专利名称：一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其检测方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及其检测方法，特别涉及一种治疗心脑血管疾病的药 物组合物及其检测方法，属于中药技术领域。
背景技术：
心脑血管疾病一直号称威胁人类健康的头号杀手，据有关调查报告显示，我国每 年死于心脑血管病的人有300多万，占我国每年总死亡人数的50%，而患病幸存下来的人 75%不同程度丧失劳动能力，4%重残。更令人担忧的是，我国30岁以上的成年人80%都或 多或少、或轻或重地患有高血脂、高血压、冠心病、脑中风等心脑血管疾病。目前在市场上存在的治疗心脑血管疾病的药物中，多数化学药长期服用易产生耐 受性和严重的副作用，而很多中药产品虽然副作用小，但由于质量控制不科学，存在药效不 稳定的缺陷。
发明内容
本发明目的在于提供一种治疗心脑血管疾病的中药组合物；本发明目的还在于提供一种治疗心脑血管疾病的中药组合物的制备方法；本发明目的还在于提供一种治疗心脑血管疾病的中药组合物的质量控制方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明所述的治疗心脑血管疾病的中药组合物是由如下重量比的原料药制成 的丹参300-500重量份、川芎150-300重量份、葛根150-300重量份上述原料药优选配比为丹参350-450重量份、川芎200-250重量份、葛根200-250重量份上述原料药优选配比为丹参400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份本发明所述的治疗心脑血管疾病的中药组合物也可由如下重量比的原料药制成 的丹参300-500重量份、川芎150-300重量份、葛根150-300重量份、何首乌200-400重量份、山楂200-400重量份；上述原料药优选配比为丹参350-450重量份、川芎200-250重量份、葛根200-250重量份、何首乌250-350重量份、山楂250-350重量份；上述原料药优选配比为
丹参400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份、何首乌300重量份、山楂300重量份；本发明药物组合物组方科学，方中丹参活血化瘀，清心安神，专行心、脑脉络闭塞，故为君药。川芎为血中气药，行气活血，气行则血行；山楂活血化瘀，化浊降脂；何首乌滋补 肝肾，养血祛风，润肠通便，可兼治气血运行不畅所致的肝肾阴亏、肠燥便秘，辅助君药共起 活血、养血、降脂通脉之功效。葛根活血化瘀，上通脑络，下通心络，为消散瘀血，通痹散结的 要药，且能引药人经，故为佐使药。取上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型，包括 但不限于胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、口服液。本发明所述的中药组合物颗粒剂的制备方法为选取上述原料药丹参300-500重量份、川芎150-300重量份、葛根150-300重量份、何首乌200-400重量份、山楂200-400重量份；以上五味，加水煎煮二次，第一次1-3小时，第二次0. 5-1. 5小时，合并煎液，滤过， 滤液浓缩至相对密度为1. 15 1. 20的稠膏，加糊精300-600重量份、甜菊素1. 5-5重量 份，制成颗粒500-1000重量份，即得。本发明药物组合物颗粒剂优选的制备方法为选取原料药丹参400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份、何首乌300重量份、山楂300
重量份以上五味，加水煎煮二次，第一次1. 5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓 缩至相对密度为1. 15 1. 20的稠膏，加糊精500重量份、甜菊素3重量份，制成颗粒800
重量份，即得；本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或 几种鉴别方法A.葛根的定性鉴别取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙酸乙酯 10-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，挥干，残渣加甲醇0. 5_2ml溶解，作为供试品溶液 ’另 取葛根素对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国 药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5-20 μ 1，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以15-40 5-20 0.5-2比例的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干， 置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点；B.丹参的定性鉴别取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，力口 30-70mL50-80%乙醇溶液超声提取10-40min，滤过，滤液蒸至近干，加水10_30mL充分溶 解，用稀HCl调PH值至1 2，用乙醚提取2-4次，每次10_30mL，合并乙醚液，用无水硫酸 钠脱水，滤过，蒸干乙醚，残渣加0. 5-2ml乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照 品，加乙醇溶解，制成ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005 年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液3-7ul，样品溶液10-20uL，分别点于同一硅胶G板上，以10-30 2-6 0.5-2比例的氯仿-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以3%三氯化铁乙醇溶液，用风筒吹至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应 位置上，显相同颜色的斑点C.川芎的定性鉴别取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加50-80%乙 醇30-70mL，超声提取20-40min，滤过，滤液蒸至近干，加水10_30mL充分溶解，用乙酸乙酯 提取1-4次，每次10-30mL，合并乙酸乙酯层，用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残留物加 乙酸乙酯ImL溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材0. 5g，加乙酸乙酯10-30mL，超声提 取10-30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱 法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液3 5uL供试品溶液10uL， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以5-15 0.5-2比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，预饱 和10-20min，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材 相应的位置上，显相同的荧光斑点；D.丹参的定性鉴别取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙醚 10-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，挥干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为样品液；另取丹 参酮II A对照品，加入醋酸乙酯制成每Iml含2mg的对照品液；再取丹参对照药材0. 5_2g， 置于具塞试管中，加入乙醚5ml振摇，放置lh，过滤，滤液挥干，残渣加入醋酸乙酯Iml溶解， 作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，取上述4种 溶液各5-15uL，点于同一硅胶G薄层板上，以10-30 0. 5-2比例的苯-醋酸乙酯为展开 齐U，展开，晾干，置于日光下检视，供试品、丹参酮Π A对照品、丹参对照药材在相应位置上 显相同颜色斑点；含量测定方法A.丹参含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 4-12 80-100比例的甲醇-1%醋酸溶液为流动相；检测波长为280nm ；理论板数按丹参素 峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备取丹参素钠对照品适量，精密称定，加30-70%甲醇制成每 Iml含20-80 μ g的溶液(相当于每Iml含丹参素18-72 μ g)，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研成细粉，取约 0. 3-0. 8g，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加入30-70%甲醇25ml，称定重量，超声处理 (功率200W，频率40kHZ) 3-10分钟，放冷，再称定重量，用30-70%甲醇补充减失的重量，摇 勻，微孔滤膜(0. 45 μ m)过滤，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5_15μ 1，注入液相色谱仪，测定， 丹参含量以丹参素纳含量计每次服用量不得少于10. Omg,即得；B.葛根含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以15-35 65-85 比例的甲醇-水为流动相；检测波长为250nm，理论板数按葛根素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，加20-50%乙醇制成每Iml含10. 0-20. Oug的溶液，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取 0. 3-0. 8g，置具塞锥形瓶中，精密加20-50 %乙醇30-70ml，称定重量，加热回流20-40min， 放冷，再称定重量，用20-50%乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，葛 根含量以葛根素计每次服用量不得少于1. 6mg,即得；C.川芎含量测定
照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以 20-50 50-70 0.5-2比例的甲醇-水-冰醋酸为流动相；检测波长为323nm，理论板数 按阿魏酸峰计算应不低于2000，柱温25°C ；对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每Iml含 20. 0-40. Oug的溶液，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取 5. 0-10. Og,溶于10-30ml蒸馏水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10_20ml，合并 乙醚液于50°C水浴中挥干，残渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，过滤，得供试 品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，川 芎含量以阿魏酸计每次服用量不得少于1. 2mg,即得。本发明药物组合物的优选质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的 一种或几种鉴别方法A.葛根的定性鉴别取0.625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙酸乙酯 20ml，超声处理20分钟，滤过，挥干，残渣加甲醇Iml溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对 照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005 年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 7 2.5 0.25比例的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯 下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B丹参的定性鉴别取0. 625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加50mL70%乙 醇溶液超声提取30min，滤过，滤液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用稀HCl调PH值至1 2，用乙醚提取3次，每次20mL，合并乙醚液，用无水硫酸钠脱水，滤过，蒸干乙醚，残渣加ImL 乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙醇溶解，制成ImL含Img的溶液， 作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照 品溶液5uL，样品溶液15uL，分别点于同一硅胶G板上，以20 4 1比例的氯仿-丙酮-甲 酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铁乙醇溶液，用风筒吹至斑点清晰；供试品 色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；C.川芎的定性鉴别取0.625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加70%乙醇 50mL,超声提取30min，滤过，滤液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次 20mL，合并乙酸乙酯层，用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残留物加乙酸乙酯ImL溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材0. 5g，加乙酸乙酯20mL，超声提取20min，滤过，滤液蒸 干，残渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一 部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液3 5uL供试品溶液10uL，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以9 1比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，预饱和15min，展开，取出，晾干，置365nm 紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同的荧光斑点；D.丹参的定性鉴别取0.625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙醚 10-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，挥干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为样品液；另取丹 参酮IIA对照品，加入醋酸乙酯制成每Iml含2mg的对照品液；再取丹参对照药材lg，置于 具塞试管中，加入乙醚5ml振摇，放置lh，过滤，滤液挥干，残渣加入醋酸乙酯Iml溶解，作为 对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，取上述4种溶液 各10uL，点于同一硅胶G薄层板上，以19 1比例的苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，晾干，置 于日光下检视，供试品、丹参酮IIA对照品、丹参对照药材在相应位置上显相同颜色斑点；
含量测定方法A.丹参含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇醋 酸溶液(8 92)为流动相；检测波长为280nm，理论板数按丹参素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备取丹参素钠对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每Iml含 50 μ g的溶液(相当于每Iml含丹参素45 μ g)，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研成细粉，取约0. 5g，精 密称定，置50ml锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率200W，频率 40kHZ)5分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补充减失的重量，摇勻，微孔滤膜(0.45μπι) 过滤，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，丹 参含量以丹参素纳含量计每次服用量不得少于10mg，即得；B.葛根含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以甲醇-水 (25 75)为流动相；检测波长为250nm，理论板数按葛根素峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇制成每Iml含 16. Oug的溶液，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取0. 5g，置 具塞锥形瓶中，精密加30 %乙醇50ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用 30 %乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，葛 根含量以葛根素计每次服用量不得少于1. 6mg,即得；C.川芎含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以甲醇-水-冰醋酸(40 60 1)为流动相；检测波长为323nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于2000， 柱温25 °C ；对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每Iml含30. Oug的 溶液，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物 适量，研细，精密称取8. 0g，溶 于20ml蒸馏水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10ml，合并乙醚液于50°C水浴中 挥干，残渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，过滤，得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，川 芎含量以阿魏酸计每次服用量不得少于1. 2mg,即得。本发明所述重量份与体积份的关系为克/毫升。本发明药物组合物用于治疗心脑血管疾病的药物，尤其适用于缺血性心脑血管疾 病，动脉硬化，脑血栓，脑缺血，冠心病，心绞痛等。本发明药物组合物经实验研究证实可明显延长小鼠体内颈动脉血栓的形成；能 明显改善脑缺血引起的毛细血管通透性增加；对ADP诱导的大鼠血小板聚集有明显的抑制 作用；能显著降低大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积和红细胞聚集指数；对脑血栓形成 患者语言障碍的改善、肢体功能的恢复以及综合功能的改善均有显著作用；具有见效快，无 毒副作用，使用安全，获效后不易复发等优点。本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后 得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且 方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供 试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控 制，并且用该方法测定的产品相比其他方法测定的产品在药效上表现的更为稳定。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1.质量检测方法筛选试验(1)薄层鉴别方法的筛选空白样品的制备按本发明药物组药味与用量比例，分别自配不含丹参、川芎、葛 根的群药，按制备工艺制成空白样品制剂。丹参的鉴别方法筛选丹参为方中的君药，其中的主要成分为丹酚酸B、原儿茶醛、丹参酮IIA等取实施例7本发明颗粒剂0. 625倍每次用剂量，分别按下表方法操作表1丹参的鉴别方法筛选I方法1I方法2
样品加乙醚5ml，振摇，放置1小时，加75%甲醇25ml，加热回流1 的处滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙小时，滤过，滤液浓缩至lml， 理方酯Iml使溶解，作为供试品溶液。作为供试品溶液。
法______
空白同样品的处理方法同样品的处理方法
样品________
对照取丹参酮IIa对照品，加乙酸乙酯取丹参酸B对照品，加75%甲 品或制成Iml含2mg的溶液；再取丹醇，制成，每Iml含2mg的溶 对照参对照药材lg，置于具塞试管液，作为对照品溶液。 药材 中，加入乙醚5ml振摇，放置lh， 过滤，滤液挥干，残渣加入醋酸 乙酯Iml溶解，作为对照药材溶
__J|c____
展开.苯-乙酸乙酯19: 1甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-
____甲酸 2: 3 4 0.5 2
显色展开、取出、晾干，置日光下检展开、取出、晾干，置紫外光
条件 视。 __灯(254nm)下检视。_
结果 样品液、对照品液、对照药材溶样品液在对照品溶液斑点处未 液在相应位置上显相同颜色斑见明显斑点。 _点，空白样品溶液在该位置无相
应斑点。_ 1_^_表2丹参的鉴别方法筛选(续表1)
权利要求
一种治疗治疗心脑血管疾病的中药组合物，其特征在于该中药组合物的原料药组成为丹参300 500重量份、川芎150 300重量份、葛根150 300重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物的原料药组成为丹参350-450重量份、川芎200-250重量份、葛根200-250重量份。
3.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物的原料药组成为丹参400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份。
4.如权利要求1-3任意一项所述的中药组合物，其特征在于它是胶囊剂、滴丸剂、颗 粒剂、片剂、口服液。
5.如权利要求1-3任意一项所述的中药组合物颗粒剂的制备方法，其特征在于以上述原料药，第一次1-3小时，第二次0. 5-1. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相 对密度为1. 15 1. 20的稠膏，加糊精300-600重量份、甜菊素1. 5-5重量份，制成颗粒 500-1000重量份，即得。
6.如权利要求1-3所述的任一中药组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴 别方法和/或含量测定方法中的一种或几种A.葛根的定性鉴别取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙酸乙酯 10-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，挥干，残渣加甲醇0. 5_2ml溶解，作为供试品溶液 ’另 取葛根素对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国 药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5-20 μ 1，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以15-40 5-20 0.5-2比例的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干， 置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点；B.丹参的定性鉴别取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加 30-70mL50-80%乙醇溶液超声提取10-40min，滤过，滤液蒸至近干，加水10_30mL充分溶 解，用稀HCl调PH值至1 2，用乙醚提取2-4次，每次10_30mL，合并乙醚液，用无水硫酸 钠脱水，滤过，蒸干乙醚，残渣加0. 5-2ml乙醇使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照 品，加乙醇溶解，制成ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005 年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液3-7ul，样品溶液10-20uL，分别点于同一硅 胶G板上，以10-30 2-6 0.5-2比例的氯仿-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以3%三氯化铁乙醇溶液，用风筒吹至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位 置上，显相同颜色的斑点；C.川芎的定性鉴别取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加50-80%乙醇 30-70mL,超声提取20-40min，滤过，滤液蒸至近干，加水10_30mL充分溶解，用乙酸乙酯提 取1-4次，每次10-30mL，合并乙酸乙酯层，用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残留物加乙 酸乙酯ImL溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材0. 5g，加乙酸乙酯10-30mL，超声提取 10-30min,滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法 (中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液3 5uL供试品溶液10uL， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以5-15 0.5-2比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，预饱 和10-20min，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同的荧光斑点；D.丹参的定性鉴别取0.5-2倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙醚10-30ml， 超声处理10-30分钟，滤过，挥干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为样品液；另取丹参酮II A 对照品，加入醋酸乙酯制成每Iml含2mg的对照品液；再取丹参对照药材0. 5_2g，置于具塞 试管中，加入乙醚5ml振摇，放置lh，过滤，滤液挥干，残渣加入醋酸乙酯Iml溶解，作为对 照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，取上述4种溶液各 5-15uL,点于同一硅胶G薄层板上，以10-30 0. 5-2比例的苯-醋酸乙酯为展开剂，展开， 晾干，置于日光下检视，供试品、丹参酮IIA对照品、丹参对照药材在相应位置上显相同颜 色斑点；含量测定方法A.丹参含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以4-12 80-100比 例的甲醇醋酸溶液为流动相；检测波长为280nm ；理论板数按丹参素峰计算应不低于 2000 ；对照品溶液的制备取丹参素钠对照品适量，精密称定，加30-70%甲醇制成每Iml含 20-80 μ g的溶液(相当于每Iml含丹参素18-72 μ g)，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研成细粉，取约0. 3-0. 8g，精 密称定，置50ml锥形瓶中，精密加入30-70%甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率200W， 频率40kHZ) 3-10分钟，放冷，再称定重量，用30-70%甲醇补充减失的重量，摇勻，微孔滤膜 (0. 45 μ m)过滤，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5-15μ 1，注入液相色谱仪，测定，丹参 含量以丹参素纳含量计每次服用量不得少于10. Omg,即得；B.葛根含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以15-35 65-85比例 的甲醇-水为流动相；检测波长为250nm，理论板数按葛根素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，加20-50%乙醇制成每Iml含 10. 0-20. Oug的溶液，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取0.3-0. 8g，置 具塞锥形瓶中，精密加20-50 %乙醇30-70ml，称定重量，加热回流20-40min，放冷，再称定 重量，用20-50%乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，葛根含 量以葛根素计每次服用量不得少于1. 6mg,即得；C.川芎含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以 20-50 50-70 0.5-2比例的甲醇-水-冰醋酸为流动相；检测波长为323nm，理论板数 按阿魏酸峰计算应不低于2000，柱温25°C ；对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每Iml含20. 0-40. Oug的 溶液，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取5. 0-10. 0g，溶 于10-30ml蒸馏水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10-20ml，合并乙醚液于50°C 水浴中挥干，残渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，过滤，得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，川芎含 量以阿魏酸计每次服用量不得少于1. 2mg,即得。
7.如权利要求6所述的中药组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法 和/或含量测定中的一种或几种 鉴别方法A.葛根的定性鉴别取0.625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙酸乙酯20ml， 超声处理20分钟，滤过，挥干，残渣加甲醇Iml溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照 品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年 版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 7 2.5 0.25比例的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯 下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； B丹参的定性鉴别取0. 625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加50mL70%乙醇溶 液超声提取30min，滤过，滤液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用稀HCl调PH值至1 2，用 乙醚提取3次，每次20mL，合并乙醚液，用无水硫酸钠脱水，滤过，蒸干乙醚，残渣加ImL乙醇 使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙醇溶解，制成ImL含Img的溶液，作为 对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶 液5uL，样品溶液15uL，分别点于同一硅胶G板上，以20 4 1比例的氯仿-丙酮-甲酸 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铁乙醇溶液，用风筒吹至斑点清晰；供试品色 谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；C.川芎的定性鉴别取0.625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加70%乙醇50mL， 超声提取30min，滤过，滤液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次 20mL，合并乙酸乙酯层，用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残留物加乙酸乙酯ImL溶解， 作为供试品溶液；另取川芎对照药材0. 5g，加乙酸乙酯20mL，超声提取20min，滤过，滤液蒸 干，残渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一 部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液3 5uL供试品溶液10uL，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以9 1比例的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，预饱和15min，展开，取出，晾干，置365nm 紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同的荧光斑点；D.丹参的定性鉴别取0.625倍每次服用剂量的本品制剂或内容物，加乙醚10-30ml， 超声处理10-30分钟，滤过，挥干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为样品液；另取丹参酮II A 对照品，加入醋酸乙酯制成每Iml含2mg的对照品液；再取丹参对照药材lg，置于具塞试管 中，加入乙醚5ml振摇，放置lh，过滤，滤液挥干，残渣加入醋酸乙酯Iml溶解，作为对照药材 溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，取上述4种溶液各10uL， 点于同一硅胶G薄层板上，以19 1比例的苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，晾干，置于日光 下检视，供试品、丹参酮IIA对照品、丹参对照药材在相应位置上显相同颜色斑点；含量测定方法 Α.丹参含量测定 照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇醋酸溶 液(8 92)为流动相；检测波长为280nm，理论板数按丹参素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备取丹参素钠对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每Iml含 50 μ g的溶液(相当于每Iml含丹参素45 μ g)，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研成细粉，取约0.5g，精密 称定，置50ml锥形瓶中，精密加入50 %甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率200W，频率 40kHZ)5分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补充减失的重量，摇勻，微孔滤膜(0.45μπι) 过滤，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，丹参含 量以丹参素纳含量计每次服用量不得少于10mg，即得；B.葛根含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以甲醇-水(25 75) 为流动相；检测波长为250nm，理论板数按葛根素峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇制成每Iml含16. Oug的 溶液，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取0.5g，置具塞 锥形瓶中，精密加30%乙醇50ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用30 %乙 醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，葛根含 量以葛根素计每次服用量不得少于1. 6mg,即得；C.川芎含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以甲醇-水-冰醋酸 (40 60 1)为流动相；检测波长为323nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于2000，柱 温 25 0C ；对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每Iml含30. Oug的溶液， 即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂或内容物适量，研细，精密称取8. 0g，溶于 20ml蒸馏水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10ml，合并乙醚液于50°C水浴中挥 干，残渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，过滤，得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，川芎含 量以阿魏酸计每次服用量不得少于1. 2mg,即得。
全文摘要
本发明公开了一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其检测方法，属于中药技术领域。本发明药物组合物的原料药组成为丹参、川芎、葛根等。本发明针对中药疗效不稳定的问题提供上述原料制成的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法控制质量的产品相比其他方法在药效上表现的更为稳定。
文档编号A61P9/12GK101961382SQ20101051440
公开日2011年2月2日 申请日期2007年8月9日 优先权日2007年8月9日
发明者付建家, 付立家 申请人:北京亚东生物制药有限公司