二肽酶-Ⅳ抑制剂衍生物的制作方法

专利名称：二肽酶-Ⅳ抑制剂衍生物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及二肽酶-IV (DPP-IV)抑制剂的化合物、其药学上可 接受的盐、其异构体，这些化合物的制备方法，含有这些化合物的药物组合物，以及这些化 合物在制备治疗和/或预防糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、高血糖、胰岛素抗性的药物中的 应用。2、 背景技术糖尿病是一种由于血糖失控高出正常水平所造成的全身慢性代谢性疾病。基本分为四类， 包括I型(胰岛素依赖型)、n型(非胰岛素依赖型)、其它型和妊娠糖尿病。I型和II型糖尿病属于原发性糖尿病，是最常见的两种形式，由遗传和环境因素相互作用而引起。糖尿病的 病因十分复杂，但归根到底是由于胰岛素绝对或相对缺乏，或胰岛素抵抗引起的。其特点为 由于胰岛素的绝对或相对不足和靶细胞对胰岛素的敏感性降低，引起碳水化合物、蛋白质、 脂肪、电解质和水的代谢紊乱。近年来，由于生活水平的提高、饮食结构的改变、日趋紧张的生活节奏以及少动多坐的 生活方式等诸多因素，全球糖尿病发病率增长迅速，糖尿病己经成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病。目前全球糖尿病患者已超过1.2亿人，我国患者人 群居世界第二。据统计，中国已确诊的糖尿病患者达4000多万，并以每年100万的速度递增。 其中，1型糖尿病患者占10%， 11型糖尿病患者占90%。糖尿病成了人们日益关注的公共卫生问题。目前I型糖尿病治疗药物主要是胰岛素制剂及其代用品；对于II型糖尿病的治疗，主要 的药物是口服降糖药，大致分为磺脲类、双胍类、中药制剂、其他降糖药及辅助用药。磺脲类降糖药物是最主要的糖尿病治疗药物，通过刺激P-细胞分泌更多的胰岛素，当它 无效时，通过注射胰岛素来增加血浆的胰岛素水平，胰岛素浓度升高可导致刺激高胰岛素抗 性组织。双胍类能提高胰岛素的敏感性，使高血糖症有所缓和，但是两种双胍，苯乙双胍和 二甲双胍，都可以诱发乳酸中毒和恶心/腹泻。a-葡萄糖苷酶抑制剂类降糖药物，通过抑制小 肠粘膜刷状缘a-葡萄糖苷酶的活性，减少低聚糖分解为单糖后再被吸收，可延缓餐后糖分的 吸收，抑制饭后血糖高峰，如阿卡波糖、米格列醇，但有肠道胀气、腹泻及其它副作用。其 他类降糖药物，如胰岛素增敏剂、胰岛素拮抗激素抑制剂、糖异生抑制剂、胰岛素样生长因 子、ISU分泌促进剂等。此外，我国在筛选降血糖中药进行了不少研究，天然药用植物中的 萜类、黄酮类、多糖类、多肽氨基酸、不饱和脂肪酸、生物碱、甾体和硫键化合物等成分均 具有一定的降血糖作用。Glitazones是最近公开的一类有效改善II型糖尿病多种症状的化合 物，是过氧化酶增值剂活化受体的激动剂。目前上市的此类化合物已经表现出严重的副作用。 以上大多数糖尿病治疗药物只能从一定程度上控制血糖，不能从根本上驱除病因及防止并发 症。DPP-IV的水解底物GLP-1、 GIP的缺乏将造成II型糖尿病。l)GLP-l是由小肠L细胞分 泌的一种肽类激素，其表达和活性受到严格的调控，食物消化时可促进GLP-1分泌，从而实 施其生理功能，主要是(l)诱导前胰岛素基因的转录，促进胰岛素的生物合成和分泌；(2)促 进胰岛P-细胞(分泌胰岛素作用)增殖分化，抑制e细胞凋亡；(3)抑制胰高血糖素(升血糖 作用)的分泌；(4)延迟胃排空，抑制食欲，减少食物摄取。这些功能都有利于降低餐后血糖 并使血糖维持在恒定水平。2)GIP是由小肠K细胞分泌的一种肠促胰岛素多肽，也称为抑胃 多肽，可以抑制胃酸分泌，促进胰岛素分泌，从而起到降低血糖的作用。DPP-IV抑制剂是新一代治疗糖尿病的药物。上市的第一个DPP-IV的抑制剂是sitagliptin phosphate (磷酸西他列汀)，结构式如下，对DPP-IV具有选择性，不抑制DPP-8和DPP-9 的活性，有较好的安全性和可容许性，并且不会引起体重增加、引起水肿和低血糖风险。 Vildagliptin (维格列汀)是由诺华开发的口服DPP-IV抑制剂，已在欧洲多个国家上市，对 DPP-IV有较好的活性，但对DPP-7的选择性较差，结构式如下。FDPP-IV抑制剂品种有限，不能满足临床需要，急需开发更多的DPP-IV的抑制剂的药物 来满足临床用药。3、发明内容为了解决上述问题，进一步改良和优化DPP-IV抑制剂，本发明人经过大量的试验研究提供了一类新的DPP-rv的抑制剂衍生物。本发明的技术方案如下本发明提供了通式(I )所示的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体 <formula>formula see original document page 7</formula>W取代或未被取代的苯基，其中，114选自:' 、个卤素原子取代或未被取代的CV6垸基， 『 、个卤素原子取代或未被取代的C"垸氧基，其中Ar代表被1-(1) 卤素，(2) 直链或支链的被P(3) 直链或支链的被P(4) -CN，或(5) 羟基； X选自N或CH; Y和Z独立的选自N或C-R5，其中，R5选自:(1) 氢原子，(2) -CN，(3) 直链或支链的被1 5个卤素原子取代或未被取代的C"垸基，或(4) 直链或支链的被1 5个卤素原子取代或未被取代的CL6烷氧基； R1、 ie和RS独立的选自氢原子或直链或支链的C^烷基。 优选的化合物为其中Ar代表被l 5个W取代或未被取代的苯基，其中，114选自(1) 氟原子，(2) 溴原子，(3) -CF3，或(4) -CN; X选自N或CH;Y和Z独立的选自N或C-R5， 其中，R5选自(1) 氢原子，或(2) 直链或支链的被1 5个卤素原子取代或未被取代的Cm院基； R1、 112和113独立的选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。进一步优选的化合物为其中，Ar选自(1) 苯基，(2) 2-氟代苯基，(3) 3,4-二氟苯基，(4) 2,4-二氟苯基，(5) 2,5-二氟苯基，(6) 2,4，5-三氟苯基，(7) 2-氟斗(三氟甲基)苯基，(8) 4-溴-2，5-二氟苯基，(9) 2-氰基-4，5-二氟苯基，(10) 4-氰基-2,5-二氟苯基，或(11) 5-氰基-2，4-二氟苯基； X选自N;Y和Z独立的选自N或C-R5， 其中，R5选自(1) 氢原子，(2) 甲基，(3) 乙基，(4) -CF3，(5) -CH2CF3，或(6) -CF2CF3;R1、 W和RS独立的选自氢原子或甲基。本发明所述"卤素原子"为氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。本发明所述"C,-6垸基"为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁 基、戊基、新戊基、己基等。本发明所述"C^烷氧基"为甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁 氧基、正戊氧基、正己氧基等。更进一步优选的化合物如下 化学名称7-[2-[N-(2,4,5-三氟苄基)-N-((l,l-二甲胍-3-基)亚胺基甲基)胺基乙酰基]-3-(三 氟甲基)-5，<formula>formula see original document page 9</formula>
本发明还提供了上述化合物的制备方法，反应方程式如下，但不仅限于下列方法:<formula>formula see original document page 9</formula>反应步骤步骤l化合物l的制备于干燥的反应瓶中，加入原料l， DMF (二甲基甲酰胺)，稍加热搅拌溶解后，降温，缓 慢滴加氯乙酰氯的二氯甲烷液，滴毕，保温反应，然后升至室温，搅拌后反应液中加入水， 于冰水浴下用碳酸氢钠溶液缓慢调pH，分出有机层，水层再用二氯甲烷萃取，合并有机层， 分别用水、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓縮，得化合物l。步骤2化合物2的制备将化合物1加入干燥的反应瓶中，加入二氯甲垸、三乙胺，加热搅拌至回流，于氮气保 护下滴入原料2，回流反应，反应毕，反应液水洗，无水硫酸镁干燥。减压浓縮，残余物用 硅胶柱纯化(洗脱剂梯度从10%乙酸乙酯和90%的石油醚到90%乙酸乙酯和10%的石油醚)， 得化合物2。步骤3化合物I的制备在反应瓶中加入HCl-乙醇，原料3，于室温搅拌反应，减压蒸除溶剂后再加入乙醇溶解， 然后缓慢分批加入化合物2，回流搅拌过夜，反应液以饱和的碳酸氢钠溶液调pH，析出固体
过滤，依次用水、乙酸乙酯洗涤，得粗品，用乙醇重结晶，即得化合物I。以上反应方程式中的Ar、 X、 Y、 Z、 R1、 112和113代表的基团如前文所定义。 本发明化合物药学上可接受的盐是指由药学上可接受的酸式盐，包括有机酸盐和无机酸 盐。有机酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸、富马酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、乳酸、马 来酸、苹果酸、扁桃酸、双羟萘酸、泛酸、琥珀酸、酒石酸、对甲苯磺酸等，特别优选柠檬 酸、马来酸、富马酸、酒石酸。无机酸包括氢溴酸、盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙 磺酸等，特别优选氢溴酸、盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸。本发明化合物含有一个或多个不对称中心，因而可作为外消旋体和外消旋混合物、单一 对映异构体、非对映异构体混合物和单一非对映异构体。本发明化合物有不对称中心，这类 不对称中心各自会独立的产生两个光学异构体，本发明的范围包括所有可能的光学异构体和 非对映异构体混合物和纯的或部分纯的化合物。本发明包括这些化合物的所有异构体形式。 本发明所述的部分化合物含有烯烃双键，除非特别说明，本发明均包括顺式或反式几何异构 体。本发明所述的部分化合物可以以互变异构体形式存在，其通过一个或多个双键位移而具 有不同的氢的连接点。例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。各互变异构体及其混 合物都包括在本发明的化合物中。本发明的化合物可与一种或多种其它药物联合，比单一药物更安全或者更有效。可将这 些其它药物与式(I )化合物同时或相继通过一种途径并以其常用量给药。同时给药时，优选为含所述其它药物和式(I )化合物的单位剂量形式的药用组合物。可与式(I )化合物 联合用药及或分别给药或在同一药用组合物仲给药的其它活性成分包括，但不限于(a) 其它二肽酶IV抑制剂(b) 胰岛素敏化物包括(i) PPARy激动剂例如glitazones (例如曲格列酮、吡格列酮、 恩格列酮、MCC-555、罗西格列酮等)和其它PPAR配体，包括PPARa"双效激动剂，例如 KRP-297，和PPARa激动剂例如非诺贝酸衍生物(吉非贝齐、氯贝丁酯、非诺贝特和苯扎贝 特)，(ii)双胍类，例如二甲双胍和苯乙双胍，和(iii)蛋白络氨酸磷酸酯酶-lB (PTP-1B) 抑制剂；(c) 胰岛素或胰岛素模拟物；(d) 磺酰脲类和其它胰岛素促分泌剂，例如甲苯磺丁脲和格列吡嗪、美格列奈和相关药物；(e) a-葡萄糖苷酶抑制剂(例如acarbose);(f) 高血糖素受体拮抗剂；(g) GLP-1、 GLP-1模拟物和GLP-1受体激动剂；(h) GLP和GLP模拟物和GLP受体激动剂；(i) PACAP、 PACAP模拟物和PACAP受体3激动剂；(j)胆固醇降低剂，例如(i) HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他 汀、氟伐他汀、阿妥伐他汀、rivastatin、伊伐他汀、罗苏伐他汀和其它他汀类药物)，(ii)螯 合物(考来烯胺、考来替泊和交联右旋糖酐的二垸基氨基烷基衍生物)，(Hi)烟醇、烟酸或其 它盐，(iv) PPAR(x激动剂，例如非诺贝酸衍生物(吉非贝齐、氯贝丁酯、非诺贝特和苯扎贝 特)，(v) PPARo/y双效激动剂，例如KRP-297， (vi)胆固醇吸收抑制剂，例如|3-谷甾醇和 依泽替米贝，(vii)乙酰基CoA，胆固醇酰基转移酶抑制剂，例如阿伐麦布，和(viii)抗氧 化剂，例如普罗布考；(k) PPARS激动剂；(1)抗肥胖症化合物，例如芬氟拉明、右芬氟拉明、芬特明、西布曲明、奥利司他、神 经肽Y5抑制剂和p3肾上腺素能受体激动剂； (m)回肠胆汁酸转运蛋白抑制剂；和(n)用于炎症的药物，例如阿司匹林、非类固醇消炎药、糖皮质类固醇、硫氮磺吡啶和 环氧酶2选择抑制剂。上述联合包括本发明的化合物不仅与一种其它活性化合物而且与两种或多种其它活性化 合物的联合。非限定性实例包括具有式(I )的化合物与两种或多种选自双胍类、磺酰脲类、 HMG-CoA还原酶抑制剂、PPAR激动剂、PTP-1B抑制剂、其它DPP-IV抑制剂和抗肥胖症 化合物的活性化合物的联合。本发明化合物与第二种活性成分的重量比可以变化，其取决于各种成分的有效剂量。一 般来说，将采用各自的有效剂量。因此例如当本发明的化合物与其它药物联合用药时，本发明化合物与其它药物的重量比一般在约1000: l到约l: 1000之间，优选为约200: l到约l: 200之间。本发明化合物与其它活性成分的联合用药一般也会在上述范围内，但在每一种情 况下，应使用各活性成分的有效剂量。本发明进一步要求保护包括上面所述的任一化合物、其药学上可接受的盐或其异构体， 与一种或多种药用载体和/或稀释剂的药物组合物，为临床上或药学上可接受的任一剂型，优 选为口服制剂或注射剂。其中含有生理有效量的通式(I )所示的化合物lmg lg，可以为 lmg、 5mg、 10mg、 15mg、 20mg、 25mg、 50mg、 75mg、 O.lg、 0.15g、 0.2g、 0.25g、 0.3g、 0.4g、 0.5g、 0.6g、 0.75g、 0.8g、 0.9g、 lg等所述的活性成分。可按每日1 4次的安排，优 选每日1 2次给予所述化合物。本发明任一化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，可以口服或肠胃外给药等方式施 用于需要这种治疗的患者。用于肠胃外给药时，可制成注射剂。注射剂系指药物制成的供注入体内的溶液、乳液或 混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂，注射剂可分为注 射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。注射液系指药物制成的供注射入体内用的无菌溶液 型注射液、乳液型注射液或混悬型注射液，可用于肌内注射、静脉注射、静脉滴注等；其规 格有lml、 2ml、 5ml、 10ml、 20ml、 50ml、 100ml、 200ml、 250ml、 500ml等，其中供静脉滴 注用的大体积(一般不小于100ml)注射液也称静脉输液。注射用无菌粉末系指药物制成的 供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物，可用适 宜的注射用溶剂配制后注射，也可用静脉输液配制后静脉滴注；无菌粉末用溶媒结晶法、喷 雾干燥法或冷冻干燥法等制得。注射用浓溶液系指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的 无菌浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，可选用水性溶剂或非水性溶剂。 最常用的水性溶剂为注射用水，也可用0.9°/。氯化钠溶液或其他适宜的水溶液；常用的非水性 溶剂为植物油，主要为供注射用大豆油，其他还有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配 制注射剂时，可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂，如渗透压调节剂、 pH值调节剂、增溶剂、填充剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等。常用的渗透压调节剂 包括氯化钠、葡萄糖、氯化钾、氯化镁、氯化钙、山梨醇等，优选氯化钠或葡萄糖；常用的 pH值调节剂包括醋酸-醋酸钠、乳酸、枸橼酸-枸橼酸钠、碳酸氢钠-碳酸钠等；常用的增溶剂 包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充剂包括乳糖、甘露醇、 山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧剂有亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等；常用抑菌剂 为苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射剂常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。 用于口服时，可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口 服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制 而成的圆片状或异形片状的固体制剂，以口服普通片为主，另有含片、舌下片、口腔贴片、 咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。胶囊剂系指药物或加有辅 料充填于空心胶囊或密封于软质囊材中的固体制剂，依据其溶解与释放特性，可分为硬胶囊 (通称为胶囊)、软胶囊(胶丸)、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊等。丸剂系指药物与适宜 的辅料均匀混合，以适当方法制成的球状或类球状固体制剂，包括滴丸、糖丸、小丸等。颗 粒剂系指药物与适宜的辅料制成具有一定粒度的千燥颗粒状制剂，可分为可溶驛粒(通称为 颗粒)、混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒和控释颗粒等。口服溶液剂系指药物溶解 于适宜溶剂中制成供口服的澄清液体制剂。口服混悬剂系指难溶性固体药物，分散在液体介
质中，制成供口服的混悬液体制剂，也包括千混悬剂或浓混悬液。糖浆剂系指含有药物的浓 蔗糖水溶液。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。常用填充剂包 括淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等； 常用粘合剂包括羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤 维素、羟丙甲纤维素、胶化淀粉等；常用崩解剂包括干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维 素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；常用润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、十二烷 基硫酸钠、微粉硅胶等。二肽酶-IV (DPP-IV)是一种涉及多种生物学功能的细胞表面蛋白。它具有广泛的组织分 布(肠、肾、肝、胰脏、胎盘、胸腺、脾、上皮细胞、血管内皮、淋巴和髓细胞、血清)和 清晰的组织以及细胞类型表达水平。DPP-IV被确定为T型细胞激活标志物CD26，它能在体 外裂解大量免疫调节的、内分泌的和神经病学的肽。这表明这种肽酶在人体或其它动物的各 种疾病过程中存在潜作用。因此，所述化合物可用于下列疾病、病症和症状的预防和治疗的方法中1、 II型糖尿病和相关疾病，现己完全确认GLP-1和GIP可被DPP-IV在体内快速灭活。 对DP-IV""-有缺陷的小鼠的研究表明DPP-IV抑制作用能增加GLP-1和GIP的稳定态浓 度，从而提高了葡糖耐受性。与GLP-1和GIP类似，其它涉及到葡糖调节的胰高血糖素系列 肽也可被DPP-IV (例如PACAP)灭活。这些肽被DPP-IV灭活也可在葡萄糖体内平衡方面发 挥作用。因此本发明的DPP-IV抑制剂可用于治疗II型糖尿病和治疗和预防伴随II型糖尿病 的大量病症，包括代谢综合症X、反应性低血糖和糖尿性异常脂血症。2、 下列疾病、病症和症状与II型糖尿病有关，因此可以通过采用本发明化合物的治疗方 法来治疗、控制或在某些情况下预防(1)高血糖症，(2)低葡萄糖耐受性，(3)抗胰岛素 性，(4)肥胖症，(5)质脂疾病，(6)异常脂血症，(7)高脂血症，(8)高甘油三酯血症， (9)高胆固醇血症，(IO)低HDL水平，(ll)高HDL水平，(12)动脉粥样硬化及其后遗症， (13)血管再狭窄，(14)肠易激惹综合症，(15)肠炎，包括克罗恩病和溃疡性结肠炎，(16) 其它炎症，(17)胰腺炎，(18)腹部肥胖症，(19)神经性病变，(20)视网膜病，(21)肾病， (22)神经病，(23) X综合症，(24)卵巢的雄激素过多症(多囊性卵巢综合症)及其它具抗 胰岛素性的疾病；以及生长素缺乏症，肠损伤，免疫抑制作用，HIV感染，血细胞生成，神 经元疾病，脑瘤侵入和转移，良性前列腺肥大，精液能动性，龈炎，骨质疏松症等。药理实验证明，DPP-IV抑制剂可以显著抑制DPP-IV活性，保护GLP-1活性，促进胰岛 素分泌，降低餐后胰高血糖素，降低血糖，提高耐糖量；且具有保护GIP活性的作用，可提
高GIP的浓度，增强其促胰岛素分泌的效果；DPP-IV抑制剂还可以改善糖脂代谢，防止体重 增加。本发明还提供了二肽酶-IV抑制剂衍生物在制备用于治疗和/或预防下列一种或多种疾病的药物中的用途糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病(n型糖尿病)、高血糖、肥胖症、异常脂血症、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、低HDL和高LDL水平、低葡萄糖耐受 性、胰岛素抗性、质脂病症、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、动脉粥样硬化及 其后遗症，血管再狭窄、肠易基综合征，肠炎疾病、其它炎症、胰腺炎、腹部肥胖症、神经 性病变、视网膜病、肾病、神经病、X综合征、卵巢雄激素过多症(多囊性卵巢综合征)及 其它具有胰岛素抗性的疾病，所述方法包括给哺乳动物施用通式(I )所述的化合物。 本发明二肽酶-IV抑制剂衍生物与最接近的现有技术相比，具有以下优点(1) 本发明二肽酶-IV抑制剂衍生物可以较好的促进胰岛素的分泌，且不会引起低血糖 和体重增加等副作用；(2) 本发明二肽酶-IV抑制剂衍生物在体内具有良好的安全性和耐受性，不良反应的发 生率更加降低；(3) 本发明化合物兼具DPP-IV抑制剂和双胍类的优点，具有双重功效；(4) 本发明化合物制备工艺简单，药品纯度高、收率高、质量稳定，易于进行大规模工业生产。以下通过体外药理实验进一步阐述本发明化合物的有益效果，但不应将此理解为本发明 化合物仅具有下列有益效果。实验例本发明化合物的体外药理活性供试品化合物l，自制，其化学名称和结构式如前文所述；对照品磷酸西他列汀、维格列汀自制，其化学名称和结构式如前文所述。实验方法准确称取供试品及对照品，加入DMSO溶解，充分混匀，配成100mM。然后用DMSO将上述母液逐级稀释至10mM、 lmM、 100pM、 10pM。取上述溶液4pl，加入396pl的缓冲液，充分混匀，配成100pM、 lOpM、 lpM、 100nM。1、 荧光法检测对DPP-IV的抑制作用取5nl正常小鼠血清，加入1^1不同浓度的待测化合物及24^11 MgCb缓冲液，混匀后室 温中预孵育5分钟，然后加入l(Hil 10(HiM反应底物以及20pl缓冲液，避光混匀后进行荧光 测定(激发波380nm/发射波460nm)，每隔3分钟测定1次，第20分钟时加入25%乙酸40^1 终止反应，室温避光放置5分钟后，再次进行荧光测定。2、 荧光法检测化合物对DPP-7的抑制作用
以O.lmg/ml的BSA和lOOmM的二甲胂酸盐的缓冲液(pH 5.5)为反应液，5pM的 Nle-Pro-AMC为底物与lpl化合物在37'C反应15分钟(激发光和发射光波长分别为360nrn 和460nm)。3、 荧光法检测化合物对DPP-8的抑制作用以O.lmg/ml的BSA和50mM的磷酸钠缓冲液(pH8.0)为反应液，lOO^M的 Ala-Pro-7-amino-4-trifluormethylcoumarin为底物与l(xl化合物在37。C反应15分钟(激发光和 发射光波长分别为400nrn和505nm)。4、 荧光法检测化合物对DPP-9的抑制作用以O.lmg/ml的BSA和lOOmM的Tris/HCl缓冲液(pH7.4)为反应液，lOO^M的 Gly-Pro-AMC为底物与1^1化合物在37'C反应30分钟(激发光和发射光波长分别为360nm 和460nm)。实验结果和结论表1本发明化合物对DPP-IV的活性及选择性錄口 _IC50(nM)_'干叩_DPP-IV_DPP-7_DPP-8_DPP-9~~化合物1 ^ >1000 >1000 >1000空白对照 >1000 >1000 >1000 >1000磷酸西他列汀 14 >1000 >1000 >1000维格列汀 5 780 >1000 >1000由表1可见，与磷酸西他列汀及维格列汀相比，本发明化合物1对DPP-IV的活性较磷 酸西他列汀略好，对DPP-IV的选择性较维格列汀优秀，因此，化合物l既安全又有效。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不 应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技 术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者 减少、增加。实施例1 7-〖2-lN-(2,4,5-三氟苄基)-N-((U-二甲胍-3-基)亚胺基甲基)胺基乙酰基l-3-(三 氟甲基)-5,6,7,8-四氢-l工41三唑4,3-al吡嗪的制备步骤1 7-(2-氯-乙酰基)-3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢-[l，2，4j三唑4，3-al吡嗪的制备于干燥的反应瓶中，加入9.6g (50mmo1) 3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢-[l，2，4]三唑并[4，3-a] 吡嗪(其制备方法参见J.Med.Chem.2005，48，141-151)， DMF 100ml，稍加热搅拌溶解后，降 至-5 (TC，缓慢滴加6.8g (60mmo1)氯乙酰氯的二氯甲烷液100ml，滴毕，保温反应5h。
然后升至室温，搅拌0.5h。反应液中加入100ml水，于冰水浴下用5%的碳酸氢钠溶液缓慢调 pH9。分出有机层，水层再用二氯甲烷50mlX2萃取。合并有机层，分别用水、饱和氯化钠 溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓縮，得黄色粘稠油状物11.5g,收率85.4%。步骤2 7-[2-(2，4，5-三氟苯甲胺基)-乙酰基]-3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢-[l，2，41三唑[4,3-al 吡嗪的制备将10.7g (40mmo1)的7-(2-氯-乙酰基)-3-(三氟甲基)-5，6,7,8-四氢-[l,2，4]三唑[4，3-a]吡嗪 加入干燥的反应瓶中，加入二氯甲烷100ml，三乙胺8ml，加热搅拌至回流。于氮气保护下滴 入6.8g (42mmo1) 2，4，5-三氟基苄胺，回流反应12h，反应毕，反应液水洗，无水硫酸镁干燥。 减压浓縮，残余物用硅胶柱纯化(洗脱剂梯度从10%乙酸乙酯和90%的石油醚到90%乙酸乙 酯和10%的石油醚)。得淡黄色固体10.8g，收率68.6%。步骤3 7-2-N-(2，4，5-三氟苄基)-N-((l，l-二甲胍-3-基)亚胺基甲基)胺基乙酰基I-3-(三氟 甲基)-5，6，7，8-四氢-[l ，2,41三唑吡嗪的制备在反应瓶中加入10%的HCl-乙醇50ml，氰基二甲胍5.6g (50mmo1)，于室温搅拌2h， 减压蒸除溶剂后再加入乙醇100ml溶解，然后缓慢分批加入7-[2-(2，4,5-三氟苯甲胺基)-乙酰 基]-3-(三氟甲基)-5，6,7，8-四氢-[l,2，4]三唑[4，3-a]吡嗪17.7g (45mmo1),回流搅拌过夜。反应液 以饱和的碳酸氢钠溶液调pH9 10，析出固体过滤，依次用水、乙酸乙酯洗涤，得粗品，用乙 醇重结晶得产物10.4g，收率45.8%。分子式C19H21F6N90 分子量505.42 质谱(m/e): 506(M+l) 元素分析C, 45.33%; H,4.42%; F,22.27%; N，24.74%(计算C， 45.15%; H,4.19%; F,22.55%; N,24.94%) 氢谱(DMSO, 600MHz):S1.82 2.02(s， 3H) S2.55(s, 6H) S3.60(d, 2H) 53.77 (t， 2H) S3.91 (s, 2H) 54.11 (s， 1H) 54.23 (s,lH) S4.89(s，lH) S4.95 (s, 1H) 57.49 (t，lH) 57.53 (m， 1H)实施例2本发明化合物片剂的制备1、处方化合物1 100g 微晶纤维素 200g 羟丙基纤维素 60g 微粉硅胶 3g 硬脂酸镁 3g共制备 1000片2、制备工艺将原料粉碎过IOO目筛，其余辅料分别过IOO目筛，备用；按照处方量称取原料和辅料；将化合物1、微晶纤维素和羟丙基纤维素混合均匀，加入混合制粒机中，加
入适量的水，搅拌制粒；湿粒在低于60'C的条件下烘干；干燥好的颗粒加入微粉硅胶、硬脂 酸镁整粒；取样，半成品化验；按照化验确定的片重压片；成品全检，包装入库。 实施例3本发明化合物胶囊的制备1、 处方化合物1 50g微晶纤维素 80g 淀粉 40g 微粉硅胶 1.7g硬脂酸镁_1.7g共制备 1000粒2、 制备工艺将原料粉碎过100目筛，其余辅料分别过100目筛，备用；按照处方量称取原料和辅料；将化合物1、微晶纤维素和淀粉混合均匀，加入混合制粒机中，加入适量的水，搅拌制粒；湿粒在低于6(TC的条件下烘干；干燥好的颗粒加入微粉硅胶、硬脂酸镁整粒； 取样，半成品化验；按照化验确定装量；装胶囊，成品全检，包装入库。
权利要求
1、通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体其中Ar代表被1～5个R4取代或未被取代的苯基，其中，R4选自(1)卤素，(2)直链或支链的被1～5个卤素原子取代或未被取代的C1-6烷基，(3)直链或支链的被1～5个卤素原子取代或未被取代的C1-6烷氧基，(4)-CN，或(5)羟基；X选自N或CH；Y和Z独立的选自N或C-R5，其中，R5选自(1)氢原子，(2)-CN，(3)直链或支链的被1～5个卤素原子取代或未被取代的C1-6烷基，或(4)直链或支链的被1～5个卤素原子取代或未被取代的C1-6烷氧基；R1、R2和R3独立的选自氢原子或直链或支链的C1-6烷基。
2、如权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体 其中Ar代表被l 5个W取代或未被取代的苯基，其中，W选自(1) 氟原子，(2) 溴原子，(3) -CF3，或(4) 陽CN; X选自N或CH; Y和Z独立的选自N或C-R5， 其中，R5选自:(1)氢原子，或(2)直链或支链的被1 5个卤素原子取代或未被取代的CM烷基； R1、 112和113独立的选自氢原子，甲基，乙基，丙基或异丙基。
3、 如权利要求2所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体 其中，Ar选自(1) 苯基，(2) 2-氟代苯基，(3) 3，4-二氟苯基，(4) 2，4-二氟苯基，(5) 2,5-二氟苯基，(6) 2,4,5-三氟苯基，(7) 2-氟-4-(三氟甲基)苯基，(8) 4-溴-2,5-二氟苯基，(9) 2-氰基-4,5-二氟苯基，(10) 4-氰基-2，5-二氟苯基，或(11) 5-氰基-2,4-二氟苯基； X选自N;Y和Z独立的选自N或C-R5，其中，R5选自:(1) 氢原子，(2) 甲基，(3) 乙基，(4) -CF3，(5) -CH2CF3，或(6) -CF2CF3;R1、 112和113独立的选自氢原子或甲基。
4、 如权利要求3所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，所述的化合物为 7-[2-[1^(2，4，5-三氟苄基)->4-((1，1-二甲胍-3-基)亚胺基甲基)胺基乙酰基]-3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢-[l，2，4]三唑[4，3-a]吡嗪。
5、 如权利要求1 4任一权利要求所述的化合物，其药学上可接受的盐选自柠檬酸、马 来酸、富马酸、酒石酸、氢溴酸、盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸。
6、 如权利要求1 4任一权利要求所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体与一种或多种药用载体和/或稀释剂的药物组合物。
7、 如权利要求6所述的药物组合物，为药学上可接受的任一剂型。
8、 如权利要求7所述的药物组合物，为口服制剂。
9、 如权利要求1 4任一权利要求所述的化合物、其药学上可接受的盐及其异构体，在 用于制备治疗、控制或预防糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、高血糖、胰岛素抗性的药物中 的应用。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，具体涉及通式(I)所示的二肽酶-IV抑制剂衍生物、其药学上可接受的盐、或其异构体其中Ar、X、Y、Z、R¹、R²和R³如说明书中所定义；本发明还涉及这些化合物的制备方法，含有这些化合物的药物组合物，以及这些化合物在制备治疗和/或预防糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、高血糖、胰岛素抗性的药物中的应用。
文档编号C07D487/00GK101397300SQ200810215028
公开日2009年4月1日 申请日期2008年9月3日 优先权日2007年9月4日
发明者赵红宇, 黄振华 申请人:山东轩竹医药科技有限公司