本发明涉及有机合成领域，具体地，涉及一种双席夫碱化合物、一种制备双席夫碱化合物的方法以及由该方法制备得到的双席夫碱化合物和双席夫碱化合物在抑制细菌生长中的应用。
背景技术：
：席夫碱(shciffbase)主要是指含有亚胺或甲亚胺特性基团(-rc＝n-)的一类有机化合物，通常席夫碱是由胺和活性羰基缩合形成。由于大多数的席夫碱具有抗菌、抗癌、抗炎和抗毒的生物性能，近几十年，研究者们对席夫碱化合物表现出了相当大的兴趣。杨丰科等(应用化学，第32卷第4期，2015.4，392-398)研究了席夫碱的合成及生物活性，其以对溴苯酚和苯甲酰氯为原料合成了一种新的单席夫碱，该化合物分别与不同的羰基化合物在酸性催化剂冰醋酸或碱性催化剂哌啶作用下发生缩合反应，合成了5种不对称双席夫碱和2种对称性双席夫碱，并通过uv、ir、13cnmr、1hnmr、元素分析、熔点等测试技术对产物进行了结构表征。将革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌作为供试菌种测定了化合物的抑菌活性，结果表明，大部分的化合物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长均具有一定的抑制作用并对菌种有一定的选择性，对金黄色葡萄球菌的抑制作用要强于对大肠杆菌的抑制作用，并且大多数不对称双席夫碱的抑菌活性高于对称双席夫碱的，其中含硫原子的席夫碱的抑菌活性最强。cn103755590a公开了一种席夫碱的制备方法及其应用，具体地，公开了席夫碱的制备方法及其在检测环境废水中痕量铬的应用，将环境废水中的铬还原为cr(iii)，与席夫碱反应形成络合物，用非离子表面活性剂/盐浊点萃取(cpe)对样品中cr(iii)-席夫碱络合物进行分离富集，形成黄色络合物，富集于表面活性剂富集相，对比标准铬含量，检测样品中痕量铬，检出限为0.1μg/ml。席夫碱配体是一类重要的有机配体，在光致变色、催化和医学等多个领域都有重要的应用。技术实现要素：本发明的目的是提供一种具有新的结构的以及具有抑制细菌生长功能的双席夫碱化合物及其制备方法。为了实现上述目的，第一方面，本发明提供一种双席夫碱化合物，该化合物具有式(1)所示的结构：其中，r1为选自由甲基、乙基、正丙基、异丙基、伯丁基、仲丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、伯丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基组成的组中的至少一种的基团，e为1-5的整数；r2为选自由甲基、乙基、正丙基、异丙基和卤素组成的组中的至少一种基团，b为0-3的整数；x为卤素。第二方面，本发明提供一种制备双席夫碱化合物的方法，该双席夫碱化合物具有式(1)所示的结构，该方法包括：1)在酸性条件下，将式(3)所示结构的化合物与式(4)所示结构的化合物进行第一反应，得到式(5)所示结构的化合物；2)在保护气体和自偶联催化剂存在下，将式(5)所示结构的化合物进行第二反应；其中，式(1)与式(4)、式(5)中的e、b和r1对应相同，式(1)与式(3)、式(5)中的e、b和r2对应相同，式(1)与式(3)、式(5)中的x对应相同，且e、b、r1、r2和x如本发明前述所定义。第三方面，本发明提供由前述方法制备得到的双席夫碱化合物。第四方面，本发明提供前述的双席夫碱化合物在抑制细菌生长中的应用。本发明提供的双席夫碱化合物具有新颖的结构，同时，本发明提供的双席夫碱化合物具有抑制细菌生长的功能，并且本发明提供的双席夫碱化合物与金属离子的络合能力强。本发明提供的制备双席夫碱化合物的方法反应时间短，操作工艺简单，易于控制，反应条件温和，对设备的要求低，且后处理简单。本发明提供的双席夫碱化合物具有抑制细菌生长的功能，并且，本发明提供的双席夫碱化合物的抑菌活性均较强。本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。具体实施方式以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。第一方面，本发明提供了一种双席夫碱化合物，该化合物具有式(1)所示的结构：其中，r1为选自由甲基、乙基、正丙基、异丙基、伯丁基、仲丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、伯丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基组成的组中的至少一种的基团，e为1-5的整数；r2为选自由甲基、乙基、正丙基、异丙基和卤素组成的组中的至少一种基团，b为0-3的整数；x为卤素。本发明中，所述r1和r2表示在相应的苯环上，两者可以为任意能够取代的位置，对r1和r2的取代个数没有限定，也就是说，在r1所在的苯环上，所述r1可以为邻位、对位和间位任意位置上的1-5个取代基，例如可以为1个邻位或者1个对位取代基，或者可以为2个邻位取代基，或者可以为1个邻位和1个对位取代基，或者可以为2个邻位和1个对位取代基，或者可以为1个邻位和1个间位取代基，或者可以为2个邻位和1个间位取代基，或者可以为2个邻位、2个间位和1个对位取代基。并且若是具有多个r1基团，所述多个r1基团并不特别要求均相同，可以为选自由甲基、乙基、正丙基、异丙基、伯丁基、仲丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、伯丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基组成的组中的任意一种或者多种基团。针对所述r2也有上述与r1类似的解释，本领域技术人员不应理解为对本发明的限制。也即，e和b分别表示r1和r2的个数。所述卤素包括氟元素、氯元素、溴元素和碘元素。根据第一种优选的具体实施方式，在式(1)中，r1为选自由甲基、乙基、正丙基、异丙基、伯丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和伯丁氧基组成的组中的至少一种的基团，e为1-3的整数；r2为选自由甲基、乙基、正丙基、异丙基、氟、氯和溴组成的组中的至少一种基团，b为0-3的整数；x为氟元素、氯元素或溴元素。根据第二种优选的具体实施方式，在式(1)中，r1为选自由甲基、乙基、正丙基、异丙基和伯丁基组成的组中的至少一种的基团，e为1、2或3；r2为选自由甲基、乙基、氯和溴组成的组中的至少一种基团，n为0；x为氯或溴。根据第三种优选的具体实施方式，该双席夫碱化合物具有式(1-1)所示的结构：其中，r11、r12和r13各自独立地选自甲基、乙基、正丙基、异丙基和伯丁基；x为氯或溴。本发明提供的上述双席夫碱化合物均具有抑制细菌生长的功能，并且本发明提供的双席夫碱化合物与金属离子的络合能力强。第二方面，本发明提供了一种制备双席夫碱化合物的方法，该双席夫碱化合物具有式(1)所示的结构，该方法包括：1)在酸性条件下，将式(3)所示结构的化合物与式(4)所示结构的化合物进行第一反应，得到式(5)所示结构的化合物；2)在保护气体和自偶联催化剂存在下，将式(5)所示结构的化合物进行第二反应；其中，式(1)与式(4)、式(5)中的e、b和r1对应相同，式(1)与式(3)、式(5)中的e、b和r2对应相同，式(1)与式(3)、式(5)中的x对应相同，且e、b、r1、r2和x如本发明前述所定义。特别地，在本发明的第二方面中，涉及的有关式(1)的定义均与本发明前述第一方面中的有关式(1)的定义相同，本发明在此不再赘述，本领域技术人员不应理解为对本发明的限制。优选地，在步骤1)中，所述第一反应在选自甲醇、乙醇和异丙醇中的至少一种溶剂存在下进行；更优选地，所述第一反应在甲醇溶剂存在下进行。优选地，在步骤1)中，所述第一反应的条件包括：温度为5-40℃，时间为4-24h，ph值为5-6。在步骤1)中，所述酸性条件可以通过向体系中加入酸性物质而形成，所述酸性物质选自乙酸、甲酸和丙酸中的至少一种；优选地，所述酸性物质为乙酸。所述酸性物质的加入量为使得所述第一反应在ph值为5-6条件下进行即可。在步骤2)中，所述保护气体优选选自氮气和氩气中的至少一种。优选地，在步骤2)中，所述第二反应在选自四氢呋喃、氯苯、氯仿、四氢萘、氯甲烷和二氧六环中的至少一种溶剂存在下进行。在本发明的步骤1)和步骤2)中，在没有特别说明的情况下，对式(3)所示结构的化合物、式(4)所示结构的化合物和式(5)所示结构的化合物之间的用量摩尔比没有特别的限定，本领域技术人员能够根据反应类型以及相关反应的反应方程式确定反应物之间的用量摩尔比。优选地，在步骤2)中，所述第二反应的条件包括：温度为5-40℃，时间为6-20h。优选地，在步骤2)中，所述自偶联催化剂为式(6)所示结构的化合物中的至少一种，在式(6)中，m为碱金属元素；所述碱金属元素包括锂元素、钠元素、钾元素、铷元素和铯元素。更优选地，在步骤2)中，所述自偶联催化剂为式(6)所示结构的化合物；且在所述式(6)中，m为锂元素、钠元素或钾元素。特别优选地，在步骤2)中，所述自偶联催化剂为式(6)所示结构的化合物；且在所述式(6)中，所述m为锂元素。本发明对所述自偶联催化剂的用量没有特别的要求，本领域技术人员可以根据本领域内常规的催化剂用量进行选择。本发明的实施例中示例性地列举了该自偶联催化剂的一些用量，本领域技术人员不应理解为对本发明的限制。优选地，所述式(3)所示结构的化合物通过以下步骤制备得到：a)在有机溶剂存在下，将式(2)所示结构的化合物与n-溴代琥珀酰亚胺和偶氮二异丁腈进行第一回流反应，并将回流反应后所得固液混合物依次进行过滤和除溶剂处理；b)将经步骤a)除溶剂处理后的产物与羧酸溶液进行第二回流反应；其中，式(2)中的b、r2和x与式(1)中的b、r2和x对应相同。经所述第二回流反应后得到的式(3)所示结构的化合物为含有杂质的粗产物，本领域技术人员可以采用本领域常规使用的后处理方法进行后处理操作以精制所述式(3)所示结构的化合物，本发明对此没有特别的限制。例如，本发明可以将经所述第二回流反应后得到的物料依次进行除溶剂、萃取和分离纯化。所述分离纯化的方法例如可以采用柱层析方法进行。本发明的除溶剂处理例如可以采用常压蒸馏或减压旋转蒸发方式进行。优选地，在步骤a)中，所述第一回流反应的时间为8-48h。优选地，在步骤a)中，所述有机溶剂选自四氯化碳、甲苯、二甲苯和1,2-二氯丙烷中的至少一种。更优选地，在步骤a)中，所述有机溶剂为四氯化碳。优选地，在步骤a)中，式(2)所示结构的化合物、n-溴代琥珀酰亚胺和偶氮二异丁腈用用量摩尔比为1：2-4：0.008-0.12。优选地，在步骤b)中，所述第二回流反应的时间为6-24h；更优选所述第二回流反应的时间为8-20h。优选地，在步骤b)中，所述羧酸选自甲酸、乙酸和丙酸中的至少一种。更优选地，所述羧酸为甲酸，也即，所述羧酸溶液可以为甲酸溶液。所述羧酸溶液的浓度可以为35-99重量％。本发明的方法对所述羧酸的用量没有特别的要求，本领域技术人员能够根据本领域的常规用量进行选择，为了清楚地说明本发明的羧酸的可选用量，本发明的实施例中示例性地列举了羧酸的一些用量，本领域技术人员不应理解为对本发明的限制。本发明的上述制备双席夫碱化合物的方法中，各步骤中获得的中间产物或者目标产物均能够采用本领域内常规的各种方法进行精制提纯，本发明对提纯的方法没有特别的限定，本发明的实施例中示例性地采用柱层析的方法进行提纯。优选地，柱层析中使用的洗脱剂均为石油醚和ch2cl2的混合试剂。根据一种优选的具体实施方式，制备具有式(1)所示的结构的双席夫碱化合物的方法包括：a)在有机溶剂存在下，将式(2)所示结构的化合物与n-溴代琥珀酰亚胺和偶氮二异丁腈进行第一回流反应，并将回流反应后所得固液混合物依次进行过滤和除溶剂处理；b)将经步骤a)除溶剂处理后的产物与羧酸溶液进行第二回流反应，得到式(3)所示结构的化合物；c)在酸性条件下，将式(3)所示结构的化合物与式(4)所示结构的化合物进行第一反应，得到式(5)所示结构的化合物；d)在保护气体和自偶联催化剂存在下，将式(5)所示结构的化合物进行第二反应；其中，式(1)与式(4)、式(5)中的e、b和r1对应相同，式(1)与式(2)、式(3)、式(5)中的e、b和r2对应相同，式(1)与式(2)、式(3)、式(5)中的x对应相同，且e、b、r1、r2和x如本发明前述所定义。第三方面，本发明提供一种由前述方法制备得到的双席夫碱化合物。第四方面，本发明提供前述双席夫碱化合物在抑制细菌生长中的应用。特别地，本发明的双席夫碱化合物能够抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长。本发明还具有如下具体的优点：1、本发明的方法的反应温度均较低，部分反应在室温下就可以进行，条件温和，安全性能高；2、本发明的制备方法简单，且产率高；3、本发明的方法符合环境友好的绿色合成技术，能够实现规模化生产，具有较好的工业应用前景。以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，在没有特别说明的情况下，使用的各种材料均来自商购。且实施例中的各个原料均为分析纯。实施例1制备式(1-1)所示结构的化合物，其中，x为br；r11为ch3；r12为ch3ch2；r13为ch3。1、将2,6-二甲基溴苯(10mmol)、nbs(30mmol)和aibn(0.2mmol)溶于50ml的ccl4中，回流10h后，冷却过滤，滤液旋干。向其中加入88重量％的甲酸(35ml)继续回流12h。之后减压蒸除溶剂，用体积比为1：1.5的ch2cl2/h2o萃取，分出有机相，用无水na2so4干燥，再用石油醚：ch2cl2＝5：1(体积比)的柱层析分离得到中间产物2-溴-3-苄溴-苯甲醛；2、将2-溴-3-苄溴-苯甲醛(3.6mmol)溶于30ml的甲醇，再向其中加入2,6-二甲基-4-乙基-苯胺(3.6mmol)，以及加入乙酸使得溶液的ph值为5，25℃下反应8h后过滤收集沉淀，得席夫碱；3、在100ml的圆底烧瓶中加入席夫碱(2.62mmol)，在氮气保护的条件下加入10ml的thf和二苯基磷锂(0.05mmol)，25℃反应12h后除去溶剂，用体积比为1：1.5的ch2cl2/h2o萃取，分出有机相，用无水na2so4干燥，之后用石油醚：ch2cl2＝2：1(体积比)柱层析分离，得到双席夫碱化合物，产率79％。所得双席夫碱化合物的表征数据如下：1hnmr(cdcl3,400mhz,δ,ppm):8.74(s,2h),8.14(d,j＝6.0hz,2h),7.37(t,j＝6.8hz,4h),6.95(s,4h),3.18(s,4h),2.78(m,4h),2.20(s,12h)，1.49(t,j＝6.7，6h)。元素分析：c36h34n2br2计算值：c,66.07；h,5.20；n,4.28。实测值：c,66.12；h,5.17；n,4.32。实施例2制备式(1-1)所示结构的化合物，其中，x为br；r11为ch3ch2；r12为ch3；r13为ch3ch2。1、将2,6-二甲基溴苯(10mmol)、nbs(28mmol)和aibn(0.23mmol)溶于50ml的ccl4中，回流9h后，冷却过滤，滤液旋干。向其中加入85重量％的甲酸(35ml)继续回流12h。之后减压蒸除溶剂，用体积比为1：1.2的ch2cl2/h2o萃取，分出有机相，用无水na2so4干燥，再用石油醚：ch2cl2＝5：1(体积比)的柱层析分离得到中间产物2-溴-3-苄溴-苯甲醛；2、将2-溴-3-苄溴-苯甲醛(3.6mmol)溶于35ml的异丙醇，再向其中加入2,6-二乙基-4-甲基-苯胺(3.8mmol)，以及加入甲酸使得溶液的ph值为6，25℃下反应9h后过滤收集沉淀，得席夫碱；3、在100ml的圆底烧瓶中加入席夫碱(2.62mmol)，在氮气保护的条件下加入15ml的二氧六环和二苯基磷锂(0.06mmol)，30℃反应10h后除去溶剂，用体积比为1：1.2的ch2cl2/h2o萃取，分出有机相，用无水na2so4干燥，之后用石油醚：ch2cl2＝2：1(体积比)柱层析分离，得到双席夫碱化合物，产率77％。所得双席夫碱化合物的表征数据如下：1hnmr(cdcl3,400mhz,δ,ppm):8.74(s,2h),8.14(d,2h),7.37(t,4h),6.95(s,4h),3.18(s,4h),2.66(m,8h),2.40(t,6h)，1.42(m,12h)。元素分析：c38h42n2br2计算值：c,66.49；h,6.12；n,4.08。实测值：c,66.50；h,6.11；n,4.05。实施例3制备式(1-1)所示结构的化合物，其中，x为br；r11为ch3；r12为ch(ch3)2；r13为ch3。1、将2,6-二甲基溴苯(10mmol)、nbs(32mmol)和aibn(0.18mmol)溶于60ml的甲苯中，回流12h后，冷却过滤，滤液旋干。向其中加入95重量％的乙酸(36ml)继续回流8h。之后减压蒸除溶剂，用体积比为1：1.8的ch2cl2/h2o萃取，分出有机相，用无水na2so4干燥，再用石油醚：ch2cl2＝5：1(体积比)的柱层析分离得到中间产物2-溴-3-苄溴-苯甲醛；2、将2-溴-3-苄溴-苯甲醛(3.6mmol)溶于40ml的甲醇，再向其中加入2,6-二甲基-4-异丙基-苯胺(4.0mmol)，以及加入乙酸使得溶液的ph值为5.6，22℃下反应10h后过滤收集沉淀，得席夫碱；3、在100ml的圆底烧瓶中加入席夫碱(2.62mmol)，在氮气保护的条件下加入20ml的氯甲烷和二苯基磷锂(0.04mmol)，28℃反应8h后除去溶剂，用体积比为1：1.8的ch2cl2/h2o萃取，分出有机相，用无水na2so4干燥，之后用石油醚：ch2cl2＝2：1(体积比)柱层析分离，得到双席夫碱化合物，产率76％。所得双席夫碱化合物的表征数据如下：1hnmr(cdcl3,400mhz,δ,ppm):8.74(s,2h),8.14(d,2h),7.37(t,4h),6.95(s,4h),3.18(s,4h),3.16(m,2h),2.20(s,12h)，1.32(d,12h).元素分析：c38h42n2br2计算值：c,66.49；h,6.12；n,4.08。实测值：c,66.53；h,6.10；n,4.03。实施例4制备式(1-1)所示结构的化合物，其中，x为br；r11为ch3；r12为ch3；r13为ch3。1、将2,6-二甲基溴苯(10mmol)、nbs(30mmol)和aibn(0.22mmol)溶于70ml的ccl4中，回流9h后，冷却过滤，滤液旋干。向其中加入84重量％的甲酸(40ml)继续回流10h。之后减压蒸除溶剂，用体积比为1：1.5的ch2cl2/h2o萃取，分出有机相，用无水na2so4干燥，再用石油醚：ch2cl2＝5：1(体积比)的柱层析分离得到中间产物2-溴-3-苄溴-苯甲醛；2、将2-溴-3-苄溴-苯甲醛(3.6mmol)溶于40ml的异丙醇再向其中加入2,4,6-三甲基苯胺(3.6mmol)，以及加入乙酸使得溶液的ph值为5.5，25℃下反应10h后过滤收集沉淀，得席夫碱；3、在100ml的圆底烧瓶中加入席夫碱(2.62mmol)，在氮气保护的条件下加入10ml的thf和二苯基磷锂(0.023mmol)，28℃反应11h后除去溶剂，用体积比为1：1.5的ch2cl2/h2o萃取，分出有机相，用无水na2so4干燥，之后用石油醚：ch2cl2＝2：1(体积比)柱层析分离，得到双席夫碱化合物，产率81％。所得双席夫碱化合物的表征数据如下：1hnmr(cdcl3,400mhz,δ,ppm):8.74(s,2h),8.14(d,2h),7.37(t,4h),6.95(s,4h),3.18(s,4h),2.30(s,18h)。元素分析：c34h34n2br2计算值：c,64.78；h,5.40；n,4.44。实测值：c,64.80；h,5.42；n,4.40。实施例5制备式(1-1)所示结构的化合物，其中，x为br；r11为ch3ch2；r12为ch3ch2；r13为ch3ch2。1、将2,6-二甲基溴苯(10mmol)、nbs(31mmol)和aibn(0.2mmol)溶于50ml的二甲苯中，回流12h后，冷却过滤，滤液旋干。向其中加入85重量％的甲酸(35ml)继续回流10h。之后减压蒸除溶剂，用体积比为1：1.5的ch2cl2/h2o萃取，分出有机相，用无水na2so4干燥，再用石油醚：ch2cl2＝5：1(体积比)的柱层析分离得到中间产物2-溴-3-苄溴-苯甲醛；2、将2-溴-3-苄溴-苯甲醛(3.6mmol)溶于35ml的甲醇，再向其中加入2,4,6-三乙基苯胺(3.8mmol)，以及加入乙酸使得溶液的ph值为5，25℃下反应9h后过滤收集沉淀，得席夫碱；3、在100ml的圆底烧瓶中加入席夫碱(2.62mmol)，在氮气保护的条件下加入30ml的氯仿和二苯基磷锂(0.028mmol)，30℃反应10h后除去溶剂，用体积比为1：1.5的ch2cl2/h2o萃取，分出有机相，用无水na2so4干燥，之后用石油醚：ch2cl2＝2：1(体积比)柱层析分离，得到双席夫碱化合物，产率71％。所得双席夫碱化合物的表征数据如下：1hnmr(cdcl3,400mhz,δ,ppm):8.74(s,2h),8.14(d,2h),7.37(t,4h),7.05(s,4h),3.18(s,4h),2.68(m,12h),1.37(t,18h).元素分析：c40h46n2br2计算值：c,67.24；h,6.44；n,3.92。实测值：c,67.20；h,6.46；n,3.91。测试例根据杨丰科等(应用化学，第32卷第4期，2015.4，392-398)公开的席夫碱的合成及生物活性中提供的抑菌活性测试方法测试本发明前述实施例提供的双席夫碱化合物的抑菌活性，具体地：1、培养基的制备：将蛋白胨(8g)、牛肉膏(2.4g)、氯化钠(4g)、蒸馏水(800ml)置于烧杯中，放于电炉上边搅拌边加热煮沸，待混合均匀至澄清时，停止加热，趁热加氢氧化钠水溶液调节ph值为7.2。将混合液分装到两个250ml的锥形瓶中(每瓶约装150ml)，剩余的加入8g的琼脂，加热至沸腾，趁热倒入两个500ml的锥形瓶中，将瓶口用面塞、纱布和牛皮纸依次封口，待用。2、琼脂培养基、培养液的灭菌：将分装后的试管和三角锥瓶放入高压灭菌锅中，排气阀打开的状态下通电加热8min将锅内的冷空气排出后，关闭排气阀，当锅内压力升到0.1mpa时开始计时，每升到所需压力(0.125mpa)，拔掉电源，压力降到0.1mpa时，插上电源，如此反复20min，自然冷却至压力为零。3、平板的制备及菌种培养：灭菌后的物品取出放入超净工作台内(事先开紫外灯杀菌15min)，将准备好的琼脂培养基倒入培养皿中均匀铺平，待琼脂培养基凝固后，放入(37±1)℃的温箱中培养1d做无杂菌检测；液体培养基冷却后将菌种接入到其中，放到37℃的摇床中培养1d，并活化3次。接种(接二环)到培养液中，放到(37±1)℃的温箱中，培养16h，备用。4、药片的制备：在慢速定量滤纸上打孔，孔直径为6mm。然后将滤纸片放在称量瓶中，放入高压灭菌锅中一同灭菌。灭菌后，将配制好不同浓度的dmso药液0.1ml注射到称量瓶中滤纸片上，温箱晾干备用。5、接种：在超净工作台中，将活化后的培养液0.2ml用移液枪移到固体培养基表面，用涂布器涂布均匀，自然冷却后，将灭菌后的药片分散地平铺到其表面，平行3次。将上述放有药片的平板放于(37±1)℃的温箱中24h，测量抑菌圈直径。根据抑菌圈的大小，可以确定物质的抑菌能力，同时可以得到最小抑菌浓度(mic)，mic越小，其抑菌活性越强，抑菌圈直径大于20mm表示具有强抑菌效果，抑菌圈在10～20mm为中等抑菌，抑菌圈小于10mm为弱抑菌。将上述实施例获得的双席夫碱化合物作为供试药剂，按照前述测试方法测定它们对两种供试菌种(革兰氏阴性菌大肠杆菌和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌)的抑菌圈直径且每种物质在同一浓度下测3次，取平均值。分别以dmso作阴性对照。结果显示空白阴性对照dmso对两种菌种没有抑制作用。对实施例中获得的双席夫碱化合物针对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性进行实验考查，抑菌圈大小平均值分别见表1和表2，最低抑菌浓度(mic)数据列于表3中。表1：大肠杆菌(ec)抑菌实验结果/抑菌圈平均直径(mm)浓度/g/l实施例1实施例2实施例3实施例4实施例51×1018.9618.5619.2319.0519.011×10-215.8915.7616.0216.0716.001×10-410.5410.3611.0210.9810.76表2：金黄色葡萄球菌(sa)抑菌实验效果/抑菌圈平均直径(mm)浓度/g/l实施例1实施例2实施例3实施例4实施例51×1019.2319.0519.8719.6519.381×10-216.5416.4716.2616.0116.111×10-411.3511.5811.4811.5911.42表3：双席夫碱的最低抑菌浓度(g/l)实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5ec1×10-61×10-51×10-61×10-51×10-5sa1×10-61×10-61×10-51×10-51×10-5从上述测试例的结果可以看出，本发明提供的双席夫碱化合物均具有抑菌活性，并且，本发明提供的双席夫碱化合物的最小抑菌浓度均较低，说明本发明的双席夫碱化合物的抑菌活性越强。以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。当前第1页12