透 到皮肤中的纳米化Sch B制剂乳膏和对照组的百分比。所测试的纳米化Sch B制剂乳膏和 对照组含有0. 45%的Sch B。纳米化Sch B制剂乳膏是从1. 5%的Sch B纳米乳液制备的。 当测试6小时时，纳米化Sch B制剂渗透进皮肤的Sch B是对照组的3倍。该结果表明经 纳米化经皮给药可以极大地提高Sch B的皮肤渗透能力。该制剂中的所测试的Sch B-纳 米乳液的平均粒子尺寸小于lOnm。
[0081] 实施例2
[0082] B.棕榈酰五肽3 (Pal-KTTKS)的纳米化
[0083] B. I Pal-KITKS-纳米乳液的制各
[0084] 以预定重量比将所需量的Pal-KTTKS、表面活性剂、油和促进剂称重到20ml 小瓶中。然后对混合物作超声处理30秒。然后在磁力搅拌（500-1500rpm)或均质化 (8000-20000rpm)下将双去离子水逐滴加入到所述混合物中。得到的纳米乳液保持搅拌规 定时间（1-10分钟）以达到平衡状态（图9)。所述纳米乳液储存在室温下以备随后使用。
[0085] Pal-KTTKS-纳米乳液系统由水、油相、表面活性剂和渗透促进剂组成，其中水含量 最高为90重量％或等于70重量％，并且油：表面活性剂的重量比为1:9的临界比。可用于 纳米乳液中的油相包括以下各项且优选地选自以下各项形成的群组：（1)多元醇与脂肪酸 的酯，例如肉豆蔻酸异丙酯、辛酰己酰聚氧甘油酯或油酸乙酯；（2)动物脂肪和油以及植物 脂肪和油，其含有连接到极性头基的长度为约10个碳到12个碳的饱和烷基链，诸如油酸、 月桂酸或亚油酸；（3)天然精油或合成精油，例如柠檬烯或薄荷醇；(4)低碳C1-C8二醇，诸 如Capryol 90或聚乙二醇。油的量优选地在相对于纳米乳液的总重量的1重量％到3重 量％的范围内。所述表面活性剂优选地选自非离子表面活性剂，例如span 80、Labrasol、 tween 20或tween 80。表面活性剂的用量优选地在9重量％到27重量％的范围内。另外， 可用于纳米乳液中的渗透促进剂包括以下各项且优选地选自以下各项形成的群组：（1)萜 烯，例如香芹酮、香叶醇或薄荷醇；（2)磷脂，例如磷脂酰胆碱；（3)尿素。渗透促进剂的用量 优选地在0. 5重量％到4重量％的范围内。纳米乳液系统中将负载的活性成分可以是棕榈 酰肽，例如棕榈酰二肽6、棕榈酰三肽5、棕榈酰四肽3、棕榈酰五肽3或棕榈酰六肽。所述活 性成分的优选百分比范围是〇. 05%到6. 7%。纳米乳液中的每种组分的百分比范围和加工 参数在表3显示。
[0086] 表3. Pal-KTTKS-纳米乳液的组分的百分比范围
[0091] B. 2 Pal-KTTKS-纳米乳液的优化
[0092] 为了促进纳米乳液的皮肤渗透，对均质化速度和均质化时间的影响进行优化，并 且基于粒子尺寸选择均质化速度和均质化时间。此外，还研宄了搅拌方法用于制造纳米尺 寸粒子的可行性。这些研宄中的Pal-KTTKS-纳米乳液的组分列举在表4中。
[0093] 在8000、12000、16000和20000rpm、均质化时间保持在2分钟下研宄了均质化速度 对Pal-KTTKS粒子尺寸的影响。纳米乳液中的Pal-KTTKS浓度为0. 2%。图10表明在不同 的均质化速度下粒子的尺寸都小于l〇nm。在12000rpm的均质化速度下发现最小的粒子尺 寸，为5. 2nm。因此，选择12000rpm的均质化速度。
[0094] 在2、5、10和20分钟、均质化速度保持在12000rpm下研宄了均质化时间对粒子尺 寸的影响，其中均质化速度保持在12000rpm。纳米乳液中的Pal-KTTKS浓度为0. 2%。结 果展示于图11中。发现在不同的均质化时间下所有粒子都小于l〇nm。在20分钟均质化下 发现最小的粒子尺寸，为I. 8nm。这表明应选择20分钟的均质化条件。
[0095] 除了均质化外，也可应用搅拌来制造 Pal-KTTKS-纳米乳液。在200、1000和 1500rpm、搅拌时间设定为1分钟下研宄了用于制备Pal-KTTKS-纳米乳液的搅拌速度的影 响。纳米乳液中的Pal-KTTKS浓度为0.2%。所述结果（图12)表明在所有搅拌速度下的 粒子尺寸都小于l〇nm。在1500rpm的搅拌速度下发现最小的粒子尺寸，为I. 8nm。因此选 择在1500rpm下揽拌。
[0096] 在1、2、5和10分钟、搅拌速度保持在1500rpm下研宄了搅拌时间对粒子尺寸的 影响。结果展示于图13中。在不同搅拌时间下的所有粒子都小于10nm。在搅拌1分钟 后，最小的粒子尺寸为1.8nm。这表明应选择1分钟的搅拌时间条件。在工业规模的生产 和设备成本的观点上，搅拌方法更优于均质化。因此，选择在1500rpm下搅拌1分钟来制备 Pal-KTTKS-纳米乳液。
[0097] 此外，研宄了 Pal-KTTKS浓度（0·05%、0· 1 %和0.2% )对纳米乳液粒子尺寸的 影响。此项研宄中的Pal-KTTKS-纳米乳液的组分和加工参数列举在表4中。图14显示 Pal-KTTKS浓度对粒子尺寸的影响的结果。所述结果表明在不同Pal-KTTKS浓度下的粒子 尺寸都小于l〇nm。因此，此项研宄证明了对于纳米乳液制备可以应用0. 05%到0. 2%范围 的 Pal-KTTKS 浓度。
[0098] B. 3 Pal-KTTKS-纳米乳液制剂乳膏和对照样品的制各
[0099] 通过在标本容器中混合Pal-KTTKS-纳米乳液与乳膏基质来制备Pal-KTTKS-纳米 乳液制剂乳膏。然后在另一个标本容器中将溶解在水中的Pal-KTTKS与乳膏基质混合以 作为对照组。两种混合物都旋转2分钟以获得均质乳膏。纳米化Pal-KTTKS或非纳米化 Pal-KTTKS与乳膏基质的体积比为3:7。
[0100] B. 4体外皮肤滲诱研究
[0101] 该程序与Sch B的'体外皮肤渗透研宄'中所描述的相同。通过LC/MS/MS分析皮 肤和受体溶液中的Pal-KTTKS的量。
[0102] B. 5 Pal-KTTKS-纳米乳液中的化学促讲剂对皮肤滲诱的影晌
[0103] 利用三种不同的促进剂（柠檬烯、磷脂和油酸）研宄化学促进剂对Pal-KTTKS-纳 米乳液的皮肤渗透的影响。图15表明可以通过向所述制剂中加入磷脂来获得皮肤渗透的 最强促进，其显示皮肤渗透增加了 174%。因此，选择磷脂作为Pal-KTTKS纳米乳液中的化 学促进剂。
[0104] 测试了 3种不同的磷脂浓度（0· 25%、0· 5%和1% )的Pal-KTTKS-纳米乳液的体 外经皮吸收。图16显示Pal-KTTKS纳米乳液中的磷脂浓度对皮肤渗透促进作用的影响。当 向所述制剂中加入〇. 5%的磷脂时，与对照组相比皮肤渗透可以实现147%的最高增加。所 述结果表明在所述制剂中应当使用〇. 5%的磷脂作为化学促进剂。
[0105] B. 6体外研究中的孵育时间对皮肤滲诱的影晌
[0106] 在Pal-KTTKS纳米乳液制剂的经皮吸收的体外研宄中，研宄了 4个不同的孵育时 间点（1. 5小时、3小时、6小时和24小时）。图17显示不同的孵育时间点对皮肤渗透促进 作用的影响。发现在6小时和24小时的孵育时间下可以实现皮肤渗透的显著增加，其与对 照组相比分别显示179%和182%的增加。由于6小时和24小时下的皮肤渗透促进作用是 相当的，因此较短的时间将被视为最佳的孵育时间。
[0107] B. 7纳米化Pal-KTTKS制剂乳膏中的Pal-KTTKS浓度对皮肤滲诱的影晌
[0108] 测试了纳米化Pal-KTTKS制剂乳膏中的3种不同的Pal-KTTKS浓度（0. 02 %、 0. 2%、2%)的体外经皮吸收。这些乳膏是分别从含有0.067 %、0. 67 %和6. 7%的 Pal-KTTKS的纳米乳液制备的。图18显示Pal-KTTKS纳米乳液制剂中的Pal-KTTKS浓度 对皮肤渗透促进作用的影响。在2 %的Pal-KTTKS浓度下可以获得最高的皮肤渗透增强作 用。作为Pal-KTTKS销售的化妆品的范围低于1%，因此选择0. 2%作为适当浓度。
[0109] 经过优化的Pal-KTTKS纳米乳液制剂（工作实例）
[0110] B. 8纳米化Pal-KTTKS制剂乳膏与对照组相比的皮肤滲诱
[0111] 这是表4中陈述的经过优化的Pal-KTTKS纳米乳液的皮肤渗透研宄。图19显示 纳米化制剂和对照制剂中的Pal-KTTKS的皮肤渗透百分比。所测试的纳米化Pal-KTTKS 制剂乳膏和对照组都含有〇. 2%的Pal-KTTKS。纳米化Pal-KTTKS制剂乳膏是从0. 67%的 Pal-KTTKS纳米乳液制备的。当测试6小时时，Pal-KTTKS-纳米化制剂乳膏的皮肤渗透与 对照组相比增加了 1.6倍。所述结果表明，Pal-KTTKS通过该制剂可以有效地渗透到皮肤 中。该制剂中的所测试的Pal-KTTKS-纳米乳液的平均粒子尺寸小于10nm。
[0112] 实施例3
[0113] C.表皮生长因子（EGF)的纳米化
[0114] C. I EGF-纳米乳液的制各
[0115] 首先将规定量的油和表面活性剂与乙醇混合在一起。加入萜烯作为皮肤渗透促进 剂。然后在超声处理浴中对所述混合物作超声处理10分钟以获得透明的均质溶液。在磁 力搅拌（1000-2000rpm)下逐滴加入所需量的含有EGF的水以形成纳米乳液。将得到的纳 米乳液进一步搅拌规定时间（1-20分钟）。图20说明纳米乳液的制备策略。纳米乳液储存 在室温下以备随后使用。
[0116] 所述EGF纳米乳液系统由水、乙醇、油、表面活性剂和渗透促进剂组成。水与乙醇 +油+表面活性剂的比率为22:78的临界比。乙醇比油比表面活性剂的比率是约1:1:2。 可用于纳米乳液中的油包括以下各项且优选地选自以下各项形成的群组：（1)多元醇与脂 肪酸的酯，例如肉豆蔻酸异丙酯、辛酰己酰聚氧甘油酯或油酸乙酯；（2)动物脂肪和油以及 植物脂肪和油，其含有连接到极性头基的长度为约10个碳到12个碳的饱和烷基链，诸如油