r>[0202] ^
[0203] 测试的浓度都未对细胞生存力产生任何显著的影响（图2;表2)。所有测试的 Steamchol的稀释物与未处理的对照相比的细胞生存力接近100%。运些结果表明FABAC相 对于类视黄醇的有益效果，所述类视黄醇已被表明在0.6-3*10 5M的范围内对成纤维细胞和 上皮细胞具有细胞毒性（Varani等.Journal of Investigative De;rmatology( 1993) 101, 839-842)，并增加上皮细胞的死亡（Ding等.Invest 0地thalmol Vis Sci.2013Jun26;54 (6):4341-50)。
[0204] 表2.暴露于Steamchol后24小时的细胞生存力
[0206] ^zil^lj2.Steamchol^AramcholX^^E|j^aj^^ABCAlfl^mRNA^nSaM7X￥6^ 作用
[0207] 将Steamchol与人类皮肤成纤维细胞解育20小时W测量在[3H]胆固醇存在的情况 下胆固醇的荷载。系列洗涂和添加含有胆固醇受体的流出物后，收集培养基并离屯、，并在存 在和不存在类似的FABAC的情况下将细胞结合的胆固醇与流出的胆固醇作比较。该研究项 目还包括ABCAl的mRNA的定量和ABCAl的直接测量。结果证实，与未处理的细胞相比，当流出 发生在FABAC存在的情况下时，成纤维细胞中的胆固醇流出物显著增加，并且ABCAl蛋白浓 度增加了大约2倍。
[0208] 类似地，将细胞用[3H]胆固醇预解育，洗涂四次并且然后置于含有或不含有 Aramcho 1的解育培养基中20小时。解育后，分别测量培养基中和细胞中的放射性。胆固醇流 出百分比计算为培养基中的放射性除W总放射性(细胞+培养基）。结果证实，与未处理的细 胞相比，当流出发生在Aramchol存在的情况下时，成纤维细胞中的胆固醇流出显著增加，并 且ABCAl蛋白浓度增加了大约2倍。
[0209] 实施例3. Steamchol对皮肤培养物中基因表达的作用
[0210] 使用Steamchol处理全厚度体外皮肤培养物模型化iderm FT(MatTek，MA)。将DMSO 中的非细胞毒性浓度的Steamchol (0.5%，5000ug/mL)应用到每个测试培养物的表面，应用 24小时后收集细胞。用不含有Steamchol的DMSO类似地处理对照细胞。将组织收集在 RNAlater中用于基因表达分析。使用Whqman低密度阵列(TLDA)格式的验证的I'aqman基因 表达测定分析基因表达。分析调控皮肤中多个已知功能的94个基因，包括ABCAl和SCDl基 因。使用验证的Taqman基因表达测定W96孔形式进行实验设置。每个基因测定两份。使用 Sl:atMine;r软件v4.2 (未成对t-检验，p<0.05，N=4)进行统计学分析W比较0.5 % Steamcho 1 组和DMSO对照组。
[0211] Steamchol对化iderm FT培养物中基因表达的作用表明，组中94个选择的基因中， 有2个基因 KRT 1(角蛋白1)和KRT 10(角蛋白10)展示出与用DMSO处理的细胞相比多于两倍 的统计学上显著偏离(参见下表3)。未观察到ABCAl的mRNA水平的显著变化。
[0212] 表3:用FABAC处理之后角蛋白1和10基因表达的变化倍数
[0214] 如表3所示，Steamchol显著抑制角蛋白1和10的表达，角蛋白1和10是已知的角质 形成细胞分化的标志物。分化速率的降低可W减少角质形成细胞到角质细胞的角质化速率 并缓解毛皮脂开口的毛孔阻塞，从而允许更有效的皮脂排空。此效果与用于治疗瘦疮的视 黄酸和水杨酸的效果类似。
[0215] 实施例4. FABAC对角质形成细胞分化的作用
[0216] 为了检测公开的FABAC对角质形成细胞的分化的作用，使用高度分化的全厚度体 外皮肤培养物模型化iderm FT(MatTek，MA)。用在DMSO中的S种不同浓度的Steamcho巧口在 DMSO中的S种不同浓度的Aramchol处理皮肤培养物，重复两次。测试的浓度之一是0.5% (5000iig/mL)，其在降低KRTl和KRTlO的基因表达中有效。使用两个未处理的皮肤培养物和 两个单独用媒介物(DMSO)处理的培养物作为阴性对照。使用视黄酸处理的两个皮肤培养物 作为阳性对照。
[0217] 组合物应用至每个测试培养物表面24小时后收集细胞。从部分细胞中提取蛋白质 并使用对角蛋白1、角蛋白l〇、SCDl和ABCA-I特异性的第一抗体对所述蛋白质进行蛋白印迹 和化ISA分析。固定另一部分细胞并使用对角蛋白1、角蛋白10、SCD1和ABCA-I特异性的第一 抗体进行免疫组织化学染色。
[0218] 角蛋白1和/或角蛋白10表达的下调指示角质形成细胞分化的降低。
[0219] 实施例5. FABAC对瘦疮丙酸菌行为的作用
[0220] 瘦疮丙酸菌(P.acnes)是在多余皮脂存在下繁殖的共生生物并且在寻常瘦疮中起 重要作用。与瘦疮丙酸菌对治疗的抗性相关的一个阻碍是其发展微膜菌落的倾向。分离自 瘦疮患者的瘦疮丙酸菌菌株体外形成生物膜，特征在于与浮游生物相比升高的醋酶活性。 醋酶可W，至少部分地，是促进炎症的刺激性脂肪酸的产生的原因，并且因此是在粉刺处的 痊痒感的原因。
[0221] 为了检查FABAC对瘦疮丙酸菌行为的作用，使用几个商业的和/或临床来源的瘦疮 丙酸菌菌株。使用FABAC(Steamck)巧日/或Aramchol)处理细菌培养物，并且检查W下参数： 细菌生长的最小抑菌浓度(MIC)、杀菌时间、最低生物膜清除浓度(MBECTM)、醋酶活性和细 菌的形态学变化。作为阳性对照，向相应细菌培养物施用W下物质:红霉素、克林霉素、四环 素、水杨酸和氯己定。 帷。实施例6. FABAC的抗炎作用的检查
[0223] 使用高度分化的全厚度体外皮肤培养物模型化Piderm FT ,MatTek，M)检查FABAC 的抗炎作用。用氧化的角整締或佛波醋处理皮肤培养物W诱导炎症，并且通过检查IL-8水 平确认炎症。
[0224] 之后，用数个不同浓度的FABAC (DMSO中的St eamcho 1或Aramcho 1)处理皮肤培养 物，重复两次。使用两个未处理的皮肤培养物和两个用媒介物(DMSO)单独处理的培养物作 为阴性对照。为了检查FABAC的抗炎作用，在mRNA和蛋白质水平检查化-1、比-6、比-8、比-16 和NFkB的表达水平。此外，检查对C0X-1、C0X-2、PGE2和PLA2的酶抑制作用。用布洛芬或日引噪 美辛处理的皮肤培养物用作酶抑制作用的阳性对照。
[0225] 具体实施方案的W上描述将如此完全地掲示本发明的一般性质，W至于其他人可 通过应用现有的知识，容易地为各种应用修改和/或调整此类具体实施方案，而不需要过度 实验和不偏离一般概念，且因此，此类调整和修改应当并且预期被包含在公开的实施方案 的等价物的含义和范围内。应理解的是，本文采用的措辞或术语是为了描述而非限制的目 的。用于进行各种公开的功能的手段、材料和步骤可采取多种替代形式而不偏离本发明。
【主权项】
1. 一种用于治疗与改变的皮脂水平相关的皮肤状况的组合物，所述组合物包含脂肪酸 胆汁酸缀合物(FABAC)作为活性成分和药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂，其中所述 FABAC具有式I: ff-X-G(I) 其中G代表胆汁酸或胆汁盐基团;W代表具有6-22个碳原子的一个或两个脂肪酸基团； 并且X代表键合成员，所述键合成员包含杂原子或直接的C-C或C = C键。2. 如权利要求1所述的组合物，其中所述FABAC包含两个脂肪酸基团，其中每次出现时， W独立地为具有6-22个碳原子的脂肪酸基团；并且X独立地为键合成员，所述键合成员包含 杂原子或直接的C-C或C = C键。3. 如权利要求1所述的组合物，其中所述键合成员选自由以下组成的组:NH、P、S、0或者 直接的C-C或C = C键。4. 如权利要求3所述的组合物，其中所述键合成员是NH。5. 如权利要求1所述的组合物，其中所述一个或两个脂肪酸独立地选自由以下组成的 组:硬脂酸、山嵛酸、二十烷醇酸、棕榈酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸和油酸。6. 如权利要求5所述的组合物，其中所述一个或两个脂肪酸基团是二十烷醇酸的基团。7. 如权利要求1所述的组合物，其中所述胆汁酸选自由以下组成的组:胆酸、熊脱氧胆 酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸以及其衍生物。8. 如权利要求7所述的组合物，其中所述胆汁酸是胆酸。9. 如权利要求所述的组合物，其中所述FABAC选自由以下组成的组： 3-β_硬脂酰-氨基，7α，12α-二羟基-5-β-胆烷-24-酸、 3-β二十烧醇氛基，7α，12α-二羟基-5_β-胆烧_24_酸及其组合。10. 如权利要求1所述的组合物，其中所述与改变的皮脂水平相关的皮肤状况选自由以 下组成的组:痤疮、皮脂溢、脂溢性皮炎、皮脂囊肿、皮脂腺增生、头皮肩以及毛囊炎。11. 如权利要求10所述的组合物，其中所述与改变的皮脂水平相关的皮肤状况是痤疮。12. 如权利要求11所述的组合物，其中所述痤疮是寻常痤疮。13. 如权利要求1所述的组合物，其中所述与改变的皮脂水平相关的状况是与升高的皮 脂水平相关的皮肤状况。14. 如权利要求1所述的组合物，被配制成用于口服施用。15. 如权利要求1所述的组合物，被配制成用于局部施用。16. 如权利要求15所述的组合物，其中被配制成用于局部施用的所述组合物被配制成 选自由以下组成的组的形式:水性溶液、霜剂、洗液、油包水或水包油乳液、多重乳液、硅酮 乳液、微米乳液、纳米乳液、凝胶以及具有共溶剂的水性溶液。17. -种在需要其的受试者中治疗与改变的皮脂水平相关的皮肤状况的方法，所述方 法包括向所述受试者施用有效量的组合物的步骤，从而治疗所述受试者中与改变的皮脂水 平相关的皮肤状况，所述组合物包含脂肪酸胆汁酸缀合物(FABAC)作为活性成分和药学上 可接受的稀释剂或载体，其中所述FABAC具有式I: ff-X-G(I) 其中G代表胆汁酸或胆汁盐基团;W代表具有6-22个碳原子的一个或两个脂肪酸基团； 并且X代表键合成员，所述键合成员包含杂原子或直接的C-C或C = C键。18. 如权利要求17所述的方法，其中所述FABAC包含两个脂肪酸基团，其中每次出现时， W独立地为具有6-22个碳原子的脂肪酸基团；并且X独立地为键合成员，所述键合成员包含 杂原子或直接的C-C或C = C键。19. 如权利要求17所述的方法，其中所述键合成员选自由以下组成的组:NH、P、S、0或者 直接的C-C或C = C键。20. 如权利要求19所述的方法，其中所述键合成员是NH。21. 如权利要求17所述的方法，其中所述一个或两个脂肪酸基团独立地选自由以下组 成的组:硬脂酸、山嵛酸、二十烷醇酸、棕榈酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸和油酸。22. 如权利要求21所述的方法，其中所述一个或两个脂肪酸基团是二十烷醇酸的基团。23. 如权利要求17所述的方法，其中所述胆汁酸选自由以下组成的组:胆酸、熊脱氧胆 酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸以及其衍生物。24. 如权利要求23所述的方法，其中所述胆汁酸是胆酸。25. 如权利要求17所述的方法，其中所述FABAC选自由以下组成的组： 3-β_硬脂酰-氨基，7α，12α-二羟基-5-β-胆烷-24-酸、 二十烧醇氛基，7α，12α-二羟基-5_β-胆烧_24_酸及其组合。26. 如权利要求17所述的方法，其中所述FABAC是3-β-二十烷醇氨基，7α，12α-二羟基-5-β_胆烷-24-酸。27. 如权利要求17所述的方法，其中所述与改变的皮脂水平相关的皮肤状况选自由以 下组成的组:痤疮、皮脂溢、脂溢性皮炎、皮脂囊肿、皮脂腺增生、头皮肩以及毛囊炎。28. 如权利要求17所述的方法，其中所述与改变的皮脂水平相关的皮肤状况是痤疮。29. 如权利要求28所述的方法，其中所述痤疮是寻常痤疮。30. 如权利要求17所述的方法，其中所述与改变的皮脂水平相关的皮肤状况是与升高 的皮脂水平相关的皮肤状况。31. 如权利要求17所述的方法，其中施用是口服地。32. 如权利要求17所述的方法，其中施用是局部地。33. 如权利要求31所述的方法，其中所述组合物是局部组合物。34. 如权利要求33所述的方法，其中所述局部组合物被配制成选自由以下组成的组的 形式:水性溶液、霜剂、洗液、油包水或水包油乳液、多重乳液、硅酮乳液、微米乳液、纳米乳 液、凝胶以及具有共溶剂的水性溶液。35. -种药物组合物，其中所述组合物被配制用于局部施用，所述组合物包含至少一种 脂肪酸胆汁酸缀合物(FABAC)作为活性成分，其中所述FABAC具有式I: ff-X-G(I) 其中G代表胆汁酸或胆汁盐基团;W代表具有6-22个碳原子的一个或两个脂肪酸基团； 并且)(代表键合成员，所述键合成员包含杂原子或直接的C-C或C = C键;并且其中包含至少 一种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。
【专利摘要】本发明提供了，除了其他以外，包含脂肪酸胆汁酸缀合物(FABAC)作为活性成分的局部药物组合物。本发明还提供了使用包含FABAC的药物组合物治疗与改变的皮脂水平相关的皮肤状况的方法，该皮肤状况包括但不限于痤疮。
【IPC分类】A61P17/10, A61K31/201, A61K31/00, A61K31/427, A61K31/426, A61K31/575, A61P17/00
【公开号】CN105611919
【申请号】CN201480055619
【发明人】纳瓦·达扬, 艾伦·巴哈拉夫
【申请人】盖尔德姆疗法有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2014年8月7日
【公告号】CA2920457A1, EP3030229A1, US20160175324, WO2015019359A1