专利名称：药用化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及全身和非全身使用的新甾族化合物，并涉及其组合物，该组合物用于氧化应激反应(oxidative stress)和内皮机能障碍的疾病。具体地说本发明涉及具有抗炎性、免疫抑制和angiostatic活性(所谓的抗炎甾族化合物)，或胃肠道活性的甾族化合物结构的化合物。
按照本发明的化合物在治疗其中通常用所述甾族化合物产品治疗具有较大益处的疾病中在治疗学是有用的，即具有更好的耐受性和/或更好的疗效。
氧化应激反应意味着自由基或残基(radicalic)化合物的产生，自由基或残基化合物造成细胞和周围组织的伤害(病理生理学成人和儿童疾病的生物学基础(Pathophysiologythe biological basis for diseasein adults and children)，McCance & Huether 1998 48-54页)。
内皮机能障碍意味着与血管内皮有关的那些机能障碍。按照下文描述(病理生理学成人和儿童疾病的生物学基础，McCance &Huether 1998 1025页)，已知血管内皮的损伤是可以引起一系列影响各种器官和身体器官的病理过程的那些重要事件之一。
正如已知的那样，氧化应激反应和/或内皮机能障碍与各种此后报道的病理学有关。许多药物的毒性也可以引起氧化应激反应，这极大地影响了它们的性能。
所述病理事件具有慢性的、虚弱的特征并且往往是十分典型的老年特征。正如已经描述的，在所述的病理性疾病中使用的药物显示出一种显著的恶化特性。
由氧化应激反应和/或内皮机能障碍引起的病理学状态(存在于老年人中)的实例如下-对于心血管系统在一般情况下的心肌和血管局部缺血、高血压、中风、动脉粥样硬化等。
-对于结缔组织类风湿性关节炎和结缔组织的炎性疾病等。
-对于肺部系统哮喘和结缔组织的炎性疾病等。
-对于胃肠系统溃疡和非溃疡消化不良，肠道炎性疾病等。
-对于中枢神经系统阿尔滋海默氏病等。
-对于泌尿生殖系统阳痿、失禁。
-对于皮肤系统湿疹、神经性皮肤炎、唑疮。
-一般性的感染性疾病(参阅Schwarz-KB，Brady“在病毒感染期间的氧化应激反应评论(Oxidative stress during viral infectionAreview)”Free radical Biol.Med.21/5，641-649 1996)。
另外，可认为衰老的过程是一种真正的病理性疾病(参阅病理生理学成人和孩子疾病的生物学基础，71-77页)。
当给予患有与氧化应激反应和/或内皮机能障碍有关的病变的患者已知药物时，显示出较低的活性和/或较高的毒性。
例如这种情况在甾族药物中发生。
药物研究涉及寻找对上述那些病理性疾病具有改善的治疗指数(功效/毒性比)或较低的风险/利益比的新分子，其中很多药物的治疗指数降低了。实际上，在上述氧化应激反应和/或内皮机能障碍的疾病中许多药物显示较低的活性和/或较高的毒性。
众所周知，在治疗炎性疾病中甾族药物为首选药理学防治药物。这类药物，例如可以提及的有氢化可的松、可的松、泼尼松、泼尼松龙、氟氢可的松、去氧皮质酮、甲泼尼松龙(metilprednisolone)、曲安西龙、帕拉米松、倍他米松、地塞米松、曲安奈德、acetonide氟轻松、acetonide倍氯米松、乙酰氧基孕烯诺龙等对不同的器官引起显著的药物-毒理学作用，并且因为这个原因，它们的临床应用和中断停药使用引起一系列的副作用，其中一些副作用是十分严重的。例如见Goodman & Gilman，“治疗的药学基础(The pharmaceutical Basisof Therapeutics)”第九板，1459-1465页，1996。
在所述的毒性作用中，可以提及的有影响骨组织导致改变细胞的新陈代谢的毒性作用和骨质疏松高发生率；影响心血管系统的毒性作用，发生高血压的反应；影响胃肠道器官产生胃损害的毒性作用。
例如见Martindale“The extrapharmacopoeia”第30版，712-723页，1993。
该类甾族药物也属于胆酸类(biliary acid)，胆酸类一直用于治疗肝病和胆绞痛。熊去氧胆酸也用于某些肝机能障碍(源于胆的肝硬化等)。在存在胃肠道并发症(慢性肝损害、消化器官溃疡、肠道炎症等)时，它们的耐受性强烈地变坏。在胆酸类药的情况下，氧化应激反应显著影响药物的性能鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸的功效和耐受性显著地降低。特别是发现对肝脏的有害作用提高了。在甾族化合物中也可能涉及到治疗低脂血症(dislipidaemias)、激素紊乱、女性器官肿瘤的雌激素。所述甾族化合物类药物也显示如上所述的副作用，特别在肝的浓度高时。
按照上述先有技术，将治疗活性与副作用分开几乎是不可能的，见Goodman等，如上所述，在1474页。
从化学、药理学和生物化学的观点来看，甾族化合物是完全不同于抗炎的非甾族化合物的，因为非甾族化合物抗炎产物的药物-毒理学作用机制是基于抑制一种或多种环加氧酶(COX)，而甾族药物不影响COX并具有更复杂的、仍未完全清楚的药物-毒理学作用机制。
当然，众所周知，在药典中将这两组药物分类为不同的类别。
意识到需要获得显示改善的治疗性能的药物，即具有较低的毒性和/或较高的功效的药物，以便可以将它们给予在氧化应激反应和/或内皮机能障碍的病态中的患者而不显示先有技术药物的缺点。
令人惊讶地和意外地发现，在给予受氧化应激反应和/或内皮机能影响的患者或一般的老人甾族药物时所显示的前述技术上的问题可通过下文所述的一类新药而得以解决。
本发明的一个目的就是具有以下通式(I)和(II)的甾族化合物或它们的盐A-(B)bo-C-N(O)s(I)其中s为等于1或2的整数，优选s＝2；bo＝0或1；A＝R-T1-，其中R为如下定义的甾族药物残基，B＝-TB-X2-TBI-其中TB和TBI相同或不同；当在前体甾族化合物中的反应官能团为-OH时，TB＝(CO)；当在前体甾族化合物中的反应官能团为-COOH时TB＝X；X＝O、S、NR1C，R1C为H或具有1到5个碳原子的直链或支链烷基，或自由价；TBI＝(CO)tx或(X)txx，其中tx和txx具有0或1的值；前提是当txx＝0时tx＝1，而当txx＝1时tx＝0；X如上定义；X2为如下定义的二价桥键基团；C为二价-TC-Y-基团，其中当tx＝0时TC＝(CO)，当txx＝0时TC＝X，X如上定义；Y为 其中nIX为一个在0和3之间的整数，优选1；nIIX为一个在1和3之间的整数，优选1；
RTIX、RTIX′、RTIIX、RTIIX′彼此相同或不同，为H或直链的或支链的C1-C4烷基；RTIX、RTIX′、RTIIX、RTIIX′优选为H。
Y3为含有至少一个氮原子，优选含有一个或两个氮原子的饱和的、不饱和的或芳族杂环，所述环有5或6个原子。或Y为Y0，选自以下基团链烯氧基基团R′O，其中R′为直链或支链(可能时)C1-C20，优选含有1到6个碳原子，最优选2-4个碳原子，或为具有5到7个碳原子的亚环烷基，在该亚环烷基环上的一个或多个碳原子可以被杂原子取代，所述环可具有R′型侧链，R′如上定义；或为 其中n3为0到3的整数和n3′为1到3的整数； 其中n3和n3′具有上述的含义；
其中nf′为1到6的整数，优选为1到4的整数； 其中R1f＝H、CH3和nf为1到6的整数，优选1到4；优选Y＝-Y0＝R′O-，其中R′如上定义；优选R′为C1-C6亚烷基； 其中 其中TCI和TCII相同或不同，当在前体甾族化合物中的反应官能团为-OH时TCI＝(CO)；当在前体甾族化合物中的反应官能团为-COOH时TCI＝X；X如上定义；TCII＝(CO)tI或(X)tII，其中tI和tII具有0或1的值；前提是当tII＝0时tI＝1，而当tII＝1时tI＝0；X如上定义；Y′如上述Y的定义，但是具有三个自由价而不是两个，优选它选自 基团，其中R′为直链或支链C1-C20，优选含有1到6个碳原子，最优选2-4个碳原子；或一个饱和的，任选取代、具有5到7个碳原子的环或 其中n3为0到3的整数而n3′为1到3的整数； 其中n3和n3′具有上述的含义； 其中在一个碳原子上的一个氢原子被自由价取代； 其中nf′为1到6的整数，优选1到4；其中在一个碳原子上的一个氢原子被自由价所取代； 其中在一个碳原子上的一个氢原子被自由价所取代； 其中R1f＝H、CH3和nf为1到6的整数，优选1到4；其中在一个碳原子上的一个氢原子被自由价所取代；优选 其中R′为直链或支链C2-C4，在Y′中与-N(O)S基团共价连接的氧原子在C1式指出的自由键的末端；或Y′＝Y0如(I)定义，但是具有三个自由价而不是两个，B1＝-TBII-X2a其中X2a为一价基团，当tI＝0时TBII＝(CO)，当tII＝0时TBII＝X，X如上定义；X2为这样的二价基团，它使B-TB-X2-TBI的对应前体符合试验4或试验5，在前体中的TB和TBI自由价各为-OZ、-Z或 所饱和，ZI和ZII相同或不相同并且具有如上定义的Z值，这取决于是否TB和/或TBI＝CO或X，与t、t′、tx和txx的值有关；当b0＝0时C前体为-TC-Y-H类型，其中TC自由价为OZ、Z或 所饱和，ZI和ZII如上定义，并符合试验5；-X2a单价基团，以使BI-TBII-X2a的对应前体符合试验4或试验5，前体中的TBII自由价为OZ、Z或 所饱和，ZI和ZII相同或不相同并且具有如上定义的Z值，这取决于是否TBII＝CO或X，与tI和tII的值有关；A＝R-，具有下面的结构
其中在通式中提及的CH基团的氢或CH2基团的两个氢的取代中，可能存在以下取代基在1-2位可以有一个双键；在2-3位可以有以下取代基 在2位可以有Cl、Br；在3位可以有CO、-O-CH2-CH2-Cl、OH；在3-4位可以有一个双键；在4-5位可以有一个双键；在5-6位可以有一个双键；在5-10位可以有一个双键；在6位可以有Cl、F、CH3、-CHO；在7位可以有Cl、OH；在9位可以有Cl、F；在11位可以有OH、CO、Cl、CH3；在16位可以有CH3、OH、＝CH2；在17位可以有OH、CH3、OCO(O)ua(CH2)vaCH3、C≡CH或 其中ua为一个等于0或1的整数，va为一个0到4的整数；在16-17位可以有以下基团 R和R′，彼此相同或不同，可以为氢或1到4个碳原子的直链或支链烷基，优选R＝R′＝CH3；R″为-(CO-L)t-(L)t2-(XI0)t1-其中t、t1和t2为彼此相同或不同的整数，等于0或1，前提是当t＝0时，t2＝1和当t＝1时，t2＝0，并且当A不含有-OH基团时，t和t1，或t2和t1不能同时等于0；所述二价桥键基团L选自(CR4R5)na(O)nb(CR4R5)n′a(CO)n′b(O)n″b(CO)n_b(CR4R5)n″a其中na、n′a和n″a彼此相等或不等，为0到6的整数，优选1-3；nb、n′b、n″b和n_b彼此相等或不等，为0或1的整数；R4和R5彼此相等或不等，选自H、1到5个碳原子的直链或支链烷基，优选1到3个；X0I为如上定义的X；而R1C为一个1到10个碳原子的直链或支链烷基，或等于X2I，其中X2I等于-OH、CH3、Cl、N(-CH2-CH3)2、SCH2F、SH或 其中试验4如下它是一个分析测定，以10-4M浓度将B或B1的前体的甲醇溶液分批加入到DPPH(2，2-二苯基-1-苦基偕腙肼-自由基)的甲醇溶液中进行所述测定；避光、在室温下保存该溶液30分钟后，在517nm波长读出试验溶液和仅含有与试验溶液相同量的DPPH的溶液的吸收度；然后通过下式的方法计算由所述前体引起的对DPPH产生残基的抑制百分率(1-AS/AC)×100其中AS和AC分别为含有试验化合物+DPPH的溶液和仅含有DPPH的溶液的吸收度值。按照本试验的化合物的可接受的标准如下如果如上定义的抑制百分率高于或等于50％，B或B1前体化合物满足试验4；其中试验5如下这是一个分析测定，该测定如下进行将10-4M浓度的具有如上定义的饱和自由价的B或B1的前体的甲醇溶液或C＝-TC-Y-H的甲醇溶液分批加入到由2mM脱氧核糖水溶液(含有100mM磷酸盐缓冲液)与1mM FeII(NH4)2(SO4)2的混合物形成的溶液中；将该溶液在37℃恒温保存一小时后，按照顺序加入2.8％三氯乙酸水溶液和0.5M硫代巴比土酸等份液，在100℃加热15分钟，然后在532nm处读出该试验溶液的吸收度；通过下式的方法计算B或B1的前体或C＝-TC-Y-H引起的对由FeII产生的残基抑制的百分率(1-AS/AC)×100其中AS和AC分别为含有试验化合物和铁盐的溶液和仅含有铁盐的溶液的吸收度值，当B或B1或C＝-TC-Y-H的前体(具有如上定义的饱和的自由价)的如上定义的抑制百分率高于或等于50％时，所述化合物符合试验5；前提是当bo＝0和C＝-TC-Y0-(其中Y0的自由价如上指出为饱和的)，s＝1或2时，在式(I)化合物中排除A＝R-的药物，其中R如上定义。
满足试验4的B或B1的前体化合物(分别为式(I)和(II)中X2或X2a残基的前体)优先选自以下类型的化合物选自以下的氨基酸L-肌肽(式CI)、鹅肌肽(CII)、硒代半胱氨酸(CIII)、硒代蛋氨酸(CIV)、青霉胺(CV)、N-乙酰基青霉胺(CVI)、半胱氨酸(CVII)、N-乙酰基半胱氨酸(CVIII)、谷胱甘肽(CIX)或其酯，优选乙基酯或异丙基酯 选自以下的羟基酸没食子酸(式DI)、阿魏酸(DII)、2，5-二羟基苯甲酸(DIII)、柠檬酸(DIV)、咖啡酸(DV)、氢化咖啡酸(DVI)、对-香豆酸(DVII)、香草酸(DVIII)、绿原酸(DIX)、犬尿喹啉酸(DX)、丁香酸(DXI) 芳香的和杂环的一或多元醇，选自以下去甲二氢愈创木酸(EI)、 皮黄酮(EII)、儿茶素(EIII)、山茶酚(EIV)、sulphurethyne(EV)、抗坏血酸(EVI)、异抗坏血酸(EVII)、氢醌(EVIII)、绵子酚(EIX)、还原酸(Ex)、甲氧基氢醌(EXI)、羟基氢醌(EXII)、没食子酸丙酯(EXIII)、蔗糖(EXIV)、维生素E(EXV)、维生素A(ExvI)、8-羟基喹啉(quinolol)(EXVII)、3-叔丁基-4-羟基苯甲醚(EXVIII)、3-羟基黄酮(EXIX)、3，5-叔丁基-对羟基甲苯(EXX)、对-叔丁基苯酚(EXXI)、噻吗洛尔(EXXII)、希波酚(EXXIII)、巯基乙酸3，5-二叔丁基-4-羟基苄酯(EXXIV)、4′-羟基丁酰苯胺(EXXV)、愈创木酚(EXXVI)、母育酚(EXXVII)、异丁子香酚(EXXVIII)、丁子香酚(EXXIX)、3，4-亚甲二氧基苯甲醇(EXXX)、别嘌呤醇(EXXXI)、conyferyl醇(EXXXII)、4-羟基乙氧苯基醇(EXXXIII)、香豆醇(EXXXIV)、姜黄素(EXXXV) 芳香胺或杂环胺，选自以下N，N′-二苯基-对苯二胺(MI)、乙氧基喹(MII)、硫堇(MIII)、羟基脲(MIV) 至少含有一个游离酸官能团的化合物，选自以下3，3′-硫代二丙酸(NI)、反丁烯二酸(NII)、二羟基顺式丁烯二酸(NIII)、硫辛酸(NIV)、乙二胺四乙酸(NV)、胆红素(NVI)、3，4-亚甲基二氧基苯乙烯酸(NVII)、3，4-亚甲二氧基苯甲酸(NVIII) 按照本领域已知的方法制备上述B或B1的前体物质，例如“TheMerck Index，12版(1996)”中所述的方法，该文献通过引用结合到本文中。当可以获得时，可以使用对应的异构体或光学异构体。
符合试验5的B或B1的前体化合物(分别为式(I)和(II)中X2和X2a残基的前体)优先选自以下类型的化合物氨基酸天冬氨酸(PI)、组氨酸(PII)、5-羟基色氨酸(PIII)、4-噻唑烷甲酸(PIV)、2-氧代-4-噻唑烷甲酸(PV) 一或多元醇或硫醇2-硫代尿嘧啶(QI)、2-巯基乙醇(QII)、esperidine(QIII)、司骨化醇(QIV)、1-α-OH维生素D2(QV)、flocalcitriol(QVI)、22-氧杂骨化三醇(QVII)、用维生素A残基酯化的维生素D3衍生物(QVIII)、式(QIX)的化合物、24，28-亚甲基-1α-羟基维生素D2(QX)、由1α，25-二羟基维生素D2衍生的化合物(QXI)、2-巯基咪唑(QXII) 琥珀酸(RI) 按照先有技术已知的方法和描述于“The Merck Index，12a Ed.(1996)”(通过引用结合到本文中)中的方法制备上述P、Q和R的组B或B1的前体化合物。
按照JP 93039261(见C.A.119 117617)所述制备具有视黄酸(QVIII)的维生素D3衍生物；按照EP 562,497制备式(QIX)化合物；按照EP 578,494制备24，28-亚甲基-1α-羟基维生素D2(QX)；按照EP549,318制备二羟基维生素D2的衍生化合物(QXI)。
优选满足试验4的B或B1的前体化合物。
进行鉴别B或B1的前体的试验详述如下试验4是一个比色分析试验，该试验旨在确定B或B1的前体是否抑制由DPPH(2，2-二苯基-1-苦基偕腙肼)产生残基(M.S.Nenseter etAl.，Atheroscler.Thromb.15，1338-1344，1995)。制备100uM实验物质的甲醇溶液，并且将所述溶液每种等份液加入到0.1M DPPH的甲醇溶液中。在室温下、避光贮存该溶液30分钟后，在517nm波长读取它们的吸收度，以及在同样浓度的相应DPPH溶液的吸收度。测定相对于与试验溶液浓度相同的DPPH溶液的吸收度的降低。试验化合物在抑制DPPH残基的形成中的效力用下式表示(1-AS/AC)×100其中AS和AC分别为含有试验化合物和DPPH的溶液与仅含有DPPH的溶液的吸收度值。在所指定的浓度(10-4M)下，当抑制由DPPH产生的残基的百分率(按照上述等式表示的百分率)等于或大于50％时，B或B1的化合物前体满足试验4。
如果B或B1的前体不满足试验4，则进行试验5。
试验5为一个比色分析试验，其中将0.1ml等份的10-4M的试验产物的甲醇溶液加入到含有一种溶液的试管中，所述溶液由0.2ml2mM脱氧核糖、0.4ml(pH7.4)的100mM磷酸盐缓冲液和0.1ml 1mMFeII(NH4)2(SO4)2在2mM HCl中形成。然后在37℃保存该试管1小时。然后，在每支试管中顺序加入0.5ml 2.8％三氯乙酸水溶液和0.5ml0.1M的硫代巴比土酸水溶液。向一支仅含有上述反应物水溶液的试管中加入0.1ml甲醇形成参比空白。封闭所述试管并在100℃的油浴中加热15分钟。出现粉红色，粉红色的强度与脱氧核糖经历基团氧化降解的量是成比例的。在室温下冷却该溶液并且相对于空白在532nm读取它们的吸收度。通过下式的方法测定由B或B1的前体或C＝-TC-Y-H引起的对由FeII产生残基的抑制(1-AS/AC)×100其中AS和AC分别为含有试验化合物+铁盐的溶液与仅含有铁盐的溶液的吸收度值，当由B或B1的前体或C＝-TC-Y-H引起的如上定义的残基产生的抑制百分率等于或大于50％时，所述化合物满足试验5。
在式(III)中Y3优先选自以下 最优选Y3为在2和6位被取代的Y12(吡啶基)。所述键合也可以在不对称位，如Y12(吡啶基)也可以在2和3位发生取代；Y1(吡唑)可以被3，5-二取代。
按照式(I)和(II)的本发明化合物可以转化成为相应的盐。例如形成盐的一个方法如下当在分子中存在一个具有足以成盐的碱性的氮原子时，它可以在如乙腈、四氢呋喃的有机溶剂中与等分子量的对应有机或无机酸反应。
在本发明化合物的通式中优选存在式(III)的Y或Y′。
有机酸的实例有草酸、酒石酸、马来酸、琥珀酸、柠檬酸。
无机酸的实例为硝酸、盐酸、硫酸、磷酸。
在所述甾族化合物前体中优选R″＝-CO-CH2OH、-CH(CH3)-CH2-CH2-COOH。
在所述甾族化合物前体中，优选那些在3位或在11位具有羟基功能基或在R″中在终端位具有一个羟基或羧基功能基的甾族化合物前体。
能够涉及到并且优选的A的甾族化合物前体列在下面，按照本领域已知的方法可以获得。
例如，作为前体和各自的方法，可以涉及到那些描述于1996年第12版The Merck Index中的前体和方法，1996年第12版The MerckIndex，通过引用结合到本文中。所述前体(按照Merck命名法)如下，其中H2、H、R、R′、R″具有在本文列出的化合物中所述的含义布地奈德、氢化可的松、阿氯米松、阿尔孕酮、倍氯米松、倍他米松、氯泼尼松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龙、氯泼尼醇、可的松、皮质酮、醋噁唑龙、地奈德、去羟米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龙、二氟泼尼酯、氟扎可特、氟氯奈德、氟米松、氟尼缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、氟考丁酯、氟可龙、氟米龙、醋酸氟培龙、醋酸氟泼尼定、氟泼尼龙、氟氢缩松、福莫可他、哈西奈德、丙酸卤倍他索、卤米松、醋酸卤泼尼松、氢可他酯、氯替泼诺Etabonate、甲羟松、甲泼尼松、甲泼尼龙、莫米松糠酸酯、帕拉米松、泼尼卡酯、泼尼松龙、25-二乙基氨基乙酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松、强的松龙戊酸酯、泼尼立定、利美索龙、曲安西龙、曲安奈德、21-乙酰氧基孕烯醇酮、可的伐唑、安西奈德、丙酸氟替卡松、马泼尼酮、替可的松、己曲安奈德、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、mitatrienediol、莫克雌醇、炔雌醇、雌二醇、美雌醇。
意外地，在氧化应激疾病中，与所述前体甾族化合物相比，式(I)和(II)的本发明产物具有改良的治疗指数。
为了阐述的目的，上述试验涉及到以下化合物(见该说明书附表)试验4(B或B1的前体试验，参阅表III)N-乙酰基半胱氨酸100％抑制由DPPH引起的残基的产生。因此，它满足试验4并且可以用作B或B1的前体。
4-噻唑烷甲酸不能抑制由DPPH引起的残基的产生。因此，它不能满足试验4，而如果它满足试验5则它可以用作B或B1的前体。试验5(B和B1的前体或C＝-TC-Y-H前体的试验，参阅表IV)4-噻唑烷甲酸满足试验5，因为其抑制百分率为100％。因此该化合物可以用作式(I)中B或B1的前体。
在所述前体药物的相同的治疗适应症中可以使用本发明化合物而具有上述优点。
按照此后所述的合成方法制备所述的式(I)和(II)化合物。
每种方法的反应选择取决存在于该甾族化合物分子中、在B或B1的前体化合物中(如上所述B或B1可以是二价的或一价的)和在C的前体化合物中的反应基团。
用先有技术所熟知的方法进行所述反应，该反应可在如前定义的甾族化合物、B或B1的前体化合物和C的前体化合物中获得键合。
当该甾族化合物的反应官能团(如-COOH，-OH)参与共价键(如酯、酰胺、醚型)时，所述官能团可以用先有技术所熟知的方法恢复。
以下报道获得本发明化合物的一些合成方案A)式(I)化合物的合成1.通过所述甾族化合物与B的化合物前体之间的反应获得的化合物的合成1a.当所述甾族化合物含有一个羧基功能基(通式R-COOH)并且使自己连接到该药物羧基官能团上的B的前体化合物的官能团具有式XZ时，X如前定义而Z＝H，进行的反应取决存在于B的前体化合物中的第二反应基团(second reactive group)的性质。
1a.1当存在于B的前体化合物中的第二反应基团为羧基基团时，合成的常规方案预期首先形成R-COHal甾族化合物(Hal＝Cl，Br)的酰基卤化物，接着与B的前体化合物的HX基团反应(IA.1)X2、TB如前定义。
当在所述的两个反应化合物中存在其它官能团COOH和/或HX时，必须在反应前按照本领域已知的方法将它们保护起来；例如按照由Th.W.Greene编辑的出版物“有机合成中的保护基团”HarwardUniversity Press，1980中所述。
按照先有技术已知的方法制备RCOHal酰基卤，例如由亚硫酰氯或草酰氯、PIII或PV的卤化物在惰性溶剂如甲苯、氯仿、DMF等中、在所述反应条件下制备。
准确地说，如果B的前体化合物中的HX基团为NH2、OH或SH，按照以上所述，首先将式R-COOH的甾族化合物转化为对应的酰基卤化物RCOHal，然后在有机碱如三乙胺、吡啶等的存在下、在0-25℃的温度范围内、在所述反应条件下、在惰性溶剂如甲苯、四氢呋喃等中与B的前体化合物的HX基团反应。
作为前述合成的一种选择，在如DMF、THF、氯仿等的溶剂中、在-5℃-50℃的温度范围内、可以用一种激活羧基基团的物质处理式R-COOH的甾族化合物，所述试剂选自N，N′-羰基二咪唑(CDI)、N-羟基苯并三唑和二环己基碳化二亚胺，并且使获得的化合物与B的前体化合物中的反应官能团原位反应获得式(IA.1)化合物。
1a.2当B的前体化合物含有两个官能团XZ时，这两个官能团彼此相同或不同，X如前定义和Z＝H时，首先用一种如上在1a.1中所述的激活羧基基团的物质处理具有式R-COOH的甾族化合物，然后在对两个反应基团HX中的一个进行保护后，例如通过与乙酰基或叔丁氧基羰基反应进行保护后，与B的前体化合物反应，在合成结束时恢复最初的官能团。该方案如下其中X、TB、X2如前定义而G为HX官能团的保护基团。2.硝酰基衍生物的合成。2a.1当在前面1a步骤结束获得的化合物具有通式(IA.1)时，可以将该酸转化为对应的钠盐，然后按照已知的先有技术的方法，例如按照以下合成方案之一制备最终的化合物其中TB、X2、TBI、TC如前定义，R4选自Cl、Br，Y如前定义，X1为没有氧原子的Y残基，R3为Cl、Br、碘、OH。当R3＝OH时，使所述式(1A.1b)化合物卤化，例如用PBr3、PCl5、SOCl2、PPh3+I2卤化，然后在如乙腈、四氢呋喃的有机溶剂中与AgNO3反应。如果R3为Cl、Br、碘，所述式(1A.1b)化合物如上所述直接与AgNO3反应。其中R5＝OH或NHR1C、R1C、R3而其它符号如前定义。
当X1为直链C4烷基时，使相应的酸R-T1-TB-X2-COOH在卤化试剂如CBr4或N-溴琥珀酰亚胺的存在下、在四氢呋喃中与三苯基膦反应，得到其中R3＝Br的化合物(1A.1c)。
2a.2当在前面1a步骤结束获得的化合物具有通式(IA.2)时，通过处理式Hal-X1-COOH的卤基-羧酸获得对应的硝酰基衍生物，其中X1如前定义，如1A.1所述首先用一种活化羧基基团的试剂，然后用式(IA.2)化合物处理所述卤基-羧酸，获得一种卤素衍生物，分离该衍生物，然后将其溶解在有机溶剂中，(参阅段落2a.1)，并且用硝酸银处理。整个反应方案如下其中TB、X2、TBI、TC、Y如前定义。
或者，可以使用卤化物Hal-X1-COCl，其中Hal优选为溴，使该卤化物与式(IA.2)化合物反应。
1b.当该甾族化合物的反应官能团为-OH(通式R-OH)时，在B的前体化合物中存在的两个官能团可以为如下的官能团1b.1一个与甾族化合物中的OH官能团反应的羧基基团，和一个HX基团，B的前体化合物中的后一反应基团，与所述甾族化合物官能团相同或不同。B的前体化合物的结构式为H-X-X2-COOH型，其中X和X2如前定义。按照先有技术已知的方法保护B的前体化合物的H-X-官能团并如上所述按照以下方案使羧基基团发生反应(1B.1)在反应结束时恢复B的前体化合物的HX官能团。
1b.2当B的前体化合物含有两个羧基基团时，在前面1a.1所述的条件下，它与等摩尔量的活化羧基基团的物质反应，然后与所述甾族化合物分子的反应官能团OH反应。存在于所述两种化合物中的HX型的可能的其它反应官能团必须按照前述方法仔细地保护。最后获得式R-TB-X2-COOH(1B.2)的化合物。
2b.硝酰基衍生物的合成。
2b.1为了由在1b.1中所述的合成结束时获得的式R-TB-X2-X-H(1B.1)化合物作为起始原料获得最终的硝酰基衍生物，使该(1B.1)化合物与式Hal-X1-COOH的卤代酸反应，该卤代酸已经按照上文段落1a.1中所述处理，或与该对应的卤代酸氯化物反应。将产生的化合物溶解在一种如乙腈或四氢呋喃的有机溶剂中，并与硝酸银反应。
2b.2为了由在1b.2中所述的合成结束时获得的式R-TB-X2-COOH(1B.2)化合物作为起始原料获得最终的硝酰基衍生物，将所述酸转变为对应的钠盐，该钠盐与R4-X1-R3化合物反应，该化合物已在前面段落2a.1的反应A.方案中定义，按照相同的方法获得其中所述的最终硝酰基衍生物。作为选择，当X1为直链C4烷基时，在卤化试剂如CBr4或N-溴琥珀酰亚胺的存在下、在四氢呋喃中，所述酸(1B.2)与三苯基膦反应并将产生的化合物溶解在如乙腈、四氢呋喃的有机溶剂中与硝酸银反应。
2b.3作为按照1b.1和2b.1的合成方法的一种替代方法，这也是可能的，即在第一步B HX-X2-COOH的前体化合物的HX-官能团与式Hal-X1-CO-Cl的氢卤酸的酰基氯反应，其中Hal优选为Br，然后使如此获得的化合物的羧基官能团与式R-OH的甾族化合物反应。在第三步和最后一步，按照描述于2b.1中的方法用-ONO2取代-Hal基团。该反应方案如下其中TC、TBI、TB、X2、X1、Y如前定义。
在前面的方案中，作为一种选择所述硝化可以地在式(2B.3)的酸化合物上进行。
在上述方法中，当b0＝0所述甾族化合物与式(I)化合物的B前体反应不能进行，并且在与C的前体化合物反应时，不能直接使用具有其反应官能团的甾族化合物。B)式(II)化合物的合成1a.当所述甾族化合物反应官能团为羧基基团并且B1的前体化合物仅含有一个X如前定义的式XH的功能性反应基团时，首先将所述甾族化合物转化为对应的酰基卤化物(RCOCl)，或按照1a.1所述用活化羧基基团的物质处理，然后与氢卤酸化合物的HX官能团反应，所述官能团与存在于B1的前体化合物中的官能团相同或不同，所述卤代酸具有下式 其中X1′为如上定义的没有氧原子的Y′，通过它连接-NO2基团，X和Hal如前定义。
化合物(IIA.1)可以用先有技术的已知方法获得。
例如当X＝NH时，可以由相应的羟基-氨基酸获得，通过相应的叔丁氧基羰基衍生物保护(amini)基团并按照在2a.1中卤化化合物(1A.1b)所述将羟基官能团转化为卤素基团。
该化合物中游离的羧基官能团产生于与该甾族化合物分子的反应，按照前面在1a.1中对式R-COOH甾族化合物与B的前体化合物之间的反应阐述，所述游离羧基官能团与存在于B1的前体化合物分子中的官能团反应。在最后一步，通过将AgNO3加入到该化合物的有机溶剂中，用ONO2基团取代存在于基团X1中的卤原子(Hal)。该反应方案如下，由RCOCl酰卤示例性原料 当所述甾族化合物反应官能团为一个OH基团并且B1的前体化合物仅含有一个式XH的功能性反应基团时，其中X如前定义，等于或不等于OH，由一种下式的卤代二酸化合物开始进行所述合成 其中X1′如上定义，按照在2a.1中卤化化合物(1A.1b)所述，由对应的羟基二酸制备所述化合物。在前面描述于1a.1的条件下，用等摩尔量的活化羧基基团的物质处理该卤代二酸化合物，然后使其与甾族化合物分子中的反应官能团反应。在随后的步骤中，按照前面第一步所进行的，用活化剂处理第二个羧基官能团，并且按照以下方案与B1的前体化合物反应 然后按照以上所述用ONO2基团取代卤原子。3.式(I)的亚硝基(s＝1)衍生物的合成。3a.1在一种由水与四氢呋喃的混合物形成的溶剂中、在盐酸的存在下，使其中R3＝OH的式(1A.1b)化合物与亚硝酸钠反应。在先有技术中广泛地阐述了该反应。该通用方案如下3a.2如果在A步骤结束末获得的化合物具有式(IA.2)，通过处理X1如前定义的式HO-X1-COOH的羟基酸获得对应的亚硝基衍生物，按照1a.1所述首先用一种活化羧基基团的物质处理，然后与1A.2反应并且按照3a.1所述用亚硝酸钠处理获得的产物。3b.1为了由在1b.1所述的合成结束时获得的式R-TB-X2-XH(1B.1)化合物开始获得亚硝基衍生物，按照3a.2所述使该化合物(1B.1)与羟基酸反应。3b.2为了由在1b.2所述的合成结束时获得的式R-TB-X2-COOH(1B.2)化合物获得亚硝基衍生物，将所述酸转化为钠盐并按照前面所述与化合物Hal-X1-OH反应，并按照3a.1所述处理获得的醇4)式(II)亚硝基衍生物的合成4a.1当所述甾族化合物含有一个羧基功能基(通式R-COOH)并且B1的前体化合物仅含有一个X如前定义的式XH的功能性反应基团时，首先将R-COOH转化为对应的酰基卤化物或按照1a.1所述用一种活化羧基基团的物质处理，然后与羟基酸化合物的HX官能团反应，所述官能团与存在于B1的前体化合物中的官能团相同或不同，所述羟基酸有下式 其中X1′为如上定义的没有氧原子的Y′，通过它连接-NO基团，X如前定义。该化合物中游离的羧基官能团产生于与所述甾族化合物分子的反应，按照前面在1a.1中对R-COOH酸与B的前体化合物之间反应的阐述，所述游离羧基官能团与存在于B1的前体化合物分子中的官能团反应。在最后一步，按照3a.1所述将所述醇转化为亚硝基衍生物。该反应方案如下，由RCOCl酰卤作为示例开始合成 4b.当所述甾族化合物的反应官能团为一个OH基团并且B1的前体化合物仅含有通式XH的功能性反应基团(在HX中，X如前定义，等于或不等于OH)时，由一种下式的卤代二酸化合物作为原料开始进行所述合成 X′1如上定义，在前面描述于1a.1的条件下，用等摩尔量的活化羧基基团的物质处理所述羟基二酸化合物，然后与所述甾族化合物反应官能团反应。在随后的步骤中，按照前面第一步所进行的，用一种活化试剂处理第二个羧基官能团，并且按照以下方案与B1的前体化合物反应 按照3a.1所述使获得的化合物反应。
按照本领域众所周知的方法将本发明的目标化合物和常规的赋形剂配制成用于胃肠外、口服使用和局部使用的相应的药用组合物；例如见书籍“Remington’s Pharmaceutical Sciences 15a Ed”。
在这些制剂中，与使用的对应的前体药物相比，以摩尔计的所述活性成分的量是相同的，或更低。
每日可以给予的剂量为所述前体药物的剂量，或任选较低的剂量。可以在本领域的出版物中发现所述日剂量，例如在“Physician’sDesk reference”中。
下列实施例的目的是阐述本发明，而不应认为是限制本发明。实施例1制备3-[4-[(3 α，5β，7β)-3，7-二羟基colan-24-oiloxy]-3-甲氧基苯基]-2-丙烯酸4-硝酰氧基(nitroxy)丁酯 其中所述甾族化合物前体为式(XL)的熊去氧胆酸而B的前体为式(DII)的阿魏酸 a)3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-丙烯酸4-溴丁酯的合成向3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-丙酸(10g，51.5mmoles)的THF(400ml)溶液中加入三苯膦(2.7g，10.3mmoles)和四溴化碳(34.16g，10.3mmoles)并且在磁力搅拌下使该溶液在室温保持48小时。过滤该固体，然后在减压下蒸发。通过硅胶层析，用正己烷/乙酸乙酯7/3洗脱，纯化获得的粗产物。获得9g 3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-丙酸4-溴丁酯。M.p.＝86℃-89℃。b)3-[4-[(3α，5β，7β)-3，7-二羟基colan-24-oiloxy]-3-甲氧基苯基]-2-丙烯酸4-溴丁酯的合成在搅拌下，向溶解于氯仿(25ml)和二甲基乙酰胺(25ml)的(3α，5β，7β)-3，7-二羟基colan-24-oic酸(2.9g，7.38mmoles)溶液中加入3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-丙烯酸4-溴丁酯(2.73g，8.28mmoles)。使该溶液在0℃冷却，保持搅拌，加入N，N′-二环己基碳化二亚胺(2g，9.7mmoles)和4-二甲基氨基吡啶(100mg，0.8mmoles)。1小时后，加热该混合物至室温，在24小时后过滤沉淀，在减压下蒸发溶剂。用乙酸乙酯(150ml)处理该残余物并用水(3×100ml)洗涤。在用硫酸钠有机相脱水(anhydrified)后，蒸发溶剂。通过硅胶柱层析，用正己烷/乙酸乙酯1/9洗脱，纯化获得的粗产物。获得2.5g 3-[4-[(3α，5β，7β)-3，7-二羟基colan-24-oiloxy]-3-甲氧基苯基-2-丙烯酸4-溴丁酯。c)3-[4-[(3α，5β，7β)-3，7-二羟基colan-24-oiloxy]-3-甲氧基苯基]-2-丙烯酸4-硝基丁酯的合成在搅拌下，向3-[4-[(3α，5β，7β)-3，7-二羟基colan-24-oiloxy]-3-甲氧基苯基]-2-丙烯酸4-溴丁酯(2.3g，3.27mmoles)的乙腈(20ml)和四氢呋喃(5ml)溶液中加入硝酸银(0.84g，4.94mmoles)并在磁力搅拌下加热该混合物至80℃6小时。当反应完成时过滤沉淀并蒸发溶剂。通过硅胶柱层析，用二氯甲烷/乙酸乙酯3/7洗脱，纯化获得的残余物。获得1.5g 3-[4-[(3α，5β，7β)-3，7-二羟基colan-24-oiloxy]-3-甲氧基苯基]-2-丙酸4-硝基丁酯。总收率为32％。元素分析计算值％C 66.55％H 8.08％N 2.04％实测值％C 66.59％H 8.14％N 1.99％实施例2制备3-[4-[(3α，5β，7α)-3，7-二羟基colan-24-oiloxy]-3-甲氧基苯基]-2-丙烯酸4-硝基丁酯 其中所述甾族化合物前体为式(XLI)的鹅去氧胆酸而B的前体为式(DII)的阿魏酸 按照实施例1报道的方法制备该化合物。总收率为28％。元素分析计算值％C 66.55％H 8.08％N 2.04％实测值％C 66.64％H 8.13％N 1.94％实施例3制备(11β)-11，17-二羟基-21[N-乙酰基-S-(4-硝酰氧基丁酰基)半胱氨酰氧基]-孕甾-1，4-二烯-3，20二酮 其中前体甾族化合物为式(XLII)的泼尼松龙而B的前体为式(CVIII)的N-乙酰基半胱氨酸 a)N-乙酰基-S-(4-溴丁酰基)半胱氨酸的合成在室温下、搅拌4-溴丁酸(5.1g，30.6mmoles)和1，1′-羰基二咪唑(5.61g，34.6mmoles)的氯仿(50ml)溶液1小时。在搅拌下，向该反应混合物中加入溶解于N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中的N-乙酰基半胱氨酸(5g，30.6mmoles)和乙醇钠(50mg)。24小时后，用1％HCl和盐水洗涤该溶液，用硫酸钠使有机相脱水并在减压下蒸发。通过硅胶柱层析，用乙酸乙酯/氯仿7/3洗脱，纯化获得的粗产物。得到N-乙酰基-S-(4-溴丁酰基)半胱氨酸。b)(11β)-11，17-二羟基-21[N-乙酰基-S-(4-溴丁酰基)半胱氨酰氧基]-孕甾-1，4-二烯-3，20二酮的合成向冷却至0℃并持续搅拌的N-乙酰基-S-(4-溴丁酰基)半胱氨酸(2.7g，8.64mmoles)和(11β)-11，17，21-三羟基孕甾-1，4-二烯-3，20二酮(3.2g，8.86mmoles)的四氢呋喃(100ml)溶液中加入N，N′-二环己基碳化二亚胺(1.9g，9.2mmoles)和4-二甲基氨基吡啶(100mg，0.8mmoles)。在1小时后加热该混合物至室温，24小时后过滤沉淀，减压下蒸发溶剂。用乙酸乙酯(150ml)处理该残余物并用水(3×100ml)洗涤。在用硫酸钠使有机相脱水后，蒸发溶剂。通过硅胶柱层析，用氯仿/乙酸乙酯3/7洗脱，纯化获得的粗产物。得到0.94g(11β)-11，17-二羟基-21[N-乙酰基-S-(4-溴丁酰基)半胱氨酰氧基]-孕甾-1，4-二烯-3，20二酮。c)(11β)-11，17-二羟基-21[N-乙酰基-S-(4-硝酰氧基丁酰基)半胱氨酰氧基]-孕甾-1，4-二烯-3，20二酮的合成在搅拌下向(11β)-11，17-二羟基-21[N-乙酰基-S-(4-溴丁酰基)半胱氨酰氧基]-孕甾-1，4-二烯-3，20二酮(0.8g，1.28mmoles)的乙腈(10ml)和四氢呋喃(5ml)溶液中加入硝酸银(0.4g，2.35mmoles)并且在磁力搅拌下加热该混合物至80℃20小时。在该反应结束时过滤沉淀并蒸发该溶剂。通过硅胶柱层析，用二氯甲烷/乙酸乙酯3/7洗脱，纯化获得的粗产物。得到(11β)-11，17-二羟基-21[N-乙酰基-S-(4-硝酰氧基丁酰基)半胱氨酰氧基]-孕甾-1，4-二烯-3，20二酮。总产率为12％元素分析计算值％C 56.59％H 6.33％N 4.40％S 5.04％实测值％C 56.63％H 6.38％N 4.36％S 5.01％实施例4制备(11β)-11，17-二羟基-21[N-乙酰基-S-(4-硝酰氧基丁酰基)半胱氨酰氧基]-孕甾-4-烯-3，20二酮 其中前体甾族化合物为式(XLIII)的氢化可的松而B的前体为式(CVIII)的N-乙酰基半胱氨酸 按照实施例3报道的方法制备该化合物。总收率为15％。元素分析计算值％C 56.37％H 6.78％N 4.39％S 5.02％实测值％C 56.39％H 6.81％N 4.31％S 4.93％实施例5制备(11β，16α)-9-氟-11，17-二羟基-21[N-乙酰基-S-(4-硝酰氧基丁酰基)半胱氨酰氧基]-16-甲基孕甾-1，4-烯-3，20二酮 其中前体甾族化合物为式(X-LIV)的地塞米松而B的前体为式(CVIII)的N-乙酰基半胱氨酸 按照实施例3报道的方法制备该化合物。总收率为17％。元素分析计算值％C 55.68％H 6.18％N 4.19％S 4.79％实测值％C 55.72％H 6.22％N 4.15％S 4.75％药理学试验实施例急性毒性通过给予一组10只体重20g的大鼠单剂量的每种试验化合物评估急性毒性，以羧甲基纤维素2％w/v的水悬浮液通过套管口服给药。
保持观察所述动物14天。即使在给予100mg/kg的剂量之后，该组动物没有一只出现毒性症状。实施例F1在体内模型中用Nw-硝基-L-精氨酸-甲酯(L-NAME)的实验前体甾族化合物和按照本发明的对应化合物对由L-NAME引起的内皮机能障碍的作用。
该试验采用的实验模型是根据J.Clin.Investigation 90，278-281，1992中所述的模型。
通过测定由于给予L-NAME引起的肝损害(GPT增加)和血管内皮或心血管损害(高血压)评估内皮机能障碍。
按照以下所述将动物(Long Evans大鼠，平均重量350-450g)分组。接受L-NAME的动物组用以400mg/升的浓度溶解于饮用水的所述化合物处理4周。建立以下各组(每组10只动物)A)对照组10组处理只用载体(生理溶液)，20组处理载体+L-NAME，B)药物处理组30组处理载体+药物；40组处理载体+药物+L-NAME。
在本试验中筛选的药物为氢化可的松、地塞米松、泼尼松龙、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸和按照本发明的对应衍生物。
在分别用氢化可的松、地塞米松、泼尼松龙及其按照本发明的对应化合物处理的那些大鼠组中，测量血压。
在分别用熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸及其按照本发明的对应化合物处理的那些大鼠组中，测量GPT。
每天一次通过腹膜内途径给予每种药物，持续4周。
在4周末禁止接近水并在24小时后处死动物。
在最后一次给药后四小时测量血压。
按照所述通过L-NAME引起的心血管作用(增加血压)测定血管内皮的损害。在处死后通过评估谷丙转氨酶(GPT增加)测定肝损害。
在表I和II中报告结果。％血压和GPT值与在第1个对照组所测得的对应值有关。在该组中血压的平均值为105mmHg。
获得的结果显示所述甾族化合物前体引起肝损害(熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸)和动脉高血压(氢化可的松、地塞米松、泼尼松龙)。处理的大鼠的GPT值和血压值与在缺少L-NAME下用药物处理的对应组和用L-NAME处理的对照组相比较高。本发明的产物与对应的前体相比具有更好的耐受性，甚至在未用L-NAME预处理的动物中也是如此。实施例F2试验4某些用于制备B或B1的前体的物质抑制DPPH产生残基该方法是以比色分析试验为基础的，在该试验中使用DPPH(2，2-二苯基-1-苦基偕腙肼)作为形成残基的化合物(M.S.Nenseter等，Atheroscler.Thromb.15，1338-1344，1995)。
首先制备终浓度为100uM的试验物质的甲醇溶液。将这些溶液的每一种的0.1ml加入到等份的1ml 0.1M DPPH的甲醇溶液中并使终体积为1.5ml。避光、在室温下贮存该溶液30分钟后，在517nm波长读出吸收度。测定该吸收度相对于含有同样浓度DPPH的溶液的吸收度的降低。试验化合物抑制残基产生的效力，或者说抗残基活性用下式表示(1-AS/AC)×100其中AS和AC分别为含有试验化合物加DPPH的溶液与仅含有DPPH的溶液的吸收度值。
如果化合物抑制DPPH产生残基的百分率等于或大于50％时，按照本发明使用作为B或B1的前体的化合物满足试验4。
在所述试验中，在表III中报告以下化合物所获得的结果N-乙酰基半胱氨酸、半胱氨酸、阿魏酸、(L)-肌肽、龙胆酸、4-噻唑烷甲酸和2-氧代-4-噻唑烷甲酸。
表III显示如下N-乙酰基半胱氨酸、半胱氨酸、阿魏酸、(L)-肌肽、龙胆酸满足试验4，因为它们抑制由DPPH引起的残基的产生高于50％，因此在合成按照本发明的化合物中它们可以用作B化合物的前体。
4-噻唑烷甲酸和2-氧代-4-噻唑烷甲酸不满足试验4，因为它们不能抑制由DPPH引起的残基的产生，因此，如果它们满足试验5，它们可以作为B或B1的前体使用。实施例F3试验5由用作B、B1或C＝-TC-Y-H前体的化合物引起的对由FeII产生的残基的抑制将0.1ml等份的10-4M浓度的4-噻唑烷甲酸和2-氧代-4-噻唑烷甲酸的甲醇溶液加入到含有一种水溶液的试管中，所述水溶液由0.2ml 2mM脱氧核糖、0.4ml pH7.4的磷酸盐缓冲液100mM和0.1ml1mM FeII(NH4)2(SO4)2在2mM HCl中混合形成。然后在37℃保存该试管1小时。然后，在每支试管中顺序加入0.5ml 2.8％三氯乙酸水溶液和0.5ml 0.1M的硫代巴比土酸水溶液。用0.1ml甲醇代替0.1ml等份上述试验化合物的甲醇溶液形成参比空白。封闭所述试管并在100℃的油浴中加热15分钟。出现粉红色，粉红色的强度与脱氧核糖经历基团氧化降解的量是成比例的。在室温下冷却该溶液并且在532nm读取它们的相对于空白吸收度。
通过下式的方法测定由B或B1或C＝-TC-Y-H的前体(其中游离价如上定义为饱和的)对抗由FeII产生的残基所引起的抑制(1-AS/AC)×100其中AS和AC分别为含有试验化合物+铁盐的溶液与仅含有铁盐的溶液的吸收度值。
在表IV中报告该结果，从结果显示两种酸皆满足试验5，因为它们抑制由FeII引起的残基产生的百分率大于50％。因此为了获得本发明的化合物，4-噻唑烷甲酸和2-氧代-4-噻唑烷甲酸均可以作为B、B1或C＝-TC-Y-H的前体使用。实施例F4用3组大鼠(每组10只动物)重复实施例F1，一个不接受L-NAME的对照组和两个接受L-NAME的组，并且按照以下通过腹膜给药a.对照组(不接受L-NAME)载体(生理溶液)，b.接受L-NAME的第1组(b组-比较组)同时在与上面相同的载体中给予25mg/kg(0.064mmoles/kg)的地塞米松+10.4mg/kg(0.064mmoles/kg)的N-乙酰基半胱氨酸，c.接受L-NAME的第2组(c组)在与上面相同的载体中给予42.5mg/kg(0.064mmoles/kg)按照本发明的地塞米松衍生物(参阅实施例5)。
在该实验中，在b组和c组动物中测定血管耐受性即升高血压(血管损害)并用相对于对照组a(假定为100％)的百分率表示。
该结果在表V中报告并且该结果显示，与本发明的化合物(c组)相比，给予b组(比较组)的混合物在动物中引起更高的血压增加。实施例F5用3组大鼠(每组10只动物)重复实施例F1，一个不接受L-NAME的对照组和两个接受L-NAME的组，并且按照以下通过腹膜给药a.对照组(不接受L-NAME)载体(生理溶液)，b.接受L-NAME的第1组(d组-比较组)同时在与上面相同的载体中给予100mg/kg(0.25mmoles/kg)的熊去氧胆酸+49.5mg/kg(0.25mmoles/kg)的阿魏酸，c.接受L-NAME的第2组(e组)在与上面相同的载体中给予175mg/kg(0.25mmoles/kg)按照本发明的熊去氧胆酸衍生物(参阅实施例1)。
在该实验中在d组和e组动物中测定肝的耐受性即GTP升高(肝损害)并用相对于对照组a(假定为100％)的百分率表示。
该结果在表VI中报告并且该结果显示，与本发明的化合物(e组)相比，给予d组(比较组)的混合物在动物中引起更高的GPT增加。
表I
表II
表III
表IV
表V
表VI
权利要求
1.具有以下通式(I)和(II)的甾族化合物或它们的盐A-(B)b0-C-N(O)s(I)其中s为一个等于1或2的整数，优选s＝2；bo＝0或1；A＝R-，其中R为如下定义的甾族药物残基，B＝-TB-X2-TBI-其中TB和TBI相同或不同；当在前体甾族化合物中的反应官能团为-OH时TB＝(CO)；当在前体甾族化合物中的反应官能团为-COOH时TB＝X；X＝O、S、NR1C，R1C为H或具有1到5个碳原子的直链或支链烷基，或自由价；TBI＝(CO)tx或(X)txx，其中tx和txx具有0或1的值；前提是当txx＝0时tx＝1，而当txx＝1时tx＝0；X如上定义；X2为如下定义的二价桥键基团；C为二价-TC-Y-残基，其中当tx＝0时TC＝(CO)，当txx＝0时TC＝X，X如上定义；Y为 其中nIX为一个在0和3之间的整数，优选1；nIIX为一个在1和3之间的整数，优选1；RTIX、RTIX′、RTIIX、RTIIX′，彼此相同或不同，为H或直链的或支链的C1-C4烷基；RTIX、RTIX′、RTIIX、RTIIX′优选为H；Y3为至少含有一个氮原子的饱和的、不饱和的或芳香的杂环，所述环有5或6个原子；或Y为Y0，选自以下基团亚烷氧基基团R′O，其中R′为直链或可能的支链C1-C20，优选含有1到6个碳原子；或为具有5到7个碳原子的亚环烷基，在该亚环烷基环上的一个或多个碳原子可以被杂原子所取代，所述环可具有R′型侧链，R′如上定义；或为 其中n3为一个0到3的整数和n3′为一个1到3的整数； 其中n3和n3′具有以上所述的含义； 其中nf′为一个1到6的整数，优选1到4； 其中R1f＝H、CH3和nf为一个1到6的整数，优选1到4；优选Y＝-Y0＝R′O-，其中R′如上定义；优选R′为C1-C6烷基； 其中 其中TCI和TCII相同或不同，当在前体甾族化合物中的反应官能团为-OH时TCI＝(CO)；当在前体甾族化合物中的反应官能团为-COOH时TCI＝X；X如上定义；TCII＝(CO)tI或(X)tII，其中tI和tII具有0或1的值；前提是当tII＝0时tI＝1，而当tII＝1时tI＝0；X如上定义；Y′如上述Y的定义，但是具有三个自由价而不是两个，优选选自以下 基团，其中R′为C1-C20直链或支链，优选含有1到6个碳原子，或为具有5到7个碳原子、任选取代的饱和环；或为 其中n3为一个0到3的整数和n3′为一个1到3的整数； 其中n3和n3′具有以上所述的含义； 其中所述碳原子之一的一个氢原子被自由价所取代； 其中nf′为一个1到6的整数，优选1到4；其中所述碳原子之一的一个氢原子被自由价所取代； 其中所述碳原子之一的一个氢原子被自由价所取代； 其中R1f＝H、CH3而nf为一个1到6的整数，优选1到4；其中所述碳原子之一的一个氢原子被自由价所取代；优选 其中R′为直链或支链C2-C4，在Y′中与-N(O)S基团共价连接的氧原子位于C1式指出的自由键的末端上；或如在式(I)中定义Y′＝Y0，而且具有三个自由价而不是2个；B1＝-TBII-X2a其中X2a为一个单价基团，当tI＝0时TBII＝(CO)，当tII＝0时TBII＝X，X如上定义；X2，二价基团，为满足试验4或试验5的对应的B前体-TB-X2-TBI，在前体中TB和TBI自由价各为OZ、Z或 所饱和，ZI和ZII相同或不相同并且具有如上定义的Z值，这取决于是否TB和/或TBI＝CO或X，与t、t′、tx和txx的值有关；当b0＝0时C的前体为-TC-Y-H类型，其中TC自由价为OZ、Z或 所饱和，ZI和ZII如上定义，满足试验5；X2a单价基团为这样的基团，以使B1-TBII-X2a的对应前体满足试验4或试验5，前体中TBII自由价为OZ、Z或 所饱和，ZI和ZII相同或不相同并且具有如上定义的Z值，这取决于是否TBII＝CO或X，与tI和tII的值有关；A＝R-具有以下结构 其中在通式中提及的CH基团的氢或CH2基团的两个氢的取代中，可能存在以下取代基在1-2位可以有一个双键；在2-3位可以有以下取代基 在2位可以有Cl、Br；在3位可以有CO、-O-CH2-CH2-Cl、OH；在3-4位可以有一个双键；在4-5位可以有一个双键；在5-6位可以有一个双键；在5-10位可以有一个双键；在6位可以有Cl、F、CH3、-CHO；在7位可以有Cl、OH；在9位可以有Cl、F；在11位可以有OH、CO、Cl、CH3；在16位可以有CH3、OH、＝CH2；在17位可以有OH、CH3、OCO(O)ua(CH2)vaCH3、C≡CH或 其中ua为一个等于0或1的整数，va为一个0到4的整数；在16-17位可以有以下基团 R和R′，彼此相同或不同，可以为氢或1到4个碳原子的直链或支链的烷基，优选R＝R′＝CH3；R″为-(CO-L)t-(L)t2-(X0I)t1-其中t、t1和t2为彼此相同或不同的整数，等于0或1，前提是当t＝0，时t2＝1和当t＝1时t2＝0，并且当A不含有-OH基团时，t和t1，或t2和t1不能同时等于0；所述二价桥键基团L选自(CR4R5)na(O)nb(CR4R5)n′a(CO)n′b(O)n″b(CO)n_b(CR4R5)n″a其中na、n′a和n″a彼此相等或不等，为等于0到6的整数，优选1-3；nb、n′b、n″b和n_b彼此相等或不等，为等于0或1的整数；R4和R5彼此相等或不等，选自H、1到5个碳原子的直链或支链烷基，优选1到3个；X0I为如上定义的X；而R1C为1到10个碳原子的直链或支链烷基，或等于X2I其中X2I等于OH、CH3、Cl、N(-CH2-CH3)2、SCH2F、SH或 在试验4中，具有如上定义的饱和自由价的B或B1前体必须满足该试验，所述试验如下这是一个分析测定，将10-4M浓度的B或B1的前体的甲醇溶液分批加入到DPPH(2，2-二苯基-1-苦基偕腙肼-自由基)的甲醇溶液中进行所述测定；避光、在室温下保存该溶液30分钟后，在517nm波长读出试验溶液和仅含有与试验溶液相同量的DPPH的溶液的吸收度；然后通过下式的方法计算由所述前体引起的对DPPH产生残基的抑制百分率(1-AS/AC)×100其中AS和AC分别为含有试验化合物+DPPH的溶液和仅含有DPPH的溶液的吸收度的值；如果如上定义的抑制百分率高于或等于50％，B或B1前体化合物满足试验4；其中试验5为一个分析测定，通过以下步骤进行将10-4M浓度的具有如上定义的饱和自由价的B或B1的前体的甲醇溶液或C＝-TC-Y-H的甲醇溶液等份加入到由2mM脱氧核糖水溶液与1mMFeII(NH4)2(SO4)2盐混合形成的溶液中，所述水为含有100mM磷酸盐缓冲液的水；在37℃将该溶液恒温保持一小时后，按照顺序加入等份的2.8％三氯乙酸水溶液和0.5M硫代巴比土酸，在100加热15分钟，然后在532nm读出该试验溶液的吸收度；通过下式的方法计算B或B1的前体或C＝-TC-Y-H引起的对由FeII产生残基的抑制百分率(1-AS/AC)×100其中AS和AC分别为含有试验化合物和铁盐的溶液和仅含有铁盐的溶液的吸收度的值，当B或B1的前体或C＝-TC-Y-H的如上定义的抑制百分率高于或等于50％时，所述化合物满足试验5；前提是在式(I)化合物中，当bo＝0和C＝-TC-Y0-，其中Y0的自由价如上指出是饱和的，s＝1或2时，排除具有A＝R-的药物。
2.按照权利要求1的化合物，其中满足试验4的B或B1的前体化合物选自以下类型选自以下的氨基酸L-肌肽(式CI)、鹅肌肽(CII)、硒代半胱氨酸(CIII)、硒代蛋氨酸(CIV)、青霉胺(CV)、N-乙酰基青霉胺(CVI)、半胱氨酸(CVII)、N-乙酰基半胱氨酸(CVIII)、谷胱甘肽(CIX)或其酯，优选乙基酯或异丙基酯 选自以下的羟基酸没食子酸(式DI)、阿魏酸(DII)、2，5-二羟基苯甲酸(DIII)、柠檬酸(DIV)、咖啡酸(DV)、氢化咖啡酸(DVI)、对-香豆酸(DVII)、香草酸(DVIII)、绿原酸(DIX)、犬尿喹啉酸(DX)、丁香酸(DXI) 选自以下的芳香的和杂环的一或多元醇去甲二氢愈创木酸(EI)、 皮黄酮(EII)、儿茶素(EIII)、山茶酚(EIV)、sulphurethyne(EV)、抗坏血酸(EVI)、异抗坏血酸(EVII)、氢醌(EVIII)、绵子酚(EIX)、还原酸(EX)、甲氧基氢醌(EXI)、羟基氢醌(EXII)、没食子酸丙酯(EXIII)、蔗糖(EXIV)、维生素E(EXV)、维生素A(EXVI)、8-羟基喹啉醇(EXVII)、3-叔丁基-4-羟基苯甲醚(EXVIII)、3-羟基黄酮(EXIX)、3，5-叔丁基-对羟基甲苯(EXX)、对-叔丁基苯酚(EXXI)、噻吗洛尔(EXXII)、希波酚(EXXIII)、巯基乙酸3，5-二叔丁基-4-羟基苄酯(EXXIV)、4′-羟基丁酰苯胺(EXXV)、愈创木酚(EXXVI)、母育酚(EXXVII)、异丁子香酚(EXXVIII)、丁子香酚(EXXIX)、3，4-亚甲二氧基苯甲醇(EXXX)、别嘌呤醇(EXXXI)、conyferyl醇(EXXXII)、4-羟基乙氧苯基醇(EXXXIII)、对-香豆醇(EXXXIV)、姜黄素(EXXXV) 选自以下的芳香胺或杂环胺N，N′-二苯基-对苯二胺(MI)、乙氧基喹(MII)、硫堇(MIII)、羟基脲(MIV) 至少含有一个游离酸官能团的化合物，选自以下3，3′-硫代二丙酸(NI)、反丁烯二酸(NII)、二羟基顺式丁烯二酸(NIII)、硫辛酸(NIV)、乙二胺四乙酸(NV)、胆红素(NVI)、3，4-亚甲基二氧基苯乙烯酸(NVII)、3，4-亚甲二氧基苯甲酸(NVIII)
3.按照权利要求1的化合物，其中满足试验5的B或B1前体化合物选自以下氨基酸天冬氨酸(PI)、组氨酸(PII)、5-羟基色氨酸(PIII)、4-噻唑烷甲酸(PIV)、2-氧代-4-噻唑烷甲酸(PV) 一或多元醇或硫醇2-硫代尿嘧啶(QI)、2-巯基乙醇(QII)、esperidine(QIII)、司骨化醇(QIV)、1-α-OH维生素D2(QV)、flocalcitriol(QVI)、22-氧杂骨化三醇(QVII)、用维生素A残基酯化的维生素D3衍生物(QVIII)、式(QIX)的化合物、24，28-亚甲基-1α-羟基维生素D2(QX)、由1α，25-二羟基维生素D2衍生的化合物(QXI)、2-巯基咪唑(QXII) 琥珀酸(RI)
4.按照权利要求1-2的化合物，其中B或B1的前体为那些满足试验4的化合物。
5.按照权利要求1-4的化合物，其中在式(III)中的Y3选自以下
6.按照权利要求5的化合物，其中Y3为在2位或6位被取代的Y12(吡啶基)。
7.按照权利要求1-6的化合物，其中在前体甾族化合物中R″＝-CO-CH2OH，-CH(CH3)-CH2-CH2-COOH。
8.按照权利要求1-7的化合物，其中在前体甾族化合物中所述羟基官能团在3位和/或在11位，和/或在R″中在末位有一个羟基或羧基官能团。
9.按照权利要求1-8的化合物，其中所述前体甾族化合物选自以下布地奈德、氢化可的松、阿氯米松、阿尔孕酮、倍氯米松、倍他米松、氯泼尼松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龙、氯泼尼醇、可的松、皮质酮、醋噁唑龙、地奈德、去羟米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龙、二氟泼尼酯、氟扎可特、氟氯奈德、氟米松、氟尼缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、氟考丁酯、氟可龙、氟米龙、醋酸氟培龙、醋酸氟泼尼定、氟泼尼龙、氟氢缩松、福莫可他、哈西奈德、丙酸卤倍他索、卤米松、醋酸卤泼尼松、氢可他酯、氯替泼诺Etabonate、甲羟松、甲泼尼松、甲泼尼龙、糠酸莫米松、帕拉米松、泼尼卡酯、泼尼松龙、25-二乙基氨基乙酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松、强的松龙戊酸酯、泼尼立定、利美索龙、曲安西龙、曲安奈德、21-乙酰氧基孕烯醇酮、可的伐唑、安西奈德、丙酸氟替卡松、马泼尼酮、替可的松、己曲安奈德、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、mitatrienediol、莫克雌醇、炔雌醇、雌二醇、美雌醇。
10.用作药物的按照权利要求1-9的化合物或盐，或它们的组合物；前提是在式(I)化合物中，当bo＝0和C＝-TC-Y0-，其中Y0的自由价如上指出是饱和的，s＝1或2时，排除A＝R-的药物。
11.按照权利要求1-9的化合物或盐，或它们的组合物在制备用于治疗氧化应急激状态的药物中的用途；在式(I)化合物中，当bo＝0而C＝-TC-Y0，其中Y0的自由价如上指出是饱和的，s＝1或2时，所述药物可以为A＝R-。
12.含有作为活性成分的权利要求1-9的化合物或其盐的药物制剂。
全文摘要
具有通式(I)和(II)的甾族化合物及其盐，其中s为一个等于1或2的整数，优选s＝2；b0＝0或1；A＝R－，其中R为一种甾族药物的残基，C和C
文档编号C07J41/00GK1420891SQ00808774
公开日2003年5月28日 申请日期2000年4月11日 优先权日1999年4月13日
发明者P·德索尔达托 申请人:尼科克斯公司