一种注射用替尼类药物白蛋白纳米制剂的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物制剂领域，涉及一种注射用替尼类药物白蛋白纳米制剂的制备方 法，本方法将难溶性替尼类药物制备成可溶性注射用白蛋白纳米粒制剂，该方法重现性好， 可以大幅提高纳米粒的载药量，增强其稳定性和安全性，适用于工业化生产。
【背景技术】
[0002] 现有技术公开了替尼类药物是近年来研发并在临床成功应用的一类分子靶向药 物，该类药物主要用于非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肾癌、黑色素瘤、慢性粒细胞白血病 等癌症的治疗，其主要通过特异性靶向并抑制酪氨酸激酶的活性而抑制肿瘤生长，其抗肿 瘤效果良好。其中，伊马替尼于2001年上市，临床适应症为慢性粒细胞白血病，2002年被 批准用于治疗转移性或手术无法切除的胃肠道恶性间质瘤。吉非替尼于2003年5月被美 国FDA批准用于治疗化疗失败的晚期非小细胞肺癌，并于2005年3月在中国获准上市。拉 帕替尼由葛兰素史克公司研发，于2007年由美国FDA批准上市，与卡培他滨联合用于治疗 晚期或转移性乳腺癌。厄洛替尼于2004年上市，用于治疗非小细胞肺癌，2007年将适应症 扩大到胰腺癌。目前已经上市的替尼类药物还有达沙替尼、舒尼替尼、尼洛替尼等。除此之 外，国内已经向CFDA提交新药申请的有索凡替尼、呋喹替尼、阿帕替尼等。2009~2013年， 共有14家国内制药企业递交了替尼类药物的1类新药临床申请，涉及23个品种。替尼类 药物因其抗癌谱广、疗效确切，已逐渐成为治疗各种癌症的一线用药。
[0003] 尽管替尼类药物在抗肿瘤方面有着诸多优势，但实际应用中也遇到很多困难。替 尼类药物大多难溶于水（如吉非替尼在水中的溶解度仅有8. 8 μ g/mL)，口服生物利用度较 低（如尼洛替尼为31%，艾力替尼〈20% )，且口服后药物的吸收易受服药次数、食物和联 合用药等影响，吸收变异大（如拉帕替尼分开服用较每日服用1次AUC增加1倍，与食物同 月艮，AUC增加3~4倍），致使药物口服给药剂量大（如帕唑帕尼单次给药剂量达800mg，而 拉帕替尼则达1250mg)，胃肠道副反应严重。因此，研发替尼类药物的注射给药系统，有望改 进其口服制剂临床使用中的局限与不足。
[0004] 近年来，纳米技术的发展为难溶性药物的增溶提供了有效的手段，其中白蛋白纳 米粒因具有独特的优点而受到广泛关注。人血清白蛋白（HSA)是人血浆中最丰富的蛋白 质，具有良好水溶性、稳定性、低毒性和低免疫原性。利用白蛋白独特的空间结构，以物理包 裹或化学键偶联的方式将药物载入其中，可增加难溶性药物的溶解度，显著降低药物毒性， 并且由于肿瘤细胞对白蛋白的高主动性摄取，以及白蛋白纳米粒的EPR效应，均有利于将 药物更有效地递送到肿瘤部位，发挥药理活性。因此，白蛋白纳米制剂不仅可以增溶难溶性 药物，还可以实现革巴向输送药物的目的。2005年，美国Abraxis公司开发的紫杉醇白蛋白纳 米粒注射剂（商品名Abraxane，凯素）获FDA批准上市，成为白蛋白纳米粒给药系统最成功 的案例，用于转移性乳腺癌、非小细胞肺癌、晚期胰腺癌等的治疗，是目前临床上疗效最好 的紫杉醇制剂。
[0005] 中国发明专利：2012101304132公开了有关替尼类药物白蛋白纳米制剂。该研究 利用替尼类药物与血浆蛋白结合率非常高的特性（如埃克替尼的血浆蛋白结合率>98 %， 索拉非尼的血浆蛋白结合率为99. 5 % )，但实践显示其存在如下不足，如，在制备方法上采 用磁力搅拌成乳、旋转蒸发除去有机溶剂，这些方法只适合实验室小批量的制备，无法实现 中试规模或工业化生产白蛋白纳米制剂；另外，为了使制备的白蛋白纳米粒粒径小，该研究 中加入了大量的磷脂（磷脂用量达到50~75%，超过白蛋白的用量），磷脂用量大，不仅降 低了白蛋白纳米粒的载药量（仅为2~5%)和稳定性（3-6天有药物析出），也使其氧化 水解产生的毒性产物溶血卵磷脂的量增加，增大了发生静脉炎、发热、疼痛、出血、过敏等不 良反应的可能性。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是针对现有技术存在的关于纳米粒载药量较低（仅为2~5% )、稳 定性差、磷脂用量大（达50~75%)易引起毒副作用、制备工艺难以工业化等缺点和不足， 提供一种注射用替尼类药物白蛋白纳米制剂的制备方法，该制备方法可大幅度提高所述制 剂的药物含量（载药量最高可达20% )、增强纳米粒的稳定性（纳米混悬液室温可稳定15 天）和安全性（降低磷脂用量或调整增溶剂的种类），本方法适于工业化生产白蛋白纳米 粒。
[0007] 本发明提供了一种重现性好、粒径小且分布均匀（粒径为50~200nm，PDK0. 2) 的替尼类药物白蛋白纳米粒的制备方法。制备的白蛋白纳米粒可通过0. 22 μ m过滤器无菌 过滤，这对于能否进行静注给药至关重要。
[0008] 本发明克服了现有技术中存在的缺陷，如，由于制剂组成中的人血清白蛋白无法 通过常规方法（如热压灭菌法）灭菌，否则会造成蛋白的凝固变性从而影响到制剂的粒径 和体内靶向特性，其次制剂组成中若含有磷脂类增溶剂，部分磷脂在灭菌的高温条件下也 会转变为溶血卵磷脂，从而造成毒性；制得的的粒径小且分布均匀的白蛋白纳米制剂尤其 适用于注射给药（如静脉给药）。
[0009] 更具体的，本发明提供的一种注射用替尼类药物白蛋白纳米制剂的制备方法，其 特征在于，其包括步骤：
[0010] (1)将一定量的替尼类药物溶于适宜的有机溶剂中作为油相，加入注射用人血清 白蛋白水溶液（调节适宜pH值），高速剪切乳化得初乳；
[0011] (2)将初乳迅速转移至高压均质机中进行均质化处理，控制均质压力及循环周期 以得到符合要求的纳米乳；
[0012] (3)将纳米乳转移入薄膜蒸发器中蒸发除去有机溶剂；
[0013] ⑷过膜调整白蛋白纳米粒粒径，同时过滤除菌；
[0014] (5)收集纳米混悬液，加入冻干支架剂，冷冻干燥得到替尼类药物白蛋白纳米粒， 临用前用适宜的水性介质分散得可供注射用的液体制剂。
[0015] 本发明中，步骤（1)所述的有机溶剂是由与水不相溶的有机溶剂单独组成或者加 以水溶性有机溶剂组成的混合物；该溶剂系统可以包括但不限于二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸 乙酯、四氢呋喃、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、N-甲基吡 咯烷酮的一种或者几种的组合。
[0016] 本发明中，针对不同替尼药物的理化性质，步骤（1)的油相中可加入磷脂类增溶 剂，包括天然、半合成、全合成磷脂及其功能化衍生物；本发明将磷脂的用量降低到50% (w/w)以下，控制在10~45% (w/w)范围内，有利于减少磷脂毒性氧化物溶血卵磷脂的量， 提高制剂的安全性；
[0017] 本发明中，步骤（1)中增溶剂的选用范围可显著扩大，所述的增溶剂选自聚 氧乙烯菌麻油（CremophorEL)、泊洛沙姆188、吐温80、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯 (S 〇lut〇lHS15)、维生素 E聚乙二醇琥珀酸酯（TPGS)、胆酸钠、脱氧胆酸钠、蔗糖的高级脂肪 酸酯中的一种或多种；其中，CremophorEL的用量为1~15% (w/w)、泊洛沙姆188的用量 为1~5% (w/w)、吐温80的用量为(λ 1~5% (w/w)、SolutolHS15的用量为1~15% (w/ w)、TPGS的用量为0. 05~5% (w/w)、胆酸钠和脱氧胆酸钠的用量为0. 1~5% (w/w)、蔗 糖的高级脂肪酸酯的用量为1~15% (w/w);根据药物性质不同，上述增溶剂可加入到油相 中或白蛋白的水溶液中；
[0018] 为了增加白蛋白纳米粒对替尼类药物包封的稳定性，本发明步骤（1)的油相中可 加入油类稳定剂；所述油类稳定剂包括但不限于大豆油、椰子油、橄榄油、棉籽油、芝麻油、 油酸、中链甘油三酯、乙酸生育酚的一种或者几种的组合；稳定剂在油相中的体积分数为 0 ~50% (v/v)，优选为 0 ~30% (v/v);
[0019] 为了增加白蛋白纳米粒对替尼类药物包封的稳定性，本发明；步骤（1)中人血清 白蛋白水溶液需加入pH调节剂调节至适宜的pH值；所述pH调节剂包括但不限于有机酸、 有机碱或无机酸、无机碱。如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、甲酸、乙酸、柠檬酸、乳酸、富马酸、酒石 酸、山梨酸、琥珀酸、马来酸、抗坏血酸、草酸、苯磺酸、谷氨酸、天冬氨酸、氢氧化钠、氢氧化 钾、三乙醇胺、氨水等；调节水相pH范围为3~9,优选为4~7。
[0020] 为获得更优的粒径分布，本发明；步骤（1)中将油相和水相的体积比例控制在 1:5~1:1000范围内，优选为1:10~1:100 ;替尼类药物与白蛋白的质量比为1:1~1:50， 优选为1:4~1:20。
[0021] 为防止人血清白蛋白在制备过程中失活，本发明；步骤（1)所述的高速剪切乳化 的转速为5000~30000r/min，优选为10000~20000r/min ;搅拌时间为1~20min，优选为 3~lOmin ;用于提供高剪切作用的仪器包括高剪切混合器、高剪切搅拌器以及类似设备。
[0022] 本发明步骤⑵中，高压均质机均质的温度控制在-10~30°C的温度范围内，高压 均质压力为5000~30000psi，优选为10000~25000psi ;循环次数为2~40个周期，优选 为5~25个周期；
[0023] 为了适应中试生产或大生产的需要，本发明步骤（3)中所述的除去有机溶剂的 蒸发器为薄膜蒸发器