组的至少一个的氨基酸序列。在一些实施方式中，分离的DNA编码能够结合hGM-CSF并中和hGM-CSF生物活性的抗hGM_CSF单克隆抗体或其抗原结合部 分，其特征在于分离的DNA编码包含选自由SEQ ID NO 330至335组成的组的至少一个的 氨基酸序列。分离的DNA可以在严紧条件下能够与上述的DNA杂交。包含任何这样的DNA 的载体，和表达重组表达载体的宿主细胞也包括在本发明的方面中。附图的简要说明

图1显示了分离抗体产生细胞克隆的流程图。图2显示了抗GM-CSF单克隆抗体的亲和力分析方案。图3显示了在GM-CSF存在条件下，抗GM-CSF单克隆抗体对外周血树突状细胞增 殖抑制效果的评价。图4显示了在酵母hGM-CSF (Leukine)存在条件下，抗GM-CSF单克隆抗体对TF-1 细胞增殖抑制效果的评价。图5显示了在大肠杆菌存在条件下，抗GM-CSF单克隆抗体 对TF-I细胞增殖抑制效果的评价。图6显示了在酵母hGM-CSF (Leukine)存在条件下，组合使用两种抗GM-CSF单克 隆抗体对TF-I细胞增殖抑制效果的评价。图7显示了在大肠杆菌存在条件下，组合使用两种抗GM-CSF 单克隆抗体对TF-I细胞增殖抑制效果的评价。图8是表示人GM-CSF (8A)和恒河猴GM-CSF (8B)的剂量依赖性抑制的两个图。图9A是从来自暴露于香烟烟雾的小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF)团粒测得的髓 过氧化物酶(MPO)活性条形图。-CS 用媒介处理的小鼠(在第1天和第3天腹膜内300μ 1 媒介)，未暴露于香烟烟雾。+CS,同种型抗体在第1天和第3天腹膜内用300 μ 1同种型抗 体处理，暴露于香烟烟雾的小鼠。+CS，抗GM-CSF抗体在第1天和第3天腹膜内用300 μ 1 抗GM-CSF抗体处理，暴露于香烟烟雾的小鼠。η = 10只每组，均值士SEM，*ρ < 0. 05, ***ρ < 0. 001。图9Β是两幅表示BALF上清液中测定的细胞因子的条形图。左侧MCP_1水平的测 定。右侧ΜΙΡ-1 α水平的测定。-CS 用媒介处理的小鼠(在第1天和第3天腹膜内300 μ 1 媒介)，未暴露于香烟烟雾。+CS,同种型抗体在第1天和第3天腹膜内用300 μ 1同种型抗 体处理，暴露于香烟烟雾的小鼠。+CS，抗GM-CSF抗体在第1天和第3天腹膜内用300 μ 1 抗GM-CSF抗体处理，暴露于香烟烟雾的小鼠。η = 10只每组，均值士SEM，*ρ < 0. 05, ***ρ < 0. 001。发明详述如在此描述的，抗hGM-CSF单克隆抗体是自抗体产生细胞获得的，所述的抗体产 生细胞衍生自特发性肺泡蛋白沉积症患者的血液。在一个实施方式中，本发明的抗hGM-CSF 单克隆抗体或其抗原结合部分是自衍生自特发性肺泡蛋白沉积症患者血液的抗体产生细 胞获得的。因而，在本发明的一个实施方式中，抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段是 完全人的单克隆抗体。因此，当抗体制品施用给人体时，将触发免疫原性的风险降至最低。本发明要解决的问题如下本发明旨在提供展现提高的针对hGM-CSF的中和能力 或活性的GM-CSF结合单克隆抗体及其GM-CSF结合片段，和包括至少一种或型这样的抗体 或其片段的组合物，以及与hGM-CSF过表达(在患有状况、疾病或病症的个体中，hGM-CSF水平高于不患有所述状况、疾病或病症的个体中的)相关的状况或疾病的治疗方法。本发明公开内容中描述的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段特异地结合 hGM-CSF，并降低或消除(中和)其生物活性，hGM-CSF的异常表达能引起各种疾病。抗 hGM-CSF单克隆抗体展现了(针对hGM-CSF的)中和活性，其高于以前存在的抗hGM-CSF单 克隆抗体。特别是，本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体是人单克隆抗体，不具有免疫原性，不 诱导免疫反应。所谓“特异结合”是指抗体高亲合力(avidity)和/或高亲和力(affinity)结合 特定的多肽，例如，蛋白如人GM-CSF蛋白的表位。抗体对这种特定多肽上的表位的结合优 选地强于所述抗体对任何其他表位的结合，尤其是那些可能存在于与同一样品相关的或在 同一样品中的分子中，因为例如，感兴趣的多肽更强地结合蛋白如GM-CSF上的表位片段， 以至于通过调节结合条件，抗体几乎专门结合目标蛋白上的表位位点或片段，如通过处理 GM-CSF而暴露的表位片段，且所述表位片段在同一亚家族的相关因子上不暴露。本发明的 分离的抗体优选地与特定的物种是免疫反应性的并对特定物种具有免疫特异性。比如，本 发明的抗体识别人GM-CSF，可以识别恒河猴GM-CSF和/或狨猴GM-CSF，但一般不识别鼠对 应物。应该理解本发明这个方面公开的抗体及其抗原结合片段识别天然构象的或充分接近 天然构象的抗原上的表位，在结构研究中观察到抗原的不连续片段聚集在一起，在完整抗 原(如，hGM-CSF)的背景内极其接近，从而协作形成被本发明的抗体识别的表位(例如，抗 原表面上的"口袋")。因此，本发明这个方面所述的抗体或其抗原结合片段不与包含形 成上述表位的两个多肽序列、不是GM-CSF的蛋白交叉反应。应该理解，在抗体-抗原结合 的上下文中，结合被认为是“特异的”，其由相互作用性质决定的。因此，“结合GM-CSF的抗 体”应解释为特异性结合抗原(即GM-CSF)。此处使用的术语“抗体”表示4条多肽链，2个重链和2个轻链通过二硫键互相连 接的免疫球蛋白分子。单克隆抗体可以通过单克隆或重组技术产生。所述技术在本领域是 熟悉的。术语"抗原结合部分"和"抗原结合片段"可互换使用，描述抗体的任何缩短的 变体，其优选地展现与抗原(如hGM-CSF)的特异的抗原结合活性。特别地，本发明的片段 是指与相应的单克隆抗体在相同的表位结合hGM-CSF的片段。片段可以是，比如说，展现上 述特点的Fab片段或任何其他片段。此外，抗体片段还包括单链抗体(scFV)，双特异性抗 体，和多特异性抗体，单链抗体中掺入了抗体可变区和互补决定区(CDR)。此处使用的“生物活性”是生物学活性的同义词。因此，“hGM-CSF生物活性”是 如本文所述的体内或基于细胞的分析确定或测定的hGM-CSF的生物学功能。更具体地说， hGM-CSF的生物活性，可以从细胞增殖分析中测得。使用了已知的对hGM-CSF作出反应的 细胞系。典型地，对于人细胞系统，将人红白血病细胞系TF-I用于进行增殖分析。TF-I是 从红白血病病人建立的细胞系。所述分析在本领域已较好地确立，其基于对GM-CSF刺激的 TF-I细胞的细胞增殖的抑制作用。其他细胞系也可能适用。本领域的普通技术人员能够选 择合适的分析体系或条件。TF-I细胞增殖分析在不同浓度的野生型重组人GM-CSF (称作rhGM_CSF)存在下 进行。根据这些数据，可以得到剂量-依赖性曲线。在TF-I细胞增殖中，引起80%最大生 物学应答所需的GM-CSF浓度在本文中被定义为ED8tl或ED80。因此，ED80代表最大应答的 “80%时的有效剂量”。类似地，在生物分析中，引起一半最大应答所需的GM-CSF浓度表示为ED50或ED50。典型地，利用人GM-CSF依赖的TF-I细胞系，在细胞增殖分析中测得的GM-CSF ED50 值为 0. 02-lng/ml。所述分析体系或其他任何类似的分析体系可以用来鉴别或测定hGM-CSF抑制剂 或拮抗剂的活性。例如，增殖分析体系可以被用来测定抗hGM-CSF抗体的中和能力。其他 测定GM-CSF生物功能的分析例子包括IL-8分泌分析与诱导表面⑶llb/Macl分析。术语“中和作用”，“中和”，“中和的”和类似词语，指对生物活性因子如hGM-CSF的 生物活性的抑制作用。因此，具有中和能力或中和活性的抗hGM-CSF抗体是指抗体在生物 系统中能够与hGM-CSF结合并拮抗或抵消hGM-CSF的生物活性，比如hGM-CSF在生物系统 中如TF-I细胞中的增殖作用，从而实质性抑制或消除hGM-CSF的生物学活性。术语例如“抑制作用”，“抑制”，“能抑制”和“抑制”意指抑制目标抗原引起的生物 活性的5 %至100 %，但不受它的来源限制。理想情况下，用于治疗目的，对hGM-CSF生物活 性的抑制作用应在50%到100%之间。一般来说，IC5tl是化合物抑制生物学或生物化学功能的有效性的一个度量。这个定 量的度量表明特定的药物或其他制剂(抑制剂)抑制指定的生物过程(或过程中的成分， 如酶、细胞、细胞受体或微生物)的一半所需的量。换言之，它是物质最大抑制浓度(IC)的 一半(50% ) (50% IC，或IC5tl)。它通常在药理研究中用来作为拮抗药物效力的度量。根据 美国食品和药物管理局采用的准则，IC5tl代表了体外50%抑制所需的药物浓度。因此，针对hGM-CSF的中和抗体的IC5tl可以通过构建剂量-反应曲线并检测不同 浓度的中和抗体对hGM-CSF增殖活性的抵消作用来测定。对于给定的拮抗剂，IC5tl值可以 通过测定抑制激动剂最大生物反应的一半所需要的浓度计算出。根据不同的实施方式，每个情况下如在ED80的TF-I的增殖分析中测定的，抗 hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段具有小于20pM，小于25pM，小于30pM，小于40pM，小 于50pM，小于60pM，小于70pM，小于80pM，小于90pM或小于ΙΟΟρΜ。在特定的实施方式中，如 在ED80的TF-I的增殖分析中测定的，该抗体或其抗原结合片段具有小于20pM，小于25pM， 小于30pM或小于40pM的IC50值。本发明公开的抗hGM-CSF单克隆抗体包括包含2条重链和2条轻链的免疫球蛋白 分子。每条重链包含重链可变区(简称"HCVR"或"Vh")和重链恒定区(重链恒定区有3 个结构域，简称〃 CHl"、“ CH2"和〃 CH3")。每条轻链包含轻链可变区(简称〃 LCVR" 或")和轻链恒定区(轻链恒定区有1个结构域，简称"(V' )。HCVR和LCVR对于抗 体的结合特异性特别重要。可变区的氨基酸序列负责抗体与抗原之间大部分的相互作用。因此，当构建的表 达载体在来自具有不同性质的其他抗体的框架序列中具有来自天然抗体的可变区序列时， 产生的载体能够表达模拟天然抗体性质的重组抗体。因此，当生产与原抗体具有类似结合 特性的完整重组抗体时，没有必要获得特定抗体的全部序列。涵盖可变区的重链和轻链部 分序列有时足以实现所述目的。抗体与目标抗原的相互作用主要是通过LCVR和HCVR的氨基酸残基。因此，可变 区氨基酸序列在不同抗体间的变化远多于可变区外的。HCVR和LCVR进一步细分为相对稳 定的“框架区(FR)，，和超变的“互补决定区(CDR) ”。每个HCVR和LCVR各由3个CDR和4 个FR组成。从氨基端到羧基端，它们的顺序是FRl，CDRl，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4。
与抗体每个结构域包括超变区，如CDR相对应的氨基酸残基的确定或预测方法是 本领域熟知的。常用的方法包括Chothia，AbM和Kabat。一般来说，抗体与抗原结合的亲和力至少约1 X IO-7M,并且抗体结合某些抗原的亲 和力至少是相比其对非特异抗原(如BSA和酪蛋白)的亲和力的两倍。对于某一 IgG抗体，术语"高亲和力"是指抗体的结合亲和力为至少约IX 10_7M， 优选至少约1 X IO^8M,更优选至少1 X IO-9M,特别优选至少1 X 10_1QM。“高亲和力"的定义在抗体的同种型间是不同的。例如，IgM同种型具有至少 1 X IO-7M的结合亲和力即定义为高亲和力。本发明的抗体正如本文所述，本发明涉及抗人GM-CSF(抗hGM_CSF)单克隆抗体及其片段，其中 和hGM-CSF的能力超过针对hGM-CSFB的现有的单克隆抗体(超过目前可利用的单克隆抗 体)。可以使用或施用在此描述的所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其片段的一型(type)或种 (kind)ο作为选择，超过一型(type)或种(kind)的抗hGM-CSF单克隆抗体可以一起使用 或施用。发明人发现，当超过一型或种的抗GM-CSF单克隆抗体一起使用时，它们提供更高 的中和活性(例如，更高的细胞生长抑制活性)。此外，一或更多型或种的抗hGM-CSF单克 隆抗体或其片段可以与一种或更多种其他的非抗体治疗剂，如小分子，RNAi或肽联合使用 或施用。一方面，提供了识别并特异结合hGM-CSF的分离的单克隆抗体及其抗原结合片 段。此处所述的是与hGM-CSF结合，且展现对hGM-CSF生物活性的中和能力或中和活性的 分离的抗hGM-CSF单克隆抗体及其抗原结合片段(与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆 抗体及其与hGM-CSF结合的抗原结合片段)。在一个实施方式中是分离的抗hGM-CSF单克 隆抗体及其抗原结合片段，其与hGM-CSF结合并展现针对hGM-CSF的中和能力或活性，其 中所述单克隆抗体及其抗原结合片段识别hGM-CSF(SEQ ID NO 1)中的ELYK (SEQ IDNO 2)和TMMASHYKQH(SEQ ID NO :3)。与hGM-CSF结合的分离的抗hGM-CSF单克隆抗体及其抗 原结合片段，其中所述单克隆抗体及其抗原结合片段识别hGM-CSF中的ELYK (SEQ ID NO 2)和TMMASHYKQH(SEQ ID NO :3)，展现对hGM-CSF活性的中和能力或活性且对治疗和预防 hGM-CSF过表达相关的疾病、状况或病症是有用的。一个特定的实施方式是与hGM-CSF结 合的分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段识别 hGM-CSF中的下列不连续的表位，如所定义的(SEQ ID NO :1)，相应于氨基酸hGM_CSF的 77-80 位 ELYK (SEQ ID NO 2)和 hGM-CSF 的 95-104 位 TMMASHYKQH(SEQ ID NO :3)。此处 所述的分离的抗hGM-CSF单克隆抗体及其抗原结合片段特异地结合hGM-CSF。他们不与 GM-CSF以外的蛋白交叉反应。更特异地，在此描述的是特异地结合hGM-CSF并具有能力中和hGM-CSF的生物活 性的单克隆抗体。在此描述的四种这样的抗体被命名为EV1018，EV1019，EV1003和EV1007， 总结在实施例的表1和2中。因此，EV1018, EV1019, EV1003和EV1007结合hGM-CSF并能 中和hGM-CSF的促生长作用。更详细地显示，EV1018和EV1019抗体识别hGM-CSF蛋白中 相同或实质上重叠的表位。本发明进一步包括抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，特征在于所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分具有一氨基酸序列，其中在互补决定区(CDR)中一 个或更多个氨基酸被替代、缺失、插入或添加。在进一步的方面，提供了编码能够结合hGM-CSF并中和hGM_CSF生物活性的抗 hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分的分离的脱氧核糖核酸(DNA)，其特征在于所述分 离的DNA编码一氨基酸序列，其包含选自由SEQ ID NO :4_9组成的组的至少一个。本发明的一个实施方式涉及能够结合hGM-CSF (hGM-CSF)并中和 hGM-CSF (hGM-CSF)生物活性的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于所述 抗hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合部分具有互补决定区(⑶R)，其由选自由SEQ ID NO 4-9 组成的组的至少一个氨基酸序列表示。本发明的另一个实施方式涉及能够结合hGM-CSF并中和hGM-CSF生物活性的抗 hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合部分，特征在于所述的抗hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合 部分具有互补决定区(⑶R)，其由选自由SEQ ID N0:330-335组成的组中的至少一个氨基 酸序列表示。本发明中，具有由选自由SEQ ID NO :4_9组成的组的一种或更多种氨基酸序列表 示的互补决定区(OTR)的抗hGM-CSF单克隆抗体，以及，具有由选自由SEQ ID NO 330-335 组成的组的一种或各种氨基酸序列表示的互补决定区(CDR)的抗hGM-CSF单克隆抗体，被 认为是不同种的抗hGM-CSF单克隆抗体。互补决定区(CDR)中一个或更多个氨基酸缺失、取代、插入或增加的单克隆抗体 或其抗原结合部分，只要特异结合hGM-CSF并中和其生物活性，会被包括在本发明中。本发明包括能够结合hGM-CSF并中和hGM-CSF生物活性的单克隆抗体或其抗原结 合部分，其中所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分具有选自下面的组的CDR (a)轻链(L链)CDRl，其具有氨基酸序列SEQ ID NO 7，(b)轻链(L链)CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO :8，和(c)轻链(L链)CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO :9。同样地，本发明包括能够结合hGM-CSF并中和hGM-CSF生物活性的单克隆抗体或 其抗原结合部分，其中所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分具有选自下面的组的 CDR (d)轻链(L链)CDRl，其具有氨基酸序列SEQ ID NO 330，(e)轻链(L链)CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO 331，和(f)轻链(L链)CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO 332。下面的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，当特异结合hGM-CSF并中和其 生物活性时，也包括在本发明中抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其中上述的轻 链互补决定区(CDRs)被一个或更多个氨基酸的缺失、替代、插入或添加修饰。本发明包括能够结合hGM-CSF并中和hGM-CSF生物活性的抗hGM-CSF单克隆抗体 或其抗原结合部分，其中所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分具有选自下面的组 的 CDR (a)重链(H链)CDRl，其具有氨基酸序列SEQ ID NO :4，(b)重链(H链)CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO 5，和(c)重链(H链)CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO :6。
同样地，本发明包括能够结合hGM-CSF并中和hGM-CSF生物活性的单克隆抗体或 其抗原结合部分，所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分具有选自下面的组的CDR (a)重链(H链)CDRl，其具有氨基酸序列SEQ ID NO 333(b)重链(H链)CDR2，其具有氨基酸序列SEQ ID NO :334，和(c)重链(H链)CDR3，其具有氨基酸序列SEQ ID NO 335。下面的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分特异结合hGM-CSF并中和其生物 活性时，也包括在本发明中抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其中上述的重链互补决定区(OTR)被 一个或更多个氨基酸的缺失、替代、插入或添加修饰。GM-CSF 表位也是此处的主题的是hGM-CSF的表位，所述表位是人GM-CSF的不连续区段，其中 所述表位包含人GM-CSF (SEQ ID NO 1)的77-80位氨基酸残基和人GM-CSF (SEQ ID NO 1) 的95-104位氨基酸残基，定义为SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3中所列的多肽序列，被包含 SEQ ID N0:4-9或SEQ ID NO :330_335所示的6个不同CDR的抗hGM-CSF单克隆抗体或其 抗原结合片段识别。如实施例中更详细的描述，单克隆抗体EV1018和EV1019识别的hGM-CSF表位已 通过表位作图研究确定。发现，EV1018和EV1019 二者识别相同(或实质上重叠)的hGM-CSF 抗原位点，其对应于GenBank登录号NP_000749所确定的77-80和95-104位氨基酸残基。 结构研究表明，虽然这两个区段在一级序列上是不连续，但是多肽的两个区段折叠时相互 靠近，共同形成构象表位。EV1018和EV1019的⑶R序列分析显示出实质的相似性，这与 EV1018和EV1019识别相同或实质上重叠的表位的观察结果一致。比较这两个抗体的⑶R 的肽序列，得到下面的共有序列(如，公式)，代表构成每个CDR的重叠(如，共有)残基对于Vh-CDRI =FTFSX1X2MiKSEQ ID NO :314)，其中 X1 是 Y 或 H，且 X2 是 G 或 A ；对于 Vh-CDR2 X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G (SEQ ID NO 315)，其中每个 Xn 互相独立 地是任何天然存在的氨基酸，或V，或I，&是￥或W，或K，&是？或 Y，且X8是R或K ；对于Vh-CDR3=EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQ ID NO :316)，其中每个Xn互相独立地是任何天 然存在的氨基酸，X9是M或V，且Xltl是A或G ；对于VfCDRl =XnGNXnXnNIGSX11AVG (SEQ ID NO :317)，其中每个 Xn 互相独立地是任 何天然存在的氨基酸，且X11是H或Y ；对于Vf CDR2 =GX12SPX13SG (SEQ ID NO :318)，其中 X12 是 R 或 K，且 X13 是 A 或 P ；且对于VL-CDR3 STWDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO :319)，其中 X14 是 R 或 S，且 X15 是 V 或 L0每个共有公式中，构成相应CDR的氨基酸残基以常用的单字母形式表示。EV1018 和EVlO 19共享的相同残基也被表示出来。相应地，此处的另一个实施方式是与hGM-CSF结合并展现对hGM-CSF的中和能力 或活性的分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片 段包含(a)重链或，当为抗体片段时，重链的一部分，其包含(i)含有Vh-CDRI的共有序列 FTFSX1X2MH(SEQ ID NO 314)，其中 X1 是 Y 或 H，且 X2 是 G 或 A，(ii)含有 VH_CDR2 的共有序列X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G (SEQ ID NO 315)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在 的氨基酸，或V，乂‘是！1或I，&是￥或W，乂6是1 或K，&是？或Y，且乂8是1 或K， 和(iii)含有 VH-CDR3 的共有序列 EXnX9GXltlQXnXnDXn(SEQ ID NO :316)，其中每个 Xn 相互独 立地是任何天然存在的氨基酸，X9是M或V，且Xltl是A或G ；和(b)轻链或，当为抗体片段 时，轻链或其一部分，其包含(i)含有VfCDRl的共有序列XnGNXnXnNIGSX11AVG (SEQ ID NO: 317)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，且X11是!1或Y，(ii)含有V^⑶R2 的共有序列GX12SPX13SG (SEQ ID NO :318)，其中X12是R或K，且X13是A或P，和(iii)含有 Vl-CDR3 的共有序歹Ij STffDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO :319)，其中 X14 是 R 或 S，且 X15 是 V 或 L ；且 其中所述的抗体或其片段识别hGM-CSF中的ELYK (SEQ IDNO :2)和TMMASHYKQH(SEQ ID NO: 3)。在一个特定的实施方式中，抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段结合hGM-CSF (SEQ ID NO 1)中的下述不连续的表位ELYK(SEQ ID NO 2)和 TMMASHYKQH(SEQ ID NO :3)。在此描述的另一个实施方式是分离的与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体或 其与hGM-CSF结合的抗原结合片段，其中所述抗体或其片段包含(a)重链，或为抗体片段 时，重链的一部分，其包含⑴含有Vh-CDRI的共有序列FTFSX1X2MiKSEQ ID N0:314)，其中 X1 是 Y 或 H，且 X2 是 G 或 A，(ii)含有 Vh-CDR2 的共有序列 X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G(SEQ ID NO :315)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，^是！^或乂，&是！“或工， X5是Y或W，X6是R或K，X7是F或Y，且X8是R或K，和(iii)含有VH_CDR3的共有序列 EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQ ID NO :316)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，X9 是M或V，且Xltl是A或G ；和(b)轻链，或为抗体片段时，轻链或其一部分，其包含(i)含 有Vf⑶Rl的共有序列XnGNXnXnNIGSX11AVG(SEQ ID NO 317)，其中每个Xn相互独立地是 任何天然存在的氨基酸，且、是11或Y，(ii)含有Vl_CDR2的共有序列GX12SPX13SG (SEQ ID NO 318)，其中X12是R或K，且X13是A或P，和(iii)含有\_CDR3的共有序列 STffDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO :319)，其中X14是R或S，且X15是V或L ；且其中实施抗体或其 片段结合hGM-CSF的Kd不超过400pM，在另一个实施方式中Kd小于160pM，Kd是根据实施例 11描述的技术测定的。另一个实施方式中，抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段特征在于， 抗hGM-CSF单克隆抗体或它的抗原结合抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段抑 制外周血树突状细胞的增殖。因而，进一步的实施方式是分离的与hGM-CSF结合的抗 hGM-CSF单克隆抗体或其与hGM-CSF结合的抗原结合片段，所述抗hGM-CSF单克隆抗体 或其片段包含重链或其一部分和轻链或其一部分。重链或，当为抗体片段时，重链的一 部分，可以包含Vh-OTRI, Vh-⑶1 2和Vh-⑶R3。在一些实施方式中，共有序列表示为式子 FTFSX1X2MH(SEQ ID NO :314)，其中X1是Y或H，且X2是6或A，其构成Vh-CDRI。类似地，式子 X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G (SEQ ID NO 315)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨 基酸，X3是L或V，X4是T或I，X5是Y或W，X6是R或K，X7是F或Y，且X8是R或K，表示构 成VH-CDR2的共有序列；而式子EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQ ID NO :316)，其中每个Xn相互独立地 是任何天然存在的氨基酸，X9是M或V，且Xltl是A或G，表示构成Vh-⑶R3的共有序列。轻链 或，当为抗体片段时，轻链或其一部分可以包含Vf⑶Rl，Vf⑶R2和Vf⑶R3。在所述实施方 式中，式子XnGNXnXnNIGSX11AVG(SEQ ID NO :317)，其中每个Xjg互独立地是任何天然存在的 氨基酸，且X11是11或Y，表示构成Vl-CDRI的共有序列；式子GX12SPX13SG (SEQ ID N0:318)，其中X12是R或K，且X13是A或P，表示构成VfCDR2的共有序列；而式子STWDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO 319)，表示构成Vl-CDR3的共有序列。在任一实施方式中，抗体或其片段中和hGM-CSF活性。在特定的实施方式中，抗 hGM-CSF单克隆抗体或其片段中和hGM-CSF活性，使得在如实施例12中所述的TF-I增殖 分析的每个例子中，ED80时实施测定的所述抗体或片段在增殖抑制分析中的IC50值小于 20pM,小于30pM,小于40pM,小于50pM,小于60pM,小于70pM,小于80pM,小于90pM或小于 IOOpM0在特定的实施方式中，所述的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段在所述的 TF-I增殖分析中ED80时测定的IC50值小于40pM或小于30pM。在特定的实施方式中，所 述的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段在所述的TF-I增殖分析中ED80时测定的 IC50值小于25pM或小于20pM。在进一步的实施方式中，本发明提供了抗hGM-CSF单克隆 抗体或其抗原结合片段，其特征在于抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段在浓度为约 14pM时，当TF-I细胞由hGM-CSF的诱导增殖时，抑制约50%的TF-I细胞增殖。如实施例中更详细的说明，EV1018和EV1019都有效地中和hGM-CSF生物活性。 由于这些抗体实质上共享相同的上述构象表位，有可能使用该表位去筛选识别该表位的其 他分子，如单克隆抗体或片段。因此，本发明还涵盖筛选方法，其中如SEQ ID NO :2和SEQ ID NO 3所示多肽序列限定的，被EV1018，EV1019或其变体识别的hGM-CSF表位。这样的 方法包括(i)用包含表位的探针筛选生物样品或肽库；(ii)分离特异结合探针的分子；和 (iii)鉴定所述分子。在一个实施方式中，所述方法进一步包括生产分子的步骤。一些实施 方式中，用所述方法鉴定的分子是抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段。在一些情况 下，探针可以进一步包含可检测的标记，包括但不限于标记物，染料，亲和标签等。根据一些 实施方式，例如为了筛选结合分子，探针可固定化。筛选的方法是通常可以获得的，且是技 术人员公知的。在此处所述的任一实施方式中，抗体或其抗原结合片段可以是免疫球蛋白的任何 亚型，例如IgG类，如IgG1, IgG2和IgG4。因此，在此处所述的任一实施方式中，重链可以是， 例如，属于伽玛类，例如伽玛I(Y1),伽玛2(Υ2),伽玛3 ( γ 3)，或伽玛4 ( γ 4)。在上述的实 施方式中，重链可以选自(重链的氨基酸残基选自)由SEQ ID NO: 10-33，38-80和152-245 和348-363所示的多肽组成的组。在一些实施方式中，可以用重链的部分，包括重链可变 区。本发明所述的重链可变区的非限制性例子在SEQ ID NO 152-159和348-363中提供。在抗hGM-CSF单克隆抗体及其抗原结合片段中，轻链可以是λ轻链或其部分，或 κ轻链或其部分。在特定的实施方式中，λ轻链含有一个或两个下列氨基酸取代R100G 和A153G (含有取代R100G，取代A153G，或取代R100G和A153G)。需要注意的是，抗体链的 氨基酸序列中的取代在这里是参照合适的参考氨基酸序列来描述的，从而任何轻链或其片 段中位置100和153的指定，应当根据本发明通过比较SEQ ID NO 35和SEQ ID Ν0:34来 决定，这些氨基酸位置分别相当于与SEQ ID 34序列比较时，SEQ ID NO: 35上R被G取代， A被G取代的氨基酸位置。例如，在上述λ轻链可以包含一个或两个所述的氨基酸取代的 情况中，参考氨基酸序列是 EV1018 轻链(EV1018-wt-original ；SEQ ID NO :34)。R100G 表 示EV1018轻链上第100位的R(精氨酸)被G(甘氨酸)取代；A153G表示EV1018轻链上 第153位的A(丙氨酸)被G(甘氨酸)取代。在特定的实施方式中，轻链选自由(氨基酸残基表示为)SEQ ID NO :34_37和184-221和364-365所列的多肽组成的组。此处所述的轻链可变区的例子提供在SEQ ID NO 184-201 和 364-365。轻链可以包含一个所述的氨基酸取代或两个及更多个所述氨基酸取代的组合，以 及不实质性损害抗体或其抗原结合片段与hGM-CSF结合并中和其活性的能力的其他氨基 酸取代。在一个实施方式中，轻链包含第100位和153位中的一个或全部氨基酸取代，使得 这两个位点中的一个或全部糖基化是不可能的。与hGM-CSF结合的抗hGM_CSF单克隆抗体或其抗原结合片段的重链可以包含一个 或更多个氨基酸取代，如 T97A、T97V、N95D、N95E、N95K、N95Q、N93Q/N95T、K144R、L164A 和 L165A。需要注意的是，抗体链的氨基酸序列中的取代在这里是参照合适的参考氨基酸序 列来描述的。位置决定的原则与上述的R100G和A153G取代的位置决定原则相同。例如， 在上述重链可以包含一个或更多个所述的氨基酸取代的情况中，参考氨基酸序列是EV1018 重链(EV1018 ；SEQ ID NO: 10)。例如，T97A表示EV1018重链上第97位上的T (苏氨酸)被 A(丙氨酸)取代；L164A表示EV1018重链上第164位上的L(亮氨酸)被A(丙氨酸)取 代。重链可以包含一个氨基酸取代或两个及更多个氨基酸取代的组合，以及不实质性 损害抗体或其抗原结合片段结合hGM-CSF并中和其活性的能力的其他氨基酸取代。关于本发明实施方式的进一步的细节概述如下在一个实施方式中，重链含有选自以下组成的组的氨基酸取代中一个或更多个， 或者一个或组合Q3E、T97A、T97V、N95D、N95E、N95K、N95Q、N93Q/N95T、K144R、L164A 和 L165A。在进一步的实施方式中，重链含有一个多个氨基酸取代，选自由Q3E、T97A、T97V、 N卯D、N95E、N95K、N95Q、N93Q/N95T、K144R、L164A和L165A组成的组，并且轻链含有氨基酸 取代R100G和A153G中的一个或两个。进一步的实施方式是与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体或其与hGM-CSF结 合的抗原结合片段，其中Vh-⑶Rl包含氨基酸残基SYGMH(SEQ ID NO 4)或SHAMH(SEQ ID NO 333)。进一步的实施方式是与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体或其与hGM-CSF结 合的抗原结合片段，其中Vh-⑶R2包含氨基酸残基LTYHHGNRKFYADSVRG(SEQ ID NO :5)或 VIffHDGSKKYYADSVKG(SEQ ID NO :334)。进一步的实施方式是与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体或其与hGM-CSF 结合的抗原结合片段，其中Vh-⑶R3包含氨基酸残基ESMGAINDN (SEQ ID NO :6)或 EWVGGTCDS(SEQ ID NO :335)。本发明进一步的实施例如下与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体或其与hGM-CSF结合的抗原结合片段， 其中 Vl-CDRI 包含氨基酸残基 IGNNNNIGSHAVG (SEQ ID NO :7)或 SGNSSNIGSYAVG(SEQ ID NO: 330)；与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体或其与hGM-CSF结合的抗原结合片段， 其中 Vf CDR2 包含氨基酸残基 GRSPPS (SEQ ID NO 8)或 GKSPAS (SEQ ID NO 331)；和与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体或其与hGM-CSF结合的抗原结合片段， 其中 VL-CDR3 包含氨基酸残基 STWDSSLSAW(SEQ ID NO :9)或 STWDSRLSAVL (SEQ ID NO:332)。本发明另外的实施方式涉及与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体或其与 hGM-CSF结合的抗原结合片段，其进一步包含信号序列。信号序列可以是本领域技术人员知道的多种信号序列中的任一个。比如有助于 允许或增强编码产物表达和/或传递出产生它的细胞的任何信号序列，包括但不限于选自 SEQ ID NO :324，325和326组成的组的信号序列。在所有的实施方式中，抗hGM-CSF单克隆抗体可以是人抗体，人源化抗体，或单链 抗体。抗体的结合活性在一个方面中以及意外地，如本公开内容的实施例所示，测得的抗体与抗原 (hGM-CSF)的结合亲和力不是与中和能力(如中和hGM-CSF生物活性的能力)线性相关的。 这个结果与一般认为的较高的亲和力对应于较高的中和能力是相反的。例如，发现的是，此 处公开的抗体即用所述的CDR识别此处所述的表位的抗体，如EV1018，在TF-I分析中，如 表7所述，显示出高于现有抗体100倍以上的抑制作用，但是结合亲和力不足现有抗体的 50%。这与W02006/122797中的教导形成对比，W02006/122797显示抗体越高的亲和力在 TF-I分析中有越高的活性。抗体的中和活性人外周血单核细胞和肿瘤细胞系TF-I可响应hGM-CSF的刺激而增殖。通过测定 对它们增殖的抑制效果，确认抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段的中和活性。众所 周知，人外周血单核细胞和TF-I细胞培养在hGM-CSF存在的条件下可增殖。在培养系统中 加入本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，或首先使hGM-CSF与本发明的抗 hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段反应，然后将其添加至培养系统可抑制这种增殖。例 如，与阴性对照(31pg/ml的hlgG)比较，本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片 段，浓度大约2ng/ml (大约14pM)时，作为中和hGM-CSF诱导的TF-I细胞增殖的活性，具有 细胞抑制率40-60% (大约50% )。本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段具有对hGM-CSF的中和能力， 所述能力高于现有的抗hGM-CSF单克隆抗体。因此，它有望作为治疗药物，适用于较小量或 剂量治疗由hGM-CSF引起的各种疾病，比如变应性皮炎，自身免疫性疾病，慢性阻塞性肺疾 病(COPD)，哮喘，囊性纤维化病，间质性肺病，鼻炎，关节炎和相关关节疾病如类风湿性关节 炎，银屑病，髓系白血病，和多发性硬化。治疗组合物，试剂盒和治疗用途此处公开的抗hGM-CSF抗体和抗原结合片段中和hGM-CSF的生物活性是有效的， 因此，对于治疗受试者中与hGM-CSF异常表达相关(如，由其引起的)医学状况(例如，疾 病或病症)是有用的。因此，这些治疗用途也包括在本发明中。本发明在某些实施方式中提供了治疗在此所述的疾病或状况的方法，包括给患者 施用在此描述的抗体或其抗原结合片段，或在此描述的组合物。此处所用的术语“与hGM-CSF过表达相关的疾病或病症”一般是指“由hGM-CSF引 起的疾病”。所述术语应该包含受试者具有GM-CSF时引起和加重病理学的任何疾病。所述 术语还包括引起和加重病理生理学的其他疾病。预期抑制GM-CSF的生物学活性可以缓解与升高的GM-CSF相关的疾病症状，和/或可以减缓疾病发展。此处所用的术语〃疾病〃、‘‘病症〃和〃状况〃是可以互换的。这些包括但不限 于呼吸道疾病，各种起因的阻塞性肺疾病，各种起因的肺气肿，限制性肺疾病，间质性肺疾 病，间质性肺部疾病，囊性纤维化，各种起因的支气管炎，支气管扩张症，成人呼吸窘迫综合 征(ARDS)和所有形式的肺水肿；选自下述的阻塞性肺疾病，慢性阻塞性肺疾病(C0PD)，哮 喘，支气管哮喘，小儿哮喘，严重哮喘，急性哮喘发作和慢性支气管炎；源于下述的肺气肿， 慢性阻塞性肺疾病(COPD)或α 1-蛋白酶抑制剂缺陷；限制性肺疾病选自变应性肺泡炎、工 作有关的有毒物质所引发的限制性肺疾病如石棉沉着病或硅沉着病、肺部肿瘤所造成的限 制，如癌性淋巴管疾病(lymphangiosis carcinomatosa)，细支气管肺泡癌和淋巴瘤；感染 引起的肺炎，例如病毒、细菌、真菌、原生动物，蠕虫或其他病原体感染，各种因素如吸入和 左心功能不全引起的肺炎，辐射诱发的肺炎或纤维化，胶原性疾病，如红斑狼疮，系统性硬 皮病或结节病，肉芽肿病，如Boec氏病，特发性间质性肺炎或特发性肺纤维化(IPF)；粘液 粘稠病，细菌或病毒感染引起的支气管炎，变应性支气管炎和毒性支气管炎；支气管扩张； 肺水肿，如，吸入有毒物质和外来物后的毒性肺水肿；鼻炎，关节炎及相关关节病，银屑病， 髓系白血病，多发性硬化，阿尔茨海默氏症，肾小球肾炎，和慢性特应性皮炎。这里使用的术语“治疗”通常是指向受试者施用治疗剂，试图获得全部或任何以下 结果施用一种或多种疗法(如GM-CSF抗体)降低或改善人GM-CSF异常表达和/或活性 相关的疾病、病症或状况的发展、严重性和/或持续时间，或者改善其一个或更多个症状。这里使用的术语“治疗有效量”是指疗法(例如，免疫特异地与人GM-CSF结合的 抗体)的量，所述量足以降低与人GM-CSF异常表达和/或活性相关联的病症的严重性，缩 短人GM-CSF异常表达和/或活性相关联的病症的持续时间，改善人GM-CSF异常表达和/ 或活性相关联的病症的一个或更多个症状，阻止人GM-CSF异常表达和/或活性相关联的病 症的发展，促使人GM-CSF异常表达和/或活性相关联的病症的消退，或增强或促进其他疗 法对人GM-CSF异常表达和/或活性相关联的病症的治疗效果。施用抗hGM-CSF单克隆抗体如施用在此所述的组合物的量，将根据所治疗的状 况、疾病或病症，所治疗的受试者(个体)的年龄、性别、健康状况，所治疗的状况、疾病或病 症的严重性或发展程度而变化。可以利用已知的方法，并根据受试者的需要凭经验来确定 合适的剂量。通常情况下，抗hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合片段以不超过500毫克/剂 的剂量施用给受试者。也可以施用较小的剂量。在其他实施方式，上面列出的任何抗GM-CSF抗体和片段可以组合。在一些实施方 式，2，3，4，5，或者更多种的所述抗GM-CSF抗体，片段或其组合可以被组合。在一些实施方式中，上述任何的实施方式可以进一步组合一或更多种过去已知的 抗GM-CSF的抗体，片段，或其组合。另一个实施方式是包含(一种，至少一种)在此所述的抗hGM-CSF单克隆抗体 或其抗原结合片段的治疗组合物。在一个实施方式中，治疗组合物包含一种或更多种抗 hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合片段，和药学上可接受的载体，所述的单克隆抗体或抗原结 合片段识别 hGM-CSF 上的 ELYK (SEQ ID NO 2)和 TMMASHYKQH(SEQ ID NO :3)。治疗组合物 可以个别地(一种治疗用组合物中包含一种或一型抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片 段)或组合地包含任何在此描述的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，如两种/型或多种/型抗hGM-CSF单克隆抗体的组合；两种/型或多种/型其抗原结合片段的组合；一 种/型或多种/型抗hGM-CSF单克隆抗体和一种/型或多种/型其抗原结合片段的组合； 一种/型或多种/型抗hGM-CSF单克隆抗体和两种/型或多种/型其抗原结合片段的组合； 或两种/型或多种/型抗hGM-CSF单克隆抗体和一种/型或多种/型其抗原结合片段的组
I=I O特定的实施方式是包含(一种或超过一种)与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克 隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体的治疗组合物，抗体或其抗原结合片段 包含(a)重链或，当为抗体片段时，重链的一部分，其包含(i)含有Vh-CDRI的共有序列 FTFSX1X2MH(SEQ ID NO :314)，其中 X1 是 Y 或 H，且 X2 是 G 或 A，(ii)含有 VH_CDR2 的共有序 列X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G (SEQ ID NO 315)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的 氨基酸，或V，乂‘是！1或I，&是￥或W，乂6是1 或K，&是？或Y，且乂8是1 或K，和 (iii)含有VH-CDR3的共有序列EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQ ID NO :316)，其中每个Xn相互独立地 是任何天然存在的氨基酸，X9是1或V，且Xltl是A或G ；和(b)轻链或，当为抗体片段时，轻 链或其一部分，其包含(i)含有VfCDRl的共有序列XnGNXnXnNIGSX11AVG (SEQ ID NO 317)其 中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，且X11是H或Y，(ii)含有V^⑶R2的共有 序列 GX12SPX13SG (SEQ ID NO :318)，其中 X12 是 R 或 K，且 X13 是 A 或 P，和(iii)含有 Vl-CDR3 的共有序列STffDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO :319)，其中X14是R或S，且X15是V或L，其中所述 抗 hGM-CSF 单克隆抗体或其片识别 hGM-CSF 中的 ELYK (SEQ ID NO 2)和 TMMASHYKQH(SEQ ID NO 3)。此处所述的组合物包含两种或更多种与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体， 两种或更多种其与hGM-CSF结合的抗原结合片段，或者它们的组合，以及药学上可接受的 载体，其中一种或多种抗hGM-CSF单克隆抗体或一种或多种其抗原结合片段识别hGM-CSF 中的不连续表位 ELYK (SEQ ID NO 2)和 TMMASHYKQH (SEQ ID NO :3)。此处所述的进一步的实施方式是包含两种或更多种与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF 单克隆抗体，两种或更多种其抗原结合片段或者其它们的组合，和药学上可接受载体的组 合物，其中一种或多种抗体或一种或多种其抗原结合片段包含(a)重链或，当为抗体片段 时，重链的一部分，其包含⑴含有Vh-CDRI的共有序列FTFSX1X2MiKSEQ ID N0:314)，其中 X1 是 Y 或 H，且 X2 是 G 或 A，(ii)含有 Vh-CDR2 的共有序列 X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G(SEQ ID NO :315)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，^是！^或乂，&是！“或工， X5是Y或W，X6是R或K，X7是F或Y，且X8是R或K，和(iii)含有VH_CDR3的共有序列 EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQ ID NO :316)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，X9 是M或V，且Xltl是A或G ；和(b)轻链或，当为抗体片段时，轻链或其一部分，其包含(i) 含有VfCDRl的共有序列XnGNXnXnNIGSXnAVG (SEQ ID NO 317)，其中每个Xn相互独立地是 任何天然存在的氨基酸，且乂 是11或Y，(ii)含有Vf CDR2的共有序列GX12SPX13SG (SEQ ID NO 318)，其中X12是R或K，且X13是A或P，且(iii)含有VfCDR3的共有序列 STffDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO :319)，其中 X14 是 R 或 S，且 X15 是 V 或 L，其中所述抗 hGM-CSF 单 克隆抗体或其片段识别 hGM-CSF 中的 ELYK (SEQ ID NO 2)和 TMMASHYKQH (SEQ ID NO 3)。在此描述的进一步的主题是组合物，其中两种或更多种与hGM-CSF结合的抗 hGM-CSF单克隆抗体中的至少一种包含选自SEQ ID NO 10-33，38-80，152-183，34-37，184-221，222-245，320-323和348-365组成的组中的多肽。组合物除了包括一种或多种在 此描述的抗hGM-CSF单克隆抗体外，可包括其他的抗hGM-CSF单克隆抗体，例如以前被描述 过的抗hGM-CSF单克隆抗体。参见例如，PCT申请，国际公开号W02006/122797 ；PCT申请， 国际公开号W02007/092939 ；和PCT申请，国际公开号WO 2006/11353。试剂盒此处公开的抗hGM-CSF抗体或其抗原结合片段及包含这样的抗体的组合物，可以 作为试剂盒提供，也包括在本发明中。试剂盒，可以以各种形式提供，除了药物(治疗组合 物)，还可以包括药物或设备的包装和/或标签，所述标签信息通常来自于医生的处方。试 剂盒通常包括印制的使用说明书。在一些实施方式中，配制的组合物(如，药剂)在一个或 更多个容器里提供。在一些实施方式中，容器可以是用来分发药剂以进行施用的装置。例 如，在本发明的药物可预先测量(例如，等分)入单次使用分配器中并以试剂盒的形式提 供。在某些情况下，容器是注射器。注射器可选地是预装的。在某些情况下，单次使用的容 器是预装的，预封的和一次性的。根据特定药物的施药途径和施药方式，试剂盒可包括合适 的组件。药剂此处使用的“药剂可接受的载体”包括任何或所有的生理相容溶液，分散介质，涂 层剂，抗菌剂或抗真菌剂，渗透压调节剂，和吸收延缓剂。药剂可接受的载体的例子包括一 种或多种制剂诸如水，盐溶液，磷酸盐缓冲盐水，葡萄糖，甘油和乙醇及其组合。在许多情况 下，渗透压调节剂，如糖，多元醇或氯化钠优选地包含在组合物中。所述多元醇可以包括甘 露醇或山梨醇。此外药剂可接受的载体可以包括少量的辅助物质，如保湿剂，乳化剂，防腐 剂，和缓冲剂。所述辅助物质可增强组合物中抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段的 保存或有效性。适合胃肠外施用的药物组合物可以在其中掺入本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体 或抗原结合片段。优选地，当施用一种抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段时，所 述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段被调整成含有浓度为0. l-250mg/mL的抗体 的可注射溶液。另一方面，当多种抗体被混合并应用时，抗体优选地调整为含有浓度为 0. OOl-lOmg/mL的抗体的注射液。此外，多种抗体，可按任何比例任意混合。液体剂型或冻干剂型形成的可注射溶液可以在火石或琥珀管形瓶，安瓿，或预装 式注射器中制备。可以使用PH 15. 0-7.0 (pH值6.0最合适)的L-组氨酸缓冲试剂。L-组 氨酸的浓度为5-10mM可能是最适合的。适用于缓冲试剂的其他试剂，可以是琥珀酸钠，柠 檬酸钠，磷酸钠，或磷酸钾，但不限于它们。在0-300mM的浓度下，氯化钠可用于缓冲剂，以 去除溶液的毒性(对于液体中形成的剂型，150mM是最合适的浓度)。冻干剂型可包括冷冻 保护剂，主要是比例为0-10%的蔗糖(比例为0. 5-1. 0%可能是最合适的)。其他合适的冷 冻保护剂，可以是海藻糖和乳糖。冻干剂型可包括膨胀剂，主要包括比例为1-10% (2-4% 的比例可能是最适合)的甘露醇。主要是L-甲硫氨酸，在l-50mM(5-10mM可能最适合)，可 应用于液体或冻干两种剂型作为稳定剂。其他合适的膨胀剂包括甘氨酸和精氨酸。可以包 含比例为0-0. 05% (0. 005-0. 01%的比例可能是最合适的)的聚山梨醇酯80，作为表面活 性剂。其他表面活性剂包括聚山梨醇酯20和BRJJ表面活性剂，但不限于它们。各种剂型可用于本发明的组合物。例如，组合物的剂型可以有液态，半固态，固态。溶液(例如，可注射或可输液溶液)，分散液，悬浮液，片剂，丸剂，粉剂，脂质体和栓剂均包 括在内。优选地，剂型取决于施用方法和治疗实例。优选地，组合物具有能够注射和输液的 液体剂型。所述组合物优选地可以用于胃肠外施用(例如，静脉内施用，皮下施用，腹部施 用和肌肉内施用)。在优选的实施方式中，抗体通过静脉输液或静脉注射施用。在另一优选 的实施方式中，抗体通过肌肉注射或皮下注射施用。所述治疗用组合物通常应该在经灭菌的稳定条件下生产和储存。组合物可以以 溶液，微乳液，分散液，脂质体或适合于高药物浓度的其他结构来开处方。可注射的经灭菌 溶液通过以下程序制备。所需量的活性化合物(特别地，抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原 结合片段)混合于合适的溶剂中。如果需要，上述化合物中的一种或其组合与活性化合物 一起混合在合适的溶剂中，然后通过过滤灭菌，从而制备出溶液。通常，基本分散介质和活 性化合物混合在经灭菌的媒介中，所述媒介包括来自上述介质的其他所需化合物。当用经 灭菌的冻干粉来制备经灭菌的注射溶液时，优选使用真空干燥法和喷雾干燥法作为制备方 法。通过所述制备方法，由活性成分粉末和用于过滤的经灭菌的溶液得到需要的其他任何 组合物。溶液的流动性通过以下方式适当地维持。所述方法为，例如，采用涂层材料如卵磷 脂保持分散液所需的颗粒大小，以及使用表面活性剂。组合物中还包括药用吸收延缓剂，如 单硬脂酸和明胶，藉此可注射组合物在人体内可以维持较长的吸收时间。本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段可以通过本领域已知的多种 方法施用。如皮下注射、静脉注射或输液等施药途径/方法优选地应用于各种疗法中。施 药途径/方法取决于期望的结果。本领域技术人员理解植入物、皮肤敷贴和药物投递系统 包含在所述的施用途径/方法中。在一个实施方式中，抗体如控制释放试剂，其可以控制化 合物的释放，也与制品中的活性化合物一起应用。生物相容聚合物具有生物可降解性。所 述制品可包括生物相容聚合物如乙烯醋酸乙烯，聚酸酐，聚羟基乙酸，胶原蛋白，聚原酸酯 (polyortito esters)，和聚乳酸。制备这些药剂的多种方法已被授予专利权，且被本领域 技术人员公知。在一个实施方式中抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段是与，例如，没有活 性的稀释剂或可食用且可吸收的载体一起口服施用的。化合物(如果需要，其他成分)也 可以被封装在硬或软胶囊中，压缩在片剂中，或直接混合在给患者的食品中。治疗中口服施 用时，所述化合物可混合在赋形剂中，然后以片剂，含片，糖锭，胶囊剂，酏剂，悬浮液，糖浆 和扁丸(oblate)等可摄食的形式使用。为了通过胃肠外途径以外的途径施用本发明的化 合物，有必要用阻止其失活的材料包被所述化合物，并同时施用化合物和所述材料。联合疗法也可以在组合物中补充掺入另外的活性成分，所述另外的活性成分不包括针对非 GM-CSF的抗原的抗体。在一个实施方式中，本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合 片段与一种或多种其他的用于治疗升高水平GM-CSF相关疾病的治疗剂一起处方，或者与 其他治疗剂同时施用，其中所述其他治疗剂不是针对GM-CSF以外的蛋白质的抗体。例如， 本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段与一种或多种其他抗GM-CSF抗体共同 处方。所述联合疗法的优点在于少量治疗剂即有效。这种治疗剂能避免单药治疗中可能伴 随的毒性或并发症。此处所用的〃同时施用〃应该被广义地理解。比如，当两种或更多种抗GM-CSF单克隆抗体或抗原结合片段施用给患者时，每一种或一些所述抗体或其片段可以或可以不以 单一药剂(如，组合物)的形式提供。在一些实施方式中，单一药剂(如，组合物)包含施用 给受试者的所有的不同种类的抗GM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，从而使得所述抗 体或其抗原结合片段以混合物同时提供给患者。然而，在一些实施方式中，包含一种或多种 抗体或抗原结合片段的两种或更多种药剂(如，组合物)分别施用给受试者。当“分别”施 用时，药剂可按顺序如一种接一种的施用。只要第一次施药和接下来施药(第二、第三次) 在受试者中药效的时间重叠，靶向组织/细胞重叠，从而实现了增强的(如协同的)结果， 就可以被认为是“同时”施用。特别地，当施用超过一种本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体时，它可能提供细胞生 长抑制活性(中和活性)，其远高于药用组合物中一种单克隆抗体提供的活性。因此，可能 以更小的量提供所需的治疗剂。相应地，提供了增强活性的方法，其特征在于两种或更多种抗GM-CSF单克隆抗体 同时施用，或药用组合物或兽药组合物，其特征在于包含了两种或更多种抗hGM-CSF单克 隆抗体或其抗原结合片段，所述两种或更多种抗体选自以下(a)和(b)(a)抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，其特异于hGM_CSF，具有SEQ ID NO :4 至 9，SEQ ID NO :330 至 335，SEQ ID NO :336 至 341，或 SEQ ID NO :342 至 347 的氨基 酸序列所示互补决定区(CDR)(b) (a)的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，其具有其中一个或多个氨基 酸被取代、缺失、插入或添加的氨基酸序列，且所述抗体或其抗原结合片段特异于hGM-CSF。同样地，本发明也包括增强活性的方法，其特征在于多种不同(此后描述为多种) 的本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体被同时施用，或者包含多种本发明的抗hGM-CSF抗体的 药用组合物或兽药组合物。在任何实施方式中，所述组合物可以包含一种或型能够中和hGM-CSF活性的抗 hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段。作为选择，在任何实施方式中，所述组合物可以包 含两种或型或者更多种或型能够中和hGM-CSF活性的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结 合片段。这样的组合物中的单克隆抗体和/或其片段除了包括此处公开的一种或多种抗体 或其片段外，还可以包括先前公开的抗hGM-CSF单克隆抗体和/或其片段。抗hGM-CSF单 克隆抗体及其抗原结合片段，和包含这样的抗体和/或其抗原结合片段的治疗组合物，药 用组合物和药物组合物可以用来治疗或预防由hGM-CSF引起和/或与其过表达(相对于对 照——例如，没有状况、疾病或病症的个体——的hGM-CSF的表达水平)相关的疾病、病症 或状况。在抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段中包含药学上可接受的载体的药用 组合物被认为对于hGM-CSF引起的疾病是有效的。可列举hGM-CSF过量产生引起的疾病， 如(a)变应性疾病，如哮喘，特应性，和花粉症，(b)移植物排斥，移植物抗宿主病(GVHD)和(c)自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎。无意将其限制到任何特定的机制，相信GM-CSF的过表达至少部分地引起一系列 疾病或病症，例如在此列出的那些。不过，这样的临床状况也可能是其他相关的生物途径受损引起的，如相应受体的上调，或一种或多种效应物途径中的突变。因此，“hGM-CSF过表达 相关疾病或病症”应包括导致与hGM-CSF的过表达结果相同的状况。制造/制备在一个实施方式中本发明是在此公开用于药物的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗 原结合片段。抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，如在此描述的抗hGM-CSF单克隆抗体 或其抗原结合片段，在制造或制备用于治疗hGM-CSF过表达(GM-CSF引起的水平)相关疾 病或病症的药物中的用途，也是本发明的实施方式，其中所述抗体或其抗原结合片段结合 hGM-CSF并能够中和hGM-CSF活性。这样的抗hGM-CSF单克隆抗体和其抗原结合片段可以 是在此描述的任何抗hGM-CSF单克隆抗体和其抗原结合片段。进一步的实施方式是识别hGM-CSF 中的 ELYK (SEQ ID NO :2)和 TMMASHYKQH(SEQ ID NO 3)的抗体或其抗原结合片段在制造或制备药物中的用途。进一步的实施方式是抗hGM-CSF单克隆抗体和/或其抗原结合片段生产或制备 药物的用途，其中，所述抗体或其片段包含(a)重链或，当为抗体片段时，重链的一部分，其 包含⑴含有Vh-CDRI的共有序列FTFSX1X2MiKSEQ ID NO :314)，其中X1是Y或H，且X2是 G 或 A，(ii)含有 VH-CDR2 的共有序列 X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G(SEQ ID N0:315)，其中每 个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，X3是L或V，X4是T或I，X5是Y或W，X6是R 或 K，X7 是 F 或 Y，且 X8 是 R 或 K，和(iii)含有 Vh-CDR3 的共有序列 EXnX9GX10XnXnDXn(SEQ ID NO 316)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，X9是M或V，且Xltl是A或 G;和(b)轻链或，当为抗体片段时，轻链或其一部分，其包含(i)含有VfCDRl的共有序列 XnGNXnXnNIGSX11AVG(SEQ ID NO :317)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，且 X11 是 H 或 Y，(ii)含有 Vl_CDR2 的共有序列 GX12SPX13SG(SEQ ID NO :318)，其中 X12 是 R 或 K，且 乂13是六或 P，和(iii)含有 Vf CDR3 的共有序列 STWDSX14LSAVX15(SEQ ID N0:319)，其 中X14是尺或S，且X15是V或L。进一步的方面，本发明提供了分离的可用于制备药物的抗hGM-CSF抗体或该抗体 的抗原结合片段。这些药物可用于治疗与hGM-CSF异常表达(如过表达)相关的疾病、状 况或病症。在此描述的任何抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段可以用于制备所述治 疗目的的药物。所述抗体或抗原结合片段识别hGM-CSF中的ELYK (SEQ ID NO 2)和 TMMASHYKQH(SEQ ID NO 3)。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含(a)重链或，当为抗体片段 时，重链的一部分，其包含⑴含有Vh-CDRI的共有序列FTFSX1X2MiKSEQ ID N0:314)，其中 X1 是 Y 或 H，且 X2 是 G 或 A，(ii)含有 Vh-CDR2 的共有序列 X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G(SEQ ID NO :315)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，^是！^或乂，&是！^或工， X5是Y或W，X6是R或K，X7是F或Y，且X8是R或K，和(iii)含有VH_CDR3的共有序列 EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQ ID NO :316)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，X9是 M或V，且Xltl是A或G ；和(b)轻链或，当为抗体片段时，轻链或其一部分，其包含(i)含 有Vf⑶Rl的共有序列XnGNXnXnNIGSX11AVG(SEQ ID NO 317)，其中每个Xn相互独立地是 任何天然存在的氨基酸，且、是11或Y，(ii)含有Vl_CDR2的共有序列GX12SPX13SG (SEQID NO 318)，其中X12是R或K，且X13是A或P，和(iii)含有\_CDR3的共有序列 STffDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO :319)，其中乂14是1 或S，且乂15是V或L。在一个实施方式中，抗体 或其抗原结合片段结合hGM-CSF，其Kd不超过400pM，在另一个实施方式中小于约160pM (如 EV1018或EV1019)，其中Kd根据实施例中描述的技术测定。在其他实施方式中，上文所列的任何抗GM-CSF抗体和片段可以组合。在一些实施 方式中，2，3，4，5种或更多这样的抗GM-CSF抗体、其片段或其组合可以组合。抗体和片段、DNA和载体的产生下面描述的是识别本发明提供的不连续表位的初始抗体(originator antibody) 的产生；但不应该理解为限制到所述特定的方法。所述的特征在本技术领域可以被取代，而 不超出本发明的范围。本发明的抗hGM-CSF单克隆抗体和其抗原结合部分是经过以下步骤，从来自特发 性肺泡蛋白沉积症患者的血液中得到分离细胞克隆以产生抗体，从得到的抗体产生细胞 库中选择抗体阳性细胞，并通过亲和纯化来纯化从抗体阳性细胞上清液中获得的抗体。1)分离抗hGM-CSF的完全人抗体产生细胞克隆B淋巴细胞是从患有特发性肺泡蛋白沉积症(IPAP)且血清中存在高水平的抗 hGM-CSF单克隆抗体的病人血液中分离出来的。然后，诱导B淋巴细胞增殖。诱导其增殖的 方法是公知的。例如，在转化方法中(D. Kozbor等)用癌症的诱导因子，“EB病毒”(以下 简称为EBV)来诱导细胞增殖。更具体地，EBV感染B淋巴细胞并诱导其增殖。保存增殖的 细胞作为抗体产生细胞库。2)从抗体产生细胞库分离单克隆抗体。用生产单克隆抗体中已知的常用方法，将单克隆细胞从诱导增殖的细胞中筛选出来。从抗体产生细胞库中选出淋巴细胞，以生产结合hGM-CSF的抗体。更具体地说，通 过有限稀释法选择细胞群(克隆)，所述细胞群(克隆)产生结合hGM-CSF的抗体。优选 的是采用ELISA法使用hGM-CSF和标记的小鼠抗hlgG抗体检测结合hGM-CSF的片段。通 过培养选定的抗体阳性细胞并且对它们进行反复筛选，获得只产生所需抗体的细胞群(克 隆)。“分离抗体产生细胞克隆”之前的步骤显示在图1的流程图中。3)使用蛋白A或蛋白G亲和纯化当纯化抗hGM-CSF单克隆抗体时，可以将选出的永生化细胞培养于滚瓶(roller bottle)，2升旋转瓶(spinner flask)，或其他培养系统。过滤并浓缩上清液。然后，用蛋白 A-琼脂糖凝胶或蛋白G-琼脂糖凝胶等(New Jersey, Piscataway, Pharmacia Corp.)，亲和 层析纯化蛋白质。将缓冲溶液交换为PBS后，通过280nm下测定OD确定蛋白质的浓度，或 者优选用比浊计分析。抗体的同种型通过其对不同同种型抗原的抗原特异性方法来检验。得到的抗hGM-CSF单克隆抗体是由人体内敏化的B淋巴细胞产生的纯粹的人抗 体，因而所述抗hGM-CSF单克隆抗体很少表现出对抗体的免疫反应。当抗体生产细胞被克 隆时，B淋巴细胞用EB病毒感染，通过EB病毒活性诱导其增殖。因此，其特征在于，抗体产 生细胞通过利用这样的EB病毒活性来克隆。EB病毒方法的优势在于在人体内生产天然抗 体，优势还在于获得高亲和力的抗体。例如，抗hGM-CSF单克隆抗体的亲和力是人工免疫的 小鼠产生的抗体亲和力的10-100倍。文库包括通过EB病毒感染增殖的一组B淋巴细胞。有可能从文库中分离出特定的抗体生成细胞克隆，并获得人抗体。如上所述，描述的特征在本领域可以被取代或改变，而不超出本发明的范围。核 酸，载体以及宿主细胞可以表达本发明中的重组抗体或其抗原结合部分。这些也包括在本 发明中。下面的表中显示的是EV1018的重链变体和轻链变体以及EV1019的重链变体和轻 链变体。表中分别提供了 EV1018的重链变体和轻链变体以及EV1019的重链变体和轻链变 体，使得鉴定EV1018和EV1019每一个的重链和轻链的所有可能的组合成为可能。本领域 普通技术人员使用本领域已知的方法和此处提供的信息，能够产生任一组合。在进一步的方面，此处公开了产生抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段的过 程(方法)。通常，产生抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段的方法包括得到或产生 DNA，所述DNA基本上由编码免疫球蛋白的DNA组成，所述免疫球蛋白由重链和轻链或Fab 区组成；产生的DNA以可操作地连接到合适启动子的方式，插入可复制的表达载体，从而产 生出载体，所述载体包含可操作地连接到合适启动子的DNA ；将所述载体导入宿主细胞，从 而生产出包含所述载体的宿主细胞；在适合DNA表达及其编码的肽和抗hGM-CSF单克隆抗 体或抗原结合片段产生的条件下培养宿主细胞。得到的抗hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合 片段可以用本领域已知的方法从宿主细胞或宿主细胞培养物回收出来。更具体地，所述过程包括在宿主细胞中至少产生Vh-OTRI, Vh-⑶R2和Vh-⑶R3，以 及 VfCDRl，Vl-CDR2 和 Vl-CDR3。所述方法包括将编码 Vh-CDRI，VH-CDR2，VH-CDR3，VfCDRl， Vf⑶R2和Vf⑶R3的DNA导入合适的宿主细胞，将得到的宿主细胞(含有编码Vh-OTRI, Vh-CDR2, Vh-CDR3, Vl-CDRI , VL-CDR2, VL-CDR3 的 DNA 的宿主细胞)维持在适合 DNA 表达(编 码的肽产生)以及抗hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合片段形成和装配的条件下，从而产生 抗hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合片段。在特定的实施方式中，抗hGM-CSF单克隆抗体或其 抗原结合片段包括(a)重链或，当为抗体片段时，重链的一部分，其包含(i)含有Vh-CDRI的 共有序列 FTFSX1X2MiKSEQ ID NO :314)，其中 X1 是 Y 或 H，且 X2 是 G 或 A，(ii)含有 VH_CDR2 的共有序列X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G (SEQ ID NO 315)，其中每个Xn相互独立地是任何天 然存在的氨基酸，X3是L或V，X4是T或I，X5是Y或W，X6是R或K，X7是F或Y，且X8是R 或K，和(iii)含有 VH-CDR3 的共有序列 EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQ ID NO :316)，其中每个Xn相互 独立地是任何天然存在的氨基酸，X9是M或V，且Xltl是A或G ；和(b)轻链或，当为抗体片段 时，轻链或其一部分，其包含(i)含有VfCDRl的共有序列XnGNXnXnNIGSX11AVG (SEQ ID NO: 317)，其中每个Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，且X11是!1或Y，(ii)含有V^⑶R2 的共有序列GX12SPX13SG (SEQ ID NO :318)，其中X12是R或K，且X13是A或P，和(iii)含有 VL-CDR3 的共有序歹Ij STffDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO :319)，其中 X14 是 R 或 S，且 X15 是 V 或 L ； 且产生的抗hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合片段结合hGM-CSF。编码Vh-CDRI, Vh_CDR2， Vh-CDR3，VfCDRl，Vl_CDR2和VfCDR3的DNA可以是一个或多个单元(如，一个DNA编码所 有的VH/VL元件，不同的DNA编码一些或所有的元件)。例如，第一 DNA可编码完整的重链重链，第二 DNA可编码完整的轻链。完整的重链 可以选自SEQ ID NO 10-33，38-80禾口 160-183 ;222_245，320和322组成的组，而完整的轻 链可以选自SEQ ID NO :34-37，202-221，321和323组成的组。在一个实施方式中，完整的 重链选自SEQ ID NO 10-33，38-80和160—183 ；222-245，320和322组成的组，完整的轻链选自 SEQ ID NO 34-37，202-221，321 和 323 组成的组。所述过程进一步包括分离抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段。下述载体也是此处的主题，所述载体包含编码Vh-⑶R1，和/或Vh-⑶R2，和/或 VH-CDR3 的 DNA。Vh-CDRI 是 SYGMH (SEQ ID NO 4)或 SHAMH (SEQ ID NO :333)，VH_CDR2 是 LTYHHGNRKFYADSVRG(SEQ ID NO :5)或VIWHDGSKKYYADSVKG(SEQ ID NO :334)，而 VH-CDR3是 ESMGATNDN(SEQ ID NO 6)或EWVGGTCDS(SEQ ID NO :335)。下述载体也是此处的主题，所述载体包含编码Vl-⑶Rl、VL-⑶R2和Vf⑶R3的DNA， 其中 Vl-CDRI 是 IGNNNNIGSHAVG (SEQ ID NO :7)或 SGNSSNIGSYAVG (SEQ ID NO :330)，\-CDR2 是 GRSPPS (SEQ ID NO 8)或 GKSPAS (SEQ ID NO :331)，而 VL_CDR3 是 STWDSSLSAVV (SEQ ID NO 9)或 STWDSRLSAVL(SEQ ID NO 332)。例如，在蛋白成熟过程中重链和轻链的前导序列被切掉。切掉的前导序列对最终 的抗体性质没有影响。为了补足缺失的序列，克隆的cDNA通过连接或PCR扩增的方法与合 成的寡核苷酸整合。术语"前导序列"和"信号序列"此处可以互换。在另外一个过程中，整个可变区是用一对短的重叠寡核苷酸合成的，然后通过PCR 扩增方法扩增由此得到的核苷酸，从而完整获得可变区的人工克隆。本发明的另一方面涉及分离的脱氧核糖核酸(DNA)，其编码能够结合hGM-CSF并 中和hGM-CSF活性的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的DNA包含 编码氨基酸的核苷酸序列，所述氨基酸序列包含选自SEQ ID NO :4至9中的至少一个。本 发明还包括分离的DNA，其中核苷酸序列编码氨基酸序列，其至少包含选自SEQ ID NO 330 至335组成的组中的一个。当分离的脱氧核糖核酸(DNA)编码能够结合hGM-CSF并中和hGM-CSF生物活性的 抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段时，下面的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合 片段也包含在本发明中能够在严格条件下与上述DNA杂交的分离的DNA。下面的载体和宿主细胞也包括在本发明中1)掺有分离的DNA的载体。2)有重组表达载体整合的宿主细胞。此外，还可能通过表达多种scFv (可变区单链片段)抗体获得特定抗体，所述scFv 抗体通过人工改组(shuffling)、* \基因以噬菌体融合蛋白形式制备，利用最近开发的 噬菌体展示技术，所述技术利用遗传工程技术在噬菌体表面表达重组抗体。可以通过本领域技术人员知道的任何方法得到本发明的抗体片段，例如，片段的 重组表达，所述片段由编码抗体的DNA的截短的形式编码，或通过蛋白水解抗体氨基酸链， 本领域技术人员藉由应用标准的生物学分析，如本发明所述的分析，来确定哪些片段维持 了抗原结合功能或中和活性。本发明的特定抗体本发明提供了 EV1018抗体本身和EV1018抗体的多种变化(如，变体)，总结在表 A中。在某些实施方式中，重链含有相对于野生型重链序列一处或多处氨基酸取代。在一些 实施方式中，轻链含有相对于野生型EV1018轻链序列一处或多处氨基酸取代。在一些实施 方式中，重链和轻链各自含有一处或多处氨基酸取代。
在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含轻链，EV1018-wt-original(SEQ ID NO :34)，和下述的重链变体之一EV1018(SEQ ID NO 10)，EV1018-wt_IgGlK0 (SEQ ID NO 11), EV1018-T97A-IgGlK0(SEQ ID NO 12)，EV1018-T97V_IgGlK0(SEQ ID NO 13), EV1018-N95D-IgGlK0(SEQ ID NO 14),EV1018-N95E IgGlKO(SEQ ID NO 15),EV1018-N95K IgGlKO(SEQ ID NO : 16)，EV1018-N95Q IgGlKO(SEQ ID NO : 17)，EV1018-N93Q-N95T IgGlKO (SEQ ID NO 18), EV1018-wt IgGl-BI(SEQ ID NO 19), EV1018-T97A IgGl-BI(SEQ ID NO 20), EV1018-T97V IgGl-BI(SEQ ID NO 21), EV1018-N95D IgGl-BI(SEQ ID NO 22), EV1018-N95E IgGl-BI(SEQ ID NO:23)，EV1018-N95K IgGl-BI(SEQ ID NO: 24) , EV1018-N95Q IgGl-BI(SEQ ID NO 25), EV1018-N93Q-N95T IgGl-BI(SEQ ID NO 26), EV1018-T97A IgGl-original-constant(SEQ ID NO 27), EV1018-T97V IgGl-original-constant(SEQ ID NO :28)，EV1018-N95D IgGl-original-constant(SEQ ID NO 29), EV1018-N95E IgGl-original-constant(SEQ ID NO 30), EV1018-N95K IgGl-original-constant(SEQ ID NO :31)，EV1018-N95Q IgGl-original-constant(SEQ ID NO :32)，EV1018-N93Q-N95TIgG卜original-constant(SEQ ID NO 33), EV1018-wt-IgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO :38)，EV1018-T97A-IgGl_K0-QVQL(SEQ ID NO: 39), EV1018-T97V-IgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO :40)，EV1018-N95D-IgGl_K0-QVQL(SEQ ID NO 41)EV1018-N95EIgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO :42)，EV1018-N95K IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO 43), EV1018-N95Q IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO :44)， EVlO18-N93Q-N95T IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO :45)，EV1018_wt IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :46)，EV1018-T97A IgGl-QVQL-BI (SEQ ID NO :47)，EVlO18-T97V IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :48)， EV1018-N95D IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :49)，EV1018-N95E IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO: 50) , EV1018-N95K IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :51)，EV1018-N95Q IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO 52), EV1018-N93Q-N95T IgGl-QVQL-BI (SEQ ID NO :53)，EV1018_IgG2 (SEQ ID NO 54), EV1018-wt-IgG2(SEQ ID NO :55)，EV1018_T97A_IgG2(SEQ ID NO: 56), EV1018-T97V-IgG2 (SEQ ID NO :57)，EV1018_N95D_IgG2(SEQ ID NO :58)， EV1018-N95E-IgG2(SEQ ID NO :59)，EV10 18-N95K-1gG2(SEQ ID NO 60), EV1018-N95Q-IgG2 (SEQ ID NO :61)，EV1018-N93Q-N95T_IgG2 (SEQ ID NO :62)， EV1018-IgG4(SEQ ID NO :63)，EV1018-wt_IgG4(SEQ ID NO :64)，EV1018-T97A_IgG4(SEQ ID NO 65), EV1018-T97V-IgG4(SEQ ID NO :66)，EV1018-N95D_IgG4(SEQ ID NO: 67), EV1018-N95E-IgG4(SEQ ID NO :68)，EVlO18_N95K_IgG4(SEQ ID NO :69)， EV1018-N95Q-IgG4(SEQ ID NO :70)，EV10 18-N93Q-N95T-IgG4(SEQ ID NO: 71) , EV1018-IgG4-SP (SEQ ID NO :72)，EV1018it-IgG4_SP (SEQ ID NO 73), EV1018-T97A-IgG4-SP (SEQ ID NO :74)，EV1018-T97V-IgG4_SP (SEQ ID NO :75)， EV1018-N95D-IgG4-SP(SEQ ID NO :76)，EV1018-N95E-IgG4_SP (SEQ ID NO :77)， EV1018-N95K-IgG4-SP (SEQ ID NO :78)，EV1018-N95Q-IgG4_SP(SEQ ID NO 79)禾口 EV1018-N93Q-N95T-IgG4-SP(SEQ ID NO :80)。在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含轻链，EV1018-wt_BI(SEQ ID NO :35)，和下面的重链变体之一EV1018(SEQ ID NO 10), EV1018-wt-IgGlK0(SEQ ID N0:11), EV1018-T97A-IgGlK0(SEQ ID NO 12)，EV1018-T97V_IgGlK0(SEQ ID NO 13),EV1018-N95D-IgGlK0(SEQID NO 14), EV1018-N95E IgGlKO(SEQ ID NO 15), EV1018-N95K IgGlKO(SEQ ID NO 16)，EV1018-N95Q IgGlKO(SEQ ID NO 17), EV1018-N93Q-N95T IgGlKO(SEQ ID NO 18), EV1018-wtIgGl-BI(SEQ ID NO 19)，EV1018-T97A IgGl-BI(SEQ ID NO 20), EV1018-T97V IgGl-BI (SEQ ID NO :21)，EV1018-N95D IgGl-BI(SEQ ID NO 22), EV1018-N95E IgGl-BI(SEQ ID NO:23)，EV1018-N95K IgGl-BI(SEQ ID NO: 24) , EV1018-N95Q IgGl-BI(SEQ ID NO 25), EV1018-N93Q-N95T IgGl-BI(SEQ ID NO 26), EV1018-T97A IgGl-original-constant(SEQ ID NO 27), EV1018-T97V IgGl-original-constant(SEQ ID NO :28)，EV1018-N95D IgGl-original-constant(SEQ ID NO 29), EV1018-N95E IgGl-original-constant(SEQ ID NO 30), EV1018-N95K IgGl-original-constant(SEQ ID NO :31)，EV1018-N95Q IgGl-original-constant(SEQ ID NO 32), EV1018-N93Q-N95T IgGl-original-constant(SEQ ID NO 33), EV1018-wt-IgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO :38)，EV1018_T97A_IgG卜KO-QVQL(SEQ ID NO: 39), EVlO18-T97V-IgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO :40)，EV1018-N95D-IgGl_K0-QVQL(SEQ ID NO 41), EV1018-N95E IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO :42)，EV1018-N95K IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO 43), EV1018-N95Q IgGl-KO-QVQL (SEQ ID NO :44)，EVlO18-N93Q-N95T IgG卜KO-QVQL (SEQ ID NO :45)，EV1018_wt IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :46)， EV1018-T97AIgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO 47), EV1018-T97V IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO: 48), EV1018-N95D IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :49)，EV1018-N95E IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO 50), EV1018-N95K IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :51)，EV1018-N95Q IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO 52), EV1018-N93Q-N95TIgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :53)，EV1018_IgG2(SEQ ID NO 54), EV1018-wt-IgG2(SEQ ID NO :55)，EV1018_T97A_IgG2(SEQ ID NO: 56), EV1018-T97V-IgG2 (SEQ ID NO :57)，EVlO18-N95D-IgG2 (SEQ ID NO :58)， EV1018-N95E-IgG2 (SEQ ID NO :59)，EV10 18-N95K-IgG2(SEQ ID NO 60), EV1018-N95Q-IgG2 (SEQ ID NO :61)，EV1018-N93Q-N95T_IgG2 (SEQ ID NO :62)， EV1018-IgG4(SEQ ID NO :63)，EV1018-wt_IgG4(SEQ ID NO :64)，EV1018-T97A_IgG4(SEQ ID NO 65), EV1018-T97V-IgG4(SEQ ID NO :66)，EV1018-N95D_IgG4(SEQ ID NO: 67), EV1018-N95E-IgG4(SEQ ID NO :68)，EVlO18_N95K_IgG4 (SEQ ID NO :69)， EV1018-N95Q-IgG4(SEQ ID NO :70)，EV10 18-N93Q-N95T-IgG4(SEQ ID NO: 71) , EV1018-IgG4-SP (SEQ ID NO :72)，EV1018it-IgG4_SP (SEQ ID NO 73), EV1018-T97A-IgG4-SP (SEQ ID NO :74)，EV1018-T97V-IgG4_SP (SEQ ID NO :75)， EV1018-N95D-IgG4-SP(SEQ ID NO :76)，EV1018-N95E-IgG4_SP(SEQ ID NO :77)， EV1018-N95K-IgG4-SP(SEQ ID NO :78)，EV1018-N95Q-IgG4_SP(SEQ ID NO 79)禾口 EV1018-N93Q-N95T-IgG4-SP(SEQ ID NO :80)。 在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含轻链，EV1018-wt-BI2(Gl) (SEQ ID NO :36)，和下述重链变体之一 EV1018(SEQ ID NO 10)，EV1018-wt_IgGlK0(SEQ ID NO :11)，EV1018-T97A-IgGlK0(SEQ ID NO 12)，EV1018-T97V_IgGlK0(SEQ ID NO 13), EV1018-N95D-IgGlK0(SEQ ID NO 14),EV1018-N95E IgGlKO(SEQ ID NO 15),EV1018-N95K IgGlKO (SEQ ID NO : 16)，EV1018-N95Q IgGlKO (SEQ ID NO : 17)，EV1018-N93Q-N95T IgGlKO(SEQ ID NO 18), EV1018-wt IgGl-BI(SEQ ID NO 19), EV1018-T97A IgGl-BI(SEQID NO 20), EV1018-T97V IgGl-BI(SEQ ID NO 21), EV1018-N95D IgGl-BI(SEQ ID NO 22), EV1018-N95E IgGl-BI(SEQ ID NO23), EV1018-N95K IgGl-BI(SEQ ID NO: 24) , EV1018-N95Q IgGl-BI(SEQ ID NO 25), EV1018-N93Q-N95T IgGl-BI(SEQ ID NO 26), EV1018-T97A IgGl-original-constant(SEQ ID NO 27), EV1018-T97V IgG卜original-constant(SEQ ID NO :28)，EV1018-N95D IgGl-original-constant(SEQ ID NO 29), EV1018-N95E IgGl-original-constant(SEQ ID NO 30), EV1018-N95K IgGl-original-constant(SEQ ID NO :31)，EV1018-N95Q IgGl-original-constant(SEQ ID NO 32), EV1018-N93Q-N95T IgGl-original-constant (SEQ ID NO 33), EV1018-wt-IgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO :38)，EV1018—T97 A-IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO: 39), EVlO18-T97V-IgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO :40)，EV1018-N95D-IgGl_K0-QVQL(SEQ ID NO 41), EV1018-N95E IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO :42)，EV1018-N95K IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO 43), EV1018-N95Q IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO 44), EV1018-N93Q-N95TIgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO :45)，EV1018_wt IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :46)，EV1018-T97 A IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :47)，EV1018-T97 V IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :48)， EV1018-N95D IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :49)，EV1018-N95E IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO: 50) , EV1018-N95K IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :51)，EV1018-N95Q IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO 52), EV1018-N93Q-N95T IgGl-QVQL-BI (SEQ ID NO :53)，EV1018_IgG2 (SEQ ID N0:54), EV1018-wt-IgG2(SEQ ID NO :55)， EVlO18_T97A_IgG2(SEQ ID NO: 56), EV1018-T97V-IgG2(SEQ ID NO :57)，EV1018_N95D_IgG2 (SEQ ID NO :58)， EV1018-N95E-IgG2(SEQ ID NO : 59)，EV10 18-N95K-IgG2(SEQ ID NO 60), EV1018-N95Q-IgG2 (SEQ ID NO :61)，EV1018-N93Q-N95T_IgG2 (SEQ ID NO :62)， EV1018-IgG4(SEQ ID NO :63)，EV1018-wt_IgG4(SEQ ID NO :64)，EV1018-T97A_IgG4(SEQ ID NO 65), EV1018-T97V-IgG4(SEQ ID NO :66)，EV1018-N95D_IgG4(SEQ ID NO: 67), EV1018-N95E-IgG4(SEQ ID NO :68)，EV1018_N95K_IgG4 (SEQ ID NO :69)， EV1018-N95Q-IgG4(SEQ ID NO :70)，EV10 18-N93Q-N95T-IgG4(SEQ ID NO: 71) , EV1018-IgG4-SP(SEQ ID NO :72)，EV1018it-IgG4_SP (SEQ ID NO 73), EV1018-T97A-IgG4-SP (SEQ ID NO :74)，EV1018-T97V-IgG4_SP (SEQ ID NO :75)， EV1018-N95D-IgG4-SP (SEQ ID NO :76)，EVlO18_N95E-IgG4_SP (SEQ ID NO :77)， EV1018-N95K-IgG4-SP(SEQ ID NO :78)，EV1018-N95Q-IgG4_SP(SEQ ID NO 79)禾口 EV1018-N93Q-N95T-IgG4-SP(SEQ ID NO :80)。 在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含轻链， EV1018-wt-original-constant (SEQ ID NO 37)，和下述重链变体之一 EV1018(SEQ ID NO 10), EV1018-wt-IgGlK0(SEQ ID NO 11)，EV1018-T97A_IgGlK0 (SEQ ID NO: 12), EV1018-T97V-IgGlK0(SEQ ID NO : 13)，EV1018-N95D_IgGlK0(SEQ ID NO 14), EV1018-N95E IgGlKO(SEQ ID NO : 15)，EV1018-N95K IgGlKO(SEQ ID NO 16), EV1018-N95Q IgGlKO(SEQ ID NO : 17)，EV1018-N93Q-N95T IgGlKO(SEQ ID NO 18), EV1018-wt IgGl-BI(SEQ ID NO 19), EV1018-T97AIgGl_BI(SEQ ID NO :20)，EV1018-T97V IgGl-BI (SEQ ID NO :21)，EVlO18-N95D IgGl-BI (SEQ ID NO :22)，EVlO18-N95E IgGl-BI(SEQ ID NO :23)，EV1018-N95K IgGl-BI (SEQ ID NO :24)，EV1018-N95QIgGl-BI(SEQ ID NO 25), EV1018-N93Q-N95TIgGl-BI(SEQ ID NO 26), EV1018-T97A IgGl-original-constant (SEQ ID NO 27), EV1018-T97V IgGl-original-constant(SEQ ID NO 28), EV1018-N95D IgGl-original-constant (SEQ ID NO 29), EV1018-N95E IgGl-original-constant (SEQ ID NO :30)，EV1018-N95K IgGl-original-constant(SEQ ID NO 31), EV1018-N95Q IgGl-original-constant(SEQ ID NO 32), EV1018-N93Q-N95T IgGl-original-constant(SEQ ID NO 33), EV1018-wt-IgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO :38)， EV1018-T97A-IgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO 39), EV1018-T97V-IgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO: 40), EV1018-N95D-IgGl-K0-QVQL(SEQ ID NO :41)，EV1018-N95E IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO 42), EV1018-N95K IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO :43)，EV1018-N95Q IgGl-KO-QVQL(SEQ ID NO 44), EV1018-N93Q-N95T IgGl-KO-QVQL (SEQ ID NO :45)，EVlO18_wt IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :46)，EV1018-T97A IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO 47),EV1018-T97V IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :48)，EV1018-N95D IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :49)，EV1018-N95E IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :50)，EV1018-N95K IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :51)，EV1018-N95Q IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO 52), EV1018-N93Q-N95T IgGl-QVQL-BI(SEQ ID NO :53)， EV1018-IgG2(SEQ ID NO :54)，EV1018-wt_IgG2(SEQ ID NO :55)，EV1018-T97A_IgG2(SEQ ID N0:56), EV1018-T97V-IgG2(SEQ ID NO :57)，EV1018-N95D_IgG2 (SEQ ID NO: 58), EV1018-N95E-IgG2(SEQ ID NO :59)，EV1018_N95K_IgG2(SEQ ID NO :60)， EV1018-N95Q-IgG2(SEQ ID NO :61)，EV1018-N93Q-N95T_IgG2(SEQ ID NO :62)， EV1018-IgG4(SEQ ID NO :63)，EV1018-wt_IgG4(SEQ ID NO :64)，EV1018-T97A_IgG4(SEQ ID NO 65), EV1018-T97V-IgG4(SEQ ID NO :66)，EV1018-N95D_IgG4(SEQ ID NO: 67), EV1018-N95E-IgG4(SEQ ID NO :68)，EV1018_N95K_IgG4(SEQ ID NO :69)， EV1018-N95Q-IgG4(SEQ ID NO : 70)，EV10 18-N93Q-N95T-IgG4(SEQ ID NO: 71) , EV1018-IgG4-SP (SEQ ID NO :72)，EV1018it-IgG4_SP (SEQ ID NO :73)， EV1018-T97A-IgG4-SP(SEQ ID NO :74)，EV1018-T97V-IgG4_SP(SEQ ID NO :75)， EV1018-N95D-IgG4-SP (SEQ ID NO :76)，EV1018-N95E-IgG4_SP(SEQ ID NO :77)， EV1018-N95K-IgG4-SP (SEQ ID NO :78)，EV1018-N95Q-IgG4_SP (SEQ ID NO 79)禾口 EV1018-N93Q-N95T-IgG4-SP(SEQ ID NO :80)。本发明提供了多种抗体EV1019本身和EV1019抗体的变化，总结在表B中。在某 些实施方式中，重链含有相对于野生型重链序列的一处或多处氨基酸取代。在一些实施方 式中，轻链含有相对于野生型EV1019轻链序列的一处或多处氨基酸取代。在一些实施方式 中，重链和轻链各自含有一处或多处氨基酸取代。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019(SEQ ID NO 160),和选自下面的组的轻链 EV1019-wt_original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant (SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO :212)，EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)，EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO 217),EV1019-S27G(SEQ ID NO 218),EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO 220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-wt-IgGl-BI (SEQ ID NO 161)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO :214)，EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO 216), EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-wt-IgGlK0(SEQ ID NO 162)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105G(SEQ ID NO 163)，和选自下面的组的轻链:EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2 (SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO :212)，EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO 216), EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重 链，EV1019-C105G-IgGl-BI(SEQ ID NO 164),和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original(SEQ ID NO 202)，EVlO19-wt-BI(SEQ ID NO 203), EV1019-wt-BI2(SEQ ID NO 204), EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)， EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)，EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO :209)，EV1019-N25T (SEQ ID NO :210)， EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO :211)，EV1019_N25R(SEQ ID NO 212),EV1019-N25R-BI2(SEQID NO 213), EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO 215), EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)，EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO 217), EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO :219)，EV1019-S27A(SEQ ID NO 220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重 链，EV1019-C105G-IgGlK0(SEQ ID NO 165),和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original(SEQ ID NO 202)，EVlO19-wt-BI(SEQ ID NO 203), EV1019-wt-BI2(SEQ ID NO 204), EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)， EV1019-N25S(SEQ ID NO 206), EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO 207), EV1019-N25G(SEQ ID NO 208), EV1019-N25G-BI2 (SEQ ID NO :209)，EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)， EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO :211)，EV1019_N25R(SEQ ID NO 212),EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO 213), EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)， EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)，EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO :219)，EV1019-S27A(SEQ ID NO 220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105S(SEQ ID NO 166)，和选自下面的组的轻链:EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ IDNO 215), EVlO19-S27N(SEQ ID NO 216), EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重 链，EV1019-C105S-IgGl-BI(SEQ ID NO 167),和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original(SEQ ID NO 202)，EVlO19-wt-BI(SEQ ID NO 203), EV1019-wt-BI2(SEQ ID NO 204), EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)， EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)，EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO 208), EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO :209)，EV1019-N25T (SEQ ID NO :210)， EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO :211)，EV1019_N25R(SEQ ID NO 212),EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO 213), EV1019-N25Q(SEQ ID NO :214)，EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)， EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)，EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO :219)，EV1019-S27A(SEQ ID NO 220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID 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EV1019-C105G-IgG4 (SEQ ID NO 226)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO :212)，EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO :214)，EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105G-IgG4SP (SEQ ID NO :227)，和选自下面的组的轻链EV1019-wt_original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ 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在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105S-IgG4 (SEQ ID NO 229)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO :212)，EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO :214)，EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105S-IgG4SP (SEQ ID NO :230)，和选自下面的组的轻链EV1019-wt_original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO 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NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105A-IgG4 (SEQ ID NO 232)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO 215), EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO 220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105A-IgG4SP (SEQ ID NO :233)，和选自下面的组的轻链EV1019-wt_original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO :214)，EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105Q-IgG2(SEQ ID NO :234)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt_original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2 (SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO :212)，EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO :214)，EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019_S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105Q-IgG4 (SEQ ID NO 235)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO :212)，EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105Q-IgG4SP (SEQ ID NO :236)，和选自下面的组的轻链EV1019-wt_original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO :214)，EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)，EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO 217),EV1019-S27G(SEQ ID NO 218),EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO 220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105T-IgG2 (SEQ ID NO 237)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ IDNO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105T-IgG4 (SEQ ID NO 238)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105T-IgG4SP (SEQ ID NO :239)，和选自下面的组的轻链EV1019-wt_original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant (SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ IDNO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO 216), EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105M-IgG2 (SEQ ID NO 240)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO 215), EV1019-S27N(SEQ ID NO 216), EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO 217),EV1019-S27G(SEQ ID NO 218),EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO 220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105M-IgG4 (SEQ ID NO 241)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO 215), EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105M-IgG4SP (SEQ ID NO :242)，和选自下面的组的轻链EV1019-wt_original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO 212), EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO :214)，EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105L-IgG2 (SEQ ID NO 243)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO -.212), EV1019-N25R-BI2 (SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q (SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO :216)， EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105L-IgG4 (SEQ ID NO 244)，和选自下面的组的轻链 EV1019-wt-original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S (SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2(SEQ ID NO 211),EV1019-N25R(SEQ ID NO :212)，EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO 213), EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO 215), EV1019-S27N(SEQ ID NO 216), EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019_S27G(SEQ ID NO 218),EV1019-S27G-BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO 220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。在本发明的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链， EV1019-C105L-IgG4SP (SEQ ID NO :245)，和选自下面的组的轻链EV1019-wt_original (SEQ ID NO 202) , EV1019-wt-BI (SEQ ID NO :203)，EV1019it_BI2 (SEQ ID NO :204)， EV1019-wt-original-constant(SEQ ID NO :205)，EV1019-N25S(SEQ ID NO :206)， EV1019-N25S-BI2(SEQ ID NO :207)，EV1019-N25G(SEQ ID NO :208)，EV1019-N25G-BI2(SEQ ID NO 209), EV1019-N25T(SEQ ID NO :210)，EV1019-N25T-BI2 (SEQ ID NO 211), EV1019-N25R(SEQ ID NO :212)，EV1019-N25R-BI2(SEQ ID NO :213)，EV1019-N25Q(SEQ ID NO 214), EV1019-N25Q-BI2(SEQ ID NO :215)，EV1019-S27N(SEQ ID NO 216), EV1019-S27N-BI2(SEQ ID NO :217)，EV1019-S27G(SEQ ID NO :218)，EV1019_S27G_BI2(SEQ ID NO 219), EV1019-S27A(SEQ ID NO :220)和 EV1019-S27A-BI2(SEQ ID NO :221)。此外，重链可变区和轻链可变区可以组合得到结合抗原的Fab片段。这样的组合 保留了相同或等效的抗原结合亲和力，可用于产生多种版本的抗原结合片段，如单链可变 片段(scFv)。scFv是免疫球蛋白的重链可变区和轻链可变区的融合物，二者通过短的(通 常是丝氨酸，甘氨酸)接头连接在一起，这在本领域是公知的。相应地，EV1018重链可变区可以与EV1018轻链可变区组合。在一些实施方式中， 重链和/或轻链可变区可以是变体，所述变体与链的野生型序列相比包含一处或多处氨基 酸改变。类似地，EV1019重链可变区可以与EV1019轻链可变区组合。在一些实施方式中， 重链和/或轻链可变区可以是变体，所述变体与链的野生型序列相比包含一处或多处氨基 酸改变。在一些实施方式中，下列EV1018重链可变区中的任一个(如，野生型及 其变体)可以与轻链可变区EV1018-VL-wt-original (SEQ ID NO 364)组合形成 与 hGM-CSF 结合的抗原结合片段:EV1018-VH(SEQ ID NO 348)，EVlO 18-VH-wt (SEQ ID NO 349), EV1018-VH-T97A(SEQ ID NO 350), EV1018-VH-T97V(SEQ ID N0: 351), EV1018-VH-N95D (SEQ ID NO 352)，EVlO18-VH-N95E(SEQ ID NO 353), EV1018-VH-N95K(SEQ ID NO :354)，EVlO18-VH-N95Q(SEQ ID NO 355), EV1018-VH-N93Q-N95T(SEQ ID NO 356), EV1018-VH-T97A IgGl-original-constant (SEQ ID NO 357) , EV1018-VH-T97V IgGl-original-constant(SEQ ID NO: 3 5 8 ) ,EVlO 18-VH-N95D IgGl-original-constant (SEQ ID NO: 359) , EVlO18-VH-N95E IgGl-original-constant (SEQ ID NO 360), EV1018-VH-N95K IgGl-original-constant(SEQ ID NO 361), EV1018-VH-N95Q IgGl-original-constant (SEQ ID NO 362),禾口 EV1018-VH — N93Q-N95T IgGl-original-constant(SEQ ID NO :363)。在一些实施方式中，下列EV1018重链可变区中的任一个(如，野生型 及其变体)可以与轻链可变区EV1018-VL-wt-BI (SEQ ID NO 365)组合，形成与 hGM-CSF 结合的抗原结合片段EV1018-VH(SEQ ID NO 348), EVlO 18-VH-wt (SEQID NO 349), EV1018-VH-T97A(SEQ ID NO 350), EV1018-VH-T97V(SEQ ID NO: 351), EV1018-VH-N95D(SEQ ID NO 352), EVlO18-VH-N95E(SEQ ID NO :353)， EV1018-VH-N95K (SEQ ID NO :354)，EV1 O 18-VH-N95Q(SEQ ID NO 355), EV1018-VH-N93Q-N95T(SEQ ID NO 356), EV1018-VH-T97A IgGl-original-constant(SEQ ID NO 357) , EVlO 18-VH-T97V IgGl-original-constant(SEQ ID NO: 358) , EVlO18-VH-N95D IgGl-original-constant (SEQ ID NO 359), EVlO 18-VH-N95E IgGl-original-constant (SEQ ID NO 360), EV1018-VH-N95K IgGl-original-constant(SEQ ID NO 361), EVlO18-VH-N95Q IgGl-original-constant (SEQ ID NO 362),禾口 EV1018-VH — N93Q-N95T IgGl-original-constant(SEQ ID NO :363)。 同样地，在一些实施方式中，EV1019的抗原结合片段包含重链可变区， EV1019-VH-wt (SEQ ID NO 152)和选自下面的组的轻链可变区EV1019-VL_wt (SEQ
ID NO184)，EV1019-VL-BI (SEQIDNO185)EV1019-VL-N25S(SEQIDNO186)，EV1019-VL-BI-N25S (SEQIDNO187)，EV1019-VL--N25G (SEQIDNO188)，EV1019-VL-BI-N25G (SEQIDNO189)，EV1019-VL--N25T (SEQIDNO190)，EV1019-VL-BI-N25T (SEQIDNO191)，EV1019-VL--N25R(SEQIDNO192)，EV1019-VL-BI-N25R(SEQIDNO193)，EV1019-VL--N25Q (SEQIDNO194)，EV1019-VL-BI-N25Q(SEQIDNO195)，EV1019-VL--S27N(SEQIDNO196)，EV1019-VL-BI-S27N(SEQIDNO197)，EV1019-VL--S27G (SEQIDNO198)，EV1019-VL-BI-S27G(SEQ IDNO199)， EV1019-VL-S27A(SEQ ID NO 200),
EV1019-VL-BI-S27A(SEQ ID NO :201)。 在一些实施方式中，EV1019的抗原结合片段包含重链可变区， EV1019-VH-C105G(SEQ ID NO 153)和选自下面的组的轻链可变区EV1019_VL_wt (SEQ
ID NO184)， EV1019-VL-BI(SEQIDNO185)EV1019-VL-N25S(SEQIDNO186)，EV1019-VL-BI-N25S(SEQIDNO187)，EV1019-VL-N25G (SEQIDNO188)，EV1019-VL-BI-N25G(SEQIDNO189)，EV1019-VL-N25T(SEQIDNO190)，EV1019-VL-BI-N25T(SEQIDNO191)，EV1019-VL-N25R(SEQIDNO192)，EV1019-VL-BI-N25R(SEQIDNO193)，EV1019-VL-N25Q(SEQIDNO194)，EV1019-VL-BI-N25Q(SEQIDNO195)，EV1019-VL-S27N(SEQIDNO196)，EV1019-VL-BI-S27N(SEQ IDNO197), EV1019-VL-S27G(SEQ ID NO 198),EV1019-VL-BI-S27G(SEQ ID NO199)，EV1019-VL-S27A(SEQ ID NO200),
EV1019-VL-BI-S27A(SEQ ID NO :201)。 在一些实施方式中，EV1019的抗原结合片段包含重链可变区， EV1019-VH-C105S(SEQ ID NO 154)和选自下面的组的轻链可变区EV1019_VL_wt (SEQ
ID NO184)，EV1019-VL-BI (SEQIDNO185);’ EV1019--VL--N25S(SEQIDNO186)，EV1019-VL--BI-N25S (SEQIDNO 187)，EV1019--VL--N25G (SEQIDNO188)，EV1019-VL--BI-N25G (SEQIDNO 189)，EV1019--VL--N25T (SEQIDNO190)，EV1019-VL--BI-N25T (SEQIDNO 191)，EV1019--VL--N25R(SEQIDNO192)，EV1019-VL--BI-N25R(SEQIDNO 193)，EV1019--VL--N25Q (SEQIDNO194), EV1019-VL-BI-N25Q(SEQ ID NO 195)，EV1019-VL-S27N(SEQ ID NO: 196), EV1019-VL-BI-S27N(SEQ ID NO 197)，EVlO19-VL-S27G (SEQ ID NO 198), EV1019-VL-BI-S27G(SEQ ID NO :199)，EV1019-VL-S27A (SEQ ID NO 200), EV1019-VL-BI-S27A(SEQ ID NO :201)。 在一些实施方式中，EV1019的抗原结合片段包含重链可变区， EV1019-VH-C105A(SEQ ID NO 155)和选自下面的组的轻链可变区EV1019_VL_wt (SEQ
ID NO184)， EV1019-VL-BI(SEQIDNO185)EV1019-VL-N25S(SEQIDNO186)，EV1019-VL-BI-N25S(SEQIDNO187)，EV1019-VL-N25G (SEQIDNO188)，EV1019-VL-BI-N25G(SEQIDNO189)，EV1019-VL-N25T(SEQIDNO190)，EV1019-VL-BI-N25T(SEQIDNO191)，EV1019-VL-N25R(SEQIDNO192)，EV1019-VL-BI-N25R(SEQIDNO193)，EV1019-VL-N25Q(SEQIDNO194)，EV1019-VL-BI-N25Q(SEQIDNO195)，EV1019-VL-S27N(SEQIDNO196)，EV1019-VL-BI-S27N(SEQ IDNO197), EV1019-VL-S27G(SEQ ID NO 198),EV1019-VL-BI-S27G(SEQ ID NO199)，EV1019-VL-S27A(SEQ ID NO200),
EV1019-VL-BI-S27A(SEQ ID NO :201)。 在一些实施方式中，EV1019的抗原结合片段包含重链可变区， EV1019-VH-C105T(SEQ ID NO 156)和选自下面的组的轻链可变区EV1019_VL_wt (SEQ
ID NO184)， EV1019-VL-BI(SEQIDNO185)EV1019-VL-N25S(SEQIDNO186)，EV1019-VL-BI-N25S(SEQIDNO187)，EV1019-VL-N25G (SEQIDNO188)，EV1019-VL-BI-N25G(SEQIDNO189)，EV1019-VL-N25T(SEQIDNO190)，EV1019-VL-BI-N25T(SEQIDNO191)，EV1019-VL-N25R(SEQIDNO192)，EV1019-VL-BI-N25R(SEQIDNO193)，EV1019-VL-N25Q(SEQIDNO194)，EV1019-VL-BI-N25Q(SEQIDNO195)，EV1019-VL-S27N(SEQIDNO196)，EV1019-VL-BI-S27N(SEQ IDNO197), EV1019-VL-S27G(SEQ ID NO 198),EV1019-VL-BI-S27G(SEQ ID NO199)，EV1019-VL-S27A(SEQ ID NO200),
EV1019-VL-BI-S27A(SEQ ID NO :201)。 在一些实施方式中，EV1019的抗原结合片段包含重链可变区， EV1019-VH-C105M(SEQ ID NO 157)和选自下面的组的轻链可变区EV1019_VL_wt (SEQ
ID NO184)， EV1019-VL-BI(SEQIDNO185)EV1019-VL-N25S(SEQIDNO186)，EV1019-VL-BI-N25S(SEQIDNO187)，EV1019-VL-N25G (SEQIDNO188)，EV1019-VL-BI-N25G(SEQIDNO189)，EV1019-VL-N25T(SEQIDNO190)，EV1019-VL-BI-N25T(SEQIDNO191)，EV1019-VL-N25R(SEQIDNO192)，EV1019-VL-BI-N25R(SEQIDNO193)，EV1019-VL-N25Q(SEQIDNO194)，EV1019-VL-BI-N25Q(SEQIDNO 195)，EV1019-VL-S27N(SEQIDNO196)，EV1019-VL-BI-S27N(SEQ IDNO197), EV1019-VL-S27G(SEQ ID NO 198),EV1019-VL-BI-S27G(SEQ ID NO199)，EV1019-VL-S27A(SEQ ID NO200),
EV1019-VL-BI-S27A(SEQ ID NO :201)。 在一些实施方式中，EV1019的抗原结合片段包含重链可变区， EV1019-VH-C105Q(SEQ ID NO 158)和选自下面的组的轻链可变区EV1019_VL_wt (SEQID NO 184), EV1019-VL-BI (SEQ ID NO 185)，EV1019-VL-N25S (SEQ ID NO 186), EV1019-VL-BI-N25S(SEQ ID NO 187) , EV1019-VL-N25G (SE 188), EV1019-VL-BI-N25G (SEQ ID NO 189), EV1019-VL-N25T (SE 190), EV1019-VL-BI-N25T (SEQ ID NO 191), EVlO19-VL-N25R (SE 192), EV1019-VL-BI-N25R(SEQ ID NO 193)， EVlO19-VL-N25Q(SE 194), EV1019-VL-BI-N25Q(SEQ ID NO 195)， EVlO19-VL-S27N(SE 196), EV1019-VL-BI-S27N(SEQ ID NO 197)，EVlO19-VL-S27G (SEQ ID EV1019-VL-BI-S27G(SEQ ID NO 199)，EVlO19-VL-S27A (SEQ ID EV1019-VL-BI-S27A(SEQ ID NO :201)。 在一些实施方式中，EV1019的抗原结合片段包含重链可变区， EV1019-VH-C105L(SEQ ID NO 159)和选自下面的组的轻链可变区EV1019_VL_wt (SEQ
IDNOIDNOIDNOIDNOIDNOIDNO〕198)，200),
ID NO184)，EV1019-VL-BI (SEQIDNO=185)EV1019-VL-N25S(SEQIDNO186)，EV1019-VL-BI-N25S (SEQIDNO187)，EV1019--VL--N25G (SEQIDNO188)，EV1019-VL-BI-N25G (SEQIDNO189)，EV1019--VL--N25T (SEQIDNO190)，EV1019-VL-BI-N25T (SEQIDNO191)，EV1019--VL--N25R(SEQIDNO192)，EV1019-VL-BI-N25R(SEQIDNO193)，EV1019--VL--N25Q (SEQIDNO194)，EV1019-VL-BI-N25Q (SEQIDNO195)，EV1019--VL--S27N(SEQIDNO
196), EV1019-VL-BI-S27N(SEQ ID NO 197)，EV1019-VL-S27G(SEQ ID NO 198), EV1019-VL-BI-S27G (SEQ ID NO :199)，EVlO19-VL-S27A (SEQ ID NO 200), EV1019-VL-BI-S27A(SEQ ID NO :201)。本发明的变体当两种或更多种全长抗hGM-CSF抗体或其抗原结合部分，或抗hGM_CSF抗体的一 部分同时施用时，它们也包括本发明中。因此，识别hGM-CSF的双特异性抗体，和多特异性 抗体也包括在本发明中。上面的描述中解释了抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分的变化，但是描述 的特征在本领域可以被取代或改变，而不背离本发明的范围。也就是说，下列抗体或其抗原结合部分包括在本发明的范围内(I)全长抗体及其抗原结合部分(II)抗体的一部分，和(III)能够特异结合hGM-CSF并中和其生物活性的重组人单克隆抗体，单克隆抗 体(包括嵌合抗体和人源化抗体)，或其抗原结合部分，其中所述重组人单克隆抗体是通过 任何公知的技术得到的，基于SEQ ID NO :4-9和330-335，SEQ ID NO :364和365，以及SEQ ID NO :348-363，SEQ ID NO 184-201 和 SEQ ID NO 152-159 的氨基酸序列，其代表可变区 和 CDR。当按上述方法产生的特定的抗体或其抗原结合部分基于选自在此描述的SEQ ID NO :4-9，或330-335组成的每个组中的至少一种氨基酸序列来应用时，所述抗体或其抗原 结合部分也包括在本发明中。抗体变体列表下面的表分别提供了 EV1018和EV1019抗体有用的抗体链和片段的列表。
表A :EV1018抗体的重链和轻链变体以及可变区列表
EV1018重链变体evioie轻链变体EV1018SBQ ID NO10EV1018>wt-O)lainaiSEQ ID NO:S4EV1018-wt^gG1KOSEQ 10 NO11EV1018-Wt-BISEQ IDNO.35EV1018-T97A-isG1KOSEQ 10 NO12EV1018-wt-8l2iGiySEO ID NO:36EVlOf8-T97V-lgG1KOSEQIO NO13SEQ IDNO:37EV1018^D'lgG1KGsm ID NO14EV10ia-VL-wt-oriQinalS氐Q IDNO;364EV10t8-N95￡ IgGtKOSEQ \D NO15EVl018-VL-wt-BISEQIDNO:365EV1018"N95K IflGtKOSEQ ID NO16EV1018-N95Q IaGIKOSEQ tD NO17EV1018-N93Q-N9ST IgGtKOSEQ ID NO18
权利要求
分离的抗hGM CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合hGM CSF(SEQ ID NO1)的表位，其包括ELYK(SEQ ID NO2)和TMMASHYKQH(SEQ ID NO3)。
2.分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含(a)重链，其包含含有Vh-⑶Rl的共有序列，含有Vh-⑶R2的共有序列，和含有Vh-⑶R3 的共有序列，其中⑴含有Vh-CDRI的共有序列是FTFSX1X2MH(SEQ ID NO :314)，其中X1是Y或H，且X2是 G或A，(ii)含有VH-CDR2 的共有序列是X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G(SEQ ID NO :315)，其中每个 Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，X3是L或V，X4是T或I，X5是Y或W，X6是R或K， X7是？或Y，且X8是R或K，且(iii)含有VH-CDR3 的共有序列是 EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQ ID NO :316)，其中每个 Xn 相互 独立地是任何天然存在的氨基酸，X9是M或V，且Xltl是A或G ；和(b)轻链，其包含含有Vf⑶Rl的共有序列，含有Vf⑶R2的共有序列，和含有Vf⑶R3 的共有序列，其中(i)含有Vl-CDRI 的共有序列是XnGNXnXnNIGSX11AVG(SEQ ID NO :317)，其中每个Xn相互 独立地是任何天然存在的氨基酸，且X11是H或Y，(ii)含有Vl_CDR2 的共有序列是 GX12SPX13SG (SEQ ID NO :318)，其中 X12 是 R 或 K，且 X13 是A或P，且(iii)含有Vl-CDR3 的共有序列是 STWDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO 319)，其中 X14 是 R 或 S，且X15是V或L。
3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段 结合人GM-CSF的Kd小于400pM。
4.如权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述Kd小于160pM。
5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或 其抗原结合片段中和hGM-CSF活性，从而在TF-I增殖分析中ED80时测得的抗体或其抗原 结合片段IC50值小于ΙΟΟρΜ。
6.如权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述IC50值小于30pM。
7.如权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述IC50值小于20pM。
8.如权利要求1至7中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链选 自伽玛I(Yl),伽玛2(y2),伽玛3(y3),和伽玛4(y4)组成的组。
9.如权利要求1至8中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链具 有选自SEQ ID NO: 10-33，38-80，160-183，222-244和245组成的组的氨基酸序列。
10.如权利要求1至9中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链是 λ轻链。
11.如权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述λ轻链包含至少一个氨基 酸取代，所述取代是R100G或A153G或两者。
12.如权利要求1至11中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链 具有选自SEQ ID NO =34-37,202-220和221组成的组的氨基酸序列。
13.如权利要求1至9中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链是 λ轻链或κ轻链。
14.如权利要求1至13中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链 选自伽玛1 ( Y 1)，伽玛2 ( γ 2)，伽玛3 ( γ 3)，和伽玛4 ( γ 4)组成的组，且其中所述轻链是 λ轻链。
15.如权利要求1至13中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链 包含选自 Τ97Α，T97V, N95D, Ν95Ε, Ν95Κ, N95Q, N93Q/N95T, K144R, L164A,和 L165A 组成的组 的一个或更多个氨基酸取代。
16.如权利要求1至15中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述 Vh-CDRI 包含氨基酸序歹Ij SYGMH(SEQ ID NO 4)或 SHAMH(SEQ ID NO 333)。
17.如权利要求1至16中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述 VH-CDR2 包含氨基酸序列 LTYHHGNRKFYADSVRG(SEQ ID NO :5)或 VIWHDGSKKYYADSVKG(SEQ ID NO 334)。
18.如权利要求1至17中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述 Vh-CDR3 包含氨基酸序列 ESMGAINDN(SEQ ID NO 6)或 EWVGGTCDS (SEQ ID NO 335)。
19.如权利要求1至18中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述 Vl-CDRI 包含氨基酸序列 IGNNNNIGSHAVG (SEQ ID NO :7)或 SGNSSNIGSYAVG (SEQ ID NO: 330)。
20.如权利要求1至19中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述 Vl-CDR2 包含氨基酸序列 GRSPPS (SEQ ID NO 8)或 GKSPAS (SEQ ID NO 331)。
21.如权利要求1至20中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述 Vf CDR3 包含氨基酸序列 STWDSSLSAVV (SEQ ID NO 9)或 STWDSRLSAVL (SEQ ID NO :332)。
22.分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片 段包含6个不同的⑶R，其中所述6个⑶R的序列是SEQ ID NO :4_9。
23.如权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含(i)选自伽玛 1(￥1)，伽玛2(^2)，伽玛3(^3)，和伽玛4(^4)组成的组的重链，和(ii)轻链，其是κ 轻链。
24.如权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含(i)选自伽玛 1(￥1)，伽玛2(^2)，伽玛3(^3)，和伽玛4(^4)组成的组的重链，和(ii)轻链，其是入 轻链。
25.分离的特异与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所 述抗体或其抗原结合片段包含6个不同的CDR，其中所述6个CDR的序列是SEQ ID NO 330-335。
26.如权利要求25所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含(i)选自伽玛 1(￥1)，伽玛2(^2)，伽玛3(^3)，和伽玛4(^4)组成的组的重链，和(ii)轻链，其是κ 轻链。
27.如权利要求25所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含(i)选自伽玛 1(￥1)，伽玛2(^2)，伽玛3(^3)，和伽玛4(^4)组成的组的重链，和(ii)轻链，其是入 轻链。
28.如权利要求1至27中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含 信号序列。
29.如权利要求28所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述信号序列选自SEQID NO 324，325和326组成的组。
30.分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含具有重链序列的 重链和具有轻链序列的轻链，其中所述重链序列是SEQ ID NO :10或其选自SEQ ID NO 11-33，38-79和80组成的组的变体，且其中所述轻链序列是SEQ ID NO :34。
31.分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含具有重链序列的 重链和具有轻链序列的轻链，其中所述重链序列是SEQ ID NO :10或其选自SEQ ID NO 11-33，38-79和80组成的组的变体，且其中所述轻链序列是SEQ ID NO :35。
32.分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含具有重链序列的 重链和具有轻链序列的轻链，其中所述重链序列是SEQ ID NO :10或其选自SEQ ID NO 11-33，38-79和80组成的组的变体，且其中所述轻链序列是SEQ ID NO :36。
33.分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含具有重链序列的 重链和具有轻链序列的轻链，其中所述重链序列是SEQ ID NO :10或其选自SEQ ID NO 11-33,38-79和80组成的组的变体，且其中所述轻链序列是SEQ ID NO :37。
34.分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含具有重链序列的 重链和具有轻链序列的轻链，其中所述重链序列是SEQ ID N0:160或其选自SEQ ID N0 161-244和245组成的组的变体，且其中所述轻链序列是SEQ ID NO 202或其选自SEQ ID NO =203-220和221组成的组的变体。
35.分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含重链可变区，其中 所述重链可变区的氨基酸序列是SEQ ID NO :152或其选自SEQ ID NO :153_158和159组成 的组的变体，和轻链可变区，其中所述轻链可变区的氨基酸序列是SEQ ID N0:184或其选自 SEQ ID NO 185-200和201组成的组的变体。
36.如权利要求35所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列 是 SEQ ID NO :152ο
37.如权利要求35所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区的氨基酸序列 是 SEQ ID NO :184ο
38.如权利要求35所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列 是SEQ ID NO 152，且其中所述轻链可变区的氨基酸序列是SEQ ID NO 184。
39.如权利要求35至38任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体属 于IgG1U)类(亚类)。
40.分离的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含重链可变区，其中 所述重链可变区的氨基酸序列是SEQ ID NO 348或其选自SEQ ID NO =349-362和363组 成的组的变体，和轻链可变区，其中所述轻链可变区的氨基酸序列是SEQ ID NO 364或SEQ ID NO :365。
41.如权利要求40所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列 是 SEQ ID NO :348ο
42.如权利要求40所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区的氨基酸序列是 SEQ ID NO :364ο
43.如权利要求40所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区的氨基酸序列 是 SEQ ID NO :365ο
44.如权利要求40至43任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体属 于IgG1U)类(亚类)。
45.分离的核酸，其编码权利要求1-44中任一权利要求所述的抗hGM-CSF单克隆抗体 或其抗原结合片段。
46.如权利要求45所述的核酸，其中所述核酸是DNA。
47.包含权利要求46的DNA的载体。
48.包含权利要求47的载体的宿主细胞，其中所述载体是表达载体。
49.试剂盒，其包含(a)权利要求1-44中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片 段；和(b)含有所述抗体或其抗原结合片段的一个或更多个容器。
50.用于药物的权利要求1-44中任一权利要求所述的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原 结合片段。
51.包含权利要求1-44中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段和药学上可接 受载体的组合物。
52.权利要求51的组合物，其进一步包含第二分离的结合hGM-CSF的抗体或其抗原结 合片段，从而所述组合物包含多种所述的抗体，多种所述的抗原结合片段，或至少一种所述 的抗体和至少一种所述的抗原结合片段，他们中的每一种均结合hGM-CSF。
53.权利要求52的组合物，其中至少一种所述抗体或其抗原结合片段是具有选自SEQ ID NO :10-80，152-245，320-323，348-364 和 365 组成的组的序列的多肽。
54.试剂盒，其包含权利要求51-53中任一权利要求所述的组合物，和一个或更多个包 含所述组合物的容器。
55.权利要求49或54的试剂盒，其进一步包含说明书。
56.如权利要求1-44和51-53中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段或组合物 在生产或制备治疗受试者中hGM-CSF过表达相关的疾病或病症的药物中的用途，其中所述 抗体或其抗原结合片段结合hGM-CSF并能够中和hGM-CSF活性。
57.如权利要求56所述的用途，其中所述疾病或病症选自慢性阻塞性肺疾病(COPD)， 哮喘，囊性纤维化病，间质性肺病，鼻炎，关节炎及相关关节病，银屑病，髓系白血病和多发 性硬化。
58.如权利要求56或57所述的用途，其中所述抗体或抗原结合片段以不超过500mg的 剂量施用给所述受试者。
59.如权利要求1-44和51-53中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段或组合物 在治疗受试者中hGM-CSF过表达相关的疾病或病症中的用途，其中所述抗体或其抗原结合 片段结合hGM-CSF并能够中和hGM-CSF活性。
60.如权利要求59所述的用途，其中所述疾病或病症选自慢性阻塞性肺疾病(COPD)， 哮喘，囊性纤维化病，间质性肺病，鼻炎，关节炎及相关关节病，银屑病，髓系白血病和多发 性硬化。
61.如权利要求59或60所述的用途，其中所述抗体或抗原结合片段以不超过500mg的剂量施用给所述受试者。
62.如SEQID NO 2和3所示的多肽中hGM_CSF的表位，其中所述表位被权利要求22 或25中所述的抗体或其抗原结合片段识别，且其中所述多肽序列表示hGM-CSF(SEQ ID NO 1)的不连续的区段。
63.表位，所述表位是人GM-CSF的不连续的区段，其中所述表位包含人GM-CSF(SEQID NO :1)氨基酸残基77-80和人GM-CSF (SEQ ID NO 1)氨基酸残基95-104，并被抗hGM_CSF单 克隆抗体或其抗原结合片段识别，所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO 4-9 或 SEQ ID NO 330-335 所示的 6 个不同的 CDR。
64.在宿主细胞中生产与hGM-CSF结合的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段的 方法，其中所述抗体或其抗原结合片段至少包含含有Vh-CDRI的共有序列，含有Vh-CDR2的 共有序列，含有\义01 3的共有序列，含有VfCDRl的共有序列，含有\-CDR2的共有序列， 和含有Vf⑶R3的共有序列，所述方法包括(i)获得包含至少一种DNA序列的宿主细胞，所述DNA序列至少编码含有Vh-⑶Rl的共 有序列，含有Vh-CDR2的共有序列，含有Vh-CDR3的共有序列，含有VfCDRl的共有序列，含 有Vf⑶R2的共有序列，和含有Vf⑶R3的共有序列，其中(a)含有Vh-CDRI的共有序列是FTFSX1X2MH(SEQID NO 314)，其中X1是Y或H，且X2是 G或A，(b)含有VH-CDR2 的共有序列是 X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G (SEQ ID N0:315)，其中每个 Xn相互独立地是任何天然存在的氨基酸，X3是L或V，X4是T或I，X5是Y或W，X6是R或K， 父7是？或￥，且乂8是1 或1(，(c)含有VH-CDR3的共有序列是EXnX9GXltlXnXnDXn(SEQID NO :316)，其中每个Xn相互独 立地是任何天然存在的氨基酸，X9是M或V，且Xltl是A或G，(d)含有Vl-CDRI 的共有序列是XnGNXnXnNIGSX11AVG(SEQ ID NO :317)，其中每个Xn相互 独立地是任何天然存在的氨基酸，且X11是H或Y，(e)含有Vl_CDR2 的共有序列是 GX12SPX13SG (SEQ ID NO :318)，其中 X12 是 R 或 K，且 X13 是A或P，且(f)含有Vl-CDR3 的共有序列是 STWDSX14LSAVX15 (SEQ ID NO :319)，其中 X14 是 R 或 S， 且X15是V或L ；并( )在适合DNA表达和产生抗体或其抗原结合片段的条件下培养所述宿主细胞。
65.权利要求64的方法，其中所述至少一种DNA编码重链或其部分和轻链或其部分， 其中所述重链或其部分具有选自SEQ ID NO 10-33，38-80，152-183，222-245，348-362和 363组成的组的序列，且其中所述轻链或其部分具有选自SEQ ID NO =34-37,184-221, 364 和365组成的组的序列。
66.权利要求64或65的方法，其进一步包括分离抗体或其抗原结合片段。
67.权利要求64-66任一项的方法，其进一步包括制备包含所述抗体或其抗原结合片 段和药学上可接受载体的组合物。
68.载体，其包含编码Vh-OTRI,Vh-⑶R2和Vh-⑶R3的DNA序列，其中Vh-CDRI 是 SYGMH(SEQ ID NO 4)或 SHAMH(SEQ ID NO 333)，VH-CDR2 是 LTYHHGNRKFYADSVRG(SEQ ID NO 5)或 VIWHDGSKKYYADSVKG(SEQ ID NO:334)，且VH-CDR3 是 ESMGAINDN(SEQ ID NO 6)或EWVGGTCDS(SEQ ID NO :335)。
69.载体，其包含编码Vh-OTRI,Vh-⑶R2和Vh-⑶R3的DNA序列，其中Vl-CDRI 是 IGNNNNIGSHAVG(SEQ ID NO 7)或 SGNSSNIGSYAVG(SEQ ID NO 330)；VL-CDR2 是 GRSPPSG(SEQ ID NO 8)或 GKSPASG(SEQ ID NO 331)；且VL-CDR3 是 STWDSSLSAW(SEQ ID NO 9)或 STWDSRLSAVL(SEQ ID NO :332)。
70.鉴定与权利要求62或63所述表位结合的分子的方法，包括(i)用包含所述表位的探针接触生物样品或肽库；( )分离特异结合所述探针的分子；并(iii)鉴定所述分子。
71.权利要求70的方法，其进一步包括(iv)生产(iii)的分子。
72.权利要求70或71的方法，其中所述分子是抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合片段。
73.权利要求70-72任一项的方法，其中所述探针进一步包含可检测的标记。
74.权利要求70-73任一项的方法，其中所述探针是固定化的。
75.能够结合hGM-CSF(hGM-CSF)并中和hGM-CSF (hGM-CSF)生物活性的抗hGM-CSF单 克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分具 有由选自SEQ ID NO :4至9组成的组的一个或更多个氨基酸序列表示的互补决定区(⑶R)。
76.能够结合hGM-CSF并中和hGM-CSF生物活性的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结 合部分，其特征在于所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分具有由选自SEQ ID NO 330至335组成的组的一个或更多个氨基酸序列表示的互补决定区(OTR)。
77.根据权利要求75或权利要求76的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其特 征在于所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分具有一氨基酸序列，其中在所述互补 决定区(CDR)中一个或更多个氨基酸被取代，缺失，插入或添加。
78.根据权利要求75-77任一项的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在 于，当TF-I细胞通过hGM-CSF的诱导增殖时，所述抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部 分在浓度约14pM时，抑制约50%的TF-I细胞增殖。
79.根据权利要求78的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于所述抗 hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分抑制外周血树突状细胞的增殖。
80.根据权利要求78的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于所述抗 hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分具有对hGM-CSF的高亲和力，Kd值为4X10—"^或更 低。
81.根据权利要求75-80任一项的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在 于所述抗体属于IgG1 ( λ )类(亚类)。
82.根据权利要求75-81任一项的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在 于所述抗hGM-CSF单克隆抗体是人单克隆抗体。
83.用于hGM-CSF引起的疾病的药物组合物，其包含根据权利要求75-82任一项的抗 hGM-CSF单克隆抗体或抗原结合部分，和药学上可接受的载体。
84.根据权利要求83的药物组合物，其特征在于所述由hGM-CSF过量产生导致的疾病 是选自下面的组的任一个(a)变应性疾病，如哮喘，特应性和花粉症，(b)移植物排斥，移植物抗宿主病(GVHD)，和(c)自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎。
85.编码抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分的分离的脱氧核糖核酸(DNA)，所述 抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分能够结合hGM-CSF并中和hGM-CSF生物活性，其 特征在于所述分离的DNA编码包含选自SEQ ID NO :4至9组成的组的至少一个的氨基酸序 列。
86.编码抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分的分离的DNA，所述抗hGM-CSF单克 隆抗体或其抗原结合部分能够结合hGM-CSF并中和hGM-CSF生物活性，其特征在于所述分 离的DNA编码包含选自SEQ ID NO :330至335组成的组的至少一个的氨基酸序列。
87.分离的DNA，其能够在严紧条件下杂交权利要求85或权利要求86中所述的DNA。
88.载体，其特征在于其中掺入了根据权利要求85-87任一项的分离的DNA。
89.宿主细胞，其特征在于其中引入了根据权利要求88的重组表达载体。
90.增强活性的方法，其特征在于特异于同一特定抗原的多种抗hGM-CSF单克隆抗体 或其抗原结合部分同时施用。
91.根据权利要求90所述的增强活性的方法，其特征在于所述多种抗hGM-CSF单克隆 抗体或它们的抗原结合部分包含选自下列(a)和(b)的两型或更多型的抗体或它们的抗原 结合部分(a)抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其具有由SEQID N0:4至9，SEQ ID NO 330至335，SEQ ID NO 336至341或SEQ ID NO 342至347的氨基酸序列所表示的互补决 定区(⑶R)，并且其特异于hGM-CSF，(b)(a)的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其具有一氨基酸序列，其中一个 或更多个氨基酸被取代，缺失，插入，或添加，并且其特异于hGM-CSF。
92.根据权利要求91的增强活性的方法，其特征在于，当TF-I细胞通过hGM-CSF的 诱导增殖时，所述两型或更多型的抗体或它们的抗原结合部分在各自浓度约55pM时抑制 80%或更多的TF-I细胞增殖。
93.药用组合物或兽药组合物，其包含多种特异于同一特定抗原的抗hGM-CSF单克隆抗体或它们的抗原结合部分，和药学上 可接受的载体。
94.根据权利要求93的药用组合物或兽药组合物，其特征在于，所述多种抗hGM-CSF单 克隆抗体或它们的抗原结合部分包含选自下列(a)和(b)的两型或更多型的抗体或它们的 抗原结合部分(a)抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其具有由SEQID N0:4至9，SEQ ID NO 330至335，SEQ ID NO 336至341或SEQ ID NO 342至347的氨基酸序列所表示的互补决 定区(OTR)，并且其特异于hGM-CSF，(b)(a)的抗hGM-CSF单克隆抗体或其抗原结合部分，其具有一氨基酸序列，其中一个 或更多个氨基酸被取代，缺失，插入，或添加，并且其特异于hGM-CSF。
95.根据权利要求94的药用组合物或兽药组合物，其特征在于，当TF-I细胞通过 hGM-CSF的诱导增殖时，所述两型或更多型的抗体或它们的抗原结合部分在各自浓度约 55pM时抑制80%或更多的TF-I细胞增殖。
全文摘要
在此公开的是抗hGM-CSF单克隆抗体和这样的抗体的抗原结合片段，具有改善的中和hGM-CSF活性的能力。还提供了包含这样的抗体或抗原结合片段的药物组合物。本发明对于治疗与hGM-CSF异常表达相关的多种疾病是有用的。
文档编号A61P17/06GK101970489SQ200880124664
公开日2011年2月9日 申请日期2008年11月12日 优先权日2007年11月13日
发明者中岛款冬, 约翰·帕克, 芭芭拉·基斯特勒, 高田贤藏 申请人:Evec股份有限公司;贝林格尔.英格海姆国际有限公司