一种从发酵液中分离纯化1403b的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从发酵液中分离纯化1403B的方法。所述方法包括步骤：（1）将1403B的发酵液和有机溶剂或其水溶液混合、抽提，得到抽提液；（2）使抽提液经大孔吸附树脂吸附，用有机溶剂或其水溶液解吸，得到解吸液；（3）使解吸液经大孔聚合物填料层析，用有机溶剂或其水溶液洗脱，得到1403B馏分。
【专利说明】一种从发酵液中分离纯化1403B的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及发酵液的分离纯化，尤其涉及一种从发酵液中分离纯化1403B的方法。
【背景技术】
[0002]1403B 是从海洋红树林内生真菌 Halorosenia sp.1403 (CCTCC N0.201018)的发酵液中分离得到的蒽醌类天然产物。经活性测试发现其具有较好的抗结核菌活性(佘志刚，林永成等.醌类化合物在制备抗结核菌药物中的应用.ZL201010204766.3)，该化合物能用于开发抗结核药物，应用前景广阔。
[0003]目前已报道的分离纯化方法主要为萃取一硅胶、聚酰胺层析一重结晶的方法，如专利ZL201010204766.3报道:将发酵液固液分离后除去菌体，上清液加热浓缩至原体积的1/20-1/5，用乙酸乙酯反复萃取、浓缩，浓缩物在硅胶柱中进行层析分离，用石油醚/乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱，收集30%—80%乙酸乙酯/石油醚部分，浓缩后再经聚酰胺柱层析，45%乙酸乙酯/石油醚洗脱，重结晶纯化，得到红色颗粒状1403B晶体。
[0004]文献报道的分离纯化方法存在一些缺点:操作较为繁琐；有机溶剂用量大、挥发性强、毒性较大、对环境有污染且安全性差；所用层析介质易污染、重复使用次数少等。上述缺点不利于1403B的规模化制备。
[0005]因此，本领域迫切需要 提供一种从红树林内生真菌Halorosenia sp.1403 (CCTCCN0.201018)的发酵液中分离纯化天然产物1403B的方法。
【发明内容】
[0006]本发明旨在提供一种从发酵液中分离纯化1403B的方法。
[0007]本发明提供了一种从发酵液中分离纯化1403B的方法，所述方法包括步骤:
[0008](I)将1403B的发酵液和有机溶剂或其水溶液混合、抽提，得到抽提液；
[0009](2)使抽提液经大孔吸附树脂吸附，用有机溶剂或其水溶液解吸，得到解吸液；和
[0010](3)使解吸液经大孔聚合物填料层析，用有机溶剂或其水溶液洗脱，得到1403B馏分。
[0011]在另一优选例中，所述大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂，所述大孔聚合物填料为非极性大孔聚合物填料；
[0012]较佳地，所述非极性大孔吸附树脂骨架选自苯乙烯-二乙烯苯或甲基丙烯酸脂；更佳地为苯乙烯-二乙烯苯；
[0013]较佳地所述的非极性聚合物填料的骨架选自苯乙烯-二乙烯苯或甲基丙烯酸脂；更佳地为苯乙烯-二乙烯苯。
[0014]在另一优选例中,所述大孔聚合物填料粒径为4-100 μ m ;更优选4_30 μ m。
[0015]在另一优选例中，步骤(2)中所述有机溶剂或其水溶液的pH为10.0-13.0 ;更优选ρΗ12.5-13.0。[0016]在另一优选例中，步骤(3)中使pH为2.0-5.0的解吸液经大孔聚合物填料吸附；更优选 ρΗ2.0-4.0。
[0017]在另一优选例中，所述有机溶剂选自醇类、酮类或腈类；更优选醇类；最优选C1-C4 醇。
[0018]在另一优选例中，步骤(I)中将1403Β的发酵液和有机溶剂或其水溶液混合后，所述有机溶剂在混合物中的体积比为20%-90%(更优选30%-90%)，并且混合液的pH为1.0-4.0(更优选 pHl.0-2.5)。
[0019]在另一优选例中，步骤(I)中在室温_80°C进行抽提；更优选70_80°C。
[0020]在另一优选例中，步骤(2)中用于解吸的有机溶剂水溶液中有机溶剂的体积比为30%-75% ;更优选 30%-55%。
[0021]在另一优选例中，步骤(3)中用于洗脱的有机溶剂水溶液中有机溶剂的体积比为30%-75%。
[0022]在另一优选例中，所述方法还包括步骤:将1403B馏分浓缩、析晶，得到1403B晶体。
[0023]据此，本发明提供了一种从红树林内生真菌Halorosenia sp.1403 (CCTCCN0.201018)的发酵液中分离纯化天然产物1403B的方法。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1显示了实施例1分离纯化得到的1403B的质谱测定结果。
【具体实施方式】.
[0025]发明人经过广泛而深入的研究，惊奇地发现将1403B发酵液经过有机溶剂抽提、大孔吸附树脂的富集、大孔聚合物填料层析和结晶，可以得到高纯度的1403B。
[0026]如本文所用，“1403B”是指分子式为C16H16O7的物质，其结构式为:
[0027]
【权利要求】
1.一种从发酵液中分离纯化1403B的方法，其特征在于，所述方法包括步骤: (1)将1403B的发酵液和有机溶剂或其水溶液混合、抽提，得到抽提液； (2)使抽提液经大孔吸附树脂吸附，用有机溶剂或其水溶液解吸，得到解吸液； (3)使解吸液经大孔聚合物填料层析，用有机溶剂或其水溶液洗脱，得到1403B馏分。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂，所述大孔聚合物填料为非极性大孔聚合物填料。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述非极性大孔吸附树脂骨架选自苯乙烯-二乙烯苯或甲基丙烯酸脂；优选苯乙烯-二乙烯苯；所述的非极性聚合物填料的骨架选自苯乙烯-二乙烯苯或甲基丙烯酸脂；优选苯乙烯-二乙烯苯。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔聚合物填料粒径为4-100μ m ;优选4-30 μ mD
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述有机溶剂或其水溶液的pH为 10.0-13.0 ;优选 ρΗ12.5-13.0。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中使pH为2.0-5.0的解吸液经大孔聚合物填料吸附；优选PH2.0-4.0。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂选自醇类、酮类或腈类；优选醇类；更优选C1-C4醇。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(I)中将1403B的发酵液和有机溶剂或其水溶液混合后，所述 有机溶剂在混合物中的体积比为20%-90% (优选30%-90%)，并且混合液的 pH 为 1.0-4.0 (优选 pHl.0-2.5)。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(I)中在室温_80°C进行抽提；优选70-80。。。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中用于解吸的有机溶剂水溶液中有机溶剂的体积比为30%-75% ;优选30%-55%。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中用于洗脱的有机溶剂水溶液中有机溶剂的体积比为30%-75%。
12.如权利要求1-11任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤:将1403B馏分浓缩、析晶，得到1403B晶体。
【文档编号】C07C46/10GK103435457SQ201310330026
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年7月31日 优先权日:2013年7月31日
【发明者】那可, 赵文杰, 赵波, 刘永双, 魏晓东, 马川川, 张守雨 申请人:上海医药工业研究院, 中国医药工业研究总院