一种制备利西拉来的方法
【专利摘要】本发明涉及一种制备利西拉来的方法，其通过将片段1-2与片段3-44肽树脂，或者将片段1-4与片段5-44肽树脂进行固相缩合，然后将得到的利西拉来肽树脂裂解，得到利西拉来粗肽。
【专利说明】一种制备利西拉来的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种新的制备利西拉来的方法。
【背景技术】
[0002]糖尿病(Diabetes Mellitus)是一种因胰岛素绝对或相对不足或祀细胞对胰岛素敏感性减低引起的以糖代谢紊乱为主的慢性综合性疾病，其严重影响患者的健康和生活质量。临床上将糖尿病分为胰岛素依赖型糖尿病(I型糖尿病)和非胰岛素依赖型糖尿病(II型糖尿病)，其中II型糖尿病患者占90%以上。利西拉来(Iixisenatide)是全球第四个上市的的肠促胰岛素类似物，其给药频率为每日一次，联合口服降糖药或基础胰岛素一起治疗成人II型糖尿病。
[0003]临床研究表明，对于二甲双胍控制不佳的2型糖尿病患者，每日I次20 μ g (早上或晚上)利西拉来给药显著改善血糖控制，餐后给药效果明显，且药物耐受性良好。利西拉来的结构如下:
[0004]
【权利要求】
1.一种制备利西拉来的方法，包括以下步骤: 1)以一种树脂P作为载体，将Fm0c-Lys(B0c)-OH与树脂偶联，得到Fmoc-Lys (Boc)-OH-NH2Resin ； 2)按照Fmoc固相合成方法顺序地偶联得到片段3-44肽树脂或片段5_44肽树脂； 3)按照Fmoc固相合成方法合成片段1-2肽树脂Fmoc-His(Trt) -Gly-P或片段1_4肽树脂 Fmoc-His (Trt)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-P,然后裂解得到片段 1-2 或片段 1-4 ； 4)将片段3-44肽树脂在固相上偶联片段1-2，或者 将片段5-44肽树脂在固相上偶联片段1-4， 得到利西拉来肽树脂； 5)裂解利西拉来肽树脂，得到利西拉来粗肽； 其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氮原子相连。
2.权利要求1的方法，还包括纯化利西拉来的步骤，纯化优选通过重结晶方法或HPLC(例如反相HPLC)而进行。
3.权利要求1的方法，其中步骤I)-4)的偶联反应在固相反应柱中进行；步骤I)-5)均在室温和常压下进行。
4.权利要求1的方法，其中步骤I)中所述的树脂P为氨基树脂，其选自RinkAmideResin、Rink Amide AM Resin、Rink Amide-MBHA Resin 树脂，优选 Rink Amide-MBHAResin ;其中所述氨基树脂的 替代度为0.05-0.5mmol/g,优选为0.1-0.4mmol/g,更优选为0.2-0.3mmol/g ； 步骤3)中所述树脂P为2-CTC树脂或王树脂，优选2-CTC树脂；其中所述树脂P的替代度为 0.2-1.2mmol/g,优选为 0.5-1.lmmol/g,更优选为 0.6-1.0mmol/g。
5.权利要求1的方法，其中步骤1)-3)中的偶联剂为HOBt/DIC;步骤4)中的偶联剂为HATU/HOAt/DIPEA。
6.权利要求1的方法，其中偶联反应或裂解反应的时间通常为1-6小时，优选2-5小时。
7.权利要求1的方法，其中偶联反应中对树脂的洗涤和溶胀采用DMF进行。
8.权利要求1的方法，其中步骤I)-5)中脱除Fmoc的试剂为DBLK;脱保护反应时间为5-30分钟，优选10-20分钟。
9.权利要求1的方法，其中将步骤I)-4)中的肽树脂中的羧基进行活化，活化在冰水浴中进行；优选活化剂为DIPEA或DIC。
10.权利要求1的方法，其中步骤3)中的裂解试剂为弱酸，优选TFA或TFE和DCM的混合物，其中TFA =DCM的体积比为I:99 ； 步骤5)中的裂解液为TFA、苯甲硫醚、乙二硫醇、三异丙基硅烷和水的混合溶剂，其中混合溶剂的配比为:TFA体积比为80-86%，苯甲硫醚的体积比为1_5%、乙二硫醇的体积比为1_5%、三异丙基硅烷的体积比为1-3%，水的体积比为0.5-1%，四者之和为100%。
【文档编号】C07K1/04GK103709243SQ201310410018
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年9月10日 优先权日:2013年9月10日
【发明者】张文治, 刘建, 马亚平, 袁建成 申请人:深圳翰宇药业股份有限公司