本发明属于生物技术领域,特别涉及一种nk免疫细胞培养基及其制备方法。
背景技术:
nk细胞(naturalkillercell),又叫自然杀伤细胞,是与t、b细胞并列的第三类群淋巴细胞。nk细胞数量较少,在外周血中约占淋巴细胞总数的15%,在脾内约有3%~4%,也可出现在肺脏、肝脏和肠粘膜,但在胸腺、淋巴结和胸导管中罕见。
nk细胞较大,含有胞浆颗粒,故称大颗粒淋巴细胞。nk细胞可非特异直接杀伤靶细胞,这种天然杀伤活性既不需要预先由抗原致敏,也不需要抗体参与,且无mhc限制。nk细胞杀伤的靶细胞主要是肿瘤细胞、病毒感染细胞、较大的病原体(如真菌和寄生虫)、同种异体移植的器官、组织等。
nk细胞表面受体(nkr)可以识别被病毒感染的细胞表面表达的多糖分子。nk细胞的杀伤效应是由其活化后释放出的毒性分子介导,如穿孔素、颗粒酶和tnfα(肿瘤坏死因子)等。
技术实现要素:
本发明的目的是提供一种nk免疫细胞培养基及其制备方法,用于nk免疫细胞的培养。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案是:
一种nk免疫细胞培养基,其由以下组分组成:基础培养基,壳聚糖,γ-干扰素,胰岛素,过氧化氢酶,二巯基乙醇,亚油酸,氨基酸,维生素。
各组分的含量为:
基础培养基5-20g/l,壳聚糖0.5-2g/l,γ-干扰素10-20μg/l,胰岛素10-20μg/l,过氧化氢酶3-9mg/l,二巯基乙醇5-10mg/l,亚油酸1-3mg/l,氨基酸20-50mg/l,维生素20-50mg/l。
所述基础培养基为imdm培养基。
所述维生素为水溶性维生素。
所述氨基酸为多种氨基酸复合物。
一种nk免疫细胞培养基的制备方法,包括以下步骤:
(1)向基础培养基中加入γ-干扰素,胰岛素,二巯基乙醇,亚油酸,氨基酸,维生素,搅拌15-30min,然后加入壳聚糖、过氧化氢酶,继续搅拌15-30min,得到混合物;
(2)将步骤(1)得到的混合物的ph调节至7.2-7.4,然后除菌,得到所述nk免疫细胞培养基。
步骤(2)中,除菌的方式为机械过滤除颗粒杂质、紫外线杀菌、高分子滤膜除菌三种方法的一种或多种组合。
有益效果:本发明的nk免疫细胞培养基,能够提供nk免疫细胞生长增殖所需的充足营养与良好环境,能够显著提高nk免疫细胞的扩增速度,大大缩短nk免疫细胞培养的时间。
具体实施方式
根据下述实施例,可以更好的理解本发明。然而,本领域的技术人员容易理解,实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明,而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
一种nk免疫细胞培养基,各组分的含量为:
基础培养基5g/l,壳聚糖2g/l,γ-干扰素15μg/l,胰岛素15μg/l,过氧化氢酶5mg/l,二巯基乙醇8mg/l,亚油酸3mg/l,氨基酸50mg/l,维生素30mg/l。
基础培养基为imdm培养基,维生素为水溶性维生素,氨基酸为多种氨基酸复合物。
其制备方法为:
(1)向基础培养基中加入γ-干扰素,胰岛素,二巯基乙醇,亚油酸,氨基酸,维生素,搅拌30min,然后加入壳聚糖、过氧化氢酶,继续搅拌30min,得到混合物;
(2)将步骤(1)得到的混合物的ph调节至7.2-7.4,然后除菌,得到所述nk免疫细胞培养基。
其中,除菌的方式为机械过滤除颗粒杂质、紫外线杀菌、高分子滤膜除菌三种方法的组合。
实施例2
一种nk免疫细胞培养基,各组分的含量为:
基础培养基20g/l,壳聚糖0.5g/l,γ-干扰素10μg/l,胰岛素20μg/l,过氧化氢酶9mg/l,二巯基乙醇8mg/l,亚油酸2mg/l,氨基酸20mg/l,维生素50mg/l。
基础培养基为imdm培养基,维生素为水溶性维生素,氨基酸为多种氨基酸复合物。
其制备方法为:
(1)向基础培养基中加入γ-干扰素,胰岛素,二巯基乙醇,亚油酸,氨基酸,维生素,搅拌15min,然后加入壳聚糖、过氧化氢酶,继续搅拌15min,得到混合物;
(2)将步骤(1)得到的混合物的ph调节至7.2-7.4,然后除菌,得到所述nk免疫细胞培养基。
其中,除菌的方式为高分子滤膜除菌。
实施例3
一种nk免疫细胞培养基,各组分的含量为:
基础培养基20g/l,壳聚糖2g/l,γ-干扰素20μg/l,胰岛素10μg/l,过氧化氢酶3mg/l,二巯基乙醇5mg/l,亚油酸1mg/l,氨基酸30mg/l,维生素20mg/l。
基础培养基为imdm培养基,维生素为水溶性维生素,氨基酸为多种氨基酸复合物。
其制备方法为:
(1)向基础培养基中加入γ-干扰素,胰岛素,二巯基乙醇,亚油酸,氨基酸,维生素,搅拌20min,然后加入壳聚糖、过氧化氢酶,继续搅拌20min,得到混合物;
(2)将步骤(1)得到的混合物的ph调节至7.2-7.4,然后除菌,得到所述nk免疫细胞培养基。
其中,除菌的方式为紫外线杀菌、高分子滤膜除菌的组合。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。