抗肿瘤活性化合物的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种制备高纯度化合物oblongifolin?C和guttiferone?K的方法，它包括如下步骤：（a）将云南藤黄用甲醇、乙醇、丙酮或丁酮室温浸泡提取或加热回流提取，减压浓缩提取液至无有机溶剂味，得浸膏A；（b）对浸膏A进行硅胶柱层析分离，得浸膏B；（c）对浸膏B进行MCI柱或大孔树脂柱层析分离，得浸膏C；（d）对浸膏C进行MPLC纯化，收集含有目标化合物的流份，得浸膏D；（e）对浸膏D进行HPLC纯化，收集目标化合物流份，减压，浓缩，干燥。
【专利说明】抗肿瘤活性化合物的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然药物领域，特别是涉及一种抗肿瘤活性化合物的制备方法【背景技术】
[0002]据文献报道，从植物中提取的化合物oblongifolin C对宫颈癌和肝癌具有显著的抑制活性，guttiferone K对卵巢癌和结肠癌具有显著的抑制活性。故而,oblongifolin C或/和guttiferone K有望作为活性成分用于制备抗肿瘤药物制剂。
[0003]Wafaa Hamed 等(J.Nat.Prod.2006,69:774-777)从 Garcinia oblongifolia 的树皮中分离得到化合物oblongifolin C，其采用乙酸乙酯浸泡提取，两次硅胶柱层析分离，以庚烷-乙酸乙酯混合溶液进行洗脱，采用制备液相以乙腈-水-0.1%甲酸混合溶液洗脱进行纯化，制得。Gang Xu 等(J.Agric.Food Chem.2008, 56 (23): 11144-11150)从 Garciniayunnanensis的果皮中分离得到化合物oblongifolin C,其采用丙酮浸泡提取,提取物经娃胶柱层析分离，三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮依次洗脱，三氯甲烷洗脱部位再进行硅胶柱层析分离，正己烷-丙酮混合溶液进行梯度洗脱，洗脱液再采用制备液相经反相C18柱纯化制得。Sheng-Xiong Huang 等(J.Nat.Prod.2009, 72:130-135)从 Garcinia oblongifolia 的树皮中分离得到化合物oblongifolin C，其采用丙酮浸泡提取，提取物水混悬后以三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取部位用硅胶柱层析分离，以正己烷-丙酮混合溶液进行梯度洗脱，洗脱液再采用制备液相经反相C18柱以甲醇-水混合溶液进行梯度洗脱，再经过凝胶LH-20柱以甲醇进行洗脱，再采用制备液相以含0.3%甲酸的乙腈-0.3%甲酸的水混合溶液为流动相进行洗脱，纯化，制得。
[0004]Shugeng Cao 等(J.Nat.Prod.2007, 70:686-688)从 Rheedia calcicola 的果实中分离得到化合物guttiferone K，其采用乙醇渗滤提取，回收溶剂后提取物用甲醇_水(9:1)混悬，以正己烷萃取。甲醇-水层稀释为70%甲醇溶液，再用二氯甲烷萃取。二氯甲烷层回收有机溶剂后，残渣用甲醇复溶，经C18固相萃取柱，后采用制备液相以甲醇-水(85:15)洗脱，制得。Milena Masullo 等(J.Agric.Food Chem.2008，56 (13): 5205-5210)从Garcinia cambogia的果实中分离得到化合物guttiferone K,其采用乙醇浸泡提取20天，回收有机溶剂后，提取物以水混悬，用二乙醚萃取，二乙醚萃取物再采用半制备高效液相经反相ODS色谱柱分离纯化，以含0.1%三氟乙酸的水-含0.1%三氟乙酸的乙腈溶液为洗脱液洗脱，纯化，制得。Gang Xu 等(J.Agric.Food Chem.2008，56 (23): 11144-11150)从Garcinia yunnanensis的果皮中分离得到化合物guttiferone K,其采用丙酮浸泡提取，提取物经硅胶柱层析分离，三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮依次洗脱，氯仿洗脱部位再进行硅胶柱层析分离，正己烷-丙酮混合溶液进行梯度洗脱，洗脱液再经过硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮混合溶液进行梯度洗脱，后再采用制备液相经反相C18柱，以乙腈-0.1%乙酸水为流动相洗脱，纯化，制得。Hui yang 等(J.Agric.Food Chem.2010, 58 (8): 4749-4755)从Garcinia Iivingstonei果实中分离得到化合物guttiferone K,其采用甲醇浸泡提取，回收有机溶剂后用水混悬，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，乙酸乙酯萃取部位经两次凝胶Sephadex LH-20柱层析分离，用甲醇洗脱,后再采用制备液相进行纯化,制得。GiovannaR.Almanza 等(Nat.Prod.Comm.2011,6 (9): 1269-124)从 Rheedia acuinata 的莖皮中分离得到化合物guttiferone K，其采用石油醚浸泡提取后，药渣再经二氯甲烷浸泡提取，二氯甲烷提取物再经减压液相柱色谱(VLC)纯化，以二氯甲烷-石油醚及甲醇-二氯甲烷为流动相依次进行梯度洗脱，洗脱液在经多次柱层析，后经重结晶纯化，制得。
[0005]云南藤黄(Garcinia yunnanensis Hu)是我国的特有植物,分布于云南省西南部。液相分析结果显示，其植物体各部位均有含量较高的抗肿瘤活性化合物oblongifolin C和guttiferone K。目前尚未见从云南藤黄中大量提取制备高纯度化合物oblongifolin C和guttiferone K的相关报道。
【发明内容】
[0006]本发明的目的旨在提供一种高纯度抗肿瘤活性化合物oblongifolin C和guttiferone K的制备方法。
[0007]具体地说，本发明第一方面是提供了一种式(I )化合物的制备方法，所述方法包括如下步骤:
[0008]
【权利要求】
1.一种式(I )化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤:
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，它包括如下步骤: Ca)将云南藤黄用丙酮室温浸泡提取，丙酮体积为云南藤黄药材质量的5倍，每次浸泡48h，共浸泡提取3次，合并丙酮浸泡提取液，减压浓缩至无丙酮味，得浸膏A ； (b)对浸膏A进行硅胶柱层析分离:硅胶用量为浸膏的10倍，规格为200目，浸膏A用三氯甲烷进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩三氯甲烷洗脱液，得浸膏B; (c)对浸膏B进行MCI柱层析分离:以乙醇与水按90:10的体积比形成的混合溶液进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩洗脱液，得浸膏C ； Cd)对浸膏C进行MPLC纯化:将含有目标化合物的流份经中压ODS柱层析纯化，以甲醇与水按85:15-100:0的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱,流速为20mL/min,薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压，浓缩，干燥。
3.—种式(II)化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤:
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，它包括如下步骤: Ca)将云南藤黄用丙酮室温浸泡提取，丙酮体积为云南藤黄药材质量的5倍，每次浸泡48h，共浸泡提取3次，合并丙酮浸泡提取液，减压浓缩至无丙酮味，得浸膏A ； (b)对浸膏A进行硅胶柱层析分离:硅胶用量为浸膏的10倍，规格为200目，浸膏A用三氯甲烷进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩三氯甲烷洗脱液，得浸膏B; (c)对浸膏B进行MCI柱层析分离:以乙醇与水按90:10的体积比形成的混合溶液进行洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩洗脱液，得浸膏C ； Cd)对浸膏C进行MPLC纯化:将含有目标化合物的流份经中压ODS柱层析纯化，以甲醇与水按85:15-100:0的体积比形成的混合溶液进行梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有目标化合物的流份，减压浓缩洗脱液，得浸膏D ； Ce)对浸膏D进行HPLC纯化:采用Waters2535或2545制备液相色谱仪，色谱柱为Waters Xbridge Prep C180BD column (19X 250mm, 5 μ m),洗脱液是以等比例的乙臆与甲醇形成的混合溶液再与0.1%甲酸水按85:15的体积比形成的混合溶液，流速为20mL/min，收集保留时间20min的目标化合物流份，减压，浓缩，干燥。
【文档编号】C07C49/83GK103626644SQ201310410325
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年9月10日 优先权日:2013年9月10日
【发明者】徐宏喜, 胡冬冬, 张红梅, 张洪, 李惠 申请人:上海中医药大学