一种人干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物中的用途
【专利摘要】本发明为一种人干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物中的用途。由包含离体的人干细胞和生理盐水组成的所述干细胞组合物配置成的体积为10~80ml的干细胞悬液，每份所述干细胞悬液中含有的人干细胞的数量为1~8×108个。本发明可通过静脉注射和血管介入进行卵巢早衰或子宫疾病的治疗。静脉输入安全可靠，操作性强，副作用小，干细胞可以通过血液循环到达细胞受损部位；血管介入疗法相对于手术治疗损伤小，可避免血管搭桥手术中可能出现的各种副损伤及并发症，该疗法起效快，可直接作用于病变部位，建立侧支循环，恢复血供。
【专利说明】一种人干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物中的用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物用途，进一步地说，是涉及一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物中的用途。
【背景技术】
[0002]卵巢和子宫是女性生殖系统的重要组成部分。子宫是产生月经和孕育胎儿的器官，位于骨盆腔中央，在膀胱与直肠之间。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，位于子宫底的后外侧，与盆腔侧壁相接。卵巢除借助卵巢系膜固定于子宫阔韧带外，还借卵巢悬韧带和卵巢固有韧带与盆腔侧壁及子宫相连。卵巢有两种主要功能:一为产生卵子并排卵，体现其生殖功能；另一为合成并分泌性激素，如雌激素、孕激素、雄激素等20多种激素和生长因子，控制着人体骨骼、免疫、生殖、神经等九大系统的400多个部位，维持这些器官的青春和活力。
[0003]卵巢早衰及多种子宫疾病如子宫内膜癌、子宫炎、宫颈糜烂、子宫肌瘤这些疾病给患者带来了很大的痛苦，现有技术的治疗方法主要包括:
[0004]1.激素替代疗法(HRT ): 口服和直接置放。
[0005]其缺点是:用量精确，长期依赖，需医生指导用药。
[0006]2.免疫治疗:查明有抗体因素存在者可行免疫治疗。
[0007]其缺点是:对其他原因所致的卵巢早衰无效。
[0008]3.手术治疗主要有两种:
[0009]I)对于因卵巢血管因素导致卵巢营养缺失而发生的POF者应尽前尽早行血管搭桥手术，如将卵巢动脉与肠系膜下动脉或肾动脉等吻合，恢复卵巢血管供应。
[0010]2)对于已处于POF晚期或由于各种原因导致卵巢缺如者，可行卵巢移植术。
[0011]而手术治疗的缺点是:术中易发生副损伤及术后并发症，患者痛苦较大。
【发明内容】
[0012]本发明的目的，就是为了克服现有技术的缺陷，提供一种人干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物中的用途。
[0013]关于本文中有关干细胞的相关术语定义如下:
[0014]1.干细胞组合物 (201210017987.9专利产品):为专利(201210017987.9)中提到的2-4_厚的油状干细胞层(详见干细胞制备过程)；
[0015]2.干细胞悬液:为该油状干细胞层经生理盐水清洗及稀释后得到的悬液，定容为10-80ml ；
[0016]3.干细胞悬液的稀释液:由于悬液中的干细胞数量多，易吸附成团，以免静滴时不能通过滤网，因此静滴前需再用100ml的生理盐水进一步稀释，即干细胞悬液的稀释液，此时的总容量为110-180ml。
[0017]注:自始至终，干细胞的数量并未发生变化，即溶质为定量，只是增加了生理盐水的量，即溶剂为变量，因此溶液的量也随之变化，即有了三种不同的称呼。若不同，也只是溶液的密度不同，由于起效成分为干细胞，因此生理盐水的多少并不会影响治疗的效果。
[0018]干细胞是一类具有自我更新，高度增殖和多向分化潜能的细胞群体，即这些细胞可以通过细胞分裂维持自身细胞群的大小，同时又可以进一步分化成为各种不同的组织细胞，被医学界称为“万用细胞”。本发明就是基于干细胞具有的细胞替代作用，将干细胞植入体内后，能自动识别并移行至细胞损伤部位，然后分裂增殖成新的细胞，替代受损或病变细胞行使其功能。
[0019]干细胞移植可治疗原始生殖细胞缺乏或正常卵巢生殖细胞的耗损加速而导致的特发性卵巢早衰；治疗针对于卵巢血供障碍所致的卵巢萎缩，干细胞可于病变部位周围建立侧支循环，恢复卵巢血运，营养早衰的卵巢，并逐渐恢复其功能。
[0020]另外，治疗针对于多种子宫疾病如子宫内膜癌、子宫炎、宫颈糜烂、子宫肌瘤这些疾病，由于干细胞具有增殖和定向分化的能力，当干细胞被趋化至子宫损伤局部后(如内膜基底层)，其中部分细胞分泌大量小分子物质，趋化受体干细胞，可促进细胞增殖并定向分化，完成内膜结构和功能的修复。而且干细胞能释放多种生物活性物质，如可以释放膜微粒，趋化并调节周围细胞的功能活性，唤醒处于休眠期的组织细胞，促进其发挥其生物学特性；另由于其具有的免疫调节作用，可增强人体的免疫机能和修复受损的免疫系统，降低机体炎症反应，从而治疗各种免疫因素及感染所致的子宫疾病。
[0021]本发明的人干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物中的用途是这样实现的:
[0022]本发明所述干细胞组合物为用生理盐水清洗及稀释人造血干细胞后得到干细胞悬液，每份所述干细胞 组合物含有的人干细胞的数量为(11) XIO8个；
[0023]所述的人干细胞选自人类骨髓、脐带血或外周血干细胞、其中优选脐带血干细胞，即按照本 申请人:的申请号为201210017987.9、名称为“一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液及干细胞分离方法”中的干细胞分离方法步骤(3)得到的“存在于整个离心管中间位置的约(2-4) mm厚的油状干细胞层”；
[0024]每份所述干细胞组合物经(10-80) ml生理盐水定容后，干细胞在干细胞悬液中的个数密度为(0.125~8) X IO7个/ml。
[0025]人干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰的的用途中，可以采用下列方法之一实现:
[0026]1.静脉输入法:通过体表浅静脉进行静脉点滴注射；
[0027]2.血管介入法:血管介入的位点为一侧股动脉。
[0028]其中，
[0029]1.所述的静脉输入法的步骤为:
[0030](I)用100ml生理盐水稀释干细胞悬液得到总容量为110_180ml用于静脉输入的干细胞悬液的稀释液；
[0031](2)通过静脉点滴的方法进行细胞治疗:
[0032]先用0.9%的氯化钠溶液20_30ml冲管；[0033]接着开始静脉点滴注射输入干细胞悬液的稀释液，保持20-30滴/分钟，半小时后无不良反应可增加到30-50滴/分钟，细胞输入过程中每15分钟轻轻晃动装有所述干细胞悬液的稀释液的细胞保存袋一次；
[0034]细胞输入完毕后用0.9%的氯化钠溶液20ml冲入细胞保存袋中轻轻晃动，再用0.9%的氯化钠溶液20-30ml冲净即可将输液器中细胞冲净，得到的冲洗液也同样注入患者体内，以保证细胞输入的数量；
[0035]静滴时将细胞液摇匀，避免细胞贴壁。
[0036]2.所述的血管介入法的步骤为:
[0037]( I)血管介入的位点为一侧股动脉；
[0038](2)血管介入直接用干细胞悬液；
[0039](3)血管介入路径为:从股动脉入路，导丝沿髂内动脉前支走行，进入子宫动脉，子宫动脉在此处分为输卵管支和卵巢支，将导丝送入卵巢支，卵巢支又与卵巢动脉支吻合于子宫阔韧带内，此处即为所述干细胞悬液的注入位置。
[0040]另外，人干细胞组合物在制备用于治疗子宫疾病的药物中的用途中，所述的用途采用下列方法之一实现:
[0041]1.静脉输入法:通过体表浅静脉进行静脉点滴注射；
[0042]2.血管介入法:血管介入位点为子宫动脉与子宫动脉阴道支；
[0043]3.经阴道后穹窿穿刺注射。
[0044]其中，
`[0045]1.所述的静脉输入法的步骤为:
[0046](I)用100ml生理盐水稀释干细胞悬液得到总容量为110_180ml用于静脉输入的干细胞悬液的稀释液；
[0047](2)通过静脉点滴的方法进行子宫疾病的治疗；
[0048]先用0.9%的氯化钠溶液20_30ml冲管，开始输入细胞时保持20_30滴/分钟，半小时后无不良反应可增加到30-50滴/分钟；
[0049]细胞输入过程中每15分钟轻轻晃动装有所述干细胞悬液的稀释液的细胞保存袋一次;
[0050]细胞输入完毕后用0.9%的氯化钠溶液20ml冲入细胞保存袋中轻轻晃动,输入完毕后再用0.9%的氯化钠溶液将输液器中细胞冲净，得到的冲洗液也同样注入患者体内，以保证细胞输入数量；
[0051 ] 静滴时将细胞液摇匀，避免细胞贴壁。
[0052]当用所述干细胞组合物用于治疗子宫疾病选择静脉输入治疗时，由于干细胞具有增殖和定向分化的能力，当干细胞被趋化至子宫损伤局部后(如内膜基底层)，其中部分细胞分泌大量小分子物质，趋化受体干细胞，可促进细胞增殖并定向分化，完成内膜结构和功能的修复。而且干细胞能释放多种生物活性物质，如可以释放膜微粒，趋化并调节周围细胞的功能活性，唤醒处于休眠期的组织细胞，促进其发挥其生物学特性；另由于其具有的免疫调节作用，可增强人体的免疫机能和修复受损的免疫系统，降低机体炎症反应，从而治疗各种免疫因素及感染所致的子宫疾病。同时静脉输入安全可靠，操作性强，副作用小，干细胞可以通过血液循环到达细胞受损部位。[0053]2.所述的血管介入法的步骤为:
[0054]( I)血管介入直接用干细胞悬液；
[0055](2)血管介入路径为:从股动脉入路，导丝沿髂内动脉前支走行，进入子宫动脉，到达阴道上部的子宫动脉阴道支，子宫动脉与子宫动脉阴道支皆为所述干细胞悬液的注入位置。 [0056]3.所述的经阴道后穹窿穿刺注射法的步骤为:
[0057](I)患者排空膀胱，取膀胱截石位，外阴常规消毒，铺巾；
[0058](2)阴道检查了解子宫、附件情况，注意阴道后穹窿是否膨隆；
[0059](3)阴道窥器充分暴露宫颈及阴道后穹窿并消毒；
[0060](4)宫颈钳钳夹宫颈后唇，向前提拉，充分暴露阴道后穹窿，再次消毒；
[0061](5)用22号长针头接5~10ml注射器，在后穹窿中央距离阴道后壁与宫颈后唇交界处稍下方平行宫颈管刺入，当针穿过阴道壁，有落空感(进针深约2cm)后即可缓慢推注，注射完毕后拔出针头，此时穿刺点如有活动性出血，可用棉球压迫片刻；血止后取出阴道窥器。
[0062]以上所述的治疗卵巢早衰或治疗子宫疾病血管介入法的具体步骤还包括:
[0063]1，术前准备:局部备皮、静脉碘过敏试验等同一般血管造影；术前快速补液、输血、抗休克治疗；向病人家属交代病情变化，以及介入治疗的必要性，方法，疗效及可能出现的不良反应，并在手术同意书上签字；
[0064]2，介入操作:采用1%_2%利多卡因溶液进行局麻，手术刀片破皮l_2mm，蚊式钳钝式分离皮下组织；常规穿刺一侧股动脉行Seldinger穿刺，具体穿刺点为腹股沟韧带下
1.5-2.0cm处；缓慢回撤穿刺针，直至血液无阻力自针尾喷出动脉；选择5F或6F血管鞘，将导丝沿股动脉送入，若导丝远端走行正确，可退出穿刺针，沿导丝送入血管鞘，撤出导丝及扩张鞘管；以三通装置抽吸血管鞘并弃去抽吸物，用肝素盐水冲洗鞘管后备用；经鞘管送入相应的导管，导入干细胞悬液；然后退出导管，逐层缝合股动脉及切口，缝合时注意严密止血；
[0065]3，术后处理:检查各项生命体征，检查足背动脉搏动，穿刺点需用弹性胶布或绷带进行加压包扎，并加沙袋压迫，患者卧床6-24小时。补液等其他治疗同一般术后处理；尽量避免应用抗生素，以免影响干细胞起效。
[0066]介入疗法相对于手术治疗损伤小，可避免血管搭桥手术中可能出现的各种副损伤及并发症，该疗法起效快，可直接作用于病变部位，建立侧支循环，恢复卵巢血供。
[0067]本发明所述的人干细胞为按照本 申请人:的申请号为201210017987.9，名称为“一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液及干细胞分离方法”的方法制得，即:
[0068]首先制备人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液:
[0069]所述的干细胞样本密度分离液分别由I号液、2号液和3号液组成，按照重量百分比计，其各自组份的含量为:
[0070]I号液为稀释剂，选自下列水溶液之一:0.1-30%氯化钠注射液和0.1-20%的脑蛋白水解物组成的水溶液、或者0.1-30%的pH为7-7.5的磷酸盐缓冲液和0.1%_20%的脑蛋白水解物组成的水溶液；
[0071]2号液为沉淀剂，选自0.1-30%羟乙基淀粉水溶液或0.1-30%甲基纤维素水溶液；[0072]3号液为分层液，其为密度为1.0-1.2g/ml的聚蔗糖和泛影葡胺水溶液。
[0073]在实施中，
[0074]所述的脑蛋白水解物为选自下列产品之一:国药准字H20052182国药准字H20003386、国药准字 H20003384 或国药准字 H20003385 ；
[0075]所述的脑蛋白水解物的组分含量优选为0.3-20% ；
[0076]所述的水溶液的水为灭菌注射用水。
[0077]更具体地说，
[0078]所述I号液的氯化钠注射液组分含量可以为0.3-12%、优选0.5_2%、更优选为0.9% ；
[0079]所述I号液的磷酸盐缓冲液的pH可以为7.1-7.4优选7.2-7.4、更优选为7.4 ；
[0080]所述的脑蛋白水解物组分含量可以为0.8-15%、优选1.5-4.5%、更优选为3% ；
[0081]所述2号液的羟乙基淀粉组分含量为0.5-18%、优选1.5_12%、更优选为6% ；
[0082]所述2号液的甲基纤维素组分含量为0.2-8%、优选0.3_5%、更优选为0.5% ；
[0083]所述3号液聚蔗糖和泛影葡胺的密度为1.01-1.088g/ml、优选L 035-1.08g/ml、更优选为1.075g/ml。
[0084]在具体操作中，
[0085]所述的I号液在超滤条件下除菌，2~3号液可以在100_130°C、优选105_120°C的温度下，灭菌10-50、优选15-20分钟。
[0086]然后是使用上述的干细胞样本密度分离液提取人类骨髓、脐带血或外周血分离干细胞的分离方法，所述的方法包括:
[0087](I)将采集、抗凝后的骨髓、脐带血或外周血样品加入到含有I号液稀释剂的大容量培养液瓶中，得到稀释样品；
[0088](2)在步骤(1)的稀释样品中加入2号液沉淀剂混匀，静置，待分层后吸取上层细胞液离心浓缩后得到浓缩样品；
[0089](3)将步骤(2)的浓缩样品铺到3号液上层，然后离心分离，得到干细胞层。
[0090]在具体操作中:
[0091]所述步骤(1)的骨髓、脐带血或外周血样品的采集、抗凝、稀释均需在无菌条件下完成，其采集、抗凝方法分别为:
[0092]骨髓血采集:采用髂后上棘，局麻骨穿方法，使用采髓针采集骨髓，采集骨髓用的针管中先抽取1-1.5ml枸橼酸钠抗凝液,再抽取骨髓与枸橼酸钠抗凝液合计为5ml,依次方法采集，收集采集的骨髓注入无菌瓶中，得到骨髓血预处理样品；
[0093]脐带血的采集:在产妇胎盘脱落后，使用单包含枸橼酸钠抗凝液的采血袋，将其采血袋上的针头插入脐静脉中，一边采集一边轻轻晃动采血袋，使抗凝液与脐带血充分结合，得到脐带血预处理样品；
[0094]外周血采集:对被采血者手臂进行消毒，使用含有枸橼酸钠抗凝液的采血袋，将采血袋上的针头插入手臂静脉采集过程中慢慢摇动采血袋，使抗凝液与外周血充分结合，得到外周血预处理样品；
[0095]在所述步骤(1)中，经采集、抗凝后的骨髓血、脐带血或外周血预处理样品与I号液的体积比为1:1，得到稀释样品；[0096]在所述的步骤(2)中，稀释样品与2号液的体积比为2:1，再经过摇匀1-8分钟，放置3分钟-3小时，待分层后吸取上层细胞液，分装至50ml离心管中，以500-4000转/分钟离心1-20分钟，搜集下层细胞液，得到浓缩样品；
[0097]将步骤(3)得到浓缩样品用生理盐水稀释后铺在号液3液上，以500-4000转/分钟离心1-60分钟，收集存在于整个离心管中间位置的约2-4_厚的油状干细胞层；
[0098]将收集的干细胞层用生理盐水清洗1-5次，再用生理盐水稀释至临床使用体积10-80ml 即可。
[0099]综上所述，本发明的优点在于:
[0100]1.临床使用安全，内毒素< 1EU,符合国家药典规定的注射用标准。
[0101]2.获取的细胞悬液体积小，可按医生的需求配成临床治疗所需剂量。
[0102]3.静脉输入安全可靠，操作性强，治疗损伤小，副作用小，干细胞可以通过血液循环到达细胞受损部位。
[0103]4.介入疗法相对于手术治疗损伤小，可避免血管搭桥手术中可能出现的各种副损伤及并发症，该疗法起效快，可直接作用于病变部位，建立侧支循环，恢复卵巢血供。
[0104]5.另外使用本 申请人:的申请号为201210017987.9、名称为“一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液及干细胞分离方法”的方法制得的人造血干细胞，还具备以下优势
[0105](I)含有多 种细胞因子，能够使干细胞快速准确的到达受损部位，并辅助其发挥生物学活性；
[0106](2)细胞数量大，特别是由人脐带血分离提取的纯化干细胞，每份脐带血(80ml左右)分离出的干细胞数量皆可达到IO8以上；
[0107](3)细胞种类全，分离全部的红细胞,血小板,血浆物质,去除部分成熟白细胞,淋巴细胞，纯化有核细胞，保留所有干细胞；
[0108](4)细胞活性强，采自人体新鲜活细胞，经分离纯化后获取干细胞。细胞活性达96%以上。
【具体实施方式】
[0109]下面结合实施例，进一步说明本发明。
[0110]实施例1
[0111]用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的干细胞悬液的制备。
[0112]无菌纱布蘸75%的酒精，擦拭所有操作过程中所需物品及操作台。(本操作中所涉及消毒步骤皆用75%酒精的无菌纱布擦拭，以下简称消毒)
[0113]1，将50mL含有枸橼酸钠的脐带血血袋消毒，导入50mLl号液瓶中。将5OmL 2号液全部倒入I号液瓶中，盖紧瓶盖，充分摇匀。将I号液瓶置于超净台，松动瓶盖后静置20-30min，待分层。12支离心管拆封，备用。
[0114]2，取3号液，消毒外壁，开盖，用新移液管取25ml3号液置于50ml新离心管中，一共移取3次，得到3支有试剂3号液的离心管，备用。
[0115]3,取步骤I静置20_30min后的试剂I号液瓶中的上层液,用移液管移取分别置于离心管中每只45ml,盖紧盖置于离心机中设置速度为2500转时间为5分钟温度为5°C。从离心机中取出离心管，消毒，开盖，弃上清液。
[0116]4，取新移液管，移取0.9%NaCl分别加入到离心管中至IOml处，摇匀，得细胞混合液备用。取步骤2下装有3号液的离心管，缓慢加入刚刚制备的细胞混合液，保持细胞混合液悬浮于3号液表面，加至45ml，轻放至试管架，即得到3支具有分层液的离心管，置于离心机中，设置速度为1800转，时间为30分钟，温度为5°C。
[0117]5，从离心机中轻取出离心管，保持液面平稳，消毒，开盖，用一次性胶头滴管吸取离心管中间的絮状液体，收集置三支新离心管中，用移液管加入0.9%NaCl至45ml处，摇匀，配平，离心，设置速度为2000转时间为5分钟温度为5°C (注:第一次清洗)。
[0118]6，取出具有细胞液的离心管，消毒，开盖，弃上清液后，用注射器先加入少量0.9%NaCl，摇匀后吸取至一支试管内，加入0.9%NaCl至45ml处，再摇匀，配平，离心，速度为1800转，时间为5分钟温度为5°C (注:第二次清洗)。
[0119]7，取出具有细胞液的离心管，消毒，开盖，弃上清液，用注射器先加入少量0.9%NaCl，摇匀后加入0.9%NaCl至45ml处，再摇匀，配平，离心，设置速度为1600转时间为5分钟温度为5°C (第三次清洗)。
[0120]8，取出具有细胞液的离心管，消毒，开盖，弃上清液后加入0.9%NaCl至所需要稀释刻度处摇匀，用微量定量移液器取IOul用于细胞计数，其余细胞液密封，置于冰桶内待用。
[0121]实施例2
[0122]药理实验，脐带血干细胞悬液的一般药理学实验
[0123]I 材料`
[0124]1.1动物:KM小鼠体质量18~22g，雌雄各半。健康杂种家犬，体重12~18kg，雌雄皆用。动物饲养于SPF级实验动物实验室条件下，室内温度19~22°C，相对湿度40%~50%，给予全价颗粒饲料，自由摄食、饮水。
[0125]1.2药物:人类脐带血干细胞悬液，其中干细胞含量为8X IO7个/ml。
[0126]1.3上海欣曼公司SYS-G型小鼠自主活动测频仪，美国BIOPAC公司RM-6000型多导生理记录仪。
[0127]2试验方法
[0128]2.1对精神神经系统的影响
[0129]2.1.1对小鼠一般外观行为的影响:取小鼠80只，随机分为四组，每组20只，雌雄各半，给药组分设0.5、1.0,2.0ul/kg三个剂量组，对照组给予5%葡萄糖注射液，均按
0.lml/10g体重尾静脉注射给药，给药后lOmin，观察小鼠的一般行为表现，步态、姿势、肌肉紧张度、瞳孔变化、流涎、二便、皮毛等，同对照组比较，了解受试药对动物的影响。
[0130]2.1.2对小鼠协调运动的影响:分组及给药同前，采用倾斜板法，于给药前及给药后10min、30min及60min各进行一次测定，计算各组小鼠从木板上跌落的百分率，按简化直接法统计。
[0131]2.1.3对小鼠自主活动的影响:小鼠80只，分组及给药同前，于尾静脉注射给药后IOmin,置小鼠于自发活动测定仪中，稳定5min后,测定IOmin内自主活动次数,用组间t检验进行统计处理。
[0132]2.2对呼吸系统及心血管系统的影响[0133]家犬6只，雌雄各半，用戊巴比妥钠30mg/kg，静脉注射麻醉后，背位固定，分离右颈总动脉，插管连接TP-101型压力转换能以多导生理记录仪记录收缩压，舒张压及平均动脉压；以针形电极刺入四肢皮下记录II导联心电图，以立位转换能器连接胸骨记录呼吸频率及幅度。实验设0.5、1.0,2.0ul/kg三个剂量组，对照组用5%葡萄糖注射液，给药容积为lml/kg，由股静脉插管给药，注射速度为30s，分别在静脉注射给药后1、2、5、10、15、20及30min时记录上述各项指标,观察脐带血干细胞悬液对呼吸,心电及血压的作用，用t检验法进行用药前后显著性检验分析。
[0134]3 结论
[0135]3.1对小鼠一般行为表现的影响:实验各组动物在用药后60min内的一般行为，步态、肌紧张度、活动、饮食、皮毛及二便，均无显著变化，未见有瞳孔大小改变，竖毛、倦伏、流涎等异常症状，同对照组相比，差异无统计学意义。
[0136]3.2对协调运动的影响:各组动物于给药前及给药后各观测点的跌落率均为0，表明在实验所用0.5,1.0,2.0ul/kg剂量下对小鼠协调运动无明显影响。
[0137]3.3对小鼠自主活动的影响:脐带血干细胞悬液各剂量组对小鼠自主活动的影响见表1。
[0138]表1对小鼠自主活动的影响
【权利要求】
1.一种人干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物中的用途，其特征在于: 所述干细胞组合物为用生理盐水清洗及稀释人干细胞后得到干细胞悬液，每份所述干细胞组合物含有的人干细胞的数量为(f 8) X IO8个； 所述的人干细胞选自人类骨髓、脐带血或外周血干细胞，即按照本 申请人:的申请号为201210017987.9、名称为“一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液及干细胞分离方法”中的干细胞分离方法步骤(3 )得到的“存在于整个离心管中间位置的约(2-4) _厚的油状干细胞层”； 每份所述干细胞组合物经(10-80) ml生理盐水定容后，干细胞在干细胞悬液中的个数密度为(0.125~8) X IO7 个/ml。
2.根据权利要求1所述的在制备用于治疗卵巢早衰的药物中的用途，其特征在于，所述的用途采用下列方法之一实现: 1.静脉输入法:通过体表浅静脉进行静脉点滴注射； 2.血管介入法:血管介入的位点为一侧股动脉。
3.根据权利要求2所述的在制备用于治疗卵巢早衰的药物中的用途，其特征在于，所述的静脉输入法的步骤为: (1)用100ml生理盐水稀释干细胞悬液得到总容量为IlO-1SOml用于静脉输入的干细胞悬液的稀释液； (2)通过静脉点滴的方法进 行 细胞治疗: 先用0.9%的氯化钠溶液20-30ml冲管； 接着开始静脉点滴注射输入干细胞悬液的稀释液，保持20-30滴/分钟，半小时后无不良反应可增加到30-50滴/分钟，细胞输入过程中每15分钟轻轻晃动装有所述干细胞悬液的稀释液的细胞保存袋一次； 细胞输入完毕后用0.9%的氯化钠溶液20ml冲入细胞保存袋中轻轻晃动，再用0.9%的氯化钠溶液20-30ml冲净即可将输液器中细胞冲净，得到的冲洗液也同样注入患者体内，以保证细胞输入的数量； 静滴时将细胞液摇匀，避免细胞贴壁。
4.根据权利要求2所述的在制备用于治疗卵巢早衰的药物中的用途，其特征在于，所述的血管介入法的步骤为: (1)血管介入的位点为一侧股动脉； (2)血管介入直接用干细胞悬液； (3)血管介入路径为:从股动脉入路，导丝沿髂内动脉前支走行，进入子宫动脉，子宫动脉在此处分为输卵管支和卵巢支，将导丝送入卵巢支，卵巢支又与卵巢动脉支吻合于子宫阔韧带内，此处即为所述干细胞悬液的注入位置。
5.根据权利要求1所述的在制备用于治疗子宫疾病的药物中的用途，其特征在于，所述的用途采用下列方法之一实现: ，1.静脉输入法:通过体表浅静脉进行静脉点滴注射； ，2.血管介入法:血管介入位点为子宫动脉与子宫动脉阴道支； ， 3.经阴道后穹窿穿刺注射。
6.根据权利要求5所述的在制备用于治疗子宫疾病的药物中的用途，其特征在于，所述的静脉输入法的步骤为: (1)用100ml生理盐水稀释干细胞悬液得到总容量为IlO-1SOml用于静脉输入的干细胞悬液的稀释液； (2)通过静脉点滴的方法进行子宫疾病的治疗； 先用0.9%的氯化钠溶液20-30ml冲管，开始输入细胞时保持20-30滴/分钟，半小时后无不良反应可增加到30-50滴/分钟； 细胞输入过程中每15分钟轻轻晃动装有所述干细胞悬液的稀释液的细胞保存袋一次； 细胞输入完毕后用0.9%的氯化钠溶液20ml冲入细胞保存袋中轻轻晃动，输入完毕后再用0.9%的氯化钠溶液将输液器中细胞冲净，得到的冲洗液也同样注入患者体内，以保证细胞输入数量； 静滴时将细胞液摇匀，避免细胞贴壁。
7.根据权利要求5所述的在制备用于治疗子宫疾病的药物中的用途，其特征在于，所述的血管介入法的步骤包括: (1)血管介入直接用干细胞悬液； (2)血管介入路径为:从股动脉入路，导丝沿髂内动脉前支走行，进入子宫动脉，到达阴道上部的子宫动脉阴道支，子宫动脉与子宫动脉阴道支皆为所述干细胞悬液的注入位置。
8.根据权利要求2或5所述的在制备用于治疗卵巢早衰或治疗子宫疾病的药物中的用途，其特征在于，所述的血管介入法的步骤还包括: 1，术前准备:局部备皮、静脉碘过敏试验等同一般血管造影；术前快速补液、输血、抗休克治疗；向病人家属交代病情变化，以及介入治疗的必要性，方法，疗效及可能出现的不良反应，并在手术同意书上签字； 2，介入操作:采用1%_2%利多卡因溶液进行局麻，手术刀片破皮l_2mm，蚊式钳钝式分离皮下组织；常规穿刺一侧股动脉行Seldinger穿刺，具体穿刺点为腹股沟韧带下1.5-2.0cm处；缓慢回撤穿刺针，直至血液无阻力自针尾喷出动脉；选择5F或6F血管鞘，将导丝沿股动脉送入，若导丝远端走行正确，可退出穿刺针，沿导丝送入血管鞘，撤出导丝及扩张鞘管；以三通装置抽吸血管鞘并弃去抽吸物，用肝素盐水冲洗鞘管后备用；经鞘管送入相应的导管，导入干细胞悬液；然后退出导管，逐层缝合股动脉及切口，缝合时注意严密止血； 3，术后处理:检查各项生命体征，检查足背动脉搏动，穿刺点需用弹性胶布或绷带进行加压包扎，并加沙袋压迫，患者卧床6-24小时；补液等其他治疗同一般术后处理；尽量避免应用抗生素，以免影响干细胞起效。
9.根据权利要求5所述的在制备用于治疗子宫疾病的药物中的用途，其特征在于，所述的经阴道后穹窿穿刺注射法的步骤为: (1)患者排空膀胱，取膀胱截石位，外阴常规消毒，铺巾； (2)阴道检查了解子宫、附件情况，注意阴道后穹窿是否膨隆； (3)阴道窥器充分暴露宫颈及阴道后穹窿并消毒； (4)宫颈钳钳夹宫颈后唇，向前提拉，充分暴露阴道后穹窿，再次消毒；(5)用22号长针头接5~10ml注射器，在后穹窿中央距离阴道后壁与宫颈后唇交界处稍下方平行宫颈管刺入，当针穿过阴道壁，有落空感后即可缓慢推注，注射完毕后拔出针头，此时穿刺点如有活动性出血，可用棉球压迫片刻；血止后取出阴道窥器。
10.根据权利要求1~7之一或9的人干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物中的用途，其特征在于: 所述的人干细胞为人类脐带血干细胞； 所述的用途采用静 脉输入法方法实现。
【文档编号】A61P15/08GK103655615SQ201210332713
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年9月10日 优先权日:2012年9月10日
【发明者】唐明淇 申请人:唐明淇