/mL和100. 0μg/mL 的丙泊酚对照品溶液各20μL，每个浓度各做3份，再分别加水各200μL，按上述血浆样品 处理方法操作，所得溶液按上述色谱条件和质谱条件进行HPLC-MS分析，记录色谱图，测定 丙泊酚峰面积并计算平均峰面积（记为As2)，测定内标麝香草酚峰面积并计算平均峰面积 (记为Ai2)，计算比值f2 =As2/Ai2。
[0119]按照As 1 /As2 X 100%计算丙泊酚的绝对基质效应（ME)，按照Ai 1 /Ai2 X 100% 计算内标麝香草酚的绝对基质效应（ME)，按照fl/f2X 100%计算相对基质效应 (IS-normalised ME)〇
[0120] 配制的各浓度溶液计算所得的基质效应结果，见表5。
[0121] 表5基质效应测定结果（η= 6)
[0122]
[0124] 由表5可知，丙泊酚和内标麝香草酚的绝对基质效应（ME)在99. 7%~106. 2%之 间、RSD小于9%;方法的相对基质效应（IS-normalisedME)在99. 9%~107. 2%之间、RSD 小于7%。结果表明，测定不受基质影响。
[0125] (2)专属性
[0126] 分别取6只大鼠的空白血浆各200μL，除将内标溶液换为乙腈外，按上述血浆样 品处理方法操作，所得溶液按上述色谱条件和质谱条件进行HPLC-MS分析，得到空白血浆 色谱图。
[0127] 取1. 5mLΕΡ试管1支，加入浓度为20. 0 μ g/mL的丙泊酚对照品溶液20 μ L，加入 空白血浆200 μ L，按上述血浆样品处理方法操作，所得溶液按上述色谱条件和质谱条件进 行HPLC-MS分析，得到空白血浆加标色谱图。
[0128] 取大鼠尾静脉给予葡萄糖基化丙泊酚注射剂AlOmin后收集的血浆样品200μL， 按上述血浆样品处理方法操作，所得溶液按上述色谱条件和质谱条件进行HPLC-MS分析， 得到给药后的血浆样品色谱图。
[0129] 图2为空白血浆的选择离子监测色谱图。
[0130] 图3为空白血浆加标的选择离子监测色谱图。
[0131] 图4为给药后的血浆样品的选择离子监测色谱图。
[0132] 结果表明，血浆中的内源性物质不干扰丙泊酚和内标麝香草酚的测定，方法具有 较好的专属性。
[0133] (3)最低检测浓度
[0134] 取1. 5mLEP试管数支，分别加入浓度为0. 1μg/mL的丙泊酚对照品溶液20μL，加 入空白血浆200μL，平行制备3份，按上述血浆样品处理方法操作，所得溶液按上述色谱条 件和质谱条件进行HPLC-MS分析，记录色谱图。
[0135] 图5为丙泊酚血药浓度为10ng/mL样品的选择离子监测色谱图。
[0136] 由图5可知，丙泊酚血药浓度为10ng/mL的样品色谱图中，丙泊酚色谱峰信噪比约 为3:1，因此最低检测浓度为10ng/mL。
[0137] (4)标准曲线与定量范围
[0138]取 1. 5mLEP试管数支，分别加入浓度为 0. 5μg/mL、5. 0μg/mL、10. 0μg/mL、 20.Ομg/mL、50.Ομg/mL和100.Ομg/mL的丙泊酉分对照品溶液各20μL，每个浓度各做3 份，再分别加入空白血浆各200μL，按上述血浆样品处理方法操作，所得溶液按上述色谱条 件和质谱条件进行HPLC-MS分析，记录色谱图，分别测定丙泊酚峰面积（记为As)和内标麝 香草酸峰面积（记为Ai)，计算比值f=As/Ai。
[0139] 配制的各浓度溶液计算所得的f值结果，见表6。
[0140] 表6标准曲线和定量范围测定结果（η= 3)
[0141]
[0142] 以各浓度溶液计算所得的f值为纵坐标，实际血样中丙泊酚浓度为横坐标，用加 权最小二乘法进行回归运算，并绘制标准曲线。
[0143] 图6为大鼠血浆中丙泊酚的峰面积比对浓度线性回归图。
[0144]由图 6 得到回归方程y=(λ0008χ+0· 0105,r=0·9986,权重系数w= 1/x2。
[0145] 将测得的f值带入标准曲线，反算出浓度与理论浓度比较计算偏差，结果见表7。
[0146] 表7标准曲线的验证（η= 3)
[0147]
[0148] 结果表明，血浆中丙泊酚在50.Ong/mL~10. 0μg/mL范围内线性关系良好，每个 浓度点偏差均小于7%、RSD均小于5. 1 %。
[0149] (5)定量下限
[0150] 取1. 5mLEP试管数支，分别加入浓度为0. 5μg/mL的丙泊酚对照品溶液20μL，加 入空白血浆200μL，平行制备5份，按上述血浆样品处理方法操作，所得溶液按上述色谱条 件和质谱条件进行HPLC-MS分析，记录色谱图，分别测定丙泊酚峰面积（As)和内标麝香草 酚峰面积（Ai)，计算比值f=As/Ai，代入随行标准曲线方程，求得实测浓度。
[0151] 配制的各溶液计算所得的浓度结果，见表8。
[0152] 表8定量下限测定结果（η= 5)
[0153]
[0154] 结果显示，丙泊酚的实测浓度为47. 2±5.Ing/mL，准确度为91. 7% ±9. 9%，RSD 为 10. 9%。
[0155] 图7为丙泊酚血药浓度为50ng/mL样品的选择离子监测色谱图。
[0156] 由图7可知，样品色谱图中丙泊酚色谱峰信噪比约为10:1，因此定量下限为50ng/ mL〇
[0157] (6)精密度
[0158] 取1. 5mLEP试管数支，分别加入浓度为1. 0μg/mL、20. 0μg/mL和100. 0μg/mL的 丙泊酚对照品溶液各20μL，每个浓度各做5份，再分别加入空白血浆各200μL，按上述血 浆样品处理方法操作，所得溶液按上述色谱条件和质谱条件进行HPLC-MS分析，记录色谱 图，分别测定丙泊酚峰面积（As)和内标麝香草酚峰面积（Ai)，计算比值f=As/Ai，代入随 行标准曲线方程，求得实测浓度，计算RSD，考察日内精密度；每天对三个浓度的样品各做1 份，进样分析，连续做5天，考察日间精密度。
[0159] 配制的各浓度水平溶液的浓度测定结果，见表9。
[0160] 表9精密度测定结果（η= 5)
[0161]
[0163] 结果显示，0. 1μg/mL、2. 0μg/mL和10. 0μg/mL三个浓度水平的日内精密度分别 为3.8%、3. 7%和3. 9%，日间精密度分别为13. 1 %、2. 9%和2. 6%，表明方法可重现。
[0164] (7)回收率
[0165]取 1. 5mLEP试管数支，分别加入浓度为 1. 0μg/mL、20. 0μg/mL和 100. 0μg/mL 的丙泊酚对照品溶液各20μL，每个浓度各做5份，再分别加入空白血浆各200μL，按上述 血浆样品处理方法操作，所得溶液按上述色谱条件和质谱条件进行HPLC-MS分析，记录色 谱图，分别测定丙泊酚峰面积（As)和内标麝香草酚峰面积（Ai)，计算比值f=As/Ai，代入 随行标准曲线方程，求得实测浓度，计算回收率和RSD。
[0166] 配制的各浓度水平溶液的回收率测定结果，见表10。
[0167] 表10回收率测定结果（η= 5)
[0168]
[0169] 结果显示，0. 1μg/mL、2. 0μg/mL和10. 0μg/mL三个浓度水平的平均回收率分别 为 101. 1%、99.8%和 93.6%，RSD分别为 6. 1%、4.7%、3.7%，表明方法准确。
[0170] (8)稳定性
[0171] 取1. 5mLEP试管数支，分别加入浓度为1. 0μg/mL、20. 0μg/mL和100. 0μg/mL的 丙泊酚对照品溶液各20μL，每个浓度各做1份，再分别加入空白血浆各200μL，按上述血 浆样品处理方法操作，所得溶液按上述色谱条件和质谱条件分别于第0、2、4、8、12、24小时 进行HPLC-MS分析，记录色谱图，分别测定丙泊酚峰面积（As)和内标麝香草酚峰面积（Ai)， 计算比值f=As/Ai，代入随行标准曲线方程，求得实测浓度，计算RSD。
[0172] 配制的各浓度水平溶液的浓度测定结果，见表11。
[0173] 表11稳定性测定结果（η=6)
[0174]
[0175]结果显示，0.lyg/mL、2.Oyg/mL和 10.Oyg/mL三个浓度的RSD分别为 5. 0%、 4. 6%和5. 1 %，表明样品室温下24小时内稳定。
[0176] 3、在大鼠体内的药动学研究
[0177] 取24只健康SD大鼠，雌雄各半，分为3组，每组8只，禁食12h后，第1组尾静脉给 予丙泊酚脂肪乳注射剂14mg/kg，第2组尾静脉给予葡萄糖基化丙泊酚注射剂A14mg/kg(按 丙泊酚计），第3组尾静脉给予葡萄糖基化丙泊酚注射剂B14mg/kg(按丙泊酚计），