专利名称：一种smancs油性制剂、制备方法和用途的制作方法
技术领域：
[I]本实用新型涉及ー种大分子抗癌药SMANCS的油性制剂，具有生物活性稳定性高，临床应用方便的特点，属于化学药物领域。
背景技术：
[2]SMANCS是由前田浩等人所开发的，世界上最早的大分子抗癌药(參考文献:Maeda H, Ueda M, Morinaga T, Matsumoto T, Conjugation of poly、styrene-co_maleicacia)derivatives to the antitumor protein neocarzinostatin:pronouncedimprovements in pharmacological properties, J Med Chem.28 (4):455-61,1985),可以应用于多种肿瘤的治疗，作为原发性肝癌(hepatocellular carcinoma)的治疗药物，以碘化油(Iipiodol)为载体的动脉注射的方法在1993年被日本厚生劳动省所批准。[3]在化学结构上，SMANCS是由蛋白抗癌药新制癌菌素(NCS)和苯こ烯马来酸聚合物(SMA)组成的高分子抗癌剂，具有羰基的苯こ烯马来酸聚合物通过酰胺连接NCS上的两个氨基，从而形成下述大分子结构:(SMA) — (NCS) — (SMA)，其分子量为15000，是ー种大分子药物，在通常情况下稳定性较 差。[4]目前常用的SMANCS使用方法为在零下30°C以下保存，在使用前与碘化油混合(I毫克SMANCS溶于I毫升碘化油中)，通过超声波处理制作成SMANCS/碘化油悬浊液，经过导管注入肿瘤营养动脉(通常选择肝动脉作为肝癌的治疗途径)。[5]这种方法在用于临床治疗中存在以下问题:1)该药物在冷藏及室温保存时有失活的可能；2)该药物在临床使用时需要准备2种制剂(SMANCS及碘化油)，在医疗现场通过超声波处理、混合，这种操作方法导致手术的准备时间延长；3)由于是现场临时配制，医生在手术中无法有效对药物剂量进行调整，如增减剂量；4)由于不同的医生或者助理医生对现场混合制备掌握的熟练程度不同，药物的混合容易因为实施者的差异出现个体偏差，从而使治疗结果出现波动，不利于治疗的规范化。[6]在近期的研究中，本领域技术人员尝试过将SMANCS制成ロ服制剂从而增加使用上的便利，然而考虑到SMANCS的生物学特性和大分子量的特征，不易为人体内的蛋白多肽消化液所吸收，人体利用度较低。[7]因此本领域依旧急需ー种SMANCS的药物制剂，从而满足使用简单、剂量灵活、标准化生产等需求。
发明内容
[8]针对现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提供ー种SMANCS油性制剂，能够在临床需要注射时随即使用，不需要临床配制。[9]本发明的另ー个目的提供ー种SMANCS油性制剂，具有良好的粘度，可以使药物更长时间的聚集于肿瘤，提高治疗效果。[10]本发明的还ー个目的是提供ー种SMANCS油性制剂，肿瘤选择性更强，具有更满意的临床治疗效果。[11]本发明的还ー个目的是提供一种制备方法，用于获得上述SMANCS油性制剂。[12]进ー步的，本发明还公开了上述SMANCS油性制剂的用途。[13]为实现上述目的，本发明是通过下述技术方案实现的:[14] ー种SMANCS油性制剂，是ー种单ー制剂，包含(I)活性成分:SMANCS，即苯こ烯马来酸新制癌菌素；(2)具有良好生物相容性的油性材料:包含碘化油。[15]通过上述组成方案，本发明的SMANCS油性制剂在临床应用前已经制备成为一种单ー的药剂成品，在临床使用时根据需要可以随时使用，而不需要像传统的SMANCS那样需要临床上当场配制，从而改善了使用上的方便性；同时由于在使用前油性制剂即可生产，因此可以提供多种不同浓度规格的制剂，可以有效对药物剂量进行调整，从而使得SMANCS治疗应用更加简便化，规范化和高效化。[16]申请人通过大量实验研究发现，通过增加SMANCS油性制剂的粘度可以使药物更长时间的聚集于肿瘤，提高治疗效果，因此相应的本发明还公开了ー种SMANCS油性制齐U，在上述基础上，所述油性材料包含用于增加粘度的油性材料。[17]进ー步的，申请人通过研究发现，使用SMANCS治疗癌症时添加ー氧化氮可以增加SMANCS的肿瘤内传送，因此相应的本发明提供了ー种SMANCS油性制剂，在上述基础上含有一氧化氮供体，用于产生一氧化氮，所产生的一氧化氮是高脂溶性分子，可以在油剂中稳定存在，不会影响药物的稳定性。[18]本发明公开的SMANCS油性制剂，由于可以在制备时调整各成分的用量，因此可以提供多种不同浓度规格的油性制剂，相对于目前市场上已有的Img SMANCS/lml碘化油的浓度，本发明可以提供更高的浓度范围，从而大幅度増加治疗的适应症。同时从医生角度来讲，采用油性制剂临床使用更加方便和规范，医生可以根据具体情况选择不同剂量的药物进行治疗；优选的是，SMANCS在油性制剂中的含量为l_2mg/ml，从而可以用于更广泛的癌症治疗。[19]在本发明中，添加的用于增加粘度的油性材料的用量可以根据需要进行必要的调整，优选的是向碘化油中加入用于增加粘度的油性材料至用于增加粘度的油性材料浓度在油性制剂中的浓度(质量百分比)为5-10%。[20]在本发明中，一氧化氮供体在油性制剂中的含量需要考虑到既要产生一定量的ー氧化氮从而改善SMANCS的肿瘤内传送效果，还需要考虑到一氧化氮在人体内的含量受到安全的限制，申请人通过实验研究确定的一氧化氮供体在油性制剂中的用量为为1-100 Ii g/ml。[21]相应的，本发明提供了上述SMANCS油性制剂的制备方法，包括将SMANCS的冻结干燥品溶于具有良好生物相容性的油性材料中，或制成悬浊液，得到SMANCS的油性制剂的步骤。[22]当将其制备成含有增加粘度的油性材料的油性制剂时，具体的方法可以包括如下步骤:(1)将用于増加粘度的油性材料加入到碘化油中，在冰浴下用超声波处理，使其完全溶解；(2)加入SMANCS，制成悬浊液，在冰浴下用超声波使其完全溶解。[23]其中，所用的超声波超声的參数、时间等可以根据制备的需要由技术人员合理调整，本发明并不限制采用某个特定的參数，优选的，超声波的超声条件为:20-50kHz，0.2-0.5W/cm2。[24]优选的，步骤(I)的超声波超声时间为30秒-1分钟；步骤(2)的超声波超声时间为3分钟。[25]进ー步的，在上述制备方法的基础上，还包括向SMANCS油性制剂中添加、溶解一氧化氮供体的步骤。[26]在上述制备方法中，通过调整SMANCS在油剂中的含量，可以制作成针对不同肿瘤的SMANCS油性制剂，从而获得广泛的浓度范围。[27]相应的，本发明公开了上述SMANCS油性制剂在制备治疗癌症药物中的用途。[28]在本发明的进ー步详述和具体实施中，本发明公开了所用的各种成分的优选类型，以便更好、更清楚的说明本发明的发明实质，然而这种详细描述并不构成对本发明的特别限制，不依靠这些细节信息而采用本发明技术领域其他通用的化学材料，只要其符合本发明上述对各组成成分作用所做的限定，依旧属于本发明的保护范围。[29]在本发明中，碘化油，英文名为Lipiodol,通常采用的是由法国LaboratorieGuerbet公司制造的。[30]在本发明中，用于增 加粘度的油性材料包括但不限于胆固醇，饱和脂肪酸(如棕榈酸)，中链脂肪酸(如MCT，由日本NOF公司制造)及食用油(如橄榄油，芝麻油，豆油，花生油等)中的ー种和/或ー种以上的混合物。[31]在本发明中，所述的ー氧化氮供体包括但不限于硝化甘油，硝普纳(SNP)，亚硝基こ酰青霉胺(SNAP)，3-吗啉-悉尼酮亚胺(SIN-1)，硝酸异山梨酷(ISDN)，亚硝基こ酰半胱胺酸(SNO-NAC)，亚硝基谷胱甘肽(GSNO)，三硝基苯等芳香族硝基化合物，3-(2-羟基-1-甲基-2-亚硝基肼基)-N-甲基-1-丙胺N0C7等中的ー种和/或ー种以上的混合物。[32]在本发明中，由于能够提供更广泛的药剂浓度，所述的采用SMANCS油性制剂治疗的癌症不仅包括传统的原发性肝癌(肝细胞癌)，还包括能够用于治疗转移性肝癌，胆囊癌，胆管癌，肾癌，卵巣癌，肺癌，癌性胸水，癌性腹水等传统上认为的非SMANCS典型适应症的肿瘤疾病。[33]在用于治疗不同的癌症时，所用的药剂浓度是临床研究和临床如研究可以确定的，例如针对原发性肝癌，通常用lmg/ml的制剂，对于其他的例如转移性肝癌，胆囊癌，肾癌等非SMANCS典型适应症的肿瘤，高浓度的制剂(1.2-2.0mg/ml)采用动脉注射疗法具有很好的治疗效果，如肾癌及转移性肝癌采用1.8mg/ml的制剂。[34]本发明的SMANCS油性制剂，具有生物活性稳定性高，临床应用方便的特点，尤其是通过添加一氧化氮可进ー步提高药物的肿瘤选择性传送，从而大幅度提高药物的临床治疗效果。
[35]图la、lb为本发明的油性制剂添加具有增加粘度作用的油性材料(胆固醇、棕榈酸)粘度变化示意图；[36]图2为本发明油性制剂与其他制剂对比的温度稳定性图，显示不同温度孵育条件下的活性变化；[37]图3为本发明油性制剂的由油系向水系的移行的示意[38]图4为本发明油性制剂与其他制剂对比的对HeLa细胞的增殖抑制作用示意图；[39]图5为本发明的油性制剂与其他制剂对比的in vivo抗肿瘤效果示意图。
具体实施例方式[40]实施例1[41] SMANCS与碘化油，制成1.5mg/ml的油性制剂。[42]实施例 2[43] SMANCS与碘化油，分别添加胆固醇，使胆固醇含量为1%、2%、4%、5%、6%、8%,制成1.5mg/ml的油性制剂。[44]实施例 3[45]SMANCS与碘化油，分别添加棕榈酸，使棕榈酸含量为5%、10%，制成1.5mg/ml的油性制剂。[46]实施例 4[47] SMANCS与碘化油,添加硝化甘油至浓度为IOy g/ml,制成两种1.5mg/ml的肿瘤选择性強化型油性制剂。[48]实施例 5[49]SMA NCS与碘化油，添加棕榈酸至其浓度为5%、10%，添加硝化甘油至浓度为10 u g/ml,制成两种1.5mg/ml的肿瘤选择性强化型油性制剂。[50]实施例 6[51] SMANCS与碘化油，添加胆固醇至其浓度为5%、8 %，添加硝化甘油至浓度为10 u g/ml,制成两种1.5mg/ml的肿瘤选择性强化型油性制剂。[52]实施例 7[53]SMANCS与碘化油，分别添加棕榈酸，使棕榈酸含量为5%、10%，制成lmg/ml的油性制剂。[54]实施例 8[55] SMANCS与碘化油，添加硝化甘油至浓度为10 u g/ml，制成两种lmg/ml的肿瘤选择性強化型油性制剂。[56]实施例 9[57]SMANCS与碘化油，添加棕榈酸至其浓度为5%、10%，添加硝化甘油至浓度为IOii g/ml,制成两种lmg/ml的肿瘤选择性强化型油性制剂。[58]基于同样方法，通过调整SMANCS的用量可以得到其他浓度的油性制剂，例如
1.2mg/ml、2.0mg/ml等。在配制时,通常是以Iml碘化油为基准进行配制的,然而本领域技术人员容易得知，任意其他用量的碘化油，只要通过调整SMANCS与碘化油的用量比例，即可得到所要求的浓度。[59]对于以上实施例制备的油性制剂，申请人采用多种技术指标对其性能进行了测试。[60]在以下试验检测中，所采用的测试方法分别为:[61] 1.药物浓度(活性)的测定方法
[62]方法1:与原药新制癌菌素的活性測定方法相同，通过测定其对滕黄微球菌(Micrococcus Iuteus)增埴的抑制作用来评价。由于新制癌菌素及SMANCS对滕黄微球菌的抗菌活性与其抗肿瘤活性平行，所以该方法(细菌感受性试验)，为标准的SMANCS活性测定、评价方法，具体方法为琼脂扩散试验(disk agar diffusion test),详细的操作步骤为本领域技术人员所熟知，例如參考该文献:Maeda H, Takeshita J, Yamashita A,Lymphotropic accumulation of an antitumor antibiotic protein,neocarzinostatin,Eur J Cancer.16(5):723-31,1980。[63]方法2:使用人宫颈癌培养细胞HeLa，通过测定其对该培养细胞的增殖抑制作用来评价。具体方法如下:将HeLa细胞(250-300个)置于直径35毫米的培养皿(FALCON ,美国Becton Dickinson公司产品)中，加入含有10 牛血清的minimumessential medium (MEM)，37 °C，5%ニ氧化碳的条件下培养18小时，使细胞附着于培养皿。之后用PBS磷酸盐缓冲液冲洗细胞2次，再加入I毫升无血清MEM，然后添加各种浓度的SMANCS油性制剂50微升，37°C，5%ニ氧化碳的条件下培养I小吋。之后用PBS磷酸盐缓冲液冲洗细胞2次，再加入含有10%牛血清的MEM，在37°C，5%ニ氧化碳的条件下继续培养7-8天。最后用I %的亚甲基蓝将细胞染色，记数所形成的细胞集落(约由50个细胞组成)，通过所细胞集落数的变化(减少)来评价SMANCS的抗肿瘤活性。[64] 2.药物稳定性的测定[65] I)温度对药物稳定性的影响:将上述各种SMANCS油性制剂分别置于零下30°C、4°C、室温(25°C )、37°C、43°C及56°C的环境中，定时采取部分样本，通过上述的琼脂扩散试验来測定其抗菌活性。[66]2)超声波处理对药物稳定性的影响:将上述各种SMANCS油性制剂进行超声波处理(UP50H，德国 Dr.Hielscher GmbH 公司产品，20_50kHz，.0.2-.0.5W/cm2)，定时采取部分样本(最长处理时间为10分钟)，同样进行抗菌活性測定。[67]3)药物由油系向水系的移行:取上述各种SMANCS油性制剂3毫升，加入等量的PBS磷酸缓冲液(pH 7.0)后移入15毫升试管中，在37°C恒温水浴中振荡(1Hz，振荡幅度10厘米)孵育。定时分别从油层及水层中采取部分样本，同上測定其抗菌活性。同时为同其他水溶性抗癌药物进行比较，采用多柔比星(阿霉素)及丝裂霉素C进行同样试验。其溶液的调制方法分别如下。多柔比星:首先以5毫克/毫升的浓度溶解于泛影葡胺(事先调整其比重使其与各种油性溶剂载体的比重相同)中，再加入等量的各种油性溶剂载体，通过超声波处理制成悬浊液。丝裂霉素C:通过添加少量卵磷脂使其溶解于各种油性溶剂载体中。[68] 3.粘度测定[69]利用旋转式与振荡式流变仪(安东帕Physcia MCR101，奥地利)测量添加不同油性材料的SMANCS油性制剂的粘度(25°C及37°C )。[70]4.1n vivo 抗肿瘤效果[71]肿瘤模型:[72] I)兔肝脏移植肿瘤VX2模型:新西兰白兔在苯巴比妥(30mg/kg，静注)麻酔下开腹，将乳头瘤VX2肿瘤组织(约2X2X2立方毫米大小)植入肝左前叶内。植入肿瘤2周后开始治疗。以动物的死亡率及肿瘤大小的变化来评价治疗效果。
[73] 2)小鼠背部S180肉瘤模型:将小鼠肉瘤细胞S180经小鼠腹腔培养传代2_3次后，分离清洗腹水中的肿瘤细胞，计数后将2X IO6细胞经皮下注入雄性ddY小鼠背部皮下。植入5-7天后，当肿瘤长至大小约直径5-6mm时，开始治疗。以肿瘤的增长速度(大小变化)即定期测量肿瘤的体积来评价治疗效果。[74]实验ー:粘度测定[75]取等量的碘化油，测试添加用于增加粘度的油性材料对油性制剂粘度的影响，测试结果如附图la、Ib所示。[76]分别以实施例2、3与未添加增加粘度油性材料的油性制剂相比较，參考附图la、lb可以看到，添加胆固醇( 8% )或饱和脂肪酸(棕榈酸，10% )后，SMANCS油性制剂在室温(25°C )的粘度增加5倍以上，在37°C时也增加3-4倍；总体上，增加此类油性材料会显著改善制剂的粘度。[77]实验ニ:粘度对油性制剂抗肿瘤效果的影响[78]分别将实施例4与实施例5、6中添加5%、8%胆固醇的油性制剂、添加5%、10%棕榈酸的油性制剂的抗肿瘤效果进行了比较，检测其抗肿瘤效果，结果如下表所示:表I SMANCS油性制剂粘度变化与抗肿瘤效果
权利要求
1.ー种SMANCS油性制剂，其特征在于，为单ー制剂，包含(I)活性成分:SMANCS，即苯こ烯马来酸新制癌菌素；(2)具有良好生物相容性的油性材料:包含碘化油。
2.根据权利要求1所述的SMANCS油性制剂，其特征在于，所述油性材料还包含用于增加粘度的油性材料。
3.根据权利要求2所述的SMANCS油性制剂，其特征在于，所述用于増加粘度的油性材料为胆固醇、饱和脂肪酸、中链脂肪酸、食用油中的ー种和/或ー种以上的混合物。
4.根据权利要求1所述的SMANCS油性制剂，其特征在于，还包含一氧化氮供体。
5.根据权利要求4所述的SMANCS油性制剂，其特征在于，所述ー氧化氮供体选自硝化甘油、硝普纳、亚硝基こ酰青霉胺、3-吗啉-悉尼酮亚胺、硝酸异山梨酷、亚硝基こ酰半胱胺酸、亚硝基谷胱甘肽、芳香族硝基化合物，3-(2-羟基-1-甲基-2-亚硝基肼基)-N-甲基-1-丙胺中的ー种和/或ー种以上的混合物。
6.根据权利要求1所述的SMANCS油性制剂，其特征在于，SMANCS在油性制剂中的含量为 l_2mg/ml。
7.根据权利要求2所述的SMANCS油性制剂，其特征在于，所述用于増加粘度的油性材料在油性制剂中的浓度为5-10%。
8.根据权利要求4所述的SMANCS油性制剂，其特征在于，一氧化氮供体在油性制剂中的含量为1-1OOii g/ml。
9.ー种SMANCS油性制剂的制备方法，其特征在于，将SMANCS的冻结干燥品溶于具有良好生物相容性的油性材料中，或制成悬浊液，即得SMANCS的油性制剂。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，包括下述步骤:(I)将用于増加粘度的油性材料加入到碘化油中，在冰浴下用超声波处理，使其完全溶解；(2)加入SMANCS，制成悬浊液，在冰浴下用超声波使其完全溶解。
11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，超声波的超声条件为:20-50kHz，0.2-0.5W/cm2。
12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，步骤(I)的超声波超声时间为30秒-1分钟；步骤⑵的超声波超声时间为3分钟。
13.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，还包括向SMANCS油性制剂中添加、溶解一氧化氮供体的步骤。
14.SMANCS油性制剂在制备治疗癌症药物中的用途。
15.根据权利要求14所述的用途，其特征在于，所述癌症包括原发性肝癌，转移性肝癌，胆囊癌，胆管癌，肾癌，卵巢癌，肺癌，癌性胸水，癌性腹水。
全文摘要
本发明公开了一种SMANCS的油性制剂，为单一制剂，包含(1)活性成分SMANCS，苯乙烯马来酸新制癌菌素，为新制癌菌素NCS与苯乙烯-马来酸共聚物SMA的化学结合体；(2)具有良好生物相容性的油性材料包含碘化油。本发明公开的油性制剂克服了传统的SMANCS保存条件复杂、临床使用不方便的缺陷，具有使用方便，可以灵活调整药剂浓度的效果。
文档编号A61K45/00GK103110577SQ20121033259
公开日2013年5月22日 申请日期2012年9月10日 优先权日2012年9月10日
发明者前田浩, 方军 申请人:美国Gca医药有限公司