一株产二甲苯单加氧酶的菌株Arthrobacterwoluwensis及其应用的制作方法

文档序号:12248358阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一株产二甲苯单加氧酶的菌株Arthrobacter woluwensis HW-1,保藏于中国典型培养物保藏中心,其菌种保藏编号为CGMCC 12833。

2.权利要求1所述Arthrobacter woluwensis HW-1菌株在制备5-甲基吡嗪-2-羧酸中的应用。

3.应用Arthrobacter woluwensis HW-1菌株制备5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法,其特征在于,以2,5-二甲基吡嗪为原料,以发酵培养获得含有二甲苯单加氧酶活性的HW-3菌株作为催化剂,于pH 5.0~8.0,20~40℃下进行发酵转化,通过批次补料的方式进行反应提高产物积累量,最终获得所述较高浓度的产物5-甲基吡嗪-2-羧酸。

4.权利要求3所述制备5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法,其特征在于,

第一步 菌体种子液的制备

Arthrobacter woluwensis接种到种子培养基中,在摇床转速100~180 r·min-1、20~40℃下培养12~24 h,获得种子液,其中,所述种子培养基成分为蛋白胨10 g/L,酵母膏5 g/L,NaCl 10g/L,溶剂为水;

第二步 菌株发酵及生物转化

(1)将Arthrobacter woluwensis种子液以1~5%的接种量接到发酵培养基中,在二甲苯的诱导下,摇床转速100~180 r·min-1 、pH 6.0~8.0,20~40℃培养;

所述培养基组成为:酵母粉0.5~2.0 g/L;蛋白胨1.0~4.0 g/L;硫酸铵 1.0~3.0 g/L;碳酸氢钠 1.0~5.0 g/L;磷酸二氢钾 0.5~4.0 g/L;氯化钠1.0~5.0 g/L;氯化镁 0.1~0.5 g/L;氯化钙 1.0~5.0 g/L;氯化铁 0.05~0.3 g/L;硫酸锌0.02~0.1 g/L;氯化锰 0.05~0.1 g/L;氯化铜 0.05~0.02 g/L;氯化镍0.01~0.03 g/L;EDTA·Na2·2H2O 1.0~5.0 g/L;硫酸亚铁1.0~3.0 g/L,二甲苯 0.1~2 mL/L,溶剂为水;

(2)向发酵液中加入底物2,5-二甲基吡嗪,初始浓度为0.5~2 mL/L,继续发酵培养。

5.权利要求3所述制备5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法,其特征在于,在发酵转化过程中的pH维持在6.0~7.0之间。

6.权利要求3所述制备5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法,其特征在于,转化率超过50%时适时进行补加底物2,5-二甲基吡嗪。

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