专利名称：清洁工程技术制取陇南党参活性物质的一种方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，特别是涉及到ー种海藻多糖提取制备的方法。
ニ背景技术：
党參属桔梗科多年生蔓性草本植物，在陇南其播种面积为4万亩左右，总产量300多万公斤，种植区域遍布9个县(区)。党參多糖是陇南党參主要活性物质有效成分之一，药理作用广泛，具有增强体力和非特异性免疫、抗疲劳、抗缺氧、抗应激和抗衰老等功能。调查显示，陇南党參内多糖的含量平均可达到33%以上。由于党參主要分布在亚洲中部和东部，受植物生长地域限制，国外对党參多糖的提取研究较少，主要集中在国内。早在1986年，中国中医研究院中药研究所的张思巨等人 将党參饮片经过脱脂、蒸馏水加热提取、こ醇沉淀并通过过DEAE纤维素(0H-)柱层析，分离得到四种单ー多糖，并通过化学组成分析得出这四种多糖为水溶性杂多糖。目前，国内党參多糖提取技术主要有水提离心法、水提醇沉淀法等(如表2所示)，但现有提取方法由于技术參数选择不合理，导致提取物中党參多糖含量低。如刘文生等人从山西长治产藏党參中经过水提醇沉、活性炭脱色、95%こ醇沉淀、重结晶得到精制党參多糖，苯酚ー硫酸法測定总多糖含量以葡萄糖计达到20. 9% ;张雅君等人对东党中所含水溶性多糖通过沸水煎煮、3倍体积的85%こ醇醇析过夜，离心，常规干燥得到粗多糖，进ー步通过酶法联合sevage法去除游离蛋白，进行了提取分离纯化及组成分析，得到了两种水溶性的多糖，其重均相对分子质量分别为6308和7086。专利方面，专利号为200410012172. 7的专利公开了ー种采用水提离心法制备党參多糖的方法，提取物中党參多糖含量只在15%以上；专利申请号为200510012557. 8的专利公开的党參多糖的制备方法，得到的黄色粉末提取物中，党參多糖含量在60%以上。同时，现有的提取方法得到的提取物都是党參多糖的粗品，由于提取未经进ー步纯化，提取物杂质多、外观性状不佳、多糖组分不明确。此外，现有提取方法通常仅以多糖含量为指标对提取エ艺进行监测，不考察提取率，因而不能很好的体现エ艺的科学性和先进性。近年来，许多学者进行了党參多糖的提取研究，如李艳、宫存杞等对新疆党參多糖的生物活性及提取エ艺进行了详细的研究；南换杰、刘文生等人系统研究了潞党參多糖的提取エ艺；杜清、王莹莹等人分别研究了明党參多糖的特性及提取エ艺，相对而言目前对于甘肃陇南党參多糖的提取研究较少，仅有甘肃省人民医院药剂科许爱霞等人用常规水提醇沉法对甘肃产党參进行了提取并常规干燥，用硫酸-苯酚法测多糖含量为88. 2%。现阶段，人们对陇南党參的利用还停留在简单加工、炮制等阶段，对其内活性物质的开发研究较少，エ艺技术粗糙，产品提取率低，纯度不高，难以支持产业化推广，极大的限制了陇南党參的应用与推广。在此背景下，本发明以陇南党參为原料，完成党參多糖的制备，为超声波清洁技术产业化生产素花党參多糖的产业化推广提供一定的技术支持。
发明内容
本发明的目的是提出一种超声波清洁技术产业化生产党參多糖的方法，依此法可以有效提高党參多糖的产量和产品纯度，提高产率，降低生产成本。I、发明技术方案一种超声波清洁技术产业化生产党參多糖的方法，主要通过如下技术方案实现(I)除尘清洗将原料党參除去杂质和霉变部分，剰余部分用清水进行冲洗，冲洗后的原料放入烘箱内烘干；(2)原料预处理烘干后党參粉碎成粗粒，过40目筛，烘干后置干燥器内备用；(3)脱脂称取经预处理后的党參置于圆底烧瓶中，加石油醚后回流脱脂，过滤，挥干残渣溶媒，对石油醚进行回收备用；(4)超声波提取脱脂后党參残渣用こ醇浸溃过夜，超声提取2次，过滤，再次超声后过滤，获得党參多糖提取液；(5)脱色、沉淀将(4)获得的党參多糖提取液减压浓缩、活性炭脱色、离心分离、こ醇沉淀，过滤获得党參多糖粗品；(6)精制制备获得的党參多糖粗品内加入蒸馏水充分溶解，过滤去除杂质，经浓缩、こ醇沉淀后得到精制的党參多糖。2、发明技术特点(I)根据党參原料烘干过程中烘干温度会对党參多糖含量产生影响，对党參原材料的烘干温度进行了研究，确定了最适的烘干温度，可保证烘干后党參原料内多糖的最高量，从原料上保证了党參多糖的最大提取量；(2)根据多糖类化合物的提取现状，本发明创新性的采用超声波技术进行党參多糖的提取，具有提取率高、提取时间短、节约溶剂等特点，避免高温对提取液活性成分的影响，可保证党參多糖提取时间短、产率高，产品纯度高，成本低；(3)根据党參多糖溶于水不溶于こ醇的特性，本发明创新性的采用水、こ醇交替溶解、洗涤，去除杂质，重结晶后获得党參多糖纯品，可保证党參多糖纯度达到99%以上，提取率达到了 30%以上，技术达到国内领先水平；(4)本发明エ艺中创新性的融入了有机溶剂回收利用技术和有机残渣绿色处理技术，由于有机溶液使用量的減少，保证固体残渣可作为饲料应用于养殖行业，減少材料的浪费和环境污染，为陇南党參的清洁生产及综合利用提供了技术基础。
四
图I :陇南党參多糖提取制备エ艺流程图
五具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明进ー步说明。实施例一将原料党參除去杂质和霉变部分，剰余部分用清水进行冲洗，冲洗后的原料放入50°C的烘箱内烘干；烘干后党參粉碎成粗粒，过40目筛，50°C烘4h，置干燥器内备用；称取经预处理后的党參200g置于圆底烧瓶中，加石油醚500ml，75°C回流Ih脱脂，过滤，挥干残渣溶媒，对石油醚进行回收备用；脱脂后党參残渣用80%的こ醇500ml浸溃过夜，超声提取2次，每次lh，过滤，药渣加蒸馏水IOOOml浸溃Ih后，超声提取30min，过滤，再加500ml蒸馏水超声提取30min，过滤，滤渣处理后可用作饲料，合并上述所有过滤液，获得党參多糖提取液，经测定党參多糖的提取率为32. 24% ；将获得的党參多糖提取液减压浓缩至150ml，浓缩液中加入O. 5%的活性炭脱色，离心分离，上清液加95%こ醇使其醇量达到80%，冰箱静置过夜，过滤获得党參多糖粗品，对减压浓缩液及多糖的沉淀液进行蒸馏回收こ醇备用；制备获得的党參多糖粗品内加入蒸馏水充分溶解，过滤去除杂质，滤液浓缩加入95%的こ醇，冰箱静置过夜，过滤，沉淀加 蒸馏水充分溶解，过滤去杂质，滤液浓缩加入无水こ醇，冰箱静置过夜，过滤，沉淀加蒸馏水充分溶解，过滤去杂质，滤液浓缩加入无水こ醇，加入少量党參多糖纯品，冰箱静置获得党參多糖结晶纯品，离心分离，党參多糖60°C烘干至恒重即得到精制党參多糖，党參多糖的总提取率达到30. 28%，产品纯度为99. 30%。实施例ニ将原料党參除去杂质和霉变部分，剰余部分用清水进行冲洗，冲洗后的原料放入50°C的烘箱内烘干；烘干后党參粉碎成粗粒，过40目筛，50°C烘4h，置干燥器内备用；称取经预处理后的党參200g置于圆底烧瓶中，加石油醚500ml，75°C回流Ih脱脂，过滤，挥干残渣溶媒，对石油醚进行回收备用；脱脂后党參残渣用80%的こ醇500ml浸溃过夜，超声提取3次，每次50min，过滤，药渣加蒸馏水IOOOml浸溃Ih后，超声提取30min，过滤，再加500ml蒸馏水超声提取30min，过滤，滤渣处理后可用作饲料，合并上述所有过滤液，获得党參多糖提取液，经测定党參多糖的提取率为32. 65% ；将获得的党參多糖提取液减压浓缩至150ml，浓缩液中加入O. 6%的活性炭脱色，离心分离，上清液加95%こ醇使其醇量达到80%，冰箱静置过夜，过滤获得党參多糖粗品，对减压浓缩液及多糖的沉淀液进行蒸馏回收こ醇备用；制备获得的党參多糖粗品内加入蒸馏水充分溶解，过滤去除杂质，滤液浓缩加入95%的こ醇，冰箱静置过夜，过滤，沉淀加蒸馏水充分溶解，过滤去杂质，滤液浓缩加入无水こ醇，冰箱静置过夜，过滤，沉淀加蒸馏水充分溶解，过滤去杂质，滤液浓缩加入无水こ醇，加入少量党參多糖纯品，冰箱静置获得党參多糖结晶纯品，离心分离，党參多糖65°C烘干至恒重即得到精制党參多糖，党參多糖的总提取率达到30. 14%，产品纯度为99.41%。实施例三将原料党參除去杂质和霉变部分，剰余部分用清水进行冲洗，冲洗后的原料放入50°C的烘箱内烘干；烘干后党參粉碎成粗粒，过40目筛，50°C烘4h，置干燥器内备用；称取经预处理后的党參200g置于圆底烧瓶中，加石油醚500ml，75°C回流Ih脱脂，过滤，挥干残渣溶媒，对石油醚进行回收备用；脱脂后党參残渣用80%的こ醇500ml浸溃过夜，超声提取2次，每次75min，过滤，药渣加蒸馏水IOOOml浸溃Ih后，超声提取30min，过滤，再加500ml蒸馏水超声提取30min，过滤，滤渣处理后可用作饲料，合并上述所有过滤液，获得党參多糖提取液，经测定党參多糖的提取率为31. 79% ；将获得的党參多糖提取液减压浓缩至150ml，浓缩液中加入O. 8%的活性炭脱色，离心分离，上清液加95%こ醇使其醇量达到80%，冰箱静置过夜，过滤获得党參多糖粗品，对减压浓缩液及多糖的沉淀液进行蒸馏回收こ醇备用；
制备获得的党參多糖粗品内加入蒸馏水充分溶解，过滤去除杂质，滤液浓缩加入95%的こ醇，冰箱静置过夜，过滤，沉淀加蒸馏水充分溶解，过滤去杂质，滤液浓缩加入无水こ醇，冰箱静置过夜，过滤，沉淀加蒸馏水充分溶解，过滤去杂质，滤液浓缩加入无水こ醇，加入少量党參多糖纯品，冰箱静置获得党參多糖结晶纯品，离心分离，党參多糖62°C烘干至恒重即得到精制党參多糖，党參多糖的总提取率达到30. 10%，产品纯度为99. 12%。实施例四
将原料党參除去杂质和霉变部分，剰余部分用清水进行冲洗，冲洗后的原料放入50°C的烘箱内烘干；烘干后党參粉碎成粗粒，过40目筛，50°C烘4h，置干燥器内备用； 称取经预处理后的党參200g置于圆底烧瓶中，加石油醚500ml，75°C回流Ih脱脂，过滤，挥干残渣溶媒，对石油醚进行回收备用；脱脂后党參残渣用80%的こ醇500ml浸溃过夜，超声提取3次,姆次45min,过滤,药洛加蒸懼水IOOOml浸溃Ih后,超声提取30min,过滤，再加500ml蒸馏水超声提取30min，过滤，滤渣处理后可用作饲料，合并上述所有过滤液，获得党參多糖提取液，经测定党參多糖的提取率为31. 51% ；将获得的党參多糖提取液减压浓缩至150ml，浓缩液中加入O. 5%的活性炭脱色，离心分离，上清液加95%こ醇使其醇量达到80%，冰箱静置过夜，过滤获得党參多糖粗品，对减压浓缩液及多糖的沉淀液进行蒸馏回收こ醇备用；制备获得的党參多糖粗品内加入蒸馏水充分溶解，过滤去除杂质，滤液浓缩加入95%的こ醇，冰箱静置过夜，过滤，沉淀加蒸馏水充分溶解，过滤去杂质，滤液浓缩加入无水こ醇，冰箱静置过夜，过滤，沉淀加蒸馏水充分溶解，过滤去杂质，滤液浓缩加入无水こ醇，加入少量党參多糖纯品，冰箱静置获得党參多糖结晶纯品，离心分离，党參多糖60°C烘干至恒重即得到精制党參多糖，党參多糖的总提取率达到30. 29%，产品纯度为99. 46%。
权利要求
1.一种清洁工程技术制取陇南党參活性物质的方法，其特征为(1)除尘清洗将原料党參除去杂质和霉变部分，剰余部分用清水进行冲洗，冲洗后的原料放入烘箱内烘干；(2)原料预处理烘干后党參粉碎成粗粒，过40目筛，烘干后置干燥器内备用；(3)脱脂称取经预处理后的党參置于圆底烧瓶中，加石油醚后回流脱脂，过滤，挥干残渣溶媒，对石油醚进行回收备用；(4)超声波提取脱脂后党參残渣用こ醇浸溃过夜，超声提取2次，过滤，再次超声后过滤，获得党參多糖提取液；(5)脱色、沉淀将(4)获得的党參多糖提取液减压浓缩、活性炭脱色、离心分离、こ醇沉淀，过滤获得党參多糖粗品；(6)精制制备获得的党參多糖粗品内加入蒸馏水充分溶解，过滤去除杂质，经浓縮、こ醇沉淀后得到精制的党參多糖。
2.如权利要求I所述的陇南党參的超声波提取方法，其特征为超声时间为45min-75min，超声次数为2_3次，党參多糖的提取率可达到30%以上。
3.如权利要求I所述的陇南党參的脱色、沉淀方法，其特征为在I中步骤(4)超声波提取后得到的浓缩液中加入0. 3% -0. 8%的活性炭脱色，离心分离，上清液加90%以上こ醇进行沉淀，沉淀液进行蒸馏回收こ醇备用。
4.如权利要求I所述的党參多糖精制方法，其特征为党參多糖粗品除杂质后，滤液浓缩加入90%以上的こ醇，过滤除去杂质，滤液浓缩加入无水こ醇，加入少量党參多糖纯品，冰箱静置获得党參多糖结晶纯品，离心分离，党參多糖于45°C _65°C烘干至恒重即得到精制的党參多糖。
5.如权利要求4所述的精制的党參多糖的纯度大于99%。
全文摘要
本发明涉及甘肃特色药材陇南党参中活性物质的制取方法。公开了一种清洁工程技术制取陇南党参活性物质的方法，关键步骤为采用超声波提取替代传统的水提法，提高陇南党参中多糖的提取率，避免高温对提取成分的影响；采用水-乙醇重结晶的方式对乙醇沉淀获得的多糖粗品进行精制，制备获得的活性物质——党参多糖纯度可达到99％以上，提取率达到30％以上，本工艺操作简单、条件温和、提取率高、提取周期短、有机溶剂使用量少且可有效实现回收利用，滤渣处理后可用作饲料，适合产业化开发。
文档编号C08B37/00GK102659957SQ201210150798
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月16日 优先权日2012年5月16日
发明者王绍礼 申请人:兰州金阳生物科技有限公司