专利名称：抗-间皮素抗体及其用途的制作方法
抗-间皮素抗体及其用途本发明提供了特异于膜锚定的，40kDa间皮素多肽的重组抗原结合区和包含所述 抗原结合区的抗体和功能片段，所述间皮素多肽在若干种肿瘤中过表达，例如胰腺和卵巢 肿瘤，间皮瘤和肺癌细胞。相应地，这些抗体可用于治疗这些和其它病症和状况。本发明 的抗体还可用于诊断领域，以及用于进一步研究间皮素在与癌症相关的病症的进展中的作 用。本发明还提供了编码前述抗体的核酸序列，包含其的载体，药物组合物和具有使用说明 的试剂盒。
背景技术：
基于抗体的治疗证明在治疗多种癌症，包括实体肿瘤中是非常有效的。例如， HERCEPTIN 已经成功地用于治疗乳癌。成功的基于抗体的治疗的开发的中心是分离 针对发现在肿瘤细胞上优先表达的细胞表面蛋白的抗体。间皮素前体多肽是糖磷脂酰 肌醇(GPI)-锚定的，糖基化的细胞表面蛋白，其被蛋白水解裂解为30kDa的N-末端分 泌的多肽和40kDa的C-末端多肽，后者主要以膜结合的，GPI-锚定的形式存在(Chang， K. and I. Pastan, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, (1996)93(1) : 136)，并且其在此命名为间皮 素(mesothelin)。间皮素被某些肿瘤细胞优先表达，特别是间皮瘤细胞，胰腺肿瘤细胞和 卵巢癌细胞，而其表达在正常组织中受限，使得它成为用于肿瘤治疗的理想靶标(Argani， P. et al.，Clin. Cancer Res. (2001)7(12) 3862 ；Hassan，R.，et al.，Clin. Cancer Res. (2004) 10(12 Pt 1) :3937)。间皮素的功能是未知的，并且在间皮素基因表达缺陷的小鼠中 没有观察到明显的生殖，血液学，或解剖学异常(Bera，T. K. and I. Pastan,Mo 1. Cell. Biol. (2000)20(8) :2902)。针对表达间皮素的癌细胞的基于抗体的，靶向的治疗已经被提出用于治疗肺，卵 巢和胰腺癌。Mab Kl是已被描述的针对膜结合间皮素多肽的第一个抗体(Chang，K.，et al.，Int. J. Cancer, (1992)50(3) :373)。Mab Kl通过免疫小鼠产生。由于该抗体的低亲 合力和弱的内化速率，由与假单胞菌属外毒素A的化学修饰的截短形式相连的Mab Kl组成 免疫毒素被认为不适于临床开发(Hassan, R.，et al.，J. Immunother. (2000)23(4) 473 ； Hassan, R. , et al. ,Clin. Cancer Res. (2004) 10(12 Pt 1) :3937)。结果，开发了具有更高 亲合力的单链抗体，包括SSl-(dsFv)-PE38，其显示了体外杀伤肿瘤细胞活性(Hassan，R.， etal. , Clin. Cancer Res. (2002)8(11) 3520)以及在表达人类间皮素的肿瘤的鼠模型中 的效力(Fan, D. , et al.，Mol. Cancer Ther. (2002) 1(8) :595)。这些数据证实了间皮素为 用于多种癌症的免疫治疗的适合的靶标。然而，在临床实验中，SSl-(dsFv)-PE38是免疫原 性的，阻止了对大多数患者的第二次给药。而且，SSl-(dsFv)-PE38已经显示出具有快速的 血液清除并且已经报道了通过将该融合蛋白peg化来提高分子量的尝试(Filpula，D.，et al.，Bioconjugate Chem. (2007) 18(3) :773)。MS-1，MS_2和MS-3是间皮素结合抗体，其由于它们的人类IgGl同种型在细胞表面 引发免疫效应物活性，并且内化入间皮素表达细胞(W0 2006/099141 A2)。这些抗体之一， 未缀合的IgG抗-间皮素抗体MOR Ab 009当前在用于治疗胰腺癌的治疗效果的临床实验 中测试。
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用于免疫毒素癌症治疗的临床结果的异种移植鼠癌症模型的预测价值通常受限 于缺少治疗抗体与它们的鼠同系物的交叉反应性，这导致降低的与正常组织的非特异性结 合。另一方面，中和在用鼠或嵌合抗体治疗的患者中形成的抗_小鼠Fv抗体可导致剂量限 制性毒性或减小的治疗效力。因此，为完全利用在癌症治疗中特异间皮素表达的潜力，需要 如下的靶向抗体，其组合了提高的亲合力和降低的与完全人类可变链形式的缔合速率，和 鼠交叉反应性的优点。新抗体的进一步的必要特征是对在它们表面表达间皮素的不同癌细胞系的不变 的亲合力。间皮素是高度可变的蛋白，经历了翻译后蛋白水解消化和在多个位点的糖基化 (Hassan, R.，et al.，Clin. CancerRes. (2004) 10(12 Pt 1) :3937)。可变性延伸到转录水 平，因为三种不同的剪接变体已被检测到，尽管转录变体1(NM_005823)似乎代表了在目前 为止测试的肿瘤细胞系中存在的主要种类(Muminova，Ζ. Ε.，et al.，BMC Cancer (2004)4 19 ；Hellstrom,I. ,et al. ,Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. (2006) 15(5) :1014)。因 此，有效的抗-间皮素抗体必须不变地结合来自不同患者的肿瘤细胞呈递的表位，独立于 个体变异，包括但不限于，糖基化模式的变异，其导致不同形式的间皮素的表达。本文提供了抗体，其抗原结合抗体片段，或其变体，其以高并且不变的亲合力结合 间皮素，有效地内化，并且其优选与来自其它物种的间皮素交叉反应。还提供了基于抗体的 用于癌症的治疗，特别是用于表达间皮素的肿瘤，例如胰腺，卵巢或肺癌，其使用促进治疗 活性试剂向癌细胞的递送的抗体，其抗原结合抗体片段，或其变体。发明概述本发明的一个目标是提供人类和人源化抗体，或其抗原结合抗体片段，或其变体， 其对于间皮素前体多肽的40kDa的C-末端细胞外部分具有高度选择性，并且其可用于检测 间皮素表达的方法中，间皮素表达与疾病状态例如胰腺，卵巢，和肺癌相关，和用于治疗所 述疾病状态。为了这些目的，本发明的一个目标是提供分离的人类抗体，或其抗原结合抗体 片段，其特异性结合间皮素多肽(SEQ ID NO 370)上存在的表位，其被表达间皮素的癌细 胞系不变地呈递，并且其被具有相当的亲合力的这些抗体结合。如本文使用的，术语表位的 “不变的呈递”指被宽范围的表达间皮素肿瘤细胞系上的特定抗体识别的表位的存在，所述 肿瘤细胞系表达不同形式的间皮素。如本文使用的，间皮素的不同“形式”包括但不限于经 历不同的翻译和翻译后修饰的不同糖形，不同同种型或间皮素多肽。如本文使用的，术语 “相当的亲合力”指通过结合表达不同形式间皮素的细胞的抗体的FACS数据的Scatchard 分析获得的半最大抗体效力(EC5tl)值，其差别不超过10倍，或优选5倍，或甚至更优选2倍。本发明的另一目标是提供对于人类给药是安全的抗体，或其抗原结合抗体片段， 或其变体。本发明的另一目标是提供结合人类间皮素并且对其它物种的间皮素是交叉反应 性的抗体，或其抗原结合抗体片段，或其变体。优选地，所述其它物种是啮齿类动物，例如小 鼠或大鼠。最优选地，所述抗体，或其抗原结合抗体片段，或其变体结合人类间皮素并且对 鼠间皮素是交叉反应性的。本发明的另一目标是提供以相当的亲合力不变地结合不同的表达间皮素的细胞 系的抗体，或其抗原结合抗体片段，或其变体。如本文使用的，术语特定抗体与间皮素的“不 变的结合”指它结合表达不同形式的间皮素的宽范围的表达间皮素的癌细胞系上的间皮素的能力。不变的结合可由但不限于以下事实引起，即抗体，或其抗原结合抗体片段，或其变 体识别没有被其它细胞外抗原掩蔽的间皮素表位，所述抗原例如癌症抗原125(CA125)，其 与间皮素相互作用。本发明的另一目标是通过利用本发明的一种或更多种抗体或其变体，提供结合不 同的表达间皮素的癌细胞或肿瘤细胞并且引发针对表达间皮素的癌细胞的免疫效应物活 性(例如ADCC或CDC)的抗体或其变体。本发明的另一目标是提供在结合表达间皮素的细胞之后被内化的抗体，或其抗原 结合抗体片段，或其变体。本发明的另一目标是提供用于治疗疾病的方法，其通过递送细胞 毒性药物或释放药物的酶到表达间皮素的癌细胞，通过利用本发明的一种或更多种抗体， 或其抗原结合抗体片段，或其变体。本发明的另一目标是提供构成诊断恶性或发育不良的状况的工具的抗体，所述状 况中间皮素表达相对于正常组织提高。提供了与可检测标记缀合的抗-间皮素抗体。优选 的标记是放射标记，酶，发色团或荧光剂。本发明还涉及编码本发明抗体的多核苷酸，表达本发明抗体的细胞，用于生产本 发明抗体的方法，利用该抗体用于抑制发育不良细胞的生长的方法，和利用该抗体用于治 疗和检测癌症的方法。本发明提供了与Mab Kl，SSI, MS-1，MS-2和MS-3区别在于以下的抗体它们a) 不变地结合间皮素b)与鼠间皮素交叉反应c)以低亲合力结合间皮素d)有效内化到表达 间皮素的细胞，和e)包含人类可变区。本发明的这些和其它目标在本文中更完整地描述。在一个方面，本发明提供包含特异于40kDa间皮素多肽的表位的抗原结合区的分 离的抗体或功能性抗体片段。所述抗体或其功能片段可包含抗原结合区，所述抗原结合区包含SEQ ID NO 67-98所述的H-CDR3区；所述抗原结合区可进一步包括SEQ ID NO :31_66所述的H-CDR2 区；并且所述抗原结合区还可包含SEQ ID NO 1-30所述的H-⑶R1区。本发明的所述间皮 素-特异抗体可包含抗原结合区，所述抗原结合区包含SEQ ID NO: 160-197所述的L-⑶R3 区；所述抗原结合区可进一步包括SEQ ID NO 99-128所述的L-⑶R1区；并且所述抗原结 合区还可包含SEQ ID NO 129-159所述的L-CDR2区。本文公开的序列的多肽变体也被本发明包括。相应地，本发明包括抗_间皮素抗 体，所述抗_间皮素抗体具有重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列具有在CDR区中与SEQ ID NO: 1-197所述CDR区至少60%的序列同一性；和/或在CDR区中与SEQ ID NO 1-197 所述⑶R区至少80%的序列同源性。还包括的是抗-间皮素抗体，所述抗-间皮素抗体具 有轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列具有在CDR区中与SEQ ID NO: 1-197所述CDR区 至少60%的序列同一性；和/或在CDR区中与SEQ ID NO 1-197所述CDR区至少80%的序 列同源性。例如，本发明的抗体可以是IgG(例如，Igh)，而抗体片段可以是Fab或scFv。发 明的抗体片段，相应地，可以是，或可以包含以一个或更多个如本文所述方式发挥作用的抗
原结合区。本发明还涉及分离的核酸序列，其每种可编码特异于间皮素表位的人类抗体或其功能片段的抗原结合区。所述核酸序列可编码抗体的可变重链并且包括选自SEQ ID N0S 284-326的序列或在高度严格条件下与SEQ ID NO :284_326的互补链杂交的核酸序列。所 述核酸可编码分离的抗体或其功能片段的可变轻链，并且可包含选自SEQ IDN0S 327-369 的序列，或在高度严格条件下与SEQ ID NO 327-369的互补链杂交的核酸序列。本发明的核酸适于重组生产。因此，本发明还涉及包含本发明核酸序列的载体和 宿主细胞。本发明的组合物可用于治疗或预防应用。本发明因此包括包含发明的抗体(或功 能性抗体片段)和用于其的药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。在相关的方面， 本发明提供了用于治疗与表达间皮素的细胞的不期望的存在相关的病症或状况的方法。所 述方法包含给予有此需要的受试者有效量的药物组合物的步骤，所述药物组合物包含本文 所述或预期的发明的抗体。本发明还提供了用于使用抗体文库来分离所述文库的特异性并且不变地结合间 皮素的一种或更多种成员的说明。附图描述
图1显示了通过Biacore配对结合分析的抗-间皮素抗体表位分组。抗体对的竞 争性结合通过下列来确定将抗体固定于传感器芯片，将可溶性间皮素与该抗体结合，并且 立即将第二抗体与间皮素结合。识别间皮素上相同或重叠表位的抗体对不能同时结合。测 试了抗体对的所有组合。显示了对于MF-T的代表性数据(A)。B栏描绘了其中抗-间皮素 抗体的表位的相对位置，其中通过重叠圆圈描绘了竞争。图2显示了本发明抗体识别的不同形式的间皮素。1和2 结合于0VCAR-3细胞提 取物中的间皮素的MF-J ；3和4 结合于CH0-A9细胞提取物中的间皮素的MF-J ；5 结合于 NCI-H226细胞提取物中的间皮素的MF-J ；6 结合于重组的去糖基化的间皮素的MF-J ；7 结合于0VCAR-3细胞提取物的M0R06635 ；和8 结合于NCI-H226细胞提取物的M0R06635。图3显示了当癌抗原125 (CA125)结合包括M0R06640和MF-T的间皮素抗体亚组 时它结合间皮素，而其它抗体，例如MF-226，与CA125竞争间皮素结合。显示的数据是通过 SECTOR光成像仪(Meso Scale Discovery)检测的相对光单位(RLU)。平板用所述间皮素 抗体包被。间皮素以所示浓度添加并且被向低滴定(titrate down) 0 CA125随后以恒定浓 度结合。用小鼠抗-CA125抗体和MSD Sulfo标签标记的抗小鼠FAB抗体进行检测。图4提供了在表达间皮素的CH0-A9细胞上1251-抗-间皮素抗体内化的数据。七 种抗-间皮素mabs，包括商业化的阳性对照K1，在没有(A)和有⑶稳定化的第二抗体时 的相对内化。使用MF-226加上第二抗体，显示了在37°C下随时间(C)的解离的，表面结合 的和内化的抗体的相对量的代表性数据与0°C的非允许温度时的数据⑶比较。发明详述本发明基于发现特异于间皮素或具有对间皮素的高亲合力的新抗体，所述新抗体 可给予受试者治疗益处。本发明的抗体，其可以是人类的或人源化的，可在许多环境下使 用，其在本文中更完整地描述。定义“人类”抗体或功能性人类抗体片段在此定义为不是嵌合的(例如，不是“人源化 的”)并且不是来自(整体或部分)非人物种的。人类抗体或功能性抗体片段可来源于人类或可以是合成的人类抗体。“合成的人类抗体”在此定义为具有整体或部分在计算机芯片上 地来源于基于已知人类抗体序列的分析的合成序列的序列。人类抗体序列或其片段的在计 算机芯片上的设计可例如通过以下实现分析人类抗体或抗体片段序列的数据库，并且利 用获于其的数据设计多肽序列。人类抗体或功能性抗体片段的另一实例是分离自人类来源 的抗体序列文库的核酸编码的抗体或功能性抗体片段(即，所述文库基于取自人类天然来 源的抗体)。人类抗体的实例包括HuCAL抗体，如Knappik et al.，J. Mol. Biol. (2000)296 57和美国专利号6，300，064所述。“人源化抗体”或功能性人源化抗体片段在本文中定义为如下(i)来源于非人类 来源(例如，具有异源免疫系统的转基因小鼠)，所述抗体基于人种系序列；或(ii)嵌合 的，其中可变结构域来源于非人类来源并且恒定结构域来源于人类来源或(iii)CDR-移植 的，其中可变结构域的CDR来自非人类来源，而可变结构域的一个或更多个框架是人类来 源的并且恒定结构域(如果有的话)是人类来源的。如本文使用的，如果抗体能够区别抗原与一种或更多种参考抗原，则该抗体“特异 性结合于”，“特异于”或“特异性识别”该抗原(本文中，间皮素)，因为结合特异性不是绝对 的，而是相对的性质。在它的大多数一般形式中(并且当没有提到定义的参考时)，“特异性 结合”是指抗体区别感兴趣的抗原与不相关抗原的能力，例如根据下列方法之一所确定的。 所述方法包括但不限于Western印迹，ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-测试和肽扫描。例如，可 进行标准ELISA测定。可通过标准显色(例如，第二抗体与辣根过氧化物酶和四甲基联苯 胺与过氧化氢)进行评分。在某些孔中的反应通过例如在450nm的光学密度评分。典型的 背景(=阴性反应)可以是0. IOD ；典型的阳性反应可以是10D。这意味着阳性/阴性的差 异可以超过10倍。典型地，结合特异性的确定通过利用不是单个参考抗原，而是一组大约 3到5个不相关抗原，例如奶粉，BSA，转铁蛋白等而进行。然而，“特异性结合”还可指抗体区别靶抗原和一种或更多种紧密相关抗原(其用 作参考点)的能力。另外，“特异性结合”可涉及抗体区别其靶抗原不同部分的能力，例如， 间皮素的不同结构域或区，例如间皮素的N-末端或C-末端区中的表位，或区别间皮素氨基 酸残基的一个或更多个关键氨基酸残基或段的能力。而且，如本文使用的，“免疫球蛋白”由此定义为属于IgG，IgM, IgE, IgA，或IgD类 (或任何其亚类)的蛋白，并且包括其所有通常已知的抗体和功能片段。抗体/免疫球蛋白 的“功能片段”或“抗原结合抗体片段”由此定义为保持抗原结合区的抗体/免疫球蛋白的 片段(例如，IgG的可变区)。抗体的“抗原结合区”通常发现于抗体的一个或更多个超变区， 即，⑶R-I，-2和/或-3区；然而，可变“框架”区也可在抗原结合中起重要作用，例如通过提 供CDR的骨架。优选，“抗原结合区”至少包含可变轻(VL)链的氨基酸残基4至103和可变重 (VH)链的5至109，更优选VL的氨基酸残基3至107和VH的4至111，并且特别优选的是完 整的VL和VH链(VL的氨基酸位点1至109和VH的1至113 ；编号根据WO 97/08320)。用于 本发明的免疫球蛋白的优选种类是IgG。本发明的“功能片段”包括Fab，Fab' ,F(ab' )2， 和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(scFv)；和从抗体片段形成的多特异性抗体 (C. A. K Borrebaeck, editor (1995)Antibody Engineering (Breakthroughs in Molecular Biology),Oxford University Press ；R. Kontermann & S·Duebel，editors(2001)Antibody Engineering (Springer Laboratory Manual), Springer Verlag)。“双特异性，，或“双功會邑性”抗体之外的抗体被理解为其每个结合位点是相同的。可以改造F(ab’)2或？油来最小 化或完全除去分子间二硫化物相互作用，这发生于Cm和Q结构域之间。本发明的抗体可来源于重组抗体文库，所述重组抗体文库基于在计算机芯片上设 计并且被合成产生的核酸编码的氨基酸序列。在计算机芯片上设计抗体序列例如通过分 析人类序列数据库并且利用从其获得的数据设计多肽序列来获得。用于设计和获得在计 算机芯片上产生的序列的方法描述于例如，Knappik et al.，J. Mol. Biol. (2000)296 57 ； Krebs et al.，J. Immunol. Methods. (2001) 254 :67 ；和授予 Knappik et al.的美国专利号 6，300，064，其全文通过引用由此并入。如本文使用的，抗原，例如间皮素的不同“形式”，由此定义为产生于不同翻译和翻 译后修饰，例如但不限于，初级间皮素转录物剪接的不同，糖基化的不同和翻译后蛋白水解 切割的不同，的不同蛋白分子。如本文使用的，术语特定抗体与间皮素的“不变的结合”指它结合在宽范围的表 达间皮素的癌细胞系上的间皮素的能力，所述癌细胞系表达不同形式的间皮素。对于不变 地结合的抗体，通过在两种不同癌细胞系上的FACS滴定测定的EC50值可能差别不超过10 倍，或优选5倍，并且最优选1和3倍之间。如本文使用的，术语“表位”包括能够特异性结合免疫球蛋白或T-细胞受体的任 何蛋白决定簇。表位决定簇通常由分子例如氨基酸或糖侧链的化学活性表面分组组成，并 且通常具有特异性的三维结构特征，以及特异性电荷特征。如果通过本领域技术人员公知 的任何方法，一种抗体在竞争性结合实验中显示与第二种抗体竞争，则两种抗体被称为“结 合相同表位”。本发明的抗体本发明涉及通过提供抗_间皮素抗体抑制间皮素阳性癌细胞生长和肿瘤疾病进 展的方法。提供了人类单克隆抗体，其抗原结合抗体片段，和该抗体和片段的变体，其特异 性结合间皮素前体多肽的40kDa的C-末端结构域(SEQ ID NO 370)，其在本文中命名为“间
皮素”。本发明的抗体，抗原结合抗体片段，和该抗体和片段的变体包含轻链可变区和重 链可变区。本发明中预期的所述抗体或抗原结合抗体片段的变体是这样的分子，其中所述 抗体或抗原结合抗体片段对于间皮素的结合活性被保持。贯穿本文献，参考下列本发明的代表性抗体"MF-J，，，"M0R07265，，，"M0R06631，，，"M0R06635，，，"M0R06669，，，"M0R07111，，， "M0R06640，，，"M0R06642，，，"M0R06643，，，” MF-226，，，"M0R06626，，，"M0R06638，，，"MF-A，，， "M0R06657，，，"MF_T，，，"MF1，，，"MF_5，，，"MF_8，，，"MF-24，，，"MF-25，，，"MF-27，，，"MF-73，，， "MF-78，，，"MF-84，，，"MF-101", “MF-230，，，“MF-236，，，“MF-252，，，“MF-257，，，“MF-423，，， "MF-427，，，"MF-428，，，MF-C，，，"MF-I，，，"MF-L，，，"MF-M，，，"MF-P，，，"MF-Q，，，MF-S，，，"MF-V，，， “MF-W”，禾口 “MF-Y”。MF-J 代表具有对应于 SEQID NO 284 (DNA)/SEQ ID N0:198(蛋白)的 可变重区和对应于SEQ IDNO 327 (DNA)/SEQ ID N0:241(蛋白)的可变轻区的抗体。MOR 07265代表具有对应于SEQ ID NO 285 (DNA)/SEQ ID N0:199(蛋白)的可变重区和对应于 SEQ ID NO 328 (DNA)/SEQ ID N0:242(蛋白)的可变轻区的抗体。MOR 06631代表具有对应 于SEQ ID NO 286 (DNA)/SEQID N0:200(蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 329 (DNA)/
8SEQ IDNO :243(蛋白)的可变轻区的抗体。MOR 06669代表具有对应于SEQID NO 287 (DNA)/ SEQ ID N0:201(蛋白)的可变重区和对应于 SEQ IDNO 330 (DNA)/SEQ ID N0:244(蛋白) 的可变轻区的抗体。MOR 07111代表具有对应于SEQ ID NO 288 (DNA)/SEQ ID N0:202(蛋 白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 331(DNA)/SEQ ID N0:245(蛋白)的可变轻区的抗 体。MOR 06640代表具有对应于SEQ ID NO 289 (DNA)/SEQID N0:203(蛋白)的可变重区和 对应于SEQ ID NO 332 (DNA)/SEQ IDNO :246(蛋白)的可变轻区的抗体。MOR 06642代表 具有对应于SEQID NO 290 (DNA)/SEQ ID N0:204(蛋白)的可变重区和对应于SEQ IDNO 333 (DNA) /SEQ ID N0:247(蛋白)的可变轻区的抗体。MOR 06643代表具有对应于SEQ ID NO 291(DNA)/SEQ ID N0:205(蛋白)的可变重区和对应于 SEQ ID NO 334(DNA)/SEQ ID N0:248(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-226代表具有对应于SEQ ID NO 292 (DNA)/SEQ ID NO 206 (蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 335 (DNA)/SEQ ID NO 249 (蛋白)的可变 轻区的抗体。MOR 06626代表具有对应于SEQ IDNO 293 (DNA)/SEQ ID N0:207(蛋白)的可 变重区和对应于SEQ IDNO 336 (DNA)/SEQ ID NO :250 (蛋白)的可变轻区的抗体。M0R06635 代表具有对应于SEQ ID NO 294 (DNA)/SEQ ID NO :208 (蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 337 (DNA)/SEQ ID N0:251(蛋白)的可变轻区的抗体。MOR 06638代表具有对应于SEQ ID NO 295 (DNA)/SEQ ID N0:209(蛋白)的可变重区和对应于 SEQ ID NO 338 (DNA)/SEQ ID N0:252(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-A代表具有对应于SEQ ID NO 296 (DNA)/SEQ ID N0:210(蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 339 (DNA)/SEQ ID N0:253(蛋白)的可变 轻区的抗体。MOR 06657代表具有对应于SEQ ID NO 297 (DNA)/SEQ ID N0:211(蛋白)的 可变重区和对应于SEQ ID NO 340 (DNA)/SEQ ID N0:254(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-T 代表具有对应于SEQ ID NO 298 (DNA)/SEQ ID NO :212 (蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 341(DNA)/SEQ ID N0:255(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-L代表具有对应于SEQ ID NO 299 (DNA)/SEQ ID N0:213(蛋白)的可变重区和对应于 SEQ ID NO 342 (DNA)/SEQ ID N0:256(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-I代表具有对应于SEQ ID NO 300 (DNA)/SEQ ID N0:214(蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 343 (DNA)/SEQ ID N0:257(蛋白)的可 变轻区的抗体。MF-5代表具有对应于SEQ ID NO 301 (DNA)/SEQID N0:215(蛋白)的可变 重区和对应于SEQ ID NO 344(DNA)/SEQID N0:258(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-8代表 具有对应于SEQ IDNO 302 (DNA)/SEQ ID N0:216(蛋白)的可变重区和对应于SEQ IDNO 345 (DNA) /SEQ ID N0:259(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-24代表具有对应于SEQ ID NO: 303 (DNA) /SEQ ID N0:217(蛋白)的可变重区和对应于 SEQ ID NO 346 (DNA)/SEQ ID NO: 260 (蛋白)的可变轻区的抗体。MF-25代表具有对应于SEQ ID NO 304 (DNA)/SEQ IDNO 218 (蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 347 (DNA)/SEQ IDNO :261(蛋白)的可变轻区 的抗体。MF-27代表具有对应于SEQ IDNO 305 (DNA)/SEQ ID N0:219(蛋白)的可变重区 和对应于SEQ IDNO 348 (DNA)/SEQ ID N0:262(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-73代表具 有对应于SEQ ID NO 306 (DNA)/SEQ ID N0:220(蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO: 349 (DNA) /SEQ ID N0:263(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-78代表具有对应于SEQ ID NO: 307 (DNA) /SEQ IDNO :221 (蛋白)的可变重区和对应于 SEQ ID NO 350 (DNA)/SEQ IDNO 264 (蛋白)的可变轻区的抗体。MF-84代表具有对应于SEQ IDNO 308 (DNA)/SEQ ID NO: 222 (蛋白)的可变重区和对应于SEQ IDNO 351 (DNA)/SEQ ID NO 265 (蛋白)的可变轻区
9的抗体。MF-101代表具有对应于SEQ ID NO 309 (DNA)/SEQ ID N0:223(蛋白)的可变重区 和对应于SEQ ID NO 352 (DNA)/SEQ ID N0:266(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-230代表 具有对应于SEQ ID NO 310 (DNA)/SEQ IDNO :224(蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO: 353 (DNA) /SEQ IDNO :267(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-236代表具有对应于SEQ IDNO 311 (DNA)/SEQ ID N0:225(蛋白)的可变重区和对应于 SEQ IDNO 354 (DNA)/SEQ ID NO: 268(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-252代表具有对应于SEQ ID NO 312 (DNA)/SEQ ID NO: 226(蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 355 (DNA)/SEQ ID N0:269(蛋白)的可变轻 区的抗体。MF-275代表具有对应于SEQ ID NO 313 (DNA)/SEQ IDNO :227(蛋白)的可变重 区和对应于SEQ ID NO 356 (DNA)/SEQ IDNO :270(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-423代表 具有对应于SEQ IDNO 314(DNA)/SEQ ID N0:228(蛋白)的可变重区和对应于SEQ IDNO 357 (DNA) /SEQ ID N0:271(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-427代表具有对应于SEQ ID NO: 315 (DNA)/SEQ ID N0:229(蛋白)的可变重区和对应于 SEQ ID NO 358 (DNA)/SEQ ID NO: 272(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-428代表具有对应于SEQ ID NO 316 (DNA)/SEQ ID N0: 230 (蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 359 (DNA)/SEQ ID NO 273 (蛋白)的可变轻区 的抗体。MF-C代表具有对应于SEQ ID NO 317 (DNA)/SEQ ID N0:231(蛋白)的可变重区 和对应于SEQ ID NO 360 (DNA)/SEQ ID N0:274(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-I代表具 有对应于SEQ ID NO 318 (DNA)/SEQ ID N0:232(蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID N0: 361 (DNA)/SEQ ID N0:275(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-M代表具有对应于SEQ ID N0: 319 (DNA)/SEQ ID N0:233(蛋白)的可变重区和对应于 SEQ ID NO 362 (DNA)/SEQ ID N0: 276(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-P代表具有对应于SEQ ID NO 320 (DNA)/SEQID N0: 234(蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 363 (DNA)/SEQ IDNO :277(蛋白)的可变轻区 的抗体。MF-Q代表具有对应于SEQ IDNO 321 (DNA)/SEQ ID N0:235(蛋白)的可变重区 和对应于SEQ IDNO 364(DNA)/SEQ ID N0:278(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-S代表具 有对应于SEQ ID NO 322 (DNA)/SEQ ID N0:236(蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID N0: 365 (DNA) /SEQ ID N0:279(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-U代表具有对应于SEQ ID N0: 323 (DNA) /SEQ ID N0:237(蛋白)的可变重区和对应于 SEQ ID NO 366 (DNA)/SEQ ID N0: 280 (蛋白)的可变轻区的抗体。MF-V代表具有对应于SEQ ID NO 324 (DNA)/SEQ ID N0: 238 (蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID NO 367 (DNA)/SEQ ID N0:281(蛋白)的可变轻区 的抗体。MF-W代表具有对应于SEQ ID NO 325 (DNA)/SEQ ID N0:239(蛋白)的可变重区 和对应于SEQ ID NO 368 (DNA)/SEQ ID N0:282(蛋白)的可变轻区的抗体。MF-Y代表具 有对应于SEQ ID NO 326 (DNA)/SEQ ID N0:240(蛋白)的可变重区和对应于SEQ ID N0: 369 (DNA) /SEQ ID N0:283(蛋白)的可变轻区的抗体。在一个方面，本发明提供了结合氨基酸序列如SEQ ID NO 370所述的间皮素的表 位的抗体，所述表位与Mab Kl识别的间皮素表位不同。在一个方面，本发明提供了结合抗体MF-J或MF-T的表位的一个或更多个氨基酸 的抗体。在某些方面，所述抗体结合抗体MF-J或MF-T的表位的至少两个，至少三个，至少 四个，至少五个或至少六个氨基酸。在某些方面，本发明的抗体结合抗体MF-J识别的表位 的一个或更多个氨基酸。在可选的方面，本发明的抗体结合抗体MF-T识别的表位的一个或 更多个氨基酸。
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在另一方面，本发明提供了具有抗原结合区的抗体，所述抗原结合区可特异性结 合间皮素的一个或更多个区或具有对于间皮素的一个或更多个区的高亲合力，所述间皮素 的氨基酸序列如SEQ ID N0:370所述。如果抗体亲合力测量值为至少IOOnM(Fab片段的 单价亲合力)，则该抗体被认为具有对于抗原的“高亲合力”。发明的抗体或抗原结合区优 选可以如下亲合力结合间皮素小于约ΙΟΟηΜ，更优选小于约60nM，并且仍然更优选小于约 30nM。进一步优选的是以小于约ΙΟηΜ，并且更优选小于约3nM的亲合力结合间皮素的抗体。 例如，本发明抗体对间皮素的亲合力可以为约10. OnM或0. 19nM(Fab片段的单价亲合力)。表1提供了本发明的代表性抗体的解离常数和解离速率的概况，如通过在直接固 定的间皮素上的表面等离子体共振(Biacore)所测定的。表1 通过表面等离子体共振对于抗-间皮素Fabs测定的对间皮素的单价解离常 数和解离速率
权利要求
分离的人类或人源化抗体或其功能片段，包含特异于间皮素(SEQ ID NO370)的抗原结合区，其中所述抗体或其功能片段显示出不变的间皮素结合。
2.根据权利要求1的分离的抗体的抗原结合区或其功能片段。
3.根据权利要求2的分离的抗原结合区，其包含如表7所述的CDR区。
4.根据权利要求2的分离的抗原结合区，其包含选自以下构成的组的重链或轻链氨基 酸序列⑴表7所述的SEQ ID NOS ；和(ii)在⑶R区中与表7所述SEQ ID NOS所述的⑶R区具有至少60%的序列同一性的序列。
5.根据权利要求1的分离的抗体，其为IgG。
6.根据权利要求2的分离的抗原结合区，其包含表7所述的一个或更多个序列。
7.根据权利要求2的分离的功能片段，其为Fab或scFv抗体片段。
8.编码根据权利要求1的人类抗体的抗原结合区或其功能片段的分离的核酸序列。
9.编码分离的抗体的可变重链或其功能片段的核酸序列，其包含(i)选自表7所述SEQ ID NOS的序列或(ii)在高度严格条件下与表7所述的SEQ ID NO的互补链杂交的核酸序 列，其中所述抗体或其功能片段特异于间皮素表位。
10.包含根据权利要求9的任一的核酸序列的载体。
11.包含根据权利要求10的载体的分离的细胞。
12.根据权利要求11的分离的细胞，其中所述细胞是细菌或哺乳动物细胞。
13.包含根据权利要求1的抗体或功能片段，及用于其的药学上可接受的载体或赋形 剂的药物组合物。
14.用于治疗与不期望的间皮素存在相关的病症或状况的方法，包含给予有此需要的 受试者有效量的根据权利要求13的药物组合物。
15.根据权利要求1的人类抗体，其中所述人类抗体是合成的人类抗体。
全文摘要
本发明提供了特异于膜锚定的，40kDa间皮素多肽的重组抗原结合区和包含所述抗原结合区的抗体和功能片段，所述间皮素多肽在若干种肿瘤中过表达，例如胰腺和卵巢肿瘤，间皮瘤和肺癌细胞。相应地，这些抗体可用于治疗这些和其它病症和状况。本发明的抗体还可用于诊断领域，以及用于进一步研究间皮素在与癌症相关的病症进展中的作用。本发明还提供了编码前述抗体的核酸序列，包含其的载体，药物组合物和具有使用说明的试剂盒。
文档编号A61K39/395GK101952319SQ200880125390
公开日2011年1月19日 申请日期2008年11月19日 优先权日2007年11月26日
发明者A·卡纳特, D·施奈德, D·莱特, N·萨托扎瓦, R·帕里, S·斯泰德尔, T·R·海特纳汉森, U·舒伯特 申请人:拜耳先灵制药股份公司