专利名称：一种多肽复合物、药物组合物、其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及糖尿病相关的药物领域，具体而言，本发明涉及一种多肽复合物，该复合物具有延长的Exendin-4的体内半衰期。本发明还涉及该多肽复合物的制备方法及其应用。
背景技术：
糖尿病是一种遗传因素和多种环境因素相关联的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱综合症。由于糖尿病还伴随着诸多并发症，现已成为仅次于恶性肿瘤和心血管疾病之后的第三大健康杀手。1984年，胰升血糖素肽-I(GLP-I)类药物被发现，它是一种具有30个氨基酸的肠降血糖素。GLP-I作为降血糖药物受到限制的主要原因是GLP-I的体内半衰期仅为3-5分钟。Exendin-4是一条39个氨基酸组成的直链多肽，最初由南美巨蜥的唾液分离提取获得。它的氨基酸残基与哺乳动物GLP-I序列有52%的同源性，其与GLP-I的最大不同之处在于N端第2位的甘氨酸耐血液中二肽基肽酶(DPP-IV)的酶切作用，而GLP-I的相同位置则为极易被DPP-IV切断的丙氨酸，故Exendin-4被吸收入血后的半衰期较长(t1/2 = 2.4 小时)。Exendin-4是一种强效GLP-I受体激动剂，能模拟GLP-I这种内源性多肽的糖调控作用，降低空腹和餐后血糖。Exendin-4的活性主要通过与人体胰脏GLP-I受体结合而介导，由环腺苷酸(cAMP)依赖和β细胞分化机制引发葡萄糖依赖的胰岛素合成和分泌。因为Exendin-4的氨基酸结构及生物活性与GLP-I均具有相关性，故通常它也被视为肠促胰岛素的一种。由于Exendin-4的降糖作用时间较GLP-I长，延缓胃排空和抑制摄食冲动，对肥胖病人体重的有益作用又有别于传统的降糖药物，因此其作为2型糖尿病治疗药物的开发潜力巨大。随着Exendin-4为活性单体的药物(英文通用名为Exenatide，艾塞那肽，Lily) 于2005年在美国上市，Exendin-4作为GLP-I家族中的一员在治疗糖尿病方面引起了广泛的关注。但是，现在上市的Exendin-4药物依然存在着半衰期短的问题，药用的 Exenatide (艾塞那肽)为每日注射两次，极大地增加的患者的痛苦。因此，目前存在对解决 Exendin-4药物体内半衰期短的方法的需求。
发明内容
本发明的一个目的是针对临床上Exendin-4类似物在体内存留时间较短，需要每天注射给药的缺限，提供了一种半衰期较长的包含载体多肽与Exendin-4的多肽复合物。本发明的另一个目的是提供上述多肽复合物的制备方法，此外，还提供上述多肽复合物在制备治疗糖尿病和肥胖症的药物中的应用。本发明的又一个目的是提供一种以Exendin-4与载体多肽的多肽复合物作为有效成分的药用组合物。
用于实现上述目的的技术方案如下一方面，本发明提供一种多肽复合物，其包含Exendin-4和载体多肽。其中，所述载体多肽优选为如序列SEQ ID NO 1所示的载体多肽A或如序列SEQ ID NO 2所示的载体多肽B。在所述多肽复合物中，Exendin-4和载体多肽的摩尔比为10 1-1 50，优选 1 2.5-1 25，更优选 1 10-1 25。另一方面，本发明提供上述多肽复合物的制备方法，该方法包括按照摩尔比例， 分别称取Exendin-4和载体多肽A或B，溶于适量的生理盐水、纯水或PBS缓冲液中，在 0_5°C温度下，超声混合1-15分钟，或者搅拌1-3小时，或者放置过夜。再一方面，本发明还提供上述多肽复合物在制备治疗糖尿病的药物中的应用，以及该多肽复合物在制备治疗和/或预防肥胖症的药物中的应用。又一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含上述多肽复合物。其中，所述的药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的辅料，其中所述药物组合物中多肽复合物和辅料的重量比优选为5 1-1 50，进一步优选1 1-1 25。并且，所述药物组合物优选为注射剂，进一步优选为冻干粉针或溶液注射剂。现结合本发明的目的对本发明逐一加以描述。⑴载体多肽本发明所述的载体多肽的序列如下序列A或B :序列A (SEQ ID NO 1) GLffffKAffffKAffffKSLffffRKRKRKA序列B (SEQ ID NO 2) GLffffKVffffKLffffKSLffffRKRLRKA(2) Exendin-4Exendin-4 为天然产物，序列为 SEQ ID NO 9 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(3) Exendin-4与载体多肽的复合物Exendin-4与载体多肽的比例Exendin_4(丽4188)能与载体多肽A (MW :3329) 或载体多肽B(MW :3384)形成的不同比例的复合物，以摩尔计算，从10 1到1 100，不同的比例得到的复合物具有不同的释放特性，从1 1到1 50之间的比例形成的复合物具有更强的作为药用的实用性，更优先的范围为1 2.5到1 25。本发明的复合物的制备方法按照摩尔比例，称取适量的Exendin-4冻干粉，溶于适量的生理盐水、纯水或PBS缓冲液中，称取适量的载体多肽A或B，溶于适量的生理盐水 (或PBSdK )中，在0-5°C温度下，超声混合1-15分钟，或者搅拌1-3小时，或者放置过夜。 所制备得到的溶液可以直接加辅料做成制剂，也可以冷冻干燥后再与其他辅料一起制成制剂。注PBS为磷酸盐。(4)本发明的药用组合物本发明的含有Exendin-4及载体多肽的复合物可以与一种或多种药学上可接受的辅料共同制成药用组合物，这些辅料包括水溶性填充剂、PH调节剂、稳定剂、注射用水、 渗透压调节剂等等。本发明所述的水溶性填充剂辅料为选自以下的一种或几种甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖等。
PH调节剂为选自以下的一种或几种枸橼酸、磷酸、乳酸、酒石酸、盐酸等非挥发性的酸以及氢氧化钾、氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化铵、碳酸钠或碳酸钾或碳酸铵盐、碳酸氢钠或碳酸氢钾或碳酸氢铵盐等生理可接受的有机或无机酸和碱及盐等。稳定剂为选自以下的一种或几种EDTA_2Na、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、 磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸钠、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫酸钠或三羟甲基氨基甲烷等。优选焦亚硫酸钠、磷酸氢二钾、精氨酸、聚乙二醇6000、三羟甲基氨基甲烷。渗透压调节剂是氯化钠、氯化钾的一种或两种的组合。(5)注射剂的制备方法本发明的药用组合物可以通过肌肉、静脉内、皮下注射途经进行给药，优选的剂型为冻干粉或溶液注射剂。冷冻干燥注射剂的制备方法取Exendin-4和载体多肽溶液适量，加入水溶性填充剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-8使其溶解，加水稀释至适当浓度，加入0. 1-0.5%活性炭，在0-10°C下搅拌10-20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得白色疏松块状物，封口即得，每个规格含有 Exendin-4 在 5 μ g 至Ij Img 之间。注射液的制备方法取Exendin-4和载体多肽溶液或冻干粉适量，加入水溶性填充剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-8使其溶解，加水稀释至适当浓度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在0-10°C下搅拌10-20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，封口即得，每个规格含有Exendin-4在5 μ g到Img之间。(6)药用组合物的用途本发明的药用组合物可以用在制备糖尿病治疗药物方面。具体地，本发明的组合物可以静脉、肌肉或皮下注射剂形式给药。虽然剂量依治疗对象、给药方式、症状及其它因素而改变，本发明的组合物在相当宽的剂量范围内是有效的。在成人的治疗中，剂量范围在 5μ g/人一Img/人，每日一次或每几日一次给药。实际剂量应该由医生根据有关的情况来决定，这些情况包括被治疗者的身体状态、给药途径、年龄、体重、患者对药物的个体反应， 患者症状的严重程度等等，因此上述剂量范围并不是以任何方式限制本发明的范围。本发明采用多肽组合药物技术克服了 Exendin-4半衰期短的问题，所提供的多肽复合物中，由于载体多肽的存在使得^^11肚11-4在体内的半衰期可达到对小时以上，较单独给药的Exendin-4的半衰期明显延长，极大地便利了 Exendin-4 (半衰期仅为2. 4小时) 的临床推广和应用。
以下，结合附图来详细说明本发明的实施例，其中图1为实施例18中几种含Exendin-4和载体多肽的多肽复合物的降血糖实验，其中Exendin-4 天然 Exendin-4 ；Exendin-4+2. 5A :Exendin_4与载体多肽以摩尔比例1 2. 5的复合物；Exendin-4+5A :Exendin_4与载体多肽以摩尔比例1 5的复合物；
Exendin-4+10A :Exendin_4与载体多肽以摩尔比例1 10的复合物；Exendin-4+25A :Exendin_4与载体多肽以摩尔比例1 25的复合物；Exendin-4+2. 5B :Exendin-4与载体多肽以摩尔比例1 2. 5的复合物;Exendin-4+5B :Exendin-4与载体多肽以摩尔比例1 5的复合物；Exendin-4+10B :Exendin-4与载体多肽以摩尔比例1 10的复合物；Exendin-4+25B :Exendin-4与载体多肽以摩尔比例1 25的复合物。图2为Exendin-4与不同比例的载体多肽复合物的液相分离结果，其中图2A为Exendin-4，图2B为载体多肽A，图2C为载体多肽B，图2D为Exendin-4+ 载体多肽A，图2E为Exendin-4+载体多肽B。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。实施例1 载体多肽A的制备按照大肠杆菌的优选密码子(但不限于优选密码子)，利用全基因合成的方法合成含有多肽A的碱基序列，DNA序列如下SEQ ID NO 3 5tatgattgaaggccgtggcctgtggtggaaagcgtggtggaaagcgtggtggaaatccctgtggtggc
gtaaacgtaaacgtaaagcgtaataag3SEQ ID NO 4
权利要求
1.一种多肽复合物，其中，所述多肽复合物包含Exendin-4和载体多肽。
2.如权利要求1所述的多肽复合物，其中，所述载体多肽为如序列SEQIDNO 1所示的载体多肽A或如序列SEQ ID NO 2所示的载体多肽B。
3.如权利要求1或2所述的多肽复合物，其中，所述Exendin-4和载体多肽的摩尔比为 10 1-1 50，进一步优选 1 2.5-1 25，更优选 1 10-1 25。
4.如权利要求1-3任一项所述的多肽复合物的制备方法，其中，所述方法包括按照摩尔比例，分别称取Exendin-4和载体多肽A或B，溶于适量的生理盐水、纯水或PBS缓冲液中，在0-5°C温度下，超声混合1-15分钟，或者搅拌1-3小时，或者放置过夜。
5.如权利要求1-3任一项所述的多肽复合物在制备治疗糖尿病的药物中的应用。
6.如权利要求1-3任一项所述的多肽复合物在制备治疗和/或预防肥胖症的药物中的应用。
7.—种药物组合物，其包含如权利要求1-3任一项所述的多肽复合物。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其中，所述药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的辅料。
9.如权利要求7或8所述的药物组合物，其中，所述药物组合物中多肽复合物和辅料的重量比为5 1-1 50，优选1 1-1 25。
10.如权利要求7-9中任一项所述的药物组合物，其中，所述药物组合物为注射剂，优选为冻干粉针或溶液注射剂。
全文摘要
本发明公开了一种多肽复合物，其包含Exendin-4和载体多肽。所述载体多肽能够有效延长Exendin-4的血液半衰期，克服其因为半衰期短而无法在临床上使用的现状，在糖尿病、肥胖症治疗药物领域较有应用前景。本发明还公开了所述多肽复合物的制备方法及其应用。此外，本发明进一步公开了包含所述多肽复合物的药物组合物。
文档编号A61K38/22GK102552883SQ20101058132
公开日2012年7月11日 申请日期2010年12月9日 优先权日2010年12月9日
发明者付刚, 任晓文, 徐为人, 汤立达, 王玉丽, 郑学敏, 龚珉 申请人:天津药物研究院