包含抗体和防腐剂的稳定的多剂量组合物的制作方法
【专利说明】包含抗体和防腐剂的稳定的多剂量组合物
[0001] 本申请是申请日为2011年5月26日，申请号为201180026538.4的、发明名称和 本发明相同的发明专利申请的分案申请。 发明领域
[0002] 本发明涉及包含蛋白（特别是但非唯一地包含稳定抗体）的稳定、多剂量的液体 组合物，并且涉及所述组合物在治疗特别是在所述稳定蛋白的皮下递送中的用途。
[0003] 发明背景 免疫球蛋白、单克隆抗体（mAb)和人源化抗体已作为药品开发多年。开发mAb的多剂 量制剂的动机很明显，因为其重复剂量的潜力对患者更便利。然而，多剂量制剂须包含抗微 生物剂以防护其在多剂量停药期间免受微生物污染。相比单剂量容器，包含防腐剂的多剂 量制剂提供数个优点。例如，由于可从相同的容器获得不同大小的剂量，产品损耗被降到最 低。另外，在一段时间内可从相同的容器获得剂量而无需担心微生物生长。此外，由于多剂 量在单个小瓶中提供，这使包装减到最少。
[0004] 因此有对稳定的多剂量的液体药物抗体组合物的巨大需要。
[0005] 然而，防腐剂对蛋白稳定性的影响是一个主要问题。已知抗微生物防腐剂与蛋白 相互作用并导致稳定性问题例如聚集。因此，在药物产品开发过程中，确定一定浓度（该浓 度还提供所需的抗微生物功效）下的制剂相容的防腐剂是主要的挑战。一致认为mAb的高 浓度制剂的开发对mAb的物理稳定性和化学稳定性形成严重的挑战，例如可溶性聚集物和 不溶性聚集物的形成增加，其增强了免疫应答的可能性并产生低的生物活性。
[0006] 在液体药物组合物的储藏期间通过多肽的聚集物形成可对所述多肽的生物活性 产生不利影响，导致药物组合物疗效的丧失。此外，聚集物的形成可导致其它问题例如当利 用输注系统给予包含多肽的药物组合物时管道系统、膜或栗的堵塞。
[0007]US2004/0009168 (Kaisheva等）描述了包含防腐剂的多剂量IgG制剂。TO 2008/071394 (F.Hoffmann-LaRoche)描述了包含淀粉状蛋白肽抗体的稳定的药物胃 肠外制剂。US2007/0053871 (Li等）描述了包含蛋白或抗体、去稳定浓度的防腐剂和稳定 浓度的渗透剂（osmolyte)的稳定的药物制剂。W0 00/15224(EliLilly和Company)描 述了包含蛋白、疏水防腐剂和烟酰胺的稳定且可溶的制剂。W0 2008/121615 (Medlmmune， Inc)描述了抗体的高度浓缩的液体制剂。W0 2009/070642 (Medlmmune,Inc)描述了双特 异性抗体的稳定的冻干制剂。US2004/0197324 (Genentech，Inc)描述了具有减少的黏 度的高度浓缩的抗体和蛋白制剂，其为稳定的、相对等渗的且低浊度的。US2008/0112953 (Amgen，Inc)描述了包含EGFR抗体和谷氨酸缓冲液的稳定制剂。US6, 875, 432 (Genentech,Inc)描述了具有减少的黏度的浓缩蛋白制剂。US6,685,940 (Genentech, Inc)描述了适合皮下给予的稳定的冻干蛋白制剂。US2008/0071063 (Medlmmune,Inc) 描述了包含变体Fc区的稳定制剂，其通过减少迅速聚集倾向改善稳定性。
[0008] 发明简述 依据本发明的第一个方面，提供包含抗体和一种或多种防腐剂的稳定、多剂量的液体 组合物。
[0009] 依据本发明的第二个方面，提供用于治疗的本文限定的稳定、多剂量的液体组合 物。
[0010] 发明详述 依据本发明的第一个方面，提供包含抗体和一种或多种防腐剂的稳定、多剂量的液体 组合物。
[0011] 已报道包含防腐剂，例如苯酚的单克隆抗体制剂导致可溶性和不溶性蛋白聚集 物。尽管苯酚在许多基于肽和蛋白的药物中使用，但关于该防腐剂与蛋白制剂之间的相互 作用仅有一些报道。已进一步报道苯甲醇导致重组人干扰素-y(rhIFN-y)、重组人粒细 胞集落刺激因子（rhGCSF)、重组人白细胞介素-1受体拮抗物（rhlL-lra)和单克隆抗体制 剂的聚集。大多数蛋白聚集与蛋白构象变性或不稳定有关是常识。已证实苯甲醇与部分未 折叠的蛋白结合并加快其聚集。在对单克隆抗体制剂的研究中，1%浓度的苯甲醇导致浑浊 和形成可溶性聚集物。在相同的单克隆抗体制剂中大于2%的苯甲醇浓度导致蛋白沉淀。
[0012] 本文呈现的数据出人意料地显示包含抗体与多种不同防腐剂组合的制剂，导致制 剂在40°C下储藏4周期间和5°C和40°C下储藏3个月内具有低含量的聚集物。
[0013] 术语"稳定组合物"是指具有令人满意的物理稳定性、令人满意的化学稳定性或令 人满意的物理和化学稳定性的组合物。
[0014] 本文所用术语蛋白组合物的"物理稳定性"是指蛋白因暴露于热-机械应力和/或 与去稳定的界面和表面（例如疏水表面和界面）相互作用所致，形成蛋白的无生物活性的 和/或不溶性聚集物的倾向。含水的蛋白组合物的物理稳定性在使装在合适容器（如药筒 或小瓶）内的组合物暴露后通过目视检查和/或池度测定来评估。由于瑞利散射（Raleigh scattering)，表现出乳白色是单克隆抗体的高度浓缩制剂的固有性质。因此，当组合物在 日光下显示出可见混浊时，其不可归类为与蛋白聚集有关的物理不稳定。然而，当在日光下 有可见的沉淀物或相分离时，将制剂归类为物理不稳定。
[0015] 本文所用术语蛋白组合物的"化学稳定性"是指蛋白结构的化学共价变化，其导 致形成与天然的蛋白结构相比具有潜在较低的生物效能和/或潜在增强的免疫原性的化 学降解产物。各种化学降解产物可视天然蛋白的类型和性质以及该蛋白所暴露的环境而 形成。化学降解的消除几乎不可能完全避免，在蛋白组合物的储藏和使用期间常常见到 化学降解产物的量增加，这为本领域技术人员熟知。大部分蛋白易于脱酰胺，即其中谷氨 酰胺酰基残基或天冬酰胺酰基残基中的侧链酰胺基被水解形成游离羧酸的过程。其它的 降解途径涉及高分子量转化产物的形成，其中两个以上蛋白分子彼此通过转酰胺基作用 和/或二硫化物相互作用共价结合，导致共价结合的二聚体、寡聚体和多聚体降解产物形 成（StabilityofProteinPharmaceuticals,Ahern.T.J. &ManningM.C. ,Plenum Press,NewYork1992)〇
[0016] 可提及氧化作用（例如甲硫氨酸残基的氧化作用）作为化学降解的另一变体。蛋 白组合物的化学稳定性可通过以下来评估：测量经暴露于不同环境条件（降解产物的形成 往往可通过例如增加温度而加速）后不同时间点的化学降解产物的量。各单独降解产物的 量通常通过使用各种色谱技术（例如SEC-HPLC和/或RP-HPLC)根据分子大小和/或电荷 分离降解产物来确定。
[0017] 具体而言SEC-HPLC用于蛋白聚集物的定量。例如样品可利用TSKG3000SWXL柱、 等度洗脱和随后214nm处的UV检测来分析。该方法用于确定单体IgG含量和由通过凝胶 树脂依照大小分离的二聚体物类或更大的物类组成的％高分子量蛋白（HMWP)。相对于通过 所述方法检测的总蛋白含量，来确定单体含量和％HMWP。
[0018] 因此，如上所略述，稳定组合物是指具有令人满意的物理稳定性、令人满意的化学 稳定性或令人满意的物理和化学稳定性的组合物。制剂的令人满意的稳定性可通过％高分 子量蛋白的增加（A%HMWP)测定。制剂的令人满意的稳定性可为其中测试期间制剂中作 为聚集物存在的蛋白的增加（△%HMWP)少于10%并且优选少于5%。一般而言，组合物在使 用和储藏期间（遵循推荐的使用和储藏条件）必须稳定直至达到到期日。
[0019] 本文所用术语"蛋白"、"多肽"和"肽"意指由通过肽键连接的至少五个组成性氨基 酸组成的化合物。所述组成性氨基酸可来自由遗传密码编码的氨基酸组，其可为并非由遗 传密码编码的天然氨基酸以及合成氨基酸。并非由遗传密码编码的天然氨基酸为例如羟脯 氨酸、y-羧基谷氨酸、鸟氨酸、磷酸丝氨酸、D-丙氨酸和D-谷氨酰胺。合成氨基酸包括通过 化学合成生产的氨基酸，即由遗传密码编码的氨基酸的D-异构体，例如D-丙氨酸和D-亮 氨酸、Aib(a-氨基异丁酸）、Abu(a-氨基丁酸）、Tle(叔丁基甘氨酸）、丙氨酸、 3-氨甲基苯甲酸和邻氨基苯甲酸。
[0020] 术语"防腐剂"是指防止组合物中微生物生长的药学上可接受的赋形剂。更特别 地，本发明提供包含防腐剂的多剂量液体组合物，防腐剂防护组合物免受微生物污染。
[0021] 在一个实施方案中，组合物内存在的防腐剂的量为0.001-2% (w/v)。在一个实施 方案中，组合物内存在的防腐剂的量为〇. 002-1% (w/v)。
[0022] 在一个实施方案中，一种或多种防腐剂选自苯酚、间甲酚、苯甲醇、氯丁醇、乙醇、 苯氧乙醇、对氯-间甲酚、羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯扎氯铵、硫柳汞或其任何组合。在一个实 施方案中，一种或多种防腐剂选自苯酚、间甲酚、苯甲醇和氯丁醇。
[0023] 在一个实施方案中，组合物包含单一的防腐剂。在一个实施方案中，组合物包含选 自苯酚、间甲酚、苯甲醇、氯丁醇、乙醇、苯氧乙醇、对氯_间甲酚、羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯扎 氯铵和硫柳汞的单一防腐剂。
[0024] 当组合物包含苯酚作为单一防腐剂时，组合物内存在的苯酚的量通常为0. 1-1% (w/v)，例如 0? 1-0. 5% (w/v)，例如 0? 15 或 0? 5% (w/v)，特别地，0? 25-0. 5% (w/v)。
[0025]当组合物包含间甲酚作为单一防腐剂时，组合物内存在的间甲酚的量通常为 0? 1-1% (w/v)，例如 0? 1-0. 5% (w/v)，例如 0? 15 或 0? 35% (w/v)，特别地，约 0? 3% (w/v)。
[0026]当组合物包含苯甲醇作为单一防腐剂时，组合物内存在的苯甲醇的量通常为 0? 1-2% (w/v)，例如 0? 1-1. 5% (w/v)，例如 0? 5-1. 1% (w/v)，特别地，约 1% (w/v)。
[0027]当组合物包含氯丁醇作为单一防腐剂时，组合物内存在的氯丁醇的量通常为 0? 1-1% (w/v)，例如 0? 25-0. 75% (w/v)，例如 0? 3 或 0? 6% (w/v)，特别地，约 0? 3%-0. 5% (w/ v) 〇
[0028] 当组合物包含羟苯甲酯作为单一防腐剂时，组合物内存在的羟苯甲酯的量通常为 0? 1-0. 5% (w/v)，例如约 0? 2% (w/v)。
[0029] 当组合物包含羟苯丙酯作为单一防腐剂时，组合物内存在的羟苯丙酯的量通常为 0? 1-0. 5% (w/v)，例如约 0? 2% (w/v)。
[0030] 当组合物包含苯氧乙醇作为单一防腐剂时，组合物内存在的苯氧乙醇的量通常为 0.1-2% (w/v)，例如约 1% (w/v)。
[0031] 当组合物包含硫柳汞作为单一防腐剂时，组合物内存在的硫柳汞的量通常为 0.002-0.01% (w/v)。
[0032] 在又进一步的实施方案中，组合物包含选自苯酚、间甲酚、苯甲醇和氯丁醇的单一 防腐剂。
[0033] 在一个实施方案中，组合物包含两种以上防腐剂。在一个实施方案中，组合物包含 两种防腐剂。本文呈现的数据出人意料地证实与单独的防腐剂存在时观察到的聚集相比， 包含两种防腐剂的组合物中观察到较低量的聚集物。在又进一步的实施方案中，组合物包 含选自苯酚、间甲酚、苯甲醇、氯丁醇、乙醇、苯氧乙醇、对氯_间甲酚、羟苯甲酯、羟苯丙酯、 苯扎氯铵和硫柳汞的两种防腐剂。在又进一步的实