专利名称：：从玄参中提取多酚类化合物的方法
技术领域：
：本发明涉及从玄参中提取多酚类化合物的方法。
背景技术：
：玄参(ScrophulariaL.)为玄参禾斗植物玄参(ScrophularianingpoensisHemsl)的干燥根，别名元参、黑参、浙玄参、乌元参等。玄参中含有丰富的多酚类化合物。多酚类化合物的主要功能性质是作为许多酶体系的抑制剂或激活剂、金属螯合剂以及自由基清除剂。多酚类化合物通过酚羟基的离解和自由基途径产生抗氧化作用，是医药、食品、化妆品中很有前景的一类天然抗氧化剂和自由基清除剂。所以从玄参中如何提取多酚类化合物具有重要的研究价值和广泛的应用前景。目前采用的从玄参中提取多酚类化合物的方法有回流、冷浸、回流和渗漉等方法(国家药典委员会编，中华人民共和国药典(2005年版一部)，2005:76-77;程存归等，南京理工大学学报，2006(30)，243-247)。以粉碎的玄参药材为原料，以渗漉法和回流法等从玄参中提取多酚类化合物，提取时间长，溶剂消耗量大，受仪器限制提取量小，成本也高。
发明内容本发明提供了从玄参中提取多酚类化合物的方法，采用快速溶剂萃取(简称ASE)方法。该ASE方法是在一定的温度(50°C-200°C)和压力(1000-3000psi或10.3-20.6MPa)下用溶剂对固体或半固体样品进行萃取的方法。使用常规的溶剂、利用增加温度和提高压力提高萃取的效率，其结果大大加快了萃取的时间并明显降低萃取溶剂的使用量。ASE快速溶剂萃取技术具有如下的显著特点时间短(仅用15-20分钟)、溶剂少(萃取10-20克样品仅用15-30毫升溶剂)、萃取效率高。从玄参中提取多酚类化合物的方法的步骤和条件如下按照干燥的玄参粉末和硅藻土的质量比为11.2:24，把干燥的玄参粉末和硅藻土混匀后装入萃取池，萃取压力9.6-20.6MPa、静态5-10min，提取温度为40-8(TC，提取溶剂为体积浓度为60-90%的乙醇水溶液；提取次数为1-3次，合并萃取液，萃取结束后浓縮提取液，得到了玄参中提取的多酚类化合物。本发明得到的玄参中提取的多酚类化合物的总多酚含量，采用Folin-Ciocalteu测定方法，结果表示为每克样品中含有相当没食子酸的毫克数。吸取上述提取的样品溶液O.2ml，加入lmL0.5N的Folin-Ciocalteu试剂，再加入0.8mL7.5%的碳酸钠溶液充分混合，室温下放置0.5小时，然后在765nm下测吸光度。用质量浓度范围为0.020.2mg/mL的没食子酸溶液制作标准曲线，y=9.5623x_0.1332(R2=0.9999)，如图1所示。所有测定重复2次，一致性很好。有益效果本发明提供的从玄参中提取多酚类化合物的方法，比传统方法节省提取时间短仅用15-20分钟；使用的溶剂少萃取10-20克样品仅用15-30毫升溶剂)漂取效率高经过本发明的方法提取的总多酚化合物的含量为0.3658-0.3842mg/g，所提取的总多酚的含量是其他提取方法约1.5-1.8倍。图l为没食子标准曲线图。图2为不同提取方法获得的从玄参中提取的总多酚化合物含量的柱状图。图中分别为本发明提供的ASE方法、超声提取法和回流提取法柱状图。可以看出本发明提供的ASE方法，可以明显提高从玄参中提取多酚类化合物的产量。具体实施方式实施例1将干燥的玄参粉末，过60目筛，准确称量2.049g，加入3.058g硅藻土混匀后装入萃取池，萃取压力10.3MPa、静态5min，提取温度4(TC，提取溶剂为80X(v/v)乙醇水溶液，提取次数为1次，萃取结束后浓縮提取液，得到了玄参中提取的多酚类化合物。样品总酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu方法，结果表示为每克样品中含有相当没食子酸的毫克数。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu试剂，再加入0.8mL7.5(m/m)%的碳酸钠溶液充分混合，室温下放置0.5小时然后在765nm下测吸光度，测得从玄参中提取的总多酚的含量为0.2909mg/g。实施例2将干燥的玄参粉末，过60目筛，准确称量2.030g，加入2.980g硅藻土混匀后装入萃取池，萃取压力11.8MPa、静态5min，提取温度45t:，提取溶剂为60X(V/V)乙醇水溶液，提取次数为2次，合并萃取液，萃取结束后浓縮提取液，得到了玄参中提取的多酚类化合物。样品总酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu方法，结果表示为每克样品中含有相当没食子酸的毫克数。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu试剂，再加入O.8mL7.5%(m/m)的碳酸钠溶液充分混合，室温下放置0.5小时，然后在765nm下测吸光度，测得从玄参中提取的总多酚的含量为0.2055mg/g。实施例3将干燥的玄参粉末，过60目筛，准确称量2.016g，加入2.004硅藻土混匀后装入萃取池，萃取压力10.3MPa、静态5min，提取温度6(TC，提取溶剂为80X(V/V)乙醇水溶液，提取次数为3次，萃取结束后浓縮提取液，得到了玄参中提取的多酚类化合物。样品总酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu方法，结果表示为每克样品中含有相当没食子酸的毫克数。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu试剂，再加入0.8mL7.5%(m/m)的碳酸钠溶液充分混合，室温下放置0.5小时，然后在765nm下测吸光度，测得从玄参中提取的总多酚的含量为0.0450mg/g。实施例4将干燥的玄参粉末，过60目筛，准确称量2.032g，加入2.432g硅藻土混匀后装入萃取池，萃取压力10.3MPa、静态5min，提取温度8(TC，提取溶剂为80^乙醇水溶液，提取次数为3次，萃取结束后浓縮提取液，得到了玄参中提取的多酚类化合物。样品总酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu方法，结果表示为每克样品中含有相当没食子酸的毫克数。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu试剂，再加入O.8mL7.5%(m/m)的碳酸钠溶液充分混合，室温下放置0.5小时，然后在765nm下测吸光度，测得从玄参中提取的总多酚的含量为0.3658mg/g。实施例5将干燥的玄参粉末，过60目筛，准确称量2.063g，加入0.2341硅藻土混匀后装入萃取池，萃取压力13.3MPa、静态5min，提取温度80°C，提取溶剂为60%乙醇水溶液，提取次数为1次，萃取结束后浓縮提取液，得到了玄参中提取的多酚类化合物。样品总酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu方法，结果表示为每克样品中含有相当没食子酸的毫克数。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu试剂，再加入O.8mL7.5%(m/m)的碳酸钠溶液充分混合，室温下放置0.5小时，然后在765nm下测吸光度，测得从玄参中提取的总多酚的含量为0.2498mg/g。实施例6将干燥的玄参粉末，过60目筛，准确称量2.002g，加入2.234g硅藻土混匀后装入萃取池，萃取压力10.3MPa、静态5min，提取温度65t:，提取溶剂为60X乙醇水溶液，提取次数为2次，萃取结束后浓縮提取液，得到了玄参中提取的多酚类化合物。样品总酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu方法，结果表示为每克样品中含有相当没食子酸的毫克数。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu试剂，再加入0.8mL7.5%(m/m)的碳酸钠溶液充分混合，室温下放置0.5小时，然后在765nm下测吸光度，测得从玄参中提取的总多酚的含量为0.2401mg/g。玄参ASE正交试验因素水平表、正交表和实验结果分析如下表l因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表2LJ33)正交表和实验结果分析<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>采用L9(33)正交试验，来确定利用ASE150型快速溶剂萃取仪进行了玄参快速溶剂萃取的最佳条件，结果见表2。各因素对快速溶剂萃取玄参影响大小的顺序为B(主)一C—A(次)。本实验选择AAC3组合萃取作为从玄参中快速溶剂萃取的最佳工艺，即使用80-90%(V/V)乙醇水溶液在8(TC温度下提取3次，每次5min。参考文献[l]Kitagawaletal.OntheiridoidconstituentisolatedfromtherootsofscrophulariabuergeranaMiq.ChemArarmBull,1967，15(8):1254[2]LIYM，JIANGSH，ZHUDY.Progressofstudyonthechemicalconstituentofinscrophulariaplantandactivityinpharmacology[J].ChinTraditHerbDrugs(中草药)，1999，30(4):307310.[3]李医明，蒋山好，高文运，等.玄参中的苯丙素苷成分[J].中草药.1999，30(7):487489[4]李医明，蒋山好，高文运，等.玄参的脂溶性化学成分[J].药学学报.1999，34(6):448450[5]李医明，蒋山好，等.玄参属植物化学成分与药理活性研究进展[J].中草药1999,30(4):307310[6]张建春，朱健美.玄参的化学成分与药理作用研究进展[J].山东医药工业.2003,22(1):2527[7]张雯洁，等.中药玄参的化学成分[J].云南植物研，1994，16(4):407412[8]邹臣亭，杨秀伟.玄参中一个新的环烯醚萜苷化合物[J].中草药.2000，31(4):241243[9]SubramaniSellappan，CasimirCAkoh&GerardKrewer.PhenolicCompoundsandAntioxidantCapacityofGeorgia—GrownBlueberriesandBlackberries[J].J.Agric.FoodChem.，2002，50(8):2432-2438.[10]Sanchez-MorenoC，LarrauriJA&Saura-CalixtoF.Freeradicalscavengingcapacityandinhibitionoflipidoxi_dationofwines，grapejuicesandrelatedpolyphenoliccon_stituents[J].FoodRes.Int.，1999，32:407-412.[11]石碧，狄莹植物多酚[M].北京:科学出版社，2000:124.[12]陈欣欣，许时婴.黑莓渣提取物中多酚类化合物抗氧化活性的研究[J].食品工业，20Q7(3):3-6.权利要求从玄参中提取多酚类化合物的方法，其特征在于步骤和条件如下按照干燥的玄参粉末和硅藻土的质量比为1～1.2∶2～4，把干燥的玄参粉末和硅藻土混匀后装入萃取池，萃取压力9.6-20.6Mpa，静态5-10min，提取温度为40-80℃，提取溶剂为体积浓度为60-90％的乙醇水溶液，提取次数为1-3次，合并萃取液，浓缩提取液，得到玄参中提取的多酚类化合物。全文摘要本发明提供了从玄参中提取多酚类化合物的方法。取干燥的玄参药材粉末，加入硅藻土混匀后入萃取，萃取结束后浓缩提取液。本发明提供的从玄参中提取多酚类化合物的方法，与传统方法相比提取时间短仅用15-20分钟；使用的溶剂少萃取10-20克样品仅用15-30毫升溶剂)；萃取效率高经过本发明的方法提取的总多酚化合物的含量为0.3658-0.3842mg/g，所提取的总多酚的含量是其他提取方法约1.5-1.8倍。文档编号C07G99/00GK101709068SQ20091021784公开日2010年5月19日申请日期2009年11月12日优先权日2009年11月12日发明者刘春明,刘质净,张红晶,时东方,李丽,王强,郑梅竹申请人:长春师范学院