1.一种新城疫病毒样颗粒,其特征在于,由M蛋白、F蛋白、NP蛋白和HN蛋白自行组装形成的空心化结构的蛋白颗粒;其中M蛋白对应的M1基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,F蛋白对应的F1基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示,NP蛋白对应的NP1基因的碱基序列如SEQ ID NO.3所示,HN蛋白对应的HN1基因的碱基序列如SEQ ID NO.4所示。
2.权利要求1所述新城疫病毒样颗粒在预防禽新城疫病毒感染灭活疫苗中的应用。
3.权利要求1所述新城疫病毒样颗粒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)人工合成各结构蛋白基因序列,即分别人工合成SEQ ID NO.1~4所示的M1基因、F1基因、NP1基因、HN1基因的碱基序列;
(2)构建表达新城疫病毒结构蛋白的重组杆状病毒,具体为,
将步骤(1)中的M1基因、F1基因、NP1基因、HN1基因分别克隆至转移载体pFastBac1中,获得重组质粒pFastBac1-M1、pFastBac1-F1、pFastBac1-NP1、pFastBac1-HN1;
将重组质粒pFastBac1-M1、pFastBac1-F1、pFastBac1-NP1、pFastBac1-HN1分别转化Escherichia coli DH10 Bac 感受态细胞,筛选获得重组杆粒rBacmid-M1、rBacmid-F1、rBacmid-NP1、rBacmid-HN1;
利用脂质体介导转染法,将重组杆粒rBacmid-M1、rBacmid-F1、rBacmid-NP1、rBacmid-HN1分别转染宿主Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBV-M1、rBV-F1、rBV-NP1、rBV-HN1;
(3)新城疫病毒样颗粒的制备和纯化,具体为,
将重组杆状病毒rBV-M1、rBV-F1、rBV-NP1、rBV-HN1共接种感染宿主Sf9昆虫细胞,四种结构蛋白在表达并自行组装后,所形成的病毒样颗粒会分泌到细胞培养上清中,经离心去除细胞碎片,切向流浓缩,再经分子筛过滤和阴离子交换层析后得到纯化的病毒样颗粒。
4.如权利要求3所述新城疫病毒样颗粒的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,重组杆状病毒共接种感染宿主Sf9昆虫细胞时,含有重组杆病毒的溶液体积比为:rBV-M1:rBV-F1:rBV-NP1:rBV-HN1=3:2:1:2。
5.如权利要求3所述新城疫病毒样颗粒的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,切向流浓缩操作时,采用50kDa分子量截留的切向流浓缩管在3500r/min水平离心15分钟。
6.如权利要求3所述新城疫病毒样颗粒的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,提纯操作时,采用不连续的20%-40%-60%蔗糖密度梯度离心方法,替代分子筛过滤和阴离子交换层析操作。