本发明涉及一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，属于生药学技术领域。
背景技术：
蛹虫草(cordycepsmilitaris(l.)link)又称为北虫草、北冬虫夏草、蛹草，隶属于真菌界(fungi)、子囊菌门(ascomycota)、盘菌亚门(pezizomycotina)、粪壳菌纲(sordarimycetes)、肉座菌目(hypocreales)、麦角菌科(clavicipiaceae)、虫草属[cordyceps(fr.)link]，是虫草属真菌的模式种。蛹虫草在世界各地均有分布，是一种虫生真菌，也是药用真菌中的一种，该真菌侵染寄主昆虫的幼虫、成虫或蛹，使其僵化，在一定条件下，该僵虫形成具有虫(僵虫菌核)、草(真菌子座)复合形态的真菌结构。现代研究表明：蛹虫草含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、核苷、甾醇等多种生物活性物质；对人体具有多种显著的生理功能，具有增强免疫力、调节内分泌、抗疲劳、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗肿瘤、抗缺氧、镇静、降血糖、保护肝肾及呼吸系统等多种生理功能。其活性成分和功能与著名的药用真菌冬虫夏草〔cordycepssinensis(berk.)sacc〕极其相似，某些活性成分如虫草素、核苷等物质含量还高于冬虫夏草生药。
安徽农业大学曾经对蛹虫草菌丝体进行了有效成分的分析，其结果表明：菌丝体中氨基酸种类和冬虫夏草生药一致，但氨基酸总量和必需氨基酸总量明显高于冬虫夏草生药，必需氨基酸占总氨基酸的比例也高于后者，必需氨基酸中苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸的含量更远远高于后者，菌丝体中粗蛋白、总糖及甘露醇的含量均高于冬虫夏草生药；菌丝体的脂肪酸组成中，不饱和脂肪酸占脂肪酸组成的85.38%，其中亚油酸、亚麻酸等多价不饱和脂肪酸占脂肪酸组成的58.87%，而亚油酸的含量占整个脂肪酸组成的一半以上(51.04%)；发酵菌丝体还含有丰富的对人体健康非常重要的zn、fe、ca等金属元素，尤以ca的含量为高。
技术实现要素：
为了克服上述现有技术的不足，本发明提供一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，按如下步骤进行：
步骤1）、将牛蒡进行切片洗净，并在45-50℃下烘干，烘干至含水率低于3%即可停止烘干；
步骤2）、将烘干的牛蒡片，放入粉碎机进行粉碎处理，过200目筛网，利用紫外线进行杀菌处理，制得牛蒡粉，备用；
步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.0-1.3%，牛蒡粉10-20%，葡萄糖2.0-2.5%，蛋白胨0.8-1.0%，酵母粉0.5-1.0%，琼脂粉1.2-1.6%，水余量，其ph值为6.0-7.5；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为15-20%；在25-32℃无氧条件下培养8-12天，制得试管菌种；
步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.0-1.3%，牛蒡粉30-40%，豆粕粉0.6-0.8%，二氧化锗粉末0.01-0.02%，硫酸锌1.0-2.0%，葡萄糖2.0-2.5%，蛋白胨0.5-0.8%，酵母提取物1.0-1.1%，水余量，其ph值为6.5-7.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的60%-80%，温度28-30℃，无氧条件下，在种子罐中培养5-10天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养30-45天，制得蛹虫草菌丝体；
步骤5）干燥及粉碎：将得到的蛹虫草菌丝体55-60℃真空干燥，干燥后用粉碎机进行粉碎，得到粉末状菌丝体产品。
进一步优化的，所述步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.2%，牛蒡粉18%，葡萄糖2.2%，蛋白胨1.0%，酵母粉0.8%，琼脂粉1.4%，水余量，其ph值为6.5；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为16%；在29.5℃无氧条件下培养10天，制得试管菌种。
进一步优化的，所述步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.2%，牛蒡粉35%，豆粕粉0.7%，二氧化锗粉末0.01%，硫酸锌1.0%，葡萄糖2.2%，蛋白胨0.7%，酵母提取物1.1%，水余量，其ph值为6.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的78%，温度29.5℃，无氧条件下，在种子罐中培养6天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养36天，制得蛹虫草菌丝体。
本发明蛹虫草菌丝体具有的功效：
(1)补充必需氨基酸：含有十余种氨基酸，其中6种属eaa，冬虫夏草可能是通过补充crf病人所缺乏的eaa，促使蛋白质的合成，减轻氮质潴留，从而达到治疗作用。
(2)调节钙磷代谢：有效地控制高磷血症是延缓肾功能恶化的重要措施之一。冬虫夏草具有升高血钙、降低血磷的作用，使钙磷代谢恢复正常，且与临床症状改善相符合，但机理不明。
(3)补充微量元素：crf患者体内微量元素如锌、铬、锰等明显低于常人。人工虫草和野生虫草均含有15种微量元素，上述微量元素含量较高，特别是锌含量较高。锌是多种金属的活化剂，是rna、dna聚合酶的主要成分，参与肌体蛋白质的合成，在改善crf临床症状中起重要作用。因此，冬虫夏草治疗crf可能与其补充微量元素有关。
(4)影响蛋白代谢：虫草对尿毒症病人体蛋白有明显影响。现已证明，尿毒症毒素对蛋白质代谢有抑制作用，虫草能降低crf患者血清中分子物质水平，且能使scr、bun水平明显下降，说明病人蛋白代谢的改善可能与尿毒症毒素的排泄有关。
(5)调节免疫功能：虫草的免疫药理作用概括起来有以下几方面：①对免疫器官的影响，主要表现为免疫器官(胸腺、脾脏)重量的增加；②对单核—巨噬细胞系统功能的增强作用；③对体液免疫功能的增强作用；④对细胞免疫功能的调节作用；⑤对自然杀伤细胞活性的增强作用。
本发明有益技术效果：
1、本发明使用的原料简单、易购、成本低。
2、本发明使用的容具亦简单、易购、成本低。
3、本发明采用旋转式摇床进行液体菌种培养，同时液体菌种在培养过程不需多级培养，不但缩短生产周期，同时也降低了因多级转接菌种培养而容易感染之风险。
4、本发明所培养的是菌丝体是通过培养至转色后使其生理性能成熟，含有虫草特有的虫草素、sod、虫草多糖等高活性物质。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，本领域技术人员应该清楚实施例是对本发明的解释，不应视为对本发明具体的保护。
实施例1
一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，按如下步骤进行：
步骤1）、将牛蒡进行切片洗净，并在50℃下烘干，烘干至含水率低于3%即可停止烘干；
步骤2）、将烘干的牛蒡片，放入粉碎机进行粉碎处理，过200目筛网，利用紫外线进行杀菌处理，制得牛蒡粉，备用；
所述步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.2%，牛蒡粉18%，葡萄糖2.2%，蛋白胨1.0%，酵母粉0.8%，琼脂粉1.4%，水余量，其ph值为6.5；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为16%；在29.5℃无氧条件下培养10天，制得试管菌种。
步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.0%，牛蒡粉30%，豆粕粉0.6%，二氧化锗粉末0.01%，硫酸锌1.0%，葡萄糖2.0%，蛋白胨0.5%，酵母提取物1.0%，水余量，其ph值为6.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的60%，温度28℃，无氧条件下，在种子罐中培养5天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养30天，制得蛹虫草菌丝体；
步骤5）干燥及粉碎：将得到的蛹虫草菌丝体55℃真空干燥，干燥后用粉碎机进行粉碎，得到粉末状菌丝体产品。
实施例2
一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，按如下步骤进行：
步骤1）、将牛蒡进行切片洗净，并在45-50℃下烘干，烘干至含水率低于3%即可停止烘干；
步骤2）、将烘干的牛蒡片，放入粉碎机进行粉碎处理，过200目筛网，利用紫外线进行杀菌处理，制得牛蒡粉，备用；
步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.0%，牛蒡粉10%，葡萄糖2.0%，蛋白胨0.8%，酵母粉0.5%，琼脂粉1.2%，水余量，其ph值为7.5；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为20%；在32℃无氧条件下培养12天，制得试管菌种；
步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.0%，牛蒡粉30%，豆粕粉0.6%，二氧化锗粉末0.02%，硫酸锌2.0%，葡萄糖2.0%，蛋白胨0.5%，酵母提取物1.0%，水余量，其ph值为6.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的80%，温度30℃，无氧条件下，在种子罐中培养10天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养45天，制得蛹虫草菌丝体；
步骤5）干燥及粉碎：将得到的蛹虫草菌丝体60℃真空干燥，干燥后用粉碎机进行粉碎，得到粉末状菌丝体产品。
实施例3
一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，按如下步骤进行：
步骤1）、将牛蒡进行切片洗净，并在45-50℃下烘干，烘干至含水率低于3%即可停止烘干；
步骤2）、将烘干的牛蒡片，放入粉碎机进行粉碎处理，过200目筛网，利用紫外线进行杀菌处理，制得牛蒡粉，备用；
步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.2%，牛蒡粉18%，葡萄糖2.2%，蛋白胨1.0%，酵母粉0.8%，琼脂粉1.4%，水余量，其ph值为6.5；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为16%；在29.5℃无氧条件下培养10天，制得试管菌种。
步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.2%，牛蒡粉35%，豆粕粉0.7%，二氧化锗粉末0.01%，硫酸锌1.0%，葡萄糖2.2%，蛋白胨0.7%，酵母提取物1.1%，水余量，其ph值为6.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的78%，温度29.5℃，无氧条件下，在种子罐中培养6天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养36天，制得蛹虫草菌丝体。
步骤5）干燥及粉碎：将得到的蛹虫草菌丝体55℃℃真空干燥，干燥后用粉碎机进行粉碎，得到粉末状菌丝体产品。