通过双功能分子诱导靶蛋白降解的方法与流程

相关申请

本申请要求于2014年12月23日提交的第62/096,318号、2015年3月4日提交的第62/128,457号、2015年4月17日提交的第62/149,170号、2015年5月8日提交的第62/159,048号和2015年7月7日提交的第62/189,502号美国临时申请的权益和优先权，其每一个的内容通过引用整体并入。

背景技术：

泛素-蛋白酶体途径(upp)是调节关键调控蛋白并降解错误折叠的或异常的蛋白的关键途径。upp对多个细胞进程极为重要，如果有缺陷或不平衡，则导致各种疾病的发病。通过e3泛素连接酶的作用，实现泛素与特异性蛋白底物的共价连接。这些连接酶包含超过500种不同的蛋白，并被分为由其e3功能活性的结构元件限定的多个类别。

小脑蛋白(cereblon)(crbn)与损伤的dna结合蛋白1相互作用，并与cullin4形成e3泛素连接酶复合物，在此crbn起到底物受体的作用，其中crbn识别的蛋白可能被蛋白酶体泛素化和降解。蛋白酶体介导的不需要的或损伤的蛋白的降解在维持细胞的常规功能如细胞存活、增殖和生长中起着非常重要的作用。已经鉴定了crbn的新作用，即免疫调节药物(imid)例如沙利度胺与crbn的结合一直与致畸性以及广泛用于治疗多发性骨髓瘤患者的免疫调节药物imid(包括来那度胺)的细胞毒性有关。crbn可能是参与维持骨髓瘤细胞功能的因子的结合、泛素化和降解的关键参与者。有关crbn在imid功能中的作用的这些新发现激发了对crbn在维持细胞的常规功能中的下游因子的集中研究(changx.intjbiochemmolbiol。210；2(3)：287-294)。

upp用于诱导选择性蛋白降解，包括使用融合蛋白人工泛素化靶蛋白和合成小分子探针以诱导蛋白酶体依赖性降解。蛋白水解靶向嵌合体(protac)是由靶蛋白-结合配体和e3泛素连接酶配体组成的异双功能化合物，通过其对e3泛素连接酶的募集和随后的泛素化诱导了所选蛋白的蛋白酶体介导的降解。这些药物样分子提供了对蛋白表达的时间控制的可能性。这样的化合物能够在加入细胞或给予动物或人体后诱导目的蛋白的失活，并且可用作生物化学试剂，并且通过除去致病性或致癌性蛋白而导致治疗疾病的新范例(crewsc.,chemistry&biology,2010,17(6):551-555；schnneklothjsjr.,chembiochem,2005,6(1):40-46)。

各种癌性和免疫疾病如癌症的成功治疗仍然是未得到满足的需求。因此，继续开发治愈或治疗这些疾病的替代方法，包括开发涉及蛋白降解技术的疗法，仍然是非常有意义的。与现有方法相比，关于可能的靶标和不同细胞系或不同体内系统的更多一般性质的新方法可能潜在地导致未来药物治疗的发展。

技术实现要素：

本申请涉及新的双功能化合物，其功能是将靶蛋白募集到e3泛素连接酶用于降解；以及其制备方法和用途。

本申请还涉及通过使用双功能分子(包括将小脑蛋白-结合部分与结合靶蛋白的配体连接的双功能分子)的蛋白靶向降解。

本申请还涉及具有以下结构的双功能化合物：

降解决定子-接头-靶向配体，

其中该接头共价结合至少一个降解决定子和至少一个靶向配体，该降解决定子是能够结合泛素连接酶如e3泛素连接酶(例如，小脑蛋白)的化合物，并且靶向配体能够结合靶蛋白。

本申请还涉及新的降解诱导部分或降解决定子，其尺寸小，并且在募集用于降解的靶蛋白方面高度有效。

本申请还涉及具有式d0、d、d0'、d'、d1、d3、d'1、d'3、d0'i或d0'ii的化合物或它们的对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

其中x、x1、x2、y、r1、r3、r3’、r4、r5、t、m和n各自如本文所定义。

本申请还涉及具有式l0的接头：

或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体，其中p1、p2、p3、w、q和z各自如本文所定义，接头共价结合降解决定子，与q相邻；并且接头共价结合靶向配体，与z相邻。

本申请还涉及本文所述的靶向配体，包括式tl-1至tl-vii的化合物。

本申请还涉及式x0、x0’、x、xi、i、ii、iii、iv、x0’i或x0’ii的双功能化合物或其对映异构体、非对映异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐：

其中接头是与靶向配体和y共价结合的基团，并且靶向配体能够结合靶蛋白，并且其中x、x1、x2、y、r1、r3、r3’、r4、r5、t、m和n各自如本文所定义。

本申请还涉及包含治疗有效量的式x0、x0'、x、xi、i、ii、iii、iv、x0'i或x0'ii的双功能化合物和药学上可接受的载体的药物制剂。

本申请还涉及通过施用治疗有效量的式x0、x0'、x、xi、i、ii、iii、iv、x0'i或x0'ii的双功能化合物至有需要的个体来治疗由靶蛋白调节的疾病或病症的方法。在某些实施方案中，疾病或病症对靶向配体的治疗具有抗性。

本申请还涉及本申请的式x0、x0'、x、xi、i、ii、iii、iv、x0'i或x0'ii的双功能化合物或药物制剂用于治疗由靶蛋白调节的疾病或病症的用途。在某些实施方案中，疾病或病症对靶向配体的治疗具有抗性。

本申请还涉及本申请的式x0、x0'、x、xi、i、ii、iii、iv、x0'i或x0'ii的双功能化合物或药物制剂在制备用于治疗由靶蛋白调节的疾病或病症的药物中的用途。在某些实施方案中，疾病或病症对靶向配体的治疗具有抗性。

本申请还涉及通过向有需要的个体施用治疗有效量的式x0、x0'、x、xi、i、ii、iii、iv、x0'i或x0'ii的双功能化合物治疗癌症的方法。在某些实施方案中，癌症对靶向配体的治疗具有抗性。

本申请还涉及本申请的式x0、x0'、x、xi、i、ii、iii、iv、x0'i或x0'ii的双功能化合物或药物制剂用于治疗癌症的用途。在某些实施方案中，癌症对靶向配体的治疗具有抗性。

本申请还涉及本申请的式x0、x0'、x、xi、i、ii、iii、iv、x0'i或x0'ii的双功能化合物或药物制剂在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在某些实施方案中，癌症对靶向配体的治疗具有抗性。

本申请的化合物和方法解决了在治疗其中致病性或致癌性内源性蛋白起作用的疾病或病症(例如癌症)中的未满足的需要。

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。在说明书中，单数形式也包括复数，除非上下文另有明确规定。尽管与本文所述的类似或等同的方法和材料可以用于本申请的实践或测试中，但是在下面描述了合适的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献通过引用并入本文。本文引用的参考文献不被认为是所要求保护的申请的现有技术。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。另外，材料、方法和实施例仅是说明性的，而不用于限制。

从以下详细描述和权利要求书中，本申请的其它特征和优点将是显而易见的。

附图说明

当结合附图阅读时，将更好地理解上述概述以及以下对本申请的详细描述。

图1a-1h：dbet1的设计和表征。图1a显示jq1(s)、jq1(r)和邻苯二甲酰亚胺的化学结构。图1b显示dbet1的化学结构。图1c显示通过alphascreen测量的指定化合物的dmso归一化brd4结合信号(值代表一式三份分析的平均值±标准差)。图1d显示与brd4的溴结构域1结合的dbet1的晶体结构。图1e显示图1d中的结构对接已公开的ddb1-crbn结构。图1f显示用指定浓度的dbet1对mv4-11细胞处理18小时后的brd4和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图1g显示结合brd4的dbet1的晶体结构，其覆盖有结合brd4的jq1的结构。图1h是蛋白质印迹，示出了通过用增加浓度的本申请的双功能化合物dbet1处理细胞后brd4的降解程度和c-myc的降低程度。

图2a-2q：图2a显示用指定浓度的dbet1(r)处理mv4-11细胞18小时后brd4的免疫印迹分析。图2b显示通过高含量测定法测定用指定浓度的dbet1和dbet1(r)处理18小时的sum149细胞中的细胞计数归一化brd4水平(值代表一式三份分析的平均值±标准差，归一化为dmso处理的细胞和基于图2c中的免疫印迹的基线校正)。图2c显示用指定浓度的dbet1和dbet1(r)处理sum149细胞18小时后brd4和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图2d显示在指定时间点用100nmdbet1处理mv4-11细胞后brd4和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图2e显示dbet1和jq1处理24小时后mv4-11中的细胞存活率剂量反应作为测定的atp水平(值代表一式四份分析的平均值±标准差)。图2f是在mv4-11或dhl4细胞中处理24小时后，相对于dmso处理对照，通过半胱天冬酶测定法评估的细胞凋亡倍数增加的柱状图描述(值代表一式四份分析的平均值±标准差)。图2g显示用指定浓度的dbet1处理原发性患者细胞24小时后brd4和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图2h是用指定浓度的dbet1或jq1处理24小时后的膜联蛋白v阳性原发性患者细胞的分数的柱状图描述(值表示一式两份的平均值和误差条的范围)(图2l和图2m中示出的代表性计数图)。图2i和2j是免疫印迹分析，分别显示sum159和molm13中用指定浓度的dbet1处理18h后的brd4和黏着斑蛋白。图2k显示用100nm的dbet1处理细胞后不同时间点的brd2、brd3、brd4和c-myc的免疫印迹分析。图2l为一系列流式细胞术图，显示用指定浓度的jq1和dbet1处理原发性患者细胞24小时的膜联蛋白v/pi数据。图2m显示用指定浓度的dbet1或jq1处理后的膜联蛋白v阳性mv4-11细胞的柱状图描述(数据代表一式三份分析的平均值±标准差)。图2n是用指定浓度的dbet1和jq1处理24小时后的切割的半胱天冬酶3、parp切割和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图2o是说明相对于处理的对照bet降解对细胞凋亡的动力学优势的柱状图描述(半胱天冬酶球蛋白)：将mv4-1细胞用指定浓度的jq1或dbet1处理4或8小时，然后药物洗出，之后在无药介质中接种24小时。图2p是相对于dmso处理的对照，通过半胱天冬酶测定法评估的用指定浓度的jq1或dbet1处理4或8小时的mv4-11细胞的凋亡的倍数增加的柱状图描述(药物用pbs(3×)洗出，然后无药介质中接种，最终处理持续时间为24小时)。图2q是在图2p相同处理条件下处理后切割的半胱天冬酶3、parp切割和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。

图3a-3f：3a-3d显示dbet1介导的brd4降解的化学和遗传补救。图3a显示用指定浓度的dbet1、jq1和沙利度胺处理mv4-11细胞24小时后brd4和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图3b显示用dmso、拉非佐米(0.4μm)、jq1(10μm)或沙利度胺(10μm)预处理4小时然后用100nm浓度的dbet1处理2小时后的brd4和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图3c显示用1μmmln4924预处理4小时然后用指定浓度的dbet1处理2小时后brd4和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图3d显示用指定浓度的dbet1处理mm1s^wt或mm1s^crbn-/-18小时后brd4、crbn和微管蛋白的免疫印迹分析。图3e是免疫印迹分析，比较了用不同浓度的沙利度胺、jq1和dbet1处理的细胞中brd4的浓度。图3f是显示用卡非佐米(400nm)、jq1(20μm)或沙利度胺(20μm)处理4小时和用指定浓度的dbet1(100nm)处理2小时的细胞中brd4的浓度的免疫印迹分析。

图4a-4f：4a-4e显示通过表达蛋白组学的选择性bet溴结构域降解：将mv4-11细胞用dmso、250nmdbet1或250nmjq1处理2小时。图4a描述了比较jq1与dmso处理的7429个蛋白的丰度的倍数变化以及它们各自的p值(t检验)(来自一式三份分析的数据)。图4b描述了比较250nmdbet1与dmso处理的7429个蛋白的丰度的倍数变化(来自一式三份分析的数据)。图4c是所选蛋白的蛋白水平变化的柱状图描述，如归一化为dmso所示(值代表一式三份的平均值±标准差)。图4d显示用dmso、250nmdbet1或250nmjq1处理mv4-11细胞2小时后brd2、brd3、brd4、myc、pim1和vinc的免疫印迹分析。图4e是用dmso、250nmdbet1或250nmjq1处理mv4-11细胞2小时后brd2、brd3、brd4、myc和pim1的转录水平的qrt-pcr分析的柱状图描述(值代表一式三份的平均值±标准差)。图4f是用沙利度胺或指定浓度的dbet1处理24小时后mm1s细胞系中ikzf3和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。

图5a-5b：图5a是显示用不同浓度的jq1-rev与本申请的100nm双功能化合物dbet1处理的细胞中brd4的浓度相比较的蛋白印迹。图5b是jq1-rev(jqi-11-079)的化学结构图。

图6a-6b：图6a和6b是一系列曲线图，其示出了用不同浓度的jq1或dbet处理的细胞经过2小时(图6a)或4小时(图6b)后通过qrt-pcr测定的brd4的转录水平。

图7是示出了通过用增加浓度的本申请的双功能化合物dbet1处理人类细胞系mm1s和缺乏小脑蛋白的人类细胞系mm1s后brd4的降解程度的蛋白印迹。

图8是示出了通过用增加浓度的本申请的双功能化合物dbet2处理细胞后brd4的降解程度的蛋白印迹。

图9a-9b：图9a是示出了通过用增加浓度的本申请的双功能化合物dbet2处理细胞后plk1减少的蛋白印迹。图9b是描述了dbet2处理的细胞中plk强度作为dmso处理的细胞中的plk强度的百分比的柱状图。

图10a-10d：dfkbp-1和dfkbp-2介导的fkbp12的降解。图10a描述了dfkbp-1和dfkbp-2的化学结构。图10b示出了用指定化合物处理18小时后对fkbp12和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图10c显示用dmso、卡非佐米(400nm)、mln4924(1μm)，slf(20μm)或沙利度胺(10μm)预处理4小时然后用1μm浓度的dfkbp-1处理4小时后的mv4-11细胞中fkbp12和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图10d显示用指定浓度的dfkbp12处理293ft^wt或293ft^crbn-/-18小时后的fkbp12、crbn和微管蛋白的免疫印迹分析。

图11a-11c：图11a是显示如通过单点筛选(bromoscan)测定的，dbet1对于结合其它人溴结构域的选择性的图。图11b显示测量重组brd4溴结构域和重组crbn-ddb1之间的dbet1诱导的接近度(在111nm处)的二聚测定的结果(值代表一式四份分析的平均值±标准偏差，并标准化为dmso)。图11c是显示在存在dmso(载体)、jq1(s)、thal-(-)、jq1(r)和thal-(+)的情况下dbet1诱导的接近度的柱状图，全部处于终浓度为1μm(值代表一式四份分析的平均值±标准差，并归一化为dmso)。

图12a-12e：图12a是显示在14天的处理期内载体处理的小鼠(n＝5)或浓度为50mg/kg的dbet1(n＝6)处理的小鼠的肿瘤体积的柱状图。图12b是第14天比较图12a所示的实验结束后的肿瘤重量的柱状图。图12c是使用来自一次处理4小时或两次分别处理22小时和4小时的小鼠的肿瘤裂解物与载体处理的对照相比的brd4、myc和黏着斑蛋白的免疫印迹分析。图12d显示dbet1处理和对照处理的小鼠的代表性肿瘤的brd4、myc和ki67的免疫组织化学染色。图12e是描绘图12d中的染色定量的柱状图，基于该部分内的3个独立区域(数据代表一式三份分析的平均值±标准差，并归一化为dmso)。

图13a-13d：cd1小鼠中dbet1的药代动力学研究。图13a是显示腹膜内注射配制在水中的0.5％mc中的dbet1后cd1小鼠中的dbet1的浓度的图。图13b是描绘图13a的小鼠中的药代动力学参数的表。图13c是显示用50mg/kgq.d.dbet1或载体处理的小鼠的体重变化的图。图13d是显示图13c的小鼠中htc、wbc或plt变化的柱状图。

图14a-14bb：用指定浓度的本申请的双功能化合物处理4小时后测量细胞(293ft^wt或293ft^crbn-/-)中brd4水平的高含量测定。图14a-14b：用指定浓度的jq1处理4小时后293ft^wt(图14a)或293ft^crbn-/-(图14b)中的brd4水平。图14c-14d：用指定浓度的dbet1处理4小时后293ft^wt(图14c)或293ft^crbn-/-(图14d)中的brd4水平。图14e-14f：用指定浓度的dbet2处理4小时后293ft^wt(图14e)或293ft^crbn-/-(图14f)中的brd4水平。图14g-14h：用指定浓度的dbet3处理4小时后293ft^wt(图14g)或293ft^crbn-/-(图14h)中的brd4水平。图14i-14j：用指定浓度的dbet4处理4小时后293ft^wt(图14i)或293ft^crbn-/-(图14j)中的brd4水平。图14k-14l：用指定浓度的dbet5处理4小时后293ft^wt(图14k)或293ft^crbn-/-(图14l)中的brd4水平。图14m-14n：用指定浓度的dbet6处理4小时后293ft^wt(图14m)或293ft^crbn-/-(图14n)中的brd4水平。图14o-14p：用指定浓度的dbet7处理4小时后293ft^wt(图14o)或293ft^crbn-/-(图14p)中的brd4水平。图14q-14r：用指定浓度的dbet8处理4小时后293ft^wt(图14q)或293ft^crbn-/-(图14r)中的brd4水平。图14s-14t：用指定浓度的dbet9处理4小时后293ft^wt(图14s)或293ft^crbn-/-(图14t)中的brd4水平。图14u-14v：用指定浓度的dbet10处理4小时后293ft^wt(图14u)或293ft^crbn-/-(图14v)中的brd4水平。图14w-14x：用指定浓度的dbet15处理4小时后293ft^wt(图14w)或293ft^crbn-/-(图14x)中的brd4水平。图14y-14z：用指定浓度的dbet17处理4小时后293ft^wt(图14y)或293ft^crbn-/-(图14z)中的brd4水平。图14aa-14bb：用指定浓度的dbet18处理4小时后293ft^wt(图14aa)或293ft^crbn-/-(图14bb)中的brd4水平。

图15a-15f：用不同浓度的本申请的双功能化合物处理的细胞中brd水平的免疫印迹。图15a是显示用指定浓度的dbet1或dbet6处理16.5小时的baf3_k-ras细胞中brd4水平的免疫印迹；图15b是显示用指定浓度的dbet1处理16.5小时的baf3_k-ras或semk2细胞中的brd4水平的免疫印迹；图15c是显示用指定浓度的dbet1或dbet6处理16.5小时的semk2细胞中的brd4水平的免疫印迹；图15d是显示用指定浓度的dbet1或dbet6处理16小时的monomac1细胞中brd4水平的免疫印迹；图15e是显示在不同时间点用50nmdbet6处理的mv4-11细胞中的brd4、brd2和brd3的水平的免疫印迹；图15f是显示用指定浓度的dbet6处理16小时的mm1s^wt或mm1s^crbn-/-细胞中brd4水平的免疫印迹。

图16a-16b：用本申请的双功能化合物处理的细胞中蛋白水平的免疫印迹。图16a是显示用1μmdbet2、dbet7、dbet8或dbet10处理的细胞(wt或crbn-/-)中的brd4和plk1水平的免疫印迹；图16b是显示用100nmdbet18处理细胞后在指定时间点的brd4水平的免疫印迹。

图17a-17e：用本申请的双功能化合物处理后的细胞存活率。图17a-17b示出本申请的双功能化合物在各种细胞系中的细胞存活率ec50值；图17c-17e显示用增加浓度的jq1、dbet1、dbet6、dbet7或dbet8处理后的细胞存活率。

图18a-18c显示用增加浓度的dbet化合物处理后的molt4(图18a)、dnd41(图18b)和cutll1(图18c)细胞的活力。

图19是显示用指定浓度的dgr3处理的细胞中的gr水平的免疫印迹。

图20是一系列显示用增加浓度的jq1或dbet6处理后各种细胞的活力的图。

图21是一系列显示用增加浓度的jq1或dbet6处理后各种细胞的活力的图。

图22是一系列显示用增加浓度的jq1或dbet6处理后各种细胞的活力的图。。

图23一系列显示用增加浓度的jq1或dbet6处理后各种细胞的活力的图。。

图24一系列显示用增加浓度的jq1或dbet6处理后各种细胞的活力的图。

图25a和25b是显示在用增加浓度的jq1(图25a)或dbet6(图25b)温育4小时后，ngp细胞中brd4和mycn的水平的蛋白印迹。图25c是显示在用250nmdbet6温育后的指定时间点，ngp细胞中brd2、brd3、brd4和mycn的水平的蛋白印迹。图25d是显示如通过rt-pcr评估的在用250nmdbet6温育后的指定时间点neg细胞中mycn的相对mrna表达的柱状图。

具体实施方式

小分子拮抗剂使蛋白靶标的离散生化特性失效。对于多结构域蛋白靶标，药物作用的药理结果受限于一个结构域特异性活性的选择性破坏。此外，目标抑制作用受到目标接合的耐久性和程度的动力学限制。传统药物分子的这些特征对于靶向转录因子和染色质相关表观遗传蛋白的抑制剂的开发具有挑战性，染色质相关表观遗传蛋白作为多结构域生物分子支架并且通常具有快速的缔合和解离动力学。设计了一种化学策略，通过与衍生的邻苯二甲酰亚胺进行化学缀合，劫持小脑蛋白e3泛素连接酶复合物的功能，促进配体依赖性靶蛋白降解。使用这种方法，将来自染色质(jq1)的bet溴结构域置换的乙酰赖氨酸竞争性拮抗剂转化为邻苯二甲酰亚胺缀合的配体，这促使即时的小脑蛋白依赖性bet蛋白降解(dbet1)。表达蛋白组学证实了检测到的7429个蛋白中的bet家族成员brd2、brd3和brd4的高度特异性。与原代人类白血病母细胞和人类白血病体内异种移植物中的溴结构域抑制相比，bet溴结构域的降解与更快速和更强健的凋亡反应相关。按照这种方法，还开发了靶向其它降解蛋白如fkbp12的另外一系列邻苯二甲酰亚胺缀合的配体。本文描述了一种控制靶蛋白包括以前顽固的蛋白靶标的稳定性的简便新策略。

如上所述，仍然需要开发用于治疗各种疾病(包括肿瘤学和免疫学疾病)的新疗法。本申请提供了通式i的新化合物，其诱导两种蛋白之间形成复合物以产生所需的生物效应。这些化合物可以通过使用传统的合成方法制备并通过作为药物加入个体中来使用。

本申请提供了一类可用于治疗癌症和其它增殖性疾病的新化合物。

本申请涉及通过不同长度和功能性的接头共价连接到靶蛋白配体的小分子e3连接酶配体(降解决定子)，其可以用作治疗各种疾病包括癌症的治疗剂。本申请还涉及将目标蛋白引入e3连接酶例如crbn用于泛素化和随后的蛋白酶体降解的技术平台，其使用包含通过接头彼此连接的沙利度胺类降解决定子和靶向配体的双功能小分子。

该技术平台提供了基于通过降解抑制靶蛋白水平的疗法。该新技术允许靶向降解以比现有方法相对于可能的靶和不同细胞系或不同的体内系统更一般的性质发生。

本申请的化合物可以为患者提供重要的临床益处，特别是用于治疗由目的蛋白调节的疾病状态和状况。

本申请的化合物

本申请涉及双功能化合物，其可用作靶蛋白的泛素化和蛋白酶体降解的调节剂，特别是包括被本申请的双功能化合物降解和/或以其它方式抑制的多肽或蛋白的抑制剂的化合物。特别地，本申请涉及含有配体以及能够与靶蛋白结合的部分的化合物，配体诸如小分子配体(即分子量低于2,000、1,500、500或200道尔顿)，如沙利度胺类配体，其能够结合泛素连接酶如小脑蛋白，该化合物使得靶蛋白被置于接近泛素连接酶以进行蛋白的降解(和/或抑制))。

一般而言，本申请提供了具有以下通式结构的化合物：

降解决定子-接头-靶向配体，

其中接头共价结合至少一个降解决定子和至少一个靶向配体，降解决定子是能够结合泛素连接酶例如e3泛素连接酶(如小脑蛋白)的化合物，并且靶向配体能够结合靶蛋白。

在某些实施方案中，本申请提供式x0的化合物或其对映异构体、非对映异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐：

其中：

接头是与靶向配体和y共价结合的基团；和

靶向配体能够结合靶蛋白；

并且其中y、r1、r3、r3’、r4、r5、t、m和n各自如本文所定义。

在某些实施方案中，本申请提供式x0'的化合物或其对映异构体、非对映异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐：

其中：

接头是与靶向配体和y共价结合的基团；和

靶向配体能够结合靶蛋白；

并且其中y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n各自如本文所定义。

在某些实施方案中，本申请提供式x或xi的化合物或其对映异构体、非对映异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐：

其中：

接头是与靶向配体和y共价结合的基团；和

靶向配体能够结合靶蛋白；

并且其中y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n各自如本文所定义。

在某些实施方案中，本申请提供式i、iii或x0'i的化合物或其对映异构体、非对映异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐：

其中：

接头是与靶向配体和y共价结合的基团；和

靶向配体能够结合靶蛋白；

并且其中x、y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n各自如本文所定义。

在某些实施方案中，本申请提供式ii、iv或x0'ii的化合物或其对映异构体、非对映异构体、立体异构体或其药学上可接受的盐：

其中：

接头是与靶向配体和y共价结合的基团；和

靶向配体能够结合靶蛋白；

并且其中x1、x2、y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n各自如本文所定义。

降解决定子

降解决定子是用于通过接头和靶向配体将靶蛋白连接到泛素连接酶用于蛋白酶体降解的化合物。在某些实施方案中，降解决定子是能够结合泛素连接酶的化合物。在其它实施方案中，降解决定子是能够结合e3泛素连接酶的化合物。在其它实施方案中，降解决定子是能够结合小脑蛋白的化合物。在其它实施方案中，降解决定子是沙利度胺或其衍生物或类似物。

在某些实施方案中，降解决定子是具有式d0的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

其中：

是

y为键、y1、o、nh、nr2、c(o)o、oc(o)、c(o)nr2’、nr2’c(o)、y1-o、y1-nh、y1-nr2、y1-c(o)、y1-c(o)o、y1-oc(o)、y1-c(o)nr2’、或y1-nr2’c(o)，其中y1为c1-c6亚烷基、c2-c6亚烯基或c2-c6亚炔基；

x为c(o)或c(r3)2；

x1-x2为c(r3)＝n或c(r3)2-c(r3)2；

每个r1独立地为卤素、硝基、nh2、oh、c(o)oh、c1-c6烷基或c1-c6烷氧基；

r2为c1-c6烷基、c2-c6烯基、c3-c8环烷基、3至8元杂环烷基、c(o)-c1-c6烷基、c(o)-c2-c6烯基、c(o)c3-c8环烷基或c(o)-3至8元杂环烷基，r2任选地被卤素、n(ra)2、nhc(o)ra、nhc(o)ora、orb、c3-c8环烷基、3至8元杂环烷基、c6-c10芳基或5至10元杂芳基的一个或多个取代，其中c3-c8环烷基、3至8元杂环烷基、c6-c10芳基或5至10元杂芳基的每一个任选地进一步被卤素、nh2、cn、硝基、oh、c(o)oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6卤代烷氧基的一个或多个取代；

r2'为h、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c3-c8环烷基或3至8元杂环烷基，当r2'不为h时，r2'任选地被卤素、n(ra)2、nhc(o)ra、nhc(o)ora、orb、c3-c8环烷基、3至8元杂环烷基、c6-c10芳基或5至10元杂芳基的一个或多个取代，其中c3-c8环烷基、3至8元杂环烷基、c6-c10芳基或5至10元杂芳基的每一个任选地进一步被卤素、nh2、cn、硝基、oh、c(o)oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6卤代烷氧基的一个或多个取代；

每个r3独立地为h或任选地被c6-c10芳基或5至10元杂芳基取代的c1-c3烷基；

每个r3'独立地为c1-c3烷基；

每个r4独立地为h或c1-c3烷基；或两个r4与它们连接的碳原子一起形成c(o)、c3-c6碳环或包含1或2个选自n和o的杂原子的4元、5元或6元杂环；

r5为h、c1-c3烷基、f或cl；

每个ra独立地为h或c1-c6烷基；

rb为h或甲苯磺酰基；

t为0或1；

m为0、1、2或3；和

n为0、1或2；

其中所述化合物通过共价结合到另一部分(例如化合物或接头)。

在某些实施方案中，降解决定子是具有式d0'的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

其中，y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n各自如式d0中所定义。

当适用时，式d0或d0'的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体可以具有一个或多个以下特征。

在某些实施方案中，降解决定子是具有式d的化合物：

在某些实施方案中，降解决定子是具有式d'的化合物：

在某些实施方案中，是

在某些实施方案中，是

在某些实施方案中，x为c(o)。

在某些实施方案中，x为c(r3)2；并且每个r3为h。在某些实施方案中，x为c(r3)2；r3中的一个为h，另一个是选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。在某些实施方案中，x为c(r3)2；并且每个r3独立地选自甲基、乙基和丙基。

在某些实施方案中，x1-x2为c(r3)＝n。在某些实施方案中，x1-x2为ch＝n。在某些实施方案中，x1-x2为c(r3)＝n；并且r3为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。在某些实施方案中，x1-x2为c(ch3)＝n。

在某些实施方案中，x1-x2为c(r3)2-c(r3)2；并且每个r3为h。在某些实施方案中，x1-x2为c(r3)2-c(r3)2；并且r3中的一个为h，另外三个r3独立地为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。在某些实施方案中，x1-x2为c(r3)2-c(r3)2；并且r3中的两个为h，另外两个r3独立地为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。在某些实施方案中，x1-x2为c(r3)2-c(r3)2；r3中的三个为h，剩余的r3为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。

在某些实施方案中，y为键。

在某些实施方案中，y为直链或支链c1-c6亚烷基。例如，y为(ch2)1、ch(ch3)、c(ch3)2、(ch2)2、(ch2)3、ch2ch(ch3)、ch2c(ch3)2、(ch2)4、(ch2)5或(ch2)6。在某些实施方案中，y为(ch2)1、(ch2)2或(ch2)3。在某些实施方案中，y为(ch2)1或(ch2)2。

在某些实施方案中，y为o。

在某些实施方案中，y为y1-o，y1或o邻近与y连接的苯环。例如，y1为直链或支链的c1-c6亚烷基。例如，y1为(ch2)1、ch(ch3)、c(ch3)2、(ch2)2、(ch2)3、ch2ch(ch3)、ch2c(ch3)2、(ch2)4、(ch2)5或(ch2)6。例如，y为(ch2)-o、(ch2)2-o、(ch2)3-o、(ch2)4-o、(ch2)5-o、或(ch2)6-o。在某些实施方案中，y为ch2-o、(ch2)2-o或(ch2)3-o。在某些实施方案中，y为ch2-o。

在某些实施方案中，y为c(o)。

在某些实施方案中，y为c(o)o，其中o或c(o)邻近与y连接的苯环。

在某些实施方案中，y为y1-c(o)，y1或c(o)邻近与y连接的苯环。例如，y1为直链或支链的c1-c6亚烷基。例如，y1为(ch2)1、ch(ch3)、c(ch3)2、(ch2)2、(ch2)3、ch2ch(ch3)、ch2c(ch3)2、(ch2)4、(ch2)5或(ch2)6。例如，y为(ch2)1-6-c(o)。

在某些实施方案中，y为y1-(co)o，y1或o邻近与y连接的苯环。例如，y1为直链或支链的c1-c6亚烷基。例如，y1为(ch2)1、ch(ch3)、c(ch3)2、(ch2)2、(ch2)3、ch2ch(ch3)、ch2c(ch3)2、(ch2)4、(ch2)5或(ch2)6。例如，y为(ch2)1-6-c(o)o。

在某些实施方案中，y为y1-oc(o)，y1或c(o)邻近与y连接的苯环。例如，y1为直链或支链的c1-c6亚烷基。例如，y1为(ch2)1、ch(ch3)、c(ch3)2、(ch2)2、(ch2)3、ch2ch(ch3)、ch2c(ch3)2、(ch2)4、(ch2)5或(ch2)6。例如，y为(ch2)1-6-oc(o)。

在某些实施方案中，y为c(o)nr2'。

在某些实施方案中，y为y1-c(o)nr2'，y1或nr2'邻近与y连接的苯环。例如，y1为直链或支链的c1-c6亚烷基。例如，y1为(ch2)1、ch(ch3)、c(ch3)2、(ch2)2、(ch2)3、ch2ch(ch3)、ch2c(ch3)2、(ch2)4、(ch2)5或(ch2)6。例如，y为ch2-c(o)nr2’、(ch2)2-c(o)nr2’、(ch2)3-c(o)nr2’、(ch2)4-c(o)nr2’、(ch2)5-c(o)nr2’or(ch2)6-c(o)nr2’。在某些实施方案中，y为ch2-c(o)nr2’、(ch2)2-c(o)nr2’或(ch2)3-c(o)nr2’。在某些实施方案中，y为ch2-c(o)nr2’。

在某些实施方案中，y为nr2’c(o)。

在某些实施方案中，y为y1-nr2’c(o)，y1或c(o)邻近与y连接的苯环。例如，y1为直链或支链的c1-c6亚烷基。例如，y1为(ch2)1、ch(ch3)、c(ch3)2、(ch2)2、(ch2)3、ch2ch(ch3)、ch2c(ch3)2、(ch2)4、(ch2)5或(ch2)6。例如，y为ch2-nr2’c(o)、(ch2)2-nr2’c(o)、(ch2)3-nr2’c(o)、(ch2)4-nr2’c(o)、(ch2)5-nr2’c(o)或(ch2)6-nr2’c(o)。在某些实施方案中，y为ch2-nr2’c(o)、(ch2)2-nr2’c(o)或(ch2)3-nr2’c(o)。在某些实施方案中，y为ch2-nr2’c(o)。

在某些实施方案中，r2'为h。在某些实施方案中，r2'选自甲基、乙基、丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基和己基。在某些实施方案中、r2'是选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。

在某些实施方案中，r2'为被卤素、n(ra)2、nhc(o)ra、nhc(o)ora、orb、3至8元杂环烷基、c6-c10芳基或5至10元杂芳基的一个或多个取代的c1-c6烷基，其中3至8元杂环烷基、c6-c10芳基或5至10元杂芳基的每一个任选地进一步被卤素、nh2、cn、硝基、oh、c(o)oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6卤代烷氧基的一个或多个取代；

在某些实施方案中，r2'是c2-c6烯基。

在某些实施方案中，y为nh。

在某些实施方案中，y为y1-nh，y1或nh邻近与y连接的苯环。例如，y1为直链或支链的c1-c6亚烷基。例如，y1为(ch2)1、ch(ch3)、c(ch3)2、(ch2)2、(ch2)3、ch2ch(ch3)、ch2c(ch3)2、(ch2)4、(ch2)5或(ch2)6。例如，y为ch2-nh、(ch2)2-nh、(ch2)3-nh、(ch2)4-nh、(ch2)5-nh或(ch2)6-nh。在某些实施方案中，y为ch2-nh、(ch2)2-nh或(ch2)3-nh。在某些实施方案中，y为ch2-nh。

在某些实施方案中，y为nr2。

在某些实施方案中，y为y1-nr2，其中y1或nr2邻近与y连接的苯环。例如，y1是直链或支链c1-c6亚烷基。例如，y1为(ch2)1、ch(ch3)、c(ch3)2、(ch2)2、(ch2)3、ch2ch(ch3)、ch2c(ch3)2、(ch2)4、(ch2)5或(ch2)6。例如，y为ch2-nr2、(ch2)2-nr2、(ch2)3-nr2、(ch2)4-nr2、(ch2)5-nr2或(ch2)6-nr2。在某些实施方案中，y为ch2-nr2、(ch2)2-nr2或(ch2)3-nr2。在某些实施方案中，y为ch2-nr2。

在某些实施方案中，r2选自甲基、乙基、丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基和己基。在某些实施方案中、r2为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。

在某些实施方案中，r2为被卤素、oh或orb的一个或多个取代的c1-c6烷基。例如，r2为ch2chf2、ch2ch2chf2、cf3、ch2cf3、ch2ch2cf3、ch2ch2oh、ch2ch2o-甲苯磺酰基或ch(oh)ch2oh。

在某些实施方案中，r2为被的n(ra)2、nhc(o)ra或nhc(o)ora的一个或多个取代的c1-c6烷基。例如，r2为ch2ch2nh2或ch2ch2nhc(o)o-叔丁基。

在某些实施方案中，r2为被3至8元杂环烷基、c6-c10芳基或5至10元杂芳基取代的c1-c6烷基，其中3至8元杂环烷基、c6-c10芳基或5至10元杂芳基的每一个任选地进一步被卤素、nh2、cn、硝基、oh、c(o)oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6卤代烷氧基的一个或多个取代。例如，r2为被3至8元杂环烷基(例如环氧乙烷，氧杂环丁烷，氮杂环丁烷，四氢呋喃，吡咯烷，哌啶，哌嗪或吗啉)取代的c1-c6烷基，3至8元杂环烷基任选地进一步被一个或多个c1-c6烷基取代。例如，r2为ch2-环氧乙烷、ch2ch2-哌嗪或ch2ch2-4-甲基哌嗪。例如，r2为被苯基或5至10元杂芳基(例如吡啶基、吲哚基、呋喃基或咪唑基)取代的c1-c6烷基，苯基或5至10元杂芳基各自任选地进一步被选自卤素、nh2、cn、硝基、oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基和c1-c6烷氧基的一个或多个取代基取代。

在某些实施方案中，r2为c2-c6烯基，例如乙烯基、丙烯基和丁烯基。

在某些实施方案中，r2为c3-c8环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。在某些实施方案中，r2为环戊基、环己基或环庚基。

在某些实施方案中，r2为3至8元杂环烷基(例如环氧乙烷、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢呋喃、吡咯烷、哌啶、哌嗪或吗啉)。在某些实施方案中，r2为氧杂环丁烷。

在某些实施方案中，r2选自c(o)-甲基、c(o)-乙基、c(o)-丙基、c(o)-丁基、c(o)-叔丁基、c(o)-戊基、c(o)-异戊基和c(o)-己基。在某些实施方案中，r2为选自c(o)-甲基、c(o)-乙基和c(o)-丙基的c(o)-c1-c3烷基。在某些实施方案中，r2为被一个或多个卤素取代的c(o)-c1-c3烷基(例如c(o)-ch2cl)。

在某些实施方案中，r2为c(o)-c2-c6烯基，例如c(o)-乙烯基。

在某些实施方案中，r2选自c(o)-环丙基、c(o)-环丁基、c(o)-环戊基、c(o)-环己基和c(o)-环庚基。在某些实施方案中，r2为c(o)-环丙基。在某些实施方案中，r2为c(o)-环戊基、c(o)-环己基或c(o)-环庚基。

在某些实施方案中，r2为c(o)-3-至8-元杂环烷基(例如环氧乙烷、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢呋喃、吡咯烷、哌啶、哌嗪或吗啉)。在某些实施方案中，r2为c(o)-环氧乙烷。

在某些实施方案中，r3为h。

在某些实施方案中，r3为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。在某些实施方案中，r3为甲基。

在某些实施方案中，r3为被苯基或5-至6-元杂芳基取代的c1-c3烷基。在某些实施方案中，r3为苄基。

在某些实施方案中，n为0。

在某些实施方案中，n为1。

在某些实施方案中，n为2。

在某些实施方案中，每个r3'独立地为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。

在某些实施方案中，m为0。

在某些实施方案中，m为1。

在某些实施方案中，m为2。

在某些实施方案中，m为3。

在某些实施方案中，每个r1独立地选自卤素(例如f、cl、br和i)、oh、c1-c6烷基(例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基和己基)和c1-c6烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基和戊氧基)。在其它实施方案中，每个r1独立地选自f、cl、oh、甲基、乙基、丙基、丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基和乙氧基。

在某些实施方案中，每个r4为h。

在某些实施方案中，r4中的一个为h，其它r4为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。

在某些实施方案中，每个r4为独立地选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。

在某些实施方案中，两个r4与它们所连接的碳原子一起形成c(o)。

在某些实施方案中，两个r4与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

在某些实施方案中，两个r4与它们所连接的碳原子一起形成选自氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢呋喃、吡咯烷、哌啶、哌嗪和吗啉的4-、5-或6-元杂环。在某些实施方案中，两个r4与它们所连接的碳原子一起形成氧杂环丁烷。

在某些实施方案中，r5为h、氘或c1-c3烷基。在其它实施方案中，r5为(s)或(r)构型。在其它实施方案中，r5为(s)构型。在某些实施方案中，化合物包含(s)-r5和(r)-r5的外消旋混合物。

在某些实施方案中，r5为h。

在某些实施方案中，r5为氘。

在某些实施方案中，r5为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。在某些实施方案中，r5为甲基。

在某些实施方案中，r5为f或cl。在其它实施方案中，r5为(s)或(r)构型。在其它实施方案中，r5为(r)构型。在某些实施方案中，化合物包含(s)-r5和(r)-r5的外消旋混合物。在某些实施方案中，r5为f。

对x、x1、x2、y、y1、r1、r2、r2’、r3、r3’、r4、r5、t、m和n之一定义的各个部分可以与对其它的x、x1、x2、y、y1、r1、r2、r2’、r3、r3’、r4、r5、t、m和n定义的任何部分相结合。

在某些实施方案中，降解决定子是具有式d1或d'1的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

其中x、y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n各自如上式d0中所定义。

x、y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n中的每一个可以选自上式d0中所述的部分。对x、y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n之一定义的各个部分可以与对其它的x、y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n定义的任何部分相结合，如上式d0所述。

在某些实施方案中，降解决定子是式d0'iii的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

其中r1、r3’、y、m和n各自如上所定义，并且可以选自上述任何部分或其组合。

在某些实施方案中，降解决定子是式d2的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

其中r1、r3'、m和n各自如上所定义并且可以选自上述任何部分或其组合。

在某些实施方案中，降解决定子是以下结构的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

在某些实施方案中，降解决定子是式d3或d'3的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

其中x1、x2、y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n各自如上式d0中所定义。

x1、x2、y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n中的每一个可以选自如上式d0中所述的部分。对x1、x2、y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n之一定义的各个部分可以与对其它的x1、x2、y、r1、r3、r3’、r4、r5、m和n定义的任何部分相组合，如上式d0所述。

在某些实施方案中，降解决定子选自下表d，其中x为h、氘、c1-c3烷基或卤素；且r是接头。

表d

在某些实施方案中，降解决定子选自下表d1：

表d1

在某些实施方案中，降解决定子选自下表d2：

表d2

在某些实施方案中，降解决定子选自下表d3。

表d3

在某些实施方案中，降解决定子选自下表d4。

表d4

其中

在某些实施方案中，本申请的降解决定子能够靶向用于降解的蛋白(例如，通过泛素化途径)，诱导蛋白降解或降解蛋白，而不通过接头与靶向配体结合。在某些实施方案中，本申请的降解决定子在施用至细胞后能够降解一种或多种细胞蛋白(例如ikzf1)。在某些实施方案中，能够降解一种或多种细胞蛋白(例如，ikzf1)的本申请的降解决定子选自表d、d1、d2、d3和d4。在某些实施方案中，能够降解一种或多种细胞蛋白(例如，ikzf1)的本申请的降解决定子选自表d3。在某些实施方案中，能够降解一种或多种细胞蛋白(例如，ikzf1)的本申请的降解决定子选自d-1至d-5、d-8至d-11、d-13至d-19和d-21至d-27。在某些实施方案中，能够降解一种或多种细胞蛋白(例如，ikzf1)的本申请的降解决定子选自d-3、d-4、d-8、d-9、d-16至d-19和d-21至d-23。

接头

接头是用于将靶向配体与降解决定子连接的键或碳链。在某些实施方案中，碳链任选地包含一个、两个、三个或更多个选自n、o和s的杂原子。在某些实施方案中，碳链仅包含饱和链碳原子。在某些实施方案中，碳链任选地包含两个或更多个不饱和链碳原子(例如，c＝c或c≡c)。在某些实施方案中，碳链中的一个或多个链碳原子任选地被一个或多个取代基(例如，氧代、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c2-c6炔基、c1-c3烷氧基、oh、卤素、nh2、nh(c1-c3烷基)、n(c1-c3烷基)2、cn、c3-c8环烷基、杂环基、苯基和杂芳基)取代。

在某些实施方案中，接头包含至少5个链原子(例如c、o、n和s)。在某些实施方案中，接头包含少于20个链原子(例如c、o、n和s)。在某些实施方案中，接头包含5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19个链原子(例如，c、o、n和s)。在某些实施方案中，接头包含5、7、9、11、13、15、17或19个链原子(例如c、o、n和s)。在某些实施方案中，接头包含5、7、9或11个链原子(例如c、o、n和s)。在某些实施方案中，接头包含6、8、10、12、14、16或18个链原子(例如c、o、n和s)。在某些实施方案中，接头包含6、8、10或12个链原子(例如c、o、n和s)。

在某些实施方案中，接头包含沿着链的一个或多个(例如一个、两个或三个)碳环和杂环，(例如，一个或多个链原子被例如c3-c8亚环烷基、3-至8-元亚杂环烷基、c6-c10亚芳基或5-至10-元亚杂芳基代替，其中c3-c8亚环烷基、3-至8-元亚杂环烷基、c6-c10亚芳基或5-至10-元亚杂芳基中的每一个任选地被卤素、nh2、cn、硝基、oh、c(o)oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6卤代烷氧基的一个或多个取代)。

在某些实施方案中，接头是任选地被非大体积取代基(例如氧代，c1-c6烷基，c2-c6烯基，c2-c6炔基，c1-c3烷氧基，oh，卤素，nh2，nh(c1-c3烷基)，n(c1-c3烷基)2和cn)取代。在某些实施方案中，非大体积取代位于邻近降解决定子的链碳原子上(即，碳原子通过接头中的至少3、4或5个链原子与降解决定子结合的碳原子隔开)。

在某些实施例中，接头具有式l0：

或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体，

p1是选自0-12的整数；

p2是选自0-12的整数；

p3是选自0-6的整数；

每个w独立地为不存在、ch2、o、s、nh或nr5；

z为不存在、ch2、o、nh或nr5；

每个r5独立地为c1-c3烷基；和

当p3为选自1-6的整数时，q为不存在、-c(o)nh-、-c(o)o-、-ch2c(o)nh-或-ch2c(o)o-；或者当p3为选自0-6的整数时，q为q1、-c1-c4亚烷基-q2或q1-c1-c4亚烷基-q2，其中q1和q2各自独立地为c3-c8亚环烷基、3-8元亚杂环烷基、c6-c10亚芳基或5-至10-元亚杂芳基，其各自任选地被卤素、nh2、cn、硝基、oh、c(o)oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6卤代烷氧基的一个或多个取代；其中接头共价结合降解决定子，与q相邻；并且接头共价结合靶向配体，与z相邻。

在某些实施方案中，接头中链原子(包括q为q1或q1-c1-c4亚烷基-q2时的所有环原子)的总数为约30或更小(例如，约20或更小或小于20)。

在某些实施方案中，接头-靶向配体(tl)具有式l1至l9中任一项的结构或其对映异构体，非对映异构体或立体异构体：

其中：

p1是选自0-12的整数；

p2是选自0-12的整数；

p3是选自1-6的整数；

每个w独立地为不存在、ch2、o、s、nh或nr5；

z为不存在、ch2、o、nh或nr5；

每个r5独立地为c1-c3烷基；

q1和q2各自独立地为c3-c8亚环烷基、3-至8-元亚杂环烷基、c6-c10亚芳基或5-至10-元亚杂芳基，其各自任选地被卤素、nh2、cn、硝基、oh、c(o)oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6卤代烷氧基的一个或多个取代；和

tl为靶向配体，

其中接头通过与降解决定子共价结合。

在某些实施方案中，p1是选自0-10的整数。

在某些实施方案中，p1是选自2-10的整数。

在某些实施方案中，p1选自1、2、3、4、5和6。

在某些实施方案中，p1选自1、3和5。

在某些实施方案中，p1选自1、2和3。

在某些实施方案中，p1为3。

在某些实施方案中，p2是选自0-10的整数。

在某些实施方案中，p2选自0、1、2、3、4、5和6。

在某些实施方案中，p2是选自0和1的整数。

在某些实施方案中，p3是选自1-5的整数。

在某些实施方案中，p3选自2、3、4和5。

在某些实施方案中，p3选自1、2和3。

在某些实施方案中，p3选自2和3。

在某些实施方案中，至少一个w为ch2。

在某些实施方案中，至少一个w为o。

在某些实施方案中，至少一个w为s。

在某些实施方案中，至少一个w为nh。

在某些实施方案中，至少一个w为nr5；r5为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。

在某些实施方案中，w为o。

在某些实施方案中，z不存在。

在某些实施方案中，z为ch2。

在某些实施方案中，z为o。

在某些实施方案中，z为nh。

在某些实施方案中，z为nr5；r5为选自甲基、乙基和丙基的c1-c3烷基。

在某些实施方案中，z为结合到接头的靶向配体的一部分，即z由靶向配体的官能团与接头反应形成。

在某些实施方案中，w为ch2，z为ch2。

在某些实施方案中，w为o，z为ch2。

在某些实施方案中，w为ch2，z为o。

在某些实施方案中，w为o，z为o。

在某些实施方案中，q1为c3-c8亚环烷基、3-至8-元亚杂环烷基(例如环氧乙烷、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢呋喃、吡咯烷、哌啶、哌嗪或吗啉)、c6-c10亚芳基(例如苯基)或5-至10元亚杂芳基(例如吡啶基、吲哚基、呋喃基或咪唑基)，它们各自任选地被卤素、nh2、cn、硝基、oh、c(o)oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6卤代烷氧基的一个或多个取代。例如，q1为3-至8-元亚杂环烷基(例如环氧乙烷、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢呋喃、吡咯烷、哌啶、哌嗪或吗啉)，其任选地被一个或多个c1-c6烷基取代。例如，q1为哌嗪或4-甲基哌嗪。例如，q1为苯基或5-至10-元杂芳基(例如吡啶基、吲哚基、呋喃基或咪唑基)，其各自任选地被选自卤素、nh2、cn、硝基、oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基和c1-c6烷氧基的一个或多个取代。

在某些实施方案中，q2为c3-c8亚环烷基，3-至8-元亚杂环烷基(例如环氧乙烷、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢呋喃、吡咯烷、哌啶、哌嗪或吗啉)、c6-c10亚芳基(例如苯基)或5-至10元亚杂芳基(例如吡啶基、吲哚基、呋喃基或咪唑基)，它们各自任选地被卤素、nh2、cn、硝基、oh、c(o)oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6卤代烷氧基的一个或多个取代。例如，q2为3-至8-元亚杂环烷基(例如环氧乙烷、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢呋喃、吡咯烷、哌啶、哌嗪或吗啉)，其任选地被一个或多个c1-c6烷基取代。例如，q2为哌嗪或4-甲基哌嗪。例如，q2为苯基或5-至10-元杂芳基(例如吡啶基、吲哚基、呋喃基或咪唑基)，其各自任选地被选自卤素、nh2、cn、硝基、oh、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基和c1-c6烷氧基的一个或多个取代。

在某些实施方案中，q1为任选地取代的苯基，q2为任选地取代的5至6元亚杂环烷基或5至10元杂芳基。在某些实施方案中，q2为任选地取代的苯基，且q1为任选地取代的5至6元亚杂环烷基或5至10元杂芳基。

在某些实施方案中，接头-靶向配体具有选自表l的结构：

表l

其中z、tl、p1、p2和p3各自如上所述，r6为o、chrc、ch、n或nrc、rc为h、c1-c6烷基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基或c1-c6卤代烷氧基。

本文描述的任何一个降解决定子可以共价结合到本文所描述的任何一个接头。

在某些实施方案中，本申请涉及具有以下结构的降解决定子-接头(dl)：

其中每个变量如上式d0和式l0所述，并且靶向配体共价结合dl，与z相邻。

在某些实施方案中，本申请涉及具有以下结构的降解决定子-接头(dl)：

其中每个变量如上式d0和式l0所述，并且靶向配体共价结合dl，与z相邻。

在某些实施方案中，本申请涉及具有以下结构的降解决定子-接头(dl)中间体或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

其中p是1-19，x和r1如上所述。

在某些实施方案中，dl具有以下结构：

或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体，

其中p为1-19。

在某些实施方案中，dl中间体具有以下结构：

本申请的一些实施方案涉及具有以下结构的双功能化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

其中每个变量如上文在式d0和式l0中所述，并且靶向配体在下文中描述。

本申请的其它实施方案涉及具有以下结构的双功能化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体：

其中每个变量如上文在式d0和式l0中所述，并且靶向配体在下文中描述。

本申请的某些实施方案涉及具有以下结构之一的双功能化合物：

在某些实施方案中，接头可以是大小为约1个至约12个乙二醇单元、1个至约10个乙二醇单元、约2个至约6个乙二醇单元、约2-5个乙二醇单元、约2-4个乙二醇单元之间的聚乙二醇基团。

在某些实施方案中，关于接头的连接位置，基于靶向配体的sar(构效关系)和x射线晶体学来设计和优化接头。

在某些实施方案中，最佳接头长度和组成根据靶标而变化，并且可以基于结合其靶标的原始靶向配体的x射线结构来估计。接头长度和组成也可以修改以调节代谢稳定性和药代动力学(pk)及药效学(pd)参数。

在某些实施方案中，当靶配体结合多个靶标时，可以通过改变接头长度来实现选择性，其中配体与不同结合口袋中的一些靶标结合，例如比其它结合口袋更深或更浅的结合口袋。

靶向配体

靶向配体(tl)(或靶蛋白部分或靶蛋白配体或配体)是能够结合目标靶蛋白的小分子。

本申请的一些实施方案涉及tl，其包括但不限于hsp90抑制剂、激酶抑制剂、mdm2抑制剂、靶向含人bet溴结构域的蛋白的化合物、靶向胞质信号蛋白fkbp12的化合物、hdac抑制剂、人赖氨酸甲基转移酶抑制剂、血管生成抑制剂、免疫抑制化合物和靶向芳基烃受体(ahr)的化合物。

在某些实施方案中，靶向配体是能够结合激酶、bet含溴结构域的蛋白、胞质信号蛋白(例如fkbp12)、核蛋白、组蛋白脱乙酰酶、赖氨酸甲基转移酶、调节血管生成的蛋白、调节免疫应答的蛋白、芳烃受体(ahr)、雌激素受体、雄激素受体、糖皮质激素受体或转录因子(例如，smarca4、smarca2、trim24)。

在某些实施方案中，靶向配体能够结合的激酶包括但不限于酪氨酸激酶(例如aatk、abl、abl2、alk、axl、blk、bmx、btk、csf1r、csk、ddr1、ddr2、egfr、epha1、epha2、epha3、epha4、epha5、epha6、epha7、epha8、epha10、ephb1、ephb2、ephb3、ephb4、ephb6、erbb2、erbb3、erbb4、fer、fes、fgfr1、fgfr2、fgfr3、fgfr4、fgr、flt1、flt3、flt4、frk、fyn、gsg2、hck、igf1r、ilk、insr、insrr、irak4、itk、jak1、jak2、jak3、kdr、kit、ksr1、lck、lmtk2、lmtk3、ltk、lyn、matk、mertk、met、mltk、mst1r、musk、npr1、ntrk1、ntrk2、ntrk3、pdgfra、pdgfrb、plk4、ptk2、ptk2b、ptk6、ptk7、ret、ror1、ror2、ros1、ryk、sgk493、src、srms、styk1、syk、tec、tek、tex14、tie1、tnk1、tnk2、tnni3k、txk、tyk2、tyro3、yes1或zap70)、丝氨酸/苏氨酸激酶(例如酪蛋白激酶2、蛋白激酶a、蛋白激酶b、蛋白激酶c、raf激酶、cam激酶、akt1、akt2、akt3、alk1、alk2、alk3、alk4、auroraa、aurorab、aurorac、chk1、chk2、clk1、clk2、clk3、dapk1、dapk2、dapk3、dmpk、erk1、erk2、erk5、gck、gsk3、hipk、khs1、lkb1、lok、mapkapk2、mapkapk、mnk1、mssk1、mst1、mst2、mst4、ndr、nek2、nek3、nek6、nek7、nek9、nek11、pak1、pak2、pak3、pak4、pak5、pak6、pim1、pim2、plk1、rip2、rip5、rsk1、rsk2、sgk2、sgk3、sik1、stk33、tao1、tao2、tgf-β、tlk2、tssk1、tssk2、ulk1或ulk2)、周期素依赖性蛋白激酶(例如cdk1-cdk11)和富含亮氨酸的重复激酶(例如lrrk2)。

在某些实施方案中，靶向配体能够结合的含bet溴结构域的蛋白包括但不限于brd1、brd2、brd3、brd4、brd5、brd6、brd7、brd8、brd9、brd10和brdt。在某些实施方案中，含bet溴结构域的蛋白是brd4。

在某些实施方案中，靶向配体能够结合的核蛋白包括但不限于brd2、brd3、brd4、触角足同源二聚体蛋白、brca1、brca2、ccaat增强结合蛋白、组蛋白、多梳组蛋白、高迁移率群蛋白、端粒结合蛋白、fanca、fancd2、fance、fancf、肝细胞核因子、mad2、nf-κb、核受体共激活因子、creb结合蛋白、p55、p107、p130、rb蛋白、p53、c-fos、c-jun、c-mdm2、c-myc和c-rel。

在某些实施方案中，靶向配体选自激酶抑制剂、含bet溴结构域的蛋白抑制剂、胞质信号蛋白fkbp12配体、hdac抑制剂、赖氨酸甲基转移酶抑制剂、血管生成抑制剂、免疫抑制化合物和芳基烃受体(ahr)抑制剂。

tl的非限制性实例显示在下面，并代表某些类型的目的蛋白的靶向配体。

在某些实施方案中，本申请涉及含有表1所示的tl部分的化合物。

表1.靶向配体1-6

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-1的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

是

a1为s或c＝c；

a2为nra5或o；

nn1为0、1或2；

每个ra1独立地为c1-c3烷基、(ch2)0-3-cn、(ch2)0-3-卤素、(ch2)0-3-oh、(ch2)0-3-c1-c3烷氧基、c(o)nra5l、ol、nra5l或l；

ra2为h、c1-c6烷基、(ch2)0-3-杂环基、(ch2)0-3-苯基或l，其中杂环基包含一个饱和的5-或6-元环和1-2个选自n、o和s的杂原子，并且杂环基任选地被c1-c3烷基、l或c(o)l取代，并且其中苯基任选地被c1-c3烷基、cn、卤素、oh、c1-c3烷氧基或l取代；

nn2为0、1、2或3；

每个ra3独立地为c1-c3烷基、(ch2)0-3-cn、(ch2)0-3-卤素、l或c(o)nra5l；

ra4为c1-c3烷基；

ra5为h或c1-c3烷基；和

l为接头，

条件是式tl-1的化合物仅被一个l取代。

在某些实施方案中，是

在某些实施方案中，是

在某些实施方案中，a1是s。

在某些实施方案中，a1为c＝c。

在某些实施方案中，a2为nra5。在其它实施方案中，ra5为h。在其它实施方案中，ra5为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，ra5为甲基。

在某些实施方案中，a2为o。

在某些实施方案中，nn1为0。

在某些实施方案中，nn1为1。

在某些实施方案中，nn1为2。

在某些实施方案中，至少一个ra1为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，至少一个ra1为甲基。在其它实施方案中，两个ra1为甲基。

在某些实施方案中，至少一个ra1为cn、(ch2)-cn、(ch2)2-cn或(ch2)3-cn。在其它实施方案中，至少一个ra1为(ch2)-cn。

在某些实施方案中，至少一个ra1为卤素(例如f、cl或br)、(ch2)-卤素、(ch2)2-卤素或(ch2)3-卤素。在其它实施方案中，至少一个ra1为cl、(ch2)-cl、(ch2)2-cl或(ch2)3-cl。

在某些实施方案中，至少一个ra1为oh、(ch2)-oh、(ch2)2-oh或(ch2)3-oh。

在某些实施方案中，至少一个ra1为c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)、(ch2)-c1-c3烷氧基、(ch2)2-c1-c3烷氧基或(ch2)3-c1-c3烷氧基。在某些实施方案中，至少一个ra1为甲氧基。

在某些实施方案中，一个ra1为c(o)nra5l。在其它实施方案中，ra5为h。在其它实施方案中，ra5为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施例中，一个ra1为ol。

在某些实施方案中，一个ra1为nra5l。在其它实施方案中，ra5为h。在其它实施方案中，ra5为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，ra5为甲基。

在某些实施方案中，一个ra1为l。

在某些实施方案中，ra2为h。

在某些实施方案中，ra2为直链c1-c6或支链c3-c6烷基(例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)。在其它实施方案中，ra2为甲基、乙基或叔丁基。

在某些实施方案中，ra2为杂环基，(ch2)-杂环基、(ch2)2-杂环基或(ch2)3-杂环基。在其它实施方案中，ra2为(ch2)3-杂环基。在其它实施方案中，杂环基选自吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、哌啶基、哌嗪基、六氢嘧啶基、吗啉基和硫代吗啉基。在其它实施方案中，杂环基是哌嗪基。

在某些实施方案中，杂环基被c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)取代。

在某些实施方案中，杂环基被c(o)l取代。

在某些实施方案中，杂环基被l取代。

在某些实施方案中，ra2为苯基、(ch2)-苯基、(ch2)2-苯基或(ch2)3-苯基。在其它实施方案中，ra2为苯基。

在某些实施方案中，苯基被c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)取代。在某些实施方案中，苯基被cn取代。在某些实施方案中，苯基被卤素(例如f、cl或br)取代。在某些实施方案中，苯基被oh取代。在某些实施方案中，苯基被c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)取代。

在某些实施方案中，苯基被l取代。

在某些实施方案中，ra2为l。

在某些实施方案中，nn2为0。

在某些实施方案中，nn2为1。

在某些实施方案中，nn2为2。

在某些实施方案中，nn2为3。

在某些实施方案中，至少一个ra3为c1-c3烷基(例如甲基，乙基，丙基或异丙基)。在其它实施方案中，至少一个ra3为甲基。

在某些实施方案中，至少一个ra3为cn、(ch2)-cn、(ch2)2-cn或(ch2)3-cn。在其它实施方案中，至少一个ra3为cn。

在某些实施方案中，至少一个ra3为卤素(例如f、cl或br)、(ch2)-卤素、(ch2)2-卤素或(ch2)3-卤素。在其它实施方案中，至少一个ra3为cl、(ch2)-cl、(ch2)2-c1或(ch2)3-cl。在其它实施方案中，至少一个ra3为cl。

在某些实施方案中，一个ra3为l。

在某些实施方案中，一个ra3为c(o)nra5l。在其它实施方案中，ra5为h。在其它实施方案中，ra5为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，ra4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，ra4为甲基。

在某些实施方案中，ra5为h。

在某些实施方案中，ra5为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，ra5为甲基。

对t1、t2、t3、t4、t5、a1、a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2之一定义的各个部分可以与对其它的t1、t2、t3、t4、t5、a1、a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2定义的任何部分相结合。

在某些实施方案中，是且a1为s。

在某些实施方案中，是且a1为c＝c。

在某些实施方案中，是且a1为c＝c。

在某些实施方案中，a2为nh，并且ra2为(ch2)0-3-杂环基。在其它实施方案中，ra2为(ch2)3-杂环基。在其它实施方案中，杂环基是哌嗪基。在其它实施方案中，杂环基被c1-c3烷基、l或c(o)l取代。

在某些实施方案中，a2为nh，并且ra2为(ch2)0-3-苯基。在其它实施方案中，ra2为苯基。在其它实施方案中，苯基被oh或l取代。

在某些实施方案中，a2为nh，ra2为l。

在某些实施方案中，a2为nh，且ra2为h或c1-c6烷基。在其它实施方案中，ra2为c1-c4烷基。

在某些实施方案中，a2为o，且ra2为h或c1-c6烷基。在其它实施方案中，ra2为c1-c4烷基。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-i1的化合物或其药学上可接受的盐：

其中a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2各自如上述式tl-i中所定义。

a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2的每个可以选自式tl-1中所述的部分。对于a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2之一定义的各个部分可以与对于其它的a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2定义的任何部分相结合，如上述式tl-i中所述。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-i1a-tl-i1d的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

每个ra6独立地为c1-c3烷基、(ch2)0-3-cn、(ch2)0-3-卤素、(ch2)0-3-oh或(ch2)0-3-c1-c3烷氧基；

ra7为(ch2)0-3-杂环基、(ch2)0-3-苯基或l，其中杂环基包含一个饱和的5-或6-元环和1-2个选自n、o和s的杂原子并且被l或c(o)l取代，并且其中苯基被l取代；

ra8为h、c1-c6烷基、(ch2)0-3-杂环基或(ch2)0-3-苯基，其中杂环基包含一个饱和的5-或6-元环和1-2个选自n、o和s的杂原子，并且任选地被c1-c3烷基取代，并且其中苯基任选地被c1-c3烷基、cn、卤素、oh或c1-c3烷氧基取代；

ra10为c1-c3烷基、(ch2)0-3-cn或(ch2)0-3-卤素；和

a2、ra4、ra5、nn1和l各自如上述式tl-i中所定义。

在某些实施方案中，nn1为0。

在某些实施方案中，nn1为1。

在某些实施方案中，nn1为2。

在某些实施方案中，至少一个ra6为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，至少一个ra6为甲基。在其它实施方案中，两个ra6为甲基。

在某些实施方案中，至少一个ra6为cn、(ch2)-cn、(ch2)2-cn或(ch2)3-cn)。在其它实施方案中，至少一个ra6为(ch2)-cn。

在某些实施方案中，至少一个ra6为卤素(例如f、cl或br)、(ch2)-卤素、(ch2)2-卤素或(ch2)3-卤素。在其它实施方案中，至少一个ra6为cl、(ch2)-cl、(ch2)2-c1或(ch2)3-cl。

在某些实施方案中，至少一个ra6为oh、(ch2)-oh、(ch2)2-oh或(ch2)3-oh。

在某些实施方案中，至少一个ra6为c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)、(ch2)-c1-c3烷氧基、(ch2)2-c1-c3烷氧基或(ch2)-c1-c3烷氧基。在某些实施方案中，至少一个ra6为甲氧基。

在某些实施方案中，ra7为杂环基、(ch2)-杂环基、(ch2)2-杂环基或(ch2)3-杂环基。在其它实施方案中，ra7为(ch2)3-杂环基。在其它实施方案中，杂环基选自吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、哌啶基、哌嗪基、六氢嘧啶基、吗啉基和硫代吗啉基。在其它实施方案中，杂环基是哌嗪基。

在某些实施方案中，杂环基被c(o)l取代。

在某些实施方案中，杂环基被l取代。

在某些实施方案中，ra7为苯基、(ch2)-苯基、(ch2)2-苯基或(ch2)3-苯基。在其它实施方案中，ra7为苯基。

在某些实施方案中，ra7为l。

在某些实施方案中，ra8为h。

在某些实施方案中，ra8为直链c1-c6或支链c3-c6烷基(例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)。在其它实施方案中，ra8为甲基、乙基或叔丁基。

在某些实施方案中，ra8为杂环基、(ch2)-杂环基、(ch2)2-杂环基或(ch2)3-杂环基。在其它实施方案中，ra8为(ch2)3-杂环基。在其它实施方案中，杂环基选自吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、哌啶基、哌嗪基、六氢嘧啶基、吗啉基和硫代吗啉基。在其它实施方案中，杂环基是哌嗪基。

在某些实施方案中，杂环基被c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)取代。

在某些实施方案中，ra8为苯基、(ch2)-苯基、(ch2)2-苯基或(ch2)3-苯基。在其它实施方案中，ra8为苯基。

在某些实施方案中，苯基被c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)取代。在某些实施方案中，苯基被cn取代。在某些实施方案中，苯基被卤素(例如f、cl或br)取代。在某些实施方案中，苯基被oh取代。在某些实施方案中，苯基被c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)取代。

在某些实施方案中，ra10为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，ra10为cn、(ch2)-cn、(ch2)2-cn或(ch2)3-cn。

在某些实施方案中，ra10为卤素(例如f、cl或br)、(ch2)-卤素、(ch2)2-卤素或(ch2)3-卤素。在其它实施方案中，ra10为cl、(ch2)-cl、(ch2)2-cl或(ch2)3-cl。在其它实施方案中，ra10为cl。

a²、ra⁴、ra⁵和nn1的每个可以选自式tl-1中所述的部分。对于a2、ra4、ra5、ra6、ra7、ra8、ra10和nn1之一定义的各个部分可以与对于其它的a2、ra4、ra5、ra6、ra7、ra8、ra10和nn1定义的任何部分相结合，如上和式tl-i所述。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-i2的化合物或其药学上可接受的盐：

其中a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2各自如上式tl-i中所定义。

对于a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2之一定义的各个部分可以与对于其它的a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2定义的任何部分相结合，如上式tl-i所述。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-i2a-tl-i2c的化合物或其药学上可接受的盐：

其中a2、ra4、ra5、nn1和l各自如上式tl-i中所定义，ra6、ra7、ra8和ra10各自如上式tl-i1a-tl-i1d中所定义。

a2、ra4、ra5和nn1中的每个可以选自上式tl-i中所述的部分，ra6、ra7、ra8和ra10各自可以选自上式tl-i1a-tl-i1d的部分。对于a2、ra4、ra5、ra6、ra7、ra8、ra10和nn1之一定义的各个部分可以与对于其它的a2、ra4、ra5、ra6、ra7、ra8、ra10和nn1定义的任何部分相结合，如上式tl-i和tl-i1a-tl-i1d所述。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-i3的化合物或其药学上可接受的盐：

a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2各自如上式tl-i中所定义。a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2的每个可以选自上式tl-i中所述的部分。对于a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2之一定义的各个部分可以与对于其它的a2、ra1、ra2、ra3、ra4、ra5、nn1和nn2定义的任何部分相结合，如上式tl-i所述。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-i3a-tl-i13的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

ra9为c(o)nra5l、ol、nra5l或l；

a2、ra4、ra5、nn1和l各自如上式tl-i中所定义；和

ra6、ra7、ra8和ra10分别如上式tl-i1a-tl-i1d中所定义。

在某些实施方案中，ra9为c(o)nra5l。在其它实施方案中，ra5为h。在其它实施方案中，ra5为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，ra9为ol。

在某些实施方案中，ra9为nra5l。在其它实施方案中，ra5为h。在其它实施方案中，ra5为c1-c3烷基(例如甲基，乙基，丙基或异丙基)。在其它实施方案中，ra5为甲基。

在某些实施方案中，ra9为l。

a2、ra4、ra5和nn1中的每个可以选自上式tl-i中所述的部分，ra6、ra7、ra8和ra10的每一个可以选自上式tl-i1a-tl-i1d所述的部分。对于a2、ra4、ra5、ra6、ra7、ra8、ra9、ra10和nn1之一定义的每个部分可以与对于其它的a2、ra4、ra5、ra6、ra7、ra8、ra9、ra10和nn1定义的任何部分相结合，如上和式tl-i和tl-i1a-tl-i1d所述。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-ii的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

t6为crb4或n；

rb1、rb2和rb5各自独立地为h或c1-c3烷基；

rb3为c3-c6环烷基；

每个rb4独立地为h，c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、cn或卤素；

nn3为0、1、2或3；

每个rb6独立地为c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、cn或卤素；

rb7为c(o)nrb8l、ol、nrb8l或l；

rb8为h或c1-c3烷基；和

l为接头。

在某些实施方案中，t6为crb4。

在某些实施方案中，t6为n。

在某些实施方案中，rb1为h。在某些实施方案中，rb1为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，rb1为甲基。

在某些实施方案中，rb2为h。在某些实施方案中，rb2为c1-c3烷基(例如甲基，乙基，丙基或异丙基)。在其它实施方案中，rb2为甲基或乙基。

在某些实施方案中，rb5为h。在某些实施方案中，rb5为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rb3为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在其它实施方案中，rb3为环戊基。

在某些实施方案中，rb4为h。

在某些实施方案中，rb4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rb4为c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)。

在某些实施方案中，rb4为cn。

在某些实施方案中，rb4为卤素(例如f、cl或br)。

在某些实施方案中，nn3为0。

在某些实施方案中，nn3为1。

在某些实施方案中，nn3为2。

在某些实施方案中，nn3为3。

在某些实施方案中，至少一个rb6为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，至少一个rb6为甲基。

在某些实施方案中，至少一个rb6为c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)。在其它实施方案中，至少一个rb6为甲氧基。

在某些实施方案中，至少一个rb6为cn。

在某些实施方案中，至少一个rb6为卤素(例如f、cl或br)。

在某些实施方案中，rb7为c(o)nrb8l。在其它实施方案中，rb8为h。在其它实施方案中，rb8为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rb7为ol。

在某些实施方案中，rb7为nrb8l。在其它实施方案中，rb8为h。在其它实施方案中，rb8为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，rb8为甲基。

在某些实施方案中，rb7为l。

对于t6、rb1、rb2、rb3、rb4、rb5、rb6、rb7、rb8和nn3之一定义的每个部分可以与对于其它的t6、rb1、rb2、rb3、rb4、rb5、rb6、rb7、rb8和nn3定义的任何部分相结合。

在某些实施方案中，rb3为环戊基，rb7为c(o)nrb8l。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-ii1的化合物或其药学上可接受的盐：

其中t6、rb2、rb4、rb6、rb7和rb8各自如式tl-ii中所定义。

t6、rb2、rb4、rb6、rb7和rb8中的每个可以选自上式tl-ii中所述的部分。对于t6、rb2、rb4、rb6、rb7和rb8之一定义的每个部分可以与对于其它的t6、rb2、rb4、rb6、rb7和rb8定义的任何部分相结合，如在上式tl-ii中所述。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-ii1a的化合物或其药学上可接受的盐：

其中t6、rb2和rb4各自如上式tl-ii中所定义。

t6、rb2和rb4中的每个可以选自式tl-ii中所述的部分。对于t6、rb2和rb4之一定义的每个部分可以与对于其它的t6、rb2和rb4定义的任何部分相结合，如上在式tl-ii中所述。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-iii的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

nn4为0或1；

rc1为c(o)nrc6l、ol、nrc6l或l；

rc2为h、c1-c3烷基、c(o)nrc6l、ol、nrc6l或l；

rc3为h、c1-c3烷基、c(o)l或l；

nn5为0、1或2；

每个rc4独立地为c1-c3烷基或c1-c3烷氧基；

每个rc5独立地为h或c1-c3烷基；

rc6独立地为h或c1-c3烷基；和

l为接头，

条件是式tl-iii的化合物仅被一个l取代。

在某些实施方案中，nn4为0。

在某些实施方案中，nn4为1。

在某些实施方案中，rc1为c(o)nrc6l。在其它实施方案中，rc6为h。在其它实施方案中，rc6为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施例中，rc1为ol。

在某些实施方案中，rc1为nrc6l。在其它实施方案中，rc6为h。在其它实施方案中，rc6为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，rc6为甲基。

在某些实施方案中，rc1为l。

在某些实施方案中，rc2为h。

在某些实施方案中，rc2为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，rc2为甲基。

在某些实施方案中，rc2为c(o)nrc6l。在其它实施方案中，rc6为h。在其它实施方案中，rc6为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rc2为ol。

在某些实施方案中，rc2为nrc6l。在其它实施方案中，rc6为h。在其它实施方案中，rc6为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，rc6为甲基。

在某些实施方案中，rc2为l。

在某些实施方案中，rc3为h。

在某些实施方案中，rc3为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rc3为c(o)l。

在某些实施方案中，rc3为l。

在某些实施方案中，nn5为0。

在某些实施方案中，nn5为1。

在某些实施方案中，nn5为2。

在某些实施方案中，至少一个rc4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，至少一个rc4为甲基。

在某些实施方案中，至少一个rc4为c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)。在其它实施方案中，至少一个rc4为甲氧基。

在某些实施方案中，至少一个rc5为h。

在某些实施方案中，至少一个rc5为c1-c3烷基(例如甲基，乙基，丙基或异丙基)。在其它实施方案中，至少一个rc5为甲基。在其它实施方案中，两个rc5为甲基。

对于rc1、rc2、rc3、rc4、rc5、rc6、nn4和nn5之一定义的每个部分可以与对于其它的rc1、rc2、rc3、rc4、rc5、rc6、nn4和nn5定义的任何部分相结合。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-iii1-tl-iii3的化合物或其药学上可接受的盐：

其中rc1、rc2、rc3、rc4和nn5各自如式tl-iii中所定义。

rc1、rc2、rc3、rc4和nn5中的每个可以选自上式tl-iii中所述的部分。对于rc1、rc2、rc3、rc4和nn5之一定义的每个部分可以与对于其它的rc1、rc2、rc3、rc4和nn5定义的任何部分相组合，如上式tl-iii所述。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-iv的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

每个rd1独立地为h或c1-c3烷基；

nn6为0、1、2或3；

nn7为0、1、2或3；

每个rd2独立地为c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、cn或卤素；

rd3为c(o)nrd4l、ol、nrd4l或l；

rd4为h或c1-c3烷基；和

l为接头。

在某些实施方案中，rd1为h。

在某些实施方案中，rd1为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，rd1为甲基。

在某些实施方案中，nn6为0。

在某些实施方案中，nn6为1。

在某些实施方案中，nn6为2。

在某些实施方案中，nn6为3。

在某些实施方案中，nn7为0。

在某些实施方案中，nn7为1。

在某些实施方案中，nn7为2。

在某些实施方案中，nn7为3。

在某些实施方案中，至少一个rd2为c1-c3烷基(例如甲基，乙基，丙基或异丙基)。在其它实施方案中，至少一个rd2为甲基。

在某些实施方案中，至少一个rd2为c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)。在其它实施方案中，至少一个rd2为甲氧基。

在某些实施方案中，至少一个rd2为cn。

在某些实施方案中，至少一个rd2为卤素(例如f、cl或br)。

在某些实施方案中，rd3为c(o)nrd4l。在其它实施方案中，rd4为h。在其它实施方案中，rd4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rd3为ol。

在某些实施方案中，rd3为nrd4l。在其它实施方案中，rd4为h。在其它实施方案中，rd4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，rd4为甲基。

在某些实施方案中，rd3为l。

对于rd1、rd2、rd3、rd4、nn6和nn7之一定义的每个部分可以与对于其它的rd1、rd2、rd3、rd4、nn6和nn7定义的任何部分相组合。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-iv1的化合物或其药学上可接受的盐：

其中rd3如上式tl-iv中所定义。

rd3可以选自式tl-iv中所述的部分。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-v的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

每个re1独立地为h或c1-c3烷基；

nn8为0、1、2或3；

nn9为0、1、2或3；

每个re2独立地为c1-c3烷基，c1-c3烷氧基，cn或卤素；

re3为nh-(ch2)1-3-c(o)nre4l、c(o)nre4l、ol、nre4l或l；

re4为h或c1-c3烷基；和

l为接头。

在某些实施方案中，re1为h。

在某些实施方案中，re1为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，re1为甲基。

在某些实施方案中，nn8为0。

在某些实施方案中，nn8为1。

在某些实施方案中，nn8为2。

在某些实施方案中，nn8为3。

在某些实施方案中，nn9为0。

在某些实施方案中，nn9为1。

在某些实施方案中，nn9为2。

在某些实施方案中，nn9为3。

在某些实施方案中，至少一个re2为c1-c3烷基(例如甲基，乙基，丙基或异丙基)。在其它实施方案中，至少一个re2为甲基。

在某些实施方案中，至少一个re2为c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)。在其它实施方案中，至少一个re2为甲氧基。

在某些实施方案中，至少一个re2为cn。

在某些实施方案中，至少一个re2为卤素(例如f、cl或br)。

在某些实施方案中，re3为nh-ch2-c(o)nre4l，nh-(ch2)2-c(o)nre4l或nh-(ch2)3-c(o)nre4l。在其它实施方案中，re3为nh-ch2-c(o)nre4l。在其它实施方案中，re4为h。在其它实施方案中，re4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，re3为c(o)nre4l。在其它实施方案中，re4为h。在其它实施方案中，re4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施例中，re3为ol。

在某些实施方案中，re3为nre4l。在其它实施方案中，re4为h。在其它实施方案中，re4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，re4为甲基。

在某些实施方案中，re3为l。

对于re1、re2、re3、re4、nn8和nn9之一定义的每个部分可以与对于其它的re1、re2、re3、re4、nn8和nn9定义的任何部分相组合。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-v1的化合物或其药学上可接受的盐：

其中re3如式tl-v中所定义。

re3可以选自式tl-v中所述的部分。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-vi的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

rf1为c(o)nrf2l、ol、nrf2l或l；

rf2独立地为h或c1-c3烷基；和

l为接头。

在某些实施方案中，rf1为c(o)nrf2l。在其它实施方案中，rf2为h。在其它实施方案中，rf2为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rf1为ol。

在某些实施方案中，rf1为nre4l。在其它实施方案中，rf2为h。在其它实施方案中，rf2为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，rf2为甲基。

在某些实施方案中，rf1为l。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-vii的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

t7为ch2或ch2ch2；

rg1为c(o)rg5或被rg6取代的c1-c3烷基；

nn10为0、1、2或3；

nn11为0、1、2或3；

每个rg2独立地为c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、cn或卤素；

r3为c(o)nrg4l、ol、nrg4l、l、o-(ch2)1-3-c(o)nrg4l或nhc(o)-(ch2)1-3-c(o)nrg4l；

r4为h或c1-c3烷基；

r5为c1-c6烷基；

r6为任选地被c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、cn或卤素取代的苯基；和

l为接头。

在某些实施方案中，t7为ch2。

在某些实施方案中，t7为ch2ch2。

在某些实施方案中，rg1为c(o)rg5。

在某些实施方案中，rg1为(ch2)-rg6、(ch2)2-rg6、(chr6)-ch3、(ch2)3-r8、(chr6)-ch2ch3或ch2-(chr6)-ch3。在某些实施方案中，rg1为(ch2)-rg6。在某些实施方案中，rg1为(chr6)-ch2ch3。

在某些实施方案中，rg5为直链c1-c6或支链c3-c6烷基(例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)。

在某些实施方案中，rg6为未取代的苯基。

在某些实施方案中，rg6为被独立地选自c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)、c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、或丙氧基)、cn和卤素(例如f、cl或br)的一个、两个、三个或更多个取代基取代的苯基。

在某些实施方案中，nn10为0。

在某些实施方案中，nn10为1。

在某些实施方案中，nn10为2。

在某些实施方案中，nn10为3。

在某些实施方案中，nn11为0。

在某些实施方案中，nn11为1。

在某些实施方案中，nn11为2。

在某些实施方案中，nn11为3。

在某些实施方案中，至少一个rg2为c1-c3烷基(例如甲基，乙基，丙基或异丙基)。在其它实施方案中，至少一个rg2为甲基。

在某些实施方案中，至少一个rg2为c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)。在其它实施方案中，至少一个rg2为甲氧基。

在某些实施方案中，至少一个rg2为cn。

在某些实施方案中，至少一个rg2为卤素(例如f、cl或br)。

在某些实施方案中，rg3为c(o)nrg4l。在其它实施方案中，rg4为h。在其它实施方案中，rg4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rg3为ol。

在某些实施方案中，rg3为nrg4l。在其它实施方案中，rg4为h。在其它实施方案中，rg4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在其它实施方案中，rg4为甲基。

在某些实施方案中，rg3为l。

在某些实施方案中，rg3为o-(ch2)-c(o)nrg4l、o-(ch2)2-c(o)nrg4l或o-(ch2)3-c(o)nrg4l。在其它实施方案中，rg3为o-(ch2)-c(o)nrg4l。在其它实施方案中，rg4为h。在其它实施方案中，rg4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rg3为nhc(o)-(ch2)-c(o)nrg4l，nhc(o)-(ch2)2-c(o)nrg4l或nhc(o)-(ch2)3-co)nrg4l。在其它实施方案中，rg3为nhc(o)-(ch2)-c(o)nrg4l，nhc(o)-(ch2)2-c(o)nrg4l。在其它实施方案中，rg3为nhc(o)-(ch2)2-c(o)nrg4l。在其它实施方案中，rg4为h。在其它实施方案中，rg4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

对于t7、nn10、nn11、rg1、rg2、rg3、rg4、rg5和rg6之一定义的每个部分可以与对于其它的t7、nn10、nn11、rg1、rg2、rg3、rg4、rg5和rg6定义的任何部分相组合。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-vii1的化合物或其药学上可接受的盐：

其中t7、rg1、rg2、rg3、rg4、rg5和rg6各自如式tl-vii中所定义。

t7、rg1、rg2、rg3、rg4、rg5和rg6各自可以选自式tl-vii中所述的部分。对于t7、rg1、rg2、rg3、rg4、rg5和rg6之一定义的每个部分可以与对于其它的t7、rg1、rg2、rg3、rg4、rg5和rg6定义的任何部分相组合，如上文在式tl-vii中所述。

在某些实施方案中，t7为ch2。

在某些实施方案中，t7为ch2ch2。

在某些实施方案中，rg1为c(o)rg5。

在某些实施方案中，rg1为(ch2)-rg6、(ch2)2-rg6、(chr6)-ch3、(ch2)3-rg6、(chrg6)-ch2ch3或ch2-(chrg6)-ch3。在某些实施方案中，rg1为(ch2)-rg6。在某些实施方案中，rg1为(chr6)-ch2ch3。

在某些实施方案中，至少一个rg2为c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)。在其它实施方案中，两个rg2都为甲氧基。

在某些实施方案中，rg3为o-(ch2)-c(o)nrg4l、o-(ch2)2-c(o)nrg4l或o-(ch2)3-c(o)nrg4l。在其它实施方案中，rg3为o-(ch2)-c(o)nrg4l。在其它实施方案中，rg4为h。在其它实施方案中，rg4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rg3为nhc(o)-(ch2)-c(o)nrg4l，nhc(o)-(ch2)2-c(o)nrg4l或nhc(o)-(ch2)3-(co)nrg4l。在其它实施方案中，rg3为nhc(o)-(ch2)-c(o)nrg4l、nhc(o)-(ch2)2-c(o)nrg4l。在其它实施方案中，rg3为nhc(o)-(ch2)2-c(o)nrg4l。在其它实施方案中，rg4为h。在其它实施方案中，rg4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2；并且rg1为c(o)r5。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2；rg1为c(o)rg5；和rg3为o-(ch2)-c(o)nrg4l。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2；rg1为c(o)rg5；和rg3为nhc(o)-(ch2)2-c(o)nrg4l。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2；和rg1为(chrg6)-ch2ch3。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2；rg1为(chrg6)-ch2ch3；和rg3为o-(ch2)-c(o)nrg4l。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2；rg1为(chrg6)-ch2ch3；和rg3为nhc(o)-(ch2)2-c(o)nrg4l。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2ch2；并且r1是c(o)r5。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2ch2；rg1为c(o)rg5；和r3为o-(ch2)-c(o)nrg4l。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2ch2；rg1为c(o)rg5；和rg3为nhc(o)-(ch2)2-c(o)nrg4l。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2ch2；和rg1是(chrg6)-ch2ch3。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2ch2；rg1为(chrg6)-ch2ch3；和r3为o-(ch2)-c(o)nrg4l。

在其它实施方案中，两个rg2均为甲氧基；t7为ch2ch2；rg1为(chrg6)-ch2ch3；和rg3为nhc(o)-(ch2)2-c(o)nrg4l。

在某些实施方案中，靶向配体是式tl-viii的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

每个rh1独立地为h或c1-c3烷基；

nn12为0、1、2或3；

每个rh2独立地为c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、cn或卤素；

rh3为c(o)l或c(o)-(ch2)1-3-c(o)nrh6l；

rh6为h或c1-c3烷基；

rh4为h或c1-c3烷基；

rh5为c1-c6烷基；和

l为接头。

在某些实施方案中，rh1为h。在其它实施方案中，rh1为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，nn12为0。

在某些实施方案中，nn12为1。

在某些实施方案中，nn12为2。

在某些实施方案中，nn12为3。

在某些实施方案中，至少一个rh2为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在某些实施方案中，至少一个rh2为c1-c3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)。在某些实施方案中，至少一个rh2为cn。在某些实施方案中，至少一个rh2为卤素(例如f、cl或br)。

在某些实施方案中，rh3为c(o)l。

在某些实施方案中，rh3为c(o)-(ch2)-c(o)nrh6l、c(o)-(ch2)2-c(o)nrh6l、c(o)-(ch2)3-c(o)nrh6l。在某些实施方案中，rh3为c(o)-(ch2)2-c(o)nrh6l。

在某些实施方案中，rh6为h。在其它实施方案中，rh6为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

在某些实施方案中，rh4为h。在其它实施方案中，rh4为c1-c3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。在某些实施方案中，rh4为甲基。

在某些实施方案中，rh5为直链c1-c6或支链c3-c6烷基(例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基或己基)。在某些实施方案中，rh5为叔丁基。

在某些实施方案中，靶向配体选自表t中的以下，其中r为接头：

表t

在某些实施方案中，基于存在(已知靶蛋白结合部分)和开发具有可容纳接头的功能位置的有效的和选择性的配体的能力来选择tl或靶。一些实施方案涉及具有较少选择性的靶，其可以受益于与蛋白组学结合的降解作为化合物选择性或靶标id的量度。这些情况包括但不限于：a)具有通过抑制不能被靶向的多个功能的靶标；b)对抑制剂具有抗性而不改变其结合的靶标；c)具有不改变靶标功能的配体的靶标；和d)将受益于不可逆抑制但缺乏可用共价配体靶向的活性残基的靶标。

在某些实施方案中，本申请涉及蛋白降解的小分子诱导物，其与蛋白功能的抑制剂相比具有许多优点，并且可以a)在某些情况下克服抗性；b)即使在小分子被代谢后也可以通过破坏需要再合成的蛋白来延长药物作用的动力学；c)一次靶向蛋白的所有功能，而不是特定的催化活性或结合事件；d)通过包括可以开发用于其的配体的所有蛋白而不是其活性受小分子抑制剂、拮抗剂或激动剂影响的蛋白来扩大药物靶标的数量；和e)由于小分子起催化作用的可能性比抑制剂具有更高的效力。

本申请的一些实施方案涉及30％至100％的靶蛋白的降解或损失。某些实施方案涉及50-100％靶蛋白的损失。其它实施方案涉及75-95％的靶蛋白的损失。

本申请的一些实施方案涉及具有以下结构的如表i所示双功能化合物、其合成和使用方法：

在某些实施方案中，本申请的双功能化合物(例如，本文所述的任一式的双功能化合物或选自本文所述的任何双功能化合物)在治疗疾病或病症(例如癌症)方面比共价结合双功能化合物中的接头和降解决定子的靶向配体更有效。在某些实施方案中，本申请的双功能化合物(例如，本文所述的任一式的双功能化合物或选自本文所述的任何双功能化合物)能够治疗对靶向配体具有抗性的疾病或病症(例如癌症)，该靶向配体与双功能化合物中的接头和降解决定子共价结合。

在某些实施方案中，本申请的双功能化合物在治疗疾病或病症方面比靶向配体(其与双功能化合物中的接头和降解决定子共价结合)更有效，或者能够治疗对靶向配体(其与双功能化合物中的接头和降解决定子共价结合)具有抗性的疾病或病症，双功能化合物包含靶向配体、本文所述的接头和式d0、d、d0’、d’、d1、d2、d3、d’1、d’3、d0’i、d0’ii或d0’iii的降解决定子。在其它实施方案中，双功能化合物包含如本文所述的靶向配体和接头以及式d1的降解决定子。在其它实施方案中，降解决定子选自表d。在其它实施方案中，降解决定子选自表d1。在其它实施方案中，降解决定子选自表d2。在其它实施方案中，降解决定子选自表d3的那些及其衍生物。在其它实施方案中，降解决定子选自表d4的那些及其衍生物。在其它实施方案中，降解决定子是其中r是接头。

在某些实施方案中，本申请的双功能化合物在治疗疾病或病症方面比靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)更有效，或者能够治疗对靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)具有抗性的疾病或病症，双功能化合物包含靶向配体、本文所述的降解决定子和式l0至l9的任一接头。在其它实施方案中，接头选自表l。

在某些实施方案中，本申请的双功能化合物在治疗疾病或病症方面比靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)更有效，或者能够治疗对靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)具有抗性的疾病或病症，双功能化合物包含靶向配体、选自dl、dla和dlb的降解决定子-接头。在其它实施方案中，降解决定子-接头选自dla1、dla2和dla3。在其它实施方案中，降解决定子-接头是dla1a或dla2a。在其它实施方案中，降解决定子-接头选自dl1至dl7。

在某些实施方案中，本申请的双功能化合物在治疗疾病或病症方面比靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)更有效，或者能够治疗对靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)具有抗性的疾病或病症，双功能化合物包含本文所述的接头和降解决定子以及选自hsp90抑制剂、激酶抑制剂、mdm2抑制剂、靶向含人bet溴结构域的蛋白的化合物、靶向胞质信号蛋白fkbp12的化合物、hdac抑制剂、人赖氨酸甲基转移酶抑制剂、血管生成抑制剂、免疫抑制化合物和靶向芳基烃受体(ahr)的化合物的靶向配体。在其它实施方案中，靶向配体是能够结合激酶、含bet溴结构域的蛋白、胞质信号蛋白(例如fkbp12)、核蛋白、组蛋白脱乙酰酶、赖氨酸甲基转移酶、调节血管生成的蛋白、调节免疫应答的蛋白、芳基烃受体(ahr)、雌激素受体、雄激素受体、糖皮质激素受体或转录因子(例如smarca4、smarca2、trim24)化合物。在其它实施方案中，靶向配体是能够结合含有bet溴结构域的蛋白或胞质信号蛋白的化合物。在其它实施方案中，靶向配体是式tl-1至tl-vii中的任一个。在其它实施方案中，靶向配体是式tl-i1、tl-i1a至tl-i1d、tl-i2、tl-i2a至tl-i2c、tl-i3、tl-i3a至tl-i3c、tl-ii1、tl-ii1a、tl-iii1至tl-iii3、tl-iv1和tl-v1中的任一个。在其它实施方案中、靶向配体是式tl-i1、tl-i1a至tl-i1d、tl-i2、tl-i2a至tl-i2c、tl-i3和tl-i3a至tl-13c中的任一个。在其它实施方案中，靶向配体选自tl1-tl7中的任一个。在其它实施方案中，靶向配体是tl2。在某些实施方案中，靶向配体选自表t。

在某些实施方案中，本申请的双功能化合物在治疗疾病或病症方面比靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)更有效，或者能够治疗对靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)具有抗性的疾病或病症，双功能化合物选自dbet1至dbet16、dgr1至dgr3、dfkbp1至dfkbp9。在其它实施方案中，双功能化合物选自dbet1至dbet16。在其它实施方案中，双功能化合物是dbet6。

在某些实施方案中，本申请的双功能化合物在治疗疾病或病症方面比靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)更有效，或者能够治疗对靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)具有抗性的疾病或病症，该双功能化合物比靶向配体更有效地抑制细胞(例如癌细胞)的生长或降低细胞(例如癌细胞)的活力。在某些实施方案中，双功能化合物以低于靶向配体用于抑制生长或降低细胞存活率的ic50的ic50抑制细胞(例如癌细胞)的生长或降低细胞(例如癌细胞)的活力。在某些实施方案中，双功能化合物的ic50至多为靶向配体的ic50的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、8％、5％、4％、3％、2％、1％、0.8％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，双功能化合物的ic50至多为靶向配体的ic50的50％、40％、30％、20％、10％、8％、5％、4％、3％、2％、1％、0.8％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，双功能化合物的ic50至多为靶向配体的ic50的30％、20％、10％、8％、5％、4％、3％、2％、1％、0.8％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，双功能化合物的ic50至多为靶向配体的ic50的10％、8％、5％、4％、3％、2％、1％、0.8％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，双功能化合物的ic50至多为靶向配体的ic50的5％、4％、3％、2％、1％、0.8％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，双功能化合物的ic50至多为靶向配体的ic50的2％、1％、0.8％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，双功能化合物的ic50至多为靶向配体的ic50的1％、0.8％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。在某些实施方案中，双功能化合物以小于靶向配体用于抑制细胞生长或降低细胞存活率的emax的emax抑制细胞(例如癌细胞)的生长或降低细胞(例如癌细胞)的活力。在某些实施方案中，双功能化合物的emax至多为靶向配体的emax的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、8％、5％、4％3％、2％或1％。在某些实施方案中，双功能化合物的emax至多为靶向配体的emax的50％、40％、30％、20％、10％、8％、5％、4％、3％、2％或1％。在某些实施方案中，双功能化合物的emax至多为靶向配体的emax的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％。在某些实施方案中，双功能化合物的emax至多为靶向配体的emax的90％、80％、70％、60％、50％、40％或30％。

在某些实施方案中，本申请的双功能化合物在治疗疾病或病症方面比靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)更有效，或者能够治疗对靶向配体(其共价结合于双功能化合物中的接头和降解决定子)具有抗性的疾病或病症，其中疾病或病症是癌症(例如本文所述的癌症)。在其它实施方案中，癌症选自膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、黑素瘤和神经母细胞瘤。在其它实施方案中，癌症选自乳腺癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、星形细胞瘤、淋巴瘤、黑素瘤和神经母细胞瘤。

前述化合物中的一些可以包含一个或多个不对称中心，因此可以以多种异构形式存在，例如立体异构体和/或非对映异构体。因此，本发明化合物及其药物组合物可以是单独的对映异构体、非对映异构体或几何异构体的形式，或者可以是立体异构体混合物的形式。在某些实施方案中，本申请的化合物是对映异构体纯的化合物。在某些其它实施方案中，提供了立体异构体或非对映异构体的混合物。

此外，如本文所述，某些化合物可以具有一个或多个双键，其可以作为z或e异构体存在，除非另有说明。本申请另外包括作为基本上不含其它异构体的单独异构体的化合物，或者作为多种异构体的混合物，例如立体异构体的外消旋混合物的化合物。除了上述化合物本身之外，本申请还包括这些化合物的药学上可接受的衍生物和包含一种或多种本申请化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂或添加剂的组合物。

本公开旨在包括存在于本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但质量数不同的那些原子。作为一般实例而非限制，氢的同位素包括氚和氘，碳的同位素包括c-13和c-14。例如，当在本文公开的任一式中的某个变量(例如，r2’、r3、r4和r5中的任一个)为h或氢时，其可以是氢或氘。

本申请的化合物可以通过化合物在不同条件下结晶来制备，并且可以作为形成本申请部分的化合物的多晶型物的一种或组合形式存在。例如，可以使用用于重结晶的不同溶剂或溶剂的不同混合物；通过在不同温度下进行结晶；或通过使用各种冷却模式，从结晶过程中的非常快速到非常缓慢的冷却；来鉴定和/或制备不同的多晶型物。也可以通过加热或熔化化合物，然后逐渐或快速冷却来获得多晶型物。多晶型物的存在可以通过固体探针nmr光谱、ir光谱、差示扫描量热法、粉末x射线衍射图和/或其它技术来确定。因此，本申请包括本发明化合物、其衍生物、其互变异构形式、其立体异构体、其多晶型物、其药学上可接受的盐、其药学上可接受的溶剂化物和含有它们的药学上可接受的组合物。

在某些实施方案中，本申请的化合物可用作抗癌剂，因此可用于通过进行肿瘤细胞死亡或抑制肿瘤细胞生长治疗癌症。在某些示例性实施方案中，所公开的抗癌剂可用于治疗癌症和其它增殖性疾病，包括但不限于乳腺癌，宫颈癌，结直肠癌，白血病，肺癌，黑素瘤，多发性骨髓瘤，非霍奇金淋巴瘤，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌，胃癌，白血病(例如骨髓性白血病、淋巴细胞性白血病、骨髓细胞性白血病和淋巴细胞性白血病)、恶性黑素瘤、t细胞淋巴瘤。

本申请化合物的合成

用于制备本申请的双功能化合物的示例性合成方案如下所示。

在本申请的一个方面，提供了合成某些化合物的降解决定子-接头部分母核结构的方法，该方法包括以下步骤：

a)在合适的条件下使(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯或其类似物(如n＝1-20)(1)与氯乙酰氯反应，生成(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯或其类似物(例如n＝1-20)(2)；

b)在合适的条件下使(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯或其类似物(2)与3-羟基邻苯二甲酸二甲酯反应，得到3-(2-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)氨基)-2-氧代乙氧基)邻苯二甲酸二甲酯或其类似物(3)；

c)使3-(2-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)氨基)-2-氧代乙氧基)邻苯二甲酸二甲酯或其类似物(3)与强碱反应，然后与3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐反应，生成(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯或其类似物(4)；

d)使化合物(4)脱保护，得到二氨基乙基-乙酰基-o-沙利度胺三氟乙酸盐或其类似物(5)。

二氨基丁基-乙酰基-o-沙利度胺三氟乙酸盐可按照fischeretal.nature,2014,512,49-53的方法制备。

在本申请的另一方面，提供了合成示例性双功能化合物的方法，该方法包括使降解决定子-接头部分例如化合物(5)与靶配体r的酸衍生物-化合物(6)在合适的条件下反应，得到双功能化合物(7)。

本领域技术人员将认识到，基于该教导和本领域已知的那些教导，其可以制备本申请的任何化合物。

在本申请的另一方面，提供了可用于制备本申请的某些化合物的中间体的方法。

在本申请的某些方面，降解决定子-接头中间体可以按照以下步骤制备：

dl5：

dl6:

dl7:

在本申请的其它方面，双功能化合物dbet1-dbet6可以使用靶向溴结构域的部分根据以下方案制备：

dbet1:

dbet2:

dbet3:

dbet4:

dbet5:

dbet6:

在本申请的其它方面，双功能化合物dgr1和dgr2可以使用tl4靶部分(地塞米松)根据以下方案制备：

dgr1：

dgr2：

在本公开的其它实施方案中，双功能化合物dfkbp-1和dfkbp-2可以使用tl5靶部分(ap1479)根据上述一般方法制备，如以下方案所示：

dfkbp-1：

dfkbp-2：

合成氨基酸-沙利度胺接头的方案

(1)

(2)

(3)

(4)

(5)

(6)

(7)

在某些实施方案中，上述方法在溶液相中进行。在某些其它实施方案中，上述方法在固相上进行。在某些实施方案中，合成方法适于高通量技术或通常用于组合化学中的技术。

药物组合物

因此，在本申请的另一方面，提供了包含本文所述的任何一种化合物(或其前药、药学上可接受的盐或其它药学上可接受的衍生物)，并且任选地包含药学上可接受的载体的药物组合物。在某些实施方案中，这些组合物任选地还包含一种或多种附加治疗剂。或者，本申请的化合物可以与一种或多种其它治疗剂组合施用于有需要的患者。例如，用于联合施用或与本申请的化合物包含在的药物组合物中的附加治疗剂可以是例如经批准的化学治疗剂，或者可以是经食品和药品管理局批准的，最终被批准用于治疗与细胞过度增殖相关的任何病症许多试剂中的任何一种。在某些其它实施方案中，附加治疗剂是抗癌剂，如本文更详细地讨论的。

还应当理解，本申请的某些化合物可以以游离形式存在用于治疗，或在适当情况下可以其药学上可接受的衍生物存在。根据本申请，药学上可接受的衍生物包括但不限于药学上可接受的盐、酯、这些酯的盐，或本申请化合物的前药或其它加合物或衍生物，一旦将其施用至有需要的患者即能够直接或间接地提供本文另外描述的化合物或其代谢物或残基。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断的范围内适合用于与人类和低等动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的利益/风险比相称的那些盐。胺、羧酸和其它类型化合物的药学上可接受的盐是本领域公知的。例如，s.m.berge等人在jpharmaceuticalsciences，66：1-19(1977)中详细描述了药学上可接受的盐，其通过引用并入本文。盐可以在最终分离和纯化本申请化合物的过程中原位制备，或者通过使游离碱或游离酸官能团与合适的试剂反应来分别制备，如下文所述。例如，游离碱官能团可以与合适的酸反应。此外，当本申请化合物携带酸性部分时，其合适的药学上可接受的盐可以包括金属盐，例如碱金属盐，如钠盐或钾盐；和碱土金属盐，如钙盐或镁盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是与无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或与有机酸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸或通过使用本领域中使用的其它方法如离子交换形成的氨基的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊基丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。其它药学上可接受的盐包括适当时使用抗衡离子如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐形成的无毒的铵、季铵和胺阳离子。

另外，如本文所用，术语“药学上可接受的酯”是指在体内水解并包括容易在人体中分解以留下母体化合物或其盐的那些酯。合适的酯基包括例如衍生自药学上可接受的脂族羧酸、特别是链烷酸、链烯酸、环烷酸和链烷二酸的那些，其中每个烷基或链烯基有利地具有不超过6个碳原子。特定酯的实例包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯。

此外，本文所用的术语“药学上可接受的前药”是指在适当的医学判断范围内适用于与人类和低等动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的利益/风险比相称，并且对其预期用途有效的本申请化合物的那些前药，以及可能情况下本申请化合物的两性离子形式。术语“前药”是指在体内快速转化以产生上式的母体化合物的化合物，例如通过血液中的水解。t.higuchi和v.stella，pro-drugsasnoveldeliverysystems，thea.c.s.symposiumseries第14卷和edwardb.roche编写的bioreversiblecarriersindrugdesign,americanpharmaceuticalassociationandpergamonpress,1987中提供了全面的讨论，两者均通过引用并入本文。

如上所述，本申请的药物组合物另外包含药学上可接受的载体，如本文所用，载体包括任何和所有溶剂、稀释剂或其它液体载剂、分散体或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等，其适合于所需的具体剂型。remington'spharmaceuticalsciences，第16版，e.w.martin(mackpublishingco.,easton,pa.,1980)公开了用于配制药物组合物的各种载体以及用于制备其的已知技术。除了与本申请化合物不相容的任何常规载体介质之外，例如产生任何不希望的生物效应或以有害方式与药物组合物的任何其它组分相互作用，其使用预期在本应用的范围内。可以用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括但不限于糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油类，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇类，如丙二醇；酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格溶液；乙醇；和磷酸盐缓冲溶液，以及其它无毒相容的润滑剂如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁；并且着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以根据配制师的判断存在于组合物中。

用于口服给药的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳剂、微乳液、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型可以含有本领域通常使用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄基醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯以及它们的混合物。除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包括佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。

可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液，可根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。无菌可注射制剂也可以是无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如1,3-丁二醇溶液。可以使用的可接受的载剂和溶剂是水、林格溶液、u.s.p.和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸用于制备注射剂。

可注射制剂可以例如通过细菌保持过滤器过滤，或通过将无菌固体组合物形式的灭菌剂并入进行灭菌，灭菌剂在使用前可溶解或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中。

为了延长药物的效果，通常期望减缓皮下或肌内注射药物的吸收。这可以通过使用具有差的水溶性的液体悬浮液或结晶或无定形材料来实现。然后药物的吸收速率取决于其溶解速率，溶解速率又取决于晶体尺寸和结晶形式。或者，肠胃外给药的药物形式的延迟吸收通过将药物溶解或悬浮在油性载剂中来实现。通过在可生物降解的聚合物例如聚丙交酯-聚乙交酯中形成药物的微胶囊基质来制备可注射的贮库形式。取决于药物与聚合物的比例和所用特定聚合物的性质，可以控制药物释放速率。其它可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。贮库型注射制剂也通过将药物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。

用于直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂，其可以通过将本申请的化合物与合适的无刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，该赋形剂或载体在环境温度下为固体但体温下为液体，因此在直肠或阴道腔中熔化并释放活性化合物。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这种固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合，a)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂，如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂如甘油，d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶剂阻滞剂如石蜡，f)吸收促进剂如季铵化合物，g)润湿剂，如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，如高岭土和膨润土，以及i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。

类似类型的固体组合物也可用作软和硬填充的明胶胶囊中的填充剂，其使用诸如乳糖或牛奶糖(milksugar)以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和壳制备，例如肠溶包衣和药物制剂领域众所周知的其它包衣。它们可以任选地含有遮光剂，并且还可以是仅在或优选在肠道的某一部分中任选地以延迟的方式释放活性成分的组合物。

可以使用的嵌入组合物的实例包括聚合物质和蜡。类似类型的固体组合物也可用作软和硬填充的明胶胶囊中的填充剂，其使用诸如乳糖或牛奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂。

活性化合物也可以是与一种或多种如上所述赋形剂的微胶囊形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和壳制备，例如肠溶衣、控释包衣和药物制剂领域众所周知的其它包衣。在这种固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂如蔗糖、乳糖和淀粉混合。如在正常实践中，这样的剂型还可以包含除惰性稀释剂之外的其它物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。它们可以任选地含有遮光剂，并且还可以是仅在或优选在肠道的某一部分中任选地以延迟的方式释放活性成分的组合物。可以使用的嵌入组合物的实例包括聚合物质和蜡。

本申请包括本发明化合物的药学上可接受的局部制剂。本文所用的术语“药学上可接受的局部制剂”是指通过将制剂施用于表皮来皮肤内施用本申请化合物的药学上可接受的任何制剂。在本申请的某些实施方案中，局部制剂包含载体系统。药学上有效的载体包括但不限于溶剂(例如醇、多元醇、水)、乳膏、洗剂、软膏、油、膏药、脂质体、粉末、乳液、微乳液和缓冲溶液(例如低渗或缓冲盐水)或本领域已知的用于局部给药的任何其它载体。本领域知名载体的更完整列表由本领域标准的参考文献提供，例如remington'spharmaceuticalsciences，第16版，1980和第17版，1985，由mackpublishingcompany，easton，pa.出版，其公开内容通过引用整体并入本文。在某些其它实施方案中，本申请的局部制剂可以包含赋形剂。本领域已知的任何药学上可接受的赋形剂可用于制备本发明的药学上可接受的局部制剂。可以包括在本申请的局部制剂中的赋形剂的实例包括但不限于防腐剂、抗氧化剂、保湿剂、润肤剂、缓冲剂、增溶剂、其它渗透剂、皮肤保护剂、表面活性剂和推进剂和/或与本发明化合物组合使用的附加治疗剂。合适的防腐剂包括但不限于醇类、季胺类、有机酸类、对羟基苯甲酸酯类和酚类。合适的抗氧化剂包括但不限于抗坏血酸及其酯、亚硫酸氢钠、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基苯甲醚、生育酚以及螯合剂如edta和柠檬酸。合适的保湿剂包括但不限于甘油、山梨糖醇、聚乙二醇、尿素和丙二醇。适用于本申请的缓冲剂包括但不限于柠檬酸、盐酸和乳酸缓冲剂。合适的增溶剂包括但不限于季铵氯化物、环糊精、苯甲酸苄酯、卵磷脂和聚山梨醇酯。可用于本申请的局部制剂中的合适的皮肤保护剂包括但不限于维生素e油、尿囊素、聚二甲基硅氧烷、甘油、凡士林和氧化锌。

在某些实施方案中，本申请的药学上可接受的局部制剂至少包含本申请的化合物和渗透增强剂。局部制剂的选择将取决于几个因素，包括待治疗的病症、本发明化合物和存在的其它赋形剂的物理化学特性、其在制剂中的稳定性、可用的制造设备和成本限制。如本文所用，术语“渗透增强剂”是指能够通过角质层输送药理学活性化合物并进入表皮或真皮的试剂，优选很少或没有全身吸收的试剂。已经评估了各种化合物在提高药物通过皮肤的渗透速率方面的有效性。参见例如，percutaneouspenetrationenhancers,maibachh.i.andsmithh.e.(eds.),crcpress,inc.,bocaraton,fla.(1995)，其调查各种皮肤渗透增强剂的使用和测试，和buyuktimkinetal.,chemicalmeansoftransdermaldrugpermeationenhancementintransdermalandtopicaldrugdeliverysystems,gosht.k.,pfisterw.r.,yums.i.(eds.),interpharmpressinc.,buffalogrove,ill.(1997)。在某些示例性实施方案中，用于本申请的渗透剂包括但不限于甘油三酯(例如大豆油)、芦荟组合物(例如芦荟凝胶)、乙醇、异丙醇、八聚苯基聚乙二醇、油酸、聚乙二醇400、丙二醇、n-癸基甲基亚砜、脂肪酸酯(例如肉豆蔻酸异丙酯、月桂酸甲酯、甘油单油酸酯和丙二醇单油酸酯)和n-甲基吡咯烷酮。

在某些实施方案中，组合物可以是软膏、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液剂、喷雾剂、吸入剂或贴剂的形式。在某些示例性实施方案中，根据本申请的组合物的制剂是可以进一步含有饱和或不饱和脂肪酸如硬脂酸、棕榈酸、油酸、棕榈油酸、鲸蜡醇或油醇的乳膏剂，特别优选硬脂酸。本申请的乳膏可以含有非离子表面活性剂，例如聚氧-4-硬脂酸酯。在某些实施方案中，将活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载体和视需要的任何需要的防腐剂或缓冲剂混合。眼用制剂、滴耳剂和滴眼剂也被认为在本申请的范围内。此外，本申请考虑使用透皮贴剂，其具有将化合物控制递送至身体的附加优点。这样的剂型通过将化合物溶解或分散在合适的介质中来制备。如上所述，渗透增强剂也可用于增加化合物通过皮肤的通量。速率可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制。

还应当理解，本申请的化合物和药物组合物可以配制并用于组合疗法，即化合物和药物组合物可以与一种或多种期望的治疗剂或医疗程序配制或同时、在其之前或之后施用。在组合方案中使用的疗法(治疗剂或过程)的特定组合将考虑所需治疗剂和/或过程的相容性和待实现的期望治疗效果。还应当理解，所用的疗法可以实现相同病症的期望效果(例如，本发明化合物可以与另一免疫调节剂或抗癌剂同时施用，或者它们可以实现不同的效果(例如，控制任何不良反应)。

例如，可以与本申请的化合物组合使用的其它疗法或抗癌剂包括手术、放射治疗、内分泌治疗、生物反应调节剂(干扰素、白细胞介素和肿瘤坏死因子(tnf)等))、过高热和冷冻疗法、减轻任何不良反应药剂(如止吐药)和其它经批准的化疗药物，包括但不限于烷基化药物(氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、美法仑、异环磷酰胺)、抗代谢物(甲氨蝶呤)、嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(6-巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨)、纺锤体抑制剂(长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇)、鬼臼毒素(依托泊苷、伊立替康、托泊替康)、抗生素(多柔比星、博来霉素、丝裂霉素)、亚硝基脲(卡莫司汀、洛莫司汀)、无机离子(顺铂、卡铂)、酶(天冬酰胺酶)和激素(他莫昔芬、亮丙瑞林、氟他胺、恩美罗酮)等。有关更新的癌症治疗的更全面的讨论，请参见themerckmanual，第十七版，1999，其全部内容通过引用并入本文。另见国家癌症研究所(cni)网站(www.nci.nih.gov)和食品和药品管理局(fda)网站列出的fda批准的肿瘤药物清单(www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe)。

在某些实施方案中，本申请的药物组合物还包含一种或多种另外的治疗活性成分(例如化学治疗和/或姑息治疗)。用于本申请的目的，术语“姑息治疗”是指专注于缓解疾病症状和/或治疗方案的副作用的治疗，但不是治愈性的。例如，姑息治疗包括止痛药、抗心律失常药物和抗病药物。此外，化疗、放射治疗和手术都可以姑息治疗性(即减少症状而不治愈，例如缩小肿瘤、降低压力、出血、疼痛和其它癌症症状)使用。

此外，本申请提供本发明化合物的药学上可接受的衍生物，以及使用这些化合物、其药物组合物或这些中的任一种与一种或多种附加治疗剂组合治疗个体的方法。

还应当理解，本申请的某些化合物可以以游离形式存在用于治疗，或在适当情况下可以作为其药学上可接受的衍生物存在。根据本申请，药学上可接受的衍生物包括但不限于药学上可接受的盐、酯、这些酯的盐或本申请化合物的前药或其它加合物或衍生物，其在给予至有需要的患者时能够直接或间接地提供本文另外描述的化合物或其代谢物或残基。

治疗方法

通常，使用本申请的化合物的方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的本申请的化合物。本申请的化合物通常是靶蛋白降解的诱导剂。

在某些实施方案中，本申请的化合物可用于治疗增殖性疾病(例如癌症、良性肿瘤、炎性疾病和自身免疫性疾病)。在某些实施方案中，根据本申请的治疗方法，调节感兴趣的细胞蛋白例如致病性和致癌性蛋白的水平，或通过使所述细胞与本文所述的本发明化合物或组合物接触来抑制其生长。在其它实施方案中，所述化合物可用于治疗癌症。在某些实施方案中，如本文所述，增殖性疾病(例如癌症、良性肿瘤、炎性疾病和自身免疫性疾病)对用本文所述的靶向配体进行治疗具有抗性。

如本文所用，“对靶向配体具有抗性”、“抗靶向配体”或“靶向配体抗性”意味着疾病或病症不能被靶向配体治疗。例如，靶向配体不能防止疾病或病症恶化，或减轻或减少疾病或病症的一种或多种症状，或改善患有该疾病或病症的患者的生活质量。例如，靶向配体不能减少或抑制靶细胞(例如癌细胞)的生长或增殖或诱导靶细胞(例如癌细胞)的死亡。例如，靶向配体不能诱导靶(例如癌细胞)中靶蛋白的降解。在另一个实施例中，靶向配体可以仅在高浓度(例如，高于非抗性疾病或病症中靶向配体所需的浓度的浓度(例如至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、150倍、200倍、或500倍以上))防止疾病或病症恶化，或减轻或减少疾病或病症的一种或多种症状，或改善患有该疾病或病症的患者的生活质量，或减少或抑制靶细胞(例如癌细胞)的生长或增殖，或诱导靶细胞(例如癌细胞)的死亡，或诱导靶(例如癌细胞)中靶蛋白的降解。在另一个实施例中，靶向配体可以仅以高浓度(例如，高于本申请的双功能化合物的浓度(例如至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、150倍、200倍或500倍以上))防止疾病或病症恶化，或减轻或减少疾病或病症的一种或多种症状，或改善患有该疾病或病症的患者的生活质量，或减少或抑制靶细胞(例如癌细胞)的生长或增殖，或诱导靶细胞(例如癌细胞)的死亡，或诱导靶(例如癌细胞)中靶蛋白的降解。

因此，在本申请的另一方面，提供了治疗癌症的方法，包括向有需要的个体施用治疗有效量的本文所述的本发明化合物。在某些实施方案中，提供了一种用于治疗癌症的方法，包括给予有需要的个体治疗有效量的本发明化合物或包含本发明化合物的药物组合物，其量和时间需要用以达到理想的效果。优选地，本申请的化合物经口或静脉内给药。在本申请的某些实施方案中，本发明化合物或药物组合物的“治疗有效量”是有效杀死或抑制肿瘤细胞生长的量。根据本申请的方法的化合物和组合物可以使用有效杀死或抑制肿瘤细胞生长的任何量和任何给药途径施用。因此，如本文所用的表述“有效杀死或抑制肿瘤细胞生长的量”是指足够杀死或抑制肿瘤细胞生长的药剂的量。根据个体的物种、年龄和一般状况、感染的严重程度、特定抗癌剂、其给药方式等，所需的精确量将根据个体而变化。在本申请的某些实施方案中，本发明化合物或药物组合物的“治疗有效量”是有效降低靶蛋白水平的量。在本申请的某些实施方案中，化合物或药物组合物的“治疗有效量”是有效杀死或抑制皮肤细胞生长的量。

在某些实施方案中，该方法涉及将治疗有效量的化合物或其药学上可接受的衍生物施用于需要其的个体(包括但不限于人或动物)。在某些实施方案中，可用于治疗癌症的双功能化合物(包括但不限于胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、白血病、淋巴瘤、肺癌(包括但不限于小细胞肺癌)、黑素瘤和/或皮肤癌、多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和胃癌、膀胱癌、子宫癌、肾癌、睾丸癌、胃癌、脑癌、肝癌或食管癌。

在某些实施方案中，本发明的抗癌剂可用于治疗癌症和其它增殖性疾病，包括但不限于乳腺癌，宫颈癌，结直肠癌，白血病，肺癌，黑素瘤，多发性骨髓瘤，非霍奇金淋巴瘤，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌和胃癌。在某些实施方案中，本发明的抗癌剂对实体瘤具有活性。

在某些实施方案中，本发明化合物还可用于预防受创伤如血管成形术和支架置入术的血管再狭窄。例如，考虑到本申请的化合物可用作植入医疗装置的涂层，例如管、分流器、导管、人造植入物、针、诸如起搏器的电植入物，特别是用于动脉或静脉支架，包括气囊扩张支架。在某些实施方案中，本发明的化合物可以结合到可植入医疗装置，或者可替代地，可被动吸附到可植入装置的表面。在某些其它实施方案中，本发明化合物可以配制成包含在外科或医疗装置或植入物例如支架、缝合线、留置导管、假体等中，或适合于通过外科或医疗装置或植入物释放。例如，具有抗增殖和抗炎活性的药物已经被评估为支架涂层，并且已经显示出预防视网膜病变的前景(参见例如，presbiterop.etal.,"drugelutingstentsdotheymakethedifference？",minervacardioangiol,2002,50(5):431-442；ruygrokp.n.etal.,"rapamycinincardiovascularmedicine",intern.med.j.,2003,33(3):103-109；andmarxs.o.etal.,"benchtobedside:thedevelopmentofrapamycinanditsapplicationtostentrestenosis",circulation,2001,104(8):852-855，这些参考文献的全部内容通过引用并入本文)。因此，不希望受任何特定理论的束缚，申请人提出具有抗增殖作用的本发明化合物可用作支架涂层和/或支用于架药物递送装置内，尤其用于预防再狭窄或再狭窄率的降低。美国专利第6,099,562、5,886,026和5,304,121号中描述了合适的涂层和涂覆的可植入装置的一般制备方法。涂层通常是生物相容的聚合材料，例如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯乙酸乙烯酯以及它们的混合物。涂层可以任选地被合适的氟硅氧烷、多糖、聚乙二醇、磷脂或其组合的外涂层覆盖，以赋予组合物中的控释特性。涉及用于预防再狭窄的支架涂层和/或局部支架药物递送的各种组合物和方法是本领域已知的(参见例如美国专利6,517,889；6,273,913；6,258,121；6,251,136；6,248,127；6,231,600；6,203,551；6,153,252；6,071,305；5,891,507；5,837,313和公开的美国专利申请us2001/0027340，其各自通过引用整体并入本文)。例如，支架可以通过将支架浸入聚合物药物溶液中或用这种溶液喷涂支架来涂覆聚合物-药物偶联物。在某些实施方案中，用于可植入装置的合适材料包括生物相容性和无毒性材料，并且可以选自金属如镍-钛合金、钢或生物相容性聚合物、水凝胶、聚氨酯、聚乙烯、乙烯乙酸乙烯酯共聚物等。在某些实施方案中，将本发明化合物涂覆在支架上用于在气囊血管成形术后插入动脉或静脉。

本申请的化合物或其药学上可接受的组合物也可以掺入用于涂覆可植入医疗装置的组合物，可植入医疗装置例如假体、人造瓣膜、血管移植物、支架和导管。因此，本申请在另一方面包括用于涂覆可植入装置的组合物，其包含如上文一般性描述的以及本文的类别和亚类的本申请的化合物，以及适用于涂覆所述可植入装置的载体。在另一方面，本申请包括一种可植入装置，其涂覆有包含如上文一般描述的以及本文的类别和亚类的本申请的化合物和适用于涂覆所述可植入装置的载体。

此外，本申请提供本发明化合物的药学上可接受的衍生物，以及使用这些化合物、其药物组合物或这些中的任一种与一种或多种附加治疗剂组合治疗个体的方法。

本申请的另一方面涉及治疗或减轻与患者的增殖病症相关的疾病或病症的严重性的方法，所述方法包括向所述患者施用式i化合物或包含所述化合物的组合物。

应当理解，根据本申请方法的化合物和组合物可以使用有效治疗与细胞过度增殖相关的癌症和/或病症的任何量和任何施用途径来施用。例如，当使用本发明化合物治疗癌症时，如本文所用的表述“有效量”是指足以抑制细胞增殖的药剂的量，或指足以减少癌症效果的量。所需的确切量将根据个体的物种、年龄和一般状况、疾病的严重程度、特定的抗癌剂、其施用方式等随个体变化。

本申请的化合物优选以剂量单位形式配制，以方便给药和均匀给药。本文所用的表述“剂量单位形式”是指适合于待治疗患者的物理上离散的治疗剂单位。然而，应当理解，本申请的化合物和组合物的总日用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。任何特定患者或生物体的特定治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所用具体化合物的活性；所用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食习惯；给药时间、给药途径和使用的具体化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所使用的具体化合物组合或巧合使用的药物；和医学领域众所周知的类似因素(参见例如goodmanandgilman's,"thepharmacologicalbasisoftherapeutics",tenthedition,a.gilman,j.hardmanandl.limbird,eds.,mcgraw-hillpress,155-173,2001，其全部内容通过引用并入本文)。

此外，在用适当的药学上可接受的载体以所需剂量配制后，本申请的药物组合物可以口服、直肠、胃肠外、体内、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉末、软膏、乳膏剂或滴剂)、颊、作为口服或鼻喷雾剂等施用于个体和其它动物，这取决于所治疗的感染的严重程度。在某些实施方案中，本申请的化合物可以每天约0.001mg/kg至约50mg/kg，约0.01mg/kg至约25mg/kg或约0.1mg/kg至约10mg/kg个体体重的剂量水平施用，每天一次或多次，以获得所需的治疗效果。还应当理解，可以向个体施用小于0.001mg/kg或大于50mg/kg(例如50-100mg/kg)的剂量。在某些实施方案中，化合物经口或肠胃外给药。

本申请提供了通过对需要这种治疗的个体施用治疗有效量的本申请的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂合物用于治疗细胞增生性病症的方法。细胞增生性紊乱可以是癌症或癌前病症。本申请还提供了本申请的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物在制备用于治疗细胞增生性紊乱的药物中的用途。

本申请还提供了通过向需要这种治疗的个体施用治疗有效量的本申请的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂合物来保护个体免受细胞增生性紊乱的方法。细胞增生性紊乱可以是癌症或癌前病症。本申请还提供了本申请的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物在制备用于预防细胞增生性紊乱的药物中的用途。

如本文所用，“有需要的个体”是具有细胞增生性紊乱的个体或相对于整个群体具有增加的发展细胞增生性紊乱的风险的个体。有需要的个体可以具有癌前病症。优选地，有需要的个体具有癌症。“个体”包括哺乳动物。哺乳动物可以是例如任何哺乳动物，例如人、灵长类、鸟、小鼠、大鼠、家禽、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。优选地，哺乳动物是人。

如本文所用，术语“细胞增生性紊乱”是指细胞的未受调节的或异常的生长或两者都可能导致不想要的病症或疾病的发展的病症，其可能是癌性的或可能不是癌性的。本申请的示例性细胞增生性紊乱包括细胞分裂失调的多种病症。示例性的细胞增生性紊乱包括但不限于肿瘤、良性肿瘤、恶性肿瘤、癌前病症、原位肿瘤、包封的肿瘤、转移性肿瘤、液体肿瘤、实体瘤、免疫肿瘤、血液肿瘤、癌症、癌性疾病、白血病、淋巴瘤、肉瘤和快速分裂的细胞。本文所用的术语“快速分裂的细胞”定义为以超过或大于在相同组织内相邻或并置的细胞中预期或观察到的速率分裂的任何细胞。细胞增生性紊乱包括初癌或癌前病症。细胞增生性紊乱包括癌症。优选地，本文提供的方法用于治疗或缓解癌症的症状。术语“癌症”包括实体瘤，以及血液肿瘤和/或恶性肿瘤。“初癌细胞”或“癌前细胞”是表现为初癌或癌前病症的细胞增生性紊乱的细胞。“癌细胞”或“癌性细胞”是表现为癌症的细胞增生性紊乱的细胞。任何可重复的测量方法可用于鉴定癌细胞或癌前细胞。癌细胞或癌前细胞可以通过组织样品(例如活组织检查样品)的组织学分型或分级来鉴定。可以通过使用合适的分子标记物来鉴定癌细胞或癌前细胞。

示例性的非癌性病症或紊乱包括但不限于：类风湿性关节炎；炎症；自身免疫性疾病；淋巴组织增生病；肢端肥大症；类风湿性脊椎炎；骨关节炎；痛风，其它关节炎病症；败血症；败血性休克；内毒素性休克；革兰氏阴性败血症；中毒性休克综合征；哮喘；成人呼吸窘迫综合征；慢性阻塞性肺疾病；慢性肺部炎症；炎性肠病；克罗恩病；银屑病；湿疹；溃疡性结肠炎；胰腺纤维化；肝纤维化；急性和慢性肾脏疾病；过敏性肠综合征；胃灼热；再狭窄；脑疟疾；中风和缺血性损伤；神经创伤；阿尔茨海默氏病；亨廷顿氏病；帕金森病；急性和慢性疼痛；过敏性鼻炎；过敏性结膜炎；慢性心力衰竭；急性冠状动脉综合征；恶病质；疟疾；麻风；利什曼病；莱姆病；赖特综合征；急性滑膜炎；肌肉变性，滑囊炎；肌腱炎；腱鞘炎；椎间盘突出症，破裂或脱垂椎间盘综合征；石骨症；血栓形成；再狭窄；矽肺；肺麻痹；骨吸收疾病，如骨质疏松症；移植物抗宿主反应；多发性硬化症；狼疮；纤维肌痛；艾滋病和其它病毒性疾病，如带状疱疹、单纯疱疹病毒i或ii型；流感病毒和巨细胞病毒；和糖尿病。

示例性癌症包括但不限于：肾上腺皮质癌；aids相关癌症；aids相关淋巴瘤；肛门癌；肛门直肠癌；肛管癌；阑尾癌；儿童小脑星形细胞瘤；儿童脑星形细胞瘤；基底细胞癌；皮肤癌(非黑色素瘤)；胆道癌；肝外胆管癌；肝内胆管癌；膀胱癌；尿管膀胱癌；骨和关节癌；骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤；脑癌；脑肿瘤；脑干胶质瘤；小脑星形细胞瘤；脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤；室管膜瘤；成神经管细胞瘤；上皮原始神经细胞肿瘤；视觉通路和下丘脑神经胶质瘤；乳腺癌；支气管腺瘤/类癌；类癌肿瘤；胃肠道癌；神经系统癌症；神经系统淋巴瘤；中枢神经系统癌症；中枢神经系统淋巴瘤；子宫颈癌；儿童期癌症；慢性淋巴细胞性白血病；慢性髓细胞性白血病；慢性骨髓增生性紊乱；结肠癌；结直肠癌；皮肤t细胞淋巴瘤；淋巴样肿瘤；蕈样霉菌病；seziary综合征；子宫内膜癌；食管癌；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；眼癌；眼内黑素瘤；成视网膜细胞瘤；胆囊癌；胃癌；胃肠道类癌瘤；胃肠道间质瘤(gist)；生殖细胞肿瘤；卵巢生殖细胞肿瘤；妊娠滋养细胞瘤胶质瘤；头颈癌；肝细胞癌(肝癌)；霍奇金淋巴瘤；下咽癌；眼内胎记瘤；眼癌；胰岛细胞肿瘤(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤；肾癌；肾脏癌；肾癌；喉癌；急性淋巴细胞性白血病；急性髓细胞性白血病；慢性淋巴细胞白血病；慢性髓细胞性白血病；毛细胞白血病；唇和口腔癌；肝癌；肺癌；非小细胞肺癌；小细胞肺癌；aids相关淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；waldenstram巨球蛋白血症；成神经管细胞瘤；黑素瘤；眼内(眼睛)黑素瘤；梅克尔细胞癌；恶性间皮瘤；间皮瘤；转移性鳞状细胞癌颈癌；口腔癌；舌癌；多发性内分泌肿瘤综合征；蕈样真菌病；骨髓增生异常综合征；骨髓增生异常/骨髓增生性疾病；慢性髓细胞性白血病；急性髓细胞性白血病；多发性骨髓瘤；慢性骨髓增生性紊乱；鼻咽癌；成神经细胞瘤；口癌；口腔癌；口咽癌；卵巢癌；卵巢上皮癌；卵巢低恶性潜在肿瘤；胰腺癌；胰岛细胞胰腺癌；鼻旁窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；松质细胞瘤和上皮原始神经外胚层肿瘤；垂体肿瘤；浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺母细胞瘤；前列腺癌；直肠癌；肾盂和输尿管癌；移行细胞癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤；唾液腺癌；肉瘤肿瘤尤因家族；卡波西肉瘤；软组织肉瘤；子宫癌；子宫肉瘤；皮肤癌(非黑色素瘤)；皮肤癌(黑素瘤)；梅克尔细胞皮肤癌；小肠癌；软组织肉瘤；鳞状细胞癌；胃癌；上皮原始神经外胚层肿瘤；睾丸癌；咽喉癌；胸腺瘤和胸腺癌；甲状腺癌；肾盂和输尿管及其它泌尿器官的移行细胞癌；妊娠滋养细胞肿瘤；尿道癌；子宫内膜子宫癌；子宫肉瘤；子宫宫体癌；阴道癌；外阴癌和威尔姆氏肿瘤。

“血液系统的细胞增生性紊乱”是涉及血液系统细胞的细胞增生性紊乱。血液系统的细胞增生性紊乱可以包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤、肥大细胞肿瘤、骨髓发育不良、良性单克隆丙种球蛋白病、淋巴瘤样肉芽肿病、淋巴瘤样丘疹病、真性红细胞增多症、慢性髓细胞性白血病、特发性髓样化生和原发性血小板增多症。血液系统的细胞增生性紊乱可以包括血液系统细胞的增生、发育异常和化生。优选地，本申请的组合物可用于治疗选自本申请的血液学癌症或本申请的血液细胞增生性紊乱的癌症。本申请的血液学癌症可以包括多发性骨髓瘤、淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、儿童淋巴瘤以及淋巴细胞和皮肤起源的淋巴瘤)、白血病(包括儿童白血病、毛细胞白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病和肥大细胞白血病)、骨髓瘤和肥大细胞肿瘤。

“肺细胞增生性紊乱”是涉及肺细胞的细胞增生性紊乱。肺细胞增生性紊乱可以包括影响肺细胞的所有形式的细胞增生性紊乱。肺细胞增生性紊乱可以包括肺癌、肺的前期癌症或癌前病症、肺的良性生长或病变、肺的恶性生长或病变、以及肺以外的身体组织和器官中的转移性病变。优选地，本申请的组合物可用于治疗肺癌或肺细胞增生性紊乱。肺癌可以包括肺的所有形式的癌症。肺癌可以包括恶性肺肿瘤、原位癌、典型类癌、非典型类癌。肺癌可以包括小细胞肺癌(“sclc”)、非小细胞肺癌(“nsclc”)、鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌、大细胞癌、腺鳞状细胞癌和间皮瘤。肺癌可以包括“瘢痕癌”、支气管肺泡癌、巨细胞癌、纺锤细胞癌和大细胞神经内分泌癌。肺癌可以包括具有组织学和超微结构异质性(例如混合细胞类型)的肺肿瘤。

肺细胞增生性紊乱可以包括影响肺细胞的所有形式的细胞增生性紊乱。肺细胞增生性紊乱可以包括肺癌、肺的癌前病症。肺细胞增生性紊乱可以包括肺的增生、化生和发育不良。肺细胞增生性紊乱可以包括石棉诱导的增生、鳞状化生和良性反应性间皮化生。肺细胞增生性紊乱可以包括用层状鳞状上皮代替柱状上皮，和粘膜发育不良。暴露于吸入性有害环境因素(如香烟烟雾和石棉)的个体可能面临发展肺细胞增生性紊乱的风险增加。可能使个体易于发展肺细胞增生性紊乱的先前的肺部疾病可包括慢性间质性肺病、坏死性肺病、硬皮病、类风湿病、结节病、间质性肺炎、结核病、复发性肺炎、特发性肺纤维化、肉芽肿、石棉沉滞症、纤维化肺泡炎和霍奇金病。

“结肠细胞增生性紊乱”是涉及结肠细胞的细胞增生性紊乱。优选地，结肠细胞增生性紊乱是结肠癌。优选地，本申请的组合物可用于治疗结肠癌或结肠细胞增生性紊乱。结肠癌可以包括结肠癌症的各种形式。结肠癌可以包括分散性和遗传性结肠癌。结肠癌可以包括恶性结肠肿瘤、原位癌、典型类癌肿瘤和非典型类癌肿瘤。结肠癌可以包括腺癌、鳞状细胞癌和腺鳞状细胞癌。结肠癌可以与选自由遗传性非息肉性结直肠癌、家族性腺瘤性息肉病、gardner综合征、peutz-jeghers综合征、turcot综合征和少年性息肉病组成的组的遗传性综合征相关。结肠癌可以由选自由遗传性非息肉性结肠直肠癌、家族性腺瘤性息肉病、gardner综合征、peutz-jeghers综合征、turcot综合征和少年性息肉病组成的组的遗传性综合征引起。

结肠细胞增生性紊乱可以包括影响结肠细胞的所有形式的细胞增生性紊乱。结肠细胞增生性紊乱可包括结肠癌、结肠癌前病症、结肠腺瘤性息肉和结肠异时性病变。结肠的细胞增生性紊乱可以包括腺瘤。结肠细胞增生性紊乱可以通过结肠的增生、化生和发育不良来表征。可能使个体易于发展结肠细胞增生性紊乱的先前结肠疾病可包括先前的结肠癌。目前可能使个体发展为结肠细胞增生性紊乱的疾病可以包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。结肠细胞增生性紊乱可能与选自p53、ras、fap和dcc的基因中的突变相关。由于在选自p53、ras、fap和dcc的基因中存在突变，个体可能具有发展结肠细胞增生性紊乱的风险。

“胰腺细胞增生性紊乱”是涉及胰腺细胞的细胞增生性紊乱。胰腺细胞增生性紊乱可以包括影响胰腺细胞的所有形式的细胞增生性紊乱。胰腺细胞增生性紊乱可包括胰腺癌、胰腺的前期癌症或癌前病症、胰腺增生、胰腺发育不良、胰腺良性生长或病变、胰腺恶性生长或病变、以及胰腺以外的身体组织和器官中的转移性病变。胰腺癌包括胰腺癌症的各种形式。胰腺癌可包括导管腺癌、腺鳞癌、多形性巨细胞癌、粘液腺癌、破骨细胞样巨细胞癌、粘液性囊腺癌、腺泡癌、未分类大细胞癌、小细胞癌、胰腺母细胞瘤、乳头状肿瘤、粘液性囊腺瘤、乳头状囊性肿瘤和浆液性囊腺瘤。胰腺癌还可以包括具有组织学和超微结构异质性(例如混合细胞类型)的胰腺肿瘤。

“前列腺细胞增生性紊乱”是涉及前列腺细胞的细胞增生性紊乱。前列腺细胞增生性紊乱可以包括影响前列腺细胞的所有形式的细胞增生性紊乱。前列腺细胞增生性紊乱可包括前列腺癌、前列腺癌的前期癌症或癌前病症、前列腺的良性生长或病变、前列腺的恶性生长或病变以及前列腺以外的身体组织和器官中的转移性病变。前列腺细胞增生性紊乱可以包括前列腺的增生、化生和发育不良。

“皮肤细胞增生性紊乱”是涉及皮肤细胞的细胞增生性紊乱。皮肤细胞增生性紊乱可以包括影响皮肤细胞的所有形式的细胞增生性紊乱。皮肤细胞增生性紊乱可以包括皮肤的前期癌症或癌前病症、皮肤的良性生长或病变、黑素瘤、恶性黑素瘤和皮肤的其它恶性生长或病变，以及皮肤以外的身体组织和器官中的转移性病变。皮肤细胞增生性紊乱可以包括皮肤的增生、化生和发育不良。

“卵巢细胞增生性紊乱”是涉及卵巢细胞的增生性紊乱。卵巢细胞增生性紊乱可以包括影响卵巢细胞的所有形式的细胞增生性紊乱。卵巢细胞增生性紊乱可以包括卵巢的前期癌症或癌前病变、卵巢的良性生长或病变、卵巢癌、卵巢的恶性生长或病变，以及卵巢以外的身体组织和器官中的转移性病变。皮肤细胞增生性紊乱可以包括卵巢细胞的增生、化生和发育不良。

“乳腺细胞增生性紊乱”是涉及乳腺细胞的细胞增生性紊乱。乳腺细胞增生性紊乱可以包括影响乳腺细胞的所有形式的细胞增生性紊乱。乳腺细胞增生性紊乱可以包括乳腺癌、乳腺的前期癌症或癌前病症、乳腺的良性生长或病变、乳腺的恶性生长或病变，以及乳腺以外的身体组织和器官中的转移性病变。乳腺细胞增生性紊乱可以包括乳腺的增生、化生和发育不良。

待治疗的癌症可以根据美国癌症联合委员会(ajcc)tnm分类系统进行分期，其中肿瘤(t)被分配为tx、t1、t1mic、t1a、t1b、t1c、t2、t3、t4、t4a、t4b、t4c或t4d期；并且其中区域淋巴结(n)被分配为nx、n0、n1、n2、n2a、n2b、n3、n3a、n3b或n3c期；并且其中远端转移(m)可以分配为mx、m0或m1期。待治疗的癌症可以根据美国癌症联合委员会(ajcc)分类分为i期、iia期、iib期、iiia期、iiib期、iiic期或iv期。待治疗的癌症可以根据ajcc分类分级为gx(例如，不能评估的等级)、1级、2级、3级或4级。待治疗的癌症可以根据ajcc病理分类(pn)分为pnx、pn0、pn0(i-)、pn0(i+)、pn0(mol-)、pn0(mol+)、pn1、pn1(mi)、pn1a、pn1b、pn1c、pn2、pn2a、pn2b、pn3、pn3a、pn3b或pn3c期。

待治疗的癌症可以包括已被确定为直径小于或等于约2厘米的肿瘤。待治疗的癌症可以包括被确定为直径约2至约5厘米的肿瘤。待治疗的癌症可以包括被确定为直径大于或等于约3厘米的肿瘤。待治疗的癌症可以包括被确定为直径大于5厘米的肿瘤。待治疗的癌症可以通过微观外观及分化、中等分化、分化不良或未分化来分类。待治疗的癌症可以通过关于有丝分裂计数(例如，细胞分裂量)或核多形性(例如，细胞变化)的微观外观分类。待治疗的癌症可以通过与坏死区域(例如，死亡或退化细胞的区域)相关的微观外观分类。待治疗的癌症可分类为具有异常核型、染色体数目异常或具有一个或多个外观异常的染色体。待治疗的癌症可分类为非整倍体、三倍体、四倍体或具有改变的倍性。待治疗的癌症可分类为具有染色体易位，或整个染色体的缺失或复制，或染色体部分的缺失、复制或扩增的区域。

待治疗的癌症可以通过dna细胞计数、流式细胞术或图像细胞计数进行评估。待治疗的癌症可以分型为在细胞分裂的合成阶段(例如细胞分裂的s期)具有10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％或90％的细胞。待治疗的癌症可以被分型为具有低s期分数或高s期分数。

如本文所用，“正常细胞”是不能被分类为“细胞增生性紊乱”部分的细胞。正常细胞缺乏可以导致不想要的病症或疾病的发展的不受调节或异常的生长或两者。优选地，正常细胞具有正常功能性细胞周期检查点控制机制。

如本文所用，“接触细胞”是指化合物或其它组合物与细胞直接接触或足够接近以在细胞中诱导所需生物学作用的情形。

如本文所用，“治疗”描述了用于对抗疾病、病症或紊乱的目的的患者的管理和护理，并且包括施用本申请的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物，以减轻疾病、病症或紊乱的症状或并发症，或消除疾病、病症或紊乱。

本申请的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂合物也可用于预防疾病、病症或紊乱。如本文所用，“预防”描述减少或消除疾病、病症或紊乱的症状或并发症的发作。

如本文所用，术语“减轻”是指描述紊乱的征兆或症状的严重程度得到降低的过程。重要的是，征兆或症状可以缓解而不被消除。在优选的实施方案中，本申请的药物组合物的施用导致征兆或症状的消除，然而消除不是必需的。有效剂量有望降低征兆或症状的严重程度。例如，如果可以在多个位置发生的癌症在多个位置中的至少一个中的严重程度降低，则紊乱的征兆或症状得到减轻。

本文所述的化合物(例如双功能化合物)一旦制备即可以使用本领域技术人员已知的各种测定法来表征，以确定化合物是否具有所需的生物学活性。例如，分子可以通过常规测定表征，包括但不限于以下描述的那些测定(例如，用测试化合物治疗感兴趣的细胞，如mv4-11细胞，人细胞系mm1s或小脑蛋白缺陷的人细胞系mm1s，然后对所指定的蛋白例如brd2、brd3和brd4进行免疫印迹，或用测试化合物治疗感兴趣的某些细胞，然后通过qrt-pcr测量brd4转录水平)，以确定它们是否具有预测的活性、结合活性和/或结合特异性。

本领域技术人员可参考用于本文讨论的已知技术或等效技术的详细描述的通用参考文本。这些文本包括ausubeletal.,currentprotocolsinmolecularbiology,johnwileyandsons,inc.(2005)；sambrooketal.,molecularcloning,alaboratorymanual(第3版),coldspringharborpress,coldspringharbor,newyork(2000)；coliganetal.,currentprotocolsinimmunology,johnwiley&sons,n.y.；ennaetal.,currentprotocolsinpharmacology,johnwiley&sons,n.y.；fingletal.,thepharmacologicalbasisoftherapeutics(1975),remington'spharmaceuticalsciences,mackpublishingco.,easton,pa,第18版(1990)。当然也可以参考这些文本来制备或使用本申请的一个方面。

定义

本申请的某些化合物和特定官能团的定义也将在下文中更详细地描述。

应当理解，本文所述的化合物可以被任何数目的取代基或官能部分取代。通常，术语“取代”，无论其前面是否有术语“任选地”以及本申请的式中所含的取代基，是指给定结构中的氢原子被指定的取代基代替。当任何给定结构中的多于一个位置可被多于一个选自指定基团的取代基取代时，在每个位置的取代基可以相同或不同。如本文所用，术语“取代的”预期包括有机化合物的所有允许的取代基。在广义方面，允许的取代基包括有机化合物的无环和环状、支链和非支链、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。为了本申请的目的，诸如氮的杂原子可以具有氢取代基和/或满足杂原子价态的本文所述的有机化合物的任何允许的取代基。

本文所用的术语“接头”、“连接体”、“接头基团”或“连接基团”是指用于将感兴趣的化合物的一部分与另一种感兴趣的化合物连接的化学部分。本申请的这些结合部分优选通过接头连接到泛素连接酶结合部分，以便呈递与泛素连接酶邻近的靶蛋白(与蛋白靶部分结合)，用于泛素化和降解。本文描述了示例性接头。

本文所用的术语“化合物”或“化学化合物”可以包括有机金属化合物，有机化合物，金属，过渡金属络合物和小分子。在某些优选的实施方案中，从化合物的定义中排除多核苷酸。在其它优选的实施方案中，从化合物的定义中排除多核苷酸和肽。在特别优选的实施方案中，术语化合物是指小分子(例如，优选非肽和非低聚物)，并且不包括肽、多核苷酸、过渡金属络合物、金属和有机金属化合物。

如本文所用，术语“小分子”是指在实验室中合成或在自然界中发现的非肽、非低聚有机化合物。本文所用的小分子可以指“天然产物样”化合物，然而，术语“小分子”不限于“天然产物样”化合物。相反，小分子的特征通常在于其含有几个碳-碳键，并且具有小于2000g/mol、优选小于1500g/mol的分子量，但是该表征不旨在限制本申请的目的。在某些其它优选的实施方案中，使用合成的小分子。

本文所用的术语“独立地”用于表示独立地应用的变量，例如原子或官能团，随着应用的不同而独立地变化。例如，当多于一个取代基或原子(碳或杂原子，例如氧(o)、硫(s)或氮(n))出现时，每个取代基或原子与另一个取代基或原子无关，该取代基或原子也可以交替。

在化学中，“衍生物”是通过一些化学或物理过程衍生自类似化合物的化合物。还可以用来表示，如果一个原子被另一个原子或原子基团取代，则化合物可以由另一种化合物产生。术语“结构类似物”也可用于此含义。

术语“结构类似物”或术语“类似物”一直用于描述结构和功能相似性。扩展到药物，这一定义意味着现有药物分子的类似物与原始化合物具有结构和药理学相似性。形式上，这个定义允许确立三类药物类似物：具有化学和药理学相似性的类似物(直接类似物)；仅具有结构相似性的类似物(结构类似物)；和具有类似药理学性质的化学上不同的化合物(功能类似物)。例如，来那度胺和泊马度胺是沙利度胺类似物，被认为以类似的方式起作用。

本文的术语“e3泛素连接酶”或“泛素连接酶”(ul)用于描述根据本申请的双功能化合物中泛素连接酶部分的靶酶结合位点。e3ul为一种与e2泛素缀合酶结合的蛋白，导致泛素与靶蛋白上赖氨酸的连接；e3泛素连接酶靶向特异性蛋白底物，用于通过蛋白酶体降解。因此，e3泛素连接酶单独或与e2泛素缀合酶复合导致泛素转移到靶蛋白。通常，泛素连接酶参与多聚泛素化，使得第二个泛素连接到第一个，第三个泛素连接到第二个，等等。聚泛素标记蛋白用于通过蛋白酶体降解。然而，有一些泛素化事件仅限于单泛素化，其中只有一种泛素通过泛素连接酶添加到底物分子中。单泛素化的蛋白不靶向蛋白酶体用于降解，而是可以改变其细胞位置或功能，例如，通过结合具有结合泛素的结构域的其它蛋白。进一步复杂的事件是，泛素上的不同赖氨酸可以被e3靶向以制备链。最常见的赖氨酸是泛素链上的lys48。这是用于制备聚泛素的赖氨酸，其通过蛋白酶体识别。

术语“蛋白靶部分”或“靶蛋白配体”在本文中用于描述能够结合靶蛋白或其它感兴趣的蛋白或多肽的小分子，并将该蛋白或多肽置于/呈递使其接近泛素连接酶，从而可以发生通过泛素连接酶降解蛋白或多肽。可以结合蛋白靶部分并且由泛素连接酶作用或降解的任何蛋白是根据本申请的靶蛋白。通常，靶蛋白可以包括例如结构蛋白、受体、酶、细胞表面蛋白，与细胞的整合功能相关的蛋白，包括参与催化活性、芳香酶活性、运动活性、解旋酶活性、代谢过程(合成代谢和分解代谢)、抗氧化活性、蛋白水解、生物合成、具有激酶活性的蛋白、氧化还原酶活性、转移酶活性、水解酶活性、裂解酶活性、异构酶活性、连接酶活性、酶调节剂活性、信号转导活性、结构分子活性、结合活性(蛋白、脂质、碳水化合物)、受体活性、细胞运动、膜融合、细胞通讯、生物过程的调节、发育、细胞分化、对刺激的反应、行为蛋白、细胞粘附蛋白的蛋白、参与细胞死亡的蛋白、参与运输的蛋白(包括蛋白转运活性、核转运、离子转运活性、通道转运活性、载体活性、通透酶活性、分泌活性、电子转运活性、发病机理、伴侣调节活性、核酸结合活性、转录调节活性、细胞外组织和生物发生活性)的蛋白。感兴趣的蛋白可以包括来自原核生物和真核生物的蛋白，作为药物治疗的靶标，真核生物包括人类、其它动物(包括驯养动物)、用于测定抗生素和其它抗微生物剂的微生物，和植物，甚至包括病毒等。小分子靶蛋白结合部分的非限制性实例包括hsp90抑制剂，激酶抑制剂，mdm2抑制剂，靶向含人溴结构域的蛋白，hdac抑制剂，人赖氨酸甲基转移酶抑制剂，血管生成抑制剂，免疫抑制化合物和靶向芳基烃受体(ahr)的化合物等。下面描述的组合物例证了这些小分子靶蛋白的一些成员。

如本文所用，术语“brd4”或“brd4”涉及含溴结构域的蛋白4，其是人类中由brd4基因编码的蛋白。bdr4与brd2、brd3和brdt一起是bet(溴结构域和额外末端结构域)家族的成员。brd4类似于bet家族成员，含有两个识别乙酰化赖氨酸残基的溴结构域。brd4表达的增加导致rna聚合酶ii(rnapii)ctd的p-tefb依赖性磷酸化增加和来自启动子的体内转录的刺激。相反，通过sirna降低brd4表达降低了ctd磷酸化和转录，揭示了brd4是p-tefb的正调控组分。在染色质免疫沉淀(chip)测定中，p-tefb向启动子的募集依赖于brd4，并且通过染色质乙酰化的增加而增强。总之，p-tefb交替地与brd4和抑制性亚基相互作用以维持细胞中的功能平衡。

brd4是示例性的非酶蛋白靶标。brd4是参与动态转录激活和延伸的转录共激活因子。通过双乙酰-赖氨酸结合模块或溴结构域识别组蛋白和转录因子(tf)上的侧链乙酰化赖氨酸，brd4结合与靶基因相邻的增强子和启动子区域。最近，开发了第一种直接作用的bet溴结构域抑制剂(jq1)((p.filippakopoulosetal.,nature468,1067-1073(2010))，其将brd4从染色质置换，导致从主调节性tf到rna聚合酶ii的信号转导受损((b.chapuyetal..,cancercell24,777-790(2013)；j.e.delmoreetal.,cell146,904-917(2011)；j.lovénetal.,cell153,320-334(2013))。通过jq1对brd4溴结构域的分子识别是立体特异性的，只有(+)-jq1对映异构体(jq1s；来自这里向前的jq1)是有活性的；(-)-jq1对映异构体(jq1r)无活性。通过rna干扰在mm和急性髓细胞性白血病(aml)的鼠和人类模型中的brd4表达沉默，引起myc癌基因的快速转录下调和有效的抗增殖反应(j.e.delmoreetal.,cell146,904-917(2011)；j.zuberetal.,nature478,524-528(2011))。癌症、炎症(e.nicodemeetal.,nature468,1119-1123(2010))和心脏病((p.anandetal.,cell154,569-582(2013)；j.d.brownetal.,mol.cell56,219-231(2014))中的这些和其它研究，建立了靶向brd4以进行选择性降解的理想的机制和翻译目的。

如本文所用，术语“fkbp”涉及具有脯氨酰异构酶活性并且与功能性亲环蛋白有关的蛋白家族，尽管不在氨基酸序列中(siekierkaetal.nature341(6244):755–7(1989))。已经在许多从酵母到人类的真核生物中鉴定了fkbp，并且其作为含有脯氨酸残基的蛋白起蛋白折叠伴侣作用。与亲环蛋白一起，fkbp属于免疫亲和家族(balbachetal.mechanismsofproteinfolding(2nded.).oxford:oxforduniversitypress.pp.212–237(2000))。细胞因子信号蛋白fkbp12在人类中是显著的，用于结合用于治疗器官移植后患者和患有自身免疫性疾病的患者的免疫抑制剂他克莫司(原名fk506)(wangetal.science265(5172):674–6(1994))。已经发现他克莫司可以减少相关治疗即结合亲环蛋白的药物环孢素的器官排斥反应(mayeretal.transplantation64(3):436–43(1997))。fkbp-他克莫司复合物和环孢素-亲环蛋白复合物抑制被称为钙调磷酸酶的磷酸酶，从而阻断t淋巴细胞转导途径中的信号转导(liuetal.cell66(4):807–15(1991))。这种治疗作用与脯氨酰异构酶活性无关。ap1497(表1，tl5)是由被设计为fkbp12识别的合成的哌可酮α-酮酰胺(holtetal.,j.am.chem.soc.115,9925(1993))。

如本文所用，术语“crebbp”涉及creb结合蛋白。该基因被普遍表达，并且参与许多不同转录因子的转录共激活。首次将其作为结合camp反应元件结合蛋白(creb)的核蛋白分离，现在已知该基因通过将染色质重塑与转录因子识别相结合在胚胎发育、生长控制和体内平衡中起关键作用。涉及该基因的染色体易位与急性髓细胞性白血病有关。

如本文所用，术语“smarca4”涉及转录激活剂brg1，也称为atp依赖性解旋酶smarca4，其是人类中由smarca4基因编码的蛋白。该基因突变首次在人肺癌细胞系中被识别。已经证明brg1在肺癌和其它肿瘤类型中对控制视网膜酸和糖皮质激素诱导的细胞分化起作用。

如本文所用，术语“核受体”涉及在细胞内发现的一类蛋白，其负责感测类固醇和甲状腺激素以及某些其它分子。作为响应，这些受体与其它蛋白一起调控特定基因的表达，从而控制生物体的发育、稳态和代谢。由于大量基因的表达受到核受体的调控，激活这些受体的配体可以对生物体产生深远的影响。

下面的代表性实施例旨在帮助说明申请，并不意图也不应被解释为限制本申请的范围。实际上，除了本文中显示和描述的那些之外，除了本文所示出的和本文中所示出的那些之外，对本申请的各种修改以及其许多其它实施方案对于本领域技术人员来说是显而易见的，包括下面的实施例和本文引用的参考科学和专利文献。应当进一步理解，除非另有说明，本文引用的每个参考文献的全部内容通过引用并入本文，以帮助说明本领域的现有技术。以下实施例包含可在其各种实施方案及其等同中应用本申请的实践的重要附加信息、示例和指导。

在考虑以下实施例时，将进一步理解本申请的这些和其它方面，这些实施例旨在说明本申请的某些特定实施方案，但并不旨在限制其权利要求所限定的范围。

实施例

合成方法的一般性描述

本文引用的各种参考文献提供了关于制备类似于本文所述的本发明化合物或相关中间体的化合物的有用的背景信息，以及关于可能感兴趣的化合物的配制、用途和施用的信息。

此外，从业者关注本文件中提供的关于各种示例性化合物及其中间体的具体指导和实例。

根据本申请，可以使用任何可用的技术来制造或制备本发明化合物或包括它们的组合物。例如，可以使用各种组合技术、并行合成和/或固相合成方法，例如下面详细讨论的那些。或者或另外，本发明化合物可以使用本领域已知的各种溶液相合成方法中的任何一种来制备。

本申请的原料、中间体和化合物可以使用常规技术分离和纯化，包括过滤、蒸馏、结晶、色谱法等。它们可以使用常规方法进行表征，包括物理常数和光谱数据。

imid衍生物和降解决定子的合成

一般程序i：imid缩合

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(d-1)

在20ml玻璃小瓶中，将3-羟基邻苯二甲酸酐(500mg，3.05mmol，1当量)、乙酸钾(927mg，9.44mmol，3.1当量)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(552mg，3.35mmol，1.1当量)在乙酸(10.2ml，0.3m)中的混合物加热至90℃过夜。将黑色反应混合物冷却至室温，用水稀释至20ml，随后在冰上冷却30分钟。将所得浆液转移到50mlfalcon管中，将其以3500rpm离心5分钟。弃去上清液，用甲醇将黑色固体转移到250mlrbf中，真空浓缩。将残余物通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2：meoh(9:1))纯化，得到标题化合物，为白色固体(619mg，74％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.07(s,1h),7.65(dd,j＝8.4,6.8hz,1h),7.31(d,j＝6.8hz,1h),7.24(d,j＝8.4hz,1h),5.06(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),2.94–2.82(m,1h),2.64–2.43(m,2h),2.08–1.97(m,1h)；ms(esi)c13h11n2o5[m+h]⁺计算值275.07，实测值275.26.

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(d-10)

按照一般程序i，使用3-硝基邻苯二甲酸酐(300mg，1.55mmol，1当量)、乙酸钾(473mg，4.82mmol，3.1当量)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(281mg，1.71mmol，1.1当量)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(9:1))纯化，得到标题化合物，为浅黄色固体(280mg，59％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.17(s,1h),8.35(d,j＝8.1hz,1h),8.24(d,j＝7.5hz,1h),8.14–8.10(m,1h),5.20(dd,j＝12.9,5.5hz,1h),2.93–2.84(m,1h),2.64–2.45(m,2h),2.11–2.04(m,1h)；ms(esi)计算值c13h10n3o6[m+h]⁺304.06，实测值304.19.

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(d-2)

按照一般程序i，使用4-硝基邻苯二甲酸酐(300mg，1.55mmol)、乙酸钾(473mg，4.82mmol)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(281mg，1.71mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(30:1))纯化得到标题化合物，为白色固体(409mg，87％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.18(s,1h),8.68(dd,j＝8.1,1.9hz,1h),8.56(d,j＝1.9hz,1h),8.19(d,j＝8.1hz,1h),5.24(dd,j＝12.9,5.4hz,1h),2.90(ddd,j＝17.2,13.9,5.5hz,1h),2.69–2.48(m,2h),2.14–2.05(m,1h)；ms(esi)计算值c13h10n3o6[m+h]⁺304.06，实测值304.19.

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-6)

按照一般程序i，使用邻苯二甲酸酐(155mg，1.05mmol)、乙酸钾(318mg，3.24mmol)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(189mg，1.15mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(15:1))纯化得到标题化合物，为白色固体(235mg，87％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.13(s,1h),8.00–7.76(m,4h),5.16(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),2.89(ddd,j＝16.8,13.7,5.4hz,1h),2.65–2.42(m,2h),2.12–1.99(m,1h)；ms(esi)计算值c13h11n2o4[m+h]⁺259.07，实测值259.23.

2-(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-7)

按照一般程序i，使用邻苯二甲酸酐(90mg，0.608mmol)、乙酸钾(185mg，1.88mmol)和3-氨基吡咯烷-2,5-二酮盐酸盐(101mg，0.668mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(14:1))纯化得到标题化合物，为白色固体(95mg，64％)。ms(esi)计算值c12h9n2o4[m+h]⁺²45.06，实测值245.26。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羧酸(d-13)

按照一般程序i，使用1,2,4-苯三酸酐(200mg，1.04mmol)、乙酸钾(317mg，3.23mmol)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(188mg，1.15mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(9:1))纯化后得到标题化合物，为白色固体(178mg，57％)。ms(esi)计算值c14h11n2o6[m+h]⁺303.06，实测值303.24。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(d-14)

按照一般程序i，使用3-氟邻苯二甲酸酐(200mg，1.20mmol)、乙酸钾(366mg，3.73mmol)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(218mg，1.32mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(50:1))纯化后得到标题化合物，为白色固体(288mg，86％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.15(s,1h),7.96(ddd,j＝8.3,7.3,4.5hz,1h),7.82–7.71(m,2h),5.17(dd,j＝13.0,5.4hz,1h),2.90(ddd,j＝17.1,13.9,5.4hz,1h),2.65–2.47(m,2h),2.10–2.04(m,1h),ms(esi)计算值c13h10fn2o4[m+h]⁺277.06，实测值277.25。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-甲基异吲哚啉-1,3-二酮(d-19)

按照一般程序i，使用3-甲基邻苯二甲酸酐(150mg，0.925mmol)、乙酸钾(281mg，2.87mmol)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(167mg，1.02mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(15:1))纯化后得到标题化合物，为白色固体(168mg，67％)。ms(esi)计算值c14h13n2o4[m+h]⁺273.09，实测值273.24。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(d-24)

按照一般程序i，使用4-氟邻苯二甲酸酐(200mg，1.20mmol)、乙酸钾(366mg，3.73mmol)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(218mg，1.32mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(15:1))纯化后得到标题化合物，为白色固体(254mg，76％)。ms(esi)计算值c13h10fn2o4[m+h]⁺277.06，实测值277.24。

2-(2,6-二氧代哌啶-4-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-43)

按照一般程序i，使用邻苯二甲酸酐(60mg，0.311mmol)、乙酸钾(95mg，0.963mmol)和4-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(56mg，0.342mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(9:1))纯化后得到标题化合物，为白色固体(40mg，43％)。ms(esi)计算值c13h11n2o4[m+h]⁺259.07，实测值259.18。

一般程序ii：芳族硝基的还原

4-氨基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-4)

将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(173mg，0.854mmol)、pd(oac)2(12.8mg，0.0854mmol，10mol％)和氟化钾(66mg，1.71mmol，2当量)在thf:水(8:1)(5.7ml，0.1m)中的溶液在室温下搅拌。缓慢加入三乙基硅烷(365μl，3.41mmol，4当量)，将所得黑色溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用过量乙酸乙酯洗涤。将滤液真空浓缩，残余物通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(7:1))纯化得到标题化合物，为黄色粉末(72mg，46％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.08(s,1h),7.47(dd,j＝8.5,7.0hz,1h),7.06–6.95(m,1h),6.59–6.44(m,1h),5.04(dd,j＝12.7,5.4hz,1h),2.93–2.82(m,1h),2.64–2.45(m,2h),2.05–1.98(m,1h)；ms(esi)计算值c13h11n3o4[m+h]⁺274.08，实测值274.23。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(d-8)

按照一般程序ii，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，0.330mmol)、pd(oac)2(7.4mg，0.033mmol)、氟化钾(38mg，0.660mmol)和三乙基硅烷(211μl，1.32mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(9:1))纯化得到标题化合物，为黄色固体(33mg，37％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.05(s,1h),7.52(d,j＝8.2hz,1h),6.94(d,j＝2.0hz,1h),6.83(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),6.55(s,2h),5.01(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),2.86(ddd,j＝16.9,13.9,5.5hz,1h),2.68–2.43(m,2h),2.03–1.93(m,1h)；ms(esi)计算值c13h12n3o4[m+h]⁺274.08，实测值274.59。

4-氨基-2-(1-苄基-2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-12)

按照一般程序ii，使用2-(1-苄基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(48mg，0.122mmol)、pd(oac)2(2.7mg，0.0122mmol)、氟化钾(14mg，0.244mmol)和三乙基硅烷(78μl，0.488mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(己烷中0-100％的etoac)纯化，得到标题化合物，为黄色固体(7mg，16％)。ms(esi)计算值c20h18n3o4[m+h]⁺364.13，实测值364.34。

3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)哌啶-2,6-二酮(d-17)

按照一般程序ii，使用3-(2-甲基-5-硝基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)哌啶-2,6-二酮(21mg，0.0664mmol)、pd(oac)2(1.5mg，0.0066mmol)、氟化钾(7.7mg，0.133mmol)和三乙基硅烷(42μl，0.266mmol)，通过制备型hplc纯化，得到标题化合物，为白色固体(7mg，37％)。ms(esi)计算值c14h15n4o3[m+h]⁺287.11，实测值287.30。

3-(7-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(d-41)

按照一般程序ii，使用3-(7-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(11mg，0.038mmol)、pd(oac)2(0.9mg，0.0038mmol)、氟化钾(4.4mg，0.076mmol)和三乙基硅烷(24μl，0.152mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化，得到标题化合物，为黄色固体(2mg，21％)。ms(esi)计算值c13h14n3o3[m+h]⁺260.10，实测值260.52。

一般程序iii：苯胺的酰化

n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)乙酰胺(d-5)

在4ml玻璃小瓶中，将5-氨基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(30mg，0.110mmol，1当量)和乙酰氯(26μl，0.220mmol，2当量)在thf(1.8ml，0.1m)中的混合物加热至回流过夜。将反应混合物过滤，滤饼用et2o洗涤得到标题化合物，为白色固体(27mg，47％)，其不经进一步纯化即可使用。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),10.63(s,1h),8.24(d,j＝1.5hz,1h),7.91–7.83(m,2h),5.11(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),2.88(ddd,j＝17.0,13.8,5.4hz,1h),2.63–2.46(m,2h),2.13(s,3h),2.09–2.00(m,1h)；ms(esi)计算值c15h14n3o5[m+h]⁺316.09，实测值316.23。

n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙酰胺(d-3)

按照一般程序iii，使用4-氨基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(50mg，0.183mmol)和乙酰氯(26μl，0.366mmol)，得到标题化合物，为白色固体(10mg，17％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.14(s,1h),9.73(s,1h),8.44(d,j＝8.4hz,1h),7.83(dd,j＝8.4,7.3hz,1h),7.62(d,j＝7.2hz,1h),5.14(dd,j＝12.9,5.4hz,1h),2.90(ddd,j＝17.1,13.9,5.4hz,1h),2.66–2.45(m,2h),2.19(s,3h),2.14–2.00(m,1h)；ms(esi)计算值c15h14n3o5[m+h]⁺316.09，实测值316.27。

2-氯-n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)乙酰胺(d-32)

按照一般程序iii，使用5-氨基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10mg，0.0366mmol)和氯乙酰氯(6μl，0.0732mmol)，得到标题化合物，为白色固体(7.1mg，55％)。ms(esi)计算值c15h13cln3o5[m+h]⁺350.05，实测值350.23。

2-氯-n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙酰胺(d-34)

按照一般程序iii，使用3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(20mg，0.0771mmol)和氯乙酰氯(12μl，0.154mmol)，得到标题化合物，为白色固体(14.9mg，56％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.02(s,1h),10.20(s,1h),7.81(dd,j＝7.7,1.3hz,1h),7.65–7.47(m,2h),5.16(dd,j＝13.3,5.1hz,1h),4.45–4.34(m,2h),4.33(s,2h),3.00–2.85(m,1h),2.68–2.56(m,1h),2.41–2.28(m,1h),2.09–1.97(m,1h)；ms(esi)计算值c15h15cln3o4[m+h]⁺336.07，实测值336.31。

n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)丙烯酰胺(d-35)

按照一般程序iii，使用3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(20mg，0.0771mmol)和丙烯酰氯(13μl，0.154mmol)，得到标题化合物，为白色固体(18mg，76％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ15.77(s,1h),14.81(s,1h),12.65(dd,j＝7.4,1.6hz,1h),12.37–12.18(m,2h),11.28(dd,j＝17.0,10.2hz,1h),11.06(dd,j＝17.0,1.9hz,1h),10.57(dd,j＝10.2,1.9hz,1h),9.91(dd,j＝13.3,5.1hz,1h),9.24–9.05(m,2h),7.67(ddd,j＝17.2,13.7,5.5hz,1h),7.36(dt,j＝17.3,3.8hz,1h),7.20–7.03(m,1h),6.83–6.72(m,1h)；ms(esi)计算值c16h16n3o4[m+h]⁺314.11，实测值314.24。

n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)丙烯酰胺(d-36)

按照一般程序iii，使用5-氨基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10mg，0.0366mmol)和丙烯酰氯(6μl，0.0732mmol)，得到标题化合物，为白色固体(8.8mg，73％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.12(s,1h),10.83(s,1h),8.33(d,j＝1.8hz,1h),7.99(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),7.90(d,j＝8.2hz,1h),6.48(dd,j＝17.0,10.1hz,1h),6.36(dd,j＝17.0,1.9hz,1h),5.88(dd,j＝10.0,1.9hz,1h),5.13(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),2.95–2.84(m,1h),2.67–2.46(m,2h),2.09–2.01(m,1h)；ms(esi)计算值c16h14n3o5[m+h]⁺328.09，实测值328.23。

n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙酰胺(d-37)

按照一般程序iii，使用3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(20mg，0.0771mmol)和乙酰氯(11μl，0.154mmol)，得到标题化合物，为白色固体(17mg，71％)。ms(esi)计算值c15h16n3o4[m+h]⁺302.11，实测值301.99。

n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)环丙烷甲酰胺(d-38)

按照一般程序iii，使用3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(20mg，0.0771mmol)和环丙烷甲酰氯(14μl，0.154mmol)，得到标题化合物，为白色固体(19mg，75％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.01(s,1h),10.06(s,1h),7.84(dd,j＝7.2,1.9hz,1h),7.66–7.38(m,2h),5.14(dd,j＝13.3,5.1hz,1h),4.52–4.30(m,2h),2.92(ddd,j＝17.3,13.6,5.4hz,1h),2.64–2.54(m,1h),2.45–2.27(m,1h),2.08–1.95(m,1h),1.93–1.83(m,1h),0.90–0.75(m,4h)；ms(esi)计算值c17h18n3o4[m+h]⁺328.13，实测值328.00。

一般程序iv：喹唑啉酮缩合

3-(2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)哌啶-2,6-二酮(d-9)

在20ml玻璃小瓶中，将邻氨基苯甲酸(100mg，0.729mmol，1当量)、乙酸(42μl，0.729mmol，1当量)和p(oph)3(479μl，1.82mmol，2.5当量)(1.0ul，0.7m)在吡啶中加热至90℃。4小时后，将反应混合物冷却至室温，加入3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(144mg，0.875mmol，1.2当量)。将反应混合物再加热至90℃1.5小时，然后在室温下搅拌过夜。将反应混合物溶解于etoac(15ml)和水(15ml)中。将有机层用盐水(2×25ml)洗涤，用na2so4干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-5％meoh)纯化，得到标题化合物，为白色固体(79mg，40％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.03(s,1h),8.03(dd,j＝7.9,1.5hz,1h),7.82(ddd,j＝8.5,7.1,1.6hz,1h),7.62(dd,j＝8.3,1.1hz,1h),7.50(ddd,j＝8.1,7.1,1.1hz,1h),5.27(dd,j＝11.5,5.7hz,1h),2.92–2.78(m,1h),2.73–2.56(m,5h),2.26–2.06(m,1h)；ms(esi)计算值c14h14n3o3[m+h]⁺272.10，实测值272.33。

3-(2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)吡咯烷-2,5-二酮(d-11)

按照一般程序iv，使用邻氨基苯甲酸(200mg，1.46mmol)、乙酸(84μl，1.46mmol)、p(oph)3(959μl，3.65mmol)和3-氨基吡咯烷-2,5-二酮盐酸盐(263mg，1.75mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2:meoh(15:1))纯化得到标题化合物，为白色固体(25mg，7％)。ms(esi)计算值c13h12n3o3[m+h]⁺258.09，实测值258.22。

3-(5-氟-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)哌啶-2,6-二酮(d-66)

按照一般程序iv，使用6-氟邻氨基苯甲酸(100mg，0.645mmol)、乙酸(37μl，0.644mmol)、p(oph)3(424μl，1.61mmol)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(127mg，0.774mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为白色固体(70mg，38％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.03(s,1h),7.84–7.76(m,1h),7.44(dd,j＝8.2,1.0hz,1h),7.25(ddd,j＝11.1,8.2,1.0hz,1h),5.24(dd,j＝11.3,5.7hz,1h),2.90–2.75(m,1h),2.62(s,3h),2.61–2.56(m,2h),2.20–2.12(m,1h)；ms(esi)计算值c14h13fn3o3[m+h]⁺290.09，实测值290.271。

3-(2-甲基-5-硝基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)哌啶-2,6-二酮(d-67)

按照一般程序iv，使用6-硝基邻氨基苯甲酸(100mg，0.549mmol)、乙酸(31μl，0.549mmol)、p(oph)3(361μl，1.37mmol)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(108mg，0.659mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为白色固体(29mg，17％)。ms(esi)计算值c14h13n4o5[m+h]⁺317.09，实测值317.58。

一般程序v：酰胺偶联

n-苄基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-甲酰胺(d-15)

在4ml玻璃小瓶中，将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羧酸(10mg，0.033mmol，1当量)、hatu(13mg，0.033mmol，1当量)、dipea(17μl，0.099mmol，3当量)和苄胺(4μl，0.036mmol，1.1当量)在dmf(331μl，0.1m)中在室温下搅拌过夜。将反应混合物用meoh稀释至4ml，过滤，然后通过制备型hplc纯化，得到标题化合物，为白色固体(6mg，46％)。ms(esi)计算值c21h18n3o5[m+h]⁺392.12，实测值392.33。

一般程序vi：亲核性芳香族取代

4-(苄基氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-16)

在4ml玻璃小瓶中，将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(10mg，0.036mmol，1当量)、苄胺(4.4μl，0.040mmol，1.1当量)和dipea(13μl，0.072mmol，2当量)在nmp(362μl，0.1m)中加热至90℃过夜。将反应混合物冷却至室温并溶解于etoac(15ml)中。将有机层用nahco3(水溶液)(15ml)、水(15ml)和盐水(3×15ml)洗涤，随后用na2so4干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶快速柱色谱法(己烷中的0-100％etoac)纯化，得到标题化合物，为黄色膜(5mg，38％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.10(s,1h),7.44(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.40–7.25(m,5h),7.12(d,j＝7.1hz,1h),6.84(d,j＝8.5hz,1h),6.71(t,j＝5.9hz,1h),4.93(dd,j＝12.3,5.3hz,1h),4.51(d,j＝5.9hz,2h),2.93–2.66(m,3h),2.21–2.07(m,1h)；ms(esi)计算值c20h18n3o4[m+h]⁺364.13，实测值364.31。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(异丙基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-18)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(30mg，0.109mmol)、异丙胺(10μl，0.119mmol)和dipea(21μl，0.119mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(己烷中的0-100％etoac)纯化，得到标题化合物，为黄色膜(11mg，32％)。ms(esi)计算值c16h18n3o4[m+h]⁺316.13，实测值316.65。

4-(二乙基氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-21)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(30mg，0.109mmol)、二乙胺(11μl，0.130mmol)和dipea(32μl，0.181mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(己烷中的0-100％etoac)纯化，得到标题化合物，为黄色膜(28mg，97％)。ms(esi)计算值c17h20n3o4[m+h]⁺330.14，实测值330.62。

5-(苄基氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-25)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(30mg，0.109mmol)、苄胺(13μl，0.119mmol)和dipea(38μl，0.217mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(己烷中的0-100％etoac)纯化得到标题化合物，为黄色膜(6mg，15％)。ms(esi)计算值c20h18n3o4[m+h]⁺364.13，实测值364.34。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(异丙基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-26)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(30mg，0.109mmol)、异丙胺(11μl，0.130mmol)和dipea(38μl，0.217mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(己烷中的0-100％etoac)纯化得到标题化合物，为黄色膜(6mg，17％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.00(s,1h),7.53(d,j＝8.3hz,1h),6.87(d,j＝2.1hz,1h),6.64(dd,j＝8.3,2.2hz,1h),4.86(dd,j＝12.3,5.4hz,1h),4.30(d,j＝7.8hz,1h),2.86–2.58(m,3h),2.12–2.01(m,1h),1.26–1.15(m,6h)；ms(esi)计算值c16h18n3o4[m+h]⁺316.13，实测值316.30。

5-(二乙基氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-27)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(30mg，0.109mmol)、二乙胺(14μl，0.130mmol)和dipea(38μl，0.217mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(己烷中的0-100％etoac)纯化得到标题化合物，为黄色膜(6mg，31％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.08(s,1h),7.57(d,j＝8.6hz,1h),6.98(d,j＝2.4hz,1h),6.72(dd,j＝8.7,2.4hz,1h),4.90–4.80(m,1h),3.40(q,j＝7.1hz,4h),2.89–2.61(m,3h),2.11–2.01(m,1h),1.16(t,j＝7.1hz,6h)；ms(esi)计算值c17h20n3o4[m+h]⁺330.14，实测值330.69。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((呋喃-2-基甲基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-28)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(50mg，0.181mmol)、糠胺(18μl，0.199mmol)和dipea(63μl，0.362mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-5％meoh)纯化得到标题化合物，为黄色膜(8mg，13％)。ms(esi)计算值c18h16n3o4[m+h]⁺354.11，实测值354.25。

(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(d-29)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(50mg，0.181mmol)、1-boc-乙二胺(32mg，0.199mmol)和dipea(63μl，0.362mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为黄色膜(31mg，41％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.08(bs,1h),7.50(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.12(d,j＝7.1hz,1h),6.98(d,j＝8.5hz,1h),6.39(t,j＝6.1hz,1h),4.96–4.87(m,1h),4.83(bs,1h),3.50–3.41(m,2h),3.41–3.35(m,2h),2.92–2.66(m,3h),2.16–2.09(m,1h),1.45(s,9h)；ms(esi)计算值c20h25n4o6[m+h]⁺417.18，实测值417.58。

(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(d-30)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(50mg，0.181mmol)、1-boc-乙二胺(32mg，0.199mmol)和dipea(63μl，0.362mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为黄色膜(22mg，29％)。ms(esi)计算值c20h25n4o6[m+h]⁺417.18，实测值417.32。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((呋喃-2-基甲基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-31)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(19.5mg，0.0706mmol)、糠胺(7μl，0.078mmol)和dipea(25μl，0.141mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-2.5％meoh)纯化得到标题化合物，为黄色膜(19mg，76％)。ms(esi)计算值c18h16n3o4[m+h]⁺354.11，实测值354.27。

3-(5-(苄基氨基)-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)哌啶-2,6-二酮(d-39)

除了将反应混合物加热至170℃而不是90℃之外，按照一般程序vi，使用3-(5-氟-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)哌啶-2,6-二酮(30mg，0.104mmol)、苄胺(13μl，0.114mmol)和dipea(36μl，0.207mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为白色固体(15mg，38％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.73(t,j＝5.7hz,1h),8.39(s,1h),7.41(t,j＝8.1hz,1h),7.39–7.19(m,5h),6.77(d,j＝7.7hz,1h),6.41(d,j＝8.3hz,1h),4.67(dd,j＝11.5,5.9hz,1h),4.43(d,j＝5.7hz,2h),3.03–2.79(m,2h),2.72–2.61(m,1h),2.60(s,3h),2.15–2.07(m,1h)；ms(esi)计算值c21h21n4o3[m+h]⁺377.16，实测值377.02。

3-(5-(异丙基氨基)-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)哌啶-2,6-二酮(d-40)

除了将反应混合物加热至170℃而不是90℃之外，按照一般程序vi，使用3-(5-氟-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4h)-基)哌啶-2,6-二酮(30mg，0.104mmol)、异丙胺(10μl，0.114mmol)和dipea(36μl，0.207mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为白色固体(5mg，15％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.31(s,1h),8.21(d,j＝7.2hz,1h),7.50–7.37(m,1h),6.70(dd,j＝7.9,0.9hz,1h),6.47(d,j＝8.4hz,1h),4.65(dd,j＝11.4,5.9hz,1h),3.69–3.56(m,1h),3.03–2.80(m,3h),2.58(s,3h),2.14–2.03(m,1h),1.27(d,j＝2.7hz,3h),1.26(d,j＝2.7hz,3h)；ms(esi)计算值c17h21n4o3[m+h]⁺329.16，实测值329.97。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-羟乙基)氨基)异二氢吲哚-1,3-二酮(d-68)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(30mg，0.109mmol)、氨基乙醇(7μl，0.119mmol)和dipea(38μl，0.217mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-5％meoh)纯化得到标题化合物，为黄色膜(6mg，18％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.26(s,1h),7.50(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.12(d,j＝7.0hz,1h),6.95(d,j＝8.5hz,1h),6.50(t,j＝5.9hz,1h),4.97–4.85(m,1h),3.94–3.79(m,2h),3.47(q,j＝5.5hz,2h),3.03–2.68(m,3h),2.19–2.04(m,1h)；ms(esi)计算值c15h16n3o5[m+h]⁺318.11，实测值318.22。

4-(环丙基氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d47)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(20mg，0.0724mmol)、环丙胺(6μl，0.080mmol)和dipea(25μl，0.141mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-5％meoh)纯化后得到标题化合物，为黄色膜(16mg，70％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.05(s,1h),7.53(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.33–7.21(m,1h),7.15(dd,j＝7.1,0.7hz,1h),6.44(bs,1h),4.95–4.85(m,1h),2.98–2.66(m,3h),2.62–2.50(m,1h),2.19–2.06(m,1h),0.92–0.78(m,2h),0.67–0.56(m,2h)；ms(esi)计算值c16h16n3o4[m+h]⁺314.11，实测值314.54。

4-((2-(1h-吲哚-3-基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-48)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(20mg，0.0724mmol)、色胺(13mg，0.080mmol)和dipea(25μl，0.144mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为黄色膜(10mg，33％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.14(s,1h),8.11(s,1h),7.65–7.55(m,1h),7.45(dd,j＝8.6,7.1hz,1h),7.37(dt,j＝8.2,0.9hz,1h),7.21(ddd,j＝8.2,7.0,1.2hz,1h),7.16–7.04(m,3h),6.88(d,j＝8.5hz,1h),6.34(t,j＝5.6hz,1h),4.89(dd,j＝12.4,5.4hz,1h),3.59(td,j＝6.8,5.5hz,2h),3.19–3.03(m,2h),2.93–2.64(m,3h),2.14–2.04(m,1h)；ms(esi)计算值c23h21n4o4[m+h]⁺417.16，实测值417.26。

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((4-羟基苯乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-49)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(20mg，0.0724mmol)、酪胺(11mg，0.080mmol)和dipea(25μl，0.144mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(在ch2cl2中的0-5％meoh)纯化得到标题化合物，为黄色膜(15mg，54％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.20(s,1h),7.51(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.17–7.08(m,2h),6.90(d,j＝8.5hz,1h),6.85–6.72(m,2h),4.95–4.90(m,1h),3.52–3.46(m,2h),2.97–2.87(m,2h),2.86–2.72(m,2h),2.21–2.09(m,1h)；ms(esi)计算值c21h20n3o5[m+h]⁺394.14，实测值394.25。

4-((2-(1h-咪唑-2-基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-50)

按照一般程序vi，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(20mg，0.0724mmol)、组胺(15mg，0.080mmol)和dipea(25μl，0.144mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为黄色膜(5mg，19％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.19(s,1h),7.61(d,j＝1.2hz,1h),7.47(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.07(d,j＝6.9hz,1h),6.96–6.83(m,2h),6.39(t,j＝5.7hz,1h),4.97–4.79(m,1h),3.59(q,j＝6.5hz,2h),2.95(t,j＝6.6hz,2h),2.92–2.62(m,2h),2.16–2.04(m,1h)；ms(esi)计算值c18h18n5o4[m+h]⁺368.14，实测值368.47。

一般程序vii：伯胺的酰化

n-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)环丙烷甲酰胺(d-22)

在4ml玻璃小瓶中，将4-(氨基甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(25mg，0.087mmol，1当量)和dipea(30μl，0.174mmol，2当量)在mecn(250μl，0.35m)中冷却至0℃。缓慢加入环丙烷甲酰氯(8.7μl，0.096mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过过滤分离产物，得到标题化合物，为白色固体(4.8mg，15％)，其不经进一步纯化即可使用。ms(esi)计算值c18h18n3o5[m+h]⁺356.12，实测值356.32。

n-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)乙酰胺(d-23)

按照一般程序vii，使用4-(氨基甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(25mg，0.087mmol)、dipea(30μl，0.174mmol)和乙酰氯(7μl，0.096mmol)，得到标题化合物，为白色固体(4.5mg，16％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.13(s,1h),8.47(t,j＝6.0hz,1h),7.88–7.76(m,2h),7.70(dt,j＝7.3,1.1hz,1h),5.15(dd,j＝12.7,5.4hz,1h),4.69(d,j＝6.0hz,2h),2.90(ddd,j＝16.8,13.8,5.4hz,1h),2.64–2.44(m,2h),2.15–2.01(m,1h),1.92(s,3h)；ms(esi)计算值c16h16n3o5[m+h]⁺330.11，实测值330.05。

2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙-1-胺2,2,2-三氟乙酸盐(d-33)

向(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(205mg，0.492mmol，1当量))的二氯甲烷(2.25ml)搅拌溶液中加入三氟乙酸(0.250ml)。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后真空除去挥发物。得到标题化合物，为黄色固体(226mg，>95％)，其不经进一步纯化即可使用。¹hnmr(500mhz,meod)δ7.64(d,j＝1.4hz,1h),7.27–7.05(m,2h),5.10(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),3.70(t,j＝6.0hz,2h),3.50–3.42(m,2h),3.22(t,j＝6.0hz,1h),2.93–2.85(m,1h),2.80–2.69(m,2h),2.17–2.10(m,1h)；ms(esi)计算值c15h17n4o4[m+h]⁺317.12，实测值317.53。

一般程序viii：苯酚烷基化

2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-45)

在4ml玻璃小瓶中，将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(30mg，0.109mmol，1当量)和k2co3(15mg，0.109mmol，1当量)在dmf(365μl，0.3m)中在室温下搅拌。加入4-(4-(溴甲基)苄基)吗啉(30mg，0.109mmol，1当量)的dmf(200μl)溶液，将反应混合物在室温下搅拌4天。将反应混合物溶解于水(15ml)和etoac(15ml)中，有机层用盐水(3×15ml)洗涤，用na2so4干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为白色固体(20mg，40％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.10(s,1h),7.82(dd,j＝8.5,7.2hz,1h),7.60(d,j＝8.5hz,1h),7.50–7.42(m,3h),7.35(d,j＝8.1hz,2h),5.35(s,2h),5.09(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),3.64–3.51(m,4h),3.46(s,2h),2.88(ddd,j＝17.0,14.1,5.4hz,1h),2.63–2.47(m,2h),2.38–2.31(m,4h),2.07–1.99(m,1h)；ms(esi)计算值c25h26n3o6[m+h]⁺464.18，实测值464.00。

4-(苄氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-46)

按照一般程序viii，使用2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(30mg，0.109mmol)、k2co3(15mg，0.109mmol)和苄基溴(8μl，0109mmol)，通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为白色固体(8mg，20％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.10(s,1h),7.83(dd,j＝8.5,7.3hz,1h),7.60(d,j＝8.5hz,1h),7.53–7.50(m,2h),7.47(d,j＝7.2hz,1h),7.45–7.39(m,2h),7.38–7.32(m,1h),5.38(s,2h),5.09(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),2.88(ddd,j＝16.9,13.8,5.5hz,1h),2.64–2.46(m,2h),2.07–1.99(m,1h)；ms(esi)计算值c20h17n2o5[m+h]⁺365.11，实测值365.21。

2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基4-甲基苯磺酸酯(d-44)

在4ml玻璃小瓶中，将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-羟乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(7mg，0.0221mmol，1当量)和et3n(3μl，0.033mmol，1.5当量)在ch2cl2(200μl)中在室温下搅拌。加入在ch2cl2(100μl)中的甲苯磺酰氯(6mg，0.026mmol，1.2当量)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩，残余物通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0-10％meoh)纯化得到标题化合物，为白色固体(4mg，40％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.13(s,1h),7.64–7.59(m,2h),7.46(dd,j＝8.6,7.1hz,1h),7.33–7.27(m,2h),7.04–6.93(m,2h),6.58(t,j＝6.4hz,1h),5.09(dd,j＝12.7,5.4hz,1h),4.15(t,j＝5.1hz,2h),3.65–3.52(m,2h),2.97–2.83(m,1h),2.67–2.46(m,2h),2.27(s,3h),2.12–2.02(m,1h)；ms(esi)计算值c22h22n3o7s[m+h]⁺472.12，实测值472.39。

(r)-4-羟基-2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-52)

将羟基异苯并呋喃-1,3-二酮(147.08mg，0.896mmol，1当量)加入至(r)-3-氨基-3-甲基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(127.32mg，0.896mmol，1当量)中。然后向混合物中加入吡啶(3.584ml，0.25m)，在110℃搅拌17小时。用甲醇稀释混合物，在减压下浓缩。通过柱色谱(isco，24g硅胶柱，0-10％meoh/dcm25分钟梯度)纯化粗物质得到白色油状物(110.9mg，收率42.63％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.95(s,1h),7.61(dd,j＝8.4,7.2hz,1h),7.27–7.14(m,2h),2.73–2.63(m,1h),2.57–2.51(m,1h),2.04–1.97(m,1h),1.86(s,3h)。lcms289(m+h)。

(s)-4-羟基-2(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d-53)

将4-羟基异苯并呋喃-1,3-二酮(148.99mg，0.907mmol，1当量)加入至(s)-3-氨基-3-甲基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(128.97mg，0.907mmol，1当量)中。然后向混合物中加入吡啶(3.628ml，0.25m)，在110℃搅拌17小时。用甲醇稀释混合物，在减压下浓缩。通过柱色谱(isco，24g硅胶柱，0-10％meoh/dcm25分钟梯度)纯化粗物质得到白色油状物(150mg，收率57.4％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.95(s,1h),7.62(dd,j＝8.4,7.2hz,1h),7.27–7.16(m,2h),2.75–2.62(m,1h),2.55(dd，j＝14.0,4.3hz,1h),2.05–1.96(m,1h),1.86(s,3h)。lcms289(m+h)。

(s)-2-((2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧)乙酸(d-55)

将tfa(0.63ml，0.1m)加入(s)-2-((2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧)乙酸叔丁酯(25.4mg，0.063mmol，1当量)中，混合物在50℃搅拌1小时。用甲醇稀释混合物，减压浓缩得到白色粉末(20.5mg，收率93.9％)，其不经纯化用于下一步。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.81-7.75(m,1h),7.50(d,j＝7.3hz,1h),7.45(d,j＝8.6hz,2h),7.43–7.37(m,3h),5.09(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),4.76(s,2h),4.63(dd,j＝9.1,5.2hz,1h),3.66–3.55(m,30h),3.51-3.41(m,5h),2.90-2.83(m,1h),2.79-2.71(m,2h),2.69(s,3h),2.43(s,3h),2.14(ddt,j＝10.5,5.5,3.2hz,1h),1.69(s,3h)。lcms347(m+h)。

(r)-2-((2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧)乙酸(d-54)

将tfa(1.78ml，0.1m)加入(r)-2-((2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧)乙酸叔丁酯(71.3mg，0.178mmol，1当量)中，混合物在50℃搅拌1小时。用甲醇稀释混合物，减压浓缩得到白色粉末(47.2mg，收率76.63％)，其不经纯化用于下一步。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.72(ddd,j＝8.5,7.3,5.0hz1h),7.46-7.42(m,1h),7.30(dd,j＝8.6,4.5hz,1h),4.94(d,j＝5.3hz,2h),2.81-2.56(m,2h),2.24-2.07(m,1h),2.00(s,2h),0.99(t,j＝6.5hz,2h)。lcms347(m+h)。

4,7-二氯-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(d51)

将4,7-二氯异苯并呋喃-1,3-二酮(434.6mg，2.002mmol，1当量)加入3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(362.6mg，2.203mmol，1.1当量)中。然后将乙酸钾(609.07mg，6.206mmol，3.1当量)和乙酸(6.67ml，0.3m)加入混合物中，在90℃搅拌18小时。将混合物冷却至室温，用去离子水稀释并离心5分钟。用甲醇稀释沉淀并减压浓缩。通过柱色谱(isco，12g硅胶柱，0-10％meoh/dcm25分钟梯度)纯化粗物质得到白色粉末(160.4mg，收率24.5％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.15(s,1h),7.91(s,2h),5.17(dd,j＝12.9,5.4hz,1h)，2.88(ddd,j＝17.2,13.9,5.4hz1h),2.68-2.54(m,1h),2.05(ddd,j＝10.5,5.4，2.7hz,1h)。lcms328(m+h)。

示例性化合物的合成

除非另有说明，否则起始材料可以商购获得，或者任何相当熟悉的技术人员通过实验室容易地合成。下面一般地描述了合成本文中一般和亚类及种类的化合物的程序和一般指导。

实施例1：合成dbet1

(1)合成jq-酸

将jq1(1.0g，2.19mmol，1当量)在室温下溶解于甲酸(11ml，0.2m)中并搅拌75小时。将混合物减压浓缩，得到黄色固体(0.99g，定量收率)，其不经纯化即可使用。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.50–7.36(m,4h),4.59(t,j＝7.1hz,1h),3.51(d,j＝7.1hz,2h),2.70(s,3h),2.45(s,3h),1.71(s,3h).lcms401.33(m+h)。

根据先前公布的方法合成n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(fischeretal.nature2014,512,49)。

(2)合成dbet1

将jq-酸(11.3mg，0.0281mmol，1当量)和n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(14.5mg，0.0281mmol，1当量)在室温下溶解于dmf(0.28ml，0.1m)中。随后加入dipea(14.7微升，0.0843mmol，3当量)和hatu(10.7mg，0.0281mmol，1当量)，将混合物搅拌19小时。然后将混合物通过制备型hplc纯化，得到dbet1，为黄色固体(15.90mg，0.0202mmol，72％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.77(dd,j＝8.3,7.5hz,1h),7.49(d,j＝7.3hz,1h),7.47–7.37(m,5h),5.07(dd,j＝12.5,5.4hz,1h),4.74(s,2h),4.69(dd,j＝8.7,5.5hz,1h),3.43–3.32(m,3h),3.29–3.25(m,2h),2.87–2.62(m,7h),2.43(s,3h),2.13–2.04(m,1h),1.72–1.58(m,7h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.41,172.33,171.27,171.25,169.87,168.22,167.76,166.73,166.70,156.26,138.40,138.23,137.44,134.83,133.92,133.40,132.30,132.28,131.97,131.50,129.87,121.85,119.31,118.00,69.53,54.90,50.54,40.09,39.83,38.40,32.12,27.74,27.65,23.61,14.42,12.97,11.57.lcms785.44(m+h)。

实施例2：合成dbet4

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐的在dmf(0.438ml，0.0438mmol，1.2当量)中的0.1m溶液中加入(r)-jq-酸(以类似于jq-酸的方法由(r)-jq1制备)(14.63mg，0.0365mmol，1当量)。加入dipea(19.1微升，0.1095mmol，3当量)和hatu(15.3mg，0.0402mmol，1.1当量)，将混合物搅拌24小时，然后用meoh稀释并减压浓缩。将粗物质通过制备型hplc纯化，得到黄色固体(20.64mg，0.0263mmol，72％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.79(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.51(d,j＝7.3hz,1h),7.47–7.39(m,5h),5.11–5.06(m,1h),4.75(s,2h),4.68(dd,j＝8.8,5.5hz,1h),3.47–3.31(m,5h),2.83–2.65(m,7h),2.44(s,3h),2.13–2.06(m,1h),1.68(s,3h),1.67–1.60(m,4h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.43,172.40,171.29,169.92,168.24,167.82,166.71,156.31,153.14,138.38,138.24,137.54,134.88,133.86,133.44,132.29,132.00,131.49,129.88,122.46,121.90,119.38,118.02,69.59,54.96,50.55,40.09,39.84,38.45,32.14,27.75,27.65,23.62,14.41,12.96,11.56.ms785.48(m+h)。

实施例3：合成dbet3

在室温下将n-(2-氨基乙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐的在dmf(0.475ml，0.0475mmol，1.2当量)中的0.1m溶液加入至jq-酸(15.86mg，0.0396mmol，1当量)。随后加入dipea(20.7微升，0.1188mmol，3当量)和hatu(16.5mg，0.0435mmol，1.1当量)，将混合物搅拌24小时，然后通过制备型hplc纯化，得到黄色固体(22.14mg，0.0292mmol，74％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.82–7.75(m,1h),7.52–7.32(m,6h),5.04(dd,j＝11.6,5.5hz,1h),4.76(d,j＝3.2hz,2h),4.66(d,j＝6.6hz,1h),3.58–3.35(m,6h),2.78–2.58(m,6h),2.48–2.41(m,3h),2.11–2.02(m,1h),1.70(d,j＝11.8hz,3h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.38,171.26,171.19,170.26,168.86,168.21,167.76,166.72,156.27,153.14,138.44,138.36,138.19,134.87,133.71,132.31,131.57,131.51,129.90,129.86,121.81,119.36,117.95,69.48,54.83,50.52,40.09,39.76,38.30,32.09,23.63,14.40,11.61.lcms757.41(m+h)。

实施例4：合成dbet5

在室温下将n-(6-氨基己基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐的在dmf(0.247ml，0.0247mmol，1当量)中的0.1m溶液加入至jq-酸(9.9mg，0.0247mmol，1当量)。随后加入dipea(12.9微升，0.0741mmol，3当量)和hatu(9.4mg，0.0247mmol，1当量)。将混合物搅拌21小时，然后用meoh稀释并减压浓缩。将粗物质通过制备型hplc纯化，得到黄色固体(13.56mg，0.0167mmol，67％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.82–7.78(m,1h),7.53(dd,j＝7.3,2.0hz,1h),7.49–7.37(m,5h),5.10(dt,j＝12.4,5.3hz,1h),4.76(s,2h),4.70(dd,j＝8.7,5.5hz,1h),3.42–3.33(m,2h),3.25(dt,j＝12.3,6.0hz,3h),2.87–2.67(m,7h),2.48–2.42(m,3h),2.14–2.09(m,1h),1.69(d,j＝4.8hz,3h),1.58(s,4h),1.42(d,j＝5.2hz,4h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.51,171.31,171.26,169.82,168.27,168.26,167.75,156.26,150.46,138.20,134.92,133.92,133.47,132.34,132.01,131.52,129.88,121.69,119.34,117.95,111.42,69.39,54.97,50.56,40.39,40.00,38.40,32.15,30.46,30.16,27.58,27.48,23.64,14.41,12.96,11.55.lcms813.38。

实施例5-1：合成dbet6

在室温下将n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐的在dmf(0.191ml，0.0191mmol，1当量)中的0.1m溶液加入至jq-酸(7.66mg，0.0191mmol，1当量)。加入dipea(10微升，0.0574mmol，3当量)和hatu(7.3mg，0.0191mmol，1当量)，将混合物搅拌22小时，用meoh稀释，减压浓缩。将粗物质通过制备型hplc纯化，得到奶油色固体(8.53mg，0.0101mmol，53％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.80(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.53(d,j＝7.4hz,1h),7.49–7.36(m,5h),5.10(dt,j＝12.3,5.3hz,1h),4.75(s,2h),4.69(dd,j＝8.8,5.3hz,1h),3.42(dd,j＝15.0,8.9hz,1h),3.30–3.18(m,4h),2.90–2.64(m,7h),2.45(s,3h),2.13(dtt,j＝10.8,5.2,2.6hz,1h),1.71(d,j＝4.4hz,3h),1.56(d,j＝6.2hz,4h),1.33(d,j＝17.1hz,8h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.50,172.38,171.30,169.81,168.28,167.74,166.64,156.25,138.38,138.20,137.55,134.92,133.88,133.42,132.27,132.02,131.50,129.85,121.66,119.30,117.95,69.37,55.01,50.58,40.51,40.12,38.44,32.18,30.46,30.33,30.27,30.21,27.91,27.81,23.63,14.42,12.96,11.55.lcms841.64(m+h)。

实施例5-2：合成dbet6

步骤1：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮的合成

将3-羟基邻苯二甲酸酐(1.641g，10mmol，1当量)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(1.646g，10mmol，1当量)溶解于吡啶(40ml，0.25m)中，加热至110c。14小时后，将混合物冷却至室温并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，24g硅胶柱，0-10％meoh/dcm)纯化，得到所需产物，为棕褐色固体(2.424g，8.84mmol，88％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.08(s,2h),7.65(dd,j＝8.4,7.2hz,1h),7.36–7.28(m,1h),7.25(dd,j＝8.4,0.6hz,1h),5.07(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),2.88(ddd,j＝17.3,14.0,5.4hz,1h),2.63–2.50(m,2h),2.08–1.95(m,1h)。

步骤2：2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸叔丁酯的合成

将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(1.568g，5.71mmol，1当量)在室温下溶解于dmf(57ml，0.1m)中。随后加入碳酸钾(1.19g，8.58mmol，1.5当量)和溴乙酸叔丁酯(0.843ml，5.71mmol，1当量)。2小时后，将混合物用etoac稀释并用水洗涤一次，然后用盐水洗涤两次。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，24g硅胶柱，0-100％etoac/己烷，21分钟梯度)纯化，得到所需产物，为奶油色固体(2.06g，5.30mmol，93％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ7.94(s,1h),7.67(dd,j＝8.4,7.3hz,1h),7.52(d,j＝6.8hz,1h),7.11(d,j＝8.3hz,1h),4.97(dd,j＝12.3,5.3hz,1h),4.79(s,2h),2.95–2.89(m,1h),2.85–2.71(m,2h),2.14(dtd,j＝10.2,5.0,2.7hz,1h),1.48(s,9h).lcms389.33(m+h)。

步骤3：2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸的合成

将2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸叔丁酯(2.06g，5.30mmol，1当量)在室温下溶解于tfa(53ml，0.1m)。4小时后，将溶液用dcm稀释并减压浓缩。得到的奶油色固体(1.484g，4.47mmol，84％)被认为是足够纯的，其不经进一步纯化即可继续用于下一步骤。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),7.79(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.48(d,j＝7.2hz,1h),7.39(d,j＝8.6hz,1h),5.10(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),4.99(s,2h),2.93–2.89(m,1h),2.63–2.51(m,2h),2.04(ddd,j＝10.5,5.4,3.1hz,1h).lcms333.25(m+h)。

步骤4：(8-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)辛基)氨基甲酸叔丁酯

将boc-1,8-二氨基辛烷(2.10g，8.59mmol，1.1当量)溶解于dmf(86ml)中。在单独的烧瓶中，将2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(2.60g，7.81mmol，1当量)溶解于dmf(78ml)。随后加入boc-1,8-二氨基辛烷在dmf中的溶液，随后加入dipea(4.08ml，23.4mmol，3当量)和hatu(2.97g，7.81mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌19小时，然后用etoac(600ml)稀释。有机层依次用200ml半饱和氯化钠、200ml10％柠檬酸(水溶液)、200ml半饱和氯化钠、200ml饱和碳酸氢钠(水溶液)、200ml水洗涤，并用200ml盐水洗涤两次。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，40g柱，0-5％meoh/dcm，35分钟梯度)纯化，得到所需产物，为白色固体(3.53g，6.32mmol，81％)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.49(s,1h),7.74(dd,j＝8.3,7.4hz,1h),7.55(d,j＝7.2hz,1h),7.39(t,j＝5.3hz,1h),7.19(d,j＝8.4hz,1h),4.97(dd,j＝12.4,5.3hz,1h),4.63(d,j＝2.2hz,2h),4.59(d,j＝10.0hz,1h),3.36(q,j＝6.9hz,2h),3.12–3.03(m,2h),2.95–2.72(m,3h),2.16(ddt,j＝10.3,5.2,2.7hz,1h),1.59(p,j＝7.1hz,2h),1.37(d,j＝67.6hz,19h).lcms559.47(m+h)。

步骤5：n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐

将(8-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)辛基)氨基甲酸叔丁酯(3.53g，6.32mmol，1当量)溶解于tfa(63ml，0.1m)中并加热至50℃。1小时后，将混合物冷却至室温，用meoh稀释并减压浓缩。将粗物质用乙醚研磨并真空干燥，得到白色固体(2.93g，5.12mmol，81％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.82(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.55(d,j＝7.2hz,1h),7.44(d,j＝8.4hz,1h),5.14(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),4.76(s,2h),3.33(dd,j＝6.8,1.8hz,1h),3.30(s,1h),2.94–2.85(m,3h),2.80–2.69(m,2h),2.19–2.11(m,1h),1.60(dq,j＝24.8,7.0hz,4h),1.37(s,8h).lcms459.45(m+h)。

步骤6：合成dbet6

将(s)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)乙酸(0.894g，2.23mmol，1当量)和n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(1.277g)在室温下溶解于dmf(22.3ml，0.1m)中。加入dipea(1.17ml，6.69mmol，3当量)，随后加入hatu(0.848g，2.23mmol，1当量)。将混合物搅拌23小时，然后用etoac稀释。有机层用饱和碳酸氢钠、水洗涤，用盐水洗涤3次。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，40g柱，4-10％meoh/dcm，35分钟梯度)纯化，得到乳白色固体的dbet6(1.573g，1.87mmol，84％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.80(dd,j＝8.3,7.5hz,1h),7.53(d,j＝7.3hz,1h),7.46–7.37(m,5h),5.11(ddd,j＝12.6,8.2,5.5hz,1h),4.75(s,2h),4.63(dd,j＝9.0,5.2hz,1h),3.41(ddd,j＝14.9,9.0,2.2hz,1h),3.30–3.14(m,5h),2.86(ddt,j＝19.8,14.6,5.2hz,1h),2.78–2.66(m,5h),2.44(s,3h),2.13(ddq,j＝15.3,7.7,4.8,3.8hz,1h),1.69(s,3h),1.61–1.51(m,4h),1.35(s,8h).¹³cnmr(126mhz,meod)δ174.49,172.65,171.30,169.80,168.28,167.74,166.18,157.03,156.24,152.18,138.19,138.08,137.97,134.92,133.52,133.23,132.02,131.99,131.33,129.76,121.65,119.30,117.94,69.36,55.27,50.57,40.49,40.13,38.84,32.19,30.49,30.34,30.31,30.22,27.92,27.82,23.64,14.42,12.92,11.60.lcms841.48(m+h)。

实施例6：合成dbet9

在室温下将n-((2-(2-(2-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.321ml，0.0321mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(12.87mg，0.0321mmol，1当量)。加入dipea(16.8微升，0.0963mmol，3当量)和hatu(12.2mg，0.0321mmol，1当量)，将混合物搅拌24小时，用meoh稀释，减压浓缩。将粗物质通过制备型hplc纯化，得到黄色油状物(16.11mg，0.0176mmol，55％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.79(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.52(d,j＝7.2hz,1h),7.49–7.36(m,5h),5.10(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),4.78–4.67(m,3h),3.64–3.52(m,11h),3.48–3.32(m,6h),2.94–2.64(m,7h),2.52–2.43(m,3h),2.18–2.08(m,1h),1.81(p,j＝6.3hz,4h),1.73–1.67(m,3h).lcms918.45(m+h)。

实施例7：合成dbet17

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.281ml，0.0281mmol，1当量)中的0.1m溶液加入至(s)-2-(4-(4-氰基苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)乙酸(11mg，0.0281mmol，1当量)。加入dipea(14.7微升，0.0843mmol，3当量)和hatu(10.7mg，0.0281mmol，1当量)，将混合物搅拌24小时，用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(isco，4g二氧化硅柱，0-10％meoh/dcm)纯化，得到白色固体(14.12mg，0.0182mmol，65％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.82–7.72(m,3h),7.61(dd,j＝8.5,2.0hz,2h),7.51(d,j＝7.9hz,1h),7.44–7.40(m,1h),5.11–5.05(m,1h),4.76(s,2h),4.66(dd,j＝9.0,5.1hz,1h),3.48–3.32(m,4h),3.30–3.23(m,1h),2.87–2.61(m,7h),2.43(s,3h),2.10(dt,j＝10.7,5.2hz,1h),1.70–1.59(m,7h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.42,172.65,171.27,169.92,168.25,167.80,165.88,156.31,143.55,138.24,134.88,133.92,133.50,133.39,131.72,131.46,130.55,121.93,119.39,119.21,118.02,115.17,69.59,55.50,50.55,40.10,39.83,38.86,32.11,27.78,27.67,23.62,14.41,12.91,11.64.lcms776.39(m+h)。

实施例8：合成dbet15

将n-(6-氨基己基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-甲酰胺三氟乙酸盐(13.29mg，0.258mmol，1当量)和jq-酸(10.3mg，0.0258mmol，1当量)溶解于dmf(0.26ml)中。加入dipea(13.5微升，0.0775mmol，3当量)，随后加入hatu(9.8mg，0.0258mmol，1当量)，并将混合物在室温下搅拌。24小时后，将物质用dcm稀释并通过柱色谱法(isco，0-15％meoh/dcm)纯化，然后通过制备型hplc纯化，得到淡黄色固体(11.44mg，0.0146mmol，57％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.29–8.23(m,2h),7.93(dd,j＝8.1,4.2hz,1h),7.50–7.34(m,4h),5.17–5.11(m,1h),4.75–4.69(m,1h),3.53–3.32(m,6h),3.25(dd,j＝13.8,6.7hz,1h),2.90–2.67(m,6h),2.49–2.38(m,3h),2.18–2.10(m,1h),1.64(d,j＝22.4hz,6h),1.47(s,4h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.48,171.17,168.05,168.03,167.99,167.70,166.63,141.81,138.40,137.47,135.09,134.77,134.74,133.96,133.94,133.38,132.24,132.05,131.44,129.85,124.57,123.12,123.09,54.98,50.78,40.88,40.08,38.37,32.13,30.40,30.23,27.34,27.26,23.58,14.40,12.96,11.54.lcms783.43(m+h)。

实施例9：合成dbet2

(1)合成(r)-4-((8-环戊基-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5,6,7,8-四氢蝶啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯

将(r)-2-氯-8-环戊基-7-乙基-5-甲基-7,8-二氢蝶啶-6(5h)-酮(44.2mg，0.15mmol，1当量)、4-氨基-3-甲氧基苯甲酸乙酯(35.1mg，0.18mmol，1.2当量)、pd2dba3(6.9mg，0.0075mmol，5mol％)、xphos(10.7mg，0.0225mmol，15mol％)和碳酸钾(82.9mg，0.60mmol，4当量)溶解于tbuoh(1.5ml，0.1m)中并加热至100℃。21小时后，将混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，用dcm洗涤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g二氧化硅柱，0-100％etoac/己烷，18分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(52.3mg，0.115mmol，77％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.57(d,j＝8.5hz,1h),7.69(td,j＝6.2,2.9hz,2h),7.54(d,j＝1.8hz,1h),4.52(t,j＝7.9hz,1h),4.37(q,j＝7.1hz,2h),4.23(dd,j＝7.9,3.7hz,1h),3.97(s,3h),3.33(s,3h),2.20–2.12(m,1h),2.03–1.97(m,1h),1.86(ddd,j＝13.9,7.6,3.6hz,4h),1.78–1.65(m,4h),1.40(t,j＝7.1hz,3h),0.88(t,j＝7.5hz,3h).lcms454.32(m+h)。

(2)合成(r)-4-((8-环戊基-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5,6,7,8-四氢蝶啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸

将(r)-4-((8-环戊基-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5,6,7,8-四氢蝶啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯(73.8mg，0.163mmol，1当量)和lioh(11.7mg，0.489mmol，3当量)溶解于meoh(0.82ml)、thf(1.63ml)和水(0.82ml)中。20小时后，加入另外0.82ml水，将混合物再搅拌24小时，然后通过制备型hplc纯化，得到奶油色固体(53mg，0.125mmol，76％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.97(d,j＝8.4hz,1h),7.67(dd,j＝8.3,1.6hz,1h),7.64–7.59(m,2h),4.38(dd,j＝7.0,3.2hz,1h),4.36–4.29(m,1h),3.94(s,3h),3.30(s,3h),2.13–1.98(m,2h),1.95–1.87(m,2h),1.87–1.76(m,2h),1.73–1.57(m,4h),0.86(t,j＝7.5hz,3h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ168.67,163.72,153.59,150.74,150.60,130.95,127.88,125.97,123.14,121.68,116.75,112.35,61.76,61.66,56.31,29.40,29.00,28.68,28.21,23.57,23.41,8.69.lcms426.45(m+h)。

(3)合成dbet2

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.183ml，0.0183mmol1.2当量)中的0.1m溶液加入(r)-4-((8-环戊基-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5,6,7,8-四氢蝶啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(6.48mg，0.0152mmol，1当量)。加入dipea(7.9微升，0.0456mmol，3当量)和hatu(6.4mg，0.0168mmol，1.1当量)，将混合物搅拌23小时，然后通过制备型hplc纯化，得到黄色固体(9.44mg，0.0102mmol，67％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.84–7.77(m,2h),7.58(d,j＝1.8hz,2h),7.53–7.46(m,2h),7.42(d,j＝8.4hz,1h),5.11–5.05(m,1h),4.76(s,2h),4.48(dd,j＝6.5,3.1hz,1h),4.33–4.24(m,1h),3.95(s,3h),3.49–3.35(m,4h),2.97(d,j＝10.5hz,3h),2.89–2.65(m,5h),2.17–1.99(m,4h),1.89(dd,j＝14.5,7.3hz,2h),1.69–1.54(m,6h),1.36(dt,j＝7.6,3.9hz,1h),0.85(t,j＝7.5hz,3h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ176.52,174.48,173.05,171.34,169.99,168.91,168.25,167.80,164.58,156.34,154.48,153.10,150.63,138.22,134.89,133.96,129.53,123.93,121.87,120.78,119.36,117.99,111.54,69.55,63.29,63.10,56.68,50.55,40.71,39.86,32.15,29.43,29.26,28.73,28.63,27.81,27.77,24.25,23.63,8.47.lcms810.58(m+h)。

实施例10：合成dbet7

在室温下将n-(6-氨基己基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.186ml，0.0186mmol1当量)中的0.1m溶液加入(r)-4-((8-环戊基-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5,6,7,8-四氢蝶啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(7.9mg，0.0186mmol，1当量)。加入dipea(9.7微升，0.0557mmol，3当量)和hatu(7.1mg，0.0186mmol，1当量)，将混合物搅拌19小时，然后通过制备型hplc纯化，得到所需的三氟乙酸盐，为黄色固体(13.62mg，0.0143mmol，77％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.80(t,j＝8.3hz,2h),7.61–7.57(m,2h),7.55–7.49(m,2h),7.42(d,j＝8.4hz,1h),5.13(dd,j＝12.6,5.5hz,1h),4.75(s,2h),4.48(dd,j＝6.5,3.2hz,1h),4.33–4.24(m,1h),3.97(s,3h),3.40(t,j＝7.1hz,2h),3.34(d,j＝6.7hz,2h),3.30(s,3h),2.98(d,j＝8.5hz,1h),2.89–2.82(m,1h),2.79–2.63(m,3h),2.17–2.00(m,4h),1.91(dt,j＝14.4,7.1hz,3h),1.61(dt,j＝13.4,6.6hz,7h),1.47–1.41(m,3h),0.86(t,j＝7.5hz,3h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.54,171.37,169.84,168.84,168.27,167.74,164.59,156.26,154.47,153.18,150.69,138.19,134.91,134.05,129.47,124.78,124.01,121.65,120.77,119.29,117.92,117.86,111.55,69.34,63.31,63.13,56.67,50.53,40.97,39.96,32.16,30.42,30.19,29.42,29.26,28.72,28.62,27.65,27.46,24.26,23.65,8.47.lcms838.60(m+h)。

实施例11：合成dbet8

在室温下将n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.186ml，0.0186mmol1当量)中的0.1m溶液加入(r)-4-((8-环戊基-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5,6,7,8-四氢蝶啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(7.9mg，0.0186mmol，1当量)。加入dipea(9.7微升，0.0557mmol，3当量)和hatu(7.1mg，0.0186mmol，1当量)，将混合物搅拌16小时，然后通过制备型hplc纯化，得到所需的三氟乙酸盐，为灰白色固体(7.15mg，0.007296mmol，39％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.83–7.77(m,2h),7.61–7.56(m,2h),7.55–7.50(m,2h),7.42(d,j＝8.5hz,1h),5.13(dd,j＝12.6,5.5hz,1h),4.75(s,2h),4.49(dd,j＝6.6,3.3hz,1h),4.33–4.24(m,1h),3.97(s,3h),3.39(t,j＝7.1hz,2h),3.34–3.32(m,2h),3.30(s,3h),3.01–2.83(m,2h),2.82–2.65(m,3h),2.17–2.01(m,4h),1.91(dt,j＝14.2,7.4hz,1h),1.68–1.54(m,7h),1.37(s,7h),0.86(t,j＝7.5hz,3h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.52,171.35,169.81,168.85,168.28,167.74,164.58,156.27,154.47,153.89,150.64,138.19,134.93,134.18,129.52,129.41,124.91,123.83,121.67,120.76,119.31,117.95,117.89,111.57,69.37,63.37,63.17,56.67,50.58,41.12,40.12,32.19,30.43,30.28,30.22,30.19,29.40,29.25,28.71,28.62,27.94,27.75,24.29,23.65,8.46.lcms866.56(m+h)。

实施例12：合成dbet10

在室温下将n-2-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.172ml，0.0172mmol1当量)中的0.1m溶液加入至(r)-4-((8-环戊基-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5,6,7,8-四氢蝶啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(7.3mg，0.0172mmol，1当量)。加入dipea(9.0微升，0.0515mmol，3当量)和hatu(6.5mg，0.0172mmol，1当量)，将混合物搅拌23小时，然后通过制备型hplc纯化，得到所需的三氟乙酸盐，为灰白色油状物(10.7mg，0.0101mmol，59％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.78(d,j＝8.3hz,1h),7.75(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.56–7.51(m,2h),7.49–7.44(m,2h),7.36(d,j＝8.4hz,1h),5.08(dd,j＝12.4,5.4hz,1h),4.69(s,2h),4.44(dd,j＝6.7,3.2hz,1h),4.30–4.21(m,1h),3.92(s,3h),3.59–3.42(m,12h),3.35(t,j＝6.7hz,2h),3.25(s,3h),2.95–2.64(m,5h),2.13–1.95(m,4h),1.91–1.71(m,7h),1.65–1.48(m,4h),0.81(t,j＝7.5hz,3h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.50,171.35,169.83,168.77,168.25,167.68,164.57,156.26,154.47,153.05,150.59,138.19,134.92,133.89,129.53,124.57,123.98,121.72,120.75,119.26,117.95,117.86,111.54,71.51,71.46,71.28,71.20,70.18,69.65,69.41,63.27,63.07,56.71,50.57,38.84,37.59,32.17,30.41,30.32,29.46,29.26,28.73,28.64,24.27,23.65,8.49.lcms942.62(m+h)。

实施例13：合成dbet16

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.402ml，0.0402mmol1当量)中的0.1m溶液加入(r)-4-((4-环戊基-1,3-二甲基-2-氧代-1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b]吡嗪-6-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(16.55mg，0.0402mmol，1当量)。加入dipea(21微升，0.1206mmol，3当量)和hatu(15.3mg，0.0402mmol，1当量)，将混合物搅拌21小时，然后通过制备型hplc纯化，然后柱色谱法(isco，12gnh2-硅胶柱，0-15％meoh/dcm，20分钟梯度)纯化，得到hplc，得到棕色固体(10.63mg，0.0134mmol，33％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.22(d,j＝8.4hz,1h),7.78(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.73–7.68(m,1h),7.49(d,j＝7.4hz,2h),7.46–7.39(m,2h),6.98(d,j＝8.8hz,1h),5.97–5.87(m,1h),5.06(dd,j＝12.6,5.4hz,1h),4.76(s,2h),3.98(s,3h),3.61(s,2h),3.44–3.36(m,4h),2.92(s,1h),2.78(dd,j＝14.3,5.2hz,1h),2.68(ddd,j＝17.7,8.2,4.5hz,2h),2.36–2.26(m,2h),2.10–1.90(m,5h),1.76–1.62(m,6h),1.31(d,j＝16.0hz,4h).lcms795.38(m+h)。

实施例14：合成dbet11

(1)合成4-((5,11-二甲基-6-氧代-6,11-二氢-5h-苯并[e]嘧啶并[5,4-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯

将2-氯-5,11-二甲基-5h-苯并[e]嘧啶并[5,4-b][1,4]二氮杂-6(11h)-酮(82.4mg，0.30mmol，1当量)、4-氨基-3-甲氧基苯甲酸乙酯(70.3mg，0.36mmol，1.2当量)、pd2dba3(13.7mg，0.015mmol，5mol％)、xphos(21.5mg，0.045mmol，15mol％)和碳酸钾(166mg，1.2mmol，4当量)溶解于tbuoh(3.0ml)中并加热至100℃。17小时后，将混合物冷却至室温并通过硅藻土过滤。混合物通过柱色谱法(isco，12g硅胶柱，0-100％etoac/己烷，19分钟梯度)纯化，得到灰白色固体(64.3mg，0.148mmol，49％)。

¹hnmr(400mhz,50％cd3od/cdcl3)δ8.51(d,j＝8.5hz,1h),8.17(s,1h),7.73(ddd,j＝18.7,8.1,1.7hz,2h),7.52(d,j＝1.8hz,1h),7.46–7.41(m,1h),7.15–7.10(m,2h),4.34(q,j＝7.1hz,4h),3.95(s,3h),3.47(s,3h),3.43(s,3h),1.38(t,j＝7.1hz,3h).¹³cnmr(100mhz,50％cd3od/cdcl3)δ169.28,167.39,164.29,155.64,151.75,149.73,147.45,146.22,133.88,133.18,132.37,126.44,124.29,123.70,123.36,122.26,120.58,118.05,116.83,110.82,61.34,56.20,38.62,36.25,14.51.lcms434.33(m+h)。

(2)合成4-((5,11-二甲基-6-氧代-6,11-二氢-5h-苯并[e]嘧啶并[5,4-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸

将4-((5,11-二甲基-6-氧代-6,11-二氢-5h-苯并[e]嘧啶并[5,4-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯(108.9mg，0.251mmol，1当量)和lioh(18mg)溶解于thf(2.5ml)和水(1.25ml)中。24小时后，加入meoh(0.63ml)以改善溶解度)并再搅拌24小时，然后用meoh稀释并通过制备型hplc纯化，得到浅黄色固体(41.31mg)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.51(d,j＝8.5hz,1h),8.22(s,1h),7.73(ddd,j＝11.8,8.1,1.7hz,2h),7.57(d,j＝1.8hz,1h),7.49–7.44(m,1h),7.19–7.11(m,2h),3.97(s,3h),3.48(s,3h),3.45(s,3h).lcms406.32(m+h)。

(3)合成dbet11

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.190ml，0.0190mmol1当量)中的0.1m溶液加入4-((5,11-二甲基-6-氧代-6,11-二氢-5h-苯并[e]嘧啶并[5,4-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(7.71mg，0.0190mmol，1当量)。加入dipea(9.9微升，0.0571mmol，3当量)和hatu(7.2mg，0.0190mmol，1当量)，将混合物搅拌22小时，然后通过制备型hplc纯化，得到hplc，得到所需的三氟乙酸盐，为乳白色固体(6.72mg，0.00744mmol，39％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.46(d,j＝8.3hz,1h),8.21(s,1h),7.79–7.73(m,2h),7.52(d,j＝7.1hz,1h),7.50–7.43(m,3h),7.33(d,j＝8.2hz,1h),7.15(dd,j＝7.7,5.9hz,2h),4.98(dd,j＝12.0,5.5hz,1h),4.69(s,2h),3.97(s,3h),3.49(s,3h),3.46–3.34(m,7h),2.81–2.67(m,3h),2.13–2.08(m,1h),1.69(dt,j＝6.6,3.5hz,4h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ173.40,170.10,169.68,169.00,168.85,167.60,167.15,164.77,156.01,155.42,151.83,150.03,148.21,137.82,134.12,133.48,132.58,132.52,128.11,126.72,124.54,122.33,121.06,120.63,118.77,118.38,117.94,117.62,109.67,68.90,56.33,49.96,40.16,39.48,38.72,36.34,31.82,27.24,23.16.lcms790.48(m+h))。

实施例15：合成dbet12

在室温下将n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.186ml，0.0186mmol1当量)中的0.1m溶液加入4-((5,11-二甲基-6-氧代-6,11-二氢-5h-苯并[e]嘧啶[5,4-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(7.53mg，0.0186mmol，1当量)。加入dipea(9.7微升，0.0557mmol，3当量)和hatu(7.1mg，0.0186mmol，1当量)，将混合物搅拌22小时，然后通过制备型hplc纯化，得到hplc，得到所需的三氟乙酸盐，为奶油色固体(7.50mg，0.00724mmol，39％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.46(d,j＝8.9hz,1h),8.21(s,1h),7.73(dd,j＝15.2,7.8hz,2h),7.50–7.42(m,3h),7.28(d,j＝8.5hz,1h),7.15(t,j＝7.7hz,2h),5.01(dd,j＝11.8,5.8hz,1h),4.68(s,2h),3.97(s,3h),3.67–3.58(m,7h),3.58–3.43(m,10h),3.39(t,j＝6.8hz,2h),3.35(s,2h),2.97(s,1h),2.84–2.70(m,3h),2.16–2.07(m,1h),1.93–1.76(m,4h).lcms922.57(m+h)。

实施例16：合成dbet13

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.501ml，0.0501mmol1当量)中的溶液加入2-((2-(4-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)氨基)乙酸(如在mckeownetal,j.med.chem,2014,57,9019中合成)(18.22mg，0.0501mmol，1当量)。加入dipea(26.3微升，0.150mmol，3当量)和hatu(19.0mg，0.0501mmol，1当量)，将混合物搅拌21小时，然后通过制备型hplc纯化，得到hplc，得到所需的三氟乙酸盐，为深黄色油状物(29.66mg，0.0344mmol，69％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ9.09(s,1h),8.65(d,j＝5.2hz,1h),8.14–8.06(m,2h),7.94–7.88(m,1h),7.80–7.74(m,1h),7.59–7.47(m,3h),7.40(dd,j＝8.4,4.7hz,1h),5.11–5.06(m,1h),4.72(d,j＝9.8hz,2h),3.90(s,2h),3.25–3.22(m,1h),3.12(t,j＝6.4hz,1h),2.96(s,2h),2.89–2.79(m,1h),2.76–2.62(m,2h),2.48–2.42(m,3h),2.29(s,3h),2.10(ddq,j＝10.2,5.3,2.7hz,1h),1.49–1.45(m,2h),1.37(dd,j＝6.7,3.6hz,2h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.45,171.98,171.35,169.88,168.17,167.85,167.40,159.88,156.28,141.82,138.26,135.85,134.82,133.09,132.06,130.75,129.67,122.07,121.94,119.30,118.98,118.06,117.24,69.56,50.56,40.05,39.73,32.13,27.53,23.62,18.71,17.28,11.64,10.85.lcms748.49(m+h)。

实施例17：合成dbet14

在室温下将n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.510ml，0.0510mmol1当量)中的0.1m溶液加入2-((2-(4-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)氨基)乙酸(如在mckeownetal,j.med.chem,2014,57,9019中合成)(18.52mg，0.0510mmol，1当量)。加入dipea(26.6微升，0.153mmol，3当量)和hatu(19.4mg，0.0510mmol，1当量)，将混合物搅拌22小时，然后通过制备型hplc纯化，得到hplc，得到所需的三氟乙酸盐，为深黄色油状物(32.63mg，0.0328mmol，64％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ9.09(s,1h),8.66(d,j＝5.4hz,1h),8.17–8.08(m,2h),7.92(d,j＝5.6hz,1h),7.77(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.60–7.47(m,3h),7.39(d,j＝8.4hz,1h),5.09(dd,j＝12.4,5.5hz,1h),4.71(s,2h),3.91(s,2h),3.62–3.46(m,10h),3.38(dt,j＝16.0,6.4hz,3h),3.18(t,j＝6.8hz,2h),2.97(s,1h),2.89–2.81(m,1h),2.78–2.66(m,2h),2.47(s,3h),2.31(s,3h),2.16–2.08(m,1h),1.79(dt,j＝12.8,6.5hz,2h),1.64(t,j＝6.3hz,2h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.48,171.88,171.34,169.80,168.22,167.69,167.42,159.87,156.24,141.87,138.21,135.89,134.88,133.13,132.04,130.76,129.67,122.08,121.69,119.20,117.94,117.23,71.44,71.22,71.10,69.92,69.62,69.38,50.57,49.64,38.11,37.55,32.16,30.30,30.20,23.63,11.67,10.88.lcms880.46(m+h)。

实施例18：合成dbet18

(1)合成(s)-4-(3-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][12,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)乙酰氨基)丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

将jq-酸(176.6mg，0.441mmol，1当量)在室温下溶解于dmf(4.4ml)中。加入hatu(176mg，0.463mmol，1.05当量)，随后加入dipea(0.23ml)，1.32mmol，3当量)。10分钟后，将4-(3-氨丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(118mg，0.485mmol，1.1当量)以在dmf(0.44ml)中的溶液加入。24小时后，将混合物用半饱和碳酸氢钠稀释并用dcm萃取两次，并用etoac萃取一次。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(isco，24g硅胶柱，0-15％meoh/dcm，23分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(325.5mg，定量收率)。

¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.67(t,j＝5.3hz,1h),7.41–7.28(m,4h),4.58(dd,j＝7.5,5.9hz,1h),3.52–3.23(m,8h),2.63(s,9h),2.37(s,3h),1.80–1.69(m,2h),1.64(s,3h),1.42(s,9h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ171.41,164.35,155.62,154.45,150.20,136.92,136.64,132.19,131.14,130.98,130.42,129.98,128.80,80.24,56.11,54.32,52.70,38.96,37.85,28.42,25.17,14.43,13.16,11.82.lcms626.36(m+h)。

(2)合成(s)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)-n-(3-(哌嗪-1-基)丙基)乙酰胺

将(s)-4-(3-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)乙酰氨基)丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(325.5mg)溶解于dcm(5ml)和meoh(0.5ml)中。加入4mhcl的二噁烷溶液(1ml)，将混合物搅拌16小时，然后在氮气流下浓缩，得到黄色固体(231.8mg)，无需进一步纯化即可使用。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.64–7.53(m,4h),5.05(t,j＝7.1hz,1h),3.81–3.66(m,6h),3.62–3.33(m,9h),3.30(p,j＝1.6hz,1h),2.94(s,3h),2.51(s,3h),2.09(dq,j＝11.8,6.1hz,2h),1.72(s,3h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ171.78,169.38,155.83,154.03,152.14,140.55,136.33,134.58,134.53,133.33,132.73,130.89,130.38,56.07,53.54,41.96,37.22,36.23,25.11,14.48,13.14,11.68.lcms526.29(m+h)。

(3)合成(s)-(6-(4-(3-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)乙酰氨基)丙基)哌嗪-1-基)-6-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯

将(s)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)-n-(3-(哌嗪-1-基)丙基)乙酰胺(62.1mg)和6-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸(24.0mg，0.1037mmol，1当量)溶解于dmf(1ml)中。加入dipea(72.2微升，0.4147mmol，4当量)，随后加入hatu(39.4mg，0.1037mmol，1当量)，将混合物搅拌25小时。将混合物用半饱和碳酸氢钠稀释并用dcm萃取三次。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-15％meoh/dcm，15分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(71.75mg，0.0970mmol，94％)。

¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.61(s,1h),7.43–7.28(m,4h),4.63(s,1h),4.61–4.56(m,1h),3.82–3.21(m,10h),3.11–3.01(m,2h),2.61(d,j＝24.3hz,9h),2.38(s,3h),2.28(t,j＝7.4hz,2h),1.73(dq,j＝13.8,7.4hz,2h),1.63–1.55(m,2h),1.53–1.24(m,14h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ171.63,171.11,164.34,156.17,155.66,150.21,136.96,136.72,132.25,131.14,131.01,130.47,130.00,128.85,79.11,56.42,54.46,53.06,52.82,45.04,41.02,40.47,39.29,38.33,33.00,29.90,28.54,26.60,25.29,24.86,14.47,13.20,11.86.lcms739.37(m+h)。

(4)合成(s)-n-(3-(4-(6-氨基己酰基)哌嗪-1-基)丙基)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)乙酰胺

将(s)-(6-(4-(3-(2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)乙酰氨基)丙基)哌嗪-1-基)-6-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯(71.75mg，0.0970mmol，1当量)溶解于dcm(2ml)和meoh(0.2ml)中。加入4mhcl的二噁烷(0.49ml)溶液，将混合物搅拌2小时，然后在氮气流下浓缩，然后真空浓缩，得到黄色泡沫(59.8mg，0.0840mmol，87％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.68–7.53(m,4h),5.04(d,j＝6.6hz,1h),4.66(d,j＝13.6hz,1h),4.23(d,j＝13.6hz,1h),3.63–3.34(m,7h),3.29–3.00(m,5h),2.95(d,j＝6.0hz,5h),2.51(d,j＝9.2hz,5h),2.08(s,2h),1.77–1.62(m,7h),1.45(dt,j＝15.3,8.6hz,2h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ173.77,171.84,169.35,155.85,153.99,140.56,136.40,134.58,133.35,132.70,130.39,55.83,53.57,52.92,52.70,43.57,40.55,39.67,37.33,36.25,33.17,28.26,26.94,25.33,25.26,14.49,13.15,11.65.lcms639.35(m+h)。

(5)合成dbet18

将(s)-n-(3-(4-(6-氨基己酰基)哌嗪-1-基)丙基)-2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)乙酰胺二盐酸盐(20.0mg，0.0281mmol，1当量)和2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(9.32mg，0.0281mmol，1当量)溶解于dmf(0.281ml)中。加入dipea(19.6微升，0.1124mmol，4当量)，随后加入hatu(10.7mg，0.0281mmol，1当量)。24小时后，将混合物用meoh稀释并通过制备型hplc纯化，得到所需的三氟乙酸盐。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.83–7.79(m,1h),7.54(d,j＝7.1hz,1h),7.45(q,j＝8.8hz,5h),5.12(dd,j＝12.5,5.4hz,1h),4.76(s,2h),4.68(t,j＝7.3hz,1h),3.59–3.32(m,8h),3.28–3.18(m,4h),2.87(ddd,j＝19.0,14.7,5.3hz,2h),2.80–2.65(m,6h),2.44(d,j＝6.8hz,5h),2.33–2.25(m,1h),2.14(dd,j＝9.8,4.9hz,1h),2.06–1.89(m,3h),1.70(s,3h),1.61(dq,j＝14.4,7.3,6.9hz,4h),1.45–1.37(m,2h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.52,173.97,173.69,171.44,169.88,168.26,167.83,166.72,156.36,138.28,137.84,134.89,133.52,132.12,131.83,131.38,129.89,121.87,119.32,118.01,69.52,55.64,55.03,52.79,50.58,43.69,39.77,38.57,36.89,33.47,32.16,29.93,27.34,25.76,25.45,23.63,14.39,12.94,11.66.lcms953.43(m+h)。

实施例19：合成dbet19

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(235微升，0.0235mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(s)-2-(4-(4-氯苯基)-2-(氰基甲基)-3,9-二甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基)乙酸(10mg，0.0235mmol，1当量)。加入dipea(12.3微升，0.0704mmol，3当量)和hatu(8.9mg，0.0235mmol，1当量)，将混合物搅拌18.5小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为白色固体(12.96mg，0.0160mmol，68％)。

¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.80(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.55–7.37(m,6h),5.14–5.06(m,1h),4.77(d,j＝1.5hz,2h),4.64(dd,j＝8.0,5.6hz,1h),3.45–3.32(m,5h),3.29–3.21(m,2h),2.83–2.66(m,6h),2.58(s,3h),2.14–2.06(m,1h),1.71–1.57(m,4h).lcms810.30,m+h)。

实施例20：合成dbet20

将3-((2-((4-(4-(4-氨基丁酰基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-n-(叔丁基)苯磺酰胺三氟乙酸盐(7.41mg，0.0107mmol，1当量)和2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(3.6mg，0.0107mmol，1当量)溶解于dmf(214微升，0.05m)中。加入dipea(5.6微升，0.0321mmol，3当量)和hatu(4.1mg，0.0107mmol，1当量)。22.5小时后，将混合物用meoh稀释并通过制备型hplc纯化，得到所需产物，为棕色残余物(6.27mg，0.00701mmol，65％)。

¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ8.06(s,1h),7.84–7.75(m,3h),7.65(s,1h),7.55(t,j＝7.8hz,2h),7.45(d,j＝8.4hz,1h),7.25–7.20(m,2h),6.99(d,j＝8.8hz,2h),5.11(dd,j＝12.5,5.4hz,1h),4.78(s,2h),3.79–3.66(m,4h),3.40(t,j＝6.6hz,2h),3.24–3.13(m,4h),2.82–2.68(m,3h),2.52(t,j＝7.4hz,2h),2.24–2.19(m,3h),2.12(dd,j＝10.2,5.1hz,1h),1.92(dd,j＝13.4,6.4hz,2h),1.18(s,9h).lcms895.63(m+h)。

实施例21：合成dbet21

在室温下将4-((10-氨基癸基)氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐在dmf(232微升，0.0232mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq酸(9.3mg，0.0232mmol，1当量)。加入dipea(12.1微升，0.0696mmol，3当量)和hatu(8.8mg，0.0232mmol，1当量)，将混合物搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型hplc纯化，然后通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为灰白色残余物(1.84mg，0.00235mmol，10％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.77–7.73(m,1h),7.50–7.33(m,6h),5.09(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),4.62(s,1h),4.21(t,j＝6.4hz,2h),3.36(s,2h),2.87–2.67(m,6h),2.44(s,3h),1.88–1.82(m,2h),1.70(s,3h),1.58(s,4h),1.29(s,8h).lcms784.51(m+h)。

实施例22：合成dbet22

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(247微升，0.0247mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(s)-4-(4-氯苯基)-6-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-3,9-二甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-2-羧酸(10.98mg，0.0247mmol，1当量)。加入dipea(12.9微升，0.0740mmol，3当量)和hatu(9.4mg，0.0247mmol，1当量)。然后将混合物搅拌21小时，然后用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为白色固体(9.79mg，0.0118mmol，48％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.80(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.51(dd,j＝7.1,1.5hz,1h),7.48–7.34(m,5h),5.11(ddd,j＝12.4,5.4,3.5hz,1h),4.76(s,2h),4.69(td,j＝7.2,1.4hz,1h),3.76(s,3h),3.55(d,j＝7.2hz,2h),3.48–3.33(m,4h),2.93–2.82(m,1h),2.78–2.64(m,5h),2.14–2.07(m,1h),1.96(d,j＝0.9hz,3h),1.66(s,4h).lcms829.39(m+h)。

实施例23：合成dbet23

在室温下将n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(220微升，0.0220mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(s)-4-(4-氯苯基)-6-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-3,9-二甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-2-羧酸(9.87mg，0.0220mmol，1当量)。加入dipea(11.5微升，0.0660mmol，3当量)和hatu(8.4mg，0.0220mmol，1当量)。然后将混合物搅拌21小时，然后用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为白色固体(8.84mg，0.00998mmol，45％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.81(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.53(d,j＝7.3hz,1h),7.50–7.39(m,5h),5.12(dd,j＝12.6,5.4hz,1h),4.75(s,2h),4.68(t,j＝7.2hz,1h),3.76(s,3h),3.54(d,j＝7.2hz,2h),3.39–3.32(m,3h),3.29(s,1h),2.90–2.83(m,1h),2.79–2.68(m,5h),2.14(dd,j＝8.9,3.7hz,1h),1.99(s,3h),1.65–1.53(m,4h),1.36(d,j＝6.5hz,8h).lcms885.47(m+h)。

实施例24：合成dbet24

步骤1：(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成

将2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(200mg，0.602mmol，1当量)溶解于dmf(6.0ml，0.1m)。依次加入hatu(228.9mg，0.602mmol，1当量)、dipea(0.315ml，1.81mmol，3当量)和n-boc-2,2'-(亚乙二氧基)二乙胺(0.143ml，0.602mmol，1当量)。6小时后，加入另外的hatu(114mg，0.30mmol，0.5当量)以确保反应完全。另外24小时后，将混合物用etoac稀释，并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，用盐水洗涤两次。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，12g二氧化硅柱，0-15％meoh/dcm，15分钟梯度)纯化，得到所需产物，为黄色油状物(0.25g，0.44mmol，74％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.82–7.75(m,1h),7.51(d,j＝7.4hz,1h),7.41(d,j＝8.5hz,1h),5.13(dd,j＝12.4,5.5hz,1h),4.76(s,2h),3.66–3.58(m,6h),3.53–3.45(m,4h),3.19(t,j＝5.6hz,2h),2.95–2.83(m,1h),2.80–2.67(m,2h),2.19–2.12(m,1h),1.41(s,9h).lcms563.34(m+h)。步骤2：合成n-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐

将(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.25g，0.44mmol，1当量)溶解于tfa(4.5ml)中，加热至50℃。3小时后，将混合物冷却至室温，用meoh稀释，减压浓缩。通过制备型hplc纯化，得到所需产物，为棕褐色固体(0.197g，0.342mmol，77％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.81(ddd,j＝8.4,7.4,1.1hz,1h),7.55–7.50(m,1h),7.43(d,j＝8.5hz,1h),5.13(dd,j＝12.7,5.5hz,1h),4.78(s,2h),3.74–3.66(m,6h),3.64(t,j＝5.4hz,2h),3.52(t,j＝5.3hz,2h),3.14–3.08(m,2h),2.89(ddd,j＝17.5,13.9,5.2hz,1h),2.80–2.66(m,2h),2.16(dtd,j＝13.0,5.7,2.7hz,1h).lcms463.36(m+h))。

步骤2：合成dbet24

在室温下将n-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.324ml，0.0324mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(13.0mg，0.324mmol，1当量)。加入dipea(16.9微升，0.0972mmol，3当量)和hatu(12.3mg，0.0324mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为灰白色固体(20.0mg，0.0236mmol，73％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.77–7.72(m,1h),7.49(d,j＝7.4hz,1h),7.45–7.35(m,5h),5.09(ddd,j＝12.3,5.4,3.7hz,1h),4.76(s,2h),4.60(dd,j＝8.9,5.3hz,1h),3.68–3.62(m,6h),3.59(t,j＝5.6hz,2h),3.54–3.48(m,2h),3.47–3.35(m,4h),2.84(ddd,j＝19.4,9.9,4.6hz,1h),2.77–2.69(m,2h),2.68(d,j＝1.8hz,3h),2.43(s,3h),2.12(dt,j＝9.8,5.3hz,1h),1.68(s,3h).lcms845.39(m+h)。

实施例25：合成dbet25

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(183微升，0.0183mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(s)-4-(4-氯苯基)-6-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-2,9-二甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-3-羧酸(8.16mg，0.0183mmol，1当量)。加入dipea(9.6微升，0.0550mmol，3当量)和hatu(7.0mg，0.0183mmol，1当量)。然后将混合物搅拌23小时，然后用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为黄色固体(4.39mg，0.00529mmol，29％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.82(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.55(d,j＝7.3hz,1h),7.45(d,j＝8.2hz,1h),7.43–7.31(m,4h),5.16–5.10(m,1h),4.77(d,j＝1.5hz,2h),4.56(s,1h),3.74(d,j＝1.8hz,3h),3.66–3.60(m,1h),3.50(dd,j＝16.5,7.3hz,1h),3.37–3.32(m,1h),3.28(s,3h),2.85(t,j＝7.2hz,2h),2.75(d,j＝7.8hz,1h),2.71(d,j＝0.9hz,3h),2.59(d,j＝1.0hz,3h),2.18–2.10(m,1h),1.36–1.24(m,4h).lcms829.38(m+h)。

实施例26：合成dbet26

在室温下将n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(186微升，0.0186mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(s)-4-(4-氯苯基)-6-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-2,9-二甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-3-羧酸(8.26mg，0.0186mmol，1当量)。加入dipea(9.7微升，0.0557mmol，3当量)和hatu(7.1mg，0.0186mmol，1当量)。然后将混合物搅拌23小时，然后用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为奶油色固体(6.34mg，0.00716mmol，38％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.83–7.78(m,1h),7.53(dd,j＝7.3,2.2hz,1h),7.45–7.38(m,3h),7.32(dd,j＝8.5,1.3hz,2h),5.16–5.08(m,1h),4.76(s,2h),4.56(s,1h),3.75(s,3h),3.66(dd,j＝15.9,8.7hz,1h),3.50(dd,j＝16.9,6.9hz,1h),3.32(d,j＝2.8hz,4h),2.84–2.74(m,3h),2.70(d,j＝1.1hz,3h),2.66–2.54(m,3h),2.14(d,j＝5.3hz,1h),1.62–1.22(m,12h).lcms885.48(m+h)。

实施例27：合成dbet27

将4-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐在dmf(257微升，0.0257mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(10.3mg，0.0257mmol，1当量)。随后加入dipea(13.4微升，0.0771mmol，3当量)和hatu(9.8mg，0.0257mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为白色固体(14.53mg，0.0195mmol，76％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.75(ddd,j＝8.5,7.3,1.3hz,1h),7.47–7.30(m,6h),5.00(ddd,j＝25.4,12.2,5.2hz,1h),4.61(td,j＝9.4,5.0hz,1h),4.36(q,j＝4.8hz,2h),3.96–3.89(m,2h),3.74(q,j＝5.6hz,2h),3.53–3.41(m,3h),3.30–3.24(m,1h),2.78–2.53(m,6h),2.41(d,j＝3.9hz,3h),2.09–1.98(m,1h),1.67(d,j＝5.0hz,3h)。

实施例28：合成dbet28

将4-(4-氨基丁氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐在dmf(202微升，0.0202mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.1mg，0.0202mmol，1当量)。随后加入dipea(10.6微升，0.0606mmol，3当量)和hatu(7.7mg，0.0202mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌18.5小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为奶油色固体(10.46mg，0.0144mmol，71％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.76(t,j＝7.5hz,1h),7.43(td,j＝6.5,2.5hz,4h),7.34(t,j＝8.8hz,2h),5.08–4.98(m,1h),4.64(td,j＝9.1,5.0hz,1h),4.26(t,j＝5.3hz,2h),3.57–3.32(m,4h),2.84–2.59(m,6h),2.45–2.37(m,3h),2.08–2.01(m,1h),2.00–1.91(m,2h),1.82(dq,j＝13.8,6.9hz,2h),1.68(d,j＝11.7hz,3h).lcms728.38(m+h)。

实施例29：合成dbet29

将4-((6-氨基己基)氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮在dmf(205微升，0.0205mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.2mg，0.0205mmol，1当量)。随后加入dipea(10.7微升，0.0614mmol，3当量)和hatu(7.8mg，0.0205mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌19小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为白色固体(8.04mg，0.0106mmol，52％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.75–7.71(m,1h),7.51–7.34(m,6h),5.07(ddd,j＝12.1,5.4,2.4hz,1h),4.62(dd,j＝9.0,5.2hz,1h),4.22(t,j＝6.4hz,2h),3.44–3.32(m,2h),3.29–3.21(m,2h),2.88–2.65(m,6h),2.43(s,3h),2.13–2.06(m,1h),1.86(dt,j＝13.9,6.7hz,2h),1.68(s,3h),1.59(dq,j＝14.2,7.0hz,4h),1.54–1.45(m,2h).lcms756.40(m+h)。

实施例30：合成dbet30

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(163微升，0.0163mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(s)-4-(4-氯苯基)-3,9-二甲基-6-(2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-2-羧酸(9.31mg，0.0163mmol，1当量)。加入dipea(8.5微升，0.0490mmol，3当量)和hatu(6.2mg，0.0163mmol，1当量)。然后将混合物搅拌23.5小时，然后通过制备型hplc纯化得到所需产物，为黄色油状物(11.48mg，0.0107mmol，66％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.82–7.78(m,1h),7.54–7.35(m,6h),5.09(td,j＝12.7,5.4hz,1h),4.77–4.70(m,3h),3.56–3.31(m,12h),3.23(dd,j＝8.0,6.0hz,3h),3.05(d,j＝3.2hz,2h),2.93–2.81(m,5h),2.78–2.63(m,5h),2.15–2.05(m,2h),1.96–1.86(m,4h),1.68(s,4h).lcms954.55(m+h)。

实施例31：合成dbet31

在室温下将n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(153微升，0.0153mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(s)-4-(4-氯苯基)-3,9-二甲基-6-(2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-2-羧酸(8.7mg，0.0153mmol，1当量)。加入dipea(7.9微升，0.0458mmol，3当量)和hatu(5.8mg，0.0153mmol，1当量)。然后将混合物搅拌25小时，然后通过制备型hplc纯化，得到所需产物，为亮棕色(不像浅褐色，类似砖色)油状物(9.52mg，0.00847mmol，55％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.81(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.59–7.40(m,6h),5.12(dd,j＝12.5,5.4hz,1h),4.75(s,2h),4.71(t,j＝7.4hz,1h),3.53–3.34(m,8h),3.29–3.11(m,6h),3.03–2.61(m,13h),2.15(s,1h),2.01–1.84(m,5h),1.59(s,4h),1.37(s,8h).lcms1010.62(m+h)。

实施例32：合成dbet32

在室温下将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(180微升，0.01当量)中的0.1m溶液加入4-(4-(4-((4-((3-(n-(叔丁基)氨磺酰基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酸(10.7mg，0.0180mmol，1当量)。加入dipea(9.4微升，0.0539mmol，3当量)和hatu(6.8mg，0.0180mmol，1当量)，将混合物搅拌19小时。然后将混合物用甲醇稀释并通过制备型hplc纯化，得到所需产物，为棕色油状物(4.40mg，0.00449mmol，25％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ8.08(d,j＝13.6hz,1h),7.84–7.76(m,3h),7.63(s,1h),7.57–7.51(m,2h),7.41(d,j＝8.4hz,1h),7.22(td,j＝6.7,2.2hz,2h),7.03–6.97(m,2h),5.14(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),4.76(d,j＝16.8hz,2h),3.72(dt,j＝10.0,5.2hz,4h),3.34–3.33(m,1h),3.23–3.12(m,5h),2.97(dd,j＝8.8,4.0hz,3h),2.80–2.69(m,4h),2.64(dd,j＝7.6,5.5hz,1h),2.50(t,j＝6.8hz,1h),2.22(dd,j＝2.4,0.9hz,3h),2.17–2.11(m,1h),1.67–1.52(m,4h),1.18(d,j＝0.8hz,9h).lcms980.64(m+h)。

实施例33：合成dbet33

在室温下将n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(188微升，0.0188mmol，1当量)中的0.1m溶液加入4-(4-(4-((4-((3-(n-(叔丁基)氨磺酰基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酸(10.8mg，0.0188mmol，1当量)。加入dipea(9.8微升，0.0564mmol，3当量)和hatu(7.1mg，0.0188mmol，1当量)，将混合物搅拌23小时。然后将混合物用甲醇稀释并通过制备型hplc纯化，得到所需产物，为棕色残余物(7.41mg，0.00715mmol，38％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ8.06(s,1h),7.80(ddd,j＝10.5,7.6,3.2hz,3h),7.65(d,j＝4.5hz,1h),7.57–7.51(m,2h),7.41(dd,j＝8.4,2.9hz,1h),7.25(td,j＝6.7,2.9hz,2h),7.02(t,j＝8.0hz,2h),5.16–5.09(m,1h),4.75(d,j＝9.5hz,2h),3.76(dq,j＝16.0,5.3hz,4h),3.29–3.12(m,7h),3.00–2.67(m,7h),2.51(t,j＝6.8hz,1h),2.22(d,j＝3.1hz,3h),2.13(dtd,j＝10.4,5.7,3.1hz,1h),1.59–1.52(m,2h),1.51–1.43(m,2h),1.32(t,j＝16.6hz,8h),1.18(d,j＝1.3hz,9h).lcms1036.69(m+h)。

实施例34：合成dbet34

在室温下将n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(173微升，0.0173mmol，1当量)中的0.1m溶液加入4-(4-(4-((4-((3-(n-(叔丁基)氨磺酰基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酸(10.3mg，0.0173mmol，1当量)。加入dipea(9.0微升，0.0519mmol，3当量)和hatu(6.6mg，0.0173mmol，1当量)，将混合物搅拌25小时。然后将混合物用甲醇稀释并通过制备型hplc纯化，得到所需产物，为棕色残余物(7.99mg，0.00718mmol，42％)。

¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ8.06(s,1h),7.83–7.76(m,3h),7.65(s,1h),7.58–7.50(m,2h),7.43(dd,j＝17.7,8.4hz,1h),7.27–7.21(m,2h),7.02(t,j＝8.0hz,2h),5.13(dt,j＝12.7,5.2hz,1h),4.76(d,j＝12.4hz,2h),3.73(q,j＝6.3hz,4h),3.63–3.49(m,10h),3.41(q,j＝6.6hz,2h),3.27–3.15(m,5h),3.01–2.81(m,4h),2.79–2.63(m,5h),2.50(t,j＝6.8hz,1h),2.22(d,j＝2.3hz,3h),2.17–2.11(m,1h),1.88–1.70(m,4h),1.18(d,j＝1.2hz,9h).lcms1112.74(m+h)。

实施例35：合成dbet35

将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(185微升，0.0185mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(7.4mg，0.0185mmol，1当量)。随后加入dipea(9.6微升，0.0554mmol，3当量)和hatu(7.0mg，0.0185mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌17小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-15％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为白色固体(2.71mg，0.00351mmol，19％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.48–7.37(m,4h),7.34(t,j＝7.8hz,1h),7.14(dd,j＝7.4,2.4hz,1h),6.67(d,j＝8.1hz,1h),5.14(td,j＝13.5,5.2hz,1h),4.66–4.60(m,1h),4.59(d,j＝8.3hz,2h),4.43–4.31(m,2h),3.88(s,2h),3.25(dd,j＝14.8,7.1hz,4h),2.94–2.72(m,3h),2.68(d,j＝4.9hz,3h),2.49–2.40(m,4h),2.21–2.12(m,1h),1.68(s,3h),1.53(s,4h).lcms770.51(m+h)。

实施例36：合成dbet36

将n-(4-氨基丁基)-2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(222微升，0.0222毫摩尔，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.9mg，0.0222mmol，1当量)。随后加入dipea(11.6微升，0.0666mmol，3当量)和hatu(8.4mg，0.0222mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌17.5小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-15％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为白色固体(12.42mg，0.0156mmol，70％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.80–7.74(m,2h),7.68(d,j＝6.8hz,1h),7.42(q,j＝8.7hz,4h),5.11(dt,j＝12.3,4.6hz,1h),4.63(dd,j＝8.8,5.5hz,1h),4.10–4.00(m,2h),3.39(ddd,j＝14.9,8.8,2.5hz,1h),3.30–3.21(m,5h),2.88–2.76(m,1h),2.74–2.65(m,5h),2.44(s,3h),2.15–2.08(m,1h),1.69(s,3h),1.63–1.55(m,4h).lcms769.49(m+h)。

实施例37：合成dbet37

将6-氨基-n-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)己酰胺三氟乙酸盐在dmf(195微升，0.0195毫摩尔，1当量)中的溶液加入jq-酸(7.8mg，0.0195mmol，1当量)。随后加入dipea(10.2微升，0.0584mmol，3当量)和hatu(7.4mg，0.0195mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-15％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为白色固体(11.83mg，0.0151mmol，77％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.78–7.74(m,2h),7.71(dd,j＝5.3,3.5hz,1h),7.42(q,j＝8.5hz,4h),5.13(dd,j＝12.6,5.5hz,1h),4.82(s,2h),4.63(dd,j＝8.8,5.5hz,1h),3.40(ddd,j＝15.0,8.8,1.6hz,1h),3.30–3.21(m,3h),2.86(ddd,j＝18.4,14.6,4.8hz,1h),2.74(ddd,j＝13.8,10.1,2.8hz,2h),2.69(s,3h),2.44(s,3h),2.30(t,j＝7.4hz,2h),2.13(dtd,j＝12.9,4.9,2.3hz,1h),1.74–1.64(m,5h),1.59(p,j＝7.0hz,2h),1.46–1.38(m,2h).lcms783.47(m+h)。

实施例38：合成dbet38

步骤1：合成(3-(3-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯

将(3-(3-氨基丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(134.5mg，0.579mmol，1当量)溶解于dmf(5.79ml，0.05m)中，随后加入到2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(192.38mg，0.579mmol，1当量)。加入dipea(0.28ml，1.74mmol，3当量)和hatu(153.61mg，0.579mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物(157.1mg)。将粗物质通过柱色谱法(isco，12g二氧化硅柱，0-15％meoh/dcm25分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(121.3mg，0.222mmol，38.27％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.78(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.50(d,j＝7.3hz,1h),7.41(d,j＝8.5hz,1h),5.13(dd,j＝12.4,5.5hz,1h),4.75(s,2h),3.53–3.37(m,6h),3.14–3.07(m,2h),2.94–2.88(m,1h),2.79–2.68(m,2h),2.16(ddd,j＝12.8,6.6,2.7hz,1h),1.81(p,j＝6.4hz,2h),1.73–1.65(m,2h),1.40(s,9h).lcms547.6(m+h)。

步骤2：合成n-(3-(3-氨基丙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐

将tfa(2.22ml，0.1m)加入到(3-(3-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)丙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(121.3mg，0.222mmol，1当量)，将混合物在50℃下搅拌2小时。然后将混合物溶解于meoh中并减压浓缩，得到棕色油状物(114.1mg)，其不经进一步纯化即可继续使用。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.81–7.74(m,1h),7.50(d,j＝7.3hz,1h),7.41(d,j＝8.5hz,1h),5.12(dd,j＝12.7,5.5hz,1h),4.76(s,2h),3.57–3.52(m,2h),3.48(t,j＝5.9hz,2h),3.40(t,j＝6.6hz,2h),3.06(t,j＝6.5hz,2h),2.87(ddd,j＝14.1,10.1,7.0hz,1h),2.79–2.65(m,2h),2.15(dtd,j＝12.8,5.5,2.6hz,1h),1.92(dt,j＝11.7,5.9hz,2h),1.81(p,j＝6.3hz,2h).lcms447.2(m+h)。

步骤3：合成dbet38

在室温下将n-(3-(3-氨基丙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.215ml，0.0215mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.6mg，0.0215mmol，1当量)。加入dipea(11.2微升，0.0644mmol，3当量)和hatu(8.2mg，0.0215mmol，1当量)。19小时后，将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-15％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为奶油色固体(10.6mg，0.0127mmol，59％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.79–7.74(m,1h),7.50(d,j＝8.1hz,1h),7.46–7.36(m,5h),5.11(ddd,j＝12.4,5.5,1.7hz,1h),4.73(s,2h),4.62(ddd,j＝8.7,5.4,1.4hz,1h),3.50(q,j＝6.3hz,4h),3.43(t,j＝6.5hz,2h),3.41–3.32(m,3h),3.29–3.24(m,1h),2.85(ddd,j＝18.3,14.6,4.2hz,1h),2.77–2.65(m,5h),2.43(s,3h),2.17–2.09(m,1h),1.80(h,j＝6.4hz,4h),1.68(s,3h).lcms829.32(m+h)。

实施例39：合成dbet39

在室温下将4-((10-氨基癸基)氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐在dmf(0.212ml，0.0212mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq酸(8.5mg，0.0212mmol，1当量)。加入dipea(11.1微升，0.0636mmol，3当量)和hatu(8.1mg，0.0212mmol，1当量)。19小时后，将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-15％meoh/dcm，25分钟梯度)和制备型hplc纯化，得到所需产物(0.39mg，0.00048mmol，2.3％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.77–7.73(m,1h),7.56–7.31(m,6h),5.11–5.06(m,1h),4.62(dd,j＝9.2,5.0hz,1h),4.58(s,2h),4.21(t,j＝6.3hz,2h),3.42–3.38(m,1h),3.24–3.20(m,1h),2.90–2.68(m,6h),2.45(d,j＝6.7hz,3h),2.11(s,1h),1.83(dd,j＝14.7,6.6hz,2h),1.70(s,3h),1.61–1.49(m,4h),1.32(d,j＝23.2hz,10h).lcms812.60(m+h)。

实施例40：合成dbet40

在室温下将4-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐在dmf(0.242ml，0.0242mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(9.7mg，0.0242mmol，1当量)。加入dipea(12.6微升，0.0726mmol，3当量)和hatu(9.2mg，0.0242mmol，1当量)。22小时后，将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)和制备型hplc纯化，得到所需产物，为棕色油状物(4.74mg，0.00601mmol，25％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.77–7.67(m,1h),7.52–7.36(m,5h),5.09–5.03(m,1h),4.64(d,j＝4.8hz,1h),4.40–4.32(m,2h),3.97–3.88(m,2h),3.81–3.74(m,2h),3.69–3.60(m,5h),3.55–3.38(m,4h),2.89–2.54(m,6h),2.45(d,j＝5.9hz,3h),2.11(s,1h),1.70(d,j＝8.6hz,3h).lcms788.42(m+h)。

实施例41：合成dbet41

步骤1：(4-((2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯

将(4-(氨基甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(183.14mg，0.755mmol，1当量)溶解于dmf(15.1ml，0.05m)中并加入到2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(250.90mg，0.755mmol，1当量)。加入dipea(0.374ml，2.265mmol，3当量)和hatu(296.67mg，0.755mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌20小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到浅棕色油状物。将粗物质通过柱色谱法(isco，12g硅胶柱，0-15％meoh/dcm25分钟梯度)纯化，得到浅棕色油状物(373.1mg，0.678mmol，89.8％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.10(s,2h),8.48(t,j＝5.8hz,1h),7.80(dd,j＝8.4,7.3hz,1h),7.49(d,j＝7.2hz,1h),7.40(d,j＝8.6hz,1h),7.26–7.08(m,4h),5.11(dd,j＝12.9,5.4hz,1h),4.86(s,2h),4.33(d,j＝3.9hz,2h),4.09(d,j＝5.3hz,2h),2.65–2.51(m,3h),2.07–1.99(m,1h),1.38(s,9h).lcms551.5(m+h)。

步骤2：合成n-(4-(氨基甲基)苄基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐

将tfa(6.77ml，0.1m)加入到(4-((2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(373.1mg，0.677mmol，1当量)，将混合物在50℃下搅拌1.5小时。然后将混合物溶解于meoh中并减压浓缩，得到棕色油状物(270.29mg)，其不经进一步纯化即可继续使用。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.11(s,1h),8.55(t,j＝6.2hz,1h),8.07(s,3h),7.81(dd,j＝8.5,7.3hz,1h),7.51(d,j＝7.2hz,1h),7.40(dd,j＝14.9,8.3hz,3h),7.31(d,j＝8.2hz,2h),5.11(dd,j＝12.9,5.4hz,1h),4.87(s,2h),4.37(d,j＝6.1hz,2h),4.01(q,j＝5.8hz,2h),2.66–2.51(m,3h),2.07–1.99(m,1h).lcms451.3(m+h)。

步骤3：合成dbet41

在室温下将n-(4-(氨基甲基)苄基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(0.237ml，0.0237mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(9.5mg，0.0237mmol，1当量)。23小时后，将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为奶油色固体(11.8mg，0.0142mmol，60％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.80–7.75(m,1h),7.51(dd,j＝7.3,1.5hz,1h),7.41(d,j＝8.4hz,1h),7.36(d,j＝2.2hz,4h),7.34–7.28(m,4h),5.10–5.00(m,1h),4.82(s,2h),4.67–4.64(m,1h),4.61–4.42(m,4h),4.34(dd,j＝14.9,12.8hz,1h),3.49(ddd,j＝14.8,9.5,5.2hz,1h),2.83–2.75(m,1h),2.73–2.61(m,5h),2.44–2.39(m,3h),2.06(ddq,j＝9.8,4.7,2.6hz,1h),1.66(d,j＝4.2hz,3h).lcms832.92(m+h)。

实施例42：合成dbet42

将5-氨基-n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)戊酰胺三氟乙酸盐在dmf(222微升，0.0222mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.9mg，0.0222mmol，1当量)。随后加入dipea(11.6微升，0.0666mmol，3当量)和hatu(8.4mg，0.0222mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌24小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为白色固体(12.23mg，0.0165mmol，74％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.76–7.71(m,1h),7.66–7.62(m,1h),7.51(td,j＝7.8,2.5hz,1h),7.45–7.35(m,4h),5.11(ddd,j＝13.2,11.3,5.2hz,1h),4.63(ddd,j＝8.8,5.7,3.2hz,1h),4.47(s,2h),3.45–3.32(m,3h),3.30–3.27(m,1h),2.90–2.80(m,1h),2.73–2.63(m,4h),2.49(t,j＝7.4hz,2h),2.46–2.38(m,4h),2.11(ddtd,j＝12.8,10.5,5.3,2.3hz,1h),1.84–1.75(m,2h),1.66(dd,j＝16.2,7.6hz,5h).lcms741.46(m+h)。

实施例43：合成dbet43

将7-氨基-n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)庚酰胺三氟乙酸盐在dmf(227微升，0.0227mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(9.1mg，0.0227mmol，1当量)。随后加入dipea(11.9微升，0.0681mmol，3当量)和hatu(8.6mg，0.0227mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌25.5小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为灰白色固体(12.58mg，0.0164mmol，72％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.71(d,j＝7.9hz,1h),7.64(d,j＝7.4hz,1h),7.51(t,j＝7.8hz,1h),7.46–7.38(m,4h),5.14(ddd,j＝13.3,5.2,2.2hz,1h),4.62(ddd,j＝8.6,5.6,2.1hz,1h),4.49–4.45(m,2h),3.39(ddd,j＝14.9,8.7,1.3hz,1h),3.30–3.24(m,3h),2.93–2.83(m,1h),2.79–2.65(m,4h),2.50–2.40(m,6h),2.16(ddq,j＝9.9,5.2,2.6hz,1h),1.78–1.70(m,2h),1.68(d,j＝2.1hz,3h),1.63–1.57(m,2h),1.50–1.42(m,4h).lcms769.55(m+h)。

实施例44：合成dbet44

将8-氨基-n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)辛酰胺三氟乙酸盐在dmf(217微升，0.0217mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.7mg，0.0217mmol，1当量)。随后加入dipea(11.3微升，0.0651mmol，3当量)和hatu(8.3mg，0.0217mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌20.5小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为奶油色固体(14.28mg，0.0182mmol，84％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.72–7.68(m,1h),7.64(d,j＝7.5hz,1h),7.51(t,j＝7.7hz,1h),7.46–7.39(m,4h),5.14(dt,j＝13.3,5.0hz,1h),4.62(dd,j＝8.8,5.4hz,1h),4.48–4.44(m,2h),3.40(ddd,j＝14.9,8.8,0.9hz,1h),3.26(dt,j＝13.2,6.9hz,3h),2.88(ddd,j＝18.7,13.5,5.4hz,1h),2.75(dddd,j＝17.6,7.1,4.5,2.4hz,1h),2.68(d,j＝2.2hz,3h),2.49–2.39(m,6h),2.17(ddt,j＝9.8,5.3,2.3hz,1h),1.76–1.70(m,2h),1.70–1.67(m,3h),1.61–1.54(m,2h),1.42(s,6h).lcms783.53(m+h)。

实施例45：合成dbet45

在室温下将n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(268微升，0.0268mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(r)-4-((4-环戊基-1,3-二甲基-2-氧代-1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b]吡嗪-6-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(11.0mg，0.0268mmol，1当量)。随后加入dipea(14.0微升，0.0804mmol，3当量)和hatu(10.2mg，0.0268mmol，1当量)，将混合物搅拌18.5小时。然后将混合物用甲醇稀释并通过制备型hplc纯化，得到所需产物，为深棕色固体(10.44mg，0.0108mmol，40％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ8.38(d,j＝8.4hz,1h),7.80–7.75(m,1h),7.55–7.48(m,1h),7.48–7.35(m,3h),7.27(d,j＝8.3hz,1h),6.45(d,j＝8.2hz,1h),5.12(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),4.72(d,j＝5.1hz,2h),4.53(s,1h),4.28(d,j＝6.8hz,1h),3.98(d,j＝4.1hz,3h),3.48–3.33(m,4h),2.90–2.82(m,1h),2.80–2.69(m,2h),2.18–2.01(m,4h),1.88–1.52(m,10h),1.34(d,j＝42.9hz,10h),1.17(d,j＝6.8hz,3h).lcms851.67(m+h)。

实施例46：合成dbet46

在室温下将n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(256微升，0.0256mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(r)-4-((4-环戊基-1,3-二甲基-2-氧代-1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b]吡嗪-6-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(10.5mg，0.0256mmol，1当量)。随后加入dipea(13.4微升，0.0767mmol，3当量)和hatu(9.7mg，0.0256mmol，1当量)，将混合物搅拌20小时。然后将混合物用甲醇稀释并通过制备型hplc纯化，得到所需产物，为深棕色固体(13.69mg，0.0132mmol，51％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ8.28–8.24(m,1h),7.74–7.71(m,1h),7.49(dd,j＝7.3,3.7hz,1h),7.39–7.34(m,2h),7.28–7.25(m,1h),7.14–7.10(m,1h),6.34(d,j＝8.3hz,1h),5.01–4.97(m,1h),4.62(s,2h),4.25(q,j＝6.7hz,1h),3.95(d,j＝5.4hz,3h),3.60(ddd,j＝9.0,6.1,1.6hz,8h),3.53–3.46(m,6h),3.40–3.37(m,2h),2.78(td,j＝11.1,6.6hz,3h),2.16–2.00(m,4h),1.84(ddt,j＝33.5,13.0,6.4hz,7h),1.75–1.60(m,6h),1.17(d,j＝6.8hz,3h).lcms927.74(m+h)。

实施例47：合成dbet50

在室温下将n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(200微升，0.0200mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(s)-4-(4-氯苯基)-6-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-3,9-二甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-2-羧酸(8.9mg，0.020mmol，1当量)。加入dipea(10.5微升，0.060mmol，3当量)和hatu(7.6mg，0.020mmol，1当量)。然后将混合物搅拌17小时，然后用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为奶油色固体(9.31mg，0.00968mmol，48％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.82–7.78(m,1h),7.52(dd,j＝7.1,1.6hz,1h),7.49–7.40(m,5h),5.10(ddd,j＝12.8,5.5,2.9hz,1h),4.74(s,2h),4.67(t,j＝7.1hz,1h),3.76(s,3h),3.62–3.50(m,14h),3.49–3.43(m,2h),3.40(q,j＝6.5hz,2h),2.87(ddd,j＝17.6,14.0,5.3hz,1h),2.79–2.67(m,5h),2.12(ddq,j＝10.3,5.4,2.9hz,1h),2.00(s,3h),1.86(q,j＝6.3hz,2h),1.80(p,j＝6.4hz,2h).lcms961.67(m+h)。

实施例48：合成dbet51

在室温下将n-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(200微升，0.0200mmol，1当量)中的0.1m溶液加入(s)-4-(4-氯苯基)-6-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-3,9-二甲基--6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-2-羧酸(8.9mg，0.020mmol，1当量)。加入dipea(10.5微升，0.060mmol，3当量)和hatu(7.6mg，0.020mmol，1当量)。然后将混合物搅拌17小时，然后用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为灰白色固体(8.38mg，0.00942mmol，47％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.80(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.52(dd,j＝7.2,1.3hz,1h),7.48–7.38(m,5h),5.08(ddd,j＝12.7,5.5,1.6hz,1h),4.74(d,j＝2.7hz,2h),4.66(t,j＝7.1hz,1h),3.75(d,j＝3.0hz,3h),3.65(t,j＝4.1hz,6h),3.59(t,j＝5.3hz,2h),3.57–3.49(m,4h),3.49–3.40(m,2h),2.93–2.84(m,1h),2.78–2.64(m,5h),2.15–2.09(m,1h),2.00(d,j＝0.9hz,3h).lcms889.58(m+h)。

实施例49：合成dbet52

在室温下将n-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(200μl，0.020mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.0mg，0.020mmol，1当量)。加入dipea(10.5微升，0.060mmol，3当量)和hatu(7.6mg，0.020mmol，1当量)。17.5小时后，将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为无色残余物(9.12mg，0.01025mmol，51％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.77(t,j＝7.9hz,1h),7.50(dd,j＝7.3,1.5hz,1h),7.47–7.36(m,5h),5.09(ddd,j＝13.0,7.6,5.5hz,1h),4.76(s,2h),4.62(dd,j＝9.1,5.1hz,1h),3.62(ddt,j＝17.3,11.2,6.5hz,12h),3.52–3.41(m,5h),3.28(d,j＝5.1hz,1h),2.90–2.81(m,1h),2.79–2.66(m,5h),2.44(s,3h),2.16–2.09(m,1h),1.69(s,3h).lcms889.38(m+h)。

实施例50：合成dbet53

在室温下将n-(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(200微升，0.020mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.0mg，0.020mmol，1当量)。加入dipea(10.5微升，0.060mmol，3当量)和hatu(7.6mg，0.020mmol，1当量)。17.5小时后，加入另外的hatu(7.6mg)和dipea(10.5微升)，并将混合物再搅拌5小时。将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物(3.66mg)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.79(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.51(d,j＝7.3hz,1h),7.45(d,j＝7.7hz,2h),7.43–7.36(m,3h),5.08(ddd,j＝12.7,5.5,2.2hz,1h),4.78–4.74(m,2h),4.62(dd,j＝9.1,5.1hz,1h),3.70–3.51(m,16h),3.50–3.41(m,5h),3.27(dd,j＝5.1,2.3hz,1h),2.87(ddt,j＝18.2,9.5,4.9hz,1h),2.78–2.66(m,5h),2.44(s,3h),2.16–2.09(m,1h),1.69(s,3h).lcms933.43(m+h)。

实施例51：合成dbet54

在室温下将n-(17-氨基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(200微升，0.020mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.0mg，0.020mmol，1当量)。加入dipea(10.5微升，0.060mmol，3当量)和hatu(7.6mg，0.020mmol，1当量)。16小时后，将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物(6.27mg，0.00641mmol，32％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.81–7.76(m,1h),7.51(d,j＝7.1hz,1h),7.47–7.38(m,5h),5.09(dd,j＝12.6,5.5hz,1h),4.77(s,2h),4.62(dd,j＝8.8,5.0hz,1h),3.67–3.55(m,20h),3.46(ddd,j＝20.1,10.2,4.7hz,5h),3.28(d,j＝5.1hz,1h),2.91–2.83(m,1h),2.78–2.68(m,5h),2.44(s,3h),2.16–2.10(m,1h),1.72–1.66(m,3h).lcms977.50(m+h)。

实施例52：合成dbet55

在室温下将n-(29-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24,27-九氧杂二十九烷基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(200微升，0.020mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.0mg，0.020mmol，1当量)。加入dipea(10.5微升，0.060mmol，3当量)和hatu(7.6mg，0.020mmol，1当量)。18小时后，混合物用etoac稀释，用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物(10.55mg，0.00914mmol，46％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.82(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.55(d,j＝7.0hz,1h),7.49–7.41(m,5h),5.13(dd,j＝12.6,5.5hz,1h),4.80(s,2h),4.65(dd,j＝9.1,5.1hz,1h),3.68–3.58(m,36h),3.53–3.44(m,5h),2.94–2.86(m,1h),2.81–2.70(m,5h),2.46(s,3h),2.19–2.13(m,1h),1.74–1.69(m,3h).lcms1153.59(m+h)。

实施例53：合成dbet56

在室温下将n-(35-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-十一氧杂三十五烷基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐在dmf(200μl，0.020mmol，1当量)中的0.1m溶液加入jq-酸(8.0mg，0.020mmol，1当量)。加入dipea(10.5微升，0.060mmol，3当量)和hatu(7.6mg，0.020mmol，1当量)。20小时后，混合物用etoac稀释，用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到所需产物，为油状残余物(9.03mg，0.00727mmol，36％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.81(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.53(d,j＝7.1hz,1h),7.50–7.40(m,5h),5.11(dd,j＝12.6,5.5hz,1h),4.78(s,2h),4.68(dd,j＝8.6,5.0hz,1h),3.69–3.56(m,44h),3.52–3.43(m,5h),3.34(dd,j＝7.9,3.5hz,1h),2.88(ddd,j＝18.0,14.0,5.2hz,1h),2.79–2.68(m,5h),2.46(s,3h),2.17–2.12(m,1h),1.71(s,3h).lcms1241.60(m+h).

实施例54：合成dbet57

步骤1：合成2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮

将4-氟异苯并呋喃-1,3-二酮(200mg，1.20mmol，1当量)在acoh(4.0ml，0.3m)中的溶液加入2,6-二氧代哌啶-3-胺盐酸盐(218mg，1.32mmol，1.1当量)和乙酸钾(366mg，3.73mmol，3.1当量)。将反应混合物加热至90℃过夜，然后用水稀释至20ml，并在冰上冷却30分钟。将所得浆液过滤，黑色固体通过硅胶快速柱色谱法(2％meoh/ch2cl2，rf＝0.3)纯化，得到标题化合物，为白色固体(288mg，86％)。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.15(s,1h),7.96(ddd,j＝8.3,7.3,4.5hz,1h),7.82–7.71(m,2h),5.17(dd,j＝13.0,5.4hz,1h),2.90(ddd,j＝17.1,13.9,5.4hz,1h),2.65–2.47(m,2h),2.10–2.04(m,1h),ms(esi)计算值c13h10fn2o4[m+h]⁺277.06，实测值277.25。

步骤2：合成(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯

将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(174mg，0.630mmol，1当量)在dmf(6.3ml，0.1m)中的搅拌溶液加入dipea(220μl，1.26mmol，2当量)和1-boc-乙二胺(110μl，0.693mmol，1.1当量)。将反应混合物加热至90℃过夜，随后将其冷却至室温并溶解于etoac(30ml)和水(30ml)中。有机层用盐水洗涤(3×20ml)，用na2so4干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶快速柱色谱法(0→10％meoh/ch2cl2)纯化，得到标题化合物，为黄色固体(205mg，79％)。¹hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.08(bs,1h),7.50(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.12(d,j＝7.1hz,1h),6.98(d,j＝8.5hz,1h),6.39(t,j＝6.1hz,1h),4.96–4.87(m,1h),4.83(bs,1h),3.50–3.41(m,2h),3.41–3.35(m,2h),2.92–2.66(m,3h),2.16–2.09(m,1h),1.45(s,9h)；ms(esi)计算值c20h25n4o6[m+h]⁺417.18，实测值417.58。

步骤3：合成2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙-1-胺2,2,2-三氟乙酸盐

将(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(205mg，0.492mmol，1当量))在二氯甲烷(2.25ml)中的搅拌溶液加入三氟乙酸(0.250ml)。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后真空除去挥发物。得到标题化合物，为黄色固体(226mg，>95％)，其不经进一步纯化即可使用。¹hnmr(500mhz,meod)δ7.64(d,j＝1.4hz,1h),7.27–7.05(m,2h),5.10(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),3.70(t,j＝6.0hz,2h),3.50–3.42(m,2h),3.22(t,j＝6.0hz,1h),2.93–2.85(m,1h),2.80–2.69(m,2h),2.17–2.10(m,1h)；ms(esi)计算值c15h17n4o4[m+h]⁺317.12，实测值317.53。

步骤2：合成dbet57

将jq-酸(8.0mg，0.0200mmol，1当量)和2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙-1-胺2,2,2-三氟乙酸盐(8.6mg，0.0200mmol，1当量)在室温下溶解于dmf(0.200ml，0.1m)中。随后加入dipea(17.4μl，0.100mmol，5当量)和hatu(7.59mg，0.0200mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物溶解于etoac(15ml)中，用饱和碳酸氢钠(水溶液)(15ml)、水(15ml)和盐水(3×15ml)洗涤。将有机层用na2so4干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶快速柱色谱法(ch2cl2中的0→10％meoh，rf＝0.3(ch2cl2中的10％meoh))纯化，得到标题化合物，为亮黄色固体(11.2mg，80％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.49(bs,0.6h),8.39(bs,0.4h),7.51–7.43(m,1h),7.38(d,j＝7.8hz,2h),7.29(dd,j＝8.8,1.7hz,2h),7.07(dd,j＝7.1,4.9hz,1h),6.97(dd,j＝8.6,4.9hz,1h),6.48(t,j＝5.9hz,1h),6.40(t,j＝5.8hz,0.6h),4.91–4.82(m,0.4h),4.65–4.60(m,1h),3.62–3.38(m,6h),2.87–2.64(m,3h),2.63(s,3h),2.40(s,6h),2.12–2.04(m,1h),1.67(s,3h)，旋转异构体；ms(esi)计算值c34h32cln8o5s[m+h]⁺700.19，实测值700.34。

实施例55：合成dgr1

实施例56：合成dgr2

实施例57：合成dgr3

实施例58：合成dfkbp-1

(1)合成slf-琥珀酸酯

将slf(25mg，2.5ml的10mg/mlmeoac溶液，0.0477mmol，1当量)与dmf(0.48ml，0.1m)和琥珀酸酐(7.2mg，0.0715mmol，1.5当量)合并，并在室温下搅拌24小时。观察到低转化率，将混合物置于n2流下以除去meoac。加入另外的0.48mldmf，再加入7.2mg琥珀酸酐和dmap(5.8mg，0.0477mmol，1当量)。然后将混合物再搅拌24小时，然后通过制备型hplc纯化，得到作为黄色油状物的slf-琥珀酸酯(24.06mg，0.0385mmol，81％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.62(d,j＝10.7hz,1h),7.44(d,j＝8.0hz,1h),7.26(td,j＝7.9,2.7hz,1h),7.07–6.97(m,1h),6.80(dd,j＝8.1,2.1hz,1h),6.74–6.66(m,2h),5.73(dd,j＝8.1,5.5hz,1h),5.23(d,j＝4.8hz,1h),3.83(s,3h),3.81(s,3h),3.39–3.29(m,4h),3.21(td,j＝13.2,3.0hz,1h),2.68–2.50(m,5h),2.37–2.19(m,2h),2.12–2.02(m,1h),1.79–1.61(m,4h),1.49–1.30(m,2h),1.27–1.05(m,6h),0.82(dt,j＝41.2,7.5hz,3h).lcms624.72(m+h)。

(2)合成dfkbp-1

将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(9.9mg，0.0192mmol，1当量)加入到slf琥珀酸酯(11.98mg，0.0192mmol，1当量)的0.192mldmf(0.1m)溶液中。加入dipea(10.0微升，0.0575mmol，3当量)，随后加入hatu(7.3mg，0.0192mmol，1当量)。将混合物搅拌17小时，然后用meoh稀释并通过制备型hplc纯化，得到dfkbp-1(7.7mg，0.00763mmol，40％)，为黄色固体。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.81(s,1h),7.77–7.70(m,1h),7.55–7.49(m,2h),7.26(dd,j＝8.0,5.3hz,2h),7.05–6.99(m,1h),6.77(d,j＝8.8hz,1h),6.66(d,j＝6.8hz,2h),5.77–5.72(m,1h),5.24(d,j＝4.8hz,1h),4.99(dd,j＝12.3,5.7hz,1h),4.68–4.59(m,2h),3.82(s,3h),3.81(s,3h),3.32(dt,j＝3.3,1.6hz,4h),3.26–3.14(m,3h),2.79(dd,j＝18.9,10.2hz,3h),2.64–2.48(m,5h),2.34(d,j＝14.4hz,1h),2.22(d,j＝9.2hz,1h),2.14–2.02(m,2h),1.78–1.49(m,9h),1.43–1.30(m,2h),1.20–1.04(m,6h),0.90–0.76(m,3h).13cnmr(100mhz,cd3od)δ208.51,173.27,172.64,171.63,169.93,169.51,168.04,167.69,167.09,166.71,154.92,149.05,147.48,140.76,138.89,137.48,133.91,133.67,129.36,122.19,120.61,120.54,119.82,118.41,118.12,117.79,112.12,111.76,68.54,56.10,55.98,51.67,46.94,44.57,39.32,39.01,38.23,32.64,31.55,31.43,26.68,26.64,25.08,23.52,23.21,22.85,21.27,8.76.lcms1009.66(m+h)。

实施例59：合成dfkbp-2

(1)合成(1-氯-2-氧代-7,10,13-三氧杂-3-氮杂十六烷-16-基)氨基甲酸叔丁酯

将(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，3.12mmol，1当量)溶解于thf(31ml，0.1m)中。加入dipea(0.543ml，3.12mmol，1当量)，将溶液冷却至0℃。加入氯乙酰氯(0.273ml，3.43mmool，1.1当量)，将混合物缓慢升温至室温。24小时后，将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水、然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物(1.416g)，其不经进一步纯化即可继续使用。

¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.24(s,1h),5.00(s,1h),3.98–3.89(m,2h),3.54(dddt,j＝17.0,11.2,5.9,2.2hz,10h),3.47–3.40(m,2h),3.37–3.31(m,2h),3.17–3.07(m,2h),1.79–1.70(m,2h),1.67(p,j＝6.1hz,2h),1.35(s,9h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ165.83,155.97,78.75,70.49,70.47,70.38,70.30,70.14,69.48,42.61,38.62,38.44,29.62,28.59,28.40.lcms397.37(m+h)。

(2)合成3-((2,2-二甲基-4,20-二氧代-3,9,12,15-四氧杂-5,19-二氮杂二十一烷-21-基)氧基)邻苯二甲酸二甲酯

将(1-氯-2-氧代-7,10,13-三氧杂-3-氮杂十六烷-16-基)氨基甲酸叔丁酯(1.41g，3.12mmol，1当量)溶解于mecn(32ml，0.1m)。加入3-羟基邻苯二甲酸二甲酯(0.721g，3.43mmol，1.1当量)和碳酸铯(2.80g，8.58mmol，2.75当量)。烧瓶装有回流冷凝器，加热至80℃保持19小时。将混合物冷却至室温并用水稀释，用氯仿萃取一次，用etoac萃取两次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗物质通过柱色谱法(isco，24g二氧化硅柱，0-15％meoh/dcm，22分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(1.5892g，2.78mmol，两个步骤共89％)。

¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.52(d,j＝7.8hz,1h),7.35(t,j＝8.1hz,1h),7.04(d,j＝8.3hz,1h),7.00(t,j＝5.3hz,1h),5.06(s,1h),4.46(s,2h),3.83(s,3h),3.78(s,3h),3.47(ddd,j＝14.9,5.5,2.8hz,8h),3.39(dt,j＝9.4,6.0hz,4h),3.29(q,j＝6.5hz,2h),3.09(d,j＝6.0hz,2h),1.70(p,j＝6.5hz,2h),1.63(p,j＝6.3hz,2h),1.31(s,9h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ167.68,167.36,165.45,155.93,154.41,130.87,129.60,125.01,123.20,117.06,78.60,70.40,70.17,70.06,69.39,68.67,68.25,52.77,52.57,38.38,36.58,29.55,29.20,28.34.lcms571.47(m+h)。

(3)合成n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐

将3-((2,2-二甲基-4,20-二氧代-3,9,12,15-四氧杂-5,19-二氮杂二十一烷-21-基)氧基)邻苯二甲酸二甲酯(1.589g，2.78mmol，1当量)溶解于etoh(14ml，0.2m)中。加入3mnaoh水溶液(2.8ml，8.34mmol，3当量)，将混合物加热至80℃达22小时。然后将混合物冷却至室温，用50mldcm和20ml0.5mhcl稀释。分离各层，有机层用25ml水洗涤。合并水层，用50ml氯仿萃取三次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到1.53g物质，其未经进一步纯化即可继续使用。lcms553.44。

将所得物质(1.53g)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.480g，2.92mmol，1当量)溶解于吡啶(11.7ml，0.25m)中，加热至110℃达17小时。将混合物冷却至室温并减压浓缩，得到粗(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-2-氧代-7,10,13-三氧杂-3-氮杂十六烷-16-基)氨基甲酸叔丁酯(3.1491g)，其为黑色泥状物，其不经进一步纯化即可继续使用。lcms635.47。

将粗(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-2-氧代-7,10,13-三氧杂-3-氮杂十六烷-16-基)氨基甲酸叔丁酯(3.15g)溶解于tfa(20ml)中，加热至50℃2.5小时。将混合物冷却至室温，用meoh稀释并减压浓缩。通过制备型hplc纯化该物质，得到n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(1.2438g，1.9598mmol，3个步骤共71％)，为深红色油状物。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.77(dd,j＝8.3,7.5hz,1h),7.49(d,j＝7.3hz,1h),7.40(d,j＝8.5hz,1h),5.12(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),4.75(s,2h),3.68–3.51(m,12h),3.40(t,j＝6.8hz,2h),3.10(t,j＝6.4hz,2h),2.94–2.68(m,3h),2.16(dtd,j＝12.6,5.4,2.5hz,1h),1.92(p,j＝6.1hz,2h),1.86–1.77(m,2h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ173.17,169.97,168.48,166.87,166.30,154.82,136.89,133.41,120.29,117.67,116.58,69.96,69.68,69.60,68.87,68.12,67.92,49.19,38.62,36.14,30.80,28.92,26.63,22.22.lcms536.41(m+h).

(4)合成dfkbp-2

将n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(12.5mg，0.0193mmol，1当量)加入到slf-琥珀酸酯(12.08mg，0.0193mmol，1当量)的0.193mldmf(0.1m)溶液中。加入dipea(10.1微升，0.0580mmol，3当量)和hatu(7.3mg，0.0193mmol，1当量)，将混合物搅拌19小时。然后将混合物用meoh稀释并通过制备型hplc纯化，得到dfkbp-2(9.34mg，0.00818mmol，42％)，为黄色油状物。

¹hnmr(400mhz,50％meod/氯仿-d)δ7.76–7.70(m,1h),7.58–7.45(m,3h),7.26(t,j＝8.2hz,2h),7.05–6.98(m,1h),6.77(d,j＝7.9hz,1h),6.71–6.63(m,2h),5.73(dd,j＝8.1,5.6hz,1h),5.23(d,j＝5.4hz,1h),5.03–4.95(m,1h),4.64(s,2h),3.82(s,3h),3.80(s,3h),3.62–3.52(m,8h),3.47(t,j＝6.1hz,2h),3.44–3.33(m,3h),3.27–3.14(m,3h),2.84–2.70(m,3h),2.64–2.47(m,6h),2.34(d,j＝14.1hz,1h),2.24(dd,j＝14.3,9.3hz,2h),2.13–2.00(m,2h),1.83(p,j＝6.3hz,2h),1.67(dtd,j＝38.4,16.8,14.8,7.0hz,7h),1.51–1.26(m,3h),1.22–1.05(m,6h),0.80(dt,j＝39.8,7.5hz,3h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ208.64,173.39,173.01,171.76,170.11,169.62,168.24,167.92,167.36,166.69,155.02,149.23,147.66,140.94,139.18,137.57,134.09,133.91,129.49,122.32,120.75,120.52,119.93,118.42,117.75,112.33,111.98,70.77,70.51,70.40,69.45,69.04,68.48,56.20,56.10,51.88,47.09,44.78,38.40,37.48,36.91,32.80,32.71,31.70,31.59,31.55,29.53,29.30,26.77,25.22,23.63,23.33,22.98,21.43.lcms1141.71(m+h)。

实施例60：合成dfkbp-3

根据dfkbp-1的合成步骤(1)制备slf-琥珀酸酯。

将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(0.233ml，0.0233mmol，1当量)的0.1m溶液加入到2-(3-((r)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((s)-1-(3,3-二甲基-2-氧代戊酰基)吡咯烷-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸(13.3mg，0.0233mmol，1当量)。加入dipea(12.2微升，0.0700mmol，3当量)，随后加入hatu(8.9mg，0.0233mmol，1当量)。将混合物搅拌23小时，然后用meoh稀释并通过制备型hplc纯化，得到白色固体(10.72mgmg，0.0112mmol，48％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.79–7.74(m,1h),7.52(d,j＝7.4hz,1h),7.33(d,j＝8.4hz,1h),7.26(t,j＝8.1hz,1h),6.97–6.90(m,2h),6.89–6.84(m,1h),6.79(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),6.73–6.64(m,2h),5.73–5.65(m,1h),5.07–4.99(m,1h),4.67(s,2h),4.57–4.51(m,1h),4.48(dd,j＝5.7,2.5hz,2h),3.82(d,j＝1.9hz,3h),3.80(s,3h),3.66–3.39(m,3h),2.88–2.48(m,6h),2.42–1.87(m,9h),1.73–1.51(m,6h),1.19–0.92(m,6h),0.75(dt,j＝56.7,7.5hz,3h).lcms954.52(m+h)。

实施例61：合成dfkbp-4

根据dfkbp-1的合成步骤(1)制备slf-琥珀酸酯。

将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异二氢吲哚-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(0.182ml，0.0182mmol，1当量)的0.1m溶液加入到2-(3-((r)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((s)-1-(3,3-二甲基-2-氧代戊酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸(10.6mg，0.0182mmol，1当量)。加入dipea(9.5微升，0.0545mmol，3当量)，随后加入hatu(6.9mg，0.0182mmol，1当量)。将混合物搅拌26小时，然后用meoh稀释并通过制备型hplc纯化，得到白色固体(9.74mg，0.01006mmol，55％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.75(dd,j＝8.3,7.4hz,1h),7.53(d,j＝2.3hz,1h),7.33–7.25(m,2h),7.00–6.84(m,3h),6.79(dd,j＝8.1,2.5hz,1h),6.72–6.65(m,2h),5.75–5.70(m,1h),5.23(d,j＝4.9hz,1h),5.05–4.96(m,1h),4.66(s,2h),4.46(s,2h),3.82(s,3h),3.81(s,3h),3.39–3.32(m,4h),3.20–3.12(m,1h),2.82–2.69(m,3h),2.62–2.49(m,2h),2.37–2.00(m,5h),1.78–1.30(m,11h),1.24–1.08(m,6h),0.81(dt,j＝32.9,7.5hz,3h).lcms968.55(m+h)。

实施例62：合成dfkbp-5

根据dfkbp-1的合成步骤(1)制备slf-琥珀酸酯。

将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异二氢吲哚-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(0.205ml，0.0205mmol，1当量)的0.1m溶液加入到2-(3-((r)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((s)-1-(2-苯乙酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸(11.8mg，0.0205mmol，1当量)。加入dipea(10.7微升，0.0615mmol，3当量)，随后加入hatu(7.8mg，0.0205mmol，1当量)。将混合物搅拌29小时，然后用meoh稀释并通过制备型hplc纯化，得到白色固体(10.62mg，0.01106mmol，54％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.77–7.72(m,1h),7.52(s,1h),7.31–7.11(m,7h),6.92–6.77(m,4h),6.68–6.62(m,2h),5.70–5.64(m,1h),5.38(d,j＝3.8hz,1h),4.99(d,j＝4.6hz,1h),4.65(s,2h),4.45–4.39(m,2h),3.80(dd,j＝6.7,2.4hz,8h),3.13–3.03(m,1h),2.83–2.68(m,3h),2.63–2.45(m,3h),2.34–1.93(m,6h),1.71–1.52(m,7h),1.34–1.20(m,3h).lcms960.54(m+h)。

实施例63：合成dfkbp-6

将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(11.9mg，0.0231mmol，1当量)加入到2-(3-((r)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((s)-1-((s)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸(16.0mg，0.0231mmol，1当量)在0.231mldmf(0.1m)中的溶液。加入dipea(12.1微升，0.0692mmol，3当量)和hatu(8.8mg，0.0231mmol，1当量)，将混合物搅拌21小时。将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到dfkbp-6，为白色固体(17.3mg，0.0161mmol，70％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.78(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.51(d,j＝7.3hz,1h),7.39(dd,j＝8.3,2.1hz,1h),7.26–7.17(m,1h),6.91–6.83(m,2h),6.80(dd,j＝8.1,4.8hz,1h),6.77–6.69(m,2h),6.63(d,j＝8.2hz,2h),6.13(dd,j＝8.3,5.8hz,1h),5.40(s,1h),5.12(td,j＝12.6,5.4hz,1h),4.71(d,j＝3.0hz,2h),4.56(dd,j＝14.9,1.6hz,1h),4.41(dd,j＝14.9,1.4hz,1h),4.12(d,j＝13.9hz,1h),3.90–3.64(m,14h),3.22(dd,j＝17.7,5.7hz,3h),2.92–2.79(m,2h),2.74(dd,j＝12.6,4.0hz,2h),2.68–2.53(m,2h),2.53–2.40(m,2h),2.24(d,j＝12.4hz,1h),2.16–2.08(m,1h),2.08–1.97(m,2h),1.95–1.86(m,1h),1.73(dd,j＝13.8,7.0hz,1h),1.69–1.61(m,2h),1.56(s,2h),1.48(s,4h),1.37–1.12(m,3h),0.93–0.79(m,3h).lcms1078.50(m+h)。

实施例64：合成dfkbp-7

将n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(12.3mg，0.0189mmol，1当量)加入到2-(3-((r)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((s)-1-((s)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸(13.1mg，0.0189mmol，1当量)在0.189mldmf的溶液(0.1m)中。加入dipea(9.9微升，0.0566mmol，3当量)和hatu(7.2mg，0.0189mmol，1当量)，将混合物搅拌17小时。将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到dfkbp-7，为白色固体(17.2mg，0.0142mmol，75％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.81-7.76(m,1h),7.52(d,j＝7.4hz,1h),7.40(d,j＝8.5hz,1h),6.87(q,j＝6.2,5.5hz,2h),6.84–6.81(m,1h),6.78-6.73(m,2h),6.67–6.62(m,2h),6.12(dd,j＝8.1,5.8hz,1h),5.41(d,j＝3.9hz,1h),5.11(dd,j＝12.6,5.5hz,1h),4.73(s,2h),4.54(d,j＝15.0hz,1h),4.41(d,j＝15.0hz,1h),4.12(d,j＝13.6hz,1h),3.86(t,j＝7.3hz,1h),3.83–3.64(m,13h),3.59-3.45(m,9h),3.44-3.33(m,4h),3.25(dq,j＝13.3,6.8hz,2h),2.88–2.80(m,1h),2.77–2.59(m,3h),2.56-2.40(m,2h),2.30-2.22(m,1h),2.17-1.88(m,5h),1.87-1.53(m,8h),1.41-1.14(m,6h),0.91-0.84(m,3h).lcms1210.72(m+h)。

实施例65：合成dfkbp-8

将n-(6-氨基己基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(12.7mg，0.0233mmol，1.3当量)加入到2-(3-((r)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((s)-1-((s)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸(12.4mg，0.0179mmol，1当量)在0.233mldmf(0.1m)的溶液中。加入dipea(9.3微升，0.0537mmol，3当量)和hatu(6.8mg，0.0179mmol，1当量)，将混合物搅拌22小时。将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，15分钟梯度)纯化，得到dfkbp-8，为白色固体(3.58mg，0.00324mmol，18％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.84–7.77(m,1h),7.53(d,j＝7.2hz,1h),7.42(d,j＝8.5hz,1h),7.26–7.19(m,1h),6.88(t,j＝7.2hz,1h),6.81(d,j＝8.2hz,1h),6.78–6.71(m,2h),6.64(d,j＝14.8hz,2h),6.14–6.09(m,1h),5.41(s,1h),5.12(d,j＝5.2hz,1h),4.74(s,2h),4.55(d,j＝4.4hz,1h),4.42(d,j＝17.2hz,1h),4.11(s,1h),3.91–3.60(m,12h),3.27(d,j＝7.0hz,2h),3.15(s,1h),2.89–2.42(m,7h),2.23(s,1h),2.16–1.88(m,5h),1.78–1.16(m,14h),0.91–0.78(m,3h).lcms1106.69(m+h)。

实施例66：合成dfkbp-9

将n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(10.4mg，0.0181mmol，1当量)加入到2-(3-((r)-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1-(((s)-1-((s)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)丁酰基)哌啶-2-羰基)氧基)丙基)苯氧基)乙酸(12.5mg，0.0181mmol，1当量)在0.181mldmf(0.1m)的溶液中。加入dipea(9.5微升，0.0543mmol，3当量)和hatu(6.9mg，0.0181mmol，1当量)，将混合物搅拌22小时。将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到dfkbp-9，为白色固体(11.1mg，0.00982mmol，54％)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.80(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.53(d,.j＝7.3hz,1h),7.42(dd,j＝8.4,4.1hz,1h),7.26–7.20(m,1h),6.89(t,j＝7.5hz,2h),6.82(d,j＝8.2hz,1h),6.79–6.71(m,2h),6.68–6.60(m,2h),6.12(dd,j＝8.0,6.0hz,1h),5.41(s,1h),5.15–5.08(m,1h),4.74(d,j＝4.2hz,2h),4.61–4.54(m,1h),4.42(d,j＝15.0hz,1h),4.12(d,j＝13.3hz,1h),3.90–3.58(m,14h),3.30(d,j＝2.8hz,2h),3.14(t,j＝5.9hz,2h),2.91–2.68(m,4h),2.68–2.40(m,4h),2.25(d,j＝13.8hz,1h),2.17–2.08(m,1h),2.08–1.87(m,3h),1.78–1.43(m,8h),1.42–1.13(m,11h),0.87(t,j＝7.3hz,3h).lcms1134.62(m+h)。

实施例67：合成dfkbp

x2

室温下将fkbp*-酸(14.0mg，0.0202mmol，1当量)和2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙-1-胺、2,2,2-三氟乙酸盐(8.7mg，0.0202mmol，1当量)溶解于dmf(0.202ml，0.1m)中。随后加入dipea(17.6μl，0.101mmol，5当量)和hatu(7.6mg，0.0200mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物溶解于etoac(15ml)中，用饱和碳酸氢钠(水溶液)(15ml)、水(15ml)和盐水(3×15ml)洗涤。将有机层用na2so4干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶快速柱色谱法(0→10％meoh，在ch2cl2中，rf＝0.6(10％meoh/ch2cl2))纯化，得到标题化合物，为亮黄色固体(11.8mg，84％)。

¹hnmr(500mhz,meod)δ7.60–7.45(m,1h),7.28–7.19(m,1h),7.10–7.00(m,2h),6.95–6.87(m,2h),6.82–6.69(m,3h),6.68–6.62(m,2h),6.59–6.51(m,1h),6.21–6.15(m,1h),5.48(d,j＝5.4hz,0.4h),5.42(d,j＝5.4hz,0.6h),5.08(dd,j＝12.5,5.4hz,0.6h),4.99(dd,j＝12.6,5.4hz,0.6h),4.70(dd,j＝15.1,8.9hz,0.4h),4.62(d,j＝15.0hz,1h),4.58–4.46(m,0.4h),4.43(dd,j＝14.9,3.2hz,1h),4.11(t,j＝14.5hz,1h),3.88–3.70(m,15h),3.59–3.48(m,1h),3.43–3.29(m,2h),2.85–2.74(m,1h),2.74–2.61(m,2h),2.56–2.35(m,3h),2.23(d,j＝13.6hz,1h),2.10–1.98(m,3h),1.98–1.87(m,1h),1.80–1.70(m,1h),1.68–1.57(m,2h),1.57–1.38(m,2h),1.26–1.10(m,2h),0.88(t,j＝7.3hz,3h)，旋转异构体；ms(esi)计算值c53h62n5o14[m+h]⁺992.43，实测值992.58。

实施例68：合成二氨基乙基-乙酰基-沙利度胺三氟乙酸盐

(1)合成(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯

在0℃将(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.40ml，2.5mmol，1当量)溶解于thf(25ml，0.1m)和dipea(0.44ml，2.5mmol，1当量)中。加入氯乙酰氯(0.21ml，2.75mmol，1.1当量)，将混合物温热至室温。22小时后，将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到白色固体(0.66g，定量产率)，其无需进一步纯化即可继续使用下一步骤。

¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.16(s,1h),4.83(s,1h),4.04(s,2h),3.42(q,j＝5.4hz,2h),3.32(q,j＝5.6hz,2h),1.45(s,9h).lcms237.30(m+h)。

(2)合成3-(2-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)氨基)-2-氧代乙氧基)邻苯二甲酸二甲酯

将(2-(2-氯乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.66g，1当量)溶解于mecn(17ml，0.15m)中。随后加入3-羟基邻苯二甲酸二甲酯(0.578g，2.75mmol，1.1当量)和碳酸铯(2.24g，6.88mmol，2.75当量)。烧瓶装有回流冷凝器，并加热至80℃32小时。然后将混合物冷却至室温，用etoac稀释并用水洗涤三次。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g二氧化硅柱，0-15％meoh/dcm，15分钟梯度)纯化，得到黄色固体(0.394g，0.960mmol，2个步骤共38％)。

¹hnmr(400mhz，氯仿-d)δ7.65-7.56(m，1h)，7.50-7.41(m，1h)，7.27(s，1h)，7.11(dd，j＝8.4,4.1hz，2h)5.17(s，1h)，4.57(d，j＝6.3hz，2h)，3.94(s，2h)，3.88(s，2h)，3.40(p，j＝5.8hz，4h)，3.32-3.19，4h)，1.39(d，j＝5.7hz，13h)。13cnmr(100mhz，cdcl3)δ168.37,168.23,165.73,156.13,154.71,131.24,130.09,124.85,123.49,117.24,79.42,68.48,53.22,52.83,40.43,39.54,28.44。lcms411.45(m+h)。

(3)合成二氨基乙基-乙酰基-o-沙利度胺三氟乙酸盐

将3-(2-((2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)氨基)-2-氧代乙氧基)邻苯二甲酸二甲酯(0.39g，0.970mmol，1当量)溶解于etoh(9.7ml，0.1m)中。加入3mnaoh水溶液(0.97ml，2.91mmol，3当量)，将混合物加热至80℃3小时。将混合物冷却至室温，用50mldcm、5ml1mhcl和20ml水稀释。分离各层，有机层用20ml水洗涤。然后将合并的水层用50ml氯仿萃取3次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色固体(0.226g)，其不经进一步纯化即可继续使用。lcms383.36。

将所得黄色固体(0.226g)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.102g，0.6197mmol，1当量)溶解于吡啶(6.2ml，0.1m)中，加热至110℃16小时。将混合物冷却至室温，减压浓缩，得到(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯，为难溶的黑色焦油(0.663g)，其不经纯化(由于溶解性差)即可继续使用。lcms475.42(m+h)。

将粗(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯溶解于tfa(10ml)，并加热至50℃3.5小时，然后减压浓缩。通过制备型hplc纯化，得到红色油状物(176.7mg，0.362mmol，3个步骤共37％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.85–7.76(m,1h),7.57–7.50(m,1h),7.48–7.41(m,1h),5.13(dd,j＝12.6,5.5hz,1h),4.81(s,2h),3.62(td,j＝5.6,1.8hz,2h),3.14(t,j＝5.8hz,2h),2.97(s,1h),2.80–2.66(m,2h),2.15(dddd,j＝10.1,8.0,5.8,2.8hz,1h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ173.09,170.00,169.99,166.78,166.62,154.93,136.88,133.46,120.71,117.93,116.77,68.29,49.17,39.37,38.60,30.73,22.19.lcms375.30(m+h，游离碱)。

实施例69：合成二氨基丁基-乙酰基-o-沙利度胺三氟乙酸盐

根据fischeretal.nature,2014,512,49–53的方法制备二氨基丁基乙酰基-o-沙利度胺三氟乙酸盐。

实施例70：二氨基己基-乙酰基-o-沙利度胺三氟乙酸盐的合成

(1)合成(6-(2-氯乙酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯

将(6-氨基己基)氨基甲酸叔丁酯(0.224ml，1.0mmol，1当量)溶解于thf(10ml，0.1m)中。加入dipea(0.17ml，1.0mmol，1当量)，将混合物冷却至0℃。加入氯乙酰氯(88微升，1.1mmol，1.1当量)，将混合物温热至室温并搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到白色固体(0.2691g，0.919mmol，92％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ6.60(s,1h),4.51(s,1h),4.05(s,2h),3.30(q,j＝6.9hz,2h),3.11(d,j＝6.7hz,2h),1.57–1.46(m,4h),1.44(s,9h),1.38–1.32(m,4h).lcms293.39(m+h)。

(2)合成3-(2-((6-((叔丁氧羰基)氨基)己基)氨基)-2-氧代乙氧基)邻苯二甲酸二甲酯

将(6-(2-氯乙酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯(0.2691g，0.919mmol，1当量)溶解于mecn(9.2ml，0.1m)中。加入3-羟基邻苯二甲酸二甲酯(0.212g，1.01mmol，1.1当量)和碳酸铯(0.823g，2.53mmol，2.75当量)。烧瓶装有回流冷凝器并加热至80℃14小时。将混合物冷却至室温并用etoac稀释，用水洗涤三次，并用etoac反萃取一次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗物质通过柱色谱法(isco，12g二氧化硅柱，0-15％meoh/dcm，15分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(0.304g，0.651mmol，71％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.66–7.58(m,1h),7.44(td,j＝8.2,1.6hz,1h),7.15–7.08(m,1h),6.96(s,1h),4.56(s,2h),3.92(t,j＝1.6hz,3h),3.88(t,j＝1.6hz,3h),3.27(q,j＝6.9hz,2h),3.10–3.00(m,2h),1.41(s,13h),1.33–1.22(m,4h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ167.97,167.37,165.58,155.95,154.37,130.97,129.74,124.94,123.26,116.81,78.96,68.04,52.89,52.87,52.69,52.67,40.41,38.96,29.88,29.13,28.39,26.33,26.30.lcms467.49。

(3)合成二氨基己基-乙酰基-o-沙利度胺三氟乙酸盐

将3-(2-((6-((叔丁氧基羰基)氨基)己基)氨基)-2-氧代乙氧基)邻苯二甲酸二甲酯(0.304g，0.651mmol，1当量)溶解于etoh(6.5ml，0.1m)中。加入3mnaoh水溶液(0.65ml，1.953mmol，3当量)，将混合物加热至80℃18小时。将混合物冷却至室温，并用50mldcm和10ml0.5mhcl稀释。分离各层，有机层用20ml水洗涤。然后将合并的水层用氯仿萃取3次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色泡沫(0.290g)，其不经进一步纯化即可继续使用。lcms439.47。

将所得黄色固体(0.290g)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.113g，0.69mmol，1当量)溶解于吡啶(6.9ml，0.1m)中，加热至110℃17小时。将混合物冷却至室温，减压浓缩，得到(6-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯，为黑色固体(0.4216g)，其不经纯化(由于溶解性差)即可继续使用。lcms531.41(m+h)。

将粗(6-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯(0.4216g)溶解于tfa(10ml)中，并加热至50℃2小时。将混合物减压浓缩，然后减压浓缩。通过制备型hplc纯化，得到棕色固体(379.2mg)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.79(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.52(d,j＝7.2hz,1h),7.42(d,j＝8.4hz,1h),5.13(dd,j＝12.6,5.5hz,1h),4.75(s,2h),3.32(t,j＝7.6hz,2h),2.96–2.89(m,2h),2.89–2.65(m,3h),2.16(ddt,j＝10.4,5.4,2.9hz,1h),1.63(dp,j＝20.6,7.1hz,4h),1.51–1.34(m,4h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.57,171.42,169.90,168.24,167.79,156.23,138.23,134.87,121.69,119.22,117.98,69.36,50.53,40.64,39.91,32.14,30.01,28.44,27.23,26.96,23.63.lcms431.37(m+h)。

实施例71：合成二氨基辛基-乙酰基-o-沙利度胺三氟乙酸盐

(1)合成(8-(2-氯乙酰氨基)辛基)氨基甲酸叔丁酯

将辛烷-1,8-二胺(1.65g，11.45mmol，5当量)溶解于氯仿(50ml)中。在室温下缓慢加入二碳酸二叔丁酯(0.54g，2.291mmol，1当量)在氯仿(10ml)中的溶液，搅拌16小时，然后减压浓缩。将固体物质重悬于dcm、meoh、etoac和0.5nnh3(meoh)的混合物中，通过硅藻土过滤并减压浓缩。通过柱色谱法(isco，12gnh2-硅胶柱，0-15％meoh/dcm，15分钟梯度)纯化，得到所需产物和起始物质的混合物(1.75g)，其不经进一步纯化即可继续使用。

将该混合物溶解于thf(72ml)和dipea(1.25ml，7.16mmol)中并冷却至0℃。加入氯乙酰氯(0.63ml，7.88mmol)，将混合物温热至室温。16小时后，将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。所得混合物通过柱色谱法(isco，在二氧化硅上干负载，24g柱，0-100％etoac/己烷，在21分钟梯度内)纯化，得到白色固体(0.56g，1.745mmol，2个步骤共76％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ6.55(s,1h),4.48(s,1h),4.05(s,2h),3.30(q,j＝6.9hz,2h),3.10(d,j＝6.2hz,2h),1.44(s,12h),1.31(s,9h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ165.86,156.14,77.36,42.86,40.73,40.00,30.18,29.44,29.26,28.59,26.86,26.82.lcms321.34(m+h)。

(2)合成3-(2-((8-((叔丁氧基羰基)氨基)辛基)氨基)-2-氧代乙氧基)邻苯二甲酸二甲酯

将(8-(2-氯乙酰氨基)辛基)氨基甲酸叔丁酯(0.468g，1.46mmol，1当量)溶解于mecn(15ml，0.1m)中。加入3-羟基邻苯二甲酸二甲酯(0.337g，1.60mmol，1.1当量)和碳酸铯(1.308g，4.02mmol，2.75当量)。烧瓶装有回流冷凝器并加热至80℃18小时。将混合物冷却至室温并加入稀释水，用氯仿萃取一次，用etoac萃取两次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。

将粗物质通过柱色谱法(isco，24g硅胶柱，0-15％meoh/dcm，20分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(0.434g，0.878mmol，60％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.57(dd,j＝7.9,0.8hz,1h),7.40(t,j＝8.1hz,1h),7.07(dd,j＝8.4,0.7hz,1h),6.89(t,j＝5.3hz,1h),4.63(s,1h),4.52(s,2h),3.88(s,3h),3.83(s,3h),3.22(q,j＝6.9hz,2h),3.01(q,j＝6.4hz,2h),1.36(s,12h),1.20(s,9h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ167.89,167.29,165.54,155.97,154.38,130.95,129.69,124.96,123.23,116.86,78.82,68.05,52.83,52.82,52.66,52.64,40.54,39.06,29.97,29.19,29.10,29.06,28.40,26.66,26.61.lcms495.42(m+h)。

(3)合成二氨基辛基-乙酰基-o-沙利度胺三氟乙酸盐

将3-(2-((8-((叔丁氧羰基)氨基)辛基)氨基)-2-氧代乙氧基)邻苯二甲酸二甲酯(0.434g，0.878mmol，1当量)溶解于etoh(8.8ml，0.1m)。加入3mnaoh(0.88ml，2.63mmol，3当量)，将混合物加热至80℃达24小时。将混合物冷却至室温，并用50mldcm和10ml0.5mhcl稀释。分离各层，有机层用20ml水洗涤。然后将合并的水层用氯仿萃取3次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色固体(0.329g)，其不经进一步纯化即可继续使用。lcms467.41。

将得到的黄色固体(0.329g)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.121g，0.734mmol，1当量)溶解于吡啶(7.3ml，0.1m)中，加热至110℃达20小时。将混合物冷却至室温，减压浓缩，得到(8-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异二氢吲哚-4-基)氧基)乙酰氨基)辛基)氨基甲酸叔丁酯，为黑色焦油(0.293g)，其不经纯化(由于溶解性差)即可继续进行。lcms559.45(m+h)。

将粗(8-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰氨基)辛基)氨基甲酸叔丁酯(0.293g)溶解于tfa(10ml)中并加热至50℃达4小时。将混合物减压浓缩，然后减压浓缩。通过制备型hplc纯化，得到棕色残余物(114.69mg，3个步骤共23％)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.84–7.78(m,1h),7.54(d,j＝7.3hz,1h),7.43(d,j＝8.5hz,1h),5.13(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),4.76(s,2h),3.32(d,j＝4.1hz,1h),3.30(d,j＝3.3hz,1h),2.94–2.84(m,3h),2.80–2.70(m,2h),2.19–2.12(m,1h),1.67–1.55(m,4h),1.40–1.34(m,8h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ174.57,171.37,169.85,168.26,167.78,156.26,138.22,134.91,121.70,119.28,117.97,69.37,50.57,40.76,40.08,32.17,30.19,30.05,30.01,28.52,27.68,27.33,23.63.lcms459.41(m+h)。

实施例72：合成n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐

(1)合成(1-氯-2-氧代-7,10,13-三氧杂-3-氮杂十六烷-16-基)氨基甲酸叔丁酯

将(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，3.12mmol，1当量)溶解于thf(31ml，0.1m)中。加入dipea(0.543ml，3.12mmol，1当量)，将溶液冷却至0℃。加入氯乙酰氯(0.273ml，3.43mmool，1.1当量)，将混合物缓慢升温至室温。24小时后，将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物(1.416g)，其不经进一步纯化即可继续使用。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.24(s,1h),5.00(s,1h),3.98–3.89(m,2h),3.54(dddt,j＝17.0,11.2,5.9,2.2hz,10h),3.47–3.40(m,2h),3.37–3.31(m,2h),3.17–3.07(m,2h),1.79–1.70(m,2h),1.67(p,j＝6.1hz,2h),1.35(s,9h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ165.83,155.97,78.75,70.49,70.47,70.38,70.30,70.14,69.48,42.61,38.62,38.44,29.62,28.59,28.40.lcms397.37(m+h)。

(2)合成3-((2,2-二甲基-4,20-二氧代-3,9,12,15-四氧杂-5,19-二氮杂二十一烷-21-基)氧基)邻苯二甲酸二甲酯

将(1-氯-2-氧代-7,10,13-三氧杂-3-氮杂十六烷-16-基)氨基甲酸叔丁酯(1.41g，3.12mmol，1当量)溶解于mecn(32ml，0.1m)。加入3-羟基邻苯二甲酸二甲酯(0.721g，3.43mmol，1.1当量)和碳酸铯(2.80g，8.58mmol，2.75当量)。烧瓶装有回流冷凝器，加热至80℃达19小时。将混合物冷却至室温并加入稀释水，用氯仿萃取一次，用etoac萃取两次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗物质通过柱色谱法(isco，24g二氧化硅柱，0-15％meoh/dcm，22分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(1.5892g，2.78mmol，两个步骤为89％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.52(d,j＝7.8hz,1h),7.35(t,j＝8.1hz,1h),7.04(d,j＝8.3hz,1h),7.00(t,j＝5.3hz,1h),5.06(s,1h),4.46(s,2h),3.83(s,3h),3.78(s,3h),3.47(ddd,j＝14.9,5.5,2.8hz,8h),3.39(dt,j＝9.4,6.0hz,4h),3.29(q,j＝6.5hz,2h),3.09(d,j＝6.0hz,2h),1.70(p,j＝6.5hz,2h),1.63(p,j＝6.3hz,2h),1.31(s,9h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ167.68,167.36,165.45,155.93,154.41,130.87,129.60,125.01,123.20,117.06,78.60,70.40,70.17,70.06,69.39,68.67,68.25,52.77,52.57,38.38,36.58,29.55,29.20,28.34.lcms571.47(m+h)。

(3)合成n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐

将3-((2,2-二甲基-4,20-二氧代-3,9,12,15-四氧杂-5,19-二氮杂二十一烷-2-基)氧基)邻苯二甲酸二甲酯(1.589g，2.78mmol，1当量)溶解于etoh(14ml，0.2m)中。加入3mnaoh水溶液(2.8ml，8.34mmol，3当量)，将混合物加热至80℃达22小时。然后将混合物冷却至室温，用50mldcm和20ml0.5mhcl稀释。分离各层，有机层用25ml水洗涤。合并水层，用50ml氯仿萃取三次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到1.53g物质，其未经进一步纯化即可继续使用。lcms553.44。

将所得物质(1.53g)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.480g，2.92mmol，1当量)溶解于吡啶(11.7ml，0.25m)中，加热至110℃达17小时。将混合物冷却至室温并减压浓缩，得到粗(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-2-氧代-7,10,13-三氧杂-3-氮杂十六烷-16-基)氨基甲酸叔丁酯(3.1491g)，其不经进一步纯化即可继续使用。lcms635.47。

将粗(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-2-氧代-7,10,13-三氧杂-3-十六烷-16-基)氨基甲酸叔丁酯(3.15g)溶解于tfa(20ml)中，加热至50℃达2.5小时。将混合物冷却至室温，用meoh稀释并减压浓缩。通过制备型hplc纯化该物质，得到n-(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺三氟乙酸盐(1.2438g，1.9598mmol，3个步骤为71％)，为深红色油状物。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.77(dd,j＝8.3,7.5hz,1h),7.49(d,j＝7.3hz,1h),7.40(d,j＝8.5hz,1h),5.12(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),4.75(s,2h),3.68–3.51(m,12h),3.40(t,j＝6.8hz,2h),3.10(t,j＝6.4hz,2h),2.94–2.68(m,3h),2.16(dtd,j＝12.6,5.4,2.5hz,1h),1.92(p,j＝6.1hz,2h),1.86–1.77(m,2h).¹³cnmr(100mhz,cd3od)δ173.17,169.97,168.48,166.87,166.30,154.82,136.89,133.41,120.29,117.67,116.58,69.96,69.68,69.60,68.87,68.12,67.92,49.19,38.62,36.14,30.80,28.92,26.63,22.22.lcms536.41(m+h)。

实施例73：合成n-(6-氨基己基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-甲酰胺

(1)合成2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异二氢吲哚-5-羧酸

将1,3-二氧代-1,3-二氢异苯并呋喃-5-羧酸(0.192g，1mmol，1当量)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.165g，1mmol，1当量)溶解于dmf(2.5ml)和乙酸(5ml)，并加热至80℃达24小时。然后将混合物减压浓缩并用etoh稀释，缓慢形成沉淀。将沉淀物用etoh洗涤两次，得到白色固体(84.8mg，0.28mmol，28％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.74(s,1h),11.12(s,1h),8.39(dd,j＝7.8,1.4hz,1h),8.26(s,1h),8.04(d,j＝7.8hz,1h),5.18(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),2.93–2.88(m,1h),2.84(d,j＝4.7hz,0h),2.66–2.50(m,2h),2.12–1.99(m,1h).lcms303.19(m+h)。

(2)合成(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-甲酰胺基)己基)氨基甲酸叔丁酯

将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羧酸(22.7mg，0.0751mmol，1当量)和hatu(31.4mg，0.0826mmol，1.1当量)溶解于dmf(0.75ml)。5分钟后，加入dipa(39.2微升，0.225mmol，3当量)。再过5分钟后，加入(6-氨基己基)氨基甲酸叔丁酯(19.5mg，0.0901mmol，1.2当量)在dmf(0.75ml)中的溶液。将混合物搅拌20小时，然后用etoac稀释。有机层用盐水洗涤三次，用硫酸钠干燥，减压浓缩。通过柱色谱法(isco，4g柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(17.18mg，0.03432mmol，46％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.29(d,j＝6.2hz,2h),8.16(s,1h),7.94(d,j＝8.4hz,1h),6.91(s,1h),5.00(dd,j＝12.4,5.3hz,1h),4.58(s,1h),3.47(q,j＝6.7hz,2h),3.14(q,j＝8.5,7.3hz,2h),2.97–2.69(m,3h),2.17(ddd,j＝10.4,4.8,2.6hz,1h),1.65(p,j＝6.9hz,2h),1.53–1.32(m,15h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.69,170.77,167.86,166.67,165.27,156.49,141.06,133.95,133.71,132.13,124.21,122.27,77.36,49.71,39.75,31.54,30.27,29.22,28.57,25.70,25.37,22.73.lcms501.28(m+h)。

(3)合成n-(6-氨基己基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-甲酰胺

将(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-甲酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯(17.18mg，0.343mmol，1当量)溶解于tfaml)并加热至50℃达2小时。将混合物减压浓缩，得到黄色油状物(13.29mg)，其被认为足够纯，无需进一步纯化。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.27(dd,j＝9.3,1.3hz,2h),7.99(d,j＝7.6hz,1h),5.18(dd,j＝12.5,5.4hz,1h),3.48–3.40(m,2h),2.96–2.84(m,3h),2.76(ddd,j＝17.7,8.1,3.7hz,2h),2.20–2.12(m,1h),1.75–1.63(m,4h),1.53–1.43(m,4h).lcms401.31(m+h)。

实施例74：合成2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸

(1)合成2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮

将4-羟基异苯并呋喃-1,3-二酮(0.773g，4.71mmol，1当量)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.775g，4.71mmol，1当量)溶解于吡啶(19ml)中，加热至110℃达16小时。将混合物减压浓缩，并通过柱色谱法(isco，12g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到灰白色固体(1.14g，4.16mmol，88％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.19(s,1h),11.07(s,1h),7.65(dd,j＝8.3,7.3hz,1h),7.31(d,j＝7.2hz,1h),7.24(d,j＝8.4hz,1h),5.07(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),2.88(ddd,j＝17.7,14.2,5.4hz,1h),2.63–2.50(m,2h),2.11–1.95(m,1h).lcms275.11(m+h)。

(2)合成2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸叔丁酯

将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(218.8mg，0.798mmol，1当量)溶解于dmf(8ml)中。加入碳酸钾(165.9mg，1.20mmol，1.5当量)，随后加入溴乙酸叔丁酯(118微升，0.798mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌3小时。混合物用etoac稀释，用水洗涤一次，用盐水洗涤两次。通过柱色谱法(isco，12g硅胶柱，0-100％etoac/己烷，17分钟梯度)纯化，得到白色固体(0.26g，0.669mmol，84％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.74(s,1h),7.61(dd,j＝8.4,7.3hz,1h),7.46–7.41(m,1h),7.06(d,j＝8.3hz,1h),4.98–4.92(m,1h),4.74(s,2h),2.83–2.69(m,3h),2.12–2.04(m,1h),1.43(s,9h).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ171.58,168.37,166.96,166.87,165.49,155.45,136.27,133.89,119.78,117.55,116.83,83.05,66.52,49.20,31.37,28.03,22.55.lcms411.23(m+na)。

(3)合成2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸

室温下将2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸叔丁酯(47.5mg，0.122mmol，1当量)溶解于tfa(1.3ml)。3小时后，将混合物用dcm稀释并减压浓缩，得到白色固体(42.27mg)，其被认为足够纯，无需进一步纯化。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.76(dd,j＝8.5,7.3hz,1h),7.50(d,j＝7.3hz,1h),7.34(d,j＝8.5hz,1h),5.11(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),4.96(s,2h),2.87(ddd,j＝17.8,14.2,5.0hz,1h),2.80–2.65(m,2h),2.18–2.09(m,1h).lcms333.15(m+h)。

实施例75：dbet1处理下调brd4水平

dbet1显示对brd4的第一个溴结构域有显著的结合力(brd4(1)；ic50＝20nm)，而差向异构体dbet1(r)相对地无活性(ic50＝6.9μm)(图1c)。相比之下，jq1和jq1-r的ic50分别为20nm和8.8μm(图1c)。选择性分析确认了通过噬菌体展示和置换研究的32个溴结构域中有效且bet特异性的靶标结合(图11a)(表2)。

表2.使用bromoscan对dbet1进行单点筛选

结合brd4(1)的dbet1的高分辨率晶体结构()证实了与jq1相当的分子识别模式(图1d和1g)。发现用于dbet1配体的有序密度仅对丁烷间隔物的前两个碳原子，表明偶联的邻苯二甲酰亚胺的构象柔性。使用dbet1-brd4(1)晶体结构和最近报道的与沙利度胺结合的crbn的结构(e.s.fischeretal.,nature512,49-53(2014))，三元复合物形成的可行性在计算机中建模。dbet1的扩展构象能够在许多取样构象中桥接有序的brd4(1)和crbn而没有破坏性空间相互作用(图1e)。crl复合物的模块化性质表明，brd4的化学补充可能导致crbn依赖性降解(e.s.fischeretal.,cell147,1024-1039(2011)；m.d.petroski,r.j.deshaies,nat.rev.mol.cellbiol.6,9-2)。

通过使用alphascreen技术的重组人crbn-ddb1和brd4的均质邻近测定法来评估dbet1的化学适配功能。如图11b所示，在存在低(10-100nm)浓度的dbet1的情况下，由受体(结合crbn)和供体(结合brd4)珠的邻近度引起的发光增加。在较高浓度的dbet1(例如1μm)下，发光减少，与通过过量dbet1(钩效应)的crbn和brd4结合位点的独立占据一致。通过用游离的jq1或沙利度胺的竞争性共温育来实现化学适配功能的抑制，每种呈立体特异性方式(图11c)。

为了功能性评估dbet1对细胞brd4的作用，将人类aml细胞系(mv4-11)用增加浓度的dbet1处理18小时，并通过免疫印迹测定内源性brd4水平。观察到brd4的显著损失(>85％)，其中dbet1的浓度低至100nm(图1f)。用dmso或增加浓度的dbet1处理mv4-11细胞24小时，在ripa缓冲液中裂解。针对指定的蛋白进行免疫印迹。此外，brd4和c-myc水平相对于用增加浓度的dbet1处理的细胞中的黏着斑蛋白水平进行定量(图1h)。值得注意的是，与brd4物理相互作用的蛋白jmjd6不受影响(图1h)。此外，通过转录控制机制的brd4抑制剂处理后通常增加的hexim1水平也适度降低(图1h)。

通过jq1对brd4溴结构域的分子识别是立体特异性的，只有(+)-jq1对映异构体是活性的；(-)-jq1对映异构体(jq1r)无活性(图1a-1c和图5)。差向异构体dbet1(r)化合物缺乏brd4结合(在均一测定中>300倍较弱的结合)，并且是无活性的，表明brd4降解需要靶蛋白参与(图2a)。

实施例76：通过dbet1降解brd2、brd3和brd4

mv4-11细胞用dmso或100nmdbet1处理1-24小时之间的各时间点。细胞在ripa缓冲液中裂解。进行免疫印迹。虽然brd3和brd4显示出相当的动力学，但brd2水平在稍后的时间点更快地平衡。结果示于图2k。

为了量化对brd4蛋白稳定性的剂量反应效应，在贴壁人癌细胞系(sum149乳腺癌细胞(图2b))中开发了细胞计数归一化的、基于免疫荧光的高含量测定法。观察到总brd4对于dbet1的有效下调(ec50＝430nm)，而对于dbet1(r)没有明显的活性，这些观察结果通过sum149中的免疫印迹证实，sum149用于测定的基线矫正(图2c)。另外培养的贴壁和非贴壁人癌细胞系显示出相当的反应(sum159，molm13)(图2i和2j)。

在mv4-11细胞中使用100nmdbet1在时程实验中测定brd4降解的动力学。在1小时观察到brd4的明显损耗，在处理2小时时观察到完全降解(图2d)。通过dbet1降解brd4与24小时时对mv4-11细胞增殖的有效抑制作用相关(通过atp含量测定，ic50＝0.14μm，与ic50＝1.1μm相比(图2e)，这与报道的这种和其它mll重排白血病模型中brd4的rna静默的显著抑制作用一致(j.zuberetal.,nature478,524-528(2011))。此外，dbet1在mv4-11中诱导了有效的凋亡结果，如通过激活的半胱天冬酶切割(胱天蛋白酶-glo)(图2f)、聚(adp-核糖)聚合酶(parp)的切割、半胱天冬酶-3的切割(图2n)和膜联蛋白v染色(图2m)测量。在另外培养的人类细胞系(包括dhl4(b细胞淋巴瘤))中证实了对dbet1的凋亡反应(图2f)。然后在培养4或8小时的mv4-11细胞中进行凋亡反应的动力学研究，然后进行药物洗脱。24小时时评估细胞凋亡的诱导。虽然jq1的脉冲处理未产生增加的细胞凋亡，在仅4小时的dbet1处理后，观察到在8小时时明显增强的凋亡(图2p和2q)。

培养的细胞系对dbet1的快速生物化学活性和强烈凋亡反应确定了评估对原代人类aml细胞的影响的可行性，其中短期培养物中离体增殖可忽略。原发性白血病患者母细胞暴露于dbet1引起brd4的剂量成比例消耗(免疫印迹)(图2g)和凋亡的诱导(膜联蛋白v染色)(图2h和2l)。重要的是，通过dbet1引起的brd4降解的作用在原代aml细胞和aml细胞系中比通过jq1的brd4置换引起明显更大的凋亡反应(图2h)。总之，这些数据证明配体依赖性靶蛋白降解，并且支持靶降解比结构域特异性靶标抑制可引发更显著的生物学后果。

通过评估重复剂量的dbet1在建立的人mv4-11白血病细胞的鼠异种移植模型中的耐受性和抗肿瘤功效，在体内评估brd4降解的治疗效果。用腹膜内注射施用dbet1(每天50mg/kg)或载体对照来处理荷瘤小鼠。治疗14天后，第一个肿瘤达到肿瘤大小的规定限制，并且终止了用于比较评估brd4稳定性和功能的功效和调节的研究。如通过连续体积测量测定的(图12a)，dbet1的施用减缓肿瘤的进展，如死后评估的(图12b)，肿瘤重量减少。通过免疫印迹法，用dbet1(50mg/kgip)进行第一次或第二次每日处理后4小时，观察到brd4的急性药代动力学降解，伴随着myc的下调(图12c)。结果经重复剂量暴露于dbet114天后，通过brd4和myc的定量免疫组织化学证实(图12d)。与切除的肿瘤中的载体对照相比，用dbet1观察到brd4的统计学显著的不稳定性、myc的下调和增殖的抑制(ki67染色)(图12d和12e)。dbet1(50mg/kgip)的药代动力学研究证实了体内足够的药物暴露(cmax＝392nm；图13b)，高于体外(<100nm)观察到的brd4敲低的ec50。值得注意的是，两周的dbet1对小鼠耐受性良好，且对体重、白细胞计数、血细胞比容或血小板计数无显著影响(图13c和13d)。

实施例77：特定于dbet1的降解

为了精密地评估dbet1诱导的brd4降解的机制，使用化学遗传和基因编辑方法检查了对蛋白酶体功能、brd4结合和crbn结合的要求。单独使用jq1或沙利度胺的处理不足以诱导mv4-11细胞中的brd4降解(图3a和3e)。brd4稳定性通过用不可逆蛋白酶体抑制剂卡非佐米(0.4μm)进行预处理来补救，表明在dbet1介导的brd4降解中需要蛋白酶体功能(图3b和3f)。过量的jq1或沙利度胺的预处理废除了dbet1诱导的brd4降解，进一步证实了对brd4和crbn两者的要求(图3b和3f)。基于cullin的泛素连接酶需要对用于进展性e3连接酶活性和靶多聚泛素化的cullin亚基进行类泛素化修饰(g.lu,etal.,science343,305-309(2014)；r.i.sufan,m.ohh,neoplasia8,956-963(2006))。选择性nae1抑制剂mln4924(29)的预处理从dbet1暴露中补救brd4稳定性，进一步支持对活性ringe3连接酶的活性的依赖(图3c)。此外，使用最近公开的人mm细胞系(mm1.s-crbn^-/-)，其特征在于通过crispr/cas9技术工程化敲除crbn(g.lu,etal.,science343,305-309(2014))，证实了对crbn的细胞需求(图3d)。这些数据显示通过dbet1对brd4的crbn依赖性蛋白酶体降解。

实施例78：通过表达蛋白组学进行的高度选择性的bet溴结构域降解

选择无偏的广蛋白组方法来评估dbet1处理对蛋白稳定性的细胞后果。将dbet1处理(250nm)的急性影响与jq1(250nm)和载体(dmso0.0025％)对照在mv4-11细胞中的蛋白稳定性进行比较。选择2小时温育以捕获小分子作用的主要即时后果，并减轻对抑制brd4靶基因转录激活的预期的混杂效应。使用等压标签为每个处理条件制备三个生物样品重复，其允许每个蛋白使用至少两个鉴定的光谱的较低截止值来检测7429个蛋白。在用jq1进行bet溴结构域抑制后，观察到很少的蛋白组变化(图4a)。在jq1处理2小时后，myc仅显著消耗2倍以上，表明报道的bet溴结构域抑制对aml中myc表达的快速、选择性影响(图4a和4c)(j.zuberetal.,nature478,524-528(2011))。jq1处理也下调了癌蛋白pim1(图4a和4c)。

用dbet1处理引起了对myc和pim1表达的相当的、适度的影响。在dbet1处理的细胞中仅有三种蛋白brd2、brd3和brd4被鉴定为显著地(p<0.001)和明显地(>5倍)耗尽(图4b和4c)。在用dbet1或jq1处理mv4-11白血病细胞后，通过免疫印迹进行brd2、brd3、brd4、myc和pim1的正交检测。bet家族成员仅被dbet1降解，而myc和pim1的丰度均被dbet1和jq1降低，至较低的程度(图4d)。在任一处理条件下均未观察到对ikarostf表达的影响(图4f)。由于myc和pim1通常通过指示下调的转录机制的表观基因组分析与大量相邻的增强子基因座相关((b.chapuyetal.,cancercell24,777-790(2013)；j.lovénetal.,cell153,320-334(2013))，测量每种消耗的基因产物的mrna转录物丰度(图4e)。用jq1或dbet1处理下调myc和pim1转录，指示二级转录效应。brd4和brd3的转录不受影响，与转录后效应一致。brd2的转录受jq1和dbet1的影响，而brd2基因产物的蛋白稳定性仅受到dbet1的影响，表明转录和转录后的结果。这些数据表明了dbet1对目标蛋白稳定性、蛋白组范围的高选择性影响。

实施例79：阴性sarjq1-rev(jqi-ii-079)

将mv4-11细胞用dmso、dbet1(100nm)或指定浓度的jq1-rev(jq-ii-079)处理24小时，用ripa缓冲液裂解，并将brd4和黏着斑蛋白作为加载对照进行免疫印迹。虽然dbet1处理显著降低brd4水平，但jq1-rev处理没有产生任何可测量的影响。结果示于图5。

实施例80：brd4蛋白水平的降低引起brd4转录水平的可测量的降低

用dbet1或jq1处理mv4-11细胞2小时和4小时，分别在100nm或1μm。使用qiagenrnaeasy试剂盒分离rna，并使用vilosuperscript逆转录酶将其转化为cdna。通过qrt-pcr测定brd4转录水平。结果示于图6。

实施例81：dbet1介导的brd4降解取决于crbn有效性

用dbet1处理精于cbrn表达的野生型mm1s(mm1swt)以及crbn表达缺陷的mm1s(mm1scrbn^-/-)8小时。其它地方报道了crbn缺陷的同基因细胞系(luetal.science2014)。细胞用ripa缓冲液裂解，brd4和微管蛋白作为加载对照进行免疫印迹。结果示于图7。

实施例82：dbet2对brd4表达水平的影响

将mv4-11细胞用dmso或增加浓度的dbet2处理8小时，在ripa缓冲液中裂解，并用brd4和微管蛋白作为加载对照进行免疫印迹。结果示于图8。

实施例83：dbet2对plk1表达水平的影响

(a)将mv4-11细胞用dmso或增加浓度的dbet2处理8小时，在ripa缓冲液中裂解，并用plk1和微管蛋白作为加载对照进行免疫印迹。(b)(a)的定量。将plk1条带的强度定量为相应的微管蛋白加载对照条带。结果示于图9。

实施例84：dbet1介导的体内降解

使用人mv4-11白血病鼠异种移植模型，用荷瘤小鼠进行短期治疗研究。每日一次给予建立肿瘤的小鼠dbet1(50mg/kg)、jq1(50mg/kg)或载体对照，持续两天。通过免疫印迹测定第二次药物暴露后4h对brd4稳定性的药代动力学效应。与jq1和载体对照相比，用dbet1处理与brd4的明确抑制有关(图20)。证实了在细胞系和原发性患者细胞中观察到的药理学优势，观察到在体内经dbet1处理后增加的凋亡反应，如通过对parp和半胱天冬酶切割的免疫印迹测得的(图20)。

实施例85：dfkbp-1和dfkbp-2介导的fkbp12降解

合成了胞质信号蛋白fkbp12的邻苯二甲酰亚胺偶联的配体。已经鉴定出fkbp12在心脏发育、利阿诺定受体功能、致癌信号传导和其它生物学表型中起作用。在fkbp12定向配体ap1497上的已知的允许位点，放置两个化学间隔物以产生偶联的邻苯二甲酰亚胺dfkbp-1和dfkbp-2(图10a)。两者都有效降低mv4-11细胞中的fkbp12丰度(图10b)，导致fkbp12在0.1μm下降80％以上，在0.01μm下降50％，与在25μm证明有活性的偶联的protac配体相比，效力提高1000倍。与dbet1一样，通过用卡非佐米、mln4924、游离ap1497或游离的沙利度胺进行预处理，补救了dfkbp-1对fkbp12的不稳定性(图10c)。使用先前公布的用于crbn的野生型(293ft-wt)或缺陷型(293ft-crbn^-/-)的等位基因293ft细胞系建立crbn依赖性降解(g.lu,etal.,science343,305-309(2014))。用dfkbp-1处理293ft-wt细胞诱导fkbp12的有效的剂量依赖性降解，而293ft-crbn^-/-不受影响(图10d)。

实施例86：通过dbet降解brd蛋白

使用384孔板每孔接种10,000个细胞(293twt或293crbn-/-)。在第二天，以不同的浓度加入dbet化合物。用dbet化合物处理4小时后，用甲醛固定细胞，用0.1％氚核透化，用licor封闭缓冲液封闭，并与一抗(brd4,1:1000)一起温育过夜。第三天洗涤细胞(5×tbst)，并使用odyseecellstain(1:500)染色。同时加入识别兔brd4抗体的二抗(1:800)。使用licor成像仪对图像进行定量。在dbet处理后细胞中的brd4水平显示在图14a-bb。

用增加浓度的dbet1或dbet6处理多种细胞(baf3_k-ras，semk2，monomac1，mm1s^wt，mm1s^crbn-/-)约16小时。将细胞裂解，并对裂解物进行免疫印迹以测量brd4的水平。结果示于图15a-15d和15f。

用50nmdbet6或200nmdbet18处理mv4-11细胞。在随后的24小时内，通过免疫印迹检测各时间点brd4或brd4、brd2和brd3的水平。结果示于图15e和图16b。

实施例87：通过dbet降解brd和其它蛋白

293twt或293crbn-/-用1μm的dbet2、dbet7、dbet8或dbet10处理16小时。然后将细胞裂解，并对裂解物进行免疫印迹以测量brd4和plk1的水平。结果示于图16a。

实施例88：用dbet化合物处理的细胞的活力

将各种细胞系(t-all(molt4，dnd41，cutll1)，loucy，mv4-11和rs4-11)以1000个细胞/孔接种在384孔板中。然后将dbet化合物加入到细胞中并温育48小时。使用atplite(promega)测量atp含量作为细胞存活率的替代。结果如图17a-17e和图18a-18c所示。

实施例89：dgr介导的糖皮质激素受体降解

将dnd41细胞在培养板中培养。加入不同浓度的dgr3并温育16小时。然后将细胞裂解，并对裂解物进行免疫印迹以测量gr水平。结果示于图19。

实施例90：用dbet6处理的jq1抗性细胞的活力

将各种细胞系以每孔2000个细胞的密度以50μl/孔的体积接种在384孔组织培养处理的板中。用janus工作站(perkinelmer)，使用384孔针刺工具以每孔100nl药物加入jq1或dbet6。温育72小时后，使用atplite(perkinelmer)发光测定试剂盒根据制造商的说明书分析细胞的细胞存活率，使用atp含量作为活细胞数的替代。在envision2104multilabelplatereader(perkinelmer)上读出发光。使用graphpadprism软件将非线性剂量反应曲线拟合到数据，并显示在图20-24。显示与表3中的jq1相比的dbet6的ic50和emax。

表3

实施例91：在jq1抗性细胞中通过dbet6的蛋白降解

将ngp细胞与不同浓度的jq1或dbet6一起温育4小时。使用brd4(bethyl抗体，a301-985)、mycn(santacruz，sc-56729)和黏着斑蛋白(santacruz，sc-25336)的免疫印迹法评估brd4、mycn和黏着斑蛋白(作为加载对照)的蛋白水平。使用imagestudio软件(licorbiosciences)量化mycn水平。百分比水平归一化为黏着斑蛋白水平且相对于dmso。如图25a和25b所示，dbet6，但不是jq1，有效降解ngp细胞中的brd4。

实施例92：在jq1抗性细胞中通过dbet6的蛋白降解

将ngp细胞与250nmdbet6一起温育0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、16小时或24小时。使用对brd4(bethyl，a301-985)、brd3(abcam，ab56342)、brd2(bethyl，a302-582a)、mycn(santacruz，sc-56729)和黏着斑蛋白(santacruz，sc-25336)的免疫印迹评估brd2、brd3、brd4、mycn和黏着斑蛋白(作为加载对照)的蛋白水平。百分比水平归一化为黏着斑蛋白水平且相对于dmso。如图25c和25d所示，dbet6有效降解ngp细胞中的brd2、brd3、brd4和cmyn。

实施例93：合成dfkbp13-dfkbp21和dfkbp24-dfkbp38

(1)dfkbp13

将4-((6-氨基己基)氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5.59mg，0.015mmol，1当量)在151.63μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(10.52mg，0.015mmol，1当量)中。加入dipea(7.43μl，0.045mmol，3当量)，然后加入hatu(5.70mg，0.015mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌17小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(14mg，88.9％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(9.6mg，61％产率)。

¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.77–7.70(m,1h),7.42–7.36(m,2h),7.23(ddd,j＝8.9,7.5,1.7hz,1h),6.88(dd,j＝8.6,6.0hz,2h),6.81–6.78(m,2h),6.72(d,j＝2.0hz,1h),6.63–6.60(m,3h),6.11(dd,j＝8.3,5.9hz,1h),5.39(d,j＝5.4hz,1h),5.07(ddd,j＝12.3,5.4,3.3hz,1h),4.41(dt,j＝14.9,2.0hz,1h),4.21–4.05(m,3h),3.88–3.74(m,9h),3.71–3.64(m,10h),3.23–3.09(m,2h),2.80(s,2h),2.76–2.66(m,1h),2.48(td,j＝13.8,7.4hz,1h),2.11–1.89(m,3h),1.80–1.54(m,2h),1.45–1.35(m,3h),1.32–1.22(m,4h),0.86(dtd,j＝9.2,7.3,2.2hz,4h),lcms1050(m+h).

(2)dfkbp14

将4-((10-氨基癸烷基)氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9.45mg，0.022mmol，1当量)在220μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(15.58mg，0.022mmol，1当量)中。加入dipea(10.9μl，0.066mmol，3当量)，然后加入hatu(8.36mg，0.022mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌17小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(10.2mg，49.5％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-15％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(9.8mg，40％产率)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ7.67(t,j＝7.9hz,1h),7.45(d,j＝7.3hz,1h),7.20(dd,j＝12.2,8.2hz,1h),6.86(t,j＝7.2hz,1h),6.76(dq,j＝14.3,9.1,7.0hz,3h),6.67(d,j＝9.8hz,3h),6.48(s,2h),5.49(d,j＝9.4hz,2h),4.95(dd,j＝12.3,5.4hz,1h),4.67–4.38(m,3h),4.14(dt,j＝24.8,6.6hz,2h),3.87–3.82(m,12h),3.79(s,2h),3.70(d,j＝2.0hz,5h),3.49(s,6h),3.23(d,j＝17.5hz,3h),3.01–2.71(m,2h),2.55(q,j＝13.2hz,1h),2.13–2.02(m,1h),1.88(dt,j＝14.9,7.9hz,1h),1.65(d,j＝13.2hz,2h),1.44(d,j＝9.3hz,2h),1.27–1.19(m,16h),0.90–0.82(m,4h),0.79(t,j＝7.2hz,1h).lcms1106(m+h).

(3)dfkbp15

将4-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8.91mg，0.022mmol，1当量)在220μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(15.58mg，0.022mmol，1当量)中。加入dipea(10.91μl，0.066mmol，3当量)，然后加入hatu(8.36mg，0.022mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌20小时，然后用etoac稀释混合物，用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤，有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粉红色油状物(16.6mg,69.8％产率)。将粗产物通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到粉红色油状物(13.21mg，55.44％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.40(dd,j＝7.3,2.3hz,1h),7.36–7.31(m,1h),7.22(ddd,j＝8.7,7.4,1.7hz,1h),6.91–6.87(m,2h),6.81(dd,j＝8.1,4.4hz,1h),6.76–6.70(m,2h),6.66–6.61(m,3h),4.29–4.20(m,2h),3.88(t,j＝7.3hz,1h),3.80–3.77(m,7h),3.71–3.68(m,9h),3.57–3.39(m,1h),3.37(s,3h),3.24(q,j＝7.4hz,1h),2.86–2.76(m,1h),2.75–2.60(m,3h),2.56–2.38(m,1h),2.30–2.16(m,2h),2.09–1.86(m,2h),1.74(dt,j＝13.9,7.0hz,1h),1.69–1.53(m,2h),1.42–1.36(m,4h),1.30(s,6h),1.17(d,j＝6.2hz,1h),0.90(dt,j＝12.0,6.8hz,5h).lcms1082(m+h).

(4)dfkbp16

将5-氨基-n-(2-2(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)戊酰胺(7.84mg，0.0219mmol，1当量)在219μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(15.23mg，0.0219mmol，1当量)中。加入dipea(10.87μl，0.065mmol，3当量)，随后加入hatu(8.32mg，0.0219mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌17小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(16.22mg，71.6％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(10.44mg，46.1％产率)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.74–8.62(m,2h),7.75(dd,j＝17.7,7.9hz,1h),7.67(d,j＝7.5hz,1h),7.44(t,j＝7.6hz,1h),7.19(t,j＝7.8hz,1h),6.92(dd,j＝15.6,6.8hz,1h),6.77(t,j＝9.6hz,2h),6.71–6.62(m,2h),6.43(s,1h),5.45(d,j＝18.1hz,1h),5.23–5.10(m,1h),4.61–4.38(m,4h),3.91–3.75(m,13h),3.65(s,4h),2.90–2.77(m,2h),2.21(ddt,j＝18.3,12.3,5.8hz,2h),2.10–1.99(m,2h),1.76–1.52(m,18h),1.44(ddd,j＝25.9,12.5,6.9hz,1h),1.31–1.18(m,3h),0.86(t,j＝7.4hz,3h),0.60(dt,j＝34.9,7.3hz,1h).lcms1035(m+h).

(5)dfkbp17

将n-(3-(3-氨基丙氧基)丙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(10.27mg，0.023mmol，1当量)在230μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(15.66mg，0.023mmol，1当量)中。加入dipea(11.07μl，0.067mmol，3当量)，然后加入hatu(8.74mg，0.023mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(19.94mg，77.26％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(11.49mg，44.5％产率)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ7.59(t,j＝5.0hz,1h),7.55(dt,j＝7.3,2.3hz,1h),7.22–7.16(m,2h),6.90–6.82(m,1h),6.80–6.72(m,3h),6.70–6.63(m,2h),6.50–6.46(m,2h),6.14(dd,j＝8.0,6.0hz,1h),5.48(d,j＝5.8hz,1h),5.03–4.94(m,1h),4.63(s,2h),4.57–4.49(m,1h),3.87–3.82(m,11h),3.80–3.77(m,3h),3.70(d,j＝2.7hz,6h),3.57(t,j＝7.2hz,1h),3.50–3.42(m,4h),3.38(td,j＝6.4,1.9hz,1h),3.34–3.26(m,1h),2.91–2.70(m,3h),2.55(ddd,j＝23.7,11.0,4.3hz,1h),2.45(dd,j＝9.0,6.6hz,1h),2.23(d,j＝13.6hz,1h),1.84–1.57(m,11h),1.46(dd,j＝20.8,6.6hz,1h),1.26(s,2h),0.91–0.84(m,3h),0.81–0.73(m,1h).lcms1123(m+h).

(6)dfkbp18

将4-(4-氨基丁氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5.31mg，0.0154mmol，1当量)在153.94μldmf(0.1m)中的溶液加入fkbp酸(10.68mg，0.0154mmol，1当量)。加入dipea(7.63μl，0.046mmol，3当量)，然后加入hatu(5.85mg，0.0154mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌21小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(10.5mg，66.77％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(5.68mg，36％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.40(dd,j＝7.3,2.3hz,1h),7.36–7.31(m,1h),7.22(ddd,j＝8.7,7.4,1.7hz,1h),6.91–6.87(m,2h),6.81(dd,j＝8.1,4.4hz,1h),6.76–6.70(m,2h),6.66–6.61(m,3h),4.29–4.20(m,2h),3.88(t,j＝7.3hz,1h),3.80–3.77(m,7h),3.71–3.68(m,9h),3.57–3.39(m,1h),3.37(s,3h),3.24(q,j＝7.4hz,1h),2.86–2.76(m,1h),2.75–2.60(m,3h),2.56–2.38(m,1h),2.30–2.16(m,2h),2.09–1.86(m,2h),1.74(dt,j＝13.9,7.0hz,1h),1.69–1.53(m,2h),1.42–1.36(m,4h),1.30(s,6h),1.17(d,j＝6.2hz,1h),0.90(dt,j＝12.0,6.8hz,5h).lcms1122(m+h).

(7)dfkbp19

将4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5.77mg，0.016mmol，1当量)在158.98μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(11.03mg，0.016mmol，1当量)中。加入dipea(7.93μl，0.048mmol，3当量)，然后加入hatu(6.08mg，0.016mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌20小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(9.8mg，59.06％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g二氧化硅柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(5.55mg，33％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.40(dd,j＝7.3,2.3hz,1h),7.36–7.31(m,1h),7.22(ddd,j＝8.7,7.4,1.7hz,1h),6.91–6.87(m,2h),6.81(dd,j＝8.1,4.4hz,1h),6.76–6.70(m,2h),6.66–6.61(m,3h),4.29–4.20(m,2h),3.88(t,j＝7.3hz,1h),3.80–3.77(m,7h),3.71–3.68(m,9h),3.57–3.39(m,1h),3.37(s,3h),3.24(q,j＝7.4hz,1h),2.86–2.76(m,1h),2.75–2.60(m,3h),2.56–2.38(m,1h),2.30–2.16(m,2h),2.09–1.86(m,2h),1.74(dt,j＝13.9,7.0hz,1h),1.69–1.53(m,2h),1.42–1.36(m,4h),1.30(s,6h),1.17(d,j＝6.2hz,1h),0.90(dt,j＝12.0,6.8hz,5h).lcms1038(m+h).

(8)dfkbp20

将8-氨基-n-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)辛酰胺(8.8mg，0.022mmol，1当量)在220μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(15.48mg，0.022mmol，1当量)中。加入dipea(10.91μl，0.066mmol，3当量)，然后加入hatu(8.36mg，0.022mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(19.65mg，83％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(10.3mg，43.5％产率)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ8.76–8.68(m,1h),8.38(d,j＝9.8hz,1h),7.69(d,j＝7.7hz,1h),7.49–7.37(m,1h),7.17(dt,j＝20.1,7.0hz,2h),6.90–6.71(m,4h),6.66(d,j＝9.1hz,2h),6.48(d,j＝9.8hz,2h),6.35(d,j＝5.6hz,1h),6.15–6.09(m,1h),5.48(t,j＝6.5hz,1h),5.15(dt,j＝13.3,5.2hz,1h),4.65–4.36(m,5h),3.89–3.76(m,13h),3.70(d,j＝6.0hz,5h),3.27–3.15(m,1h),2.79(ddd,j＝25.5,10.2,4.6hz,2h),2.50–2.29(m,2h),2.27–2.10(m,1h),2.05(s,2h),1.94(tt,j＝14.4,7.2hz,1h),1.81–1.53(m,9h),1.51–1.36(m,2h),1.33–1.10(m,8h),0.87(t,j＝7.3hz,3h),0.69(dt,j＝28.4,7.3hz,1h).lcms1077(m+h).

(9)dfkbp21

将n-(4-(氨基甲基)苄基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(9.9mg，0.022mmol，1当量)在220μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(15.31mg，0.022mmol，1当量)中。加入dipea(10.91μl，0.066mmol，3当量)，然后加入hatu(8.36mg，0.022mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌16小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(23mg，92.8％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(12.31mg，49.7％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.40(dd,j＝7.3,2.3hz,1h),7.36–7.31(m,1h),7.22(ddd,j＝8.7,7.4,1.7hz,1h),6.91–6.87(m,2h),6.81(dd,j＝8.1,4.4hz,1h),6.76–6.70(m,2h),6.66–6.61(m,3h),4.29–4.20(m,2h),3.88(t,j＝7.3hz,1h),3.80–3.77(m,7h),3.71–3.68(m,9h),3.57–3.39(m,1h),3.37(s,3h),3.24(q,j＝7.4hz,1h),2.86–2.76(m,1h),2.75–2.60(m,3h),2.56–2.38(m,1h),2.30–2.16(m,2h),2.09–1.86(m,2h),1.74(dt,j＝13.9,7.0hz,1h),1.69–1.53(m,2h),1.42–1.36(m,4h),1.30(s,6h),1.17(d,j＝6.2hz,1h),0.90(dt,j＝12.0,6.8hz,5h).lcms1127(m+h).

(10)dfkbp24

将n-(14-氨基-3,6,9,12-四氧杂十四烷基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(15.93mg，0.024mmol，1当量)在240μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(16.76mg，0.024mmol，1当量)中。加入dipea(11.90μl，0.072mmol，3当量)，然后加入hatu(9.125mg，0.024mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌17小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到无色油状物(15mg，51.02％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g二氧化硅柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到无色油状物(12mg，收率40.8％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.52(dd,j＝7.3,1.3hz,1h),7.41(d,j＝8.4hz,1h),7.24(td,j＝7.8,1.7hz,1h),6.90(d,j＝8.0hz,2h),6.84(d,j＝8.2hz,1h),6.77–6.75(m,2h),6.68(d,j＝1.9hz,1h),6.64(d,j＝0.8hz,2h),5.46–5.42(m,1h),5.12(ddd,j＝12.4,5.5,1.9hz,1h),4.76(d,j＝1.2hz,2h),4.62–4.54(m,2h),3.84–3.78(m,9h),3.70(d,j＝6.0hz,9h),3.64–3.59(m,7h),3.59–3.47(m,11h),3.33(p,j＝1.7hz,9h),2.79–2.60(m,4h),2.51(d,j＝41.0hz,1h),2.27(t,j＝10.2hz,1h),2.18–2.10(m,1h),1.78–1.66(m,4h),1.60(d,j＝12.8hz,2h),1.31(s,1h),0.90(t,j＝7.3hz,3h).lcms1227(m+h).

(11)dfkbp25

将n-(29-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24,27-二十九氧杂二十九烷基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(22.1mg，0.025mmol，1当量)在250μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(17.51mg，0.025mmol，1当量)中。加入dipea(12.4μl，0.075mmol，3当量)，然后加入hatu(9.5mg，0.025mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌19小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到无色油状物(15.1mg，41.7％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到无色油状物(14.9mg，42％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.84–7.78(m,1h),7.54(d,j＝7.3hz,1h),7.44(d,j＝8.5hz,1h),7.28–7.21(m,1h),6.91(d,j＝8.3hz,2h),6.85(d,j＝8.2hz,1h),6.77(dt,j＝3.8,2.2hz,2h),6.69(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),6.64(s,2h),5.53–5.40(m,1h),5.14(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),4.78(s,2h),4.58(d,j＝14.1hz,2h),4.47(d,j＝14.9hz,1h),3.89(t,j＝7.3hz,1h),3.82(dd,j＝7.9,5.9hz,8h),3.70(d,j＝6.0hz,8h),3.64(d,j＝4.9hz,5h),3.62–3.58(m,21h),3.58(s,3h),3.54(q,j＝2.1hz,2h),3.51(td,j＝5.5,2.1hz,4h),3.44–3.36(m,1h),3.33(p,j＝1.6hz,6h),2.81–2.69(m,2h),2.48(q,j＝7.2,6.5hz,1h),2.15(ddq,j＝10.2,6.0,2.8hz,1h),2.02(dddd,j＝25.8,15.0,13.3,7.6hz,2h),1.68(s,1h),0.90(t,j＝7.3hz,3h).lcms1447(m+h).

(12)dfkbp26

将n-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(12.4mg，0.02mmol，1当量)在200μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(14.4mg，0.02mmol，1当量)中。加入dipea(10.29μl，0.062mmol，3当量)，然后加入hatu(7.6mg，0.02mmol，1当量)，将混合物在室温下搅拌18小时，然后将混合物用etoac稀释，用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤，有机层用硫酸钠干燥，过滤并冷凝，得到白色油状物(10.2mg，产率44.4％)，粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化至得到白色油状物(9.38mg，收率39.67％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.78(t,j＝7.9hz,1h),7.51(d,j＝7.4hz,1h),7.40(d,j＝8.4hz,1h),7.23(t,j＝7.7hz,1h),6.89(q,j＝7.3,6.5hz,2h),6.83(d,j＝8.0hz,1h),6.76(d,j＝6.8hz,2h),6.67(d,j＝8.3hz,1h),6.64(s,2h),6.15(dd,j＝8.1,5.7hz,1h),5.44(d,j＝5.3hz,1h),5.12(dd,j＝12.4,5.4hz,1h),4.75(d,j＝1.9hz,2h),4.63–4.51(m,2h),4.45(d,j＝14.9hz,1h),4.13(d,j＝13.6hz,1h),3.88(t,j＝7.2hz,1h),3.83–3.77(m,9h),3.69(d,j＝6.3hz,9h),3.59(d,j＝3.9hz,6h),3.53–3.46(m,4h),3.33(p,j＝1.7hz,5h),2.86(ddd,j＝18.8,14.2,5.3hz,1h),2.80–2.62(m,3h),2.50(ddt,j＝48.5,14.5,8.2hz,2h),2.26(dd,j＝19.8,10.4hz,1h),2.18–2.09(m,1h),2.07–1.96(m,1h),1.78–1.64(m,3h),1.63–1.55(m,2h),1.31(s,1h),0.90(t,j＝7.3hz,4h).lcms1183(m+h).

(13)dfkbp27

将n-(17-氨基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(13.87mg，0.019mmol，1当量)在196μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(13.65mg，0.0196mmol，1当量)中。加入dipea(9.75μl，0.059mmol，3当量)，然后加入hatu(7.45mg，0.0196mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌16小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到无色油状物(12mg，产率48.2％)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到无色油状物(9.16mg，产率36.8％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.80(dd,j＝8.5,7.3hz,1h),7.52(d,j＝7.3hz,1h),7.42(d,j＝8.5hz,1h),7.24(ddd,j＝8.5,7.6,1.7hz,1h),6.89(t,j＝7.7hz,2h),6.85(d,j＝8.2hz,1h),6.76(dp,j＝3.2,1.6hz,2h),6.68(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),6.64(s,2h),6.15(dd,j＝8.1,5.7hz,1h),5.46–5.42(m,1h),5.13(ddt,j＝12.4,5.6,1.9hz,1h),4.77(s,2h),4.62–4.54(m,2h),4.46(d,j＝14.9hz,1h),3.84–3.79(m,8h),3.77(d,j＝7.3hz,1h),3.70(d,j＝6.1hz,8h),3.64–3.58(m,8h),3.57(d,j＝8.6hz,5h),3.54–3.48(m,7h),3.45–3.35(m,1h),2.92–2.81(m,1h),2.81–2.61(m,2h),2.58–2.40(m,1h),2.31–2.23(m,1h),2.15(ddq,j＝13.1,5.8,3.2,2.7hz,1h),2.02(dddt,j＝21.8,19.0,13.9,7.4hz,2h),1.77–1.56(m,5h),1.31(d,j＝4.2hz,1h),0.90(t,j＝7.3hz,3h).lcms1271(m+h).

(14)dfkbp28

dfkbp28(sd-2-90)

将n-(23-氨基-3,6,9,12,15,18,21-七氧杂二十三烷基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-吡啶-2-基)氧基)乙酰胺(16.71mg，0.021mmol，1当量)在210μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(14.46mg，0.021mmol，1当量)中。加入dipea(10.33μl，0.062mmol，3当量)，然后加入hatu(7.98mg，0.021mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌17小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(13.5mg，47.3％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(11.96mg，41.9％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.81(t,j＝7.7hz,1h),7.53(d,j＝7.1hz,1h),7.43(d,j＝8.3hz,1h),7.28–7.21(m,1h),6.94–6.83(m,3h),6.76(td,j＝6.4,5.4,3.3hz,2h),6.71–6.57(m,4h),5.44(d,j＝5.5hz,1h),5.13(dt,j＝11.7,5.8hz,1h),4.77(d,j＝6.0hz,2h),4.61–4.53(m,3h),4.53–4.41(m,1h),4.14(d,j＝13.8hz,1h),3.89(t,j＝7.2hz,1h),3.84–3.78(m,9h),3.71–3.67(m,10h),3.65–3.61(m,6h),3.60–3.56(m,14h),3.55–3.48(m,6h),3.39(dq,j＝14.1,7.1,6.3hz,1h),2.93–2.63(m,5h),2.51(ddt,j＝47.5,14.4,6.5hz,2h),2.34–2.24(m,1h),2.15(dd,j＝12.1,5.8hz,1h),2.09–1.87(m,3h),1.80–1.57(m,6h),1.50(dtd,j＝14.3,10.2,9.4,4.8hz,1h),1.30(d,j＝6.2hz,1h),0.90(t,j＝7.3hz,4h).lcms1358(m+h).

(15)dfkbp29

将n-(35-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-十一氧杂三十五烷基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(19.36mg，0.0199mmol，1当量)在199μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(13.83mg，0.0199mmol，1当量)中。加入dipea(9.88μl，0.059mmol，3当量)，然后加入hatu(7.56mg，0.0199mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌16小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到无色油状物(10mg，产率32.76％)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到无色油状物(8.9mg，产率29.15％)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.82(t,j＝7.9hz,1h),7.55(d,j＝7.3hz,1h),7.45(d,j＝8.4hz,1h),7.28–7.21(m,1h),6.93–6.83(m,3h),6.79–6.75(m,2h),6.69(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),6.64(s,2h),5.45(d,j＝5.4hz,1h),5.16–5.10(m,1h),4.79(s,2h),4.61–4.55(m,2h),4.47(d,j＝15.0hz,1h),4.13(t,j＝10.1hz,2h),3.88(t,j＝7.2hz,1h),3.82(dd,j＝7.5,5.4hz,8h),3.77(d,j＝8.4hz,1h),3.70(d,j＝6.3hz,9h),3.67–3.48(m,50h),3.41(dd,j＝12.4,5.7hz,1h),3.37(s,4h),2.92–2.73(m,3h),2.66(td,j＝13.3,3.2hz,1h),2.61–2.42(m,1h),2.29(d,j＝13.4hz,1h),2.19–2.12(m,2h),2.04(q,j＝5.5,4.3hz,2h),1.79–1.65(m,3h),1.61(d,j＝12.4hz,1h),1.50(d,j＝13.2hz,1h),1.31–1.22(m,1h),0.90(t,j＝7.4hz,3h).lcms1534(m+h).

(16)dfkbp30

将n-(4-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(11.04mg，0.022mmol，1当量)在220μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(15.07mg，0.022mmol，1当量)中。加入dipea(10.91μl，0.066mmol，3当量)，然后加入hatu(8.36mg，0.022mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(10.9mg，46.5％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(14.4mg，61.5％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.51–7.42(m,2h),7.23(t,j＝7.9hz,1h),7.13(d,j＝7.8hz,1h),6.91–6.84(m,2h),6.84–6.80(m,1h),6.79–6.72(m,2h),6.62(t,j＝2.4hz,3h),6.09(dd,j＝8.3,6.0hz,1h),5.39(d,j＝5.3hz,1h),5.13(dd,j＝13.3,5.1hz,1h),4.64(d,j＝4.2hz,2h),4.59–4.44(m,3h),4.38(d,j＝14.9hz,1h),4.12(d,j＝13.2hz,1h),3.85(q,j＝7.3hz,1h),3.76(qd,j＝9.5,8.6,1.3hz,9h),3.69(q,j＝5.0,4.0hz,9h),3.62–3.50(m,1h),3.20(q,j＝12.2,9.1hz,3h),3.08(dd,j＝13.1,7.1hz,1h),2.92–2.80(m,1h),2.71(ddd,j＝17.6,4.6,2.4hz,1h),2.60(td,j＝13.4,13.0,3.2hz,1h),2.48(hept,j＝7.0hz,2h),2.37–2.19(m,2h),2.17–1.85(m,4h),1.73(dt,j＝13.8,7.0hz,1h),1.66–1.44(m,3h),1.39(dt,j＝13.5,6.3hz,3h),1.17(t,j＝13.6hz,1h),0.86(q,j＝6.5,5.7hz,4h).lcms1065(m+h).

(17)dfkbp31

将n-(8-氨基辛基)-2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(8.56mg，0.0154mmol，1当量)在154μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(10.7mg，0.0154mmol，1当量)中。加入dipea(7.6μl，0.046mmol，3当量)，然后加入hatu(4.05mg，0.0154mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(11.9mg，69％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(5.4mg，31.4％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.81–7.72(m,2h),7.68(dd,j＝7.5,1.2hz,1h),7.23(td,j＝7.8,1.7hz,1h),6.89(t,j＝7.9hz,2h),6.82(d,j＝8.2hz,1h),6.78–6.73(m,2h),6.67–6.61(m,3h),6.12(dd,j＝8.2,6.0hz,1h),5.41(d,j＝5.4hz,1h),5.15–5.08(m,1h),4.57(d,j＝15.1hz,1h),4.42(d,j＝15.0hz,1h),4.13(d,j＝13.8hz,1h),4.05(d,j＝4.0hz,2h),3.87(t,j＝7.3hz,1h),3.82–3.77(m,9h),3.75(d,j＝7.5hz,1h),3.69(d,j＝5.7hz,9h),3.19–3.09(m,4h),2.85(ddd,j＝18.0,14.3,5.2hz,1h),2.77–2.70(m,2h),2.68–2.41(m,4h),2.29–2.22(m,1h),2.16–2.08(m,1h),2.03(dt,j＝12.8,7.3hz,2h),1.97–1.87(m,1h),1.73(dq,j＝13.8,7.1hz,1h),1.69–1.53(m,3h),1.47(p,j＝7.2hz,3h),1.37(p,j＝7.1hz,1h),1.29(s,2h),1.21(tdd,j＝22.3,8.9,6.0hz,2h),0.88(q,j＝7.3,6.4hz,4h).lcms1119(m+h).

(18)dfkbp32

将n-(8-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(11.8mg，0.0212mmol，1当量)在212μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(14.75mg，0.0212mmol，1当量)中。加入dipea(10.5μl，0.063mmol，3当量)，然后加入hatu(8.06mg，0.0212mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌16小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(19.1mg，80.4％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(13.6mg，57％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.51–7.42(m,2h),7.23(td,j＝7.9,1.7hz,1h),7.13(dd,j＝8.0,4.9hz,1h),6.91–6.85(m,2h),6.82(d,j＝8.0hz,1h),6.79–6.73(m,2h),6.67–6.61(m,3h),6.12(dd,j＝8.2,6.0hz,1h),5.41(d,j＝5.3hz,1h),5.15(dd,j＝13.3,5.1hz,1h),4.65(d,j＝3.9hz,2h),4.60–4.50(m,3h),4.42(d,j＝15.0hz,1h),4.13(d,j＝13.7hz,1h),3.86(t,j＝7.2hz,1h),3.82–3.76(m,8h),3.74(d,j＝7.7hz,1h),3.69(d,j＝5.9hz,9h),3.24(t,j＝7.1hz,2h),3.18–3.07(m,2h),2.97(s,1h),2.93–2.84(m,1h),2.75(ddd,j＝17.6,4.6,2.3hz,1h),2.67–2.40(m,4h),2.28–2.20(m,1h),2.15(dtd,j＝10.6,5.4,3.0hz,1h),2.07–1.87(m,3h),1.72(dt,j＝13.9,7.1hz,1h),1.64(ddt,j＝9.1,5.6,3.1hz,1h),1.59–1.41(m,4h),1.36(t,j＝6.4hz,2h),1.29(s,1h),1.21(dt,j＝14.7,5.8hz,8h),0.88(q,j＝7.4,6.5hz,3h).lcms1121(m+h).

(19)dfkbp33

将n-(8-氨基丁基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺(12.23mg，0.022mmol，1当量)在220μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(15.33mg，0.022mmol，1当量)中。加入dipea(10.9μl，0.066mmol，3当量)，然后加入hatu(8.36mg，0.022mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌17小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物(16.4mg，66.6％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(5.42mg，22％产率)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ7.36(dt,j＝22.5,7.5hz,3h),7.20(t,j＝7.9hz,1h),6.87(q,j＝6.2,4.9hz,1h),6.80–6.73(m,3h),6.72–6.63(m,3h),6.49(d,j＝6.9hz,2h),6.39(s,1h),6.14(d,j＝2.7hz,1h),5.49(d,j＝5.0hz,1h),5.20(dd,j＝13.4,5.1hz,1h),4.64–4.50(m,2h),4.46–4.32(m,2h),4.21(dd,j＝15.7,10.0hz,1h),3.91–3.81(m,13h),3.79(s,4h),3.70(d,j＝5.1hz,6h),3.61–3.55(m,1h),3.22(ttd,j＝29.2,16.4,14.9,8.1hz,6h),2.92–2.76(m,2h),2.67–2.39(m,3h),2.35–1.99(m,4h),1.92(d,j＝8.5hz,1h),1.77(dq,j＝12.8,6.5hz,1h),1.55(d,j＝12.8hz,1h),1.49–1.36(m,6h),1.26(d,j＝2.7hz,1h),1.24–1.19(m,6h),0.88(t,j＝7.3hz,3h).lcms1120(m+h).

(20)dfkbp34

将n-(4-氨基丁基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9.68mg，0.0212mmol，1当量)在212μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(14.75mg，0.0212mmol，1当量)中。加入dipea(10.52μl，0.063mmol，3当量)，然后加入hatu(8.06mg，0.0212mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物(18.4mg，85％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(15.14mg，70％产率)。1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.52(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.25–7.19(m,1h),7.02(d,j＝7.2hz,1h),6.98(dd,j＝8.6,2.3hz,1h),6.91–6.85(m,2h),6.80–6.70(m,3h),6.64(d,j＝3.9hz,2h),6.62–6.58(m,1h),5.52–5.40(m,1h),4.58(d,j＝14.9hz,1h),4.42(d,j＝14.8hz,1h),4.10(d,j＝13.7hz,1h),3.84(td,j＝7.3,2.2hz,1h),3.78–3.73(m,9h),3.70(dd,j＝3.5,1.3hz,9h),3.68(d,j＝3.3hz,1h),3.24–3.15(m,5h),2.91–2.80(m,1h),2.76–2.66(m,2h),2.46(q,j＝7.2hz,2h),2.23(d,j＝14.2hz,1h),2.11–1.98(m,4h),1.92(dt,j＝9.4,4.5hz,1h),1.71(dq,j＝13.8,6.8hz,1h),1.63–1.56(m,2h),1.55–1.43(m,5h),0.90–0.82(m,4h).lcms1121(m+h).

(21)dfkbp35

将5-((4-氨基丁基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9.78mg，0.0214mmol，1当量)在214μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(14.89mg，0.0214mmol，1当量)中。加入dipea(10.64μl，0.064mmol，3当量)，随后加入hatu(8.13mg，0.0214mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌17小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物(15.5mg，71％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(14.1mg，64.6％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.53(d,j＝8.2hz,1h),7.23(t,j＝7.5hz,1h),6.92–6.85(m,2h),6.73(d,j＝6.8hz,2h),6.66–6.59(m,4h),6.11(dd,j＝8.3,5.9hz,1h),5.51–5.45(m,1h),5.39(s,2h),5.06–4.99(m,1h),4.58(dd,j＝15.0,7.8hz,1h),4.43(dt,j＝14.9,3.8hz,1h),4.11(s,2h),3.79–3.76(m,11h),3.70(s,3h),3.68–3.65(m,8h),3.24–3.13(m,1h),3.08(s,3h),2.85(ddd,j＝17.9,13.6,5.4hz,1h),2.77–2.67(m,1h),2.62(s,1h),2.48(ddt,j＝28.9,14.3,7.2hz,2h),2.23(d,j＝13.8hz,2h),2.05(ddd,j＝28.5,13.4,6.3hz,2h),1.96–1.86(m,1h),1.72(dt,j＝13.7,6.9hz,1h),1.62(s,3h),0.87(dd,j＝8.6,6.1hz,5h).lcms1021(m+h).

(22)dfkbp36

将4-((8-氨基辛基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10.41mg，0.0203mmol，1当量)在203μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(14.15mg，0.0203mmol，1当量)中。加入dipea(10.06μl，0.061mmol，3当量)，然后加入hatu(7.72mg，0.0203mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状物(15.6mg，71.4％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(6.3mg，28.8％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.58–7.50(m,1h),7.23(td,j＝7.9,1.7hz,1h),7.02(dd,j＝7.8,6.5hz,2h),6.89(t,j＝7.5hz,2h),6.82(t,j＝8.5hz,1h),6.79–6.75(m,1h),6.73(d,j＝2.1hz,1h),6.66–6.63(m,1h),6.61(s,2h),6.38(q,j＝9.0,7.5hz,1h),6.12(dd,j＝8.2,5.9hz,1h),5.40(d,j＝5.4hz,1h),5.08–5.01(m,1h),4.57(d,j＝15.0hz,1h),4.42(dd,j＝14.9,1.2hz,1h),4.11(d,j＝13.8hz,1h),3.85(t,j＝7.3hz,1h),3.81–3.72(m,11h),3.71–3.63(m,11h),3.28(d,j＝6.9hz,2h),3.14(td,j＝6.9,4.5hz,2h),2.89–2.83(m,1h),2.81(s,2h),2.77–2.68(m,2h),2.66–2.41(m,3h),2.24(d,j＝12.9hz,1h),2.12–1.98(m,2h),1.97–1.88(m,1h),1.72(dt,j＝13.8,7.0hz,1h),1.63(dp,j＝14.7,6.9,6.4hz,4h),1.57–1.42(m,1h),1.38(p,j＝7.2hz,3h),1.29(s,1h),1.24–1.15(m,1h),0.87(t,j＝7.4hz,4h).lcms1077(m+h).

(23)dfkbp37

将5-((2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(11.56mg，0.0206mmol，1当量)在206μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(14.31mg，0.0206mmol，1当量)中。加入dipea(10.21μl，0.0618mmol，3当量)，然后加入hatumg，0.0206mmol，1当量)。混合物在室温下搅拌22小时，然后将混合物用etoac稀释，用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到黄色油状物(13mg，57％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(5.4mg，23.32％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.53(dd,j＝8.4,1.1hz,1h),7.21(ddd,j＝10.6,6.2,2.3hz,1h),7.01(t,j＝1.8hz,1h),6.90–6.79(m,4h),6.74(tt,j＝4.1,2.4hz,2h),6.68–6.64(m,1h),6.62(d,j＝2.4hz,2h),5.42(d,j＝5.4hz,1h),5.06–4.98(m,1h),4.59–4.51(m,1h),4.48–4.39(m,1h),4.12(d,j＝13.3hz,2h),3.86(t,j＝7.1hz,1h),3.81–3.75(m,10h),3.69–3.65(m,11h),3.65–3.62(m,2h),3.57(d,j＝4.6hz,3h),3.55–3.50(m,2h),3.48(dd,j＝6.2,2.2hz,1h),3.38–3.34(m,2h),2.83(ddd,j＝17.7,11.4,3.9hz,1h),2.76–2.60(m,2h),2.57–2.39(m,2h),2.30–2.16(m,2h),2.08–1.89(m,2h),1.77–1.54(m,3h),1.46(d,j＝13.2hz,1h),1.29(s,2h),0.91–0.85(m,5h).lcms1025(m+h).

(24)dfkbp38

将n-(3-(氨基甲基)-苯基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异二氢吲哚-4-基)氧基)乙酰胺(7.35mg，0.0134mmol，1当量)作为在134μldmf(0.1m)中的溶液加入到fkbp酸(9.35mg，0.0134mmol，1当量)中。加入dipea(6.68μl，0.0404mmol，3当量)，然后加入hatu(5.09mg，0.0133mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌20小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到黄色粉末(11.8mg，79％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色粉末(7.1mg，47.6％产率)。1hnmr(500mhz,氯仿-d)δ9.53–9.37(m,1h),7.82–7.68(m,3h),7.58(d,j＝7.3hz,1h),7.41(dd,j＝31.3,15.5hz,1h),7.24(dt,j＝8.3,2.9hz,1h),7.21–7.14(m,1h),6.93–6.77(m,3h),6.76–6.68(m,1h),6.65–6.58(m,2h),6.46(d,j＝4.1hz,2h),6.38(d,j＝2.1hz,1h),5.44–5.40(m,1h),5.09–5.01(m,1h),4.79–4.66(m,2h),4.65–4.48(m,2h),3.84–3.78(m,10h),3.76(d,j＝2.1hz,2h),3.67(d,j＝2.9hz,4h),3.53(t,j＝7.3hz,1h),2.89(s,1h),2.84–2.76(m,2h),2.53–2.43(m,1h),2.17(s,2h),2.10–1.97(m,1h),1.74(dtd,j＝13.9,7.1,2.8hz,1h),1.53(s,14h),0.87(dt,j＝14.7,7.0hz,5h),0.79–0.74(m,1h).lcms1112(m+h).

实施例94：本申请化合物的合成

(1)

将5-((4-氨基丁基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(233.07mg，0.051mmol，1当量)在510μldmf(0.1m)中的溶液加入到jq1-酸(20.46mg，0.051mmol，1当量)中。加入dipea(25.28μl，0.153mmol，3当量)，然后加入hatu(19.39mg，0.051mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌20小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(31.3mg，84.4％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(16.7mg，45％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.51(dd,j＝8.4,1.3hz,1h),7.44–7.39(m,2h),7.36–7.30(m,2h),6.95(t,j＝2.0hz,1h),6.81(ddd,j＝8.4,2.2,1.2hz,1h),5.01(ddd,j＝12.7,5.5,3.0hz,1h),4.64(dd,j＝9.0,5.2hz,1h),3.47–3.34(m,2h),3.25(tt,j＝9.7,6.2hz,2h),2.88–2.79(m,1h),2.77–2.70(m,1h),2.68(s,3h),2.42(s,4h),2.07(ddq,j＝10.3,5.4,2.8hz,1h),1.75–1.68(m,5h),1.67–1.63(m,3h),1.29(s,1h).lcms728(m+h).

(2)

将4-((8-氨基辛基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(23.59mg，0.046mmol，1当量)在460μldmf(0.1m)中的溶液加入到jq1-酸(18.68mg，0.046mmol，1当量)中。加入dipea(23.1μl，0.139mmol，3当量)，然后加入hatu(17.49mg，0.046mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌18小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色粉末(26mg，72.18％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(17.1mg，47.4％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.52(dd,j＝8.6,7.2hz,1h),7.46–7.43(m,2h),7.39(d,j＝8.6hz,2h),7.00(dd,j＝7.6,2.0hz,2h),5.03(dd,j＝12.5,5.5hz,1h),4.62(dd,j＝9.0,5.2hz,1h),3.40(dd,j＝14.9,9.0hz,1h),3.28(d,j＝6.8hz,2h),3.27–3.17(m,2h),2.89–2.79(m,1h),2.74(dd,j＝4.4,2.6hz,1h),2.68(s,3h),2.43(s,4h),2.13–2.01(m,1h),1.68(s,3h),1.63(q,j＝7.2hz,1h),1.56(q,j＝7.0hz,2h),1.46–1.34(m,9h),1.29(s,1h).lcms784(m+h).

(3)

将4-((4-氨基丁基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(22.71mg，0.0497mmol，1当量)在497μldmf(0.1m)中的溶液加入到jq1-酸(19.95mg，0.0497mmol，1当量)中。加入dipea(24.67μl，0.149mmol，3当量)，随后加入hatu(18.89mg，0.0497mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌17小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(30.4mg，72％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g二氧化硅柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色油状物(26.6mg，63.6％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.51(ddd,j＝8.3,7.1,0.8hz,1h),7.45–7.41(m,2h),7.34(dd,j＝8.7,3.4hz,2h),7.06–7.00(m,2h),5.01(ddd,j＝12.9,10.8,5.5hz,1h),4.62(ddd,j＝9.0,5.3,2.3hz,1h),3.44–3.33(m,3h),3.27(ddd,j＝14.7,5.2,2.2hz,1h),2.83(ddd,j＝14.2,5.4,2.6hz,1h),2.76–2.70(m,2h),2.43(s,3h),2.07(dtt,j＝12.9,5.4,2.9hz,1h),1.76–1.68(m,5h),1.66(s,3h).lcms728(m+h).

(4)

将n-(23-氨基-3,6,9,12,15,18,21-七氧杂二十三烷基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-吡啶-2-基)氧基)乙酰胺(60.49mg，0.076mmol，1当量)在760μldmf(0.1m)中的溶液加入到jq1-酸(30.80mg，0.076mmol，1当量)中。加入dipea(38μl，0.23mmol，3当量)，然后加入hatu(28.89mg，0.076mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌20小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(42.8mg，52.8％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(36.6mg，45.2％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.81–7.75(m,1h),7.50(d,j＝7.3hz,1h),7.45(d,j＝8.6hz,2h),7.43–7.37(m,3h),5.09(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),4.76(s,2h),4.63(dd,j＝9.1,5.2hz,1h),3.66–3.55(m,30h),3.51–3.41(m,5h),2.90–2.83(m,1h),2.79–2.71(m,2h),2.69(s,3h),2.43(s,3h),2.14(ddt,j＝10.5,5.5,3.2hz,1h),1.69(s,3h).lcms1065(m+h).

(5)

将n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺(28.9mg，0.052mmol，1当量)在524μldmf(0.1m)中的溶液加入到jq1-酸(21.01mg，0.052mmol，1当量)中。加入dipea(524μl，0.157mmol，3当量)，然后加入hatu(19.77mg，0.052mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌20小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色粉末(33.7mg，78％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色粉末(13.8mg，32％产率)。¹hnmr(500mhz,氯仿-d)δ7.39(dd,j＝8.2,4.7hz,3h),7.31(dd,j＝8.5,3.5hz,3h),7.23(dd,j＝7.6,3.8hz,1h),6.65(dd,j＝8.0,3.4hz,1h),5.20–5.00(m,2h),4.63(q,j＝7.1hz,2h),3.87(d,j＝5.6hz,1h),3.52(ddd,j＝29.5,14.8,7.8hz,1h),3.37–3.13(m,6h),2.71–2.54(m,7h),2.39(d,j＝3.3hz,5h),1.66(d,j＝5.7hz,5h),1.52(t,j＝7.1hz,1h),1.43(dt,j＝17.8,5.3hz,3h),1.35–1.21(m,3h).lcms827(m+h).

(6)

将n-(8-氨基辛基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(29.52mg，0.053mmol，1当量)在536μldmf(0.1m)中的溶液加入到jq1-酸(12.51mg，0.053mmol，1当量)中。加入dipea(26.6μl，0.161mmol，3当量)，然后加入hatu(20.15mg，0.053mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌20小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色油状物(27.4mg，62.5％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色油状物(19.6mg，44.7％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.50–7.41(m,4h),7.41–7.37(m,2h),7.12(dd,j＝7.9,1.4hz,1h),5.14(dt,j＝11.4,3.2hz,1h),4.66–4.60(m,3h),4.58–4.47(m,2h),3.44–3.34(m,1h),3.30–3.20(m,4h),2.94–2.84(m,1h),2.76(ddq,j＝17.7,5.0,2.5hz,1h),2.68(s,3h),2.53–2.45(m,1h),2.43(s,3h),2.17(ddt,j＝10.0,4.9,2.6hz,1h),1.68(s,3h),1.53(dp,j＝21.0,6.8hz,4h),1.39–1.24(m,9h).lcms827(m+h).

(7)

将n-(9-氨基壬基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙酰胺(7.5mg，0.0135mmol，1当量)在135μldmf(0.1m)中的溶液加入到jq1酸(5.41mg，0.0135mmol，1当量)中。加入dipea(6.7μl，0.0405mmol，3当量)，随后加入hatu(5.13mg，0.0135mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌19小时，然后将混合物用etoac稀释，用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色粉末(10.5mg,94.3％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到白色粉末(6.8mg，61％产率)。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.81–7.73(m,2h),7.67(dd,j＝7.5,1.2hz,1h),7.47–7.43(m,2h),7.40(d,j＝8.7hz,2h),5.11(dd,j＝12.7,5.5hz,1h),4.63(dd,j＝8.9,5.3hz,1h),4.10(q,j＝7.1hz,1h),4.04(d,j＝4.1hz,2h),3.41(dd,j＝14.9,9.0hz,1h),3.29–3.20(m,2h),3.17(td,j＝6.9,2.0hz,2h),2.90–2.80(m,1h),2.78–2.70(m,2h),2.44(s,3h),2.12(ddd,j＝7.8,5.7,2.7hz,1h),2.01(s,1h),1.70(s,3h),1.56(q,j＝7.3hz,2h),1.49(q,j＝6.8hz,2h),1.38–1.28(m,11h),1.24(t,j＝7.1hz,1h),0.95–0.81(m,1h).lcms839(m+h).

(8)

将(r)-n-(4-氨基丁基)-2-((2-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(47.1mg，0.113mmol，1当量)在1.13mldmf(0.1m)中的溶液加入到jq1-酸(45.3mg，0.113mmol，1当量)中。加入dipea(56.02μl，0.339mmol，3当量)，随后加入hatu(42.96mg，0.113mmol，1当量)。将混合物在室温下搅拌21小时。然后将混合物用etoac稀释并用饱和碳酸氢钠、水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到黄色粉末(49.2mg，54.5％产率)。将粗物质通过柱色谱法(isco，4g硅胶柱，0-10％meoh/dcm，25分钟梯度)纯化，得到黄色粉末(20.1mg，22％产率)。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.77(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.47(s,1h),7.44(d,j＝2.1hz,1h),7.42(d,j＝1.3hz,2h),7.40(d,j＝2.3hz,2h),7.38(d,j＝2.6hz,1h),4.73(s,2h),4.66–4.61(m,1h),3.45–3.34(m,3h),2.98(s,2h),2.68(d,j＝11.1hz,5h),2.44(dd,j＝8.2,0.9hz,4h),1.96(s,3h),1.69–1.62(m,7h),0.95–0.81(m,4h).lcms799(m+h).

实施例95：本申请化合物的生物活性

使用本申请中公开的生物测定法，例如实施例94中所述的方法，证明本申请的化合物具有有效的生物活性，例如结合蛋白靶标、介导蛋白降解等，如下表所示。

表4-1

表4-2

表4-3

na:无活性

nt:未检测到

表5

表6

实施例96：实验程序

蛋白纯化和晶体结构

在存在50mg/ml卡那霉素的lb培养基中，在大肠杆菌bl21(de3)中过表达pnic28bsa4载体(addgene)中包含残基44-168的人brd4的构建体。细胞在37℃下生长至od为0.8，用500μm异丙基-1-硫代-d-半乳糖苷诱导，于17℃温育过夜，离心收集，储存于-80℃。将细胞沉淀物在缓冲液a(50mmhepes7.5+300mmnacl+10％甘油+10mm咪唑+3mmbme)中超声处理，所得裂解物以35,000×g离心40分钟。将ni-nta珠(qiagen)与裂解物上清液混合30分钟并用缓冲液a洗涤。将珠转移至fplc相容性柱，结合的蛋白用15％缓冲液b(50mmhepes7.5+300mmnacl+10％甘油+300mm咪唑+3mmbme)洗涤，并用100％缓冲液b洗脱。将tev加入洗脱的蛋白中，并在4℃下温育过夜。然后将样品通过用缓冲液a(无咪唑)平衡的脱盐柱(26/10柱)，并将洗脱的蛋白进行第二次ni-nta步骤以除去组氨酸标签和tev。将洗脱液浓缩，并通过在20mmhepes7.5+150mmnacl+1mmdtt中的superdex-20010/300柱。合并级分，浓缩至14mg/ml，并在-80℃冷冻。

结晶、数据采集和结构测定

将1.5倍过量的10mmdbet1(在dmso中)与500μm蛋白混合，并在20℃下在结晶缓冲液15％peg3350、0.1m琥珀酸盐中通过沉滴蒸气扩散结晶。在液氮中快速冷冻之前，将晶体短暂地转移到含有25％甘油的结晶缓冲液中。在先进光子源(argonne国家实验室)在ne-cat的束线24id-c处收集来自复杂晶体的衍射数据，并且使用xds(kabsch,w.actacrystallographicasectiond,biologicalcrystallography2010,66,133)对数据集整合和分级。结构通过使用程序phaser(mccoyetal.,journalofappliedcrystallography2007,40,658)和搜索模型pdb条目xxxx通过分子置换来解析。使用buster自动定位和细化配体(smartetal.actacrystallographicasectiond,biologicalcrystallography2012,68,368)。使用phenix(adamsetal.actacrystallographicasectiond,biologicalcrystallography2010,66,213)和coot(emsley,p.；cowtan,k.actacrystallographicasectiond,biologicalcrystallography2004,60,2126)建立和细化的迭代模型导致具有表4所示的统计信息的模型。

表7.数据收集和细化统计

最高分辨率shell的统计信息显示在括号中。

brd4alphascreen

用最小修改的制造商的方案(perkinelmer，usa)进行测定。将所有试剂在50mmhepes、150mmnacl，0.1％w/vbsa、0.01％w/vtween20中稀释，ph7.5，并使其平衡至室温，随后加入板。在将α珠加入母液后，所有后续步骤都在低光条件下进行。将终浓度为40nm的brd4、10μg/ml的ni包被的受体珠和20nm生物素化的jq1(andersetal.naturebiotechnology2013,32,92)的组分的2×溶液以10μl加入至384孔板(alphaplate-384,perkinelmer,usa)。将板以150×g离心，使用janus工作站(perkinelmer,usa)通过针转移加入来自储存板的100nl化合物的dmso溶液。如先前的溶液以2×10μl体积的量加入链霉抗生物素蛋白包被的供体珠(终浓度为10μg/ml)。加入后，将板用箔密封以防止曝光和蒸发。将板再次以150×g离心。将板在室温下温育1小时，然后使用制造商的方案在envision2104(perkinelmer,usa)上读数。使用prismgraphpadv6分析数据以获得ic50值。

brd4双荧光素酶测定

在293ft细胞中产生包含与纳米荧光素酶(nluc)和单独的萤火虫萤光素酶(fluc)连接的融合brd4的慢病毒构建体，用于转导293ft细胞。用嘌呤霉素选择转导的细胞并扩增。对于测定，以1000个细胞/孔将细胞以20μl分配到白色384孔培养板中。使细胞粘附到板上过夜，然后使用janus工作站(perkinelmer)用在dmso中的100nl化合物固定。将细胞与化合物在37℃、5％co2下温育4小时，然后冷却至室温。向每个板中加入25μlfluc缓冲液(200mmtris，15mmmgso4，100μmedta，1mmdtt，1mmatp，200μm辅酶a，400μmd-萤光素，0.1％tritionx-100)。将板在室温下温育15分钟，然后在envision2104(perkinelmer)上读取发光。然后将25μlnluc缓冲液(25mmna4ppi，10mmnaoac，15mmedta，500mmnaso4，500mmnacl，16μm腔肠素，50μm4-(6-甲基-1,3-苯并噻唑-2-基)苯胺[santacruzbiotechnology,sc-276812])加入到每个孔中，并将板在室温下温育15分钟，然后读取发光。将每个板上每个读数的发光值归一化为dmso对照，然后对每个孔取nluc/fluc信号比。使用prismgraphpadv6进一步分析这些数据以获得ic50和最大降解值(参见例如表4-3“conc@最大(μm)”、“最大降解(双荧光素酶)”和“pdc50(双荧光素酶)”)。

ikzf1双荧光素酶测定

在293ft细胞中产生包含与纳米荧光素酶(nluc)和单独的萤火虫荧光素酶(fluc)连接的融合ikzf1的慢病毒构建体，用于转导293ft细胞。用嘌呤霉素以2μg/ml选择转导的细胞并扩增。对于测定，以1000个细胞/孔将细胞以20μl分配到白色384孔培养板中。使细胞粘附到板上过夜，然后使用janus工作站(perkinelmer)用在dmso中的100nl化合物固定。将细胞与化合物在37℃、5％co2下温育4小时，然后冷却至室温。向每个板中加入25μlfluc缓冲液(200mmtris，15mmmgso4，100μmedta，1mmdtt，1mmatp，200μm辅酶a，400μmd-萤光素，0.1％tritionx-100)。将板在室温下温育15分钟，然后在envision2104(perkinelmer)上读取发光。然后将25μlnluc缓冲液(25mmna4ppi，10mmnaoac，15mmedta，500mmnaso4，500mmnacl，16μm腔肠素，50μm4-(6-甲基-1,3-苯并噻唑-2-基)苯胺[santacruzbiotechnology,sc-276812])加入到每个孔中，并将板在室温下温育15分钟，然后读取发光。将每个板上每个读数的发光值归一化为dmso对照，然后对每个孔取nluc/fluc信号比。使用prismgraphpadv6进一步分析这些数据以获得ic50和最大降解值(参见例如表6)。

fkbp双荧光素酶测定

用表达fkbp12融合纳米荧光素酶(nluc；ha标记)以及来自相同多顺反子转录物的萤火虫荧光素酶(fluc)的慢病毒载体，或者用表达fkbp12融合纳米荧光素酶(nluc；ha标记)以及来自相同多顺反子转录物的萤火虫荧光素酶(fluc)的慢病毒载体，转导野生型293ft细胞或小脑蛋白突变型293ft细胞(crbn^-/-)。细胞用增加浓度的各种dfkbp处理4小时。测量nluc和fluc的量，并通过计算nluc/fluc的信号比来量化fkbp12-ha-nluc的丰度。

fkbp12(wt和36v)配体置换alphascreen测定

在384孔alphaplates(perkinelmer)中，将90nmgst-fkbp12(wt或36v)和62.5nm生物素-slf在含有竞争剂化合物或dmso的20μl测定缓冲液(含有0.1％bsa和0.01％tritonx-100的pbs)中稀释。在30分钟温育后，向每个孔中加入20μl检测溶液，其含有在测定缓冲液中稀释至20ng/μl的链霉亲和素供体珠和谷胱甘肽受体珠。在室温下温育1小时后，在envision2104平板读数器上测量发光。通过将平均背景(无蛋白孔)设置为平均dmso孔的0％至100％活性来计算活性值百分比。从化合物浓度的至少四次重复测量确定标准偏差。使用graphpadprismv6分析和绘制数据，并使用‘log(抑制剂)相对于归一化响应-变化斜率’分析模型测定ic50值(参见例如表5)。

crbn-ddb1表达和纯化

如fischer,e.s.etal.,nature512,49(2014)所述，使用sf9细胞(invitrogen)进行crbn-ddb1的表达和纯化。编码人crbn和ddb1的pfastbac载体用于蛋白的表达。

crbn-ddb1/brd4二聚化测定

alphascreen技术用于检测由dbet分子诱导的crbn-ddb1/brd4二聚化。简言之，将gst-brd4[49-170](sigmaaldrich)和crbn-ddb1(6xhis标记的)在测定缓冲液(50mmhepesph7.4，200mmnacl，1mmtcep和0.1％bsa)中分别稀释至125nm和250nm，并将20μl蛋白混合物加入384孔alphaplate(perkinelmer)的每个孔中。然后使用janus工作站(perkinelmer)从dmso储备板以100nl/孔加入化合物。在室温下温育1小时后，将镍螯合物受体珠和谷胱甘肽供体珠(perkinelmer)在测定缓冲液中稀释至2×浓度(20ng/μl)，并以每孔20ul加入。在envision2104平板读数器(perkinelmer)上进行发光检测之前，将板在室温下温育1小时。对于竞争测定，在111nmdbet1存在下将gst-brd4[49-170]和crbn-ddb1如上所述稀释。如上所述进行化合物添加和随后的检测。

使用graphpadprismv6对数据进行分析和绘制。使用“guassian”分析模型测定二聚体幅度、二聚体平均值和二聚体sd值(参见例如表4-3)。

crbn-ddb1配体置换alphascreen测定

沙利度胺竞争alphascreen测定用于测量沙利度胺偶联物和新imid与crbn-ddb1的结合亲和力(ic50)。在384孔alphaplates(perkinelmer)中，将50nmcrbn-ddb1和125nm生物素-沙利度胺在含有竞争化合物或dmso的20μl测定缓冲液(50mmhepesph7.4，200mmnacl，1mmtcep和0.1％bsa)中稀释。温育30分钟后，向每个孔中加入20μl检测溶液，其含有稀释至20ng/μl的链霉亲和素供体珠和镍螯合物受体珠。在室温下温育1小时后，在envision2104平板读数器上测量发光。通过将平均背景(无蛋白孔)设置为平均dmso孔的0％至100％活性来计算活性值百分比。从化合物浓度的至少四次重复测量确定标准偏差。使用graphpadprismv6分析和绘制数据，并使用‘log(抑制剂)相对于标准化响应-变化斜率’分析模型测定crbnalphaic50值(参见例如表4-3“thalalpha(ic50)”和表6)。

细胞内crbn结合测定

在293ft细胞中产生包含与纳米荧光素酶(nluc)和单独的萤火虫荧光素酶(fluc)连接的融合fkbp(36v)的慢病毒构建体，并用于转导293ft细胞。对于测定，以4000个细胞/孔将细胞分配到20μl的白色384孔培养板中。使细胞粘附到板上过夜，然后用在dmso中的100nl竞争化合物固定，然后使用janus工作站(perkinelmer)加入80nmdfkbp7。将细胞与化合物在37℃、5％co2下温育3小时，然后冷却至室温30分钟。向每个板中加入25μlfluc缓冲液(200mmtris，15mmmgso4，100μmedta，1mmdtt，1mmatp，200μm辅酶a，400μmd-萤光素，0.1％tritionx-100)，将板在室温下温育15分钟，然后在envision2104(perkinelmer)上读出发光值。将25μl的nluc缓冲液(25mmna4ppi，10mmnaoac，15mmedta，500mmnaso4，500mmnacl，16μm腔肠素，50μm4-(6-甲基-1,3-苯并噻唑-2-基)苯胺[sc-276812])加入各孔中，将板在室温下温育15分钟，然后读取发光值。每个孔采用nluc/fluc信号比，通过将仅有dfkbp7的孔设置为0％，将仅有dmso的孔设置为100％，对这些值进行归一化。使用graphpadprismv6进一步分析和绘制数据，并使用‘log(激动剂)相对于标准化反应-变化斜率’分析模型测定ic50值(参见例如表4-3“fkbp7救援(ec50)”和表5)。

细胞系

293ft和293ft^crbn-/-在补充有10％fcs和1％青霉素/链霉素的dmem中培养。将mv4-11、molm13、mm1s和mm1s^crbn-/-在补充有10％fcs和1％青霉素/链霉素的rpmi中培养。将sum149细胞在含有dmemf12(corningcellgro，10-090-cv)(1:1))和含有1％青霉素/链霉素的最终5％fcs的humec培养基(细胞应用，815-500)中培养。

原发性患者材料的培养

将细胞新鲜融化并在补充有(全部为ng/ml终浓度)：il-3(20)、il-6(20)、flt3l(100)、scf(100)和gscf(20)的stemspansfem培养基(stemcell)中生长24小时。之后，细胞用指定浓度的dbet1或jq1和更新的细胞因子处理24小时。随后，将细胞用于免疫印迹分析或用于facs分析。

流式细胞仪分析凋亡细胞

对于每个样品，细胞用500μlpbs洗涤，并以400×g离心5分钟并从培养基中吸出。然后将细胞重悬于膜联蛋白v结合缓冲液：140mmnacl，10mmhepes，2.5mmcacl2，ph7.4，将500μl各样品转移到5ml聚苯乙烯facs管(falcon目录号352054)中。将细胞以400×g离心5分钟并从缓冲液吸出。向每个样品中加入400μl含有250ng/mlfitc-膜联蛋白v和500ng/ml碘化丙啶的膜联蛋白v结合缓冲液用于染色。然后在bdlsrfortessa上分选细胞，并使用flowjov10软件(treestar，inc)进行分析。

通过半胱天冬酶球蛋白测定分析凋亡细胞

已按照制造商的建议进行半胱天冬酶球蛋白测定(promega)。细胞以5000个细胞/孔的密度接种在白色384孔板(thermoscientificnunc,#164610)中，总体积为40ul，并用各种化合物或载体对照处理。温育24小时后，每孔加入30μl的半胱天冬酶底物。将板在黑暗中温育90分钟，并在envision平板读数器(perkinelmer)上读数。

brd4-高含量测定

使用96孔板的内部60孔，以3×10⁵个细胞/孔的密度铺板sum149细胞。24小时后，加入不同浓度的化合物。以最小修改的制造商方案(licorin-cellwesternassaykit)进行测定。简言之，将细胞在室温下用3.7％甲醛固定在pbs中(200μl/孔)20分钟，随后使用1×pbs与0.1％tritonx-100(5×200μl/孔)透化。然后，使用100μl1:1稀释的odyssey封闭缓冲液(licor)在室温下封闭细胞90分钟。接下来，将细胞与在odyssey封闭缓冲液(licor)(50μl/孔)中1：1000稀释的brd4抗体在4℃下温育过夜。第二天，用tbst洗涤板5次(每孔200μl)。然后，将平板用1:800稀释的irdye800cw山羊抗兔抗体(licor)同时用celltag700stain(1:500，licor)对板染色，用于细胞归一化。将板在室温下在黑暗中温育1小时，用tbst(每孔200μl)洗涤5次，并在odysseyclx成像仪(li-cor)上成像。

qrt-pcr

使用rneasyplusminikit(qiagen)分离rna，使用superscriptreversetranscriptase(lifetechnologies)每个样品使用500ng总rna进行逆转录。将cdna稀释为1:9，并且使用sybrselectmastermix将2μl用作qrt-pcr的模板。使用以下引物：

gapdh(f):ccactcctccacctttgacseqidno.1

gapdh(r):accctgttgctgtagccaseqidno.2

brd2(f):gtggttctcggcggtaagseqidno.3

brd2(r):ggttgacaccccggattacseqidno.4

brd3(f):ttggcaaacctcatctcaaaseqidno.5

brd3(r):gatgtccggctgatgttctcseqidno.6

brd4(f):ctccgcagacatgctagtgaseqidno.7

brd4(r):gtaggatgactgggcctctgseqidno.8

c-myc(f):caccgagtcgtagtcgaggtseqidno.9

c-myc(r):gctgcttagacgctggatttseqidno.10

pim1(f):tcatacagcaggatccccaseqidno.11

pim1(r):ccgtctacacggacttcgatseqidno.12

用于定量质谱分析的样品制备

如前所述用以下修改版本制备样品(weekes,m.p.etal.,cell157,1460(2014))。所有溶液都报告为最终浓度。将裂解缓冲液(8m尿素，1％sds，50mmtrisph8.5，来自roche的蛋白酶和磷酸酶抑制剂)加入到细胞沉淀中以获得蛋白浓度为2-8mg/ml之间的细胞裂解液。微量bca测定(pierce)用于测定细胞裂解液中的最终蛋白浓度。如前所述蛋白被还原并烷基化。使用甲醇/氯仿沉淀蛋白。简言之，将四体积的甲醇加入到细胞裂解液中，随后加入一体积的氯仿，最后加入三体积的水。将混合物涡旋并离心以将氯仿相与水相分离。沉淀的蛋白用一体积冰冷的甲醇洗涤。将洗过的沉淀蛋白风干。沉淀的蛋白重悬于4m尿素，50mmtrisph8.5中。蛋白首先用lysc(1:50；酶：蛋白)在25℃下消化12小时。将lysc消化物稀释至1m尿素，50mmtrisph8.5，然后在25℃下用胰蛋白酶(1:100；酶：蛋白)消化另外8小时。肽使用c18固相萃取盒脱盐。将干燥的肽重悬于200mmepps中，ph8.0。使用微量bca测定(pierce)进行肽定量。用tandemmasstag(tmt)试剂(1:4；肽：tmt标签)(pierce))标记来自每种条件的相同量的肽。10-plex标记反应在25℃下进行2小时。通过在25℃下加入5％羟胺15分钟，逆转tmt对酪氨酸残基的修饰。将反应用0.5％tfa淬灭，并将样品以1:1:1:1:1:1:1:1:1:1的比例合并。如前所述，将合并的样品脱盐并离线分级成24份。

液相色谱法-ms3光谱(lc-ms/ms)

使用lc-ms3数据采集策略(mcalister,g.c.etal.,anal.chem.86,7150(2014))在proxeoneasynlc1000的orbitrap融合质谱仪(thermofisherscientific)上分析来自基本反相步骤(每隔一个级分)的24个肽级分中的12个，用于在线样品处理和肽分离。将重悬于5％甲酸+5％乙腈中的约5μg肽加载到内径100μm的熔融二氧化硅微毛细管上，将针尖拉至小于5μm的内径。柱用c18反相树脂(gp118树脂1.8μm，sepaxtechnologies)内部填充到35cm长。使用从缓冲液a(3％acn+0.125％甲酸)平衡的3％至25％缓冲液b(100％acn+0.125％甲酸)120分钟线性梯度以600nl/分钟的流速过柱来分离肽。fusionorbitrap的扫描序列以ms1谱(orbitrap分析，分辨率120,000，4400-1400m/z扫描范围，agc目标2×105，最大注射时间100ms，动态排除75秒)开始。选择“前n个”(前10个前体)用于ms2分析，其由cid(0.5da的四极隔离设置和离子阱分析，agc4×103，nce35，最大注射时间150ms)组成。选择来自每个ms2扫描的前十个前体用于ms3分析(同步前体选择)，其中前体在orbitrap分析之前被hcd分段(nce55，最大agc5×104，最大注射时间150ms，隔离窗口2.5da，分辨率60,000。

lc-ms3数据分析

一套内部软件工具用于raw文件处理和控制肽和蛋白水平的假发现率、从肽组装蛋白和肽的蛋白定量，如前所述。针对uniprot人类数据库(2014年2月)用正向和反向序列进行ms/ms谱的检索。数据库检索标准如下：具有两个缺失裂解的胰蛋白酶，50ppm的前体质量容限，1.0da的片段离子质量容限，半胱氨酸的静态烷基化(57.02146da)，赖氨酸残基和肽的n-末端的静态tmt标记(229.162932da)，和甲硫氨酸的可变氧化(15.99491da)。使用在ms3扫描中围绕每个报道离子的理论m/z的0.003da窗口测量tmt报道离子强度。匹配质量差的ms3光谱的肽质谱被排除在定量之外(跨10个信道的<200的信噪比和<0.5的前体分离特异性)。

mv4-11异种移植实验

每只小鼠(nsg)皮下注射体积为200ulpbs的1×10e7个mv4-11细胞。通过生物发光和卡尺测量监测成功的植入。注射mv4-11细胞后11天，肿瘤明显，小鼠分布在对照(载体)或dbet1处理的组中。每天用50mg/kg的dbet1或载体(captisol)通过腹膜内注射治疗小鼠。通过卡尺测量记录肿瘤体积。研究在治疗开始14天后终止，此时载体处理的小鼠的肿瘤大小达到制度限制。

表达蛋白组学

用dmso、250nmdbet1或250nmjq1一式三份处理5×10⁶个细胞2小时，用冰冷的pbs洗涤3次并在液氮中快速冷冻。接下来，将样品在裂解缓冲液(8m尿素，1％sds，50mmtris，ph8.5，蛋白酶和磷酸酶抑制剂)中机械均质化，并使用微bca试剂盒(pierce)进行蛋白定量。蛋白定量后，立即用dtt还原裂解物，并用碘乙酰胺烷基化。用甲醇/氯仿沉淀600μg蛋白，用lysc和胰蛋白酶消化。用tandemmasstag(tmt，thermoscientific)试剂对50μg的每种样品进行标记，并分级用于总蛋白组学分析。

在以下条件下进行反相分级：缓冲液a：5％acn，50mmambicph8.0；缓冲液b：90％acn，50mmambicph8.0(级分尺寸-37秒(～300μl))。

蛋白通过brp分级，并收集到每组12个级分的两组中。在orbitrapfusion质谱仪上分析来自hprp的一套完整组(12个级分)。在200分钟内使用3-25％乙腈在0.125％甲酸中的梯度分离肽。在orbitrap中检测(ms1)并定量(ms3)肽，在离子阱中对肽进行测序(ms2)。使用sequest算法针对来自含有其反向互补物和已知污染物的人类蛋白组的uniprot复合数据库检索ms2光谱。使用与线性判别分析结合的目标诱饵策略将所有肽谱匹配滤波为1％的假发现率(fdr)。蛋白仅从具有>＝200的总sn阈值和0.5的ms2分离特异性的肽中定量。

免疫印迹

使用补充有蛋白酶抑制剂混合物(roche)和0.1％苯甲酸酶(novagen)的ripa缓冲液将细胞在冰上裂解15分钟。裂解物在4℃下以16000×g离心15分钟，并使用bca(pierce)测定法测定蛋白浓度。在本研究中使用以下一抗：brd2(bethyl实验室)，brd3(abcam)，brd4(bethyl实验室)，myc，微管蛋白和黏着斑蛋白(全部来自santacruz)以及pim1(细胞信号传导技术)和ikzf3(novusbiologicals)。使用odysseyclximager(li-cor)上的荧光标记的二抗(li-cor)对印迹进行成像。使用odysseyclx软件(li-cor)进行带强度的量化。

免疫组化

使用a301-985a抗体(bethyl实验室)按照浓度为1：2000的推荐参数进行brd4染色。如前所述进行myc和ki67染色。使用aperio软件(leicabiosystems)进行阳性染色的核的量化。

等同

本领域技术人员将认识到或使用不超过常规实验能够确定本文所述的具体实施方案和方法的许多等同。这样的等同物旨在被本申请的范围所涵盖。

本文引用的所有专利、专利申请和文献参考文献通过引用明确地并入本文。