一种抗hbv的药物组合物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种抗HBV的药物组合物及其应用，该组合物由活性成分和辅料制备而成，其特征在于：所述的活性成分包括雷公藤乙素或/和其衍生物。本发明具有较强的抗HBV的生物活性，并且不会产生耐药性，为治疗乙肝提供了新的候选药物。
【专利说明】一种抗HBV的药物组合物及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，具体而言，涉及一种抗病毒药物，尤其涉及一种抗HBV的药物组合物及其应用。
【背景技术】
[0002]乙型病毒性肝炎病毒(HBV)是引起乙型病毒性肝炎罪魁祸首。慢性乙型病毒性肝炎治疗的目的是在肝脏发生明显损伤之前抑制HBV的复制。治疗的初期目标是抑制病毒复制，阻止肝脏损伤；治疗的远期目标是清除病毒，阻止疾病向肝硬化以及肝癌的发展，延长生存期。抗病毒治疗还用于防止肝移植后、化疗或免疫抑制治疗时乙型病毒性肝炎病毒的再复制。因为目前所有的抗病毒药物不能有效的清除HBV DNA，所以实现长期清除HBV的目标几乎不可能实现。慢性乙型病毒性肝炎的治疗有两种方式:免疫调节和抑制病毒。肝移植可用于对药物治疗无效的终末期肝病患者。
目前市场上治疗乙型病毒性肝炎的方法主要有注射干扰素类药物、服用阿德福韦酯，恩替卡韦等核苷类似物类药物以及注射乙型病毒性肝炎疫苗三种方式。但上述三种方式均存在比较大的缺点，长期服用干扰素会造成患者出现流感感样症状、并可能使患者出现消化道症状、脱发等不良反应。严重者还能抑制骨髓导致白细胞、血小板减少，这样就会导致患者的凝血功能下降。而服用阿德福韦酯，恩替卡韦等核苷类似物类则会导致乳酸性酸中毒和重度的脂肪性肝肿大，且很多患者服用半年左右就会耐药，而且还不能随时停药，否则可能会导致病情迅速恶化，甚至转化为肝硬化、肝癌。虽然乙型病毒性肝炎疫苗能够抑制HBV的复制，其安全性和耐受性都很好，但是还不足以打破乙型病毒性肝炎的免疫耐受状态进而清除HBV，仍需辅 以抗乙型病毒性肝炎药物的治疗。
[0003]雷公藤(Tripterygium willfordii Hook, f.)系卫矛科雷公藤属植物,其药用部位是该植物的根及根茎。雷公藤药材中最重要的有效且毒性大的成分是雷公藤甲素，而雷公藤乙素(Tripdiolide，又名雷公藤羟内酯、雷公藤内酯二醇)是有效却毒性低的二萜内酯成分。通过检索国内外文献，尚没有发现雷公藤乙素具有抗乙型病毒性肝炎病毒活性的文献报道。
【发明内容】
[0004]为了克服现有乙型病毒性肝炎治疗药物毒副作用大，治疗过程中易出现耐受性等不足，本发明通过对天然药物进行研究，提供一种植物源性的抗HBV的药物。该治疗药物以雷公藤乙素为活性成分，其用于乙型病毒性肝炎患者治疗时，疗效确切，毒副作用小，且雷公藤乙素的安全性和耐受性均较好，具有十分广泛的医疗应用前景。
本发明的目的是这样实现的:
一种抗HBV的药物组合物，由活性成分和辅料制备而成，所述的活性成分包括雷公藤乙素或/和其衍生物。
[0005]优选地，如上所述抗HBV的药物组合物，其中所述的活性成分由雷公藤乙素组成。[0006]进一步优选地，如上所述抗HBV的药物组合物，其中所述的药物组合物为口服制剂，所述的口服制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂。
[0007]本发明通过体外试验研究证明，雷公藤乙素在体外抗乙型病毒性肝炎病毒(HBV)的效果很显著。因此，本发明还提供一种制药用途，即:雷公藤乙素或/和其衍生物在制备抗HBV的药物中的应用。优选的方案为:雷公藤乙素作为唯一活性成分在制备抗HBV的药物中的应用。
[0008]与现有技术相比，本发明涉及的含有雷公藤乙素的药物组合物具有如下突出的优势:
(1)有较强的抗乙型病毒性肝炎病毒的生物活性，并且不会产生耐药性；
(2)为治疗乙肝提供了新的候选药物，可以单独作为防治乙肝的药物使用，具有非常重要的临床意义。
【具体实施方式】
[0009]HBV是一种引起急性和慢性坏死炎症性肝病及肝细胞癌的DNA病毒。HBV具有特异嗜肝性、非细胞损伤与裂解、易发展为慢性等特征。H印G2.2.15细胞是能够表达HBV抗原和分泌完整HBV颗粒的肝胚瘤细胞系，也是目前用来研究HBV复制及筛选抗乙肝药物最为合适的细胞模型系统。本发明采用H印G 2.2.15细胞的培养，MTT比色法检测药物对细胞的毒性，ELISA检测上清HBs Ag及HBe Ag，从而证实了雷公藤乙素具有抗HBV的药效。具体试验过程如下:
UHepG2.2.15细胞培养
细胞培养液为MEN培养液，每IOOmL含胎牛血清10mL，3% (W/V)的谷氨酰胺溶液lmL，G418 380 μ g/mL，庆大霉素50U/mL ;细胞消化液为0.25% (W/V)的胰酶溶液，用Hanks液配制。
细胞培养方法:将H印G 2.2.15细胞解冻后，接种入25cm2培养瓶，浓度为I X IO5个/mL，待细胞长满后，加0.25% (W/V)的胰酶溶液37°C消化3-5min。加培养液吹打，I: 3传代，每天收集上清，连续2周，冷藏待检。
2、药物的细胞毒性试验
用MTT法测定药物的细胞毒性，96孔板每孔加浓度为3 X IO5个细胞/mL的H印G 2.2.15细胞100 μ L，37°C 5% CO2培养箱中培养。一天后，换用含药培养液，每个浓度4孔，将雷公藤乙素用DMEM培养液稀释成(200 μ g/mL, 100 μ g/mL, 50 μ g/mL, 25 μ g/mL),每3天换同浓度含药培养液，370C 5% CO2培养箱中继续培养8天。向每孔细胞中加入5 μ g/mL MTT 10 μ L，每孔中存留有上清100μ L，37°C 5% CO2培养箱中培养4h后，酶标仪570/630nm波长测定OD值。细胞抑制百分率=[(细胞对照OD值-药物作用组OD值)/细胞对照OD值]X 100%。按Reed-Muench法计算最大无毒浓度(TCO)。每个浓度雷公藤乙素进行两批实验,每批进行3组平行实验。表1显示雷公藤乙素对IfepG2.2.15细胞有低毒作用，它的最大无毒剂量是100 μ g/mL。
表1雷公藤乙素对HepG2.2.15细胞的毒性作用
【权利要求】
1.一种抗HBV的药物组合物，其特征在于:由活性成分和辅料制备而成，所述的活性成分包括雷公藤乙素或/和其衍生物。
2.根据权利要求1所述抗HBV的药物组合物，其特征在于:所述的活性成分由雷公藤乙素组成。
3.根据权利要求1或2所述抗HBV的药物组合物，其特征在于:所述的药物组合物为口服制剂，所述的口服制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂。
4.雷公藤乙素或/和其衍生物在制备抗HBV的药物中的应用。
5.雷公藤乙素作为唯一活性成分在制备抗HBV的药物中的应用。
【文档编号】A61P31/20GK103989688SQ201410199848
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2014年5月13日 优先权日:2014年5月13日
【发明者】于法周 申请人:于法周