本发明属于生物医药领域，具体涉及一种人脐带间充质干细胞源外泌体的美容制剂。
背景技术：
：2013年，美国、德国3位科学家凭借他们所发现的细胞囊泡运输的调节机制，荣获诺贝尔生理学或医学奖。外泌体(exosomes)作为人体内一类重要囊泡，也开始受到越来越多的关注。科学家们已发现，外泌体会参与到免疫应答、凋亡、血管生成、炎症反应、凝结等重要的生物过程中，细胞会通过分泌外泌体，将一些信号分子分泌到较远的组织或细胞中，以起到调控作用。2016年，中国江苏大学医学院许文荣等人研究发现，人脐带间充质干细胞源外泌体包含的蛋白质，能够与皮肤再生过程中的信号分子相互协作。(文献：zhang,b.,etal.(2016)."hucmscexosome-delivered14-3-3zetaorchestratesself-controlofthewntresponseviamodulationofyapduringcutaneousregeneration."stemcells.)首先，通过评估人脐带间充质干细胞源外泌体治疗大鼠深ⅱ度烧伤的作用，发现人脐带间充质干细胞源外泌体在皮肤的再生重塑阶段促进wnt/β-catenin信号通路的自我调节。其次，人脐带间充质干细胞源外泌体的蛋白质组学分析表明，有关蛋白可以通过外泌体运输。综合研究结果表明，人脐带间充质干细胞源外泌体不但可作为wnt/β-catenin信号的“加速器”以促进受损皮肤组织的再生修复，而且可通过调节yap控制皮肤再生作为该信号的“刹车”。因此，在修复老化皮肤/受损皮肤方面，具有广阔的市场前景，但目前该领域的产品抗衰老效果并不理想，寻找一种抗衰老好的产品是目前该领域刻不容缓的事情。技术实现要素：为此，本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术的空白区，从而提出一种抗衰老效果好的人脐带间充质干细胞源外泌体的美容制剂。为解决上述技术问题，本发明公开了一种人脐带间充质干细胞源外泌体的美容制剂，所述制剂包括如下组分：人间充质干细胞源外泌体冻干粉、甘油、芦荟汁；三者的重量比为1:1:10-20。优选的，所述制剂的制备方法为：按比例称取所述人间充质干细胞源外泌体冻干粉、甘油、芦荟汁，混合搅拌至透明，然后依次经0.45μm、0.22μm的微孔滤膜过滤，即得到所述美容制剂。优选的，所述外泌体的外膜为磷脂双层结构，所述外泌体内部含有micro-rna、所述外泌体源细胞的mrna、dna和核酸中的至少一种。优选的，所述的外泌体的获取方法如下：a)对人间充质干细胞进行培养，培养阶段在细胞培养基中添加干扰素、epo和pdgf-bb；b)对培养后的干细胞进行预处理；c)在预处理后的培养基的上清液中提取所述人脐带间充质干细胞源外泌体。优选的，所述芦荟汁中，含有芦荟多糖，含量为700-800mg/l。优选的，所述外泌体为msc分化而来。优选的，所述间充质干细胞为人脐带间充质干细胞。优选的，所述所述预处理的具体步骤为：1)将人传代msc进行无血清悬浮培养，并调整细胞浓度为1.0×106/ml；2)按照106/150mm大培养皿接种，培养至细胞融合度至70-80％，培养时间为2-3天；3)吸除培养皿中的液体，并用alpha-mem液体培养基对培养皿进行洗涤；4)在150mm培养皿中再次加入20ml的alpha-mem；5)依次加入重组人干扰素、pdgf-bb和epo；7)在37℃，5％的co2条件下培养96小时，收集得到msc培养液。优选的，所述msc培养液中干扰素的浓度为10u/ml～600u/ml、pdgf-bb的浓度为2ng/ml～60ng/ml，epo的浓度为0.1iu/ml～5iu/ml。优选的，所述步骤2)的预处理的具体为：1)取所述msc培养液的上清液，进行离心处理，去除细胞碎片；2)然后将上清液滤膜过滤处理，去除凋亡小体，得到预处理后的上清液。优选的，所述步骤3)具体为：1)取容积为5体积份的离心管，加入1体积份的外泌体分离试剂；2)加入4体积份的经过预处理后的上清液，充分混匀；3)静置处理后，再进行两次离心处理，得到所述外泌体。本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：本发明采用一种新型的人间充质干细胞源外泌体作为活性成分，可以制备得到一种有明显效果的美容制剂，能够在解决人的皮肤老化问题；制作方法简便，适合即用即配，很好地利用外泌体的生物活性成分；制备成本较低，适合多次使用，可以让使用者长期保持美容效果；所用物料均为经过国家药监部门批准的药用辅料，可以降低副作用，保证使用者的皮肤安全；具有极大的市场前景和应用价值。具体实施方式实施例1本实施例公开了一种人脐带间充质干细胞源外泌体的美容制剂，所述制剂包括如下组分：人间充质干细胞源外泌体冻干粉、甘油、芦荟汁；三者的重量比为1:1:15；所述芦荟汁中，含有芦荟多糖，含量为750mg/l。所述制剂的制备方法为：按比例称取所述人间充质干细胞源外泌体冻干粉、甘油、芦荟汁，混合搅拌至透明，然后依次经0.45μm、0.22μm的微孔滤膜过滤，即得到所述美容制剂。实施例2本实施例公开了一种人脐带间充质干细胞源外泌体的美容制剂，所述制剂包括如下组分：人间充质干细胞源外泌体冻干粉、甘油、芦荟汁；三者的重量比为1:1:10；所述芦荟汁中，含有芦荟多糖，含量为800mg/l。所述制剂的制备方法为：按比例称取所述人间充质干细胞源外泌体冻干粉、甘油、芦荟汁，混合搅拌至透明，然后依次经0.45μm、0.22μm的微孔滤膜过滤，即得到所述美容制剂。实施例3本实施例公开了一种人脐带间充质干细胞源外泌体的美容制剂，所述制剂包括如下组分：人间充质干细胞源外泌体冻干粉、甘油、芦荟汁；三者的重量比为1:1:20；所述芦荟汁中，含有芦荟多糖，含量为700mg/l。所述制剂的制备方法为：按比例称取所述人间充质干细胞源外泌体冻干粉、甘油、芦荟汁，混合搅拌至透明，然后依次经0.45μm、0.22μm的微孔滤膜过滤，即得到所述美容制剂。实施例4实施例1中所提及的外泌体的获取方法如下：a.人msc的培养及预处理1.材料及试剂1)人脐带、胎盘、骨髓、脂肪或其它来源的msc，传代次数在6代以内均可。2)人msc无血清培养基3)alpha-mem4)重组人干扰素5)重组人epo6)重组人pdgf-bb7)培养皿(直径150mm)8)其它耗材2.细胞培养1)将人传代msc消化后计数，使用msc无血清完全培养基悬浮，调整细胞浓度为1.0×106/ml。2)按照106/150mm大培养皿接种，培养至细胞融合度至70-80％。一般需要2-3天。3)吸除培养皿中的液体，并用alpha-mem液体培养基对培养皿进行洗涤。4)加入alpha-mem20ml/150mm培养皿。5)首先加入重组人干扰素、pdgf-bb，在37℃，5％的co2条件下培养24小时；然后，再加入epo，在37℃，5％的co2条件下培养72小时。重组人干扰素(终浓度为10u/ml～600u/ml)、pdgf-bb(2ng/ml～60ng/ml)及epo(0.1iu/ml～5iu/ml)。7)37℃，5％co2条件下培养96小时。8)收集上清进行以下处理。如不能及时处理，将上清置于-80℃保存。b.人msc培养上清的预处理1.材料与试剂1)离心管等耗材。2)孔径为1μm，0.45μm及0.22μm的滤器。2.操作步骤1)收集细胞培养上清，室温或4℃条件下离心2000g，10分钟，去除细胞碎片。2)将培养上清或体液分别经过直径为1μm，0.45μm及0.22μm滤膜过滤，以去除其中可能存在的凋亡小体。c.外泌体的收获1)取50ml离心管，加入外泌体分离试剂10ml。或取250ml离心管，加入外泌体试剂50ml。2)加入经过处理的细胞培养上清40ml，充分混匀。或加入培养上清200ml。3)置于4℃过夜，或至少6小时。4)离心，2000g，30分钟。5)移除液体，再次离心，2000g，5分钟。6)用pipette小心吸除残留液体。7)加入pbs或生理盐水500μl至1ml。或加入pbs或生理盐水2.5ml至5ml。8)测定蛋白质浓度，或进行流式细胞学等仪器分析。d.所得外泌体的冻干粉制备取所得外泌体，加入甘露醇(1％～15％)，混匀，过滤(0.22μm)，分装，再放置于超低温冰箱(-80℃)10h。然后，在10pa的真空度下进行冻干(-50℃，24h)，得到人间充质干细胞源外泌体冻干粉。实验例一、稳定性试验所得美容制剂放置于-20℃条件下保存。在六个月以后观察，无明显变化。二、有效性测试在美容院挑选十位女士，分为两组，其中一组试用所得美容制剂，另一组使用常规美容品。在完成一个疗程(30天)以后，分析评价结果列于表1、表2。表1外泌体美容制剂试用组的用后感觉及感观评价序号皮肤类型及状况性别年龄段无效一般良好显效01油性细纹女30～35√02中性皱女40～45√03中性斑女25～30√04干性细纹女25～30√05干性皱斑女40～45√表2常规美容制剂对照组的用后感觉及感观评价序号皮肤类型及状况性别年龄段无效一般良好显效01油性细纹女30～35√02中性皱女40～45√03中性斑女25～30√04干性细纹女25～30√05干性皱斑女40～45√综合表1、表2的结果可以发现，人脐带间充质干细胞源外泌体的美容制剂，对于各种类型的皮肤状况均有良好或显效的效果。而相比于常规美容制剂，人脐带间充质干细胞源外泌体的美容制剂对于中性皱和干性皱斑的皮肤问题有更好的效果，可以舒缓女士们面对的皱纹问题。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。当前第1页12