白血病干细胞靶向配体及应用方法
【专利摘要】本发明涉及包含氨基酸基序LR(S/T)的C型凝集素样分子1(CLL1)特异性配体肽及其应用方法，例如，用于诊断白血病和白血病干细胞(LSCs)存在的成像检测，以及针对至少部分地由表达CLL1的LSCs介导的白血病的靶向治疗。
【专利说明】白血病干细胞靶向配体及应用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]根据35U.S.C.§ 119(e)，本申请要求于2011年6月9日递交的美国临时申请第61/506，058号的权益，为所有目地其通过引用全部并入本文。
[0003]发明领域
[0004]本发明涉及包含单独的或缀合至效应部分(effector moiety)的LR(S/T)氨基酸基序的肽和多肽，以及该类肽/多肽及其缀合物在治疗和预防白血病，尤其是急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia 或 acute myelogenous leukemia, AML)中的用途。
[0005]发明背景
[0006]癌症干细胞的概念与癌症的管理极为相关[Pan, et al., FutureOncol (2006)2:723-731;和 Misaghian, et al.，Leukemia(2009)23:25-42]。在血液和实体恶性肿瘤中均确认有癌症干细胞，这表明癌症干细胞的存在为大多数恶性肿瘤的共同特征。这些细胞能够自我更新并再生出更多癌细胞。为了有效地治疗和预防癌症，必须减少或消除癌症干细胞。然而，相比它们的子代癌细胞，癌症干细胞表现出较高水平的化学抗性[Terpstra, et al., Blood (1996) 88:1944-1950;和 Copland, etal.，Blood(2006) 107:4532-4539]。本发明部分基于以下证明，即使用经设计以高亲合性和特异性结合急性骨髓性白血病(AML)干细胞(LSC)的载药纳米颗粒的可行性。
[0007]按目前的方案，LSC的化学抗性可通过高剂量化疗以及随后的骨髓移植来克服。然而，高剂量化疗与严重的毒性和治疗相关的高死亡率有关。由于并存病，许多患者不符合该治疗的要求。对于诊断出的中值年龄为60-65岁的且通常与多种并存病有关的AML患者尤其如此。对于骨髓移植，由于被LSC污染通常不使用自体的骨髓或干细胞。同种异体的造血干细胞移植通常与严重的移植物抗宿主病有关，且一般不向老年患者提供。
[0008]在癌症干细胞类型中，AML LSC得到了最好的表征。LSC上许多细胞表面分子为已知的。例如，已知C型凝集素样分子I(CLLl)优先在大多数AML LSC上表达。尽管CLLl也表达于⑶38⑴骨髓祖细胞上，但其不表达于⑶34(+) /⑶38(-)造血干细胞上[Bakker, et al., Cancer Res(2004)64:8443-8450;和 van Rhenen etal.,Blood (2007) 110:2659-2666] ο 已经表明，CLLl 可为用于治疗 AML 的潜在靶标[Zhao, etal., Haematologica(2010)95:71-78]。
[0009]最近，研制出了一种生物相容性纳米胶束药物递送系统，其由一种称为树状聚合物(telodendrimer)的独特两亲性聚合物组成[Xiao, et al., Biomaterials (2009) 30:6006-6016; Luo, et al., Bioconjug Chem(2010) 21:1216-1224]。树状聚合物由胆酸、赖氨酸和聚乙二醇(PEG)共价缀合在一起组成，其赋予了自组装为具有能够隔离许多种类药物的疏水核心的水溶性球体的能力。胆酸是胆汁酸的主要成分，其具有表面两亲性结构:刚性类固醇骨架，其一个表面上具有4个亲水基，且另一个表面上具有疏水甲基。赖氨酸为天然氨基酸。PEG为生物相容性的且已用于改善治疗性药物的药代动力学。该纳米载体系统具有许多用于药物递送的诱人特征，如高药物载荷能力、窄的多分散度、规整结构、易于化学修饰、优异的物理和化学稳定性以及生物相容性。[0010]本发明部分地基于通过噬菌体展示文库法发现了一系列特异性结合至CLLl的肽。CLLl-Ll为这些配体之一，其被用于修饰纳米胶束的表面以形成我们称为“LSC靶向性纳米胶束”的靶向纳米平台。不同于主要位于血管外间隙且通过纳米治疗剂(nanotherapeutics)可及(主要通过提高的渗透性和保留效应)的实体瘤，LSC和白血病细胞主要位于血管和骨髓内，通过静脉内给予纳米治疗剂对其直接可及。本文提供的数据证明，展示有CLLl-Ll的靶向纳米胶束可结合至表达CLLl的细胞表面，并将所述纳米胶束及其效应物递送至靶细胞内。
[0011]发明概述
[0012]本发明提供了优先或特异性地结合至C型凝集素样分子I(CLLl)的肽，所述肽包含氨基酸基序LR(S/T)。所述肽可用于减少、抑制和/或预防表达CLLl的白血病干细胞的增殖或生长。
[0013]因而，在一个方面，本发明提供了包含氨基酸序列基序LR(S/T)的肽，其中所述肽不超过10个氨基酸长度且结合至C型凝集素样分子I (CLLl)。在一些实施方案中，所述肽不超过9个氨基酸长度。在一些实施方案中，所述肽不超过8个氨基酸长度。在一些实施方案中，所述肽不超过7个氨基酸长度。
[0014]对于所述肽的实施方案，在一些实施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1LRX4X5X6X7,其中:
[0015]X1为任何氨基酸；
[0016]X4*S*T;
[0017]X5 为 A、S 或 F ;`
[0018]X6 为 A、G 或 S;且
[0019]X7 为八、V、P 或 F。
[0020]在一些实施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1LRX4X5X6X7，其中:
[0021]X1为任何氨基酸；
[0022]X4 为 S 或 T ;
[0023]X5 为 A 或 S;
[0024]X6 为 A 或 G ;且
[0025]X7 为 A、V 或 P。
[0026]在一些实施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1LRX4AAV,其中:
[0027]X1为任何氨基酸；且
[0028]X4 为 S 或 T。
[0029]在一些实施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1LRX4AAX7，其中:
[0030]X1为任何氨基酸
[0031]X4 为 S 或 T ;且
[0032]X7SA或V。在一些实施方案中，X1 SP、D、L、T或A。
[0033]在一些实施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1LRSSGP,其中X1为任何氨基酸。在一些实施方案中，X1为V、S、P或T。
[0034]在一些实施方案中，X1为除半胱氨酸残基外的任何氨基酸。
[0035]在一些实施方案中，所述肽选自PLRSAAA、DLRSAAV、LLRTAAV、LLRSAAV, TLRTAAV,ALRSAAV、VLRSSGP、SLRSSGP、PLRSSGP、TLRSSGP 和 PTPPFSF。在一些实施方案中，所述肽为DLRSAAV。在一些实施方案中，所述肽为CDLRSAAVC。
[0036]所述肽可被取代(例如，在一个或两个氨基酸位点)或修饰。例如，在一些实施方案中，本发明提供了如上述和本文描述的氨基酸序列的多肽或肽，其中:
[0037]i) 一个或多个所述氨基酸残基为D-氨基酸；
[0038]ii)所述多肽或肽包含位于N-末端或C-末端或者N-末端和C-末端的保护基；
[0039]iii)所述多肽或肽为完全或部分逆反型(retro-1nverso)；
[0040]iv)所述多肽或肽包含2个或更多个重复，例如，3、4、5、6个或更多个重复；
[0041]V)所述多肽或肽为环化(circularized)的；
[0042]vi) 一个或多个氨基酸残基连接至类肽(peptoid)骨架；
[0043]vii) 一个或多个氨基酸残基为β氨基酸残基；或
[0044]viii)所述多肽或肽用烃装订物(staple)来稳定。
[0045]在一些实施方案中，所述肽结合至表达于白血病干细胞(LSCs)表面上的C型凝集素样分子I (CLLl)。优选地，所述肽不结合或不大量结合至正常血细胞或正常造血干细胞。
[0046]在一些实施方案中，所述肽在氨基和/或羧基末端还包含1-5个侧翼氨基酸残基。在一些实施方案中，所述肽还包含位于氨基末端的半胱氨酸残基和位于羧基端的半胱氨酸残基。
[0047]在一些实施方案中，所述CLLl特异性肽(或其重复)可嵌入或位于较长的多肽序列内，例如，融合序列或另外的非天然存在的多肽序列。在一些实施方案中，所述肽连接(例如，通过化学连接或融合)至一个或多个其他的多肽，例如，在氨基端和/或羧基端。
[0048]在相关的实施方案中，本发明提供了融合蛋白，其包含含有如上述和本文中描述的氨基酸序列的肽和第二多肽(其不同于所述肽)。在一些实施方案中，所述第二多肽为免疫球蛋白例如IgG的Fe部分。在一些实施方案中，所述第二多肽为人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4同种型的Fe区。在一些实施方案中，所述第二多肽为细胞毒素。
[0049]在一些实施方案中，所述肽连接至治疗性部分或可检测标记。例如，在一些实施方案中，所述可检测标记为成像标记、珠子、染料、荧光团、化学发光部分、量子点、纳米颗粒、磁性粒子(例如，氧化铁粒子)、金属粒子(例如，金粒子)或放射性同位素(例如，3h、32p、1251、1231、nC、13N' 150、18F、82Rb、锝-99m (Tc_99m)、铊-201)。在一些实施方案中，所述治疗性部分为免疫球蛋白的Fe部分、细胞毒素、纳米颗粒、脂质体或化疗剂。在不同的实施方案中，所述纳米颗粒可为纳米胶束。在一些实施方案中，所述抗癌剂或化疗剂被包封于脂质体或纳米颗粒内。在一些实施方案中，所述治疗性部分为包封于纳米颗粒或纳米载体内的化疗剂或抗肿瘤剂。
[0050]在另一方面，本发明提供了纳米颗粒或纳米载体，其连接至一个或多个如本文描述的CLLl特异性肽。在不同的实施方案中，所述CLLl特异性肽共价结合至所述纳米颗粒或纳米载体。所述纳米颗粒或纳米载体还可包封或连接至效应部分(例如，治疗性部分或可检测标记)。在一些实施方案中，所述纳米颗粒或纳米载体包封有化疗剂或抗肿瘤剂。在不同的实施方案中，所述纳米颗粒或纳米载体包含由两亲性树状聚合物例如聚乙二醇-嵌段-树状寡聚胆酸自组装形成的纳米颗粒。
[0051]在相关的方面，本发明提供了包含如本文描述的CLLl特异性多肽或肽配体和药学上可接受的载体的组合物。在一些实施方案中，所述CLLl特异性肽配制为纳米颗粒。
[0052]在相关的方面，本发明提供了检测表达C型凝集素样分子I(CLLl)的白血病干细胞(LSC)存在的方法。在一些实施方案中，所述方法包括使LSC与连接至可检测标记的、如上述和本文中描述的肽接触，和检测所述肽与所述LSC的接触。在不同的实施方案中，所述可检测标记可为珠子、荧光团、化学发光部分、量子点、纳米颗粒、磁性粒子、金属粒子或放射性同位素。在一些实施方案中，所述LSC在体外。在一些实施方案中,所述LSC在体内。在一些实施方案中，所述LSC在血细胞群中。
[0053]在一些实施方案中，可检测到所述CLLl特异性肽的结合信号，表明白血病和/或白血病干细胞存在。在一些实施方案中，不能检测到所述CLLl-特异性肽的结合信号，表明白血病和/或白血病干细胞不存在。在一些实施方案中，所述CLLl特异性肽的结合信号大于一个阈值水平，表明白血病和/或白血病干细胞存在。在一些实施方案中，所述CLLl特异性肽的结合信号小于一个阈值水平，表明白血病和/或白血病干细胞不存在。在一些实施方案中，所述CLLl特异性肽的结合信号大于所述CLLl特异性肽与正常对照组织(例如，来自已知没有患白血病的对象的血液)的结合信号，表明白血病和/或白血病干细胞存在。在一些实施方案中，所述CLLl特异性肽的结合信号约等于或小于所述CLLl特异性肽与正常对照组织(例如，来自已知没有患白血病的对象的血液)的结合信号，表明白血病和/或白血病干细胞不存在。
[0054]在又一个方面，本发明提供了抑制、减少或防止表达C型凝集素样分子I (CLLl)的白血病干细胞(LSC)生长或增殖的方法。在一些实施方案中，所述方法包括使所述LSC与连接至治疗性部分的、如上述和 本文中描述的肽接触，其中所述肽结合至LSC，并且所述治疗性部分可抑制或防止所述LSC生长或增殖。在一些实施方案中，所述LSC在体外。在一些实施方案中，所述LSC在体内。
[0055]在又一个方面，本发明提供了抑制、减少或防止有需要的对象的表达C型凝集素样分子I(CLLl)的白血病干细胞(LSC)生长或增殖的方法。在一些实施方案中，所述方法包括使所述LSC与连接至治疗性部分的、如上述和本文中描述的肽接触，其中所述肽结合至LSC，并且所述治疗性部分的肽可抑制或防止所述LSC生长或增殖。在一些实施方案中，所述对象为哺乳动物，例如，人、非人的灵长类或犬。在一些实施方案中，将连接至所述治疗性部分的所述肽对所述对象进行静脉注射或骨髓内给药。在一些实施方案中，所述对象患有、怀疑患有急性骨髓性白血病(AML)或具有发展该疾病的风险。
[0056]在一些实施方案中，所述治疗性部分为免疫球蛋白的Fe部分、细胞毒素、纳米颗粒、脂质体或化疗剂。
[0057]
[0058]术语“C型凝集素样分子1”、“CLL1”、“CLEC12A”是指C型凝集素/C型凝集素样结构域(CTL/CTLD)超家族的一个成员。该家族的成员共享共同的蛋白质折叠子且具有不同的功能，如细胞粘附、细胞-细胞信号发送、糖蛋白转换和在炎症和免疫反应中的作用。功能上，CLLl为粒细胞和单核细胞功能的负调节物。结构上，CCLl是指核酸和多肽多态变体、等位基因、突变体和种间同系物，其:(I)具有的氨基酸序列与由CCLl核酸编码的氨基酸序列有大于约90%的氨基酸序列同一性，例如，91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或更大的氨基酸序列同一性，优选在至少约25、50、100、200、400个或更多个氨基酸的区域上或在全长上(参见，例如，GenBank登录号:NM_138337.5 — NP_612210.4(同种型I)；ΝΜ_201623.3 —ΝΡ_963917.2(同种型 2) ；NM_001207010.1 — ΝΡ_001193939.I (同种型 3)；(2)结合至抗体，例如，多克隆抗体，其针对包含CLLl多肽(例如，本文描述的CLLl多肽)的氨基酸序列或由CLLl核酸(例如，本文描述的CLLl多核苷酸)编码的氨基酸序列及其保守修饰变体的免疫原产生；(3)在严格杂交条件下，可与对应于编码CLLl蛋白的核酸序列及其保守修饰变体的反义链特异性杂交；(4)具有的核酸序列与CLLl核酸(例如，如本文描述的CLLl多核苷酸和如本文描述的编码CLLl多肽的CLLl多核苷酸)有大于约90%，优选大于约91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的核苷酸序列同一性，优选在至少约25、50、100、200、500、1000、2000个或更多个核苷酸的区域上或在全长上。基于CLLl同系物的知识，本领域技术人员能容易地确定较能容纳取代的残基位置。例如，在种间保守的氨基酸残基对取代或缺失容纳较少。类似地，在种间不保守的氨基酸残基在保留CLLl蛋白功能的同时对取代或缺失容忍较多。
[0059]“毒性部分”为使嵌合分子对目标细胞具有毒性的嵌合分子部分。
[0060]术语“效应部分”或“治疗性部分”是指预期对靶向部分(例如，本文描述的CLLl肽配体)所靶向的细胞具有效果或用于鉴定免疫缀合物的存在的嵌合分子部分。 [0061]术语“嵌合分子”包括关于效应分子与本发明的结合CLLl肽的共价连接。
[0062]术语“细胞毒素”通常包括关于相思豆毒素、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素(PE)、白喉毒素(DT)、肉毒杆菌毒素或其修饰的毒素。例如，PE和DT为高毒化合物,其通常通过肝中毒导致死亡。然而，PE和DT可修饰为用作免疫毒素的形式，即通过移除该毒素的天然靶向组分(例如，PE的Ia结构域或DT的B链)并用不同的靶向部分如本文描述的肽将其取代。
[0063]术语“接触”包括关于放置为直接物理结合(association)。
[0064]如本文所用，“多肽”、“肽”和“蛋白质”可互换使用，且包括关于氨基酸残基的聚合物。如本文所用，术语“肽”以其最广含义使用，指常规的肽(即含有L-氨基酸或D-氨基酸的短多肽)，以及保留期望功能活性的肽等同物、肽类似物和模拟肽。肽等同物可以不同于常规的肽，其通过以相关的有机酸(如PABA)、氨基酸等取代一个或多个氨基酸，或者取代或修饰侧链或功能基。所述术语适用于这样的氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基为对应的天然存在的氨基酸和天然存在的氨基酸聚合物的人工化学类似物。所述术语也适用于包含保守氨基酸取代以便该蛋白保留其功能的聚合物。
[0065]除非另有说明，术语“肽等同物”、“肽类似物”、“肽模拟物”和“模拟肽”可互换使用。肽类似物在医药行业通常用作非肽药物，其具有类似于模板肽的性能。(Fauchere, J.(1986) Adv.Drug Res.15: 29 ; Veber and Freidinger (1985) TINSp.392;and Evans et al.(1987) J.Med.Chem30:1229)。肽类似物通常借助计算机化的分子模拟来研制。结构上类似于治疗上有用的肽的肽模拟物可用于产生等效的治疗性或预防性效果。通常，模拟肽结构上类似于模本(paradigm)多肽(例如，具有生物学或药理活性的多肽)，如天然存在的受体结合多肽，但具有被选自下述的连接任选取代的一个或多个肽连接:一CH2NH—、— CH2S-, — CH2-CH2—、一CH=CH — (顺式和反式)、一COCH2一、一CH(OH)CH2一和一CH2SO—，所述取代通过本领域已知的且进一步描述于以下参考文献中的方法进行:Spatola, A.F."Chemistry and Biochemistryof Amino Acids, Peptides, and Proteins,^B.Weinstein, eds., Marcel Dekker,NewYork, p.267 (1983) ; Spatola, A.F., Vega Data (Mar chi 98 3), Vol.1, Is sue 3，"PeptideBackbone Modifications"(综述)；Morley, J.S.，Trends Pharm Sci (1980)pp.463-468 (综述)；Hudson，D.et al., Int J Pept Prot Res (1979) 14:177-185 (—CH2NH-, CH2CH2-);Spatola, A.F.et al., Life Sci (1986) 38: 1243-1249 (-CH2S) ;Hann, M.M., JChem Soc Perkin Trans I (1982) 307-314 (—CH—CH—,顺式和反式)；Almquist, R.G.et al., J Med Chem (1980) 23: 1392-1398 (— COCH2-—) ; Jennings-ffhite, C.et al., Tetrahedron Lett(1982) 23:2533(—COCH2—) ;Szelke, M.et al., EuropeanApp In.EP45665 (1982) CA: 97: 39405 (1982) (一 CH (OH) CH2-) ;Holladay, M.ff.etal., Tetrahedron Lett (1983) 24: 4401-4404 (—C(OH)CH2—);和 Hruby, V.J.，LifeSci (1982) 31:189-199 (-CH2-S-)。所述肽骨架的部分或全部也可被构象受限的环烷基或芳基取代基所取代，以限制本文指定的功能性氨基酸侧链的移动性，如以下参考文献中所述:1.Bondinell et al.Design of a potent and orally active nonpeptide plateletfibrinogen receptor(GPIIb/IIIa)antagonist.Bioorg Med Chem2:897(1994).2.Keenanet al.Discovery of potent nonpeptide vitronectin receptor(alpha v beta3)antagonists.J Med Chem40:2289(1997).3.Samanen et al.Potent, selective, orallyactive3-oxo-l, 4-benzodiazepine GPIIb/IIIa integrin antagonists.J MedChem39:4867(1996)。
[0066]本发明所述肽可通过已知方法制备，如本领域熟知的重组和合成方法。重组技术通常描述于:Sambrook, et al., Molecular Cloning:ALaboratory Manual, (3rd ed.)Vols.1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, (2001) ? 肽合成技术为大家所熟知，且包括以下文献中所描述的那些技术:Merrifield, J.Amer.Chem.Soc.85:2149-2456(1963)，Atherton, et al., Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, IRLPress (1989),和 Merrifield, Science232:341-347 (1986)。也参见 Lam, et al., Nature (1991)354:82-84;Lam, et al., Chem Rev(1997)97:411-448;和 Zhang, et al., UrolOncol(2011)PMID:20888272。
[0067]术语“残基”或“氨基酸残基”或“氨基酸”包括关于整合至蛋白质、多肽或肽(通称“肽”)中的氨基酸。所述氨基酸可为天然存在的氨基酸，且除非另有限制，可包括能够以与天然存在的氨基酸类似的方式发挥作用的已知的天然氨基酸类似物。
[0068]本文所指氨基酸和类似物以缩写命名描述于如下表A中:
[0069]表A:氨基酸命名
【权利要求】
1.包含氨基酸序列基序LR(S/T)的肽，其中所述肽不超过10个氨基酸长度且结合至C型凝集素样分子I (CLLl)。
2.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列X1LRX4X5X6X7，其中: X1为任何氨基酸； X4为S或T ;
X5 为 A、S 或 F ; X6为A、G或S ;且 X7 为 A、V、P 或 F。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列X1LRX4X5X6X7,其中: X1为任何氨基酸； X4为S或T ; X5为A或S ; X6为A或G ;且 X7 为 A、V 或 P。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列X1LRX4AAX7，其中: X1为任何氨基酸； X4为S或T ;且 X7为A或V。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列X1LRX4AAV,其中: X1为任何氨基酸；且 父4为S或T。
6.根据权利要求4-5中任一项所述的肽，其中X1为P、D、L、T或A。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的肽，其中所述肽包含氨基酸序列X1LRSSGP,其中X1为任何氨基酸。
8.根据权利要求7所述的肽，其中X1为V、S、P或T。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的肽，其中所述肽选自PLRSAAA、DLRSAAV、LLRTAAV、LLRSAAV、TLRTAAV、ALRSAAV、VLRSSGP、SLRSSGP、PLRSSGP、TLRSSGP 和 PTPPFSF。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的肽，其中: i)一个或多个氨基酸残基为D-氨基酸； ii)所述肽包含位于N-末端或C-末端或N-末端和C-末端的保护基； iii)所述肽为完全或部分逆反型； iv)所述肽包含2个或更多个重复；或 V)所述肽为环化的。
11.根据权利要求ι-?ο中任一项所述的肽，其中所述肽结合至表达于白血病干细胞表面上的C型凝集素样分子I (CLLl)。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的肽，其中所述肽不结合至正常血细胞或正常造血干细胞。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的肽，其中所述肽还包含位于氨基端和/或羧基端的1-5个侧翼氨基酸残基。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的肽，其中所述肽还包含位于氨基端的半胱氨酸残基和位于羧基端的半胱氨酸残基。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的肽，其中所述肽连接至治疗性部分或可检测标记。
16.根据权利要求15所述的肽，其中所述可检测标记为珠子、荧光团、化学发光部分、纳米颗粒、磁性粒子、金属粒子或放射性同位素。
17.根据权利要求15所述的肽，其中所述治疗性部分为免疫球蛋白的Fe部分、细胞毒素、纳米颗粒、脂质体或化疗剂。
18.根据权利要求15所述的肽，其中所述治疗性部分为包封于纳米颗粒或脂质体内的化疗剂。
19.包含权利要求1-14中任一项所述肽的融合蛋白。
20.根据权利要求19所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含融合至免疫球蛋白Fe部分的权利要求1-14中任一项所述的肽。
21.—种纳米载体或纳米颗粒,其连接至一个或多个权利要求1-14中任一项所述的肽。
22.根据权利要求21所述的纳米载体或纳米颗粒，其中所述纳米颗粒或脂质体包封有化疗剂。
23.根据权利要求21-22中任一项所述的纳米载体或纳米颗粒，其中所述纳米载体或纳米颗粒包括胆酸、赖氨酸和聚乙二醇(PEG)。
24.检测表达C型凝集素样分子I(CLLl)的白血病干细胞(LSC)存在的方法，包括使所述LSC与连接至可检测标记的权利要求1-14中任一项所述的肽接触，以及检测所述肽与所述LSC的结合。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述可检测标记选自珠子、荧光团、化学发光部分、纳米颗粒、磁性粒子、金属粒子或放射性同位素。
26.根据权利要求24-25中任一项所述的方法，其中所述LSC在体外。
27.根据权利要求24-25中任一项所述的方法，其中所述LSC在体内。
28.根据权利要求24-27中任一项所述的方法，其中所述LSC在血细胞群中。
29.抑制、减少或防止有需要的对象的表达C型凝集素样分子I(CLLl)的白血病干细胞(LSC)生长或增殖的方法，包括使所述LSC与以下物质接触:连接至治疗性部分的权利要求1-14中任一项所述的肽、权利要求19-20中任一项所述的融合蛋白或权利要求21-23中任一项所述的纳米颗粒或纳米载体，其中所述肽结合至LSC且所述治疗性部分抑制或阻止所述LSC的生长或增殖。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述治疗性部分为免疫球蛋白的Fe部分、细胞毒素、纳米颗粒、脂质体或化疗剂。
31.根据权利要求29-30中任一项所述的方法，其中所述治疗性部分为包封于纳米颗粒内的化疗剂。
32.根据权利要求29-31中任一项所述的方法，其中所述对象为人。
33.根据权利要求29-32中任一项所述的方法，其中将连接至所述治疗性部分的所述肽对所述对象进行静脉内或骨髓内给药`。
【文档编号】A61K38/08GK103764668SQ201280040039
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2012年7月9日 优先权日:2011年7月9日
【发明者】潘崇贤, 张洪勇 申请人:加利福尼亚大学董事会