专利名称：无梗五加叶提取物的制备工艺及抗氧化活性的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及无梗五加叶提取物的制备工艺及抗氧化活性。本发明产品具有抗氧化活性。
背景技术：
本发明涉及无梗五加叶提取物的制备工艺及抗氧化活性。无梗五加Acanthopanaxsessiliflorus(Rupr.et Maxim.)Seem.为五加科五加属植物，分布于东北、华北、陕西等地，在山地、溪流两岸、丘陵坡地、林缘及灌木丛中也有生长。性温，味辛，无毒，药理研究表明无梗五加叶具有滋补强壮、祛风除湿等功效。现在人们用无梗五加制剂治疗白细胞减少症、眩晕症及妇女更年期综合征。随着对无梗五加的进一步开发和利用，市场上已开发出无梗五加苦茶，具有减肥、降血糖、镇静安神之功效。然而对无梗五加叶的抗氧化作用鲜有报道。
人体在生命活动的氧化代谢过程中会不断产生各种自由基，体内过多自由基对生物大分子造成损伤，导致细胞和组织的结构和功能减退，并对机体的衰老过程产生影响，最终导致疾病的发生。而人工合成的抗氧化剂具有一定的毒性和致癌作用。所以评价和筛选具有强抗氧化活性的天然植物已成为医学、生物学和食品科学研究的新趋势。
采用典型的体外抗氧化体系，以抗坏血酸为对照，评价无梗五加叶提取物的抗氧化活性，为更好的开发利用无梗五加食用资源提供理论依据。
发明内容
1.本发明涉及无梗五加叶提取物的制备工艺及抗氧化活性，其特征在于制备无梗五加叶提取物的工艺包括以下过程 步骤(一)将无梗五加叶加入8-10倍量70％乙醇室温下浸提8-10h，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复以上步骤各一次，得到滤液； 步骤(二)将步骤(一)中的滤液合并，回收乙醇，得无梗五加叶提取物； 步骤(三)将步骤(二)中的无梗五加叶提取物加入适量的蒸馏水，密封超声30min，温度为30℃，功率为80W，待其溶解完全后，进行抗氧化试验，无梗五加叶提取物具有抗氧化作用。
2.根据本发明所述的制备无梗五加叶提取物的原料为无梗五加Acanthopanaxsessiliflorus(Rupr.et Maxim.)Seem.的叶。
根据本发明，本发明中的“％”是重量百分比。
具体实施例方式 本发明所述的涉及无梗五加叶提取物的制备工艺及抗氧化活性包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1 步骤(一)将无梗五加叶加入10倍量70％乙醇室温下浸提8h，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复以上步骤各一次，得到滤液； 步骤(二)将步骤(一)中的滤液合并，回收乙醇，得无梗五加叶提取物； 步骤(三)将步骤(二)中的无梗五加叶提取物加入适量的蒸馏水，密封超声30min，温度为30℃，功率为80W，待其溶解完全后，进行抗氧化试验，无梗五加叶提取物具有抗氧化作用。
实施例2 步骤(一)将无梗五加叶加入8倍量70％乙醇室温下浸提10h，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复以上步骤各一次，得到滤液； 步骤(二)将步骤(一)中的滤液合并，回收乙醇，得无梗五加叶提取物； 步骤(三)将步骤(二)中的无梗五加叶提取物加入适量的蒸馏水，密封超声30min，温度为30℃，功率为80W，待其溶解完全后，进行抗氧化试验，无梗五加叶提取物具有抗氧化作用。
无梗五加叶提取物的抗氧化试验 1无梗五加叶提取物对DPPH清除率的测定 1.1DPPH溶液的制备 精密称定DPPH样品0.01g，加入无水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到DPPH溶液，浓度为0.04mg/ml。
1.2样品溶液的制备 精密称取无梗五加叶提取物0.4g置于50ml具塞容量瓶中，加入适量的蒸馏水，密封超声30min，待其溶解完全后，再加入蒸馏水定容至50ml，得到样品母溶液，浓度为8mg/ml，备用。在样品母溶液中，用移液枪精密移取体积为0.003125，0.00625，0.0125，0.025，0.05，0.1，0.2，0.4ml的样品母液，用蒸馏水定容于10ml容量瓶中得到浓度为0.0025，0.005，0.01，0.02，0.04，0.08，0.16，0.32mg/ml的样品溶液。
1.3样品对DPPH的清除作用 准确移取不同浓度的样品溶液分别与DPPH溶液和无水乙醇溶液等体积混合于不同试管中，摇匀，在黑暗中放置30min，在515nm下测定其吸光度值分别为Ai和Aj。另取蒸馏水与DPPH溶液等体积混合于试管中，测得吸光度值为A。其中以蒸馏水和无水乙醇混合为空白对照试验。并按下面公式计算清除率。
清除率＝(A-Ai+Aj)/A×100％ 1.4 50％(IC50)抑制浓度的计算 利用SPSS16.0软件分析，得出IC50值。
2无梗五加叶提取物对羟自由基清除率的测定 2.1样品溶液的制备 精密称取无梗五加叶提取物0.25g置于50ml具塞容量瓶中，加入适量的蒸馏水，密封超声30min，待其溶解完全后，定容至刻度，得到样品母溶液，备用。在样品母溶液中，用移液枪精密移取体积为5μl，10μl，20μl，40μl，80μl，160μl，320μl，640μl的样品母液，用蒸馏水定容于10ml容量瓶中得到浓度为0.0025，0.005，0.01，0.02，0.04，0.08，0.16，0.32mg/ml的样品溶液。
2.2试剂的制备 称取0.2032g甲基紫用去离子水定容于100ml容量瓶中，备用。用盐酸调Tris缓冲溶液PH为5，备用。取30％的H2O2溶液1.0mL，用去离子水定容于100mL容量瓶中，备用。称取0.0695gFeSO4·7H2O用水定容于50mL容量瓶中，备用(现用现配)。
2.3羟自由基·OH的产生及测定 取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液1mL，按顺序放入10mL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇匀静置三十分钟，记为A578。
取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液1mL，Fe2+溶液1mL，H2O2溶液1mL按顺序放入10mL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇匀静置三十分钟，记为A0。
取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液1mL，不同浓度梯度的待测液2mL，Fe2+溶液1mL，H2O2溶液1mL按顺序放入10mL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇匀静置三十分钟。平行三次，记为As。
以去离子水做空白实验，用721紫外分光光度计在578的波长下测定其吸光度。
2.4羟自由基·OH清除率的计算 利用公式清除率％＝(As-A0)/(A578-A0)×100％，得出样品提取液对羟自由基的清除率。
2.5 50％抑制浓度(IC50)的计算 利用SPSS16.0软件分析，得出IC50值。
3无梗五加叶提取物抗氧化结果 3.1无梗五加叶提取物对DPPH和羟自由基的清除率 见表1。
表1样品溶液对DPPH和羟自由基的清除率结果
3.2维生素C(VC)对DPPH和羟自由基的清除率 见表2。
表2VC对DPPH和羟自由基的清除率结果
3.3利用SPSS16.0统计分析3.1和3.2中的数据 见表3。
表3无梗五加叶和VC清除DPPH·的EC50值及·OH的IC50值
权利要求
1.本发明涉及无梗五加叶提取物的制备工艺及抗氧化活性，其特征在于制备无梗五加叶提取物的工艺包括以下过程
步骤(一)将无梗五加叶加入8-10倍量70％乙醇室温下浸提8-10h，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复以上步骤各一次，得到滤液；
步骤(二)将步骤(一)中的滤液合并，回收乙醇，得无梗五加叶提取物；
步骤(三)将步骤(二)中的无梗五加叶提取物加入适量的蒸馏水，密封超声30min，待其溶解完全后，进行抗氧化试验，无梗五加叶提取物具有抗氧化作用。
2.根据本发明所述的制备无梗五加叶提取物的原料为无梗五加Acanthopanaxsessiliflorus(Rupr.et Maxim.)Seem.的叶。
全文摘要
本发明属于医药产品研究开发技术领域。本发明涉及无梗五加叶提取物的制备工艺及抗氧化活性。将无梗五加叶加入6-8倍量70％乙醇室温下浸提8-10h，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复以上步骤各一次，合并三次滤液，回收乙醇，得无梗五加叶提取物，无梗五加叶提取物加入适量的蒸馏水，密封超声30min，温度为30℃，功率为80W，待其溶解完全后，进行抗氧化试验，本发明产品具有抗氧化活性。
文档编号A61K127/00GK101810655SQ201010163028
公开日2010年8月25日 申请日期2010年4月2日 优先权日2010年4月2日
发明者张崇禧, 郑友兰, 孙丽, 陈晓芳, 杨淑超, 张腾 申请人:山东大学威海分校