一种TTLL12基因新转录本的鉴定引物及其方法与流程

文档序号:12697675阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种TTLL12基因新转录本的鉴定引物,其特征在于,包括针对TTLL12基因特异性的PCR引物:所述TTLL12基因特异性的PCR引物为:5'-GATTACGCCAAGCTTAGAGCACACAGACGGCGCGGGTG-3'。

2.如权利要求1所述的TTLL12基因新转录本的鉴定方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1收集培养中的H1299细胞株,提取RNA;

S2用特异性的3'-RACE CDS引物反转录mRNA,形成cDNA链;所述反转录的条件为:阶段1:42℃,90s;阶段2:70℃,10min;阶段3:4℃,保温;

S3以步骤S2中的cDNA链作为模板,采用权利要求1的特异性性引物和UPM通用性引物扩增获得3'-RACE产物,所述PCR扩增条件包括:阶段1:94℃,30s;72℃,3min,5个循环;阶段2:94℃,30s;70℃,30s;72℃,3min,5个循环;阶段3:94℃,30s;72℃,3min,5个循环;阶段4:94℃,30s;70℃,30s;72℃,3min,5个循环;阶段5:94℃,30s;68℃,30s;72℃,3min,5个循环;阶段6:4℃,保温;

S4将步骤S3的3'-RACE产物进行琼脂糖电泳,回收3'-RACE产物,连接到载体上,进行一代测序。

3.如权利要求2所述的TTLL12基因新转录本的鉴定方法,其特征在于,所述步骤S2中的特异性的3'-RACE CDS引物为:5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC-3’。

4.如权利要求2所述的TTLL12基因新转录本的鉴定方法,其特征在于,所述步骤S3中的UPM引物的长引物为:5'-CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3',所述步骤S3中的UPM引物的短引物为:5'-CTAATACGACTCACTATAGGGC-3'。

5.如权利要求1所述的TTLL12基因新转录本的鉴定引物在制备检测TTLL12基因新转录本试剂盒中的用途。

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