专利名称：一种制备朝藿定c的方法
技术领域：
本发明涉及一种制备朝藿定C的方法，特别是涉及一种利用高速逆流色谱法制备朝藿定C的方法。
背景技术：
朝藿定(XEpimedin C)，黄酮苷类化合物，熔点179_180°C(甲醇)，分子式C39H5tlO19, 分子量822. 8，分子结构式
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朝藿定c具有显著增加细胞基质钙、促进骨细胞增殖和增加矿化结节钙作用，同时还具有显著的免疫促进作用。传统医学认为淫羊藿性味辛甘、温，有补肾壮阳、祛风除湿的功效。现代医学研究表明淫羊藿中含有大量黄酮类物质，具有增强内分泌系统的分泌功能、激素样作用、促进蛋白质合成、调节细胞代谢、增强免疫功能、抗衰老、降压、抗血小板聚集、抗炎、抗菌、抗病毒、 袪痰、镇咳、降糖及性激素样作用等药理作用。但淫羊藿又分为檗科植物淫羊藿处i ^// brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿腫 sagittaturn (Sieb. et Zucc. )Maxim.、柔毛 S^e Epimedium pubescens Maxim. >M illS^im Epimedium wushanense Τ· S. Ying 禾口卓月 ^fmMEpimedium koreanum Naka，其中朝藿定C含量差别悬殊，巫山淫羊藿含量最高，同时在《中国药典-2010版》中规定朝藿定C作为巫山淫羊藿的指标性成分。由于朝藿定C结晶较难，纯化高含量朝藿定C的工艺较为繁琐，制备量较小。如专禾Ij (申请号200610201222. 5)“朝藿定C对照品的制备方法及其产品”，该专利公开的方法是 45-90%乙醇回流提取，提取液浓缩后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，再进行硅胶柱和聚酰胺分离。专利(申请号200710002610. 5)“朝藿定C标准对照品的制备方法”， 该专利公开的方法是乙醇回流提取，乙酸乙酯和乙酸乙酯-甲醇萃取，萃取物用硅胶柱分离后再采用反相硅胶和凝胶柱分离。还有专利(200810229887. 6)“一种朝藿定C化学对照品的分离制备方法”，该专利采用的方法是两步制备液相分离得到产品。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种制备朝藿定C的方法，应用高速逆流色谱分离纯化，操作简单，生产周期短。
为实现上述目的，本发明技术解决方案如下
一种制备朝藿定C的方法，其特征在于包括以下步骤
1)以巫山淫羊藿为原料，粉碎加入70-90%甲醇溶液微波提取，提取液加活性炭脱色， 脱色液减压浓缩至无醇加水分散，加入聚酰胺树脂吸附，甲醇水溶液梯度洗脱，收集目标成分，减压浓缩，放置沉淀，去除沉淀物，浓缩液干燥，得粗提物；
2)上述粗提物采用高速逆流色谱分离，即得高纯度朝藿定C。步骤1)中活性炭可选药用粉末状活性炭，用量为液体量的1_2%。步骤1)所述的甲醇溶液梯度洗脱为4-5BV20-30%甲醇洗脱杂质，4_5BV40_60%甲醇洗脱有效成分。步骤2)所述的高速逆流色谱的溶剂系统为氯仿、甲醇、水，混合比例4-5:5-7:3， 取上相为流动相，下相为固定相。步骤2)所述的高速逆流色谱分离条件为流动相流速l-3ml/min，主机转速 700-1000rpm,常温分离，检测器检测波长270nm。本发明优点是采用高速逆流色谱分离，是液液分配色谱，分离过程样品不损失，也不产生废弃物，制备周期短，制备量大，产品含量高。
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1
取巫山淫羊藿，取1kg，加10倍量70%甲醇溶液微波提取1小时，滤出液体，再加6倍量甲醇溶液，微波提取1小时，提取液合并加入2%药用活性炭80°C脱色1小时，滤除活性炭减压浓缩，浓缩液加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先取5BV20%甲醇溶液洗脱杂质，再取5BV40%甲醇溶液洗脱，收集减压浓缩无醇，放置沉淀，滤出沉淀再浓缩干燥，得到18g粗品。取氯仿、甲醇、水，按比例5:7:3混合，静置分层后，取下相注入色谱管中做固定相，开启主机，调整转速700rpm，泵入上相，平衡后，调整流速2ml/min，上相溶解粗品，过滤后进样， 紫外检测器在波长270nm检测，收集流分回收试剂，连续制备，干燥即得到朝藿定C 5. 2g， 经HPLC检测，含量98. 7%。实施例2:
取巫山淫羊藿，取lkg，加6倍量90%甲醇溶液微波提取30分钟，提取3次，提取液合并加入1%药用活性炭80°C脱色1小时，滤除活性炭减压浓缩，浓缩液加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先取4BV30%甲醇溶液洗脱杂质，再取4BV60%甲醇溶液洗脱，收集减压浓缩无醇， 放置沉淀，滤出沉淀再浓缩干燥，得到15g粗品。取氯仿、甲醇、7K，按比例4:5:3混合，静置分层后，取下相注入色谱管中做固定相，开启主机，调整转速IOOOrpm，泵入上相，平衡后，调整流速lml/min，上相溶解粗品，过滤后进样，紫 外检测器在波长270nm检测，收集流分回收试剂，连续制备，干燥即得到朝藿定C 4. 2g，经HPLC检测，含量98. 1%。实施例3:
取巫山淫羊藿，取1kg，加10倍量80%甲醇溶液微波提取1小时，滤出液体，再加6倍量甲醇溶液，微波提取1小时，提取液合并加入2%药用活性炭80°C脱色1小时，滤除活性炭减压浓缩，浓缩液加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先取5BV30%甲醇溶液洗脱杂质，再取5BV50%甲醇溶液洗脱，收集减压浓缩无醇，放置沉淀，滤出沉淀再浓缩干燥，得到13g粗品。取氯仿、甲醇、水，按比例5:5:3混合，静置分层后，取下相注入色谱管中做固定相，开启主机，调整转速800rpm，泵入上相，平衡后，调整流速3ml/min，上相溶解粗品，过滤后进样， 紫外检测器在波长270nm检测，收集流分回收试剂，连续制备，干燥即得到朝藿定C 4. 5g, 经HPLC检测，含量98. 4%
权利要求
1.一种制备朝藿定C的方法，其特征在于包括以下步骤1)以巫山淫羊藿为原料，粉碎，加入70-90%甲醇溶液微波提取，提取液加活性炭脱色， 脱色液减压浓缩至无醇加水分散，加入聚酰胺树脂吸附，甲醇水溶液梯度洗脱，收集目标成分，减压浓缩，放置沉淀，去除沉淀物，浓缩液干燥，得粗提物；2)上述粗提物采用高速逆流色谱分离，即得高纯度朝藿定C。
2.根据权利要求1所述制备朝藿定C的方法，其特征在于步骤1)所述的甲醇溶液梯度洗脱为4-5BV20-30%甲醇洗脱杂质，4-5BV40-60%甲醇洗脱有效成分。
3.根据权利要求1所述制备朝藿定C的方法，其特征在于步骤2)所述的高速逆流色谱的溶剂系统为氯仿、甲醇、水，混合比例4-5:5-7:3，取上相为流动相，下相为固定相。
4.根据权利要求1所述制备朝藿定C的方法，其特征在于步骤2)所述的高速逆流色谱分离条件为流动相流速l-3ml/min，主机转速700-1000rpm，常温分离，检测器检测波长 270nm。
全文摘要
本发明涉及一种制备朝藿定C的方法。方法包括以下步骤1)以巫山淫羊藿为原料，粉碎加入70-90%甲醇溶液微波提取，提取液加活性炭脱色，脱色液减压浓缩至无醇加水分散，加入聚酰胺树脂吸附，甲醇水溶液梯度洗脱，收集目标成分，减压浓缩，放置沉淀，去除沉淀物，浓缩液干燥，得粗提物；2)上述粗提物采用高速逆流色谱分离，即得高纯度朝藿定C。本发明的工艺简单易操作，产品收率高、纯度高，适合工业化制备。
文档编号C07H17/07GK102329357SQ20111021064
公开日2012年1月25日 申请日期2011年7月26日 优先权日2011年7月26日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司