和组织标本，并测量腹主动脉环舒张功能。
[0019] 1.5血脂检测 取材前一晚禁食12h，取血后3500r离心15min，分离血清，采用日立7080全自动生化 分析仪检测血脂四项：TC、TG、HDL及LDL。
[0020] 1.6离体血管环的制备与舒张功能测定 采用棒击法对实验兔实施安乐死后，迅速取出腹主动脉，部分置入4%甲醛溶液中，留 做免疫组化，部分置于盛有4°C混合气体（95%02+5%C02)饱和PSS液的培养皿中。在解剖显 微镜下仔细去除血管周围脂肪和结缔组织，避免损伤动脉内皮细胞，用新剃须刀片切成长 约3mm的血管环。向浴槽内加入5ml PSS溶液，将血管环套在浴槽内两个L型的金属针上， 一端通过张力换能器连接PowerLab系统，另一端手动调整血管静息张力为20mN。浴槽恒 温37°C，持续通入混合气体平衡60min，期间每15min更换PSS液一次。然后用K-PSS溶 液刺激血管环收缩至最大值，再用PSS液洗脱3~4次，至血管环张力稳定，如此反复刺激两 次。末次洗脱后向浴槽内加入终浓度为l(T 6mol/L的PE，待血管环张力达峰后加入终浓度 为l(T6mol/L的Ach。舒张功能以Ach的舒张幅度占 PE预收缩幅度的百分比表示。
[0021] 1.7管壁微血管密度测量 CD34蛋白为血管内皮细胞的特异性标记物，定位于胞浆或胞膜。组织标本经固定、脱 水、包埋等处理后制成4 μ m厚切片。采用免疫组织化学SP法，切片脱蜡至水，微波抗原修 复，3%H202孵育、血清封闭后，依次加入一抗、二抗，DAB显色，复染、脱水、封片。光镜下观察， 凡呈现棕黄色单个内皮细胞或内皮细胞群者，只要与邻近其它组织有明显界线，就视为一 个微血管。参照有关文献。在200倍视野下分别计数管壁微血管数量Q，并计算管壁的横截 面积A (mm2)，取两者的比值作为该切片的管壁微血管密度值，计算公式为Qa=Q/A。
[0022] 1.8统计学方法 采用SPSS18. 0统计软件进行数据分析，计量数据以均数土标准差(f 士 s )表示。组 间比较用单因素方差分析（One-Way AN0VA)，方差齐时采用最小显著法（LSD)，方差不齐用 Dunnett ' s T3 法。
[0023] 2 结果 2.1各组不同时间点血脂水平比较 图1示，与正常组比较，模型组TC和LDL-C水平在造模3天时即开始明显升高(产 < 0. 05或/7 < 0. 01)，TG和HDL-C水平在2W时开始明显升高0° < 0. 05或/7 < 0. 01)。 与模型组比较，阿托伐他汀组、TXL高剂量组和TXL中剂量组在灌胃给药2W后TC和LDL-C 水平明显降低Gd < 0.05或/7 < 0.01)，TG水平从4W时也开始明显降低Gd < 0.05或/7 < 0. 01)，而此三组相同时间点组间比较无统计学差异0° > 0. 05) ;TXL低剂量组各时间点 降脂作用不明显0° >0.05)。此外，与模型组比较，各治疗组HDL-C水平在各时间点均未出 现统计学差异Gd > 0.05)。
[0024] 2.2各组不同时间点主动脉内皮依赖性舒张功能比较 表1示，与正常组比较，模型组主动脉内皮依赖性舒张功能在4W时明显降低(产 < 0. 01)，6W时进一步加重。与模型组比较，阿托伐他汀组和TXL高剂量组在给药4W时明 显提高主动脉内皮依赖性舒张功能0° < 0. 05或/^ < 0. 01)，TXL中剂量组在给药6W后主 动脉舒张功能也得到明显改善Gd < 〇. 05)，三个治疗组之间无差异0° > 0. 05)。而TXL低 剂量组虽然在4W和6W时也表现出了一定的增强主动脉内皮依赖性舒张功能的作用，但均 未出现统计学差异G d > 0. 05)。
【主权项】
1. 一种中药组合物在制备抑制主动脉管壁微血管滋生药物中的应用，其特征在于，该 中药组合物由如下重量份的原料药制成： 人参3-10水蛭3-11 土鳖虫5-10制乳香1-5 赤芍3_9 降香1_5檀香1_5 全蝎3-9 蝉蜕3-12蜈蚣1-3冰片1-7炒酸枣仁3-10。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制 成： 人参3水蛭11 土鳖虫7制乳香2赤芍9 降香2 檀香5全蝎7 蝉蜕7 蜈蚣3 冰片1 炒酸枣仁10。
3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制 成： 人参11水蛭3 土鳖虫5制乳香1 赤芍5 降香5 檀香2 全蝎9 蝉蜕7 蜈蚣1 冰片5 炒酸枣仁5。
4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制 成： 人参6 水蛭11 土鳖虫7制乳香2赤芍5 降香2 檀香2 全蝎3 蝉蜕7 蜈蚣1 冰片5 炒酸枣仁5。
5. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，该中药组合物由如下重量份的原料药制 成： 人参9 水蛭6 土鳖虫5 制乳香1 赤芍5 降香2 檀香2 全蝎9 蝉蜕10 蜈蚣1 冰片5 炒酸枣仁7。
6. 根据权利要求1-5中任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分 由下列成分组成： a平均粒径小于100 Mm的全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫、蝉蜕及制乳香药粉； b冰片药粉； c由降香和檀香提取的挥发油； d人参用乙醇提取后的醇提液经浓缩后的醇提浸膏； e提取成分c后的降香和檀香药渣的水提液、赤芍和炒酸枣仁加水煎煮后的水提液以 及提取成分d后的人参药渣的水提液过滤、混匀后浓缩成的水提浸膏。
7. 根据权利要求1-5中任一项所述的应用，其特征在于，该中药组合物的制剂剂型为 胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。
8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述胶囊剂是由以下步骤制成的： a) 按照重量份比例称取各原料药； b) 药材粉碎工艺： 将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳 香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上；粗粉后的药粉经各种超微粉 碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于100 Mffl ;待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配 料； c) 提取浓缩和干燥工艺： 降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和炒酸枣仁加水煎煮，水提液过滤 后，待浓缩成浸膏；人参用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回收乙醇后，浓缩成醇提浸膏， 水提液过滤与所有的水提液混匀后浓缩成水提浸膏； d)制剂工艺： 在沸腾制粒干燥机中加入超微粉碎粉，再将步骤c)所得提取浸膏喷入制粒；将制成的 颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，混匀后由胶囊充填机充填， 制成胶囊。
9. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述胶囊剂是由以下步骤制成的： a) 按照重量份比例称取各原料药； b) 药材粉碎工艺： 将全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫和蝉蜕五种虫药经净选、水洗处理后和净选炮制后的制乳 香按处方配料，由粉碎机进行粉碎，药粉细度达到80目以上；粗粉后的药粉经各种超微粉 碎技术进行超微粉碎，使药粉平均粒径小于100 Mffl ;待粉碎的药材经清洗烘干灭菌后，配 料； c) 提取浓缩和干燥工艺： 降香和檀香先加水提取挥发油后再用水提取，赤芍和炒酸枣仁加水煎煮，水提液过滤 后，待浓缩成浸膏；人参用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回收乙醇后，浓缩成醇提浸膏， 水提液过滤与所有的水提液混匀后浓缩成水提浸膏，将浸膏直接喷雾干燥成喷雾粉； d) 制剂工艺： 将超微粉碎粉与步骤c)所得喷雾干燥粉一起加到沸腾制粒干燥机中，再喷溶媒制成 颗粒；将制成的颗粒经整粒，加入冰片细粉，喷入由降香和檀香提取的挥发油，混匀后由胶 囊充填机充填，制成胶囊。
10. 根据权利要求1-5中任一项所述的应用，其特征在于所述中药组合物在制备提高 内皮依赖性血管舒张功能药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种中药组合物在制备抑制主动脉管壁微血管滋生药物中的应用，属于中药应用领域，由人参、水蛭、土鳖虫、制乳香、赤芍等原料药组成。对于血管壁微血管新生均具有抑制作用，改善血管内皮功能。
【IPC分类】A61K9-20, A61K9-08, A61K35-648, A61K31-045, A61P9-14, A61K9-14, A61P9-08, A61K35-64, A61K9-48, A61K35-646, A61K9-16, A61K36-725, A61K35-62
【公开号】CN104547100
【申请号】CN201310463731
【发明人】肖维刚, 张秋艳, 王宏涛, 张东蛟, 田超, 贾振华, 魏聪, 常丽萍
【申请人】河北以岭医药研究院有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月9日