专利名称：P-糖蛋白单克隆抗体修饰的苯妥英靶向纳米制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于医用制剂，涉及一种P-糖蛋白单克隆抗体修饰的苯妥英靶向纳米制 剂及其制备方法。
背景技术：
癫痫是最常见的神经病症之一，据有关统计，我国现有癫痫患者约900万，每 年新增病例约45万，其中约30%的患者为难治性癫痫(refractory epilepsy, RE)，又 称耐药性癫痫[1_2]。其最为突出的特征就是对不同化学结构，不同作用方式的抗癫痫药 (anti-epilepsy drugs，AEDs)均有不同程度的耐药。死亡率比一般的癫痫患者高4 7 倍，严重影响患者的生活质量，消耗了巨大的公共卫生资源[μ]。苯妥英钠(I^henitoin，PHT)为二苯乙内酰脲的钠盐，作为最常用的抗癫痫药已有 半个多世纪的历史。由于其疗效显著，至今仍是一线治疗药物。实践显示，苯妥英钠服药后 常见眩晕、头痛、恶心、呕吐、厌食、皮疹等反应，长期用药有牙龈增生，常见共济失调、白细 胞减少、神经性震颤，严重时有视力障碍及精神错乱、紫癜等。除对胃肠道的刺激外，苯妥英 钠的不良反应都与血药浓度大致平行。而脑脊液中的原型药物不到10%，提示苯妥英钠透 过血脑屏障的能力较低，降低血药浓度将难以保证治疗效果，而其口服吸收慢而不规则，达 峰值浓度时间不稳定，可相差8小时以上，不利于血药浓度的控制。由于PHT是非线性代谢 药物，其治疗剂量(血药浓度)不易控制，且易过量出现中毒症状。此外，在耐药性癫痫病 灶区，由于P-gp外排泵作用，使已经透过血脑屏障的苯妥英钠被泵回到血液循环中，由肝 脏药物代谢酶P450系统代谢后经肾脏排出体外，导致脑内病灶区的苯妥英钠浓度进一步 降低，无法抑制癫痫发作。载药纳米微粒是纳米技术与现代医药学结合的产物，是一种药物控释和缓释的新 剂型。它包括纳米粒子(nanoparticales)和纳米胶囊(nanocapsules)，是直径在10 500nm之间的固状胶态粒子，活性部分(药物、生物活性材料等)通过溶解、包裹作用位于粒 子内部，或者通过吸附、附着作用位于粒子表面。自1976年BirrerAach首次报道载药纳米 微粒以来，纳米微粒作为药物缓释和靶向载体已被广泛地运用于医学领域中，但利用缓释 纳米微粒靶向治疗耐药性癫痫，国内外还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型载苯妥英纳米制剂，具体涉及一种P-糖蛋白单 克隆抗体修饰的苯妥英靶向纳米制剂及其制备方法。本发明以苯妥英为有效成分，以P糖蛋白单克隆抗体为靶向头基，以高分子聚合 物为载体，制备治疗耐药性癫痫的纳米制剂。具体而言，本发明的载苯妥英纳米制剂，以P-糖蛋白的单克隆抗体为靶向头基对 纳米制剂进行表面修饰，以聚乙二醇聚己内酯为载体，通过改变聚乙二醇和聚己内酯的比例，控制苯妥因英的载药量和释放速度。本发明以适宜的制备及提纯方法，使载苯妥英纳米 粒子具有适当的粒径和粒型，载药量> 20%，且毒副作用较小。本发明利用缓释和主动靶向技术解决目前苯妥英治疗耐药性癫痫中血脑屏障通 透性差，癫痫病灶区药物浓度低，治疗效果差，不良反应大的问题，提高苯妥英的安全性。本发明的载苯妥英纳米制剂通过下述方法和步骤制备(1)首先制备马来酰亚胺基团(Mal)封端的聚乙二醇聚己内酯聚合物一定量的马来酰亚胺基团封端的聚乙二醇中加入适量的辛酸亚锡溶液，密封后抽 真空，除去溶剂和氧气，然后加入一定量的己内酯，升温至己内酯单体开环聚合；反应结束 后，加入一定量的二氯甲烷溶解，然后乙醚中沉淀，以除去未反应的己内酯以及形成的己内 酯均聚物；沉淀物重新用二氯甲烷溶解，倒入大量的甲醇中沉淀，以除去未反应的聚乙二 醇，得到马来酰亚胺基团(Mal)封端的聚乙二醇聚己内酯聚合物。(2)制备载苯妥英纳米粒子上述马来酰亚胺基团(Mal)封端的聚乙二醇聚己内酯聚合物和药物苯妥英以适 当的比例溶于二氯甲烷和四氢呋喃的混合溶剂中，加入一定量含有十二烷基硫酸钠(SDS) 的去离子水，超声分散，得到的溶液搅拌过夜后，再透析过夜除去溶剂，得到载药聚合物纳 米粒子。(3)修饰P-糖蛋白单抗一定量的Traut，s试剂(2-iminothiolane)溶解在硼酸纳/EDTA缓冲溶液中；将 Traut’ s溶液缓慢加入到一定量的P-糖蛋白单抗中；避光搅拌1小时后，用HEPES置换硼 酸纳/EDTA缓冲溶液，巯基化的P-糖蛋白单抗与载药聚合物纳米粒子混合，搅拌过夜；反应 混合物过柱分离，用PBS缓冲液淋洗，收集乳白色纳米粒子，得修饰有P-糖蛋白单抗、负载 苯妥因的纳米粒子(P-gpMAb Nano-structured material, PNM)。
构式为
权利要求
1.P-糖蛋白单克隆抗体修饰的苯妥英靶向纳米制剂，其特征在于，该纳米制剂以苯妥 英为有效成分，以P糖蛋白单克隆抗体为靶向头基，以高分子聚合物为载体；所述制剂其载 药量> 20%。
2.权利要求1所述的P-糖蛋白单克隆抗体修饰的苯妥英靶向纳米制剂的制备方法，其 特征在于，包括如下步骤(1)制备马来酰亚胺基团封端的聚乙二醇聚己内酯聚合物一定量的马来酰亚胺基团封端的聚乙二醇中加入适量的辛酸亚锡溶液，密封后抽真 空，除去溶剂和氧气，然后加入一定量的己内酯，升温至己内酯单体开环聚合；反应结束后， 加入一定量的二氯甲烷溶解，然后乙醚中沉淀，除去未反应的己内酯以及形成的己内酯均 聚物；沉淀物用二氯甲烷溶解，倒入甲醇中沉淀，除去未反应的聚乙二醇，得马来酰亚胺基 团封端的聚乙二醇聚己内酯聚合物；(2)制备载苯妥英纳米粒子上述马来酰亚胺基团封端的聚乙二醇聚己内酯聚合物和药物苯妥英以适当的比例溶 于二氯甲烷和四氢呋喃的混合溶剂中，加入一定量含有十二烷基硫酸钠的去离子水，超声 分散，得到的溶液搅拌过夜后，透析过夜除去溶剂，得载药聚合物纳米粒子；(3)修饰P-糖蛋白单抗一定量的Traut’ s试剂溶解于硼酸纳/EDTA缓冲溶液；将其加入到一定量的P-糖蛋 白单抗中；搅拌1小时，用HEPES置换硼酸纳/EDTA缓冲溶液，巯基化的P-糖蛋白单抗与载 药聚合物纳米粒子混合，搅拌过夜；反应混合物过柱分离，用PBS缓冲液淋洗，收集乳白色 纳米粒子，得修饰有P-糖蛋白单抗、负载苯妥英的纳米粒子。
3.按权利要求2所述的方法，其特征在于，所制得的苯妥英靶向纳米制剂中，以马来酰 亚胺基团封端的聚乙二醇聚己内酯共聚物为载体，其分子结构式为
4.按权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的马来酰亚胺基团封端的聚乙二醇聚 己内酯聚合物中η = 1000 50000。
5.权利要求1的P-糖蛋白单克隆抗体修饰的苯妥英靶向纳米制剂在制备治疗耐药性 癫痫病药物中的用途。
全文摘要
本发明属于医用制剂，涉及一种新的苯妥英靶向纳米制剂及其制备方法。本发明以苯妥英为有效成分，以P-糖蛋白单克隆抗体为靶向头基，以高分子聚合物为载体，制成靶向治疗耐药性癫痫的纳米制剂。本发明通过改变高分子聚合物中聚乙二醇和聚己内酯的比例，控制苯妥英的载药量和释放速度；利用缓释和主动靶向技术解决目前苯妥英治疗耐药性癫痫中血脑屏障通透性差，癫痫病灶区药物浓度低，治疗效果差，不良反应大的问题，明显提高苯妥英的安全性。本发明制剂可靶向给药至耐药性癫痫病灶区，从而大大提高病灶区的苯妥英含量，抑制癫痫的发作。
文档编号A61K47/42GK102125522SQ20101002288
公开日2011年7月20日 申请日期2010年1月15日 优先权日2010年1月15日
发明者刘晓英, 洪震 申请人:复旦大学附属华山医院